Вакцина против ньюкаслской болезни из штамма "ГАМ-61" тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Руденко, Татьяна Владиславовна

• Руденко, Татьяна Владиславовна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Руденко, Татьяна Владиславовна

ВВЕДЕНИЕ .7

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие сведения о нькжаслской болезни.12

1.1.1. Клинические признаки и формы проявления.17

1.1.2. Патологоанатомические изменения

1.2. Биологические свойства вируса ньюкаслской болезни

1.2.1. Таксономическое положение, антигенный и химический 21-23 состав вируса

1.2.2. Морфология.23

1.2.3. Выделение и методы культивирования вируса.24

1.2.3.1. Способность вируса к репродукции при различной температуре.25

1.2.3.2. Способность вируса к репродукции в культурах клеток.26

1.2.4. Аттенуация вирулентных штаммов вируса ньюкаслской болезни.27

1.2.5. Гемагглютинирующая активность.30

1.2.6. Нейраминидазная активность.

1.2.7. Интерфероногенная активность и интерферирующая спо- 31-33 собность.

1.2.8. Термостабильность.33

1.2.9. Бляшкообразование.34

1.2.10. Антигенные свойства вируса.35

1.2.11. Вирулентность и основы патогенности .36

1.3. Иммунная система птиц.38

1.3.1. Иммунитет при ньюкаслской болезни.

1.3.1.1. Клеточно-опосредованный иммунитет. Краткая хг 40-43 иммунокомпетентных клеток.

1.3.1.2. Гуморальный иммунитет.43

1.3.1.3. Локальный иммунитет.45

1.4. Средства специфической профилактики ньюкаслской болезни.

1.4.1. Вакцины из лентогенных штаммов .46

1.4.2. Вакцины из мезогенных штаммов .51

1.4.3. Инактивированные вакцины.53

1.4.4. Генно-инженерные вакцины.55

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Вакцина против ньюкаслской болезни из штамма "ГАМ-61"»

Актуальность темы. В условиях специализированных птицеводческих хозяйств первостепенное значение принадлежит иммунопрофилактике инфекционных болезней вирусной этиологии. Высокая концентрация поголовья на ограниченных территориях, одновременное содержание неоднородных по возрасту и физиологическому развитию птиц, использование кормов, обсеменных болезнетворными агентами, постоянное поступление ремонтного молодняка из эпизоотически опасных хозяйств и регионов, создают благоприятные условия для быстрого возникновения и распространения инфекционных болезней, оперативная профилактика и ликвидация которых невозможны без применения современных дммунологи-ческих препаратов (129,143,146,149).

Одной из наиболее опасных инфекций является ньюкаслская болезнь (НБ). Несмотря на обстоятельные исследования в области эпизоотологии НБ, расшифровку молекулярных основ патогенности возбудителя, наличия детально отработанных методов диагностики и профилактики, это заболевание до настоящего времени является актуальным не только для птицеводства стран, стационарно неблагополучных по НБ, но и для европейских государств, многие годы свободных от высоковирулентных вариантов возбудителя (329,330).

По данным Международного Эпизоотического Бюро в 1996 г. в мире официально зарегистрировано 2277 неблагополучных по НБ пункта, в 1997 г. - 2382, в 1998 г. - 2385. Причем, в последнее время на некоторых континентах вновь начала прослеживаться тенденция их увеличения. Так, в Европе после крупной эпизоотии НБ в 1993-94 гг. (390 зарегистрированных неблагополучных пунктов только в Германии) в 1996 г. было зафиксировано 69 случаев возникновения ньюкаслской болезни, в 1997- 98 гг.-98.

В РФ за период с 1996 г. по 2000 г. было отмечено всего лишь 13 пунктов, где заболевание проявлялось клинически (307,329). Однако заметно увеличилось количество хозяйств с атипичным течением НБ, о наличии которой можно судить только по появлению чрезвычайно высоких титров антител, снижению общей сохранности и продуктивности. По мнению ряда ученых, одной из возможных причин, объясняющих данную ситуацию, является изменение антигенной или конформационной структуры вирулентных штаммов вируса НБ, что неизбежно при длительном направленном антительном прессинге (202). Следствием этого является неполная комплементарность измененного вируса антителам, формирующимся в ответ на введение большинства традиционных профилактических препаратов, предложенных более 40-50 лет назад и до настоящего времени производящихся отечественной биологической промышленностью (129,130,145,150) .

