Тест-системы на основе полимерных микросфер для лабораторной диагностики инфекционного бронхита кур тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат ветеринарных наук Ондзе Урбен Боско

• Ондзе Урбен Боско
• кандидат ветеринарных наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Ондзе Урбен Боско

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Таксономия вируса ИБК.

1.2. Характеристика вируса ИБК.

1.2.1. Морфология и химический состав.

1.2.2. Устойчивость к физико-химическим воздействиям.

1.2.3. Антигенная структура.

1.2.4. Антигенная вариабельность.

1.3. Особенности иммунитета при ИБК.

1.4. Лабораторные методы диагностики ИБК.

1.4.1. Реакция гемагглютинации с трипсинизированным вирусом.

1.4.2. Реакция непрямой гемагглютинации,.

1.4.3. Реакция связывания комплемента.

1.4.4. Реакция диффузной преципитации.

1.4.5. Реакция иммунофлуоресценции.

1.4.6. Иммуноферментный анализ.

1.4.7. Полимеразная цепная реакция.:.

1.5. Использование полимерных микросфер в диагностике инфекционных заболеваний.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы исследования

2.1.1. Антигены.

2.1.2. Сыворотки.

2.1.3. Полимерные суспензии.

2.1.4. Буферные растворы и реагенты.

2.1.5. Оборудование.

2.2. Методы исследования

2.2.1. Метод очистки и концентрирования вируса ИБК.

2.2.2. Метод выделения иммуноглобулина с использованием ПЭГ-4000.

2.2.3. Определение белка.

2.2.4. Иммунохимическая характеристика препаратов.

2.2.5. Оценка качества полимерных суспензий.

2.2.6. Получение антительных латексных диагностикумов и контрольного латекса.:.

2.2.7.Метод сенсибилизации ПМ иммуноглобулиновой фракцией сыворотки крови кур.

2.2.8. Определение концентрации Ig, адсорбированного на поверхности полимерных микросфер.

2.2.9. Метод сенсибилизации ПМ, модифицированных протеином А, антителами сыворотки крови кур.:.

2.2.10. Постановка и учет результатов PAJI.

2.2.11. Постановка и учет результатов ИФА.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Оценка качества полимерных суспензий при создании иммуно-диагностических тест-систем.

3.2. Разработка технологии получения латексной тест-системы на основе антигенов вируса ИБК.

3.3. Испытание экспериментальных серий латексных диагностикумов на основе антигенов вируса ИБК.

3.4. Разработка технологии получения латексной тест-системы на основе антител против вируса ИБК.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Тест-системы на основе полимерных микросфер для лабораторной диагностики инфекционного бронхита кур»

Вирусные болезни птиц, в том числе и инфекционный бронхит кур (ИБК), причиняют значительный ущерб птицеводству во всем мире. Особенно тяжело они протекают в крупных птицеводческих хозяйствах, где на ограниченном пространстве находится большое количество птиц. Поэтому обеспечение устойчивого благополучия по инфекционным болезням является первостепенной задачей ветеринарной службы [8].

ИБК - острое высококонтагиозное заболевание кур различного возраста, возбудителем которого является вирус, принадлежащий к роду Coronavirus, семейства Coronaviridae [6, 17,18, 23, 29].

В настоящее время ИБК распространен практически повсеместно [6, 17, 45, 142], что связано с постоянным появлением новых антигенных вариантов вируса, в том числе штаммов, способных вызывать заболевание у вакцинированной птицы. В зависимости от штамма возбудитель может поражать респираторные органы, почки, а также герминативные органы и кишечник кур.

Проявление ИБК часто маскируется другими болезнями вирусной и бактериальной природы. Даже при типичном течении болезни постановка диагноза по клиническим и патологоанатомическим признакам является затруднительной. Кроме того, в крупных птицеводческих хозяйствах ИБК может иметь стационарный характер и протекать как хроническая инфекция без ярко выраженных симптомов поражения респираторных органов. Поэтому представляется важным разработка методов, позволяющих выявлять вирус в патологическом материале и таким путем верифицировать диагноз.

Для профилактики ИБК используют живые и инактивированные вакцины. Их производство представляет собой современный биотехнологический процесс, по ходу выполнения которого постоянно требуется количест7 венно определять концентрацию вируса в аллантоисной жидкости для технологических целей.

Для обнаружения антигена вируса ИБК разработан "сэндвич"- вариант иммуноферментного анализа (ИФА), однако он предусматривает использование моноклональных антител, получение которых представляет определенные трудности. До сих пор не разработана тест-система, пригодная для быстрого обнаружения антигена вируса ИБК в полевых условиях и для его количественной оценки в вируссодержащих материалах, при проведении исследований в диагностических ветеринарных лабораториях.

Большое значение имеет и контроль иммунного статуса поголовья кур птицефабрик, в первую очередь, контроль поствакцинального иммунитета и его напряженности. Традиционные методы для определения уровня антител в сыворотках крови кур: реакция диффузионной преципитации (РДП), реакция торможения гемагглютинации (РТГА), реакция нейтрализации (РН), реакция иммунофлуоресценции (РИФ) и ИФА не всегда удобны для массовых исследований в силу трудоемкости для одних и невозможности стандартизации условий постановки реакции для других [12, 23].

Целью настоящих исследований явилось создание тест-систем для диагностики инфекционного бронхита кур на основе полимерных микросфер (ПМ) - латексов в качестве носителей как антигена вируса ИБК, так и противовирусных антител.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) разработать латексную тест-систему (антительный латексный диагно-стикум) для выявления и определения уровня антител к вирусу ИБК в сыворотках крови кур в реакции агглютинации латекса (PAJI);

2) разработать латексную тест-систему (антигенный латексный диагно-стикум) для обнаружения антигена вируса ИБК и его количественной оценки в вируссодержащих материалах; 8

3) оценить чувствительность и специфичность разработанных тест-систем в РАЛ;

4) показать возможность практического применения разработанных латексных тест-систем в ветеринарной практике.

Научная новизна.

Впервые разработана латексная тест-система для выявления и определения антител к вирусу ИБК в сыворотках крови кур. Отработаны условия иммобилизации антигена вируса ИБК на ПМ без функциональных групп, а также имеющих реакционноспособные альдегидные группы на своей поверхности.

Впервые разработана латексная тест-система для выявления антигена вируса ИБК и его количественной оценки в пробах вируссодержащей аллан-тоисной жидкости (ВСАЖ) куриных эмбрионов. Впервые определены условия иммобилизации специфических антител сыворотки крови кур к вирусу ИБК на ПМ, модифицированных протеином А.

Практическая значимость.

Разработанные препараты прошли апробацию во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ). По заключению экспертов антительный латексный диагностикум является специфичным, достаточно чувствительным и может быть рекомендован для контроля напряженности поствакцинального иммунитета, ретроспективной диагностики ИБК и серологического мониторинга данного заболевания. Антигенный латексный диагностикум также является специфичным и может быть использован для диагностических и технологических целей при тестировании биологического материала, содержащего не менее 5,0 lg ЭИД50 вируса ИБК.

Результаты научных исследований легли в основу проектов ряда нормативных документов:

1) Комплект научно-технической документации (НТД) на латексную тест9 систему для выявления антител к вирусу ИБК в РАЛ;

2) Комплект НТД на латексную тест-систему для выявления антигена вируса ИБК в РАЛ.

В каждый комплект входят: технические условия, инструкция по изготовлению и контролю латексного диагностикума и наставление по его применению.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Изготовление чувствительного и специфичного антительного латексного препарата для диагностики ИБК возможно только при работе с очищенным и концентрированным вирусом ИБК.

