Тестирование вирулентности синегнойной палочки, изолированной от песцов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат биологических наук Семикрасова, Алла Николаевна

• Семикрасова, Алла Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Семикрасова, Алла Николаевна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Распространение и патогенетическая роль синегнойной палочки.

2.2. Биологические свойства синегнойной палочки

Pseudomonas aeruginosa).

2.3. Инвазивные свойства синегнойной палочки.

2.4. Экзотоксины синегнойной палочки.

2.5. Тестирование патогенности синегнойной палочки.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материал и методы исследования.

3.2. Результаты экспериментального исследования.

3.2.1. Результаты серологического типирования изолятов от павших песцов.

3.2.2. Результаты биотестирования культур синегнойной палочки

3.2.3. Тестирование экзотоксина А.

3.2.4. Результаты определения протеолитической активности синегнойной палочки, изолированной от песцов.

3.2.5. Тестирование адгезивной способности.

3.2.6. Статистическая связь между показателями вирулентности синегнойной палочки.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

5. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Тестирование вирулентности синегнойной палочки, изолированной от песцов»

Актуальность темы. В производстве пушнины песцеводству придается важное значение прежде всего из-за сравнительно низкой себестоимости и высокой окупаемости шкурковой продукции. Однако сдерживающим фактором в его развитии является патология, ассоциированная с синегнойной палочкой. Она, по данным О.Б. Литвинова (2000), контаминирует воду, корма, предметы ухода за животными и, проникая в организм песцов, обусловливает бактерионосительство, заболеваемость и гибель животных. Из-за поражения гениталий нарушается эмбриогенез, происходят аборты и рождается ослабленный молодняк. В результате снижается воспроизводительная функция животных и в зверохозяйствах формируется стационарное неблагополучие.

Вакцины, используемые в норководстве, обладают слабой протектив-ной активностью при псевдомонозе у песцов, поскольку серологический профиль возбудителя болезни не совпадает с природными маркерами пато-генности микроба и защитной активности их для пушных зверей.

Относительно диагностической ценности поверхностных структур синегнойной палочки, таких как адгезивные антигены, внеклеточная слизь, степени продуцирования ими экзотоксина А и протеолитичееких ферментов научная информация неоднозначна. Зависимость вирулентности синегнойной палочки от степени выраженности синтеза, обусловливающего ее экзопродук-ты, определить еще предстоит. Тем более, что адаптированные к задачам ветеринарных лабораторий, медицинские методы лабораторного анализа не учитывают оценки корреляции многопланового тестирования с реакцией защиты организма. Еще не установлены ведущие факторы патогенности микроба, не оценена патогенетическая роль их для организма песцов. Между тем, такая информация необходима в познавательном и прикладном плане, в частности, при идентификации возбудителя псевдомоноза и при разработке специфических лечебшшрофилактических биопрепаратов.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование возможности тестирования и уровня взаимодействия факторов патогенности строго идентифицированных клонированных культур синегнойной палочки, изолированных из патологического материала поражённых псевдомонозом песцов. На полевом материале апробированы современные способы тестирования главного фактора вирулентности по ферментативной и иммунохимиче-ской активности, адгезинов - по прямой гемагглютинации и образованию экстрацеллюлярной слизи ^факторов распространения - по протеолитической способности щелочной протеазы и антигенной активности эластазы.

Установлена достоверная положительная корреляция между показателями биотестирования, адгезии, токсичности и протеолитической активности микроорганизмов.

Опытами по отмене адгезии микроба преинкубацией с антисыворотками показана обусловленность фиксации синегнойной палочки неполисаха-ридными структурами.

Сопряженность биосинтеза факторов патогенности с серологическим профилем синегнойной палочки экспериментально не подтверждена.

Практическая ценность. Для практической ветеринарии предложено биотестирование патогенности синегнойной палочки на белых мышах живой массой 18 - 20 г посредством внутрибрюшинного введения взвеси микроба в дозе 800*106 м.т./ гол.

Для эпизоотологического анализа в зверохозяйствах (установление источника, пути распространения инфекции и рецепции возбудителя) предлагается определение экзотоксина А (в РПГА), адгезии (прямой гемагглютина-цией эритроцитов кроликов и слизеобразованием) и щелочной протеазы (по расщеплению казеина).

Тестирование токсичных экзопродуктов синегнойной палочки предлагается для отбора штаммов при изготовлении протективных препаратов, контроле их качества и защитной эффективности. Благодаря такому тестированию банк вакцинных штаммов синегнойной палочки НИИИПЗК им. В.А. Афанасьева пополнен нами 13 возбудителями псевдомоноза песцов, что подтверждено 2 патентами и 11 положительными решениями ВНИИГПЭ.

Апробация материалов диссертации происходила при ежегодном обсуждении планов, методик и отчетов по научно - исследовательской работе на методической комиссии № 4 и Ученом совете института (1989 - 1999), на секции пушного звероводства Российской академии сельскохозяйственных наук (1994), на Всероссийской научно - практической конференции, посвященной 65 - летию НИИПЗК им. В.А. Афанасьева (1997), на семинаре ветеринарных специалистов зверохозяйств на ВВЦ (1998), при обсуждении заявок в Роспатенте в 1999 году.

