Внутрипопуляционная изменчивость люцерны посевной (Medicago sativa L.) по содержанию антипитательных соединений тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.12, кандидат биологических наук Никитина, Екатерина Валерьевна

• Никитина, Екатерина Валерьевна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Никитина, Екатерина Валерьевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. АНТИПИТАТЕЛЬНЫЕ ВЕЩЕСТВА КОРМОВОЙ МАССЫ ЛЮЦЕРНЫ: СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ.

1.1. Тимпания жвачных животных.

1.1.1. Пенящие агенты.

1.2. Сапонины.

1.3. Конденсированные танины.

1.4. Фитоэстрогены.

1.5. Флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты.

1.5.1. Флавоноиды.

1.5.2. Фенолкарбоновые кислоты.

1.6. Другие вторичные метаболиты.

1.7. Биохимические аспекты селекции люцерны в связи с проблемой антипитательных веществ.

1.8. Внутрипопуляционная изменчивость биохимических признаков люцерны.

2. ИСХОДНЫЙ МАТЕРИАЛ, ПОГОДНО-КЛИМАТИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследования.

2.2. Характеристика погодно-климатических условий произрастания люцерны посевной.

2.3. Методы исследования.

3. АНАЛИЗ ВНУТРИПОПУЛЯЦИОННОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ ЛЮЦЕРНЫ ПОСЕВНОЙ ПО БИОХИМИЧЕСКИМ ПРИЗНАКАМ.

3.1. Содержание сухих веществ.

3.2. Содержание белка.

3.3. Способность к пенообразованию.

3.4. Сапонины.

3.5. Танины.

3.6. Фитоэстрогены.

3.7. Флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты.

3.8. Статистическая обработка результатов.

3.8.1. Корреляционный анализ.

3.8.1.1. Связь содержания сапонинов и танинов с пенообразованием.

3.8.1.2. Связь антипитательных факторов с дифференциацией особей по содержанию белка.

3.8.1.3. Связь между содержанием различных групп антипитательных веществ в растениях люцерны.

3.8.2. Анализ главных компонент.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

5. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Внутрипопуляционная изменчивость люцерны посевной (Medicago sativa L.) по содержанию антипитательных соединений»

Актуальность темы

Люцерна (Medicago L.) в качестве кормовой культуры широко распространена по всему миру, в том числе в зонах умеренного климата. Она является одной из наиболее ценных кормовых культур, так как весьма богата белком, витаминами и минеральными веществами.

Однако кормовая масса люцерны содержит некоторые химические вещества (антипитательные, или антиметаболические), которые могут отрицательно влиять на её кормовые качества, приводить к заболеваниям и даже гибели животных. Наиболее существенной отрицательной особенностью вегетативной массы люцерны является её способность вызывать повышенное пенообразование в пищеварительном тракте жвачных животных. Образование стабильной пены в рубце жвачных приводит к серьёзному заболеванию - тимпании, или вздутию жвачных. Есть предположение, что повышенное пенообразование люцерновых кормов частично обусловлено присутствием в надземной массе таких продуктов вторичного метаболизма растений, как сапонины (Klita et al., 1996). Кроме того, сапонины могут производить и другие отрицательные воздействия на организм животных (Cheeke, 1971; Bondi et al., 1973; Oleszek, 1996).

Конденсированные фенолы, или танины, могут способствовать предотвращению тимпании, разрушая пену в рубце жвачных животных (Lees, 1992; Tanner et al., 1995). Однако танины при высоком их содержании в кормовой массе могут понижать перевариваемость белка и сухой массы жвачными животными, (Barry, 1989).

Кормовая масса люцерны характеризуется наличием такого класса вторичных метаболитов, как фитоэстрогены (изофлавоноиды и кумарины), названные так за способность производить эстрогенный эффект в организме животного, приводящий часто к весьма нежелательным последствиям, вплоть до бесплодия самок (Moule et al., 1963). Однако в небольших количествах фитоэстрогены могут оказывать положительное влияние на продукцию животноводства, в частности, стимулируя рост ягнят (Oldfield et al., 1966).

Флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты, вероятно, не представляют прямой угрозы здоровью и жизни сельскохозяйственных животных, потребляющих корма из люцерны, но также могут ухудшать вкусовые качества кормов (в ходе эволюции определилась важная функция таких продуктов вторичного обмена, как фенольные соединения, к которым относятся флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты, - защита растений от поедания животными (Beart et al., 1985).