2. Синтетическими носителями вируса ИБК могут быть как полистирольные микросферы, не содержащие на своей поверхности функциональные группы, так и полиакролеиновые микросферы, содержащие на поверхности ре-акционноспособные альдегидные группы.

3. Иммобилизация антигена вируса ИБК на ПМ происходит за счет физической адсорбции.

4. На чувствительность антительных латексных препаратов для диагностики ИБК влияет жирорастворимый краситель и наличие альдегидных групп на поверхности ПМ.

5. Носителями антител против вируса ИБК могут быть полистирольные микросферы, содержащие на своей поверхности как функциональные карбоксильные группы, так и реакционноспособные альдегидные группы, модифицированные протеином А.

6. Разработанные латексные тест-системы могут быть использованы для диагностики ИБК и технологических целей.

10

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Ондзе Урбен Боско

ВЫВОДЫ

1. Получен специфичный и достаточно чувствительный латексный диагностикум на основе антигена вируса ИБК, использование которого целесообразно для контроля напряженности поствакцинального иммунитета, ретроспективной диагностики ИБК и серологического мониторинга данного заболевания.

2. Для изготовления латексного диагностикума на основе антигена вируса ИБК наиболее пригодны ПМ с диаметром 1,5-2,0 мкм, обладающие высокой седиментационной способностью. Срок сохранения агрегативной устойчивости ПС зависит от природы полимера и характера функциональных групп на поверхности микросфер.

3. Применение неокрашенных полистирольных суспензий с диаметром частиц 2,0 мкм, не содержащих на своей поверхности функциональные группы, позволяет повысить чувствительность и специфичность диагностикумов на основе антигена вируса ИБК.

4. Иммобилизация антигена вируса ИБК на микросферах полимерных суспензий происходит за счет физической адсорбции!

5. Чувствительность диагностикумов, полученных на основе антигена вируса ИБК, зависит от жирорастворимого красителя, вводимого в полимерную суспензию и наличия альдегидных групп на поверхности микросфер.

6. Получение достаточно чувствительного и специфичного антительного латексного препарата для диагностики ИБК возможно только при работе с очищенным и концентрированным вирусом ИБК.

7. Получен специфичный латексный препарат на основе антител против вируса ИБК, использование которого целесообразно для диагностических и технологических целей при тестировании биологического материала, содержащего не менее 5,0 lg ЭИД5о вируса ИБК.

74

8. Синтетическими носителями антител против вируса ИБК могут быть по-листирольные микросферы, содержащие на своей поверхности как функциональные карбоксильные группы, так и реакционноспособные альдегидные группы, модифицированные протеином А.

9. Использование ПС с альдегидными группами, модифицированными протеином А, позволяет иммобилизовать на латексных частицах иммунную сыворотку против вируса ИБК без предварительного выделения из нее иммуноглобулиновой фракции.

75

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты проведенных исследований использованы при разработке следующих проектов нормативно-технических документов (Приложение 3) :

1. Технические условия на латексную тест-систему для выявления антител к вирусу ИБК в РАЛ;

2. Наставление по применению латексной тест-системы для выявления антител к вирусу ИБК в РАЛ;

3. Инструкция по изготовлению и контролю латексной тест-системы для выявления антител к вирусу ИБК в РАЛ;

4. Технические условия на латексную тест-систему' для выявления антигена вируса ИБК в РАЛ;

5. Наставление по применению латексной тест-системы для выявления антигена вируса ИБК в РАЛ;

6. Инструкция по изготовлению и контролю латексной тест-системы для выявления антигена вируса ИБК в РАЛ.

76

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выявление ИБК представляет значительные трудности, особенно в начале эпизоотии. Многообразие симптомов, схожесть клинических форм проявления вирусных болезней животных, вызванных возбудителями, относящимися к различным таксономическим группам, зачастую латентный характер их течения затрудняет постановку диагноза и эффективное проведение противоэпидемических и профилактических мероприятий [12]. Поэтому, чтобы с определенностью установить этиологию каждого индивидуального заболевания, необходимы лабораторные исследования, даже если клинические данные достаточно очевидны [23].

Обеспечение устойчивого благополучия хозяйств по инфекционным болезням проводится по нескольким направлениям, включающим ветеринар-но-санитарные мероприятия, профилактические и лечебные, в случае возникновения болезни. Однако ветеринарно-санитарные меры и специфическая профилактика болезней, вызываемых вирусами, при неточной диагностике не приносят желаемого результата [8].

В последние десятилетия в диагностическую практику широко внедряют иммунологические методы исследования, обладающие высокой чувствительностью и строгой специфичностью. К наиболее перспективным относят ИФА, РИФ и РИГА. Положительные результаты этих реакций с применением иммунологических препаратов характеризуют их как эффективные средства ранней диагностики, эпиданализа и эпиднадзора за различными инфекциями, однако все массовые обследования птиц, контроль напряженности иммунитета, ретроспективная диагностика, серологический мониторинг, требуют дешевого, простого и доступного метода.

70

В настоящее время достаточно широко обсуждается вопрос о замене эритроцитов различных видов животных, используемых в качестве носителей при создании диагностических систем, синтетическими ПМ - латексами. Это вызвано тем, что свойства биологических носителей меняются в зависимости от генетической особенности и возраста донора, от сезона, условий содержания животного и т.д. Кроме того, на поверхности эритроцитов присутствуют изоантигены, способные вызывать ложно-положительные реакции. Все это обуславливает необходимость введения различных контролей при постановке реакции на интактность носителя к используемым иммунным сывороткам и антигенам. Недостатками эритроцитарных диагностикумов являются также лабильность эритроцитов к воздействию экстремальных факторов и трудности стабилизации и стандартизации эритроцитарных препаратов. В связи с этим, в последние годы в России и за рубежом наряду с широко известными методами все большее применение находит реакция агглютинации латекса с использованием диагностических препаратов на основе ПМ. Метод латекс-агглютинации является одним из наиболее простых в техническом отношении, т.к. не требует наличия специального оборудования, высокой квалификации персонала и может проводится в полевых условиях.

Использование разработанных в настоящее время технологий позволяет получать синтетические носители разных размеров, с различными функциональными группами на поверхности частиц, способных фиксировать антигены и антитела и тем самым способствует получению стандартных и стабильных диагностических препаратов.

Учитывая изложенное, настоящая работа была посвящена разработке иммунохимических тест-систем для диагностики ИБК на основе нового поколения латексов, представляющих собой суспензии ПМ определенного гранулометрического состава, несущих на поверхности различные функциональные группы.

В результате проведенных исследований разработана технология полу

71 чения специфичных и достаточно чувствительных латексных диагностикумов как на основе антигена вируса ИБК, так и на основе антител против данного вируса.

При оценке качества ПС установлено, что наибольшей скоростью седиментации обладают ПМ с диаметром 1,5-2,0 мкм. Срок сохранения агрега-тивной устойчивости ПС зависит от природы полимера (полистирол или полиакролеин), а также от характера функциональных групп на поверхности микросфер.

Показано, что для получения достаточно чувствительного и специфичного антительного варианта латексного препарата необходимо использовать только очищенный и концентрированный вирус ИБК. Иммобилизовать на ПМ нативную вируссодержащую аллантоисную жидкость, используемую при производстве эритроцитарных диагностикумов, не представляется возможным.

Повышение чувствительности и специфичности диагностикумов на основе антигена вируса ИБК достигается путем использования неокрашенных полистирольных суспензий с диаметром частиц 2,0 мкм, не содержащих на своей поверхности функциональные группы. Иммобилизация антигена вируса ИБК на ПМ происходит за счет физической адсорбции.

Введение в микросферы ПС жирорастворимых красителей, а также наличие альдегидных групп на поверхности частиц на порядок снижают чувствительность препаратов в PAJI.

