Стрептококкоз нутрий: Диагностика, меры борьбы и специф. профилактика тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, доктор ветеринарных наук в форме науч. докл. Есепенок, Виктор Арсентьевич

• Есепенок, Виктор Арсентьевич
• доктор ветеринарных наук в форме науч. докл.
• 1998

Оглавление диссертации доктор ветеринарных наук в форме науч. докл. Есепенок, Виктор Арсентьевич

Диссертационная работа представлена в виде научного докладам является результатом 16-летних исследований по изучению клиникозпизо-отологических характеристик стрептококкоза нутрий, выяснению этиологического агента, усовершенствованию диагностики, и разработке общих и специфических мер борьбы и профилактики данной болезни. Работа выполненав соответствии с инициативной, хоздоговорной и государственной программами для решения научно-технической проблемы задания.

1.1 Актуальность проблемы. Стрептококков сельскохозяйственных животных, птиц, пушных зверей и грызунов остается недостаточно изученной инфекцией, энизоотологически не контролируемой, в результате животноводству наносится огромный ущерб. По данным Долганова В.А. (1988) в хозяйствах заболевает сгрептококкозом до 75% телят, с летальным исходом до 65%.

Патогенные стрептококки довольно широко распространены в природе и их относят к убиквитарныи микроорганизмам, способным как самостоятельно, так и в ассоциации с другими мнкрооргнизмами вызывать всевозможную массовую патологию (аборты, метриты , маститы, олфалн-ты, пневмонии, сепсис, энтериты, циститы, лимфадениты, артриты и др.). Широкому распространению стрептококкозов способствуют слабая изученность этиологической структуры болезни и не разработанность'надежных средств ее профилактики. В связи с этим остается актуальной ветеринарной проблемой изучение эпизоотологической значимости кон^-кретных серогрупп стрептококков, изыскание надежны* методов их идентификации, атакже средств специфической профилактики стрептококкозов.

Впервые обнаружил стрептококки в крови жешц ииы СогеаРеН? , (1869). Роль стрептококков в возникновении мыта лошадей устанр»ил Я1УоИа(1873). Ву1го1 (1874) обнаружил стрептококки в гнойном эксудате при рожистом воспалении, а через 5 лет Пасгеру (1879) удалось выделить к впервые культивировать стрептококки на искусственной питательной среде.

В бывшем СССР стрептококкоз телят впервые установил Дышелес-ский С.Н. (1932). Чепуров К.П. (1943) разработал и внедрил формол-яакцину, а Малявин А.Г. (1956) предложил ассоциированную вакцину против диплококкоза, сальмонелеза и пастерелеза. В последние годы большой вклад в изучение эпизоотологии и в разработку ¡средств специфической профилактики стрептококкоза внесли российские ученые: Ас-В.К. (1990); Панин А.Н. (1992); Сансыбаев А.Р., Юров К.П.(1993; п'сгроев М.П., Юров К.П. (1996).

Современная классификация стрептококков представлена в 9-ом издании "Руководства по систематике бактерий" (Bergey 1986 г. том 2) и наиболее полно охватывает всех представителей рода Streptococcus.

Согласно этой классификации, все стрептококки делятся на шесть категорий, на оснований - их обычных мест обитания: гноеродные, оральные, молочные, энтерококки, анаэробные и другие стрептококки, объединяющие 29 видов.

Огромна и социальная значимость стрептококков. По данным Винсент А. Фишетти (1991) ежегодно только в США наблюдается от 20 до 30 млн. случаев инфекций, вызываемых стрептококками группы А. В это время в Индии около 6 млн. детей школьного возраста страдает ревматическими заболеваниями сердца.

Наши исследования посвящены изучению стрептококкоза нутрий. Нутриеводство - молодая отрасль животноводства. Нутрия (Myocastor Coypus Molinä) - крупный полуводный грызун, обитающий в естественных, условиях в субтропических странах южной Америки. Впервые был завезен в СССР в начале 30-х гг. и тогда же были организованны первые совхозы с клеточным разведением нутрий. В настоящее время этих растительноядных животных разводят повсеместно, так как большкм спросом пользуются ценные шкурки и диетическое мясо. Серьезным препятствием на пути развития нутриеводства является стрептохоккоз -болезнь, наносящая хозяйствам огромный экономический ущерб за счет падежа молодняка и абортов у самок во второй половине беременности, запрещения продажи зверей, выделения дополнительных средств на проведение лечебно-профилактических мероприятий. Ветеринарная практика не обладала специфическими средствами профилактики стрептококкоза. Более того, стрептококкоз нутрий оказался слабо изученной формой , а в отечественной и зарубежной литературе имеются лишь несколько сообщений по отдельным вопросам эпизоотологии (Baldelli В., 1956; Cerrutig, 1956; Абовян A.B.,1981). Поэтому актуальность работы не вызывает сомнения.

