Деструкция хитозана под действием некоторых ферментных препаратов медицинского назначения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.06, кандидат химических наук Чернова, Валентина Витальевна

• Чернова, Валентина Витальевна
• кандидат химических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат химических наук Чернова, Валентина Витальевна

ВВЕДЕНИЕ.

I ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1 Природные полисахариды хитин и хитозан.

1.1 Сырьевые источники и способы получения хитина и хитозана.

1.2 Структурные характеристики хитина и хитозана.

1.3 Деструкция хитозана.

1.3.1 Химическая деструкция хитозана.

1.3.2 Ферментативная деструкция хитозана.

1.4 Свойства и применение хитозана.

1.5 Применение хитозана в медицине.

1.5.1 Полимерные покрытия для лечения и защиты ожоговых и гнойных ран.

1.5.2 Полимеры как носители ферментных препаратов.

1.5.3 Хитозан как носитель иммобилизованных ферментов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Деструкция хитозана под действием некоторых ферментных препаратов медицинского назначения»

Актуальность проблемы. Одним из перспективных направлений в области поиска новых материалов для медицины стало изучение, создание и внедрение в практику материалов на основе хитозана. Уникальный комплекс нативных свойств хитозана - биосовместимость, биодеградируемость, нетоксичность на фоне высокой биологической и сорбционной активности, позволяют отнести этот аминополисахарид к немногочисленной группе промышленно доступных, экологически безопасных полимеров и, в перспективе, - к потенциально новым биоматериалам на его основе, исключительно подходящим для использования в медицинских целях. Поскольку хитозан достаточно быстро претерпевает биодеградацию под действием ферментов живого организма, не образуя токсичных веществ, он может стать прекрасным биоразлагаемым з ащитн ы мм ате р и ал о м для'лечения открытых ран и ожогов. Особый интерес могут представлять ферментсодержащие пленочные хитозановые материалы, которые целесообразно использовать на стадии очищения раны от некротических тканей и в косметической, терапии келоидных рубцов. При этом существует принципиальная возможность регулирования скорости ферментативного разложения материалов на раневой поверхности.

В связи с этим особую актуальность приобретает целенаправленное изучение закономерностей ферментативной деструкции хитозана под действием неспецифических для хитозана ферментов, присутствующих на ране, а также поиск путей регулирования ферментативной устойчивости пленочных материалов, полученных на его основе.

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «Башкирский государственный университет» по теме «Химия и физико-химия полимеров и полимерных систем медицинского назначения» (ГР № 01.2006.10183). Научные исследования проводились при поддержке РФФИ проекта: «Физико-химические основы создания физиологически активных полимерных материалов с управляемыми свойствами для медицинского применения на основе полимеров природного происхождения» (грант рповолжьеа №08-03-97030), а также ФЦП «Научные и» научно-педагогические кадры инновационной России» (г/к №02.740.11.0648).

Цель работы. Изучение закономерностей ферментативной деструкции хитозана в растворе и в пленочных образцах, полученных из раствора, и поиск путей регулирования его ферментативной устойчивости.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи: -изучение закономерностей ферментативной деструкции хитозана под действием ряда ферментных препаратов в растворе;

-изучение особенностей ферментативной деструкции пленочных хитозановых материалов, полученных методом формования из раствора;

-установление возможной причины деструкции хитозана под действием неспецифических ферментов;

-модификация пленочных образцов- с целью регулирования их ферментативной устойчивости;

-изучение закономерности ферментативной деструкции ферментсодержащих пленочных материалов на основе хитозана.

Научная новизна. В результате исследования закономерностей ферментативных превращений хитозана в растворе и твердой фазе:

- выявлена роль надмолекулярных эффектов при ферментативной деструкции хитозана под действием неспецифических для него ферментов в растворе и в твердых пленках; показано, что в области разбавленных растворов в термодинамически хороших растворителях макромолекулы хитозана в различной степени ассоциированы, что в свою очередь является причиной наблюдающейся 6 зависимости скорости деструкции от термодинамического качества растворителя и концентрации раствора; в ферментативной деструкции пленочных образцов хитозана надмолекулярный эффект проявляется как зависимость скорости и степени ферментативной деструкции от степени кристалличности образцов и плотности упаковки макроцепей; выявлена принципиальная возможность регулирования ферментативной устойчивости пленочных образцов путем их направленной структурной модификации, при которой изменяется плотность упаковки макромолекул (перевод хитозана из солевой формы в основную, изотермический отжиг), следствием чего является уменьшение степени ферментативной деструкции пленок; добавление второго полимера -поливинилового спирта или полидиметилдиаллиламмоний хлорида, склонного к образованию гетероассоциатов с хитозаном в растворе, напротив, приводит к увеличению степени ферментативного разложения пленки, вследствие понижения плотности упаковки макромолекул;

- показано, что ферментативной деструкции подвергается преимущественно аморфная фаза хитозана, в результате — повышается степень кристалличности деструктированных образцов; в случае твердых пленок с иммобилизованными ферментными препаратами повышение степени кристалличности хитозана приводит к повышению устойчивости пленок к последующему процессу ферментативного разложения при внешнем контакте с ферментами.