По материалам диссертации опубликовано 5 статей, получено 2 патента и 11 положительных решений на изобретения.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Семикрасова, Алла Николаевна

5. ВЫВОДЫ

Вирулентность синегнойных палочек, как полидетерминантный признак, определяется токсичностью и инвазивностью, которые можно тестировать лабораторными методами.

2.Главный фактор вирулентности микроорганизма экзотоксин А (АДФ-рибозил-трансфераза) выявляется в 77 % ферментативным методом, в 87 % непрямой гемагглютинацией и в 37 % иммунодиффузионным тестом.

3.Факторы распространения: щелочная протеаза у 97,3 % клонов обнаруживается по казеинолитической способности, а эластаза у 76,3 % клонов индентифицируется в реакции преципитации.

4.Адгезивную активность поверхностных структур бактерий у 100 % клонов устанавливали в реакции прямой агглютинации с эритроцитами кролика, экстрацеллюлярное слюеобразование - у 47 % клонов по формированию соответствующих колоний после прединкубации с гидролизатом бычьего сердца.

5.Путем инокуляции взвеси изолированной от песцов синегнойной палочки песцам, морским свинкам и белым мышам минимальная летальная доза микроорганизма установлена для белых мышей.

6.Биотестирование летальности положительно коррелирует с показателями уровня экзотоксина А, щелочной протеазы и адгезивной активности микроорганизма.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Семикрасова, Алла Николаевна, 2000 год

1. . Bergan Т. Epidemiological typing of Ps. Aeruginosa I I Brown M.R.W.(ed) Resistance of Pseudomonas aeruginosa.- London74 Willy Inter Sei., 1982,-P. 189-235.

2. Александрова И.А. Методы серологической диагностики инфекций, обусловленных Pseudomonas aeruginosa.

3. Антипенко В.П. и др. Энтеробактерии и Ps. aeruginosa в этиологии хронических заболеваний легких и плевры // Микробиология, 1990.- № 9.- С. 24-27.

4. Африканов С.Г. и др. Псевдомоноз птиц // Ветеринария,- 1985.- № 10.-С. 40-41.

5. Ашмарин И.И., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медицина, 1962,- 178 с.

6. Баснакьян И. А., Северцова М. К., Станиславский Е. С., Машилова Р. М., Определение активности токсинов in vivo и in vitro. Сообщение 1. Новый метод определения активности in vitro. ЖМЭИ, 1983, №9, с. 33-36.

7. Бредни С. Г. и др. Молекулярная биология. М.: Мир, 1977.- С. 7482.

8. Бродинова Н.С., Лучина Т.Я., Аджиева A.A. и др. Активность про-теазы штаммов Ps. aeruginosa, выделенных из различных источников // ЖМЭИ,- 1981,- № 10,- С. 54 57.

9. Буавэн А. и др. Физиология бактерий. Бухарест: Меридиане, 1963,-227с.

10. Венцел Р.П. Внутрибольничные инфекции.- М.: Медицина, 1990.655 с.

11. Выделение и идентификация штаммов синегнойной палочки из клинического материала: Методические рекомендации, утв. Минздравом СССР 17.01.1983,-М.:МЗСССР, 1983.

12. Гамалея Н.Ф., Шаррен A. Vactination et accoutunanse // G. R. Soc. Biol.- 1890,- 19,- 234

13. Гамалея Н.Ф., Шаррен A. Vactination et accoutunanse. // G. R. Soc. Biol.-1980. 1923.

14. Герхерд Ф. и др. Методы общей бактериологии. М.: Мир, 1983.-Т.1.- С.112.

15. Данилов Е.П. Биологические свойства штаммов синегнойной палочки выделенных от норок // Научные труды НИИПЗК. 1973. - Т. 17. - С. 119-121.

16. Данилов Е.П. Псевдомоноз // Болезни пушных зверей. М.: Колос, 1984,-С. 118-124.

17. Данилов Е.П. Типизация возбудателя псевдомоноза пушных зверей // Научные труды НИИПЗК,- 1973,- Т. 17,- С. 119 121.

18. Езепчук Ю.В. Биомолекулярные основы патогенеза бактерий. М.: Наука, 1978.

19. Емельяненко П. А. Учение об инфекции и иммунитете // Ветеринарная микробиология. М.: Колос, 1982. - 280 с.

20. Кириллова Э.В., Добрянская A.JI. Характеристика штаммов Ps. aeruginosa, выделенных из спермы быков производителей // Инфекционные и инвазионные болезни с. - х. животных и птиц. - Одесса, 1984.- С.27 - 29.

21. Литвинов О.Б. Эпизоотологические особенности возбудителя синегнойной инфекции у песцов и лисиц: Диссертация на соиск. уч. степени доктора вег. наук. М., 2000. - С. 117 - 189.

22. Литвинов О.Б., Комарова Г.А. Новые данные о псевдомонозе пушных зверей // Новое в звероводстве. -1993. № 2. - С. 53-61.

23. Литвинов О.Б., Комарова Г.А., Кириллов А.К. и др., Псевдомоноз песцов // Кролиководство и звероводство. 1988. - № 4. - С.46.