1.2 Цель работы - изучить распространенность болезни и этиологическую • значимость различных серогрупп стрептококков, разработать методы диагностики, меры борьбы и специфическую профилактику стрептококкоза нутрий.

Основные задачи исследований:

- изучить эпизоотическую ситуацию по стрёптококкозу в нутриводческих фермах;

- 'изучить клинические и патологоморфологические изменения при стрептококкозе нутрий;

- изучить свойства патогенных стрептококков, выделенных от нутрий;

-1 разработать методы диагностики и борьбы при стрептококкозе нутрий; разработать средства специфической профилактики стрептококкоза;

- разработать систему мероприятий по борьбе со стрептококкозом нутрий.

Научная з новизна. Впервые изучены основные характеристики клинического и эпизоотологического проявления стрептококкоза у нутрий на территории' СНГ. Установлено эпизоотологическое значение стрептококка серогруппы С, при массовом поражении стрептококкозом всех возрастных групп нутрий. Экспериментальная инфекция у нутрий клинически и патологоморфологически не отличается от спонтанного стрептококкоза, протекающего остро и иодостро, в септической и легочной формах.

Дано научное обоснование систем^мер борьбы при стрептококкозе нутрий.

Научная новизна работы подтверждена следующими документами:

- авторское свидетельство № 1506617 "Способ профилактики и лечение при стрептококкозе нутрий " от 8 мая 1989 года.;

- справка о депонировании штамма микроорганизмов " Штам К-ДЕП" представитель стрептококков серогруппы С, предлагается для производства вакцины против стрептококкоза нутрий, преднаначенный для специфической профилактики стрептококковой инфекции у нутрий" ВГНКИ от 28 апреля 1993 г.;

- ПАТЕНТ № 2097422 на Изобретение "Штамм бактерий Str. Zooepidemicus, используемый для. изготовления диагностических и профилактических биопрепаратов против стрептококкоза нутрий" от 27 ноября 1997 г.;

- ПАТЕНТ № 2099081 на Изобретение "Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза нутрий " от 20 декабря 1997г.;

- ПАТЕНТ № 2099084 на Изобретение "Вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий" от 20 декабря 1997 г.;

- ПАТЕНТ № 2099083 на Изобретение "Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза и пастереллеза нутрий" от 20 декабря 1997 г.;

- ПАТЕНТ № 2099083 на Изобретение "Вакцина против стрептококкоза нутрий " от 20 декабря 1997г. v

Практическая значимость. Выделены штаммы стрептококков, циркулирующие в нутриводческих хозяйствах. • й изучены их морфологические, биохимические, антигенные и иммуногенные свойства, доказана патогенность для нутрий и лабораторных животных (белые мыши, морские свинки). Штаммы селекционированы и явились производственными для изготовления диагностических сывороток и вакцин:

- вакцины против стрептококкоза нутрий формодгидроокись-алюминивой, вакцины против стрептококкоза и - пастереллеза сапонииформолгидроокисьалюминивой.

Разработана и внедрена система мер борьбы со стрептококкозом нутрий, включающая:

- лабораторную диагностику стрептококкоза, обеспечивающую идентификацию возбудителя до серогруппы;

- меры общей и специфической профилактики болезни;

- мероприятия по ликвидации заболевания.

Перечисленные мероприятия опробированы в широкой производственной практике и положены в основу, соответствующих документов, утвержденных Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода Р Ф.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: отчетных конференциях сотрудников НИИ пушного звероводства и кролиководства им. В.А. Афанасьева (1982-1985 г. г.); отчетных конференций Московской ветеринарной академии, им.К.И. Скрябина (1986-1996 г.г.); совещании отделения ВАСХНИЛ по Нечерноземной зоне РСФСР "Интенсификация животноводства и кормопроизводства в Нечерноземной зоне РСФСР" (18-19 ноября 1986 г.) часть III; конференции, посвященной 70-летию МВА "Актуальные проблемы ветеринарной и зоотехнической науки животноводства" (24-26 ноября 1989 г.); Всесоюзный научно- технической конференции "Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной клеточной инженерии в ветеринарной медицине"(5-7 декабря 1990 г., Г. Нижний Новгород); Третьей Всесоюзной конференции по эпизоотологии. Новосибирск (24-26 сентября 1991 г.); Всесоюзной научной конференции "Использование физических и биологических факторов в ветеринарии и животноводстве", г. Витебск (11-12 сентября 1992 г.); Второй международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля <сельскохозяйственной продукции". Девиз: ' "Здоровое животное - здоровая пища - здоровый человек ".