Поэтому с научной и практической точек зрения представлялась важной и своевременной разработка нового профилактического препарата из вакцинного штамма НБ максимально «поздней» селекции. Такой штамм, обозначенный «ГАМ-61» («А(в)ВН») был получен в начале 70-х годов сотрудником ЦВЛ Михальским Г.А. путем аттенуации на первичной культуре клеток почки теленка и эмбрионах кур высоковирулентного вируса НБ, выделенного от павших 25-ти суточных цыплят птицефабрики «XXII партсъезда» Луховицкого района Московской области. При этом основные иммунобиологические свойства штамма были не изучены.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось создание новой вакцины против ньюкаслской болезни, отвечающей современным требованиям, предъявляемым к противовирусным биологическим препаратам.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• Изучить иммунобиологические свойства пггамма «ГАМ-61», предлагаемого в качестве продуцента новой вакцины.

• Проверить эффективность вакцины в лабораторных и производственных условиях.

• Разработать технологию изготовления вирусвакцины, методы ее контроля, подготовить НД.

Научная новизна. Научная новизна работы заключается в следующем:

• Определены генетические параметры и иммунобиологические характеристики штамма «ГАМ-61» вируса НБ, который депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, и предложен для производства вакцины.

• Изучен механизм формирования ранней резистентности цыплят, привитых штаммом «ГАМ-61».

• Разработан новый метод контроля иммуногенности профилактических препаратов против ньюкаслской болезни по результатам сероконверсии с использованием референс-серий вакцин.

• Установлена структурная и филогенетическая близость искуственно-аттенуированных мезогенных штаммов «ГАМ-61» и «Н» с высоко вирулентными изолятами ВНБ. Доказано, что последовательность нуклеотидных оснований и аминокислотных остатков в сайте разрезания Fo-белка вируса НБ детерминирована. Это позволяет дифференцировать штаммы по степени их патогенности. Снижение вирулентности в процессе аттенуации не связано с нуклеотидными заменами в функционально важных участках генов F и HN.

Новизна полученных результатов подтверждена патентом РФ на изобретение: «Штамм Paramyxovirus, используемый для изготовления вакцины против ньюкаслской болезни кур». Патент РФ № 2055890 от 10.03.96.г.

Практическая значимость. Подготовлена и утверждена в установленном порядке нормативная документация на «Вирусвакцину против ньюкаслской болезни из штамма «ГАМ-61» сухую» (Технические условия 9384-080-95 от 25.12.95 г. и Наставление по применению вирусвакцины против ньюкаслской болезни из штамма «ГАМ-61» № 13-4-2/490 от 27.12.95 г.). Разработана инструкция по изготовлению и контролю вакцины (утверждена директором ВГНКИ 12.1995 г.).

Вакцина из штамма «ГАМ-61» зарегистрирована в РФ и выпускается серийно по заявкам потребителей во ВНИИТиБП и на Краснодарской биофабрике.

Разработаны «Методические указания по определению уровня антител к вирусу ньюкаслской болезни в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)», утвержденные Департаментом ветеринарии МСХи П РФ 23.06.97 г.

Метод оценки иммуногенности профилактических препаратов против ньюкаслской болезни по результатам сероконверсии с использованием референс-серий вакцин введен в ТУ 9384-080-95 «Вирусвакцина сухая против ньюкаслской болезни из штамма «ГАМ-61»; ТУ 9384-002-22727671-00 «Вирусвакцина против ньюкаслской болезни из штамма «БОР-74 ВГНКИ»; ТУ 9384-010-00008064-98 «Вирусвакцина сухая против ньюкаслской болезни из штамма «Н»; ТУ 10-19-212-86 «Вирусвакцина сухая против ньюкаслской болезни из штамма «Ла-Сота».

Апробация. Материалы диссертации доложены на XIII научной конференции молодых ученых (10.01.1992 г.), на 11-ом Интернациональном конгрессе всемирной птицеводческой ассоциации (Венгрия, 1997), на 10-ой Европейской конференции по птицеводству (Израиль, 1998), а также на заседаниях специальной комиссии по проблемам вирусных болезней, Ученого Совета ВГНКИ.

Разработки по материалам диссертации удостоены медали «Лауреат ВВЦ» (постановление № 2345 от 12. 98 г.).

Публикации. Основные положения диссертационной работы отражены в двух заключительных отчетах ВГНКИ: за 1991-1993 гг. № Гос. регистрации 01910034974; за 1994-1996 гг. № Гос. регистрации 01940007075; комплекте НД на вакцину против ньюкаслской болезни из штамма «ГАМ-61»; а также в 15 научных статьях, включая Патент РФ на изобретение, и «Методические указания по определению уровня антител к вирусу ньюкаслской болезни в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)».

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

• Результаты изучения биологических свойств штамма «ГАМ-61» в сравнении со штаммом «Н» вируса НБ.

• Технология изготовления и контроля вакцины против НБ из штамма «ГАМ-61».

• Методики и результаты разработки количественных показателей оценки иммуногенности вакцин против ньюкаслской болезни.