24. Литвинов О.Б., Рютова В.П. Эпизоотические аспекты синегнойной инфекции // Кролиководство и звероводство. 1993. - № 5. - С.20-21.

25. Мейнелл Дж., Мейнелл Э. Экспериментальная биология (Теория и практика). М.: Мир, 1967.- С. 197 - 198.

26. Меньшиков Д.Д., Олейник В.А., Енилеев Р.Х. и др., Изменение состава возбудителей раневой инфекции в экстренной хирургии за период 1967 по 1987 годы //Микробиология. 1990,-№ 4,- С. 31 -36.

27. Мирдэозилова X., Журавлева Н. The blue bacelus in children under one year // Здравохранение Таджикистана. 1983. - № 5. - С. 44 - 46.

28. Михайлова H.A., Кузнецова Т.Н. Состояние углеводного обмена и токсинообразование при периодическом глубинном гомогенном культивировании синегнойной палочки // Бактериальные токсины: Тезисы 2 Всесоюзн. конференции. Юрмала., 1989. - С.78.

29. Мойсинко H.H. Динамика выживаемости клебсиелл и Ps. aeruginosa в имитатах морской воды // Методы инд. биоценоза патог. и потенц. патог. микроорганизмов в объектах окружающей среды. М., 1985.- С. 79 - 84.

30. Мороз А.Ф., Анциферова Н.Г. и др. Синегнойная инфекция. М.: Медицина, 1988.- 256 с.

31. Осокина Т.И. Оценка методов серо-, пиоцино- и фаготипирования синегнойной палочки и изучение возможности использования их для эпидемиологических целей: Дисс. на соиск. учен, степени канд. биол. наук. М.-1978.

32. Пенгаева Н. К., Селиванов А. В. Изучение чувствительности разных видов животных к возбудителю псевдомонозы. Биологические препараты против инф. болезней животных. М.- 1981,- с. 146-148.

33. Петровская В.Г. Проблема вирулентности бактерий. М.: Медицина, 1967. - 247 с.

34. Позур В.К., Кириченко Е.В., Вершигора Т.Г. Генотоксичность фильтрата культуры синегнойной палочки // Бактериальные токсины: 2 Всесоюзная конференция: Тезисы докладов. Юрмала, 1989. - С. 102.

35. Позур В.К., Хоробрых В.В. Влияние пеитидогликана на миграцию Т и В - клеток // Иммунология, 1991. - № 4. - С. 65 - 66.

36. Радчук Н.А., Азимов И.А. Биологические свойства экзотоксина А и эластазы, полученных из культур синегнойной палочки // Сборник научных трудов ЛВИ. Л., 1989. - Вып. 101. - С. 135 - 145.

37. Рокицкий П.Ф. Основы вариационной статистики для биологов,-Минск, 1961.-221 с.

38. Роуз Э. Химическая микробиология. М.: Мир, 1971. - 80 с.

39. Свирская Л.М., Строков В.А., Анциферова Н.Г. и др., Госпитальная инфекция, обусловленная синегнойной палочкой, в отделениях реанимации // Микробиология. 1986. - № 5. - С. 7 -12.

40. Седов Н. К., Селиванов А. Б. Изучение разных видов животных к возбудителю псевдомоноза. Биологические препараты против инф. болезней животных. М.-1981.- с. 146-148.

41. Семина Н. А. Премухина М.С. Основные характеристики вспышек внутрибольничных инфекций в СССР в 1986 1988 годах // Микробиология. - 1990. - № 10. - С. 60-64.

42. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоо-патогенных микроорганизмов: справочник. М.: Колос, 1975. - С. 163 - 167.

43. Случай на сепсис при прасета, причинен от Pseudomones aeruginose -Ветеринара. №.- 1981,- 79(6).- 30-32.

44. Смирнова Е. Н. Серотипирование штаммов Ps. aerugimosa.-ЖМЭИ.- 1976,-№9.- 126-129.

45. Сонин П.Ф., Ледовских Н.П. Характеристика культур синегнойной палочки (Pseudomonas aeruginosa), выделенных от песцов // Сборник научн. трудов ЛВИ. 1989. - Вып. 101. - С. 140 - 145.

46. Сонин П.Ф., Ледовских Н.П., Ногинов В. К. и др., Особенности псевдомоноза у песцов и проведение мероприятий по оздоровлению и профилактике // Ученые труды ЛЗВИ. Л., 1990. - Вып. 107. - С. 85 - 90.

47. Стейнер Р., Эдельберг Э., Ингрэм Дж. Мир микробов. М.: Мир, 1979,-Т.З.-С. 122-129.

48. Фробишер М. Основы микробиологии. М.: Мир, 1965.- С. 524529.

49. Хоулт Дж. Краткий определитель бактерий Берги. М.: Мир, 1980.-С. 112-121.

50. Цветкова Е.Т. Выделение патогенных бактериальных культур при ранней гибели щенков голубого песца // Труды НИИПЗК. 1980. - Т. 21. - С. 58-61.

51. Черномордик А.Б. Серологические типы синегнойной палочки:// ЖМЭИ. 1960. - № 5. - С. 100 - 101.

52. Черномордик А.Б. Синегнойная палочка, бактериология и серологическое исследование: Дисс. на соиск. уч. степени доктора биол. наук. Киев: АН УССР, 1959.