Синтетическими носителями антител против вируса ИБК могут быть ПМ, содержащие на своей поверхности как функциональные карбоксильные группы, так и реакционноспособные альдегидные группы, модифицированные протеином А.

Использование ПС с альдегидными группами, модифицированными протеином А, позволяет иммобилизовать на ПМ иммунную сыворотку против вируса ИБК без предварительного выделения иммуноглобулиновой

72 фракции.

Таким образом, разработана технология изготовления латексных тест-систем для диагностики ИБК. Полученные препараты по заключению экспертов ВГНКИ могут применяться в ветеринарной практике для контроля напряженности поствакцинального иммунитета, ретроспективной диагностики ИБК и серологического мониторинга данного заболевания, а также для технологических целей при тестировании биологического материала, содержащего не менее 5,0 lg ЭИД50 вируса ИБК.

73

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Ондзе Урбен Боско, 2002 год

1. Александер С. К. и др. Определение титров противокоревых антител в реакции латекс агглютинации.// жур. Вопрос вирусологии. 1992. - Т. 37, №5-6. с. 259-261.

2. Александер С. К. и др. Приготовление Ig G-диагностикума на основе окрашенных полиакролинновых латексов для применения в реакции латексной агглютинации.// жур. Микробиология. 1990. № 6. с. 84 88.

3. Антонов Б. И. Лабораторные исследования в ветеринарии (под общ. ред.) // М. : Агропромиздат. 1991.

4. Блохина Т. А. и др. Быстрое обнаружение ротавируса человека в фекалиях с помощью VJIA.II Сб. " Острые кишечные инфекции вирусно-бактериальной природы.".М. 1988. - с. 71 - 75.

5. Борисов Л. Б. , Смирнов А. М. и др. Медицинская Микробиология, Вирусология и иммунология // М. : Медицина. 1994.

6. Бочков Ю. А. Метод штаммовой дифференциации вируса инфекционного бронхита кур и анализ изолятов вируса, выделенных на территории России. //Автореферат диссертации на соиск. учен. Степ. канд. биол. наук. Владимир 1999.

7. Бровкина А. Н. Разработка диагностических тест-систем для ускоренной индикации энтеробактерий с помощью реакции латекс-агглютинации. // Диссертация на соиск. учен. степ. канд. биол. наук. -М. 1999.

8. Васильев А. В. Разработка и совершенствование экспресс-методов для серодиагностики вирусных инфекций животных. // Автореферат диссертации на соиск. учен. степ. док. биол. наук. М. - 2000.77

9. Воробьева 3. Г., Лазовская А. Л. и др. Микросферные тесты для диагностики инфекционных заболевании Эукариотов. // Вестник Российской Академий Сельскохозяйственных Наук. 1998. - № 4. - с. 51 - 61.

10. Ю.Гришина В. А. , Терюханов А. Б. Изменение состава белков крови у цыплят при экспериментальном инфекционном бронхите. // Материалы первой межвузовской ветеринарной вирусологической конференций. -1970.-ч. п.-с. 182- 183.

11. Кожемяка Н. В. и др. Инфекционный бронхит // Справочник вет.врача птицеводческого предприятия. -М.: колос. 1982.

12. Луговская Н. Н. Совершенствование методов диагностики инфекционного бронхита кур. // Автореферат дисс. на соиск. учен. степ. канд. биол. Наук. Владимир. - 2001.

13. Лукин Ю. В. , Трифонов В. Д. и др. Использование полиакрилеиновых латексов для иммуноанализа. // Труды МАТХТ. 1985. - Вып. 135. - с. 88-92.

14. Мазурина М. Г., Терюханов А. Б., Казаков В. Д. Опыт специфической профилактики инфекционного бронхита кур.// Ветеринария. 1975. -№8.-с. 38-39.

15. Милютина Л. Н., Тендетник Ю. Я. и др. Диагностика Сальмонеллеза у детей с помощью теста латекс-агглютинации.// Тез. Докл. VI Всерос. Съезда Микробиол. Эпидем. и Паразитол. М. - 1991. - Т. 1.-е. 108 — 109.

16. Никитин В. М. Справочник методов биохимической экспресс-индикации микробов // Кишинев. 1989. - 294с.

17. П.Николаева И. Н., Сюрин В. Н. Гемагглютинины вируса инфекционного бронхита кур. // Ветеринария. 1973. - Т. 2.

18. Прокопов Н. И. и др. Синтез монодисперсных функциональных полимерных микросфер для иммунодиагностических исследовании.// жур. Успехи Химии. 65 (2), 1996.78

19. Радчук Г. В. и др. Патогенные кокки. // Ветеринарная микробиология и иммунология. М., Агропромиздат. - 1991. - с. 188.

20. Станишевский Я. М. и др. Влияние способа присоединения биолиган-да на устойчивость иммунохимических тест-систем, основу которых составляют полимерные микросферы. //Журнал Биомедицинские технологии. М. - 2001. Вып. 16.-c.107- 113.

21. Сухарев О. И. Автореферат диссертации на соискание учен, степени кандидата вет. наук. Москва 1977.

22. Сюрин В. Н. , Белоусова Р. В. , Фомина Н. В. Инфекционный бронхит птиц // Диагностика вирусных болезных животных: справочник. М. -Агропромиздат. 1991. - с. 235 - 258.

23. Сюрин В. Н. и др. Инфекционный бронхит кур. // Частная ветеринарная вирусология: справочник книга-М. колос. - 1979.

24. Терюханов А. и соавторы. Профилактика инфекционного бронхита. //Журнал Птицеводство. М., "Колос". - 1995. - № 5. - С.24-25.

25. Фикс J1. И. и др. Разработка и апробация PJ1A для экспресс-диагностики стафилококковой инфекции. ЖМЭИ. 1995., № 6. - с. 73 -74.

26. Яшина Н. В. Иммунохимические реагенты на основе окрашенных микросфер полистирольного латекса.// Автореферат дисс. на соиск. уч. степ. канд. биол. наук. М. - 1997.

27. Adzhar А. В., Shaw К. , Britton P. et al. Avian infectious bronchitis virus: Differnces between 793/B and other strains. // Vet. Rec. 1995. - Vol. 136. -P. 548.79

28. Albini В. , Wick G. Immunoglobulin determinants on the surface of chicken lymphoid cells. // Internat. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1973. -Vol. 44. - P. 804.

29. Alexander D. J. , Collins M. S. Effect of pH on the growth and cytopathogenicity of avian infectious bronchitis virus in chicken kidney cells. // Arch. Virol. 1975. - Vol. 59. - P. 161 - 167.

30. Bains B. S. Infectious bronchitis.// A manual of poultry diseases. Editiones < Roche >, Basle. 1979. - P. 122 - 125.

31. Bansal R. , Jochi R. , Chandra U. Latex agglutination Test. // Acta Virol. -1989. Vol. 32 (3). - P. 275 - 277.

32. Beach J. R. , Schalm O. W. A filterable virus, distinct from that of laryngotracheaitis, the cause of a respiratory disease of chicks. // Poult. Sci. 1936.-Vol. 15.-P. 199-206.

33. Beaudette F. R. , Hudson С. B. Cultivation of a virus of infectious bronchitis. // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1937. - Vol. 90. - P. 51 - 60.

34. Berry D. M. Inactivated infectious bronchitis vaccine. // J. of comparative Pathology. 1965. - Vol. 75. - P. 409 - 415.

35. Веггу D. M. Infectious bronchitis and inactivated infectious bronchitis vaccine. // J. World's Poultry Sci. 1964. - Vol. 20 (4). - P. 273 - 283.

36. Berry D. M., Cruickshanr J. G., Chu H. P. et al. The structure of infectious bronchitis virus // J. Virol. 1964. - Vol. 23. - P. 403 - 407.