Практическая ценность. Разработаны принципиальные подходы к созданию пленочных хитозановых материалов с регулируемой биоустойчивостыо, соответствующих современным требованиям к временным покрытиям для защиты и лечения ожоговых и гнойных ран. Материалы могут быть рекомендованы для клинического применения.

Личный вклад автора. Автор лично участвовал в разработке основной идеи исследования, выработке методологии его выполнения, проведении экспериментальных исследований и анализе результатов.

Апробация работы. Основные результаты работы были представлены на Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, МГУ, 2008 г. и 2011 г.), IX и X Международных конференциях «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Ставрополь, 2008 г. и Нижний Новгород, 2010 г.), Всероссийской конференции, посвященной 40-летию кафедры высокомолекулярных соединений ГОУ ВПО «Башкирский государственный университет» «Высокомолекулярные соединения. Наука и практика» (Уфа, 2008 г), VII Всероссийской конференции «Химия и медицина. 0рхимед-2009» (Уфа, 2009 г.), XVI Всероссийской конференции «Структура и динамика молекулярных систем» (Яльчик, 2009г.), V Всероссийской Каргинской конференции «Полимеры — 2010» (Москва, 2010г.), Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы химии. Теория и практика» (Уфа,2010 г.), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием' «Новые материалы, химические технологии и реагенты для промышленности, медицины и сельского хозяйства на основе нефтехимического и возобновляемого сырья» (Уфа,2011 г.)

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 21 печатных работ, из них б статей - в журналах, входящих в перечень, рекомендованный ВАК для публикации материалов диссертационных исследований, 4 статьи - в сборниках статей и 2 статьи - в материалах Международных конференций, тезисы 2 докладов - на Международных и 6 докладов — на Всероссийских конференциях, получен 1 патент РФ с решением о выдаче.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 129 страницах машинописного текста, состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов, списка литературы, включающего 152 источника. Работа включает 14 таблиц и 41 рисунок.

Заключение диссертации по теме «Высокомолекулярные соединения», Чернова, Валентина Витальевна

выводы

1. Установлен факт протекания ферментативной деструкции хитозана по механизму случайного разрыва цепей под действием ферментных препаратов «Коллагеназа», «Лираза», «Трипсин» и «Пепсин», вследствие наличия* в них сопутствующих лизосомальных ферментов с Р~ гликозидазной активностью. Ферментативная деструкция хитозана как в растворе, так и в сформированных из растворов твердых пленочных образцах выражается в уменьшении молекулярной массы хитозана в 5-11 раз.

2. Найдена качественная зависимость между степенью ферментативной деструкции хитозана и надмолекулярным состоянием хитозановых полимерных систем. Показано, что даже в области разбавленных растворов в 5 термодинамически хороших растворителях макромолекулы хитозана в различной степени ассоциированы. В свою очередь это является причиной наблюдающейся зависимости скорости деструкции от термодинамического качества растворителя и концентрации раствора. В деструкции пленочных образцов хитозана при контакте с растворами ферментов надмолекулярный эффект проявляется как зависимость скорости и степени ферментативной деструкции от степени кристалличности образцов и плотности упаковки макроцепей. Предыстория формирования.пленочных образцов, по крайней мере, качество растворителя, концентрационный режим раствора и состав смесей с другими полимерами определяет ферментативную устойчивость пленок.

3. Выявлена принципиальная возможность регулирования ферментативной устойчивости пленочных образцов путем их направленной структурной модификации. Показано, что при переводе хитозана из солевой формы в основную и проведении изотермического отжига, плотность упаковки макромолекул увеличивается, следствием чего является уменьшение степени ферментативной деструкции пленок. Добавление второго полимера, склонного к образованию гетероассоциатов с хитозаном в растворе, - поливинилового спирта или полидиметилдиаллиламмоний хлорида, напротив, приводит к увеличению степени ферментативного разложения пленки, вследствие понижения плотности упаковки макромолекул.

4. Показано, что при использовании хитозана как матрицы-носителя ферментных препаратов, деструкции под действием иммобилизизованных ферментов подвергается аморфная фаза хитозана, следствием чего является повышение степени кристалличности образцов и соответствующее повышение их устойчивости к процессу ферментативного разложения при внешнем контакте с ферментами.

5. Разработан ряд материалов на основе хитозана, в том числе ферментосодержащие пленочные покрытия. Материалы могут быть рекомендованы в качестве временных защитных покрытий при лечении ожогов, защите донорских ран и аутодерматрансплантатов при операциях на глубоких ожогах и консервативном лечении гипертрофических и келоидных рубцов. ь t

Заключение у

Таким образом, проведенные исследования позволяют с уверенностью говорить о том, что в присутствии ферментных препаратов «Коллагеназа»,

Лираза», «Пепсин» и «Трипсин», происходит процесс ферментативной деструкции хитозана. Об этом говорит совокупность экспериментальных фактов по изучению растворов и пленочных образцов хитозана данными вискозиметрии, скоростной седиментации и определения концентрации восстанавливающих Сахаров. Наиболее вероятная причина ферментативной деструкции - наличие в ферментных препаратах сопутствующих ферментов с

3-гликозидазной активностью, вероятно лизосомального происхождения. По этой причине изучаемые нами ферментные препараты также являются причиной ферментативной деструкции другого полисахарида с (3гликозидной связью — карбоксиметилцеллюлозы, и не вызывают распад полисахаридов крахмала и пектина, имеющих а-гликозидную связь.

