Влияние слабых электромагнитных и химических воздействий на эмбриональное развитие амфибий тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.30, кандидат биологических наук Падалка, Светлана Михайловна

• Падалка, Светлана Михайловна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Падалка, Светлана Михайловна

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. Механизмы чувствительности клеток к факторам внешней сре

AD1 1. Чувствительность организмов и клеток к повреждающим факторам б

2. Критические периоды эмбриогенеза как модель изучения механизмов чувствительности эмбриональных клеток

3. Свободные радикалы в биологических объектах.

4. Свободно-радикальные реакции как показатель адаптационного стресса при загрязнении среды.

5. Свободно-радикальные реакции в метаболизме эмбриональных клеток. б. Радиационно-химические изменения липидов.

7. Действие малых доз повреждающих воздействий на клетки и организмы.

Глава II. Ионизирующее излучение

1. Виды ионизирующего излучения

2. Эффекты воздействия радиации на живой организм

3. Механизм воздействия электрических и магнитных полей

4. Биологические эффекты действия ЭМП антропогенного происхождения на живые организмы

5. Влияние источников радиочастотного диапазона ЭМП

Глава III. Влияние растворов солей тяжелых металлов

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

• Объект

• Общая схема эксперимента

• Морфологический метод анализа

• Метод привитой сополимеризации

• Воздействия солей меди

• Воздействие электромагнитного излучения

• Режим работы и параметры излучения сотового телефона

• Воздействие рентгеновского излучения

• Воздействие гамма-излучения

РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Воздействие малых доз (МД) гамма-излучения на нейрулы

Xenopus laevis.

2. Воздействие рентгеновского излучения на развитие и уровень

CP-реакций у Xenopus laevis.

3. Воздействие ЭМИ бытовых приборов на развитие и уровень СРреащий у Xenopus laevis.

4. Воздействие CuSC>4 в разных концентрациях на развитие и уровень CP-реакций у Xenopus laevis.

5. Встречаемость разных типов аномалий при воздействии разных факторов на развитие шпорцевой лягушки.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние слабых электромагнитных и химических воздействий на эмбриональное развитие амфибий»

В процессе развития и жизнедеятельности организм неизбежно подвергается воздействию экзогенных факторов. Результат воздействия таких факторов может проявляться в нарушении или модификации нормальных процессов функционирования целого организма или отдельных групп органов или тканей. Известно, что в процессе раннего развития организмов существуют так называемые "критические периоды", в которые резко повышается чувствительность организма к воздействию различных факторов, т.к. происходит детерминация путей дальнейшего развития организма, и любое неблагоприятное воздействие способно нарушить дальнейший ход развития организма (П.Г.Светлов, 1960, Дыбан А.П., 1988). Нет сомнений, что возможность защиты процессов развития от внешних потенциально неблагоприятных техногенных воздействий, как, например, электромагнитных излучений или химических загрязнений, имеет громадное значение для всех живых организмов, подвергающихся таким воздействиям.

Эмбрионы водных животных в критических фазах развития могут служить чувствительными биотестами для оценки токсичности среды, вызванной электромагнитными или химическими загрязнениями (О.П.Мелехова, 1994; О.П.Мелехова, Г.В.Коссова, 1997; патент №2073868).

Однако, термин «малые дозы» до сих пор используется весьма неоднозначно. Малыми считаются такие дозы воздействий, эффекты которых вызваны попаданиями единичных молекул вещества или факторов ионизации в клетку (Герась-кин С.А.,1995). Также экспериментально показано, что область малых доз лежит, как правило, на два порядка ниже летальной дозы (ЛД50) для данного объекта (Бурлакова,1992). Однако, для каждого воздействия и для каждого вида организмов ЛД50 сугубо индивидуально. Существующие стандарты загрязнений учитывают состояние взрослых организмов, не рассматривая эмбриональное развитие исследуемых объектов.

Однако более подробное изучение данной проблемы показало, что и химические, и электромагнитные воздействия в диапазоне малых доз нарушают эмбриональное развитие, что выражается в его замедлении или остановке, тератогенезе и гибели. При этом обнаружена нелинейная динамика реагирования эмбриональных объектов на применение воздействия, с достоверным усилением эффекта при действии слабых доз. Характер аномалий, возникающий после облучения на разных стадиях развития, отражает положение в эмбрионе детерминирующихся зачатков, что подтверждает представления о механизмах чувствительности эмбриональных клеток, развиваемые на кафедре эмбриологии (Мелехова О.П., 1976,2001). Реакцию эмбрионов на повреждающие факторы в первые часы после воздействия исследовали по изменению уровня свободнорадикальных процессов, определяемого методами привитой сополимеризации и радиометрии (Козлов Ю.П., 1970, Мелехова О.П., 1976). Обнаружено, что все примененные нами воздействия в дозах более низких, чем считающиеся предельно допустимыми, нарушают окислительно-восстановительный гомеостаз эмбриональных клеток, показателем которого может служить интенсивность свободнорадикальных реакций.

Эмбрионы водных животных, являясь уникальным объектом для исследования повреждений различными токсическими агентами, позволяют наглядно демонстрировать последствия субклеточных процессов, возникающих в момент воздействия. При развитии зародыша эти скрытые изменения быстро проявляются в виде уродств, изменения скорости или остановки эмбриогенеза. Это обстоятельство делает зародыши удобным объектом для тестирования слабых повреждающих воздействий. Особенность предлагаемого в данной работе подхода заключается в использовании в качестве теста на чувствительность эмбриональных клеток измерения уровня свободно-радикальных реакций. Для измерения используется радиоактивный индикатор, который вводят в инкубационную среду.

Предпосылками нашей работы послужили исследования научной группы О.П. Мелеховой, в которых были применен параметр клеточного метаболизма -уровень CP-реакций - для исследования физико-химических механизмов диффе-ренцировки, а также для биоиндикаций химических и радиационных загрязнений водной среды (патент №2073868 и справка о приоритете 93002685/25/002367).

Целью данной работы стало изучение влияния малых доз химических (на примере солей тяжелого металла - меди) и электромагнитных воздействий ( как радиационных, так и не радиационных ) на развитие африканской шпорцевой лягушки Xenopus laevis.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава L Механизмы чувствительности клеток к факторам внешней среды I. Чувствительность организмов и клеток к повреждающим факторам.

Термин "чувствительность", как это ни парадоксально, является в биологии не вполне неопределенным, ибо это понятие не характеризует однозначно биологический объект, а зависит от избранного критерия повреждения, условий эксперимента, времени наблюдения и дозы воздействия. Например, при анализе радиочувствительности сопоставлять можно лишь сравнимые величины - параметры, характеризующие один и тот же класс повреждений, один и тот же механизм.

Среди радиационных эффектов на культурах клеток следует выделить три класса: репродуктивную гибель пролиферирующих клеток с одной стороны, а с другой - интерфазную гибель, при которой важнейшую роль играет повреждение мембран, и множество обратимых изменений, регистрируемых различными методами (Л.Х.Эйдус, 1977, Кудряшов, 2004).

Необходимо отметить что чаще всего периоды высокой чувствительности к любым внешним воздействиям у зародышей совпадают с периодами детерминации. Эти периоды называются " критическими периодами" и подъем чувствительности в это время связан с понижением репаративных возможностей клеток (П.Г.Светлов, 1960).

Слегка видоизменяя формулировку В.Я.Александрова (1952), впервые внесшего ясность в этот вопрос, можно сказать, что свойство клеток, называемое чувствительностью, определяется, с одной стороны, повреждаемостью, а с другой - репаративной способностью. Таким образом, та или иная степень чувствительности - всегда результат, по крайней мере, двух образующих ее компонентов. Та или иная степень чувствительности клеток определяется количественными и качественными показателями обмена веществ, особенностями белков, (в частности наличием в них сульфгидрильных групп), нуклеиновых кислот, коллоидными свойствами протоплазмы. Надо отметить бесспорный факт связи неспецифической чувствительности зародышей с совокупностью их цитофизиологиче-ских и биохимических показателей (П.Г.Светлов,1960). Некоторые работы показывают, что биохимический фон высокой чувствительности эмбрионов низших позвоночных к повреждающим факторам связана с повышением уровня свобод-норадикальных реакций (Мелехова, 1976,2005).

Также немаловажное значение имеет среда, в которой находится исследуемый объект. Так, при облучении живых объектов в большинстве случаев замена бескислородной среды во время облучения на воздух повышает радиочувствительность и соответственно понижает инактивирующую дозу в 2-3 раза. Как оказалось, зависимость радиочувствительности от концентрации кислорода в среде в самых различных случаях примерно одна и та же. Аналитически она может быть выражена уравнением:

Do .4= 0К + m(О) . ,где D4 0m(K+(0)) D - доза, вызывающая данную степень поражения

Do - доза, соответствующая этому же поражению в кислородосодержащей среде

О ) - концентрация растворенного кислорода в среде Кит- константы

Величина ш указывает, во сколько раз радиочувствительность в кислороде выше, чем в условиях аноксии, а величина К равна той концентрации кислорода, которая соответствует радиочувствительности, вдвое превышающей аноксиче-ский уровень. А поскольку все исследования живых организмов проводятся в присутствии кислорода, то и это уравнение имеет полную силу в описании процессов лучевого поражения.

Существуют еще несколько методов оценки радиочувствительности. Например для оценки радиочувствительности коммутированных клеток мегакариоцитар-ного ростка были использованы данные, характеризующие изменения уровня тромбоцитов в момент перехода "радиорезистентного" периода (первое время после облучения, когда уровень тромбоцитов относительно высок) в "радиочувствительный" период (тромбоцитопения) (П.Г.Груздев и др., 1996). Оценка радиочувствительности клеток коммитированного пула может вестись и с помощью математической модели, описывающей поведение тромбоцитов периферической крови после облучения.