Разработки по материалам диссертационной работы демонстрировались на ВДНХ СССР и удостоены Золотой медали '' (удостоверение №542 от 10; сентября 1991 г.).

Публикация результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 30 работ. Получены: одно авторское свидетельство и пять ' ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту: результаты изучения этнологщ^ркой структуры стрептококкоза нутрий, создание средств и системы мер борьбы при стрептококкозе нутрий в Российской Федерации.

Объем и структура научного доклада. '.,.

Научный доклад изложен,jja,f,3Q. страницах, содержит 5 таблиц и включает следующие разделы: общая характеристика работы, материалы и методы исследований, результаты исследований, выводы, практические предложения, список работ, опубликованных по теме. ,диссертационного доклада.

Собственнее исследования.

Материалы и методы.

Работа выполнена в 1981-1997 г.г. в отделе ветеринарии Всероссийского научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства им. Афанасьева и на кафедре эпизоотологии Московской Государственной .академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина. ,'„,,

Эпизоотологические исследования проведены в 14 нугриеводческих фермах Московской и Тамбовской' областей, Краснодарского и Ставропольского краев, и в бывших республиках СССР: Армянской, Казахской, Эстонской, Кабардино-Балкарской и Татарской АССР, в которых под наблюдением находилось около 400 тыс. натрий.

В каждом хозяйстве анализировали эпизоот>

Патологоанатомические вскрытия, исследования и взятия проб материала для гистологического исследования проводили по общепринятым методикам с учетом анатомических особенностей организма нутрий (Bergnoff P.C., 1989). Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. Срезы окрашивали гемотоксилинэозином. Исследовано 156 срезов из внутренних органов < (селезенка, почка, печень, лимфатические узлы).

Материалом для бактериологического исследования служили головной мозг, кровь из сердца, легкие, печень, почки, селезенка, абортированные, плоды. Всего было исследовано. 661 труп нутрий, из которых 101 - щенки и 560 - молодняк после отсадки.

Выделение и исследование стрептококков' вели с использованием мясо-пептонного бульона (МПБ), мясо-пётонного агара (МПА), полужидкого агара (ПЖА) ,кровяного агара (КА), среды Китта-Тароцци. Во все среды добавляли 0,5-1% глюкозы. Эту работу проводили согласно "Рекомендаций по индикации и идентификации стрептококков" (1976) и "Методических указаний по лабораторной диагностике Стрептококкоза животных" (1983).

Наличие инфекционного агента в исходном материале выявляли путем высева из материала на вышеуказанные питательные среды. Посевы инкубировали в термостате при 37-38°С в течение 24 час. Учитывали характер роста на всех использованных средах.

Морфологические свойства выделенных стрептококков изучали путем микроскопии мазков, приготовленных из различных питательных сред и окрашенных по Граму. Патогенность чистых культур стрептококков, выделенных от нутрий , проверяли на белых мышах ,вводя им внутрибрюшинно 0,2 мл 18-24 - часовых культур, на морских свинках (доза 0, 5 мл).

Для определения вирулентности использовали белых мышей, которых заражали 18-20 - часовыми культурами, внутрибрюшинно последовательно десятикратными разведениями исходной (10 м.т./мл) взвеси стрептококков в физиологическом растворе в объеме ОД мл. Среднюю смертельную дозу

1д 50) микробов определяли по методу Спирмена-Кербера ( Закс Л., 1976).

При дифференциации стрептококков, выделенных из патологического материала нутрий, использовали тесты: 11) выявление гемолитической активности на 5% кровяном агаре;

2) рост в глюкозасывороточном бульоне в присутствии 10 и 40 % желчи;

3) рост на среде с 6,5 % поваренной соли (ИаС1);

4) рост в натуральном молоке;

5) обесцвечивание молока с 0,2% раствором метиленовой сини;

6) рост в желатине;

7) рост при 10 и 45°С

8) рост в среде с рН 9,6;

9) определения терморезистентности;

10) выявление ферментации на цветных средах с лактозой, глюкозой, мальтозой, сахарозой, арабинозой, сорбитом, маннитом, дульцитом, инозитом, галактозой, рафинозой, ксилозой.