Использование вискозиметрии в качестве метода исследования, позволило выявить существенную роль надмолекулярных эффектов в процессе ферментативного разложения хитозана. Данные эффекты проявляются и при изучении исходных, не подвергнутых деструкции образцов хитозана, и в ходе изучения процесса деструкции хитозана как в растворе, так и в твердой фазе. Причина этого — высокая склонность хитозана, как полярного полимера, склонного к межмолекулярному взаимодействию, к процессам ассоциации, имеющим место даже в разбавленном растворе. Именно в силу этой причины образцы хитозана, прошедшие предварительно стадию растворения и переосажденные из раствора, характеризуется иной надмолекулярной структурой ассоциатов в растворе, нежели исходный полимер. По этой же причине проявляется зависимость степени ферментативной деструкции хитозана от его концентрации в растворе. По этой причине проявляется зависимость степени ферментативной деструкции

109 хитозана в растворе от степени его ассоциации в растворе. Не менее ярко надмолекулярный эффект проявляется в процессе ферментативной деструкции хитозановых пленок, сформированных путем удаления растворителя (уксусной кислоты). Например, прослеживается очевидная взаимосвязь между значением степени ассоциации раствора хитозана, характеристической вязкости хитозана, определенной для пленочных образцов, и условиями их формирования (концентрацией уксусной кислоты, используемой в процессе получения пленок и временем предварительной выдержки раствора). Принципиально важным, однако, является то, что предыстория получения пленки сказывается не только на степени структурирования системы, но и на степени ферментативного разложения пленок. Таким образом, варьирование надмолекулярной структуры является фактором, оказывающим влияние на степень ферментативного разложения пленочных образцов хитозана. В связи с этим, существует принципиальная возможность, варьируя структуру полученного из раствора пленочного материала, регулировать доступность звеньев хитозана для взаимодействия с ферментом в процессе деструкции, а, следовательно, регулировать скорость и степень- разложения пленки. Проведенные исследования* подтвердили возможность регулирования ферментативной- устойчивости хитозановых пленок за счет направленного структурообразования, осуществляемого в процессе модификации. Например, в пленках, подвергнутых изотермическому отжигу, происходит изменение морфологии пленочного образца, а именно, увеличение степени его кристалличности, а также увеличение плотности упаковки макромолекул. Следствием этого является повышенная ферментативная устойчивость пленок по сравнению с пленками, полученными в солевой форме. Исследованные в качестве вторых полимеров -модификаторов поливиниловый спирт и полидиметилдиаллиламмоний хлорид, наоборот, разрыхляют систему вследствие образования гетероагрегатов из макромолекул, вследствие чего смесевые пленки разлагаются с несколько большей скоростью, нежели исходные, немодифицированные солевые пленки.

С практической точки зрения наилучшие результаты были достигнуты при использовании термомодифицированных и ферментсодержащих пленок. Именно в этих случаях получаемые пленочные материалы обладали хорошими физико-механическими качествами, высокой влагопоглощающей способностью, прекрасными бактерицидными свойствами и повышенной устойчивостью к биоразложению.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Чернова, Валентина Витальевна, 2011 год

1. Muzzarelli R.A.A. Chitin. Oxford: Pergamon Press, 1977. - 309 p.

2. Быкова B.M., Немцев C.B Сырьевые источники и способы получения хитина и хитозана // Хитин и хитозан: получение, свойства и применение / под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. М.: Наука, 2002. -С. 7-23.

3. Феофилова Е.П., Терешина В.М Перспективные источники получения хитина из природных объектов // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана: материалы V Всерос. конф. М.: ВНИРО, 1999. — С. 76-78.

4. Гальбрайх JI.C. Хитин и хитозан: строение, свойства, применение // Соровский образовательный журнал. Серия химия. — 2001. — Т.7, № 1. — С.51-56.

5. Muzzarelli R.A.A. Chitin in nature and technology/ R. A. A. Muzarelli, C. Jeuniaux, G. W. Gooday // New York: Plenum Press, 1986. 420 p.

6. Муринов К.Ю., Монаков Ю.Б. Выделение хитозана из природного сырья // Вестник Башкирского университета. — 2003. №1. - С. 30-33.

7. J 7. Нудьга JI.A., Плиско Е.А., Данилов С.Н. Получение хитозана иизучение его фракционного состава // Журнал общей химии. — 1971. — т.41 — С. 2555-2558.

8. Немцев C.B. Способы получения хитина и хитозана // Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержащихsотходов криля и пути их использования: материалы III Всесоюз. конф. М.: ВНИРО, 1991.-С. 7-15.