Исследования радиочувствительности проводились не только на культурах клеток и взрослых организмах, но и на зародышах, и чаще всего использовались различные таксономические группы. Но сопоставление полученных результатов затруднительно и во многом невозможно. В качестве иллюстрации можно привести бытующее в литературе спорное утверждение об увеличении радиочувствительности по мере усложнения организации биологического объекта, основанное на различии в ЛД 50 (летальной дозе) для лучевой гибели бактерий и, к примеру, млекопитающих. Если учесть, что гибель бактериальной особи осуществляется уже при одном или нескольких актах ионизации в ее чувствительном объеме, а для гибели особи млекопитающего число актов ионизации должно быть в миллиарды раз больше, соотношение показателей радиочувствительности будет обратным (Эйдус,1977).

Однако самым чувствительным объектом для исследований являются развивающиеся организмы - эмбриональные ткани стремительно развиваются и любое вмешательство в этот высококоординированный процесс приводит к нарушениям развития.

II. Критические периоды эмбриогенеза как модель изучения механизмов чувствительности эмбриональных клеток.

Исторически термин и понятие "критический период" за родился на рубеже XIX и XX веков в экспериментально-эмбриологических работах по влиянию повреждающих факторов внешней среды на развитие. Эта проблема получила широкое развитие благодаря работам А.Вейсмана. Экспериментируя на личинках и куколках бабочки Chrysonomus phlaes, A.BeficMaH(Weisman, 1889,1894,1895) показал, что длительные температурные влияния, отклоняющиеся от физиологического оптимума, сказываются у взрослых особей изменением ряда признаков развития. В исследованиях Мерифилда (Merrifield,1894), Фишера (Fischer,1895, 1901-1903), Штандфуса (Standfuss,1896) и др. на насекомых был выяснен интересный факт, а именно: " В проведенных экспериментах, - писал Штандфус (Standfuss,1896,c.324), - выявляются строго определенные фазы развития, являющиеся чрезвычайно реакционноспособными по отношению к примененным факторам». Такие в высшей степени чувствительные периоды обнаруживались на стадиях яйца и личинки при повышенной температуре (В.Ф.Пучков, 1978). Термин "критические периоды" еще в 1897 году ввел ботаник П.И.Броунов . Он говорил о периодах наибольшей чувствительности сеянцев злаков, всходов картофеля и иных растений. Он считал, что в эмбриональном и постэмбриональном развитии происходит смена периодов, во время которых организм стоек к различным воздействиям, на периоды, когда он чувствителен в равной мере к действию разнообразных агентов. Ц.Р.Стоккард в 1921 году положил начало представлениям критических периодах развития животных организмов. Он представил себе онтогенез как ряд последовательных этапов, различающихся скоростями развития. Критические периоды характеризуются наибольшей скоростью развития. На ранних стадиях эмбриогенеза эти периоды являются критическими для всего организма в целом, на более поздних стадиях имеются критические стадии в развитии отдельных органов. Внешние факторы, к которым особенно велика чувствительность в эти периоды, могут ускорять, замедлять или совсем приостанавливать развитие (Б.П.Токин, 1987).

Критические периоды развития стали предметом пристального внимания фено-генетиков, использовавших факторы внешней среды в качестве одного из основных методов изучения действия генов в онтогенезе, причем одним из излюбленных объектов исследования стал рисунок крыла бабочек. Было выяснено (Schwanwitsch, 1924; Kohler, 1932), что этот рисунок состоит из отдельных морфологически хорошо различимых компонентов (полоски, пятна, жилки), легко поддающиеся количественному учету. Кюн ( Kuhn, 1926), сверяя температурные дефекты рисунка крыла бабочки-перламутренницы с нормальными ее рисунками, установил, что для любого из компонентов рисунка имеется свой чувствительный (критический) период. Фельдотто ( Feldotto, 1933) и Вулькопф (Wulkopff, 1936) на другом объекте ( личинки амбарной огневки) подтвердили данные Юона. Б.Н.Шванвичем (1937) выяснена также закономерность - критические периоды развития всегда предшествуют морфологической дифференциации (В.Ф.Пучков, 1978).

Некоторые исследователи предполагают, что периоды развития, характеризующиеся интенсивно идущими процессами дифференциации, являются высокочувствительными к разнообразным внешним воздействиям (Светлов). В некоторые периоды развития зародыши стойки или чувствительны к ряду внешних факторов, причем реакция их на воздействие бывает однотипной (так же, как реакция мускула или нерва глаза оказывается однотипной при действии мноrax раздражителей). Но таких критических периодов, во время которых зародыш одинаково чувствителен к действию всех внешних факторов среды, не существует (Дыбан, 1988).

Многие факты не позволяют говорить о чередовании стойких и нестойких этапов в индивидуальном развитии животных. Вместе с тем нельзя отрицать своеобразия реагирования зародыша на разных этапах эмбриональной жизни. Существует определенный набор фактов, говорящих в пользу критических периодов у различных групп позвоночных. Таковыми являются, например, начало га-струляции у рыб и амфибий, у млекопитающих - стадия бластоцисты в период ее имплантации в стенку матки.

Представляют интерес взгляды на эмбриональное развитие Р.Гольдшмидта (1927,1932). Он рассматривал онтогенез как "координированную систему скоростей развития". Критические периоды - это " узловые точки " пересечения кривых скоростей различных реакций. В эти периоды гармонически сочетаются, "пересекаются" независимые до этого процессы развития, что обусловливает нормальное развитие. Эти периоды схождения ранее независимых процессов развития совпадают со временем детерминации. Повышенная в эти периоды чувствительность обусловливается большой скоростью и разнообразием "перекрещивающихся" процессов развития, ибо координация этих процессов лабильна и может быть легко нарушена при действии внешних агентов. Эти мысли близки к некоторым современным высказываниям (Б.П.Токин, 1987). Вопрос о закономерной связи чувствительных периодов с работой морфогенети-ческих систем был подвергнут обстоятельному анализу в работе Ф.Э.Лемана (1937), ставившего целью сравнить между собой изменения процессов развития у позвоночных при оперативных вмешательствах, химических воздействиях и при мутациях. На основании собственных и литературных данных Ф.Э.Леман

1937, с.23) сделал важные выводы. " Может служить правилом, - писал он, - что критические, или чувствительные, периоды в закладке органов появляются незадолго до той фазы, когда окончательно устанавливается развитие данного органа ". И далее:" Процесс детерминации, как это стало очевидным благодаря оперативному методу, может подвергаться воздействию и химических веществ. Характерно, что химическое воздействие особенно возможно в течение чувствительных фаз, которые продолжаются лишь сравнительно короткое время". И, наконец, сопоставляя проявление экспериментальных нарушений развития с наследственными, "процессы развития организатора могут изменяться под действием не только химических средств, но и факторов, содержащихся в ядре". Из работы указанного автора с очевидностью вытекает вывод о том, что критические периоды, периоды детерминации и проявление действия наследственных задатков фокусируются в одной и той же точке и являются составными элементами механизма работы формообразовательных аппаратов (В.Ф.Пучков,1978). Появление специфических типов клеток является результатом дифференциальной активности генов. В пространственно-временной организации дифференциальной транскрипции значительную роль играет открытая А.А. Нейфахом периодичность морфогенетической функции ядер (МФФЯ) (Нейфах, 1961,1962). На фоне непрерывной транскрипции и-РНК синтезируется как бы «квантово», в ограниченные промежутки времени. Именно эти периоды являются наиболее чувствительными к повреждающим факторам. В раннем развитии периоды МФФЯ обеспечивают наступление следующей фазы развития всего зародыша, при подготовке органогенеза в каждом зачатке также проявляется такая периодичность (Корочкин, 2002). Таким образом, для эмбриогенеза характерна дифференциальная активность генов во времени и в пространстве. Явление МФФЯ объясняет с молекулярно-генетических позиций сущность критических периодов развития

Броун, 1897, Стоккард, 1921, Гольдшмидт, 1927, 1932, Светлов, 1978, Дыбан, 1968, Токин, 1987).

Остановимся на оригинальной гипотезе критических периодов П.Г.Светлова. Согласно его взглядам, онтогенез в целом реактивный процесс, и его основные закономерности должны быть выдержаны в понятиях физиологии раздражения. Зародыш в определенные периоды как бы "прислушивается" к тому, что делается вокруг него. Поэтому он и восприимчив в этот период к действию гормонов, индукторов, давлению, растяжениям, электрическому току, к тому, что оказывается во внешней среде, а внешней средой для любой части зародыша являются и соседние клетки, и наличие кислорода, и т.д.