Для многолетних видов люцерны, как для перекрёстноопыляющихся культур, характерен определенный уровень внутрипопуляционной изменчивости по многим, в том числе биохимическим, признакам (Иванов, Гаврилюк, Эгги, 1979; Полякова, Ершова, 2000). В связи с этим, представляется актуальным изучить эту изменчивость по наиболее важным антипитательным факторам, оказывающим существенное влияние на экономический эффект использования люцерны на корм, а также связь этих признаков с одним из наиболее важных показателей качества кормовой массы - содержанием белка. Целесообразной представляется попытка дать рекомендации по наиболее эффективной форме отбора растений в ходе селекции на качество зеленой массы люцерны.

Основной целью настоящей работы является характеристика закономерностей внутрипопуляционной изменчивости содержания антипитательных веществ на примере двух селекционных популяций люцерны посевной, или синей (Medicago sativa L.) для более эффективной селекции на качество.

В задачи исследований входило:

• определить на уровне индивидуальных растений содержание основных антипитательных веществ (сапонины, фитоэстрогены) и величину показателя пенообразования, а также некоторых других вторичных соединений, присутствие которых может оказать существенное влияние на формирование антипитательных свойств люцерны (танины, флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты) для двух взятых в изучение селекционных популяций люцерны;

• выявить закономерности внутрипопуляционной изменчивости у двух селекционных популяций люцерны по содержанию белка и важнейших антипитательных факторов для обоснованного формирования селекционного материала (селекционной популяции).

Научная новизна. Впервые для люцерны, произрастающей в условиях Северо-Западного региона, выявлены закономерности внутрипопуляционной изменчивости по содержанию белка и важнейшим антипитательным факторам. Показано, что внутрипопуляционное распределение растений люцерны по содержанию антипитательных соединений характеризуется преобладанием растений с относительно невысоким содержанием данных веществ при наличии малочисленных группы растений с высоким содержанием данных групп соединений. Установлено, что содержание сапонинов в растениях исследованных популяций люцерны достоверно коррелирует со способностью зелёной массы к пенообразованию, т.е. может влиять на заболеваемость жвачных животных тимпанней.

Практическая значимость работы. Полученные данные о закономерностях внутрипопуляционной изменчивости у люцерны посевной по содержанию белка и важнейших антипитательных веществ позволят более эффективно вести селекцию культуры на улучшение питательных (кормовых) свойств. В частности: выделять в селекционной популяции группу растений со стабильным содержанием белка или определённых, б важных для целей селекции, антиметаболитов и вести селекционную работу, формируя популяцию на основе этой группы генотипов. Для оценки большого числа растений предложен экспресс-метод определения содержания основных антипитательных соединений люцерны с использованием инфракрасной спектроскопии.

Апробация работы. Результаты работы доложены на научно-практических конференциях аспирантов и молодых ученых ГНУ ГНЦ РФ ВИР им. Н.И. Вавилова в 1996 и 1998 гг., на совещаниях Отдела биохимии и молекулярной биологии ГНУ ГНЦ РФ ВИР им. Н.И. Вавилова.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы, в т.ч. две в журналах, входящих в список ВАК.

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Никитина, Екатерина Валерьевна

5. ВЫВОДЫ

1. Изученные селекционные популяции люцерны посевной {Medicago sativa L.) характеризуются широким диапазоном внутрипопуляционной изменчивости по содержанию важнейших антипитательных соединений, что необходимо учитывать при селекции люцерны на качество.

2. Показано, что в исследованных популяциях люцерны посевной (.Medicago sativa L.) преобладают растения, характеризующиеся нестабильным (за два года изучения) содержанием антипитательных соединений (до 80% популяции) и белка (до 70%> популяции). Лишь единичные растения в популяциях одновременно сохраняли стабильным содержание всех исследованных нами антиметаболических соединений и белка.

3. Растения (до 20% в популяции) со стабильным (за два года изучения) содержанием антипитательных соединений и белка (до 30% растений в популяции) характеризовались значениями этих признаков, близкими к средним по популяции.

4. Растения, характеризующиеся самыми низкими и самыми высокими концентрациями антипитательных соединений (сапонины, фитоэстрогены), белка, хуже переносят зимний период.

5. Установлено, что содержание сапонинов в растениях исследованных популяций люцерны коррелирует со способностью зелёной массы к ценообразованию, т.е. может влиять на возникновение тимпании жвачных.