9. Маслова Г.В. Теория и практика получения хитина электрохимическим способом // Хитин и хитозан: получение, свойства и применение / под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. М.: Наука, 2002. - С. 24-43.

10. Куприна Е.Э., Водолажская C.B. Способы получения и активации хитина и хитозана // Хитин и хитозан: получение, свойства и применение /под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. — М.: Наука, 2002. — С. 44-63.

11. Маслова Г.В., Куприна Е.Э., Сподобина J1.A. и др. Спосрб получения хитина из панцирьсодержащего сырья. A.c. 175188 А 23 1 1/33 СССР, 1990.

12. Нудьга Л.А., Баклагина TO.F., Петропавловский- Г.А. и др. Надмолекулярная организация и физико-механические свойства волокна из хитина с низкой степенью дезацетилирования // Высокомолекулярные соединения. 1991.-Сер. Б, Т. 33, № 11.-С. 864-868.

13. Штагер В.П., Валеев Н.Х., Язев В.А., Кощеев Г.И. Способ получения хитозана. Заявка 99125648/04 А, 30.11.1999, С08В31/18.

14. Касьянов Г.И.', Квасенков О.И., Николаев А.И., Касьянова Е.Е. Способ получения хитозана. Заявка 97104789/04, 26.03.1997, С08В37/08.

15. Быков В.П., Сныткин И.И., Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Недосекова Т.М., Новиков A.B., Панов К.Н., Фурман Д.И. Способ получения хитозана из ракообразных. Заявка 95121269/04, 26.12.1995, A23L1/33.

16. Иванов A.B., Гартман О.Р., Цветкова A.B., Полторацкая Е.Б. Способ получения хитозана. Заявка 95121269/04, 26.12.1995; С08В37/08.

17. Сливкин А.И, Лапенко, В.Л., Кулинцов П. И., Болгов A.A. Способ получения хитозана из хитина. Заявка 2007131895/13, 22.08.2007, A23L1/33.

18. Варламов В.П., Стояченко И.А., Буданов М.В. Способ получения низкомолекулярного водорастворимого хитозана. Пат. №2073016 РФ. Опубл. в Б.И. 1997.-№4.

19. Танако К., Цумаки К., Нива Т. Водорастворимые низкомолекулярные хитозаны и способы их получения. Заявка- 2-69502 Япония, МКИ С 08 В 37/08, А 61 К 7/001.№63-220377; Заявл. 5.09.88; Опубл. 8.03.90.

20. Chitin and Chitozan: Sources, Chemistry, Biochemistry,Physical Properties and Application. / Ed. T. Anthonsen. — London. N.-Y.: Elsevier Applied Science, 1990.-830 p.

21. Гамзазаде А.И. Структурная неоднородность как фактор изменчивостисвойств хитина и хитозана // Хитин и хитозан: получение, свойства и115применение / под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. — М.:Наука, 2002. С. 112-118.

22. Феофилова Е.П., Немцев Д.В., Терешина В.М., Козлов В.П. Полиаминосахариды мицелиальных; грибов: новые биотехнологии и перспективы практического использования // Прикладная биохимия и микробиология. 1996. - Т. 32, № 5. - С. 483-492.

23. Плиско Е.А., Нудьга JI.A., Данилов С.Н. Хитин и его химические превращения // Успехи химии. 1977. -T.XLVI, Вып.8. - С. 1470-1487.

24. Rinaudo M., Milas M., Le Dung P. Characterization of chitosan. Influence of ionic strength and degree of acetylation on chain expansion // Int. J. Biol. Macromol. 1993. -V. 15, № 5. - P. 281-285.

25. Вихорева Г.А., Роговина C.3., Пчелко O.M1., Гальбрайх JI.C. Фазовое состояние и реологические свойства системы хитозан-уксусная кислота-вода // Высокомолекулярные соединения. — 2001. — Т.43Б, № 6. — С. 1079-1084.

26. Миронов A.B., Вихорева Г.А., Кильдеева Н.Р., Успенский С.А. Причины нестабильности вязкостных свойств уксуснокислотных растворов хитозана // Высокомолекулярные соединения. 2007. — Т.49 Б, № 1. - С. 136138

27. Нудьга JI.A., Петров В.А., Бочек A.M., Каллистов О.В., Петрова С.Ф., Петропавловский Г.А. Молекулярные и надмолекулярные превращения врастворах хитозана и аллилхитозана // Высокомолекулярные соединения. -1997. Т.39 Б, № 7. - С. 1232-1239.

28. Rinaudo М., Pavlov G., Desbrieres J. Influence of acetic acid concentration on the solubilization of chitosan // Polymer. 1999. - V. 40. - P. 7029-7032.

29. Горбачева И.Н., Овчинников Ю.К., Гальбрайх Л.С., Трофимов Н.А., Мажоров В.В. Рентгенографическое изучение структуры хитозана // Высокомолекулярные соединения. — 1988. Т. 30 А, №12. - С. 2512-2515.

30. В.Н. Цветков, В.Е. Эскин, С.Я. Френкель. Структура макромолекул в растворах. М.: Наука, 1964. - 720 с.