Преимущество теории П.Г.Светлова в том, что она ставит проблему детерминации на физиологическую основу и не довольствуется односторонне химическими или генетическими методами исследования (Б.П.Токин,1987). Главным признаком критических периодов развития является повышение чувствительности к действию внешних агентов. У зародышей эта чувствительность является по преимуществу первичной и локальной. Если в рассматриваемые явления замешивается вторичная и отраженная чувствительность, то это может служить од ним из источников осложнения и маскировки относящихся сюда простых закономерностей. В основном речь идет о чувствительности клеток, что, однако ни в коем случае не должно означать недооценки факта организмен-ной целостности зародыша как многоклеточного живого организма. Уже говорилось, что свойство клеток, называемое чувствительностью, определяется, с одной стороны, повреждаемостью, а с другой - репаратив-ной способностью (В.Я. Александров). Повреждаемость же может относиться к первичной чувствительности или развиваться далее, проходя ряд промежуточных звеньев; тогда она становится примером вторичной, или отраженной чувствительности. Таким образом, та или иная степень чувствительности всегда -результат, по крайней мере, двух образующих ее компонентов. Подъем чувствительности во время критических периодов развития прежде всего связан с понижением репаративных возможностей клеток в эти периоды. Это является одной из физиологических особенностей этого периода развития. Говоря об особенностях, необходимо упомянуть еще две: снижение уровня репарации и возможное появление мозаичной структуры (П.Г.Светлов, 1976). Связь критических периодов с процессами детерминации уже давно понимается в эмбриологии как ступенчатый процесс. По-видимому, абсолютной детерминированности вообще не существует, как и абсолютно индифферентного состояния: и то, и другое следует понимать в относительном смысле. Первыми ступенями детерминации являются импульсы, в результате которых достигается состояние лабильной детерминации или предетерминации. За ними следуют новые импульсы, за каждым из которых начинается процесс развития (рост и дифференциация), приводящий к некоторому состоянию, условно принимаемому за конечное, но за которым могут следовать дальнейшие акты детерминации и определяемые ими процессы развития. Детерминация понимается как приобретение зачатком комплекса факторов, ведущих его к дефинитивному состоянию. Детерминированное состояние определяет возможность автономного развития зачатка. Что же касается ограничения потенции, то, если оно и происходит при детерминации, оно должно рассматриваться как привходящее явление, не касающееся ее существа.

По современным представлениям, дифференциальная экспрессия генов в эмбриогенезе носит многоуровневый характер. Регуляция осуществляется и на уровне транскрипции, и на уровне трансляции, и при посттрансляционных событиях (время жизни, активация, транспорт продуктов). На каждом уровне можно выделить «триггер» всего каскада процессов, активаторы и ингибиторы каждого звена. В итоге создается неравномерное распределение генопродуктов в зародыше -основа «позиционной информации».

Процесс дифференцировки (специализации) возможен только для группы клеток, чье количество достигло определенного критического значения. Дифференци-ровка начинается с латентного периода — детерминации, при которой «судьба клетки» становится предопределенной на генном уровне; при этом потенциал развития уменьшается, хотя не видно ни биохимических, ни морфологических изменений.

Дифференцировки, приводящие к появлению различных видов клеток и развитию органов, координируются в значительной мере через взаимные контакты: «старшие» зачатки индуцируют (инициируют) дифференцировку в «младших» зачатках. Важная роль в раннем эмбриогенезе принадлежит также явлению «позиционной информации» (Wolpert, 1983; Gurdon et al ( a!., 1994, 1995, 1996). Благодаря последней, клетки дифференцируются в соответствии с их расположением в эмбрионе. Полагают, что градиенты распределения «морфогенов» (веществ, регулирующих экспрессию генов) между клетками, как и различия между последними в отношении пороговой чувствительности к этим «морфогенам», ответственны за различные направления дифференцировки.

Критические периоды являются теми рубежами, которые отделяют относительно индифферентное состояние зачатка от детерминированного, о чем и говорит сопоставление данных по чувствительности и репарации с данными других методов изучения детерминации (трансплантация, эксплантация, действие инородных индуцирующих веществ) (Б.П.Токин, 1987).

Детерминация - центральное событие в раннем развитии; этим термином определяют последовательное сужение широких проспективных потенций эмбриональной клетки вплоть до единственной программы терминальной дифференцировки. Состояние детерминации экспериментально определяется методами I трансплантации или эксплантации исследуемого зачатка. Изучение детерминации как феномена, определяющего ход развития, составляло основной предмет экспериментальной эмбриологии (Ру, 1988; Шпеманн и Мангольд, 1924; Светлов, 1978; Ко-рочкин и мн.др. Обзоры: Светлов, 1978; Корочкин, 12).

Физиологические методы изучения детерминации вошли в употребление в 20 в.; они связаны с повышенной реактивностью детерминирующихся зачатков, Применяются внешние факторы, модифицирующие развитие. Это направление работ начато с исследований П. Чайлда, продолжено и разработано П.Г. Светловым и А.П. Дыбаном (обзор: Светлов, 1978). По существу, это направление в своих истоках связано с тератологией (Сент-Илер, 1830 и мн. др.) и концепцией критических периодов развития (Стоккард, 1920, Светлов, 1978). Основные положения теории П.Г.Светлова:

1. Онтогенезы состоят из некоторого небольшого числа этапов, характеризуемых морфофизиологически; каждый из них начинается относительно коротким критическим периодом с высокой чувствительностью к действию среды, что является следствием пониженной способности к репарации; в течение этого периода совершаются процессы детерминации морфологических процессов до конца этапа. За критическими периодами следуют периоды, в течение которых совершаются видимые процессы развития дифференциация и рост).

2. Развитие отдельных областей тела, зачатков органов и клеток делится на этапы, аналогичные этапам онтогенеза в целом. Поэтому развитие каждого зачатка проходит один или несколько критических периодов, наступающих в общем разновременно. Это положение является следствием принципа комплексной целостности организма.

3. Повышение чувствительности зародышей и их частей к внешним воздействиям в периоды детерминации обеспечивает восприятие ими раздражений, ответом на которые являются акты онтогенеза.

Работы А.А. Нейфаха связывают критические периоды развития с периодичностью морфогенетической функции ядер (Нейфах, 1960). Л.И. Корочкин (2002) приводит периодизацию клеточной дифференцировки. По современным представлениям критерием детерминации определенного типа клеток является первое появление специфических транскриптов. Эти продукты неактивны и для их трансляции требуется дополнительный сигнал. Судя по работам, выполненным на кафедре эмбриологии, оба эти этапа детерминации связаны с активацией СР-процессов и энергетического метаболизма (Мелехова, 1990,2005).

III. Свободные радикалы в биологических объектах.

В системе клеточного метаболизма могут быть выделены интегральные параметры, которые служат показателями общего физиологического состояния клетки. Одним из таких параметров и является интенсивность процессов свободно-радикального окисления.

Как перекисное неферментативное окисление, так и значительная часть окислительно-восстановительных ферментативных реакций идут с участием свободных радикалов (CP) как короткоживущих, активных промежуточных продуктов. Являясь группой высокоактивных интермедиатов, С.Р. играют важную роль во многих окислительно-восстановительных биохимических процессах. Общепризнано участие С.Р.-реакций при действии окислительных ферментов в системах цитохромов и других гемопротеидов, НАД, флавопротеидов, убихинона, осуществляемых с помощью коферментов - переносчиков электронов (Prayor et а1.,1976;Нонхибел и др., 1982).

Ферментативные реакции энергетического метаболизма достаточно многообразны и локализованы в различных компартментах клетки. Однако клетка регулирует общую концентрацию макроэргических соединений, скорости их расхода и ресинтеза. В систему этой регуляции наряду с реакциями ферментативного окисления и фосфорилирования входит и неферментативное перекисное окисление липидов мембран, с нтенсивностью которого связано физико-химического состояние мембранного аппарата клетки, скорость его обновления, активность мембранносвязанных ферментов, и, в конечном счете, чувствительность клетки к внешним воздействиям (Козлов Ю.П., 1973, Бурлакова Е.Б. 1976, 2001).

Свободный радикал (CP) - это молекула или ее часть, имеющая неспаренный электрон на молекулярной или на внешней атомной орбите. Он имеет два основных свойства, которые и определяют природу его взаимодействия - это очень высокая способность к химическим превращениям и наличие магнитного момента, обусловленного нескомпенсированным спином неспаренного электрона. Все С.Р. можно разделить на нейтральные и заряженные: анион-радикалы и катион-радикалы, образующиеся в процессах одноэлектронного окисления и восстановления. Основное же деление происходит по сроку жизни радикальных частиц: коротоживущие и долгоживущие радикалы. Возникновение первой группы в значительной мере связано с процессами перекисного окисления липидных мембран (Козлов, 1975; Владимиров и Арчаков, 1972). В этом случае чаще всего имеет место образование липидных гидроперекисей, распад которых приводит к образованию активных радикалов. Особенно подвержены этому аутоокисле-нию компоненты липидов клеточных мембран-ненасьпценные жирные кислоты (Нонхибел и др., 1982). Схема реакций цепи аутоокисления:

1 .инициирование цепи: RH--R* 2.продолжение цепи: R* +0—ROO* ROO*+RH—ROOH+R* 3.обрыв цепи: 2R* —R-R

R* +R00*-ROOR 2R00*-R00R+0

Появление С.Р. в липидах мембран приводит к изменениям ее физико-химического состояния и активности мембранно-локализоавнных ферментов. При повреждающих воздействиях на клетки процессы перекисного окисления липидов развиваются более активно и при этом прослеживается прямая зависимость между скоростью процесса и степенью повреждения. При этом перекис-ные радикалы могут взаимодействовать с молекулами белков или нуклеиновых кислот, связанных с мембраной, изменяя биологические свойства этих молекул, а значит и клетки в целом.

Долгоживущие С.Р. в основном принадлежат активным центрам окислительных ферментов и кофакторам окисления, работающим в цепях переноса электронов и возникающих в процессе окисления, фосфорилирования и гидролиза АТФ (Commoner et а1.1961;Бржевская и др.,1967;Райхман и Аннаев,1971). Концентрации их обычно пропорциональны активности соответствующих ферментов в системах цитохромов, НАД, убихинона, осуществляемые с помощью кофермен-тов-переносчиков электронов (Prayor et а1.,1976;Нонхибел и др., 1982). Повышение общего уровня С.Р. реакций является показателем ряда взаимосвязанных событий на субклеточном уровне при переходе эмбриональной клетки в активно метаболизирующее состояние или при ее повреждении (Мелехова, 1976, 2005)

При использовании метода электронно-парамагнитного резонанса (ЭПР) было установлено, что все активно метаболизирующие ткани растительного и животного происхождения содержат С.Р. в концентрации 10 "5-10 45 М на 1 грамм сухого веса ткани (Козлов,1970). Сам сигнал ЭПР - это узкая одиночная линия с g-фактором (g-фактор - константа спектроскопического расщепления, необходимая для определения значения магнитного поля, соответствующего резонансу, когда ЭПР-спектрометр настроен на фиксированную частоту), близким к g-фактору свободного электрона. Наличие самого сигнала связано с ферментативной активностью. Время сигнала пропорционально времени, за которое окислилось данное количество субстрата.