37. Berry D. M. , Stokes K. J. Antigenic variations in isolates of infectious bronchitis virus. // Vet. Record. 1968. - Vol. 83. - P. 157 - 160.

38. Bienenstock J., Galudic J., Perey D. Y. E. Synthesis of IgG, IgA, IgM by chicken tissues : Immunofluorescent and С14 aminoacid incorporation studies. // J. Immunol. 1973. - Vol. 111. - P. 1112.

39. Boursnell M. E. , Brown T. D. , Foulds I. J. et al. Completion of the sequence of the genome of the coronavirus avian infectious bronchitis virus. // J. Gen. Virol. 1987. - Vol. 68. - P. 57 - 77.80

40. Box P. G. Egg production of hens showing evidence of infection with infectious bronchitis virus. // J. Vet. Rec. 1964. - Vol. 76 (43). - P. 1202 -1206.

41. Box P. G. , Sider D. , Abbortt P. K. et al. Live and killed infectious bronchitis vaccines on infectigation of varying schedules. // J. Vet. Rec. -1973.-Vol. 92 (2).-P. 32-38.

42. Bracewell C.D. A direct complement fixation test for infectious bronchitis virus using heat-inactivated sera. // Vet. Rec. 1973. - Vol. 92. - P. 451 -454.

43. Brumfield H. P., Pomeroy B. S. Direct complement fixation by turkey and chicken in viral systems. // Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 1957. - Vol. 94. - P. 146 - 149.

44. Bushnell I. D., Brandly C. A. Laryngotracheaitis in chicks. // Poultry Sci. -1933.-Vol. 12.-P. 55-60.

45. Capus I. , Gough R. E. , Mancini M. et al. A "novel" infectious bronchitis strain infecting broiler chickens in Italy. // Zentralbl. Veterinarmed. 1994. -Vol. 41.-P. 83 -89.

46. Chen B. Y. et Itakura. //Avian pathology. Vol. 26. № 3. 1997. p. 607 624.

47. Chubb R. C. Effect of the suppression of circulating antibody on resistance to Australian avian infectiouys bronchitis virus. // Res. in Vet. Sci. 1974. -Vol. 17 (2).-P. 169-173.

48. Chubb R. C., Cumming R. B. The use of the gel diffusion precipitin technique with avian infectious bronchitis virus. // Australian Vet. Journal. -1971. Vol. 47. - N.l0. - P. 496 - 499.

49. Clewley J. P., Morser J., Avery R. J. et al. Oligonucleotid fingerprinting of ribonucleic acids of infectious bronchitis virus strains. // Infect. Immunol. -1981.-Vol. 32.-P. 1227-1233.

50. Collisson E. W., Alexander D. J. Avian infectious bronchitis virus structural polypeptides : effect of different conditions of disruption and comparison of81different strains and isolates // Arch. Virol. 1980. - Vol. 63. - P. 239 -251.

51. Cook J. K. The classification of new serotypes of infectious bronchitis virus isolated from poultry flocks in Britain between 1981 and 1983. // Avian Pathol. 1984. - Vol. 13. - P. 733 - 741.

52. Coria M. F. , Booth G. D. Immune response in chickens to infectious bronchitis virus strain 33. Betapropiolactone-inactivated and live virus vaccines compared by statistical methods.// Avian Dis. 1972. - Vol. 16 (4). - P. 767 - 773.

53. Coria M. F. , Hofstad M. S. Immune response in chickens to infectious bronchitis virus strain 33. II. Response to vims propagated in chicken embryo kidney cells. // Avian Dis. 1971. - Vol. 16. - P. 696 - 703.

54. Cumming R. B. Infectious avian nephrosis (uraemia) in Australia. // Aust. Vet. J.- 1963.-Vol. 39.-P. 145-147.

55. Cumming R. B. Studies on infectious bronchitis nephrosis ( Nephritis; Uraemia). // Ph. D. Thesis University of New England. 1967. Armidale.

56. Cumming R. B. The control of avian infectious bronchitris / nephrosis in Australia. // Aust. Vet. J. 1969. - Vol. 45. - P. 200 - 203.

57. Cunningham С. H. Newer information on the properties of infectious bronchitis virus. // Proc. 13 th World's Poultry Congr. 1966. - P. 416 -418.

58. Dave Cavanagh. Infectious Bronchitis Virus: A moving target. // Poultry international; March 1999. p. 58-61.82

59. Davelaar F. G. , Kouwenhoven B. , Burger A. G. Occurrence and significance of infectious bronchitis virus variant strains in egg and broiler production in the Netherlands. // Vet. Q. 1984. - Vol. 6. - P. 114 - 120.

60. Dawson P. S. , Gough R. E. Antigenic variation in strains of avian infectious bronchitis. // Arch, fur die Gesampte Virusforsch. 1971. - Vol. 34.-P. 32-39.

61. Erlich H. A. PCR technology // New-York. Raven Press. 1988. - P. 254.

62. Faith R. E. , Clem L. W. Passive cutaneous anaphylaxis in the chicken biological fractionation of the mediating antibody population. // J. Immunol. 1973.-Vol. 25.-P. 151.

63. Finkelstein M. S., McWilliams S. U. et al. Use of Chicken tracheal cultures for studying resistance of respiratory epithelium to virus infection. // J. Immunol.-1972.-Vol. 108(1).-P. 183 185.

64. Ganju L. et al. A paid latex agglutination test for detection of antibodies in tuberculosis and hansen's disease.// J. Immuno assay. 1991. V. 12, № 4. p. 579-596.

65. Gdovinova A., Bracewell C. D. et al. Assessing infectious bronchitis vaccines. // Vet. Rec. 1974. - Vol. 23. - N. 7. - P. 53 - 54.

66. Gelb J. , Keeler C. L. , Nix W. A. et al. Antigenic and SI genomic characterization of the Delaware variant serotype of infectious bronchitis virus. // Avian Dis. 1997. - Vol. 41. - P. 661 - 669.

67. Gelb J. , Wolff J. B. , Moran C. A. Variant serotypes of infectious bronchitis virus isolated from commercial layer and broiler chickens. // Avian Dis. 1991. - Vol. 35. -P. 82 - 87.83

68. Gillette К. G. Avian infectious bronchitis demonstration of serum IgG and IgM neutralizing antibody by sucrose density-gradient centrifution and merkan to ethanol reduction. // Avian Dis. 1974. - Vol. 18 (4). - P. 515 — 525.

69. Gough R. E. , Randall C. G., Dagless M. et al. A "new" strain of infectious bronchitis virus infecting domestic fowl in Great Britain. // Vet. Res. 1992. -Vol. 130.-P. 493-494.

70. Gray J. J. et al. Evaluation of a commercial latex agglutination test for detecting antibodies to cytomegalovirus in organ donors and transplant recipients.//J. Virol, meth. 1987. -V. 16. - p. 13-19.

71. Hitchner S. B., Appleton G.S. et al. Evaluation of the immunity response to infectious bronchitis virus. // Anim. Dis. 1964. - Vol. 8. - P. 153 - 162.

72. Hofstad M. S. Antigenic and immunological studies on several isolates of avian infectious bronchitis virus. // Avian Dis. 1961. - Vol. 5. - P. 102 -106.

73. Hofstad M. S. Antigenic differences among isolates of avian infectious bronchitis virus. // Amer. J. Vet. Res. 1958. - Vol. 19. - P. 740 - 743.

74. Hofstad M. S. , Kenzy S. G. Susceptibility of chicks hatched from recovered hens to infectious bronchitis. // Cornell Vet. 1950. - Vol. 40. -P. 87.