31. Федосеева Е.Н., Смирнова Л.А., Федосеев В.Б. Вязкостные свойства растворов хитозана и его реакционная способность // Вестник Нидегородского университета им. Н.И. Лобачевского. 2008. - № 4. - С. 5964.

32. Банникова Т.Е., Ильина А.В., Варламов В.П. Некоторые свойства солейIнизкомолекулярного хитозана в растворах и в сухом виде // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: материалы VI1 международ, конф. М.: ВНИРО, 2001. - С. 265-269.

33. Samuels R.J. Solid State Characterization'of the Structure of Chitosan'Films //J. Polym. Sci. Polym. Physics Ed. 1981. -V. 19, № 7. P. 1081-1105.

34. Вихорева Г.А., Гальбрайх Л.С. Пленки и волокна на основе хитозана // Хитин и хитозан: получение, свойства и применение / под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. М.: Наука, 2002. - С. 254-279.

35. Титова Е.Ф., Белавцева Е.М., Гамзазаде А.И., Скляр A.M., Павлова С.А., Рогожин С.В. Изучение структурообразования хитозана в растворах методом электронной микроскопии // Acta Polymerica. 1986. - V 37, № 2. -P. 121-124.

36. Ikeda H., Yamamura S., Takayama K., Nagai T. Physicochemical properties of chitosan film1 prepared on a metal plate loaded with electric charge // Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 1996. - V. 44, № 7. - P. 1372-1375.

37. Ikeda H., Uchiyama К., Takayama К., Nagai Т. Chitosan Film Prepared on a Metal Plate Loaded with Electric Charge // Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 1995. - V. 43, № 12. - P. 2211-2214.

38. Ikeda H., Takayama K., Nagai T. Drug Permeation Behavior in Chitosan Film Prepared on the Metal Plate Loaded with Electric Charge // Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 1997. - V. 45, № 1. - P. 221-223.

39. Синицына Г.М., Влодавец И.Н., Ребиндер П.А. // Докл. АН СССР. -1967. Т. 175, №2. - С. 399-402.

40. Николаев А.Ф., Прокопов А.А., Шульгина Э.С. Термические и деформационные свойства хитозановых пленок // Журнал прикладной химии. 1985. - Т. LVII, № 8. - С. 1870-1874.

41. Алексеев B.JL, Кельберг Е.А., Бронников С.В., Евмененко Г.А. Структурные и механические свойства пленок, полученных из смесей хитозана и полиэтиленоксида // Высокомолекулярные соединения. 2001. -Т. 43 Б, № 10.-С. 1856-1860.

42. Mi Zhang, Tianwei Tan. Insecticidal and Fungicidal' Activities of Chitosan and Oligo-chitosan // J. Bioactive Compatible Polym. 2003. - V. 18. - P.391-400.

43. Галлиаскарова Г.Г. Закономерности деструкции хитозана под действием перекиси водорода и озона: автореф. дис. . канд. хим. наук. -Уфа, 1997.

44. Комаров Б.А., Албулов А.И. Способ получения водорастворимой формы хитозана. Пат. 2001115860/04 Россия, 2003.

45. Муринов К.Ю., Волошин А.И., Красногорская И.Н., Соков Ю.Ф. Получение низкомолекулярного водорастворимого хитозана // Изв. РАН. Сер. хим. 2002. - №1. - С.52-55.

46. Shih-Chang Hsu, Trong-Ming Don, Wen-Yen Chiu. Free radical degradation of chitosan with potassium persulfate, Polymer Degradation and Stability// Polym. Degrad. Stab. 2002. - №75. - P.73-83.

47. Федосеева E.H., Семчиков Ю.Д., Смирнова JI.A. Деструкция хитозана в растворах под действием окислительно-восстановительной системы // Высокомолекулярные соединения. Сер. Б. — 2006. — Т. 48, №10. — С. 1930 -1935.

48. Varum K.M., Ottoy М.Н., Smidsrod. О. Acid hydrolysis of chitosans // Carbohydr. Polym. 2001. - V. 46, №1. - P. 89-98.

49. Муллагалиев И.Р., Кабальнова H.H., Галиаскарова Г.Г., Монаков Ю.Б. Окислительная деструкция хитозана при озонировании // Журнал прикладной химии. 1997. - Т. 70, №10. - С. 1709-1712.

50. Муринов К.Ю., Курамшина А.Р., Хисамутдинов P.A., Кабальнова H.H. Окисление хитозана гипохлоритом и хлоритом натрия // Башкирский химический журнал. 2003. - Т. 10, №1. - С. 44-46.

51. Гизатуллина Г.А., Новиков В.Ю., Коновалова! И.Н. Деполимеризация хитина и хитозана при кислотном гидролизе // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: материалы VIII Международ, конф. М.: ВНИРО, 2006. - С. 27-30.

52. Новиков В.Ю., Долгопятова Н.В., Коновалова И.Н., Путинцев Н.М. Исследование механизма кислотного гидролиза хитина и хитозана // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: материалы X Международ, конф. М.: ВНИРО; 2010. - С. 50-53.

53. Новиков В.Ю. Кислотный гидролиз хитина и хитозана // Журнал прикладной химии. 2004. - Т.77, №3. - С. 490-493.