53. Шаталов В.Ф., Малевин В. И., Храпковская Л.П. Эпизоотологиче-ские особенности псевдомононосительства и его роль в воспроизводстве крупного рогатого скота // Меры борьбы с болезнями с. х. животных Сев.Кавказа. -1986.

54. Шлегель Г. Общая микробиология. М.: Мир, 1972. - С. 64 - 65.

55. Akimoto Н., Mikami J., Saton Н. Acollutive outbrear and control of hemorrhagic pneumonia in mink // J. Japan. Veter. Assoc. 1987. - V. 40, N 10.-P. 735-788.

56. Ali L.A. Isolation of Pseudomonas aeruginosa from food.- J. Biol. Sci.-13, N2.-P. 35-43.

57. Atherton I.G. Types of Pseudomonas aeruginosa, isolated from horses // Equine veb. J.- 1982.- V.14, N 4.- P. 329 332.

58. Baltimore R.S. Clinical and apidemiological correlates of pseudomonas tiping // The J. Infect. Diseases. 1974.- V. 130, - P.53 - 59.

59. Bergan T. Epidemiological markers for Ps. aeruginosa 1. Pyocine typing and their interrelations I I Acta path. Microbiol. Scand.- 1973/- V. 8113.- P. 70 -80.

60. Berna R., Vasil M. Phospolipase C (heat ealile hemolysin) of Pseudomonas aeruginosa pulification and puliminary characterizatiion // J.Bacter, 1982.-V. 152.-P.239-245.

61. Björn M.J. et al., Incidence of exotoxin production by Pseudomonas species // Infect, and Immun. 1977. - V. 16. - P. 362 - 366.

62. Borowski R., Stock L., Schiller N. Development of an ELISA for studing Ps. Aeruginosa cell surface antigen // J. Clin. Microbiol.- 1984,- V. 19,N 6,-P. 736-741.

63. Botzenbuart K., Heizmann W. Pseudomonas aeruginosa in swimming pools//Ibl. Bakteriol.- 1987.-V. 13,N 183,-P. 5-6.

64. Boyd N.Z. a.u. Chronic colonization of rat airways with Pseudomonas aeruginosa // Infec. and Lnmun.- 1983,- 39 N 3.- P. 1409 1410.

65. Chiaradia V. et al., Valutasione di alcune caratterislisch biochimiche, Se-rologiche e di antibiotico- sensibilita di Pseudomonas aeroginosa per fini epidemi-ologici // Ann. Scand.- 1982,- 24.- №2,- 136-144.

66. Chung D.W., Collier R.J. Enzymatically active peptide from the adenosine diphosphate-ribosylating toxin of Pseudomonas aeruginosa // Infect. Immun. -1977.-V. 16, N3,-P. 832-841.

67. Cicmanec J.F., Holder A. Growth of Pseudomonas aeruginosa in normal and Barned skin Ixtract: nole of Extracellulas proteses // Infect, and Immun. -1979.- V.2, N 2,- P.477 483.

68. Clements J. A. Surface phenomena in relation to pulmonary baction sexth Bouditch lecture//Physiologist.- 1962.-5,-P. 11.

69. Collier R. J., Lory S. Diphteria toxin. Toxin Ps. aeruginosa // Metcha-nisms of action transport of macromolucules in cellular systems (ed S.C. Silverstein). Berlin: Danlem konferenzen, 1978. - P. 83 - 102.

70. Collier R.J. Mecklanos S. ADF riboyleting exotoxins // Multifunctional proteins (Ed. By Bisswenger H., Schminoke O.), NY, Wiley.- 1980,- P. 261 -291.

71. Collier R.J., Kandel J. Structure and activity of diphteria toxin. 1. Thiol -dependent dissociation of a fraction of toxin into enzymatically active and inaction fragments.- J. Biol. Chem.-1971.- V.246, N 5.- P. 1446 1503.

72. Cryz S.J., Friedman R.L., Igiewski B.H. Isolation and characterization of a Pseudomonas aeruginosa mutant producing a nontoxic immunologically crossre-active toxin A protein // Proc. Natl. Acad. Sei USA.- 1980.- V. 88, N 12.- P. 7199 -7203.

73. Dimitracopoulos G., Bartell P.F. Slime glikoprotein and the pathogenicity of varions strains of Pseudomonas aeruginosa in experimental infection // Infect. and Immun.- 1980.- V.30.- P. 402 408.

74. Döring G., Obernesser H., Botzenhart K. Extrazelluläse toxine von Pseudomonas aeruginosa. Enwirkung zweier gereningter proteasen auf die men-schichen immunoglobaline IgG, IgA and sekretorisches Igt. // Zbl. Bakteriol.-1981, AGT,- 249,1.-P. 89-98.

75. Dugnino N.N., Rosenberg F.A. Antibiotic resistant Ps. Aeruginosa in bottled drinking water // Can. J. Microbiol.- 1987.- V. 33, N 4.- P. 286 - 289.

76. Elsheikh L.E. et al. Assessment of elastase as a Pseudomonas aeruginosa viralence factor in experimenai lung infection in mink // Vet. Microbiol. 1987.-V. 13, N3.-P. 281-289.