6. Отсутствие прямой зависимости между таким важным показателем качества люцерны, как содержание белка, и содержанием важнейших антипитательных факторов свидетельствует о возможности независимой селекции на эти признаки.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Никитина, Екатерина Валерьевна, 2007 год

1. Абдушаева Я.М., Дегунова Н.Б., Кун C.B. Создание агрофитоценозов люцерны в условиях Новгородской области. Фундаментальные исследования. 2006. №5. С. 21-24.

2. Бриггс Ф., Ноулз П. Научные основы селекции растений. М.: Колос. 1972. 400 с.

3. Дзюбенко Н.И., Марьина О.И. Метод определения сапонинов и возможности снижения их уровня в кормовой массе люцерны. Сб. науч. тр. прикл. бот., генет., селек. ВИР. 1986. Т.107. С. 92-96.

4. Запрометов М.Н. Фенольные соединения: Распространение, метаболизм и функции в растениях. М.: Наука. 1993. 272 с.

5. Иванов А.И. История, происхождение, эволюция рода Medicago L. подрода Falcago (Reichb) Grossh. Тр. по прикл. ботанике, генетике и селкции. 1977. Т. 59. Вып. 1. с. 3-40.

6. Иванов А.И., Гаврилюк И.П., Егги Э.Э. Иммунохимичский анализ и эволюция многолетних видов люцерны. Бюллетень ВИР. 1979. Вып. 91. С. 53-56.

7. Илиева А., Васильева Б. Оценка сортов и селекционного материала люцерны по содержанию сапонинов гемолитическим методом. Растен. науки. 1989. 4.26. №9. С.45-49.

8. Исследование биологически активных веществ плодовых культур. Под ред. Г.Б.Самородовой-Бианки. Л.: ВНИИР. 1989. 80 с.

9. Конарев A.B. Биохимия в ВИРе: некоторые проблемы и перспективы сельскохозяйственных растений. Научно-технический бюллетень ВНИИР им. Н.И.Вавилова. Вып. 202. С.3-5.

10. Конарев В.Г. Проблемы вида и генома в селекции растений. Генетика. 1994. Т. 30. №10. С.1293-1305.

11. Методические указания. Изучение коллекции многолетних кормовых трав. Сост. А.И.Иванов и др. Л.: ВНИИР. 1985. 39 с.

12. Методы биохимического исследования растений. Под ред. А.И.Ермакова. 3-е изд., перераб. и доп. Л.: Агропромиздат. 1987. 430 с.

13. Пасешниченко В.А. Растения продуценты биологически активных веществ. Соросовский образовательный журнал. Т. 7. №8. 2001. С. 1319.

14. Полякова Л.В., Ершова Э.А. Внутрипопуляционная и межпопуляционная изменчивость люцерны желтой по некоторым биохимическим признакам. Сибирский вестник с.-х. науки. 1985. №4. С. 37-41.

15. Полякова Л.В., Ершова Э.А. Изменчивость фенольных соединений у некоторых травянистых и древесных растений от межпопуляционного до внутрииндивидуального (эндогенного) уровня. Химия растительного сырья. 2000. №1. С.121-129.

16. Сметанникова А.И. Люцерна на Северо-Западе СССР. Л.: Наука. 1967. 224 с.

17. Смиряев A.B., Кильчевский A.B. Генетика популяций и количественных признаков. М.: КолосС. 2007. 272 с.

18. Харченко Ю.В. Создание и изучение исходного материала для селекции сортов люцерны с пониженным содержанием пенообразующих веществ. Автореф. дисс. СПб: 1994. 20 с.

19. Яковлев В.Б. Статистика. Расчеты в Microsoft Excel. М.: КолосС, 2005. 352 с.

20. Achnine Г., Huhman D.V., Farag М.А., Sumner L.W., Blount J.W. and Dixon R.A. Genomics-based selection and functional characterization of triterpene glycosyltransferases from the model legume Medicago truncatula The Plant Journal. 2005. 41: 875-887.

21. Aerts, J.R., Barry, T.N. and McNabb, W.C. Polyphenols and agriculture: benefcial effects of proanthocyanidins in forages. Agric. Ecosyst. Environ. 1999. 75: 1-12.

22. Agrelli J„ Oleszek W,, Stochmal A., 01 sen ML, Anderson P. Herbivore-induced responses in alfalfa (Medicago sativa). J. Chem. Ecol. 2003. 29(2): 303-20.