54. Рогожин C.B., Гамзазаде А.И., Членов М.А., Леонова Е.Ю., Скляр A.M., Дотдаев С.Х. Частичный кислотный гидролиз хитозана // Высокомолекулярные соединения. 1988. — Т. ХХХ(А), №3. - С. 610-616.

55. Журавлева Н.В., Лукьянов П.А. Хнтинолитические ферменты: источники, характеристика и применение в биотехнологии // Вестник ДВО РАН. 2004. - № 3. - С. 76-86.

56. Fukumizo Т. Chitinolitic enzymes: catalysis, substrate binding, and their application // Curr. Protein Peptide Sci. 2000. - V. 1, № 1. - P. 105-124.

57. Koga D., Mitsutomi M., Kono M., Matsumiya M. Biochemistry of chitinase // Chitin and Chitinases / Eds Jolles P., Muzzarelli R.A.A. Ancona: Atec. Grottammare, 1999.-P. 111-123.

58. Ильина A.B., Ткачева Ю.В., Варламов В.П. Деполимеризация высокомолекулярного хитозана ферментным препаратом целловиридин Г 20Х // Прикладная биохимия и микробиология. 2002. - Т.38, №2. - С. 132135.

59. Zhang Н., Du Y., Yu. X., Mitsutomi М., Aiba S. Preparation of chitosanoligosaccharides from chitosan by a complex enzyme // Carbohydrate Research. 1999. - V.320. - P. 257-260.

60. Fu J.Y., Wu S.H., Chang S.T., Sung H.Y. Characterization of three chitosanase isozymes isolated from a commercial crude porcine pepsin preparation // JournaLagriculture food chemistry. 2003. - V.51, №4. - P. 1042-1048i

61. Hung Т.Н., Chang S.T., Sung H.Y., Chens C.T. Purification and characterization of hydrolase with chitinase and chitosanase activity from commercial stem bromelane. // Journal agriculture food chemistry. — 2002. V.50, №16.-P. 4666-4673-.'

62. Ильина A.B., Варламов В.П. Энзимология синтеза и деградации хитина и хитозана // Хитин и хитозан: получение, свойства и применение / под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. М.:Наука, 2002. - С. 79-90.

63. Ильина А.В., Варламов В.П. Влияние степени ацетилирования на ферментативный гидролиз хитозана препаратом Целловиридин Г20х. // Прикладная биохимия и микробиология. 2003. - Т. 39, № 3. - С. 273-277.

64. Ильина А.В., Варламов В.П. Ацетилирование низкомолекулярного водорастворимого хитозана // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: материалы VI Межд. конф. М: ВНИРО, 2001. - С. 280-283.

65. Большаков И.Н. Инновационные аспекты применения хитозана в медицине // Рыбпром. 2010. - № 2. - С.46-47.

66. Пат. 4701444. США // РЖХим. 1988. №18. О 251П

67. Пат. 51-150398 Яп. // РЖХим. 1985. №21. О 344П.

68. Нудьга J1.A. Производные хитина и хитозана и их свойства // Хитин и хитозан: получение, свойства и применение / под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. М.:Наука, 2002. - С. 141-177.

69. Чирков С.Н. Противовирусные свойства хитозана // Хитин и хитозан: получение, свойства и применение / под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. М.:Наука, 2002. - С.327-338.

70. Галиаскарова Г.Г., Муллагалиев И.Р., Монаков Ю.Б. Применение в медицине хитина и его модифицированных производных // Башкирский химический журнал. — 1996. — Т. 3, вып. 5-6. — С. 3-12.

71. Плиско Е.А., Нудьга JI.A., Данилов С.Н. О-алкилирование хитозана // Журнал общей химии. 1972. - Т. XLIII, №12. - С. 2752-2756.

72. Нудьга J1.A., Плиско Е.А., Данилов С.Н. N алкилирование хитозана // Журнал прикладной химии. - 1973. - Т.23, №12. - С. 2756-2760.

73. Горовой JT.B., Косяков В.Н. Сорбционные свойства хитина и его производных // Хитин и хитозан: получение, свойства и применение // под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. — М.:Наука, 2002. С. 217-246.

74. Knorr D. Use of chitonous polymers in food a challenge for food research and development // Food technology. 1984. - № 1. - P. 85-99.

75. Дубинская A.M., Добротворская A.E. Применение хитина и его производных в фармации // Хим.-фарм. журнал. 1989. - № 5. - С. 623-628.

76. Тосленко А .Я., Попова В.Г. Хитин и его производные в биотехнологии: обзор, информ. /Гл. управ, микробиол. пром-сти при Сов. М-ов СССР. — М., 1982.-40 с.

77. Хитин и хитозан: получение, свойства и применение / под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. — М.:Наука, 2002. 365 с.

78. Червинец В.М., Смоленская Л.П., Чекесов М.И., Албулов А.И. Опыт лечения язвенной' болезни двенадцатиперстной кишки хитозаном // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: матер. VI Международ, конф. М.: ВНИРО, 2001. С. 255-258.