75. Holmes К. V. , Doller E. W. , Behnre J. N. Analysis of function of coronavirus glycoproteins by differential inhibition of synthesis with tunicamycin. // Adv. Exp. Med. Biol. 1981. - Vol. 142. - P. 133 - 142.

76. Holmes К. V. , Doller E. W. , Sturman L. S. Tunicamycin resistant glycosylation of a coronavirus glycoprotein: Demonstration of a novel type of viral glycoprotein. // Virol. 1981. - Vol. 115. - P. 334 - 344.

77. Hopkins S. R. Serologic and immunologic properties of a recent isolate of infectious bronchitis virus. // Avian Dis. 1969. - Vol. 13. - P. 356 - 362.84

78. Hopkins S. R. Serological comparisons of strains of infectious bronchitis virus using plaque purified isolants. // Avian Dis. 1974. - Vol. 18. - P. 231 -239.

79. Ignjatovic J. , McWaters P. G. Monoclonal antibodies to three structural proteins of avian infectious bronchitis virus: Characterization of epitopes and antigenic differentiation of Australian strains. // J. Gen. Virol. 1991. -Vol. 72.-P. 2915-2922.

80. Ignjatovic J., Ashton F. Detection and differentiation of avian infectious bronchitis viruses using a monoclonal antibody-based ELISA // Avian Pathol. 1996. - Vol. 25. - P. 721 - 736.

81. Ignjatovic J., McWaters P. G. Monoclonal antibodies to three structural proteins of avian infectious bronchitis virus: characterization of epitopes and antigenic differentiation of Australian strains // J. Gen. Virol. 1991. - Vol. 72.-P. 2915-2922.

82. Johnson R. B. , Marquardt W. W. , Newman J. A. A new serotype of infectious bronchitis virus responsible for respiratory disease in Arkansas broiler flocks. // Avian Dis. 1973. - Vol. 170. - P. 518 - 523.

83. Johnson R. B. , Newman J. A. , Wills F. K. Titration of infectious bronchitis virus in tracheas of susceptible and immune chickens. // Avian Dis. 1969. - Vol. 13. - P. 632 - 633.

84. Jungher E. L. , Chomiak T. W., Luginbuhl R. E. Immunologic differences in strains of infectious bronchitis. // Proc. 60 th Annu. Meet US Livestock Sanit. Assoc. 1956. - P. 203 - 209.

85. Jungherr E. L. , Terrell N. L. Naturally acquired passive immunity to infectious bronchitis in chicks. // Amer. J. Vet. Res. 1948. - Vol. 9. - P. 201 -205.

86. Kant A., Koch G., et al. Location of antigenic sites defined by neutralizing monoclonal antibodies on the SI avian infectious bronchitis virus glycopolypeptide // J. Gen. Virol. 1992. - Vol. 73. - P. 591 - 596.85

87. Karaca К., Nagi S. A. A monoclonal antibody-based ELISA to detect serotype-specific infectious antibodies // Vet. Microbiol. 1993. - Vol. 34. -P. 249-257.

88. Karaca K., Nagi S. A., Gelb J. Production and characterization of monoclonal antibodies to three infectious bronchitis virus serotypes // Avian. Dis. 1992. - Vol. 36. - P. 903 - 915.

89. Khattab M. S. , Craig J. V. Ontogeny of allotype synthesis and decay of maternal allotype in young chickens. // Poultry Sci. 1970. Vol. 49. - P. 973.

90. Kincade P. W., Cooper M. D. Development and distribution of immunoglobulin-containing cells in the chickens : immunofluorescent analysis using purified antibodies to M, у and light chains. // J. Immunol. -1971.-Vol. 106.-P. 371.

91. Kincade P. W. , Cooper M. D. Immunoglobulin A : Site and sequence of expression in developing chicks.// Science. 1973. Vol. 179. - P. 398.

92. Koch G., Hartog A., Kant A. et al. Antigenic domains of the peplomer protein of avian infectious bronchitis virus : Correlation with biological functions // J. Gen. Virol. 1990. - Vol. 71. - P. 1929 - 1935.

93. Kondo A., Kawano T. et al. Immunological agglutination kinetics of Latex particles with physically adsorbed antigens. // J. of immunological methods. 1990. Vol. 135.-Iss. 1-2.-P. 111-119.

94. Kramer Т. T., Cho H. C. Transfer of immunoglobulins an antibodies in the hen's egg. // J. Immunol. 1970. - Vol. 19. - P. 157.

95. Kusters J. G., Niesters H. G. et al. Phylogeny of antigenic variants of avian coronavirus IBV. // J. Virol. 1989. - Vol. 169. - P. 217 - 221.

96. Leslie G. A., Martin L. N. Modulation of immunoglobulin ontogeny in the chicken effect of the purified antibody specific for chain on IgM, IgY and IgA production. // J. Immunol. 1973. Vol. 110. - P. 959.

97. Leslie G. A. , Martin L. N. The secretory immunologic system of fowl. IV. Serum and salivery immunoglobulins in normal agammaglobulinemic and dysgammaglobulinemic chickens. // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1974. - Vol. 46. - P. 834.

98. Lin Z. , Kato A. Kudou Y. et al. A new typing method for the avian infectious bronchitis virus using polymerase chain reaction and restriction enzyme fragment polymorphism // Arch. Virol. 1991. - Vol. 120. - P. 145- 149.

99. Lomniczi B. Biological properties of avian coronavirus RNA. // J. Gen. Virol. 1977. - Vol. 36. - P. 531 - 533.

100. Long P. L. , Pierce A. E. Role of cellular factors in the mediation of immunity to avian coccidiosis (Eimeria Tenella).// Nature, London. 1963. -Vol. 200.-P. 426.

101. Lowry O., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. //J. Biol. Chem. 1951. - V. 193, № 1. - P. 265-275.

102. Marinkovich V. A., Baluda M. A. In vitro synthesis of M-like globulin by various chick embryonic cells. // J. Immonol. 1966. - Vol. 10. - P. 383.

103. Marquardt W. W., Snyder D. В., Schlotthober B. A. Detection and quantification of antibodies to infectious bronchitis virus by enzyme-linked immunosorbent assay // Avian Dis. 1981. - Vol. 25. - P. 713 - 722.87

104. O.Martin L. N. , Leslie G. A. Ontogeny of IgA in normal and neonatally bursectomzed chickens with corroborative data on IgY and IgM. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1973. - Vol. 143. - P.241.

105. Mcintosh K. , Dees J. H. , Becker W. B. et al. Recovery in tracheal organ cultures of novel viruses from patients with respiratory desease. // Proc. Nat. Acad. Sci. 1967. - Vol. 57. - P. 933 - 940.

106. McMartin D. A. The pathogenecity of an infectious bronchitis virus for laying hens with observation on pathogenesis. // Brit. Vet. J. 1968. - Vol. 124 (12).-P. 576-580.

107. Mongkolsirichaikul D. et al. Development of a latex agglutination inhibition reaction test for amphetamines in urine.// J. Immunol. Methods. 1993.-V. 157., № 1-2.-p. 189-196.

108. Muldoon R. L. Some characteristics of the hemagglutinating activity of infectious bronchitis virus. // Ph.D. Thesis. Michigan State University. -East Lansing. - Michigan. - 1960.

109. Mullis K. , Faloona F. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase- catalyzed chain reaction // Methods Enzymol. 1987. - Vol. 155.-P. 335 -344.

110. Parr R. L., Collisson E.W. Epitopes on the spine protein of a nephropathogenic strain of infectious bronchitis virus // Arch. Virol. -1993. Vol. 133. - P. 369 - 383.

111. Picault J. P. , Bennejean G., Drouin P. A new pathogenic avian infectious bronchitis virus isolated in France. // In: current topics in vet. med. and animal science. 1986. - P. 122 - 127.