23. Bangham, A.D., Home, R. W. Action of saponin on biological cell membranes. Nature (Lond.). 1962. 196: 952.

24. Barry, T.N. and McNabb, W.C. The implications of condensed tannins on the nutritive value of temperate forages fed to ruminants. Br. J. Nutr. 1999. 81: 263-272.

25. Beart J.E., Lilley T.H., Haslam E. Plant polyphenols secondary metabolism and chemical defence: come observations. Phytochem. 1985. 24. 1: 33-38.

26. Bialy, Z., Jurzysta, M., Oleszek, W., Piacente, S. and Pizza, C. Saponins in alfalfa (Medicago sativa L.) root and their structural elucidation. J. Agric. Food Chem. 1999. 47: 3185-3192.

27. Bickoff, E.M., Kohler, G.O., Smith D. Chemical composition of herbage. Agronomy. 1972. 15:247-282.

28. Birk, Y. Saponins. In I.E. Liener (ed.). Toxic constituents of plant foodstuffs. Academic Press, New York. 1969. P. 169-210.

29. Bondi, A., Birk, Y. and Gestetner, B. Forage saponins. In G.W.Butler and R.W.Bailey (ed.) Chemistry and biochemistry of herbage. Academic Press, New York. 1973. P. 511-528.

30. Broderick, G.A., Albrecht K.A. Ruminal in vitro degradation of protein in tannin-free and tannin-containin forage legume species. Crop. Sci. 1997. 37: 1884-1891.

31. Brookbanks, E.O., Welch, R.A.S. and Coup, M.R. Oestrogens in pasture and a possible relationship with mastitis. N. Z. Vet. J. 1969. 17: 159-160.

32. Cheeke, P.R. Nutritional and physiological implications of saponins: a review. Can. J. Anim. Sci. 1971. 51: 621-632.

33. Dixon R., Paiva N. Stress-induced phenylpropanoid metabolism. The Plant Cell. 1995. 7: 1085-1097.

34. Duke, J.A. Handbook of phytochemical constituents of GRAS herbs and other economic plants. Boca Raton, FL. CRC Press. 1992.

35. Frank, N.A., Sanger, V.L., Pounden, W.D., Pratt, A.D. and Van Keuren, R. Forage estrogens and their possible influence on bovine mastitis. J. Am. Vet. Med. Assoc. 1967. 150: 503-507.

36. Fenwick D.E., Oakenfull D.O. Saponin content of food plants and some prepared foods. J. Sci. Food Agric. 1983. 34: 186-191.

37. Free B.L., Satterlee L.D. Biochemical properties of alfalfa protein concentrate. J. Food Sci. 1975. 40: 85-89.

38. Goplen, B.P., Howarth R.E., Sarkar S.K., Lesins K. A search for condensed tannins in annual and perennial species of Medicago, Trigonella, and Onobrychis. Crop. Sci. 1980. 20: 801-804.

39. Hill R.R., Shenlc J.S., Barnes R.F. Breeding for yield and quiality In Hanson (ed). et al. Alfalfa and alfalfa improvement. ASA-CSSA-SSSA. Agronomy Monograph. 1988. 29: 809-825.

40. Heywang, B.W., Thompson, C.R., and Kemmer, A.R. Effect of alfalfa saponin on laying hens. Poult. Sci. 1959. 38: 968-971.

41. Hostettmann, K. and Marston, A. Saponins. Cambridge University Press. Cambrige. 1995.

42. Howarth, R.E. Antiquality factors and nonnutritive chemical components. In Hanson (ed.) et al. Alfalfa and alfalfa improvement. ASA-CSSA. Agronomy Monograph. 1988. 29: 493-514.

43. Howarth, R.E., Chaplin, R.K., Cheng, K.-J., Goplen, B.P., Hall, J.W., Hironaka, R., Majak, W. and Radostits, O.M. Bloat in cattle. Agriculture Canada Publ. 1858/E. Ottawa, Ontario, Canada. 1991.

44. Hudson, B.J.F., Mahgoub, S.E.O. Naturally-occurring antioxidants in leaf lipids. J. Sci. Food Agric. 1980. 31: 646-650.

45. Klita, P.T., Mathison, G.W., Fenton, T.W. and Hardin, R.T. Effects of alfalfa root saponins on digestive function in sheep. J. Anim. Sci. 1996. 74: 1144-1156.

46. Kowalska, I, Stochmal, A., Kapusta, i, Janda, B., Pizza. C„ Piacente, S.„ Oleszek, W. Flavonoids from barrel medic (Medicago truncatula) aerial parts. J. Agric. Food Chem. 2007. 55(7): 2645-52.