77. El-Sisi M.A., Ismail A., Nasser A.A., El-Taher A., Shihata A.B., The role of Pseudomonas as a pathogen for Squabs //Egypt. J. Vet. Sei. 1985.- V. 22, N1,-P. 51-54.

78. Eluk S. The recognition of toxinogenic bacterice strain in vivo // Br. Med. J. 1948,- N 1. - P. 493 - 496.

79. Farmer J. et al., Hospital outbreaks coused by Ps. aeruginosa: importance of serogroup 011// J. clin. Microbiol.- 1982,- V. 16 N2.- P. 266 270.

80. Gallagher P.G. Watanakimakorn G. Pseudomonas bacterimia in a community teaching hospital (1980 1989) // Rev. Infect. Dis.- 1989.- Vol. 11, N 6,-P.846 - 853.

81. Gavis J. de, Heice H. Meningitis purulenta door Pseudomonas aeruginosa nalen aorta bifiircatieoperatie, vermoedelijk somenhangend met interathe-cade pijlestrijding // Oon der ned. Tijdschr. Genecsk.- 1983.- V. 127, N 9.- P. 377 -381.

82. Gilmore D.S., Bruce S.K. Pseudomonas aeruginosa colonisation in patients with spinal corol injuries // J. Clin. Microbiol. 1982.- V. 16, N 5.- P. 856 -860.

83. Greit Z., Merzbach D., Freundlich E. Pseudomonas Septicemia in child-brood // Isr. J. Med. Sei. 1983.- V. 19, N 11,- P. 977 - 979.

84. Habs J. Untersudungen über die O Antigene von Ps. Aeruginosa // Z. Hyg. Infekt. Rr.- 1957,- V. 144,- P. 218 - 228.

85. Heck L.W. et al. Specific cleavage of human type III and IV collagens by Pseudomonas aeruginosa elastase // Infect, and Immun.- 1986.- V. 51(1).- P. 115-118.

86. Homma J.C. Serological typing of Ps. Aeruginosa and several points to be considered // Jap. J. exp. Med/- 1974/- V. 44/- P. 1 12.

87. Homma J.G. et al. Changes in serotype of Ps. Aeruginosa // Jap. J. exp. Med.- 1972/- V. 42,- P. 171 172.

88. Homma J.V. Roles of exoenzymes and exotoxin in the pathogenecity of Pseudomonas aeruginosa of a new vaccine // Japan. J. Exp. Med.- 1980.- V.50, N 3.-P. 149-165.

89. Iglewski B.H. et al., Pseudomonas aeruginosa Exoenzyme-S Adenosine Diphosphate Ribosiltransferase distinet from toxin A // Proc Nat. Acad. Sei. USA.-1978,- V.75, N 7.- P.-3211 -3215.

90. Iglewski B.H., Kabet D. NAD dependent ingribition of protein sinthe-sis by Ps. Aeruginosa toxin // Proc. Natl. Acad. Sei USA.- 1975,- V12.- P. 2284 -2288.

91. Jacguot J. et al. In vitro evidence that human airway lysozyme is cleaved and inactivated by Pseudomonas aeruginosa elastase and not by human leukocyte elastase // Infect, and Immunol. 1985. - 47(2). - P 555 - 560.

92. Jagger K., Nickol M.M., Sachinger C.B. Resistance of exotoxin A to purified Pseudomonas proteolytic enzymes // Infect, and Immunol. 1980,- V.28, N 3.-P. 746. 752.

93. Janbon F et al. Les septicimies a Pseudomonas aeruginosa. Aspects cliniques et therepeutiques actenaess // Pathol. Diol.- 1982.- 30,N 6 dis.- P. 563 -567.

94. Jarvis F.G. Johnson M.J. A glycolinide produced by Pseudomonas aeruginosa // J. Am. Chem. Soc. 1949,- 71,- P. 4124.

95. Kandel J. Collier R. J., Chung D.W. Interaction of fragment A from diphteria toxin with nicotinamide adenine dinucleotide // J. Biol Chem.- 1974.-V.249, N 7.- P. 2088-2097.

96. Kangas J. Halsotillstandandet pa palsdjur sformerna a 1981 // Finsk Pal-stidskift -1981/- N 3,- P. 159 160.

97. Kauffmann F. The Differetiation of Eceherichia and Klepsiella Types ( Ed. Thomas).-1951.

98. Kawaharajo R. Changes in serotype of Ps. Aeruginosa // Jap. J. exp Vtl/-1973,-V. 43,- P. 225-226.

99. Kiss P., et al. Incidence of Ps. Aeruginosa serogroups in drinking water: use of serotiping in the control of water supplies // Acta micrjbiol. Hung.- 1983,- N 7,- 1984,- V.30,N 2,- P. 131 137.

100. Kooij D. Oranje J. P., Jijnen W.A.M. Grouser of Pseudomonas aeruginosa in Tap water in relation to utilization of subszrates at concentrations of fewmicrograms per liter // Appl. and Environ. Microbiol.- 1982.- V.44, N 5.- P. 1086 -1095.

101. Kusama R. Elisa Aor detection of Ps. Aeruginosa lipopolysaccharides // J. Clin. Microbiol.- 1983,- V. 17, N 2,- P. 317 322.