112. Raggi L. G., Gomes L. Two new isolants of infectious bronchitis virus with polyvalent immunogenicity. // Avian Dis. 1975. - Vol. 19. - P. 323 -328.

113. Raggi L. G., Lee G. G. Lack of correlation between infectivity serologic response and challenge results in immunization with an avian infectious bronchitis vaccine. // J. Immunol. 1965. - Vol. 94. - P. 538 - 543.

114. Sapats S. I. , Ashton F. , Wright P. J. et al. Sequence analysis of the SI glycoprotein of infectious bronchitis viruses: Identification of novel genotypic group in Australia. // J. Gen. Virol. 1996. - Vol. 77. - P. 413 -418.

115. Schochetman G. , Stevens R. H. , Simpson R. W. Presence of infectious polyadenylated RNA in the coronavirus avian infectious bronchitis virus. // Virology. 1977. - Vol. 77. - P. 772 - 782.

116. Severin W. P. J. Latex agglutination in the Diagnosis of Meningococca Meningitis. // J. Clin. Path. 1972. - Vol. 25. - P. 1079 - 1082.

117. Siddell S. G., Wege H., ter Meulen V. The biology of Coronaviruses. // J. Gen. Virol. 1983. - Vol. 64. - P. 761 - 776.

118. Steele F. M., Liginbuhle R. E. Direct and indirect complement-fixation tests for infectious bronchitis virus. // Amer. J. Vet. Res. 1964. Vol. 25. -P. 1249- 1255.

119. Tannock G. A. The nucleic acid of infectious bronchitis virus. // Arch. Ges. Virusforsch. 1973. - Vol. 43. - P. 259 - 271.

120. Tevethia S. S., Cunningham С. H. Antigenic characterization of infectious bronchitis virus. // J. Immunology. 1968. - Vol. 100. - P. 793 - 798.90

121. Thorbeck G. J. , Warner N. L. et al. Immune globulin production by the bursa of Fabricius of young chickens. // J. Immunol. 1968. - Vol. 15. - P. 123.

122. Tyrell D. A. , Almeida J. D. Berry D. M. et al. Coronaviruses. // Nature. -1968.-Vol. 220.-P. 650.

123. Uschinuno Y. ,Yamada S. , Fugikawa H. et al. Newcastle disease-infectious bronchitis inactivated combined vaccine. // J. Japan Vet. Med. Assoc. 1973. - Vol. 26 (3). - P. 124 - 128.

124. Van Roekel H. , Clarke M. K., Bullis K. L. et al. Infectious bronchitis. // Amer. J. Vet. Res.-1951.-Vol. 12.-P. 140-146.

125. Wadey C. N. , Faragher J. T. Australian infectious bronchitis virus: Identification of nine subtypes by a neutralization test. // Res. Vet. Sci. -1981.-Vol. 30.-P. 70-74.

126. Wang С. H., Hsieh M. C., Chang P. C. Isolation, pathogenicity and HI20 protection efficacy of infectious bronchitis viruses isolated in Taiwan. // Avian Dis. 1996. - Vol. 40. - P. 620 - 625.

127. Wang H. N. , Wu Q. Z. , Huang Y. et al. Isolation and identification of infectious bronchitis virus from chickens in Sichuan, China. // Avian Dis. -1997. Vol. 41. - P. 279 - 282.

128. Wang Xiuging, Lin Xi. Acta veterinaria et zootechnica Sinica. 1993. -Vol. 24. №6.-P. 554-559.

129. Winterfield R. W. , Hitchner S. B. Etiology of infectious nephritis-nephrosis syndrome of chickens. // Amer. J. Vet. Res. 1962. - Vol. 23. -P. 1273- 1279.

130. Winterfield R. W. , Hitchner S. B. , Appleton G. S. Immunological characteristics of a variant of infectious bronchitis virus isolated from chickens. // Avian Dis.- 1964. Vol. 8. - P. 40 - 47.91

131. Wintrefield R. W. Respiratory signs, immunity response and interference from vaccination with monovalent and multivalent infectious bronchitis vaccine. // Avian Dis. 1968. - Vol. 12. - P. 577 - 584.

132. Woernle H. Ein beitrag zur infectiozen bronchitis der huhner. Mh.Tierheilk. 1960. -Vol. 12.-P. Ill -116.

133. Woernle H. Impfversuche mit adsorbat-vakzine bei der infectiosen Bronchitis des huhnes. Monatshefte F. Tierheilk. 1961. Vol. 13. - P. 136 - 142.

134. Woernle H. The use of the agar-gel diffusion technique in the identification of certain avian virus diseases. // Veterinarian. 1966. - Vol. 4.-P. 17-28.

135. Yagyu K., Ohta S. Detection of infectious bronchitis viruses antigen from experimentally infected chickens by indirect immunofluorescent assay with monoclonal antibody // Avian Dis. 1990. - Vol. 34. - P. 246 - 252.

136. Zanella A., Giallini L. Observazioni e ricerche suH'officacia ummunizzante di un vaccine inattivo contro la bronchite infettica aviare. // Arch. Vet. Italia. 1969. - Vol. 20 (1). - P. 33 - 44.

137. Zuerlein T. G. et al. Latex agglutination detection of group В Streptococcal inoculum in urine.// Diagn. microbial, infect, disease. 1991. -Vol. 14, №3. p. 191-195.

138. МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ

139. Звенигородское шоссе,5 Российского Университета Дружбы Народов1. Тел.:[phone] ДалинуМ.В.2, f- /У, is / № >2 If ^ /Я 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая,8. на № б/нот 02.10.01 г.

140. Институт провел повторные испытания образцов латексного диагностического набора для выявления антител к вирусу инфекционного бронхита кур (IBV), изготовленных аспирантом Вашего Университета ОНДЗЕ УРБЕН БОСКО.

141. Набор был проверен по показателям специфичности и чувствительности.

142. Подготовку и проведение реакции латексной агглютинации (PJIA) проводили по предложенной автором методике, применяя последовательные двукратные разведения проб сывороток крови на боратном буфере (рН 8,2) с добавлением сывороточного альбумина человека.

143. Результаты испытаний латексного диагностического набора представлены в таблице

144. Сыворотки Титр антител в РЛА Титр антител в ИФА1 ss mv (kpl) Отр. 1: 27132 SS IBV (ГОЕХХ) Огр. 1:350

145. SS IBV (BioChek) Отр. 1:2834 SS NDV (KPL) Отр. Отр.5 SS M.g. (KPL) Отр. Отр.6 SS Reo (KPL) Огр. Отр.7 SN (KPL) Отр. Отр.8 SN (ВГНКИ) Отр. Огр.

146. SS IBV (из коллекции ВГНКИ) титр в ИФА 1:1600 1:5788

147. SS IBV (из коллекции ВГНКИ) титр в ИФА 1:800 1:7495

148. SS IBV (из коллекции ВГНКИ) титр в ИФА 1:400 1:4106

149. SS IBV (из коллекции ВГНКИ) титр в ИФА 1:3200 1:8176

150. SS IBV (из коллекции ВГНКИ) титр в ИФА 1:1600 1:7423

151. Зам. директора ВГНКИ по научной работе, профессор1. Исп.: с.н.с. Руденко Т.В.

152. МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ1. ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ

153. ВСЕРОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ КОНТРОЛЯ, СТАНДАРТИЗАЦИИ И СЕРТИФИКАЦИИ ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ (ВГНКИ)123022, Москва, Д-22 Зам. декана медицинского факультета

154. Звенигородское шоссе, 5 Российского Университета Дружбы Народов1. Тел.:[phone] ДалинуМ.В.117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая,8на № б/нот 02.10.01 г.

155. Наборы были проверены по показателям специфичности и чувствительности.