Однако метод ЭПР не позволяет в настоящее время изучать короткоживущие активные состояния биологических молекул, возникающие при окислении ли-пидных систем клетки.

Метод привитой сополимеризации(Козлов, 1970) основан на способности CP инициировать полимеризацию некоторых ненасыщенных химических соединений. Измеряя концентрацию привитых сополимеров можно определять суммарное содержание CP в системе. Быстрые изменения концентраций CP в биообразцах регистрируются также методом измерения хемшпоменесценции (Владимиров, Литвин, 1959). Метод привитой сополимеризации (ПС) заключается в том, что мономер радиоактивного маркера, введенный в живой организм, включается в CP-реакции в живых клетках и полимеризуется в живой клетке. Затем относительное содержание CP определяется методами авторадиографии или радиометрии соответственно уровню радиоактивности в образцах, приготовленных из тканей объекта. Быстрые изменения интенсивности CP-реакций в живых организмах типичны для ранних стадий патологических процессов.

IV. Свободно-радикальные реакции как показатель адаптационного стресса при загрязнении среды.

Энергетический метаболизм в клетке может считаться связующим и результирующим звеном разнообразных реакций катаболизма и анаболизма. Физиологическое состояние клетки и организма, реактивность, возможности репарации повреждений, способность к выполнению общих и специфических функций зависят от уровня энергетического метаболизма. Различного рода патологические состояния клетки, предрасположенность к ним и прогноз их течения также в значительной мере опосредуются через изменения энергетических показателей и функционального состояния мембран. В литературе обсуждается роль свободных радикалов - активных форм кислорода (АФК) в качестве сигнальных молекул, запускающих целый ряд ответных реакций на изменение окислительно-восстановительного состояния клеток. Первичный ответ клеток на любые повреждающие факторы реализуется через неспецифические явления окислительного стресса, включающего развитие CP-реакций и изменение состояния и состава мембранного аппарата. АФК также могут атаковать ДНК, вызывая нестабильность генома (Бурлакова и др., 2001).

Скорость протока в энергетической системе клетки, которую хорошо отражает уровень С.Р. окисления, является важным признаком при определении физиологического состояния и реактивности эмбриональной клетки (Мелехова, 1990,2005). Как функциональная активность, так и неустойчивость состояния, то есть высокая реактивность, характерны для клеточных систем на пике энергетического метаболизма (Бауэр,1935;Кондрашева,1979). Представления классической эмбриологии однозначно говорят о высокой чувствительности процесса детерминации к различным повреждающим факторам. Исследования О.П. Мелеховой с соавт. показали участие CP реакций как в механизмах детерминации эмбриональных зачатков, так и в механизмах их чувствительности.

Метод привитой сополимеризации и эмбрионы амфибий в критических периодах развития в качестве биотестов были использованы для создания нового способа оценки эмбриотоксичности водной среды (Мелехова, Коссова 1997). Принцип способа — измерение стрессовой реакции тест-объекта (эмбриона амфибий), адаптированного к чистой воде, в первые 1-2 часа после помещения его в загрязненную среду. Эта реакция измеряется по сдвигу уровня привитой сополимеризации (ПС) по сравнению с контролем. Известно, что быстрые изменения интенсивности CP реакций в живых объектах типичны для начальных стадий разных патологических процессов. В том числе известно участие CP в первичных реакi циях лучевого поражения и на ранних этапах химического стресса. Способ оказался исключительно чувствительным и экспрессным. Он был использован для определения критического уровня загрязнения водной среды, приводящего к нарушению жизнеспособности тест-организма. Зачастую официальные значения ПДК химических токсикантов оказывались выше этого критического уровня. Повреждения тест-объектов, выявленные экспрессно по метаболическому критерию (CP) были подтверждены в долгосрочных экспериментах (гибель, замедление и аномалии развития эмбрионов). При сравнении результатов экспрессных и долгосрочных экспериментов было показано, что сдвиг уровня CP более чем на 30% по отношению к контролю свидетельствует о начале патологических процессов.

Интенсивность радикалообразования этим способом определяется по реакции П.С. меченого по углероду акриламида (АА-14С) (Тарусов, Козлов, 1961; Козлов, 1970). При введении в клетки объекта АА-14С процесс полимеризации этого ненасыщенного соединения инициируется С.Р., возникающими в окислительно-восстановительных реакциях и развивается пропорционально скорости этих реакций и суммарному количеству С.Р., возникших в клетках объекта за время инкубации в растворе АА-14 С. Полимеры.

Полиакриламид относится к группе привитых сополимеров, примерную схему которой можно изобразить так: .-В-В-В-. .-В-В-В-.

• • .-А-А-А- • • • иА"А"А- • • *—. • • .-В-В-В-.

Общая классификация полимеров делит их на три группы:

1. простые полимеры, которые в свою очередь делятся на:

-хаотические полимеры .-А-В-А-А-А-В-А-А-В-В-В-В-А-А-. -полимеры со строгой последовательностью звеньев .-А-В-А-В-А-В-А-В-А-В-А-В-А-В-А-.

2. блок-сополимеры .-А-А-А-А-А-А-А-В-В-В-В-В-В-В-В-.

3. привитые сополимеры (схема см. выше) (Козлов, 1970).

Для начала реакции сополимеризации необходимо создание "активного центра" в макромолекуле, который мог бы инициировать полимеризацию мономера или реагировать с соседними макромолекулами другого полимера. В ходе С.Р. полимеризации мономера могут наблюдаться реакции передачи цепи между растущими цепями полимера и инициатором (1), мономером (2) или другой растущей цепью (3):

1) Rr*+B--Rr+B*

2) Rr*+M--RrfM*

3) Rr*+Rs*--Rr+*Rs* Та часть мономера М, которая вошла в состав привитого сополимера, обычно выражается коэффициентом эффективности привитой сополимеризации f: f= количество М (весовые части) в виде боковых цепей общее количество М в реакции

Степень разветвленности привитых сополимеров, полученных таким способом, зависит от скорости реакции полимера, температуры, реакционной способности радикала привитого мономера и "подвижности" атомов, входящих в состав полимерной цепи (Козлов,1970). Применение меченого акриламида позволяет идентифицировать биохимические субстраты CP реакций, определить их субклеточное расщепление.

Идентификация методом привитой сополимеризации (П.С.) компонентов клеток, отвественных за протекание химических реакций с участием радикальных состояний в возбудимых субстратах, показала, что основное их количество образуется во фракции фосфолипидов.

Применение метода П.С.в сочетании с авторадиографией позволило получить карты распределения С.Р. в эмбрионах амфибий (Мелехова, 1976,1977).

V. Свободно-радикальные реакции в метаболизме эмбриональных клеток. В развитии зародышей многих видов животных уже на стадии зиготы (оплодотворенная яйцеклетка) складывается определенная региональность метаболических процессов. Считается, что такая региональность может быть основой первичного акта дифференцировки, происходящего во время гаструляции. На примере бесхвостых амфибий методом привитой сополимеризации и гисторадиоав-тографии показана устойчивая корреляция по месту и времени повышения уровня свободноорадикальных (CP) процессов в раннем эмбриогенезе с процессом детерминации, то есть приобретения генетическим аппаратом зародышевых кле

24 ток готовности к активности определенных для каждого типа ткани групп генов. При этом высказано предположение, что в начале дивергентной дифференцировки зачатков, при узком выборе альтернатив дальнейшего развития уровень обязательного метаболизма клетки может играть существенную роль для определения режима работы ядра, в частности для включения транскрипционных процессов (Мелехова, 1976,1977). На основании этих и других данных, полученных тем же методом (Остроумова и др.,1978), была разработана гипотеза параметрического управления дифференцировкой (Chernavskii et al.,1980). Однако механизмы связи генной экспрессии с метаболическими окислительно-восстановительными процессами, идущими с образованием свободных радикалов, не ясны. Исследование методом привитой сополимеризации, седиментаци-онного и радиоиндикаторного анализа субклеточной локализации CP-реакций в клетках зародышей амфибий различного возраста показало, что период эмбриогенеза, когда активируется транскрипционная функция ядер и интенсивно идут процессы детерминации, существенный вклад в общий уровень радикалообразо-вания вносят ядра, а позже, при наступлении личиночных стадий и, соответственно, периода терминальной дифференцировки, когда интенсивно идет трансляционный этап специфических белковых синтезов, резко (в 10 раз) возрастает уровень радикалообразования в митохондриях (Мелехова с соавт.,1982). В той же работе было обнаружено, что определенный вклад в клеточные метаболические процессы, идущие по свободно-радикальному механизму, вносит окисление желтка (Мелехова с соавт.,1988).

Следующим шагом в выяснении роли CP процессов в регуляции дифференцировки в эмбриогенезе было выявление биохимических субстратов СР-реакций в зародышевых клетках.

Новые пути к пониманию этих механизмов, по-видимому, открывает исследование субстратов CP реакций в эмбриональных клетках, показавшее тесную связь их с мембранными мессенджерами -фосфоинозитидами (Мелехов, Косова и др., 1988; Мелехова, 1990). Используя метод тонкослойной хроматографии, авторы обнаружили активное включение используемого нами радиоактивного индикатора в фосфоинозитиды. Известно, что эти мембранные фосфолипиды служат началом раздваивающегося на мембранную и цитоплазматическую ветви пути передачи сигналов, оперирующего множеством функций клетки, и в том числе, играющего роль в управлении делением и дифференцировкой клеток (Berridge,1993).