79. Заявка 19742318 Германия, МПК6 С 08 L 5/08, С 08 L 21/02. Опубл. 01.04.1999. РЖХ 00.09-19Ф.48П.

80. Чирков С. И. Противовирусные свойства хитозана // Новые достижения в исследовании хитина и. хитозана: матер. VI Международ, конф. М.: ВНИРО, 2001. - С. 120-124.

81. Жоголев К.Д., Никитин В.Ю., Цыган В.И., Егоров В.Н. Разработка и изучение некоторых лекарственных форм препаратов на основе хитозана// Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: матер. VI Международ, конф. М.: ВНИРО, 2001. - С. 163-167.

82. Hirano S., Tanaka Y., Hasegava M. et al. Effect of sulfated derivatives of chitosan on some blood coagulant factors // Carbohydr. Res. 1985. - V. 137. - P. 205-215.

83. Kato Y., Onishi H., Machida Y. Efficacy of lactosaminated and intact N-succinylchitosanmitomycin С conjugates against M5076 liver metastatic cancer // J. Pharm. Pharmacol. 2002. - V. 54, № 4. - P. 529-537.

84. Kum Young Ho, Choi Hyung-Min, Yoon Jung Нее Synthesis of a quaternary ammonium derivative of chitosan and its application to a cotton antimicrobial finish// Text. Res. J. 1998. - V. 68, № 6. - P. 428-434.

85. Гамзазаде А.И., Корнилова Г.В., Карамов Э.В. Биологическая активность некоторых производных сульфата хитозана.// Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: матер. VII Международ, конф. М.: ВНИРО, 2003. - С. 165-166.

86. Сливкин А.И., Лапенко В.Л., Арзамасцев А.П., Болгов А.А. Аминоглюканы. в качестве биологически активных компонентов лекарственных средств // Вестник ВГУ. Сер.: Химия. Биология. Фармация. -2005.-№2.-С. 73-87.

87. Симко И.В., Лазаренко В.И., Большаков И.Н., Кузовников В.В. Способ лечения атрофии зрительного нерва; Пат. РФ №2309749. МПК7 А61К 31/722, 31/726,31/727,38/30, приоритет №2006120253/14 (021998) от 08.06.2006.

88. Кузовников В.В., Большаков И.Н1, Лазаренко В.И. Способ профилактики прогрессивной близорукости. Пат. РФ № 2275917. МПК7 А61 КЗ 1/722, А61 К 31/728, А61 К 38/18, А61 Р27/02,.приоритет № 2005108099 (009669) от 23.03.2005.

89. Барахтенко Н.Н., Левенец А.А., Большаков И.Н. «Бол-хитал» новый инновационный продукт в челюстно-лицевой хирургии // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: матер. IX Междун. конф. — М.: ВНИРО, 2008. - С. 138-140.

90. Ueno Н., Mori Т., Tanaka I., Kaba N., Matsuura M., Okumura M., Kadosawa Т., Fujinada Т. Accelerating effects of chitosan for healing at early phase of experimental open wound in dogs // Biomaterials, 1999. V. 20. p. 14071414.

91. Березин И.В., Клячко H.JL, Левашов A.B., Мартинек К., Можаев В.В., Хмельницкий Ю.Л. Иммобилизованные ферменты кн. 7 // Биотехнология: 8 кн. / под ред. Н. С. Егорова, В. Д. Самуилова. М.: Высшая школа, 1987. -159 с.

92. Н. Ф. Казанская, Н. И. Ларионова, В. П. Торчилин. Ферменты и белковые препараты в медицине // Биотехнология: уч. пособие / под ред. Баева A.A.-М.: Наука, 1984.-С. 113-125.

93. Кузьмина H.A. Основы биотехнологии Электронный ресурс. // Учебное пособие, Омский Государственный Университет. Режим доступа: http://wvvw.biotechnolog.ru/prombtyprombtl02.htm

94. Беленова A.C. Исследование закономерностей гидролиза триглицеридов свободной и иммобилизованной липазой: автореф^ дис. .г канд. биол. наук. Воронеж, 2011. - 24 с.5 124. Коллахит. Раневые покрытия. Электронный ресурс. Режим доступа:http://kollahit.ru.

95. Информационный сайт Научно-исследовательского института текстильных материалов Электронный ресурс. — Режим доступа: http://www.polyferm.ru.

96. Тихонов В.Е., Краюхина М.А., Гнатюк Н.Г., Ямскова В.П., Ямсков И.А. Новое лекарственное средство на основе хитозана «Адгелон-гель» // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: материалы VI Международ, конф. - М. ВНИРО, 2001. - С. 235-236.

97. Горбачева И.Н., Овчиников Ю.К., Гальбрайх JI.C., Трофимов Н.А., Мажоров В.В. Рентгенографическое изучение структуры хитозана // Высокомолекулярные соединения. 1988. - Т.ЗО А, №12. - С. 2512- 2515.

98. Рафиков С.Р., Будтов В.П., Монаков Ю.Б. Введение в физико-химию растворов полимеров. М.: Химия, 1978. - 320 с.