156. Результаты испытаний антигенного варианта латексного диагностического набора представлены в таблице 1.1. Табл.1

157. Пробы Титр вируса в lg ЭИД50 Результат РНЛА

158. ЭЭЖ, содержащая вирус ИБК 7,0 Положительная реакция в разведениях 10"1 и 10"2

159. ЭЭЖ, содержащая вирус НБ 9,0 Отр.3. Нормальная ЭЭЖ Отр. Отр.

160. Латексный антиген не взаимодействовал с гетерологичным вирусом НБ и нормальной аллантоисной жидкостью, что свидетельствовало о его специфичности.

161. Результаты испытаний антительного варианта латексного диагностиче ского набора представлены в таблице 2.

162. Сыворотки Результат PHJIA с антительным вариантом латексного диагностикума ИБК1 SS EBV (KPL) 1:2002 SS EBV (ГОЕХХ) 1:8003 SS ШУ (BioChek) 1:8004 SS NDV (KPL) 1:16005 SS M.g. (KPL) 1:16006 SS Reo (KPL) 1:16007 SN (KPL) 1:64008 SN 1:6400

163. Латексный диагностикум, контрольный латекс и сыворотки, входящие в состав набора по своим физическим и биологическим свойствам должны соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице.

164. В каждую серию наборов должны входить компоненты одной серии. В каждую коробку вкладывают "наставление по применению", в котором изложены методы подготовки и применения набора.

165. Наименование показатели Характеристика и нормы Метод Испыта

166. Латексных диагностикумов Сывороток

167. Специфического Контрольного Специфичес Отрицатель- ' Для: кой ной: | разбавителя ни я

168. Внешний вид Прозрачная жидкость с осадком пол имерных частиц (латекса), образующих при встряхивании гомогенную взвесь Сухая г омогенная аморфная масса По п.3.2.

169. Цвет Бесцветная прозрачная жидкость с белым осадком, при встряхивании гомогенная взвесь белого цвета Светло-серый или кремовый По п.3.2.

170. Наличие механической примеси и плесени Не допускается Не допускается По п.3.2.

171. Наличие вакуума в ампулах — Фиолетово-синее свечение, сопровождающееся потрескиванием при проверке аппаратом типа Д. Арсонваль По п.3.3.

172. Растворимость — Содержимое ампул должно растворяться в течение 1-3 мин. В физрастворе и представлять опал есцирующую жидкость По п.3.4.

173. Влажность. % . — 1-4. По л.3.5.

174. Наименование показатели Характеристика и нормы Метод Испыта и и ялатексных диагностикумов Сывороток

175. Сп еци ф ическо го Контрольного Сп е пифической Отр и цате льной Для разбавителя

176. Актив,в:остъ Титр в РАЛ не ниже 1:800 о Титр в РАЛ не ниже 1:800. Титр РЛА не выше 1:200 По п.3,6.

177. Каждая серия наборов должна быть проверена контролером предприятия-изготовителя,

178. Серией наборов считают определенное их количество, включающее полный комплект компонентов, полученное в одних производственных условиях, имеющих один номер серии и номер контроля на предприятии-изготовителе и оформленные одним документом о качестве.

179. Для контроля качества наборов делают выборкуиз разных мест серии в количестве определяемом по формуле: п = 0,41/№ , где п число отбираемых упаковочных единиц (объем выборки), № - количество упаковочных единиц в серий.

180. В случае выпуска микросерий объем выборки должен составлять не менее 6-ти наборов, три из которых подлежат контролю, а остальные хранятся в архиве контролера на биопредприятии.

181. Определение внешнего вида, цвета, наличия механической примеси и плесени.

182. Ампулы или флаконы с латексным диагностикумом, контрольным латексом и сыворотками просматривают визуально в проходящем свете.33. Определение вакуума.

183. Вакуум в ампулах с сухими сыворотками определяют по ГОСТ 28083-89,

184. Фиолетово-синее свечение в ампулах и характерное потрескивание указывает на наличие вакуума.

185. Определение растворимости.

186. Растворимость сухих сывороток определяют путем добавления в ампулы по 1 мл 0,15 М боратного буфера рН 8,2.

187. Содержимое ампул должно раствориться при встряхивании в течение од= ной-трех минут и представлять собой гомогенную взвесь.

188. Определение влажности сухих сывороток.

189. Влажность сухих сывороток определяют по ГОСТ 24061-89. Влажность сухих сывороток должна быть в пределах 1- 4%.36. Определение активности.36.1. Определение активности латексного диагностикума.36.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы.

190. Для проведения испытания применяют: планшеты для иммунных реакции, латексный диагностикум, контрольный латекс, боратный буфер (ББ) с рН=8,2 , содержащий 0,2% ЧСА, положительная и отрицательная сыворотки крови кур.36.1.2. Проведение испытания.

191. Активность специфического антительного латексного диагностикума определяют в РАЛ с использованием специфической к ИБК-вирусу сыворотки крови кур.

192. Активность специфического антительного латексного диагностикума, то есть его титр с положительной сывороткой, должен быть не ниже 1:800, при отсутствии агглютинации в контроле. 3.6.3. Определение активности специфической сыворотки в РЛА.

193. Для проведения испытания применяют аппаратуры, материалы и реактивы перечисленные в пункте 3.6.1.37.2.2. Проведение испытания.

194. Контроль на спонтанную агглютинацию.38.1, Материалы и оборудование.

195. Для проведения испытания применяют аппаратуры, материалы и реактивы перечисленные в пункте 3.6.1.38.2, Контроль на спонтанную агглютинацию антительного латексного диагноетикума и контрольного латекса.38.2.1. Проведение испытания.

196. Латексы антительного диагноетикума и контрольного латекса должны осесть в виде точки или плотного кольца.38.3, Контроль отрицательных сывороток кур на отсутствие спонтанной агглютинации.38.3.1. Проведение испытания.

197. Отрицательные сыворотки крови кур не должны вызывать агглютинацию как антительного латексного диагноетикума, так и контрольного латекса в титре выше 1:200.

198. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

199. Предприятие-изготовитель гарантирует соответствие качества набора диагностикума требованиям настоящих технических условий при соблюдении условий транспортирования, хранения и применения.

200. Срок годности набора латексного диагностикума 6 мес. со дня изготовления латексного диагностикума.

201. ПЕРЕЧЕНЬ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ ДОКУМЕНТОВ, НА КОТОРЫЕ

202. ДАНЫ ССЫЛКИ В НАСТОЯЩИХ ТЕХНИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ.

203. ГОСТ 12301-81 Коробки из картона, бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия.

204. ГОСТ 13357-87 Ящики дощатые неразборные для кондитерских изделий.1. Технические условия.

205. ГОСТ 14192-77 Маркировка грузов/

206. ГОСТ 24061-89 Препараты биологические сухие. Метод определения влажности.

207. ГОСТ 28083-89 Препараты биологические. Метод определения вакуума в ампулах и флаконах

208. ГОСТ 64-2-485-85 Ампулы стеклянные для лекарственных средств.1. Пояснительная запискак проекту- ТЕХНИЧЕСКИХ УСЛОВИИ "Набор антительного латексного ноетикума для выявления антител к вирусу ИБК в реакции агглютинащ текса.1. ОСНОВАНИЕ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ

209. Проект настоящих технических условий разработан в соответствии с планом кафедры микробиологии РУДН на 1998-2002 гг. Задание: "Тест-системы на основе полимерных микросфер для лабораторной диагностики инфекционного бронхита кур".

210. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ РАЗРАБОТКИ ТУ

211. Основная цель и задачи разработки ТУ установление норм, требований и показателей качества набора, а также единых методов испытания этих показателей и требований к упаковке, маркировке, транспортированию и хранению наборов.

212. ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТА СТАНДАРТИЗАЦИИ

213. В настоящее время для диагностики инфекционного бронхита кур используется набор по ТУ 46-21-531-79, который обеспечивает проведение серологической диагностики в РНГА, РДП, РН, ИФА и индикацию возбудителя в РИФ.

214. Данные реакции имеют невысокую чувствительность для одних и трудоемки в исполнении для других.

215. С целью совершенствования методов диагностики и снижения трудоемкости были разработаны ТУ на опытную партию набора антительного латексного диагностикума.

216. Настоящие ТУ разработаны впервые. Набор диагностикума будет применяться в ветеринарных лабораториях страны для постановки диагноза на инфекционный бронхит кур.

217. В разделах "Правила приемки" и "Методы испытаний" описаны методы проверки перечисленных выше показателей качества диагностикумов,

218. В разделе "Транспортирование и хранение" регламентируются условия, обеспечивающие качество и сохранность набора диагностикумов,

219. НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКИЙ УРОВЕНЬ

220. Результаты применения набора диагностикума показали достаточную эффективность и малую трудоемкость постановки диагноза на инфекционном бронхите кур, что соответствует современному мировому уровню.

221. Своевременно поставленный диагноз помогает снижать экономический ущерб от инфекционного бронхита кур путем осуществления неспецифической и специфической профилактики.5. ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

222. Настоящие ТУ разработаны на основании результатов научно-исследовательской работы кафедры микробиологии РУДН.

223. ВЗАИМОСВЯЗЬ С ДРУГИМИ ДОКУМЕНТАМИ

224. Проект технических условий составлен в соответствии с ГОСТ 2114-70 и ГОСТ 1.3.-85.7. СВЕДЕНИЯ О СОГЛАСОВАНИИ

225. Проект настоящих технических условий подлежит согласованию с ВГНКИ ветпрепаратов.

226. УТВЕРЖДАЮ Руководитель Департамента ветеринарии МСХ РФ М.В. Кравчук2002 г.1. НАСТАВЛЕНИЕпо применению антительного латексного диагностикума для выявления антител к вирусу инфекционного бронхита кур в реакции агглютинации латекса

227. Диагностикум представляет собой 0,5%-ную взвесь неокрашенных частиц монодисперсного полистирольного латекса с адсорбированным на их поверхности специфическим антигеном вируса инфекционного бронхита кур (ИБК),

228. Диагностикум представляет собой суспензию белого цвета, при хранении которой образуется рыхлый осадок белого цвета, разбивающийся при встряхивании и слегка мутная надосадочная жидкость.1. НАЗНАЧЕНИЕ

229. Диагностикум предназначен для выявления специфических антител в сыворотках крови кур больных и вакцинированных против инфекционного бронхита, а также для контроля напряженности их иммунитета.

230. СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

231. Диагностикум основан на реакции агглютинации латекса (РАЛ), проводимой микрометодом в планшетах для иммунологических реакций с U-образным профилем лунок. Комплект рассчитан на проведение 100 анализов, включая контроли.1. Приготовление реагентов:

232. Содержимое флакона ЧСА (40 мг) добавляют к ББ рН=8,2, до конечной концентрации 2 мт/мл (разбавитель). Разбавитель хранят при температуре 4-5°С в течение месяца,

233. Содержимое ампулы с положительной сывороткой против вируса ИБК растворяют в 1 мл ББ (рН=8,2), а затем разводят в 100 разбавителем. Разведенную сыворотку используют однократно (при вскрытии комплекта) для контроля специфической активности диагностикума.

234. Содержимое ампулы с нормальной сывороткой кур растворяют в 1 мл ББ (рН=8,2). Разведенную сыворотку используют однократно (при вскрытии комплекта) для контроля специфичности диагностикума.

235. Проведение реакции агглютинации латекса

236. Материалом для исследования служат сыворотки крови кур. Исследуемую сыворотку разводят разбавителем 1:100. Проведение PAJI и учет результатов с сыворотками крови кур аналогичны таковым при титровании положительной сыворотки против ИБК.

237. Положительная РАЛ испытуемой сыворотки одновременно с диагностикумом и с контрольным латексом свидетельствует о неспецифической агглютинации латекса данной сывороткой. В этом случае реакция не подлежит учету.1. ФОРМА ВЫПУСКА

238. Диагностикум выпускают в комплекте. В комплект входят:1 .Диагностикум латексный антительный2.Контрольный латекс

239. Положительная сыворотка против вируса ИБК

240. Нормальная сыворотка кур 5.ЧСА6.ББ (рН=8,2)

241. Комплект вложен в картонную коробку, в которой содержится инструкция по применению и ампульный нож.-2 ампулы по 2 мл; -1 ампула по 2 мл; -1 ампула (1 мл); -1 ампула (1 мл); -2 флакона (40 мг); -5 флакона по 20 мл

242. СРОК ГОДНОСТИ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ и ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ

243. Препараты хранят в закрытых, темных складских помещениях или холодильниках при температуре (4-6)°С. Препараты в транспортной таре хранят в штабелях, а в групповой упаковке на стеллажах.

244. Транспортирование разрешено всеми видами транспорта при температуре от 2 до 20°С, Не допускается замораживание.1. Срок годности 6 месяцев.

245. Рекламации на специфические и физические свойства препарата направлять в адрес предприятия, изготовившего препарат, а также в ВГНКИ ветпрепа-ратов. по адресу 123022. Москва, Звенигородское шоссе, 5.1. УТВЕРЖДАЮ

246. Ректор Российского университета дружбы народов Д. П. Билибин / / ./2002 г.

247. ИНСТРУКЦИЯ ПО ИЗГОТОВЛЕНИЮ И КОНТРОЛЮ НАБОРА АНТИТЕЛЬНОГО ЛАТЕКСНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР1. Общие положения

248. Для создания антительного латексного диагностикума необходимы: полистирольная полимерная суспензия без функциональных групп на поверхностях ПМ, очищенный антиген вируса ИБК и химические реагенты.1.. Требования к антигенам ИБК

249. I. Требования к полимерным носителям

250. С целью обеспечения равномерного распределения антигена на поверхности ПМ процедуру сенсибилизации проводили при постоянном перемешивании.

251. Для получения контрольной суспензии латекса вместо раствора антигена использовали ББ (рН= 8,2).

252. Диагностикум и контрольную суспензию латекса отмывали несколько раз ББ (рН=8,2). По окончании инкубации частицы латекса переводили в ББ (рН=8,2) и добавляли в качестве консерванта 0,02% раствор азида натрия,

253. Диагностикум и контрольную суспензию латекса хранили в холодильнике при температуре +4°С.

254. VI. Оценка качества изготовленного антительного латексного диагностикума и контрольного латекса

255. Специфичность и чувствительность изготовленных препаратов определяется в планшетах для иммунологических реакций. В качестве поддерживающей среды использовали ББ (рН=8,2), содержащей 0,2% ЧСА.

256. Учет реакции начинают с контроля. Во всех лунках второго ряда и в 1, 11, и 12 лунках первого ряда должно быть полное отсутствие агглютинации За титр сыворотки принимали максимальное ее разведение, при котором наблюдалась агглютинация латекса на "2+".

257. Специфичность антительного латексного диагностикума определяется в РАЛ с гомологичными и гетерологичными сыворотками. Антительный латексный диагностикум должен выявлять в РАЛ только гомологичные антитела.

258. Чувствительность антительного латексного диагностикума (титр гомологичной сыворотки в РАЛ) должна быть не ниже 1:800.2002 г.1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

259. Латексный антигенный диагностикум и компоненты, входящие в состав набора, по своим физическим и биологическим свойствам должны соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице.

260. В каждую серию наборов должны входить компоненты одной серии.