Компоненты плазматических мембран - фосфоинозитиды (ФИ) являются веществами, необходимыми для опосредования клеткой внешних сигналов, - вторичными мессенджерами (Berridge, Irvine,1984). Мембранные белки, принимающие сигнал, высокофосфорилированы ( с участием ГТФ), они активируют усилительный фермент, находящийся на внутренней стороне мембраны, -фосфолипазу С, которая расщепляет мембранный липид фосфатидилинозитол-4,5-дифосфат на диацилглицерол и инозитолтрифосфат. Последний вызывает освобождение кальция из эндоплазматического ретикулума. Кальций активирует протеинкина-зу, и этим актом начинает каскад фосфорилирования белков, ведущей к ответной реакции клетки. В частности, изучен путь воздействия через систему фосфоино-зитидов на процессы клеточного деления: при этом активируется механизм обмена ионов, выкачивающий ионы водорода из клетки, в результате чего повышается внутриклеточный рН, а это вместе с мобилизацией внутриклеточного кальция запускает синтез РНК и белков в фазе G ь необходимой для подготовки клетки к репликации ДНК (Berridge, Irvine, 1984).

Надо отметить, что в опытах Мелеховой с соавторами(1988) получены сведения о том, что радикалообразованне в липидах в эмбриональном периоде идет гораздо активнее, чем у личинок (через 2 суток после вылупления); включение метки во фракцию ДНК наиболее высокое во время дробления, когда синтез ДНК имеет максимальную возможную для данного вида животных скорость, а затем снижается и остается примерно на одном уровне во время всего исследованного периода. Включение метки во фракции РНК и белков увеличивается с возрастом, причем растет особенно резко в периоды, предшествующие активации транскрипции (ранняя бластула) и специфического белкового синтеза (органогенез).

В свете этих данных можно предположить, что включение метки 14 С-АА во фракции ДНК и РНК, ДНП и РНП, а также в белки в значительной мере связано именно с фосфорилированием цитоплазматических и ядерных белков. Подтверждением этого мнения служат опыты с инкубацией зародышей в предгаст-руляционном периоде в присутствии динитрофенола (ДНФ) и 14 С -АА одновременно (Мелехова, Косова и др.,1988). Оказалось, что действие разобщающего окислительное фосфорилирование ДНФ вдвое снижает уровень радикалообразо-вания, оцениваемый по реакции свободно-радикальной сополимеризации, и прекращает развитие зародыша (гаструляция не наступает, хотя жизнь зародыша еще некоторое время продолжается).

К тем же выводам приводят результаты опытов с дополнительной инкубацией в течение 15 часов зародышей, получивших импульсную (в течение 50 мин.) метку 14 С -АА. Данные показывают, что при дополнительной инкубации происходит перераспределение включившейся метки: доля ее в белках растет (от 26% до 35%), а в липидах уменьшается почти вдвое (с 9,6% до 5%), но при этом изменяется соотношение меченых липидных компонентов. По-видимому, в этих процессах главную роль играет именно ФИ.

Накопление метки С14-АА в белковой фракции, по-видимому, идет двумя путями. С одной стороны, оно связано с возникновением CP-состояний фермент-субстратных комплексов при работе окислительно-восстановительных ферментов, так как наличие стадий одноэлектронного переноса хорошо известно для систем НАД, флавиновых ферментов, убихинона, цитохромов (Нонхибел с соавт.,1982). С другой стороны, накопление метки в белках возможно и за счет каскада актов фосфорилирования при работе системы фосфоинозитидных мессенджеров.

CP в липидах, детектируемые методом привитой сополимеризации, также могут иметь различное происхождение. Известно, что большая их часть возникает при аутоокислении мембранных липидов с образованием перекисей, содержащих непредельные карбоновые кислоты с метиленовым звеном между двойными связями. Активные радикалы этого происхождения могут непосредственно атаковать мембранносвязанные белки или нуклеиновые кислоты, модифицируя их функции (Нонхибел с соавт.,1982). Экспериментально доказано, что может иметь место радикалообразование в ядерных мембранах (Пескин, 1984). Процессы CP окисления в липидах могут быть связаны с изменением скорости пролиферации клеток (Алесенко с соавт., 1975,1984). Наличие CP-состояний в метаболизме ФИ, обнаруженное в нервных волокнах (Лимаренко с соавт., 1969) и эмбриональных клетках низших позвоночных (Мелехова с соавт., 1988), указывает на существование еще одного пути влияния регуляторной системы внутриклеточных промоторов и ингибиторов CP-реакций на формирование клеточного ответа - через вторичные мессенджеры. Работой той же системы может объясняться накопление метки 14 С -АА во фракциях РНП и ДНП, например, вследствие фосфорилирования гистонов и негистоновых ядерных белков, так как известно, что процессы фосфорилирования ядерных белков также имеют решающее значение для функционирования ядра (Восток, Самнер,1981), а фосфорили-рование в ядерных порах (Газарян, Тарантул, 1983) и затем при инициации трансляции (Спирин,1986) являются важнейшими моментами посттранскрипционной регуляции экспрессии генов.

Таким образом, CP реакции могут играть существенную роль в регуляции процессов дифференцировки, связанной с последовательной инициацией транскрипции и трансляции в эмбриональных клетках.

VI. Радиационно-химические изменения липидов.

Гидрофобная фаза клетки в основном представлена липидами. В эту группу веществ входят свободные высшие жирные кислоты, нейтральные жиры, фосфо-липиды, сфингомиелины, стероиды и каротиноиды.

Трудно переоценить iy роль, которую выполняют липиды в жизнедеятельности клетки. Липиды составляют основу структуры биомембран, в которых они определяют такие ведущие функции, как избирательная полупроницаемость, активация и угнетение мембранно-связанных ферментов, передача сигналов от внешних эффекторов вторичной регуляторной системе. Липиды играют существенную роль в надмолекулярной структуре ДНК (липидные линкеры), регулируют инициацию синтеза ДНК в ДНК-мембранном комплексе, непосредственно участвуют в энергообеспечении жизнедеятельности клетки. Радиационно-химические изменения липидов были предметом многочисленных исследований, обобщеных в ряде монографий и обзоров (Кузин, 1962; Штреффер,1972; Амирагова и др.,1973; Wills,Wilkinson,1967; Гончаренко, Кудряшов,1980. - цитировано по А.М.Кузину, 1986)

В модельных системах показано, что под влиянием облучения легко образуются радикалы ненасыщенных жирных кислот, дающие с кислородом перекисные радикалы, которые реагируют с нативными жирными кислотами, образуя гидроперекиси , что приводит к возникновению цепной реакции окисления в присутствии кислорода. Эти первично возникающие процессы были продемонстрированы на изолированных клеточных органеллах, таких, как микросомы, лизо-сомы, митохондрии и клеточные ядра (Will,Wilkinson,1967). Вероятно, они возникают и в целых клетках и тканях.

Митохондрии, по-видимому, являются одной из самых чувствительных органелл клетки и их реакции и состояние могут определять реакции и состояние всей клетки (Введенский,1960; Аккерман,1964; Кондрашова, 1968,1971; цитировано по работе Мелеховой, 1976). М.Н. Кондрашова в своих исследованиях установила параллелизм метаболического состояния митохондрий и функционального состояния ткани, позволяющий на изолированных митохондриях моделировать системную реакцию ткани на различные воздействия.

В этих работах также показано, что при переходе митохондрий из одного метаболического состояния в другое происходит переключение в них ведущего механизма, регулирующего скорость дыхания; при этом основным субстратом ми-тохондриальных окислительных реакций в активно метаболизирующем состоянии становятся липиды.

Однако благодаря наличию антиоксидантов развитие цепнцх реакций в облученных тканях возможно лишь при дозах облучения, которые окажутся достаточными для разрушения природных антиоксидантов (Бурлакова и др., 1975). Ведущее значение свободных радикалов, возникающих в липидной фазе клеток в момент облучения, в инициации последующих реакций перекисного окисления липидов и изменении свойств биомембран достаточно хорошо аргументировано в исследованиях (Эммануэль,1963; Козлов и др,1972; Козлов,1973) Взаимодействие радикалов может способствовать образованию полимеров липидов, что приводит к нарушению свойств липидной фазы биомембран. Первично образующиеся радикалы в молекулах фосфолипидов реализуются по месту эфирных связей, вызывая образование лизоформ. Радиационное нарушение белок-липидных взаимодействий в облученных биомембранах обусловливает свободно-радикальное окисление фосфолипидов и образование их лизоформ (Козлов, 1975).

VII. Действие малых доз повреждающих воздействий на клетки и организмы.

Эта проблема в настоящее время очень актуальна и интенсивно обсуждается в литературе с медицинских и экологических позиций. Малыми считаются такие дозы воздействий, эффекты которых вызваны попаданиями единичных молекул вещества или факторов ионизации в клетку (Гераськин С.А.,1995). В радиационной биологии сверхмалые дозы (СМД) - это дозы облучения порядка долей сГр и ниже; СМД биологически активных органических веществ - это дозы порядка Ю-10 -10"12 М (Бурлакова,1995).

Возможно, способность клеток отвечать на такие слабые воздействия складывалась эволюционно как механизм адаптации, мобилизующий энергетическое депо клетки. Тогда такие воздействия могут играть не столько прямую повреждающую, сколько информационную роль. Предполагают, что таким может быть механизм действия гомеопатических лекарств.