Дифференциацию стрептококков от стафилококков проводили по каталазной пробе и способности стафилококков расти на средах, содержащих 10% хлорида натрия (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, 1982; "Методическое указание по лабораторной диагностике стрептококкоза животных", 1983).

Серологическую дифференциацию выделенных культур стрептококков осуществляли с помощью реакции кодьцепреципиТации (РКП) по методу Lencefield (1928, 1933) в модификации института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалея АМН СССР и в реакции диффузной преципитации по методу Оухтерлони (1948) с помощью изготовленных нами преципитирующих иммунных сывороток.

С целью серологического группирования стрептококков, выделенных от нутрий, мы получили группоспецифические антистрептококковые преципитирующие сыворотки путем иммунизации кроликов. Использовали кроликов породы советская шиншилла, массой 2,5-3,5 кг. Антиген для иммунизации кроликов готовили из эталонных штаммов стрептококков групп А,В,С,Д и из пяти полевых, свежевыделанных штаммов. Сыворотки крови получали по общепринятой методике, расфасовывали в пенициллиновые флаконы по 0,5 мл и хранили до использования при температуре - 10 - 18°С.

Для получения высокоактивных и специфических сывороток в сравнительном аспекте, антиген для гипериммунизации кроликов готовили по методу, предложенному Москаликом P.C. (1974) и по методу, описанному Бородюком К.А. и Лямпертом П.М.(1986). Также в сравнительном аспекте испытали 4 схемы гипериммунизации, отличающихся количеством и качеством вводимого антигена, числом инъекций и ,интервалом между ними.

Активность и специфичность полученных гипериммунных сывороток была испытана в перекрестных реакциях преципитации с антигенами из эталонных штаммов разных групп стрептококков.

Групповой полисахаридный С-антиген для серологических реакций в сравнительном аспекте готовили тремя способами: кислотным, гидролизным по Ленсфилду (1928,1933) в модификации, применяемой в институте эпидемиологии и микробиологии им. И.Ф. Гамалей (Руководство по микробиологической , диагностике инфекционных болезней, 1973г.), термической экстракцией автоклавированием по Кунтеру в модификации Карташова и Гинсбурга (A.A. ,Гинсбург, 1979) и дезинтеграции микробных клеток путем замораживания и оттаивания (Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, 1973).

Для проведения ветеринарно-санитарных мероприятий при стрептококкозе нутрий проводили следующие исследования: определили чувствительность стрептококков к антибиотикам методом Дисков, изучали возможность использования аэрозольных препаратов хлор-скипидара и молочной кислоты при стрептококкозе нутрий и разработали режим дезинфекции воздушного бассейна в присутствии животных. Для приготовления смеси брали (из расчета на 1 м3) хлорной извести с 25% содержанием активного хлора - 2; 1,6; и 1,22 и соответственно 0,5; 0,4 мл скипидара. Экспозиций" - 20-30;смЙйут. Расход молочной кислоты в перерасчете на чистое иещестЬо - 20-30 мг/м? "•

Вакцины против сТрептококкоза и ■ ассоциированную против стрептЬкоккоза и пастфёлеза*' иутрйй ' готовили1 'Согласно техническим условиям, разработанными : нами и утвержденными ' Департаментов ветеринарии РФ. ' • ■' ! •••'•• * ! ' :

Сравнительную эффективность ветеринарйЬ-санитарных мероприятий и эпизоотологическую активность вакцин определяли обработкой данпых на персональном компьютерс марки ГВ'М-РС по специальной разработанной программе.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ. Выделение эпизоотических 'штаммов / стрептококков, их биологические свойства и диагностика стрептококкоза нутрий. ь': '

Начиная с 1981 мы проведи бактериологическое исследование патматериала от нутрий из 14 хозяйств различных регионов бывшего СССР. В мазках-отпеча'гках из внутренних органов (печень, почка, мозг, легкие, селезенка) микробные клетки обнаруживали кучками, состоящими из нескольких грамположи'тельных, округлых бактерий, а из крови сердца -стрептококки располагались одиночно, попарно, короткими цепочками.

В маЗНйИ из бульонной культуры бактериальные клетки чаще располагались длинными цепочками, их количество в одной цепочке было непостоянно и колебалось от трех до нескольких десятков, напоминая