• Результаты испытания эффективности вакцины против НБ из штамма «ГАМ-61» в лабораторных и производственных условиях.

• Результаты исследований функционально важных участков генома вируса НБ для определения антигенных модификаций полевых возбудителей и изучения молекулярных основ процесса аттенуации штамма «ГАМ-61».

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 19& страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Руденко, Татьяна Владиславовна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Полученные результаты свидетельствуют отом, что вакцина из штамма «ГАМ-61» является эффективным противоэпнзоотнческим препаратом для хозяйств, стационарно неблагополучных по НБ, и позволяют надежно контролировать эпизоотическую ситуацию .

Систематическое применение вакцины из штамма « ГАМ-61» способствует вытеснению из стада вирулентных возбудителей НБ и оздоровлению поголовья от данного заболевания.

И-ДСуровцева И.П.Горева Т.В.Руденко ' Ю.В.Родин

О f 9 %

Краснодарский птицепром 24 сентября 1993 год

19Ч?

Прйл. Я

Заключительный акт по результатам испгтаяи;: в Краснодарском к'оао опытно -лоо-шшлешшх серий вирусвакципы против" ишодслодо»; болозш" из штак;,а"А(в)Б1Г1 в течение 1993 года. гласпо разрешения Главного Управления ветеринарии от 07.05.92г. •46/442 в условиях птицефабрик Краснодарского края в 1393 году >дилнсъ испытания опытно -проглышлеиных серий вирусвакцины против злско:] болезни из шташла "А (в )ШГ'. зкцияа была изготовлена согласно требованиям Временной инструкции

•отовленкю к контролю сухой вирусвакципы из штаглма"А(в)ВН" , утгор;::::.

1\ директором НИЖИ ветпрепаратов 20.03.92г. ятрэль вакцины проводив согласно Т требованиям ТУ на вакцину, дащш-ТУВ КСХ РФ 07.05.92 г., а выпускали по. результауагл порчтрования. актуемую вакцину применяли на птицефабриках "Приморская", "Арыа-ая"," Внселковокая". вдну' использовали поело предварительной иммунизации птицепого-вакциной из лентогенного штамма. гщефабркка^исолкоБСкая"- плоцрелродуктор. Основное направло.'ше-ащяваяив реммолодняка до 90-дневного возраста. Вакцина прпменя

0 следующей схеме: я вакцинация( 10-12 дн)-"Бор-74 ШШ1 "-интраназально; вакцинация ( ¿2-42 ди)/"Бэр-74 .ВШЕ" -интраназально ( но по-ашям ИГА ); | я вакщшцпя ( 62-70 дн.)-"А(в)ВН"- внутримышечно. пршито 42Ь300 голов. После применения испытуемой вакцины пост-алыще ослошюния не отмечались. Применение вакцины из штамма И" обеспечивало 100% напряженность иммунитета,титры опоцифкчес-тмтол к вирусу пыокаслскои 'болезни через 14 дне:; после гакцина-ходошсь в пределах 6,2-8,3 через 2В дней- 5,7- . ице>а брлка "Армавирская "-яичного направления. / га применялась по следующей схеме: ^ вакшнашя( 10-~;. дк)-"Ла-Сота"-выпаивание; . . ! вакцинация ( 20-22 дн)-'М:а-Сота"-выпапБаиие ( по показания:;: А):,

1 павддаиия ( 35-40 дн)~"А(б)1;]1" -БЕутркмкшечпо-0,5 мл; ) гаданагепя ( ('5-71: дп) -"А(б)Ш"-вяутримкшечно-1,0 гл. щлшто Т75С00 голов.; После прймоноыш испытуемо?: вакцин постзпечиэало 100/j напряженность шялукитета ,титри опоц-тфитоотах антптол ipycy Iяыокас леко•5 болезни находились б пределах о. зтаточно высокая ап:-:^генная активность ктрускактчш связала с год отходом птлцн »вкзваяныдз поставкам нодобракачествспдкх корглов. фабрика "Пркиорскал"--шеного направления. Вакщша применялась здукэдеЯ схеме г j вакщиаиия ( 12 дн)-"Бор-74 ВГШ'Ц - вшаиваиие; 1 вакцинация "Еор-74 ВПШ" проводится по показаниям Ш Л, я вакщшацня ( CG-Г.о дн.)~"Л(в)ЗН"- внутряглшючно. Йявпто J2GS0 голов. Применение вакщшк обеспечивало Ю0# напря-сь хшг/упитета, титры антител к вирусу 1Ш составили 0.

•о испытуемой вакциной в Краснодарское крае привито 55С9ЗД голов.

Л.Тайласуков

С.Б. Спарников

Гуденко