С другой стороны, радиационные воздействия характеризуются иммодальной кривой "доза-эффект" (Бурлакова,1995). В частности на громадном статистическом материале по заболеваемости и смертности людей после облучения в Чернобыле и в Хиросиме показано, что первый пик отдаленной смертности от лейкоза приходится на дозы ниже 5 Р (0.05 Гр), а второй - на дозы выше 25 Р (0.25 Гр), и только после облучения в дозе выше 150 Р наблюдается немедленное проявление лучевой болезни. Экспериментальное изучение механизмов действия СМД электромагнитного облучения показало, что ранним его эффектом является рост CP-реакций за счет появления активных форм кислорода и интенсификации перекисного окисления липидов. Значительную роль в этих первичных эффектах играет изменение активности фермента супероксиддисмутазы (СОД) и других ферментов - антиоксидантов, изменение структуры мембран и активности связанных с мембранами ферментов (Бурлакова,1992). В некоторых работах отмечено действие малых доз облучения на аденилатциклазную систему клеток в культуре (Раев,1982)

Заключение диссертации по теме «Биология развития, эмбриология», Падалка, Светлана Михайловна

выводы

• Малые дозы факторов химической и физической природы достоверно, но не специфично влияют на эмбриональное развитие амфибий.

• Эффекты воздействий малых доз стадиоспецифичны.

• Проявления эффекта от воздействий обнаруживают нелинейную зависимость в диапазоне малых доз.

• В рамках изученного периода - нейруляции - выявлены фазы максимальной чувствительности к исследованным воздействиям.

• По материалам работы предложен новый биотест - эмбрион амфибий на стадии закладки осевого комплекса.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Падалка, Светлана Михайловна, 2006 год

1. Александров В.Я. "Экспериментальный анализ понятия "чувствительность"", М., Изд-во АН СССР, серия биология, том 4, стр. 89-119,1962.

2. Алесенко А.В., Бурлакова Е.Б., Вайнсон А.А. "Изменение антиокиоли-тельных свойств липидов на разных стадиях клеточного цикла.", В кн. "Антиокоиданты", 197Б, М., "Наука".

3. Алесенко А.В., Бурлакова Е.Б., Красшгьников В.А. "Участие фосфоли-пидов в образовании контактов нуклеиновых кислот о ядерным матрик-сом в процессах репликации и транскрипции", В сборнике "Структура и функции клеточного ядра", Пущино,1984.

4. Андроникашвили ЭЛ. // Биофизика.-1987.-Т.23.-С.782

5. Аникин В.В., Шляхтин Г.В. и др. Обследование состояния энтомофауны в зоне влияния ЛЭП-500. // В кн. Мат-лы науч.-практич. конф. «Электромагнитная безопасность. Проблемы и пути решения», г. Саратов 28-30 августа 2000. Изд-во СГУ, 2000. стр.3-6

6. Бауэр Э.С. "Теоретическая биология",М.,1935.

7. Благой Ю.П., Галкин В.Л., Гладченко Г.О., Корнилова С.В., Сорокин В.А., Шкорбатов А.Г. Металлокомплексы нуклеиновых кислот в растворах. Киев: Наукова думка.-1991.-270с.

8. Восток К., Самнер Э."Хромосомы эукариотической клетки", М., "Мир",1981, отр.158.

9. Брагинский Л.П. Теоретические аспекты проблем "нормы и патологии" в водной экотоксикологии // Теоретические вопросы водной токсикологии: Материалы Ш советско-американского симпоз. JI.: Наука, 1981. - С. 29-40.

10. Брагинский Л.П., Щербань Э.П., Острая токсичность тяжелых металлов для водных беспозвоночных при различных температурных условиях // Гидробиол. журн. 1978. - Т. 14, №1. - С. 86-97.

11. Брагинский Л.П., Величко И.М., Щербань Э.П. Пресноводный планктон в токсической среде. Киев: Наук, думка, 1987. - 179 с.

12. Бржевская О.Н. "Изучение биологического окисления и фосфорилиро-вания методом ЭПР","Биофизика", 1967,том 12,стр.839

13. Будников Г. К., Тяжелые металлы в экологическом мониторинге водных систем, 1998, Интернет.

14. Бурлакова Е.Б. "Сверхмалые дозы ионизирующей радиации в биологии и медицине", 199Б,в сборнике трудов конференции, ИХФ,

15. Бянкин А. Г., Биомониторинг водной среды с помощью органа обоняния рыб, Хабаровский государственный технический университет, Электронный журнал "Исследовано в России", 1186-1208, 2003, http://zhurnal.ape.relarn.ru/articles/2003/102.pdf

16. Васильев А.С. и др., Магниторецепторные реакции у стекловидного угря.//Биофизика, 1973.

17. Владимиров и Арчаков "Переписное окисление липидов в биологических мембранах", 1972.

18. Власова Г.А., Христофорова Н.К. Действие кадмия на ранний онтогенез морского ежа Stongylocentrotus intermedius // Биол. моря. 1982- №4. - С. 31-36.

19. Газаряк К.Г., Тарантул В.З. "Геномы эукариот", М., МГУ, 1983, стр.216.

20. Гераськин С.А. «Концепция биологического действия малых доз ионизирующего излучения на клетки» / Радиационная биология и радиоэкология, том 35, выпуск 5, 1995.

21. Григорьев Ю. Г., Степанов В. С., Григорьев О. А., Меркулов А. В. Электромагнитная безопасность человека. Справочно-информационное издание. Российский национальный комитет по защите от неионизирующего излучения, 1999

22. Груздев П.Г., Чистопольский А.С., Суворова А. Д. "Радио-чуствительность и пострадиационная кинетика мегакариоцитарного ростка костного мозга'У/Радиобиология, том 36, вып. 2, стр.250, 1996.

23. Дабагян Н.В., Слепцова JI. А. "Объекты биологии развития" М.: Наука, 197Б./Таблица нормального развития Xenopus laevis D. Ньюкуп, Фабер, стр.392.

24. Детлаф Т.А., Руднева Т.Е. Шпорцевая лягушка Xenopus laevis D. Объекты биологии развития. М.: Наука, 1975 г. стр. 392

25. Дышловой В.Д., Пилявская С.М. и др. Влияние ЭМП ПЧ на генеративную функцию млекопитающих // В кн. Тезисы докладов Всесоюз. симпозиума «Биологическое действие ЭМП» Пущино, 1982. стр. 98-99.

26. Захаров В. М., Чубинишвили А. Т., Дмитриев С. Г. и др. Здоровье среды: практика оценки.- М.: Центр экологической политики России, 2000. 320 с.

27. Захаров В.М., Кларк Д.М. "Биотест: интегральная оценка здоровья экосистем и отдельных видов",М. 1993г.

28. Зенгер В. Принципы структурной организации нуклеиновых кислот. М.: Мир.-1987.-584с

29. Израэль Ю.А. Экология и контроль состояния природной среды. М.: Гидрометеоиздат, 1984. - 560 с

30. Под ред. Исаева Л. К Контроль химических и биологических параметров окружающей среды. СПб, Эколого-аналитический информационный центр «Союз», 1998 896 с.

31. Калинина М.В. Изучение влияния меди и цинка на картину крови молоди кеты (Oncorhynchus keta) // 1-й конгресс ихтиологов России: Тез. докл. Астрахань, 1997. - С. 219-220

32. Карасев В.Е., Бабий А.П., Комплексы Cu(II) с дегидратированной спиральной ДНК, Электронный журнал «Исследовано в России», 2003, стр. 1038 1048, http://zhurnal.ape.re1arn.ru/artic1es/2003/093.ndf

33. Карташев А. Г., Плеханов Г. Ф. Экологическая оценка ПеЭП ЛЭП. // В кн. Тезисы докладов Всесоюз. симпозиума «Биологическое действие ЭМП» Пущино, 1982. стр. 99-101.

34. Кашулин Н.А., Ответные реакции сига Coregonus Lavaretus (L) на загрязнение тяжелыми металлами, 2000. Интернет

35. Под ред. Киршвинка Дж, Д. Джонса, Б. Мак-Фаддена. Биогенный магнетит и магнитотрецепция. Новое о биомагнетизме: В 2-х т. Т. 1: Пер. с англ., М.: Мир, 1989. -353с.

36. Под ред. Киршвинка Дж., Д. Джонса, Б. Мак-Фаддена Биогенный магнетит и магнитотрецепция. Новое о биомагнетизме: В 2-х т. Т. 2: Пер. с англ./., М. Мир, 1989. -525 с.

37. Козлов Ю.П. "Привитая сополимеризация как метод исследования свободных радикалов в биологических системах." М.: Изд-во МГУ, 1970.

38. Козлов Ю.П. "Свободные радикалы и их роль в нормальных и патологических процессах." М.: Изд-во МГУ, 1975.

39. Конрашева М.Н. "Живое состояние с позиции биоэнергетики". М.: Методические и теоретические проблемы биофизики., 1979

40. Корочкин Л.И. Введение в генетику развития. М. Наука, 1999,252 стр.

41. Кузин А.М. "Радиационная биохимия." М., АН СССР ,1968.

42. Кузин A.M. "Структурно-метаболическая теория в радиобиологии" М., "Наука", 1986

43. Ларин Г.М., Колосов В.А., Панова Г.В., Викулова Н.К. // Журн. Неорган. Химии.-1973.-Т. 18.-С.2268.

44. Лимаренко И.М., Волкова С.П., Козлов Ю.П., Бурлакова Е.В., Тарусов Б.Н. "Свободные радикалы в фосфолипидах нервных волокон в норме и при проведении возбуждения"/ Докл. АН СССР, 1969, ТОМ 185, N5, отр. 11-84.