102. Lanyi B Serological properties of Ps. Aeruginosa // Acta Microbiol. Acad. Sei Hung.- 1970.- 17,- P. 35 38.

103. Leppla S.H. et al. The exotoxin of Ps. aeruginosa having an unusual mode of activation // Biophys. Res. Commun.- 1978,- V. 81, N 2.- P. 532 538.

104. Leppla S.H. Large seale purification and Characterization of the Exotoxin of Ps. Aeruginosa // Inf. Immun. - 1976,- V. 14, N 4. - P. 1077 - 1086.

105. Leprat R., Michel Brand G. Extracellular neuraminidaze production by a strain of Pseudomonas aeruginosa isolated from cystra fibrosis // Ann. Micro-biol.- 1980,-V. 131,-P. 209-222.

106. Lin P.V. Biology of Pseudomonas aeruginosa // Hospital practice.-1976,-N 11.-p. 139-147.

107. Lin P.V. Exotoxins of Pseudomonas aeruginosa. I. Factors that influence the production of exotoxin A. J. Infect. Dis. - 1973. - 128 - P. 506 - 513.

108. Lin P.V. Extracellular toxins of Ps. Aeruginosa // J. of Infect. Dis.-1974,- 130 Sypplement.- P. 94 98.

109. Lin P.V. Hsieh H. Exotoxins of Pseudomonas aeruginosa. HI. Characteristics of anttoxin A // J. Infect. Dis. 1973. - 128/ - P. 520 -526.

110. Lin P.V. The role of varions fractions of Pseudomonas aeruginosa in its pathogenesis. Identification of letal toxins produced in vivo and in vitro // J. Infect. Dis.- 1966.-V. 116, N4,-P. 481-489.

111. Lin P.V., Abe Y., Bates J. L. The roles of varions fractions of Ps. aeruginosa in its pathogenesis // J. Infect. Dis. 1961.- 108 - P. 218 - 228.

112. Lin P. V., Yoshii S., Hsieh H. Exotoxins of Pseudomonas aeruginosa II. Concentration, purification and characterization of exotoxin A // J. Infect. Dis. -1973.- 128.-P. 574-579.

113. Lindemann R.A., Newman M.L., Kaufman A.K. Oral colonization and susceptibility testing of Ps. Aeruginosa oral isolated from cystic fibrosis patients // J. Dent. Res. 1986,- 64, N 1. -P. 54-57.

114. Lutz F. Purification of cytotoxic protein from Pseudomonas aeruginosa // Toxicon.- 1979,- V. 17,- P. 467 475.

115. Lutz F., Grieshaler S., Kaufer J. Cytotoxin from Pseudomonas aeruginosa in mice: distribution related to pathology toxicon.-1981.- V. 19.- P. 763 -771.

116. Martino P. et al. Water supply as a sourie of Pseudomonas aeruginosa in a hospital for hemotological nreignancies // Bool. Isk. Sieroter Milano.- 1985.-V. 64, N2.-P. 109-114.

117. Mc Leöd C. In.// Bacterial and mycitic infections of man Lippincott -1958-3 -ed. 83.

118. Mc Loc Acta Path. Microbiol. Scand/.- 1948,- 25 .- 414, 755.

119. Meitert E. et al. Food poisoning associated with Pseudomonas aeruginosa // Arch. Roum. Pathol. Exp. Et. Microbiol. 1984,- V.43, N 2.- P. 115 - 119.

120. Meitert M., Meitert E. Epidemiological and immunological implications of Pseudomonos aeruginosa epidemiological markers // Arch. Roum. Pathol. Exp. Etmicrobiol.- 1981.-40, N1,-P. 5-23.

121. Montie T.C., Anderson T.R. ELISA for detection of Pseudomonas aeruginosa H (Flagellar) antigen // Eur. J. Clin. Microbiol.- 1988,- V. 7, N 2/- P. 256-260.

122. Morihara K. et al. Effects of proteases on the structure and activity of Pseudomonas aeruginosa Exotoxin A // Infect. Immunol.-1981,- V.34, N.2.- P. 435-440.

123. Obrig T.G. et al. Effect of Pseudomonas aeruginosa citotoxin on thymidine incorporation by murine splenocytes // Infect. And Immunol 1984,- V. 45, N 3.- P 756 - 760.

124. Ogaard A.R. et al. Correlation between adhesion of Ps. aeruginosa bacteria to cell sutfaces and the presence of some factors related to virulence // Acta pathol., microbiol. and immunol. Scand. 1985. - B 93, № 3. - P. 211-216.

125. Ohman D.E., Sadoff J.C., Iglewski B.H. Toxin A deficient mutans of Pseudomonas aeruginosa PA 103: isolation and characterization // Infect, and Immun. -1980.- V. 28. P. 899 - 908.

126. Parandiych W. et al. Pseudomonas pili // Antibiot. Chemother.- 1985. -V. 36,-P. 49-57.

127. Pavlovskis O.R., VoelkenT.A., Shackelford A.H. Pseudomonas aeruginosa exotoxin in mica histopathology and serum enzyme changes // J. Infect. Dis.- 1976.- 133.-P. 253-259.