47. Kushiro, T., Shibuya, M. and Ebizuka, Y. P-Amyrin synthase. Cloning of oxidosqualene cylase that catalyzes the formation of the most popular triterpene among higher plants. Eur. J. Biochem. Plant Sci. 1998. 5: 380386.

48. Lahiry, N.L., Satterlee, L.D., Hsu, H.W., Wallace, G.W. Characterization of the chlorogenic acid binding fraction in leaf protein concentrates. J. Food Sci. 1977. 42: 83-85.

49. Latunde-Dada, A.O., Lucas, J.A. Involvement of the phytoalexin medicarpin in the differential response of callus linesof lucerne {Medicago sativa) to infection by verticillium albo-atrum. Physiol. Plant Path. 1985. 26: 31-42.

50. Lees, G.L. Condensed tannins in some forage legumes: their role in prevention of ruminant pasture bloat. In Hemingway, R.W. and Laks, P.E. (eds.). Plant Polyphenols. 1992. 1: 915-935.

51. Livingston, A.L. Forage plant estrogens. J. Toxicol. Environ. Health. 1978. 4: 301-324.

52. Livingston, A.L., Knuchlees, B.E., Miller, R.H. and Kohler, G.O. Distribution of saponin in alfalfa protein recovery systems. J. Agric. Food Chem. 1979. 27(2): 362-365.

53. Lungh, T. Metabolism of estrogenic isoflavones in domestic animals. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1995. 208: 33-39.

54. Majak, W., Howarth, R.E., Fesser, A.C., Goplen, B.P. and Pedersen, M.W. Relationships between ruminant bloat and the composition of alfalfa herbage. II. Saponins. Can. J. Anim. Sci. 1980. 60: 699.

55. Majak, W., Hall, J.W., McCaughey, W.P. Pasture management strategies for reducing the risk of legume bloat in cattle. J. Anim. Sci. 1995. 73: 14931498.

56. Majak W., McAllister, T.A., McCartney, D., Stanford, K., Cheng, K-J. Bloat in cattle. Alberta Agriculture, Food and Rural Development Information Packaging Center, Edmonton, Alberta, Canada. 2003.

57. Makkar, H.P.S., Blummel, M. and Becker, K. In vitro effects of and interactions between tannins and saponins and fate of tannins in the rumen. J. Sci. Food Agric. 1995. 69: 481-493.

58. Malinow, M.R. Triterpenoid saponins in mammals: effects on cholesterol metabolism and atherosclerosis, In W.D. Nes (ed.) et al. Isopentenoids in plants. Marcel Dekker, New York. 1984. 229-246.

59. Massiot, G., Lavaud, C., Besson, V., Le Men-Olivier, L. and Van Binst, G. Saponins from te aerial part of alfalfa (Medicago sativa). J. Agric. Food Chem. 1991. 39: 78-82.

60. McSweeney, C.S., Palmer, В., McNeill, D.M. and Krause, D.O. Microbial interactions with tannins: nutritional consequencs for ruminants. Animal Feed Sci. Tech. 2001. 91: 83-93.

61. Milic B. L. Lucerne tannins. I. Content and composition during growth J . Sci. Food Agric. 2001. 23(10 ): 1151-1156.

62. Michaud, R., Lehman, W.F., and Rumbaugh, M.D. World distribution and historical development. In A. Hanson, D.K. Barnes, and R.R. Hill (eds) Alfalfa and alfalfa improvement. American Society of Agronomy. Madison, WI. 1988.259-291.

63. Monsanto. Safety, compositional and nutritional assesment of roundup ready alfalfa events J101 and J103. U.S. FDA/CFSAN. BNF84. 2003.

64. Monties В., Rambourg J.C. Occurrence of flavonoids (flavones and coumestans) in alfalfa (Medicago saliva var. Europe) leaf proteins. Ann. Technol. Agric. 1978. 27: 629-654.

65. Moule, G.R., Braden, A.W.H. and Lamond, D.R. The significance of oestrogens in pasture plants in relation to animal production. Anim. Breed. Abstr. 1963. 31: 139-157.

66. Newby, V.K., Sablon, R.M., Synge, R.L.M. Free and bound phenolic acids of lucerne (Medicago sativa cv. Europe). Phytochemistry. 1980. 19: 651657.

67. Nowacka, J., Oleszek, W. Determination of alfalfa (.Medicago sativa) saponins by high performance liguid chromatography. J. Agric. Food Chem. 1994. 42(3): 727-30.