99. Будтов В.П. Физическая химия растворов полимеров. — СПб.: Химия, 1992.-384 с.

100. Рабинович M.JL, Клесов А.А., Березин И.В. Вискозиметрический анализ кинетики гидролиза карбоксиметилцеллюлозы // Биоорганическая химия. -1977. Т. 3, № 3. - С.405-414.

101. Клесов А.А., Рабинович М.Л., Синицын А.П., Чурилова И.В., Григораги С.Ю. Ферментативный гидролиз целлюлозы. I. Активность и компонентный состав целлюлазных комплексов из различных источников // Биоорганическая химия. 1980. - Т. 6, № 8. - С.1225-1242.

102. Степаненко Б.Н. Химия и биохимия углеводов (полисахариды). — М.: Высшая школа, 1977. — 224 с.

103. Папков С.П. Равновесие фаз в системе полимер-растворитель. М.: Химия; 1981.-272 с.

104. Чалых А.Е., Герасимов В.Н., Михайлов Ю.Н. Диаграммы фазового состояния полимерных систем. М.: Янус К, 1998. - 199 с.

105. Samuels R.J. Solid State Characterization of the Structure of Chitosan Films // J. PolymSci. Polym. Physics Ed. 1981. - V. 19, № 7. - P.1081-1105.

106. Геллер Б.Э., Геллер A.A., Чиртулов В.Г. Практическое руководство по физикохимии волокнообразующих полимеров: учебное пособие для вузов. 2-е изд. -М.: Химия, 1996. 432 с.

107. Лопатин С.А., Дербенева М.С., Куликов С.Н., Варламов В.П., Шпигун О.А. Фракционирование хитозана методом ультрафильтрации // Журнал аналитической химии. 2009. - Т. 64, № 6. - С. 666-670.

108. Черкасова Е.И., Смирнова Я.А., Смирнов В.Ф. Измерение молекулярной массы олигомеров хитозана // Высокомолекулярные соединения. 2006. - Сер. Б, Т. 48, № 3. - С. 557-560.

109. Аринштейн А.Э. Влияние агрегационных процессов на вязкость суспензий // Журнал экспериментальной и теоретической физики. — 1992. —Т. 101, Вып. 4.-С. 1209-1215.

110. Иващенко Г.Л., Шахтшнейдер, В.В.Болдырев, Н.Г.Базарнова, А.В.Иванов, О.Р.Гартман. Механическая активация, как способ получения водорастворимых форм хитина и хитозана в твердой фазе // Химия в интересах устойчивого развития. 2002. — №10. - С. 69-76.

111. Чеботок Е. Н., Новиков В. Ю., Коновалова И. Н. Влияние кристалличности хитина и хитозана на кинетику щелочного деацетилирования // Журнал прикладной химии. 2007. - Т. 80, вып 10. -С. 1724-1729.

112. Чалых А.Е., Сапожникова И.Н., Булгакова P.A., Соколова Н.П. Закономерности фазовых и конформационных переходов в системе ПВХ-МЭК // Высокомолекулярные соединения-1987 Сер.А, Т. 29, № 8. - С. 1749-1754.

113. Колесов C.B., Кулиш Е.И., Минскер K.G. Роль надмолекулярной структуры в процессе деструкции поливинилхлорида в растворе // Высокомолекулярные соединения. -1994. Сер. Б, Т. 36, № 8. - С. 1383-1384.

114. Кулиш Е.И., Колесов C.B., Минскер К.С., Заиков Г.Е. Влияние структурно-физического состояния поливинилхлорида в растворе на его термический распад // Высокомолекулярные соединения. 1998. - Сер. А, Т. 4, №8.-С. 1309-1313.

115. Кулиш Е.И., Герчиков А .Я., Чирко К.С., Колесов C.B., Заиков Г.Е. Особенности окисления полибутадиена в растворе // Высокомолекулярные соединения. -2004. Сер. Б, Т. 46. № 2. - С. 349-353.

116. Эмануэль Н.М., Бучаченко А.Л. Химическая физика старения и стабилизации полимеров. -М.: Наука, 1982. 359 с.

117. Федосеева E.H., Алексеева М.Ф., Смирнова JI.A. Механические свойства пленок хитозана различной молекулярной массы // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. -2008. № 5. — С. 5862.

118. Кулезнев В.Н.Смеси полимеров. М.: Химия, 1980. - 304 с.

119. Зоткин М.А., Вихорева Г.А., Кечекьян A.C. Термомодификация хитозановых пленок в форме солей с различными кислотами // Высокомолекулярные соединения. 2004. - Сер. Б, Т. 46, № 2. - С. 359-363.

120. Бабаев М.С., Кулиш Е.И., Мударисова Р.Х., Колесов C.B. Изучение взаимодействия хитозана с трипсином // матер, пятой Всерос. каргинской конференции «Полимеры 2010». М., 2010. - С. 137.

121. Мударисова Р.Х., Бабаев М.С., Галяутдинов A.A., Кулиш Е.И. Ферментсодержащие хитозановые пленки // тезисы докладов 8 Всерос. конф. с международным участием Химия и медицина. Уфа, 2010. - С.258-259.1.