128. Pavlovskis O.R., WretlindB. Assesment of protease (elastase) as a Pseudomonas aeruginosa virulence factor in experimental mouse burn infection // Infect, and Immun. 1979. - 24, N 1 - P. 181 - 187.

129. Pellett Sh., Bigley D.V., Grimes D.J. Distribution of Pseudomonas aeruginosa in a riverine ecosystem // Appl. and Ekoiron. Microbiol.- 1983.- V. 45, N1.-P. 328-332./

130. Pencheva P. Serotiping of Ps. aeruginosa strains isolated in Bulgaria using the Lanyl Bergan combined scheme // Acta microbiol. Hung. - 1986.- V. 33, N4. P. 345-349.

131. Piipoinen Malli, Hinlikka Eeva Liiza. Distribution of Pseudomonas aeruginosa acrey serotipes from mink and fox in Finland. A vaccinatio trial in mice // Scientific- 1986. - 10(3).- P. 206 -210.

132. Pollack M., Anderson S.E. Toxicity of Pseudomonas aeruginosa Exotoxin A for Human Macrophyes // Inf. And Immun.- 1978.- V. 19, N 3,- P. 1092 -1096.

133. Pollack M., Toylor N.S., Callahan L.T. Exotoxin Production by clinical Isolates of Ps. aeruginosa// Infect. Immunol.- 1977.- 15. N 3.- P. 776 780.

134. Pollack M., Young L.S. Protective activity of antibodies to exotoxin A and Lipopolysaccharide et the onset of Ps. aeruginosa septicemia in man // J. Clin. Invest.- 1979,- 63, N 2,- P. 276 -287.

135. Ramphai R., Pier G.B. Role of Pseudomonas aeruginosa mucoid exopolysaceharide in adherece to tracheal colls // Infect and Immunol.- 1985.-V.47, N l.-P.l -4.

136. Ricci N. et al. Colomizzarione neonatale de Ps. aeruginose dovuta a disinfettanti contaminati in sala parto // Minerva pediat.- 1983.- V. 35, N 19.- P. 929-934.

137. Salmon P. et al. Whirlpool associated Pseudomonas aeruginose urinary tract infections И JAMA.- 1983,- V. 250, N 15,- 2025 - 2026.

138. Sandwik О. Serological comparateon between strains of Ps. aeruginosa from human and animal strains // Acta patn. Microbiol. Scand.- 1960,- 48.- P. 56 60.

139. Sandwik O. The serology of Ps. aeruginosa from bovine underin lections // Acta Vet. Scand.- 1960,- N 1 .- P. 221 228.

140. Snell K. et al. Цит. по НВБ Басмановой К.К. Факторы патогенно-стн синегнойной палочки // Синегнойная инфекция.- М: Медицина, 1988. С. 38.

141. Sokol P.A. et al. Production of exoenzyme S by clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa // Infect, and Immun.- 1981,- V.34,N 1.- P. 147- 153.

142. Stec E., Kudelski Z. Biologiczne wtasciwosci patectek z rodzajn Pseudomonas izolowanych z zywnosci // Med. Dosw. I mikrobiaL- 1986.- 38 N 3.-P.159 -163.

143. Tomas J., Oliver-Rodes B. Pseudomanas aeruginose an equas envasadas. Concentración optima del agents selectivo.- Alimentaria.- 1987.- 24,- №180.71-74.

144. Urbano P., Deir R., Tarantelli F. Epidemiological Studies of Pseudomonas aeruginosa infection in vleg ulurs.- Med. Microbiol and Immunit.- 1983.-172,-№1.-41-45.

145. Vasil M. L., Igleuski В. H. Comparative toxities of diphterial toxin and Pseudomonas aeroginosa exotoxin A: evidance for different cell, receptors.-1. Gen. Microbiol.- 1978,- 108.-2.-333-337.

146. Vasil M. L., Kabat D., Igleuski В. H. Structure activity relationships at an exotoxin of Pseudomonas aeruginosa.- Infect, and Immun.- 1977.- 19.- 353361.

147. Verder E., Evans J. A proposed antigenic schema for the identification of strains of PS. aeruginosa.-J. Infect.- Dis.- 1961.- 109,- 183-193.

148. Wasserman A. Experimentelle Untersuchungen über einige theoretische Punkte der immunitats- lehre.- Z. Hyg.- Infect.- 1896.- 22,- 263.

149. Watson D.A., Brandly С. Ann. Rev. microbiol., 1949, Ш, 195. Цит по Петровской В.Г. Проблема вирулентности бактерий.-М.: Медицина, 1967. С. 14.

150. Wieland М., Lederman М.М., Юте-King С. et ai. Left-Sicled Endo-careditis due to Pseudomonas aeroginosa. A seport of 10 cases and reniew of the literature.- Medicine (Baltimor).- 1986.- 65.- №3.- 180-189.

151. Zedan H.H., Khatibi A., Salama A.A. et al. Microbial contamination with bacteria of potential health hazard.- Egipt. J. Microbiol.- 1982 (1983).- 17,-№1-2,-151-178.

152. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПО РЕАЛИЗАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ1. ИССЛЕДОВАНИЯ

153. Рекомендации по выделению и идентификации культурсинегнойной палочки

154. Общие сведения о бактериях рода Pseudomonas

155. Род Pseudomonas насчитывает около 200 видов, большинство из которых для пушных зверей не имеет никакого значения.