68. Oldfield, J.E., Fox, C.W., Bahn, A.V., Bickoff, E.M. and Kohler, G.O. Coumestrol in alfalfa as a factor in growth and carcass quality in lambs. J. Anim. Sci. 1966. 25: 167-174.

69. Oleszek, W. Saponin fractions from Medicago sativa: liquid chromatographic separations. J. Chromatogr. Sci. 1991. 29: 128.

70. Oleszek, W. Alfalfa saponins: structure, biological activity, and chemotaxonomy. In Waller and Yamasaki (eds.). Saponins used in food and agriculture. Plenum Press. New York. 1996. 155-170.

71. Oleszek, W. Personal communication to W. D. Price, US Food and Drug Administration, Rockville, MD. 2004.

72. Oleszek, W., Jurzystra, M., Ploszynski, M., Colquhoun, I.J., Price, K.R. and Fenwick, G.R. Zanhic acid tridesmoside and other dominant saponins from alfalfa {Medicago sativa L.) aerial parts. J. Agric. Food Chem. 1992. 40: 191-196.

73. Pedersen, M.W., Zimmer, D.E., McAllister, D.R., Andersen, J.O., Wilding, M.D., Taylor, G.A. and McGuire, C.F. Comparative studies of saponin of several alfalfa varieties using chemical and biochemical assays. Crop Sci. 1967. 7: 349.

74. Popp, J.D., McCaughey, W.P., Cohen, R.D.H., McAllister, T.A. and Majak, W. Enchancing pasture productivity with alfalfa: a review. Can. J. Plant Sci. 2000. 80: 513-519.

75. Robbins, M.P., Bavage, A.D., Strudwicke, C., Morris, P. Genetic manipulation of condensed tannins in higher plant II. Analysis of birdsfoot trefoil plants harboring antisense dihydroflavonol reductase. Plant Physiol. 1998. 116: 1133-1144.

76. Rosenthal, G.A., Nkomo, P. The natural abundance of L-canavanine, an active anticancer agent, in alfalfa (.Medicago sativa L.). Pharmaceutical Biology. 2000. 38: 1-6.

77. Rumbaugh, M.D. Breeding bloat-safe cultivars of bloat-causing legumes. Forage legumes for energy-efficient animal production. Proceeding of a trilateral workshop held in Palmerston North, New Zealand. April 30-May 4, 1984.

78. Saleh, N.A., Boulos, L., El-Negoumy, S.I. and Abdalla, M.F. A comparative study of the flavonoids of Medicago radiala with other Medicago and related Trigonella species. Biochem. Systematics Ecol. 1982. 10 p.33-36.

79. Sarkar S.K, Howarth R.E. Specificity of the vanillin test for flavanols. J. Agric. Food Chem. 1976. 24: 317-320.

80. Sylwia, G., Leszczynski, B„ Oleszek, W. Effect of low and high-saponin lines of alfalfa on pea aphid. J. Insect Physiol. 2006. 52(7): 737-743.

81. Smolenski, S.J., Kinghorn, A.D. and Balandrin, M. Toxic constituents of legume forage plants. Econ. Bot. 1981. 35: 321-355.

82. Stob, M. Naturally occurring food toxicants estrogens. In M. Rechcigl (ed.). CRC handbook of naturally occurring food toxicants. CRC Press. Boca Raton, FL. 1983. 81-100.

83. Stochmal, A., Piacente, S., Pizza, C., DeRiccardis, F., Leitz, R., Oleszek, W. Alfalfa (.Medicago sativa L.) flavonoids. 1. Apigenin and luteolin glycosides from aerial parts. J. Agric. Food Chem. 2001a. 49: 753-758.

84. Stochmal, A., Simonet, A.M., Macias, F.A., Oleszek, W. Alfalfa {Medicago sativa L.) flavonoids. 2. Tricin and chrysoeriol glycosides from aerial parts. J. Agric. Food Chem. 2001b. 49: 5310-5314.

85. Tanner, G.J., Moate, P., Dailey, L., Laby, R. and Larkin, P.J. Proanthocyanidins (condensed tannins) destabilise plant protein foams in a dose dependent manner. Aust. J. Agric. Res. 1995. 46: 1101-1109.

86. Wall, M. Toxins of animal and plant origin. Gordon and Breach Science Pub., London. 1971.

87. Wallase, R.J., and McPherson, C.A. Factors affecting the rate of breakdown of bacterial protein in rumen fluid. Br. J. Nutr. 1987. 58: 313.