45. Лукьяненко В.И. Экологические основы регламентирования антропогенного загрязнения водоемов России // Экологические аспекты регламентирования антропогенного загрязнения водоемов России (региональные ПДК). Ярославль: ВВО РЭА, 1998. - С. 37-62.

46. Лукьянова О.Н. Молекулярные биомаркеры. Владивосток: Изд-во ДВГАЭУ, - 2001. - 192 с.

47. Малахов В.В., Медведева Л.А. "Эмбриональное развитие двустворчатых моллюсков в норме и при воздействии тяжелых металлов", М., "Наука",1991.

48. Материалы 5-го советско-американского рабочего совещания по проблеме: «Изучение биологического действия физических факторов окружающей среды». Ялта, 22-26 апреля 1985 г. — Киев «Здоровья», 1987

49. Материалы Международного совещания «Электромагнитные поля. Биологическое действие и гигиеническое нормирование» Москва, Россия, 18-22 мая 1998 г. Под ред. М. X. Репачоли, Н. Б. Рубцова, А. М. Муц. -Женева, 1999

50. Мелехова О.П. "Свободнорадикальные процессы в эмбриогенезе Апига/ "Онтогенез", 1976, том 7, №2, стр. 131.

51. Мелехова О.П. "Некоторые физико-химические аспекты дифференцировки глазного зачатка у Anura / Автореф. дис. на соискание уч. ст. канд. биол. наук, М.: МГУ, 1976 б.

52. Мелехова О.П., Стволинский С. А., Косова Г.В., Туровецкий В.Б. "Субклеточная локализация свободнорадикальных реакций в эмбриогенезе бесхвостых амфибий." Известия АН СССР, 1988, томи, стр.297.

53. Мелехова О.П., КоссоваГ.В., Лимаренко И.М., Туровецкий Е.Е. "Свободные радикалы в биохимический фракциях Anura Известия АН СССР, 1988, том 6.

54. Мелехова О.П. "Физико-химические характеристики системы пространственно-временной организации эмбриогенеза." Клеточная репродукция и процессы дифференциации, Л.-Наука, 1990,стр.30.

55. Мелехова О.П. Способ определения действующей дозы электромагнитного излучения на эмбрионах водных животных. Приоритет №93002685/25/002367, 1992.

56. Мелехова О.П. Патент на изобретение способа определения эмбриоток-сичности химических соединений и их комплексов в водной среде N 2073868,1993.

57. Мелехова О.П. "Оценка эмбриотоксичности водной среды." Известия АН СССР, 1994, №4, стр.661.

58. Нейфах С.А. Динамические, структурные и генетические факторы интеграции обмена. В кн.: Механизмы интеграции клеточного обмена. Л.: Наука, 1967г. стр. 9-66.

59. Нейфах А.А. Гены и механизм развития: детерминизм и самоорганизация // Кн.: Механизмы детерминации. М.: Наука, 1990 г. стр. 19 30.

60. Нехорошее О.Г. Линии электропередачи и экология птиц. // В кн. Мат. 1-ой росс. конф. «Проблемы электромагнитной безопасности человека. Фундаментальные и прикладные исследования», Москва, 28-29 ноября 1996 г. стр. 109.

61. Никифоров М.В. , Черкашин С.А. Оценка влияния кадмия, цинка и свинца на выживаемость предличинок морских рыб, 2004, стр.427 444 zhurnal.ape.relarn.ru/articles/2004/040.pdf427

62. Нонхибел Д., Тедцер Дж., Уолтон Дж. "Радикалы." М.: Мир, 1982, стр.227.

63. Павлович С. А Магнитная восприимчивость организмов. М.: Наука и техника, 1985. - 110 с.

64. Перечень N1. ПДК для рыбохозяйственных водоемов N12-04-11 от 9 августа 1996 года.

65. Перечень № 2 ПДК для рыбохозяйственных водоемов № 12-04-11 от 28 декабря 1990г.

66. Плеханов Г.Ф. Основные закономерности низкочастотной электромаг-нитобиологии. Томск: Изд-во Томского университета, 1990. 188 с.

67. Поддубный А.Г. Экологическая топография популяций рыб в водохранилищах. Л. Наука, 1971

68. Пресман А. С. Организация биосферы и ее космические связи, (кибернетические основы планетно-космической жизни). ГЕО СИНТЕГ

69. Прести Д.Е. Навигация птиц, чувствительность к геомагнитному полю и биогенный магнетит. В кн.: Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Изд-во:МИР, 1989. Т.2. стр. 233-265.

70. Раев В.А. «О некоторых механизмах биологического действия малых доз рентгеновского излучения на культивируемые клетки китайского хомячка» Автореферат кандидатской диссертации, М., МГУ,1982.

71. Рыбникова В.И. Биологическое действие микроволн на некоторые микроорганизмы. // В кн. Тезисы докладов Всесоюз. симпозиума «Биологическое действие ЭМП» Пущино, 1982. стр. 27

72. Савин Б.М., Косова И.П., Шитникова О.Ю. Материалы 5-го советско-американского рабочего совещания по проблеме: «Изучение биологического действия физических факторов окружающей среды». Ялта, 22-26 апреля 1985 г. Киев «Здоровья», 1987 с. 171

73. Светлов П.Г. Физиология (механика) развития: в 2х т. Л.: Наука, 1978 г.

74. Светлов П.Г." Теория критических периодов развития и ее значение для понимания принципов действия среды на онтогенез" Вопросы цитологии и общей физиологии, М., Изд-во АН СССР, стр. 263-285.

75. Сорокин В.А. // Биофизика.-1994.-Т.39.-С.993.

76. Строева О.Г. Роль линзового эпителия в индукции ткани радужины и цили-арного тела. //Докл. АН СССР, 1963 г. Т. 151, стр. 464 467.

77. Темурьянц Н. А., Владимирский Б. М., Тишкин О. Г. Сверхнизкочастотные электромагнитные сигналы в биологическом мире. Киев: Наук, думка, 1992.188 с.

78. Тарусов Б.Н. К вопросу о первичных физико-химических механизмах радиационного поражения. // Радиобиология, 1968.7,5. стр. 670 677.

79. Терентьев П.М., Кашулин Н.А., Королева И.М., Долговременные изменения структуры популяции сига Coregonus lavaretus (L) под действием малых (фоновых) доз загрязнения, 2002. Интернет

80. Токин Б.П. "Общая эмбриология" М., Высшая шкала, 1987.

81. Тоун У.Ф., Гоулд Дж. JI. Чувствительность медоносных пчел к магнитному полю. В кн.: Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Изд-во:МИР, 1989. стр. 147-173.

82. Тюрин А.Н. Метаморфоз хитона Ischnochiton hakodadensis как биотест загрязнения морской среды // Биол. моря. 1994а. - №1. - С. 68-72.

83. Тюрин А.Н. Действие ионов металлов и детергентов на развитие хитонов: Автореф. дисертации канд. биол. наук. Владивосток, 19946. - 22 с.

84. Федоров В.Д., Гильманов Т.Г. Экология. М.: МГУ, 1980. - 463 с.

85. Филенко О.Ф. Биотестирование: возможности и перспективы использования в контроле поверхностных вод // Методы биоиндикации и биотестирования природных вод. JL: Гидрометеоиздат, 1989. - С. 185-193.

86. Христофорова Н.К. Биоиндикация и мониторинг загрязнения морских вод тяжелыми металлами. JL: Наука, 1989. - 192 с.

87. Холодов Ю. А. Мозг в электромагнитных полях. М.: Наука, 1982. -123 с.

88. Холодов Ю. А. Реакции нервной системы на электромагнитные поля. М.: Наука, 1975

89. Черкашин С.А. Экспериментальная оценка экологической ситуации с помощью изучения выживаемости ихтио- и зоопланктона // Вопросы рыболовства. 2000. - Т. 1, №2-3, ч. 2. - С.168-169.

90. Черкашин С.А. Биотестирование: терминология, задачи, основные требования и применение в рыбохозяйственной токсикологии // Изв. ТИНРО. -2001.-Т. 128.-С. 1020- 1035.

91. Чернышев В.Б. Влияние электромагнитных полей на поведение насекомых // В сб. Влияние солнечной активности на атмосферу и биосферу. М. Наука, 1971. с. 231.

92. Шидлаускайте JI.А. Реакции водных животных в электромагнитных полях. // Тр. АН Лит. ССР, сер. В, Т.2,1973, С. 127.

93. Щеглов В.В., Мойсейченко Г.В., Ковековдова Л.Т. Влияние меди и цинка на эмбрионов, личинок и взрослых особей морского ежа Stongylocentrotus intermedius и трепанга Stichopus japonicus // Биол. моря. 1990. №3. С. 55-58.

94. Эйдус Л. X.,"Неспецифическая реакция клеток, и радиочуствитель-ность", Атомиздат, 1977.

95. Balodis V. et al. Does the Skruda Location station diminish the radial growth of pine trees? The Science of the Total environment 180 (l):87-93.1996

96. Balodis V., A. Kolodynski et al. The effects of electromagnetic radiation from the Skruda RLS on organisms. Proceedings Int. Seminar on effects of EMF on the living Environment. Ismaning, Germany, October 4-5, 1999. ICNIRP, 2000

97. Becker G. Elektrische Kommunication bei termiten// Z. f. Angew. Entomol.1977, p. 82;

98. Becker G. On the orientation of diptera according to the geomagnetic field. Ill Intern. Biomagn. Sympos. Chicago, 1966, p.9

99. Berridge M.Y."Inositol triphogphfte and calcium signalling", Nature, 1993, Vol. 361, page 315.

100. Braun F.A. A compas directional phenomenal in mud snails and its relations to magnetism. // Biol. Bull., 1965,51. p. 135

101. Commoner B, Ternberg I.L., "Free radicals in surviving tissues", Proc. Nat. Acad. Sci. USA,1961, Vol. 47, page 1374.