156. Характеристика и идентификация культур синегнойной палочки

157. Синегнойная палочка чувствительна к высушиванию, действию хлор-содержащих дезинфицирующих препаратов, легко инактивируется под воздействием высокой температуры (при кипячении, автоклавировании).

158. Встречаются штаммы синегнойной палочки атипичные беспигментные или малопигментные.

159. Для стимуляции синтеза пиоцианина с успехом применяется среда Кинг А; на среде Кинг А усиливается образование флуорисцеина.

160. Оптимальными для синтеза пиоцианина условиями являются температуры 30 37 °С, питательные среды, содержащие глицерин, аланин и ионы некоторых металлов (особенно и К4}.

161. При культивировании на питательных средах синегнойная палочка образует триметиламин, придающий культурам запах жасмина, земляничного мыла или карамели.

162. Дифференциально диагностические признаки синегнойной палочки представлены в таблице (см. Приложение).

163. Способы взятия, пересылки и посева исследуемого материала

164. Для бактериологического исследования предпочтительны трупы тех зверей, которые при жизни не подвергались антибиотикотерапии.

165. Труп павший после аборта самки и абортированные плоды доставляют в лабораторию в хорошо упакованной (полиэтиленовой, железной), исключающей пропитку упаковочного материала кровью, испражнениями и другими истечениями из трупа.

166. Банки закрывают стерильными крышками и с нарочным доставляют в лабораторию.

167. При проведении посева самку держат головой вниз, помощник одной рукой фиксирует щипцами голову, прижав ее к земле, а другой оттягивает в сторону хвост.

168. Методика бактериологического исследования

169. Плоские колонии неправильной формы;

170. Колонии, сходные с колониями кишечной палочки;

171. Складчатые («цветок маргаритки»);

172. Мукоидные, образующие большое количество слизи, которая со временем приобретает зеленую окраску;

173. Карликовые колонии, формируемые не менее, чем в течение 18 часов.

174. Рост Pseudomonas на МПА часто сопровождается феноменом радужного лизиса появление блестящего металлического налета и зон лизиса.

175. Обычно используют методы серо-, пиоцино и фаготипирования:

176. Пиоцинотипирование осуществляется по методу J. J. Jarmer, I. Е. Herman (1969). Метод основан на получении пиоцинов из исследуемых штаммов синегнойной палочки и проверки их в отношении набора 18 ALA индикаторных штаммов.

177. Схема пиоцинотипирования состоит из следующих этапов:1. Получение пиоцинолизатгов

178. Подготовка к работе индикаторных штаммов

179. Результаты исследования одного пиоцинолизата против 18 ALA штаммовследующий: 1 2 3 45 6 7 89 10 11 12 13 14 15 16 17 18+ + + -- + - - - +- + + + +

180. Найдем обозначение троек по вышеописанной схеме и получим пиоцинотип 167831.

181. Для сведения: один и тот же пиоцинотип может встречаться у штаммов синегнойной палочки различных серовариантов, поэтому использование в целях эпизоотологического анализа только метода пионинротипирования может привести к ошибке.

182. Фаготипирование штаммов синегнойной палочки

183. Специфичность литической реакции фага связана с наличием на поверхности клеточной стенки бактерий рецепторов для данного фага.

184. Процесс фаготипирования включает в себя следующие этапы:

185. Накопление фагов (получение фаголизатов), 2- определение титров фагов, 3- определение рабочих разведений фагов, 4- процесс фаготипирования.

186. Накопление фагов производят путем размножения их на гомологичных штаммах синегнойной палочки, имеющих обозначения аналогичные таковым у бактериофагов. В качестве питательной среды используют 1,6 % и 75 % МПА и МПБ.

187. Определение титров фагов (полученных фаголизатов ) осуществляют по методу ГРАЦИА (1936), основанном на подсчете количества негативных колоний, образующихся на плотной питательной среде.

188. Фаготип исследуемой культуры синегнойной палочки обозначают номером фагов, дающих реакции на 5, 4 и 3. Например: 7/21 Со 1 П.

189. Бальную оценку на 2 можно поместить в скобках 7/21 (44)/68.

190. Определение чувствительности синегнойной палочки к антибактериальным веществам.

191. Основные методы, используемые для определения биохимических свойств:

192. Определение продукции пиоцианина.

193. Тесты для определения аргининдегидролазы, лизиндекарбоксилазыи орнитиндекарбоксилазы. Полоски бумаги (ватман 3 М) размером 0,5 х 5,0 см пропитываются 0,03 М растворами аминокислот и подсушиваются

194. Аргинин HCL - 63 мг + 10 мл фосфатного буфера 0,0125 М (рН = 5,0)

195. Селективная среда для выделения культур Рб. аеп^шовапептон ферментативный 20,0 г сульфат калия - 7,0 гхлорид магния -1,5 гсульфат магния -1,5 г

196. N цетилперидиний хлорид (Киевский з-д РИАЛ) - 2,0 г агар-агар -10,0 гвода дистиллированная 1000,0 мл рН = 6,8 - 7,0 Среду довести до кипения, кипятить 2- 3 минуты и разлить по чашкам.