102. Folch J.et all- J.Biol.chem.,1951, vol.191, p.833-841.

103. Folch J„ Lees M., Sloane Stanley G.H.-J. Bi-ol.Chem., 1957, vol. 226, p. 497-509.

104. Gentile G.H., Gentile S.M., Hairston H.G., Sullivan B.G. The use of life-tables for evaluating the chronic toxicity of pollutants to mysidopsis-bahia // Hydrobiologia. 1982. - Vol. 93, №1-2. - P. 179-188.

105. Hjeresen DL, Miller MC, Kaune WT, Phillips RD (1982). A behavioral response of swine to a 60-hz electric field. Bioelectromagnetics 3(4):443-452.

106. Hunt J.W., Anderson B.S. Sublethal effects of zinc and municipal effluents on larvae of the red abolone Haliotis rufescens // Mar. Biol. 1989. - Vol. 101. -P. 545-552.

107. ICNIRP. Effects of Electromagnetic Fields on the Living Environment. Proceedings. International Seminar on Effects of Electromagnetic Fields on the Living Environment, Ismaning, Germany, October 4 and 5, 1999. ICNIRP 10/2000-280 p.

108. INTERNATIONALE PROGRAMME ON CHEMICALSAFETY, Guidelines for drinking-water quality, World Health Organization, Geneva, 1996

109. Johnson JG, Poznaniak DT, McKee GW (1979). Prediction of damage severity on plants due to 60-hz high-intensity electric fields. NTIS Document No CONF-781016:172-183,Hanford Life Sciences Symposium 18th Annual Meeting October 1978 Richland WA.

110. Kobayashi N. Marine ecotoxicological testing with echinoderms // Ecotoxi-cological Testing for the Maine Environment. Bredene, (Belgium): State Univ. Ghent, and Inst. Mar. Scient. Res. 1984. - V.l. P. 341-405.

111. Lee JM Jr, Stormshak F, Thompson JM, Thinesen P, Painter LJ, Olenchek EG, Hess DL, Forbes R, Foster DL (1993). Melatonin secretion and puberty in female lambs exposed to environmental electric and magnetic fields. Biol Reprod 49(4):857-864.

112. Lee JM. Jr, Stormshak F, Thompson JM, Hess DL, Foster D.L (1995). Melatonin and puberty in female lambs exposed to EMF: a replicate study. Bioelectromagnetics 16(2): 119-123 1995

113. Mercer H. D. (1985). Biological effects of electric fields on agricultural animals. Vet Hum Toxicol 27(5):422-426 1985.

114. Phillips J.B., Adler K., Directional and discriminatory responses of salamanders to weak magnetic fields. In: Animal Migration Navigation and homing. Springer-Verlag, Berlin, 1978. pp. 325-333.

115. Niewkoop, P.D. The organization center of the amphibian embryo: Its origin, spatial organization and morphogenetic action. // Adv. Morphol. 1973.10. p. 139

116. Prayor (ed.). "Free radicals in biology", Acad. Press. Vol. 1,2, N.Y.,1976

117. Quinn T.P. A model for salmon navigation on the high seas. In: Proceedings of the Salmon and Trout Migratory Behavior symposium. 1982. pp. 229-237.

118. Richard H., Schreiber J.P., Daune M. // Biopolymers.-1973.- V.12,N1.-P.l.

119. Sheppard A.R. "Biological Effects of High Voltage Direct Current Transmission Lines," Report to the Montana Department of Natural Resources and Conservation, Helena. NTIS publication, PB 83 207258, April, 1983.

120. Scott F., Gilbert F. Developmental biology. Sunderland, Masschusets, Sinauer Associates, Inc. Publishers, 2000. 891 p.

121. Slack J.M.W. From Egg to Embryo. Regional Specification in Early Development. P.W. Barlow et al. (eds.). Cambrige University Press: Cambrige, 1991. 328 p.

122. Публикации Падалка С.М. по теме диссертации:

123. Мелехова О.П., Коссова Г.В., Падалка С.М. «Модификации эмбрионального развития при воздействии радионуклидов» // в сб.: «Физические проблемы экологии», Москва, 2001, стр.170

124. Падалка С.М. «Аномалии развития водных животных как показатели загрязнения водной среды» // Труды Международного Форума по проблемам науки, техники и образования 2001. 03-07.12.2001. Москва.

125. Ахматова Е.Н., Падалка С.М., Супруненко Е.А. «Влияние электромагнитного излучения на процессы регенерации плоских червей» // Труды второй международной конференции «Неионизирующие электромагнитные излучения в биологии и медицине» (БИО-ЭМИ-2002) стр. 133

126. Мелехова О.П, Цветкова Л.И., Коссова Г.В., Падалка С.М., Докина С.М., Пронина Н.Д. «Новое в технологии криоконсервации генома ценных видов рыб»

127. Тезисы Международной конференции «Новые технологии в защите биоразнообразия в водных экосистемах» Москва 27-29 мая 2002 года, стр. 42

128. Падалка С.М., Супруненко Е.А. «Влияние электромагнитного излучения на процессы раннего развития бесхвостых амфибий» // Труды Международного Форума по проблемам науки, техники и образования 2002, стр.28-29

129. Мелехова О.П., Цветкова Л.И.,Докина О.В., Пронина Н.Д., Коссова Г.В., Падалка С.М. Заявка на изобретение «Способ определения жизнеспособности спермы рыб после криоконсервации», № 2003101419 от 21.01.03 г., 7 стр.

130. Мелехова О.П., Егорова Е.И., Коссова Г.В. Падалка С.М. «Влияние ГНЦ-РФ ФЭИ на окружающую природную среду», Отчет по проекту Минатома РФ.

131. Бурлаков А.Б., Падалка С.М., Супруненко Е.А., Ахматова Е.Н., Голичен-ков В.А. «Влияние внешних электромагнитных воздействий на процессы самоорганизации сложных биологических систем» // "Дельфис". Ежегодник 2003. М. С 211-215

132. Мелехова О.П., Цветкова Л.И., Докина О.В., Пронина Н.Д., Коссова Г.В., Падалка С.М. «Способ определения жизнеспособности спермы рыб после криоконсервации». Патент № 2233142, Бюл. №21 от 27.07.2004

133. Препарат 2 Препарат 5 Препарат 14

134. CP Морфометрия CP Морфометрия CP Морфометрия

135. Откло нение в% Критерий Вилкоксона Критерий Ансари- Бредли i Откло нение в% Критерий Вилкоксона Критерий Ансари- Бредли X* Откло нение в% Критерий Вилкоксона Критерий Ансари- Бредли

136. ЮР 104,814 -45,9 р-0,0606 р=0,0045 р=0 р=0,4999 X" =19,96 р=0,0458 X2 =4,032 р=0,4016 Х2=8,21 р=0,07 X2=13,44 р=0,01220Р 34,83 -38,0 р=0,1898 р=0,0071 р=0,4999 р=0,0016 X" =6,841 р=0,8118 X2 =6,282 р=0,179 X2 =24,39 р=0,005 X2 =13,99 р=0,01

137. Отклонение Критерий Критерийв% Вилкоксона Ансари-Бредли

138. Стадия 1548,3 р=0,0062 р=0,0463 X* =77,61 р=012/13 X2 =65,38 р=0 X2 =88,21 р=0 X2 =38,92 р=0 X2 =56,33 р=0 X2 =75,83 р=0 X2 =78,51 р=0 X2 =85,9 р=0 X2 =68,42 р=0

139. Стадия 14 2830,1 р=0 р=0,0034 Х^ =65,9 р=0,0048 X2 =91,23 р=0,0158 Х2=75,11 р=0,0032 Х2=88,4 р=0 X2 =98,32 р=0 X2 =77,51 р=0 X2 =49,99 р=0 5^=76,71 р=0 X2 =48,36 р=0,00571

140. Стадия 2133,6 р=0,0439 р=0,021 3^=38,9 р=015/16 X2 =92,3 8 р=0,0065 Х2=82,19 р=0,0049 X2 =22,22 р=0,01 X2 =59,83 р=0 X2 =32,92 р=0 X2 =35,32 р=0 Х2=21,4 р=0,003 X2 =25,16 р=0

141. Стадия 18 1889,1 р=0,0258 р=0,0155 3^=49,12 р=0 Х2=15,15 р=0 X2 ==39,81 р=0,03 X2 =35,39 р=0 3^=41,9 р=0 X2 =43,12 р=0 3^=94,51 р=0 X2 =49,63 р=0 3^=25,19 р=0,0015

142. Стадия 22 951,3 р=0,0058 р=0,0029 3^=51.28 р=0 Х2=88.9 р=0,02 X2 =34,51 р=0 3^=68,33 р=0 X2 =87,35 р=0 Х2=15,21 р=0,0054 3^=37,85 р=0 X2 =13,69 р=0 X2 =20,57 р=0,0231. Соли меди.1 мг/л 0,01 мг/л 0,0001 мг/л

143. CP Морфометрия CP Морфометрия CP Морфометрия

144. Откло нение в % Критерий Вилкоксон а Критерий Ансари- Бредли ЗС1 Откло нение в% Критерий Вилкоксон а Критерий Ансари- Бредли * Откло нение в% Критерий Вилкоксон а Критерий Ансари- Бредли ЗС<

145. Ю'у мг/л -5,01 р=0,111 р=0,134 х" =43,64 р=0 11,71 р=0,534 р=0,0737 5,7 р=0,457611,2 р=0,0705 р=0,271 X2 =43,39 р=0 10,01 р=0,187 р=0,1 X2 =41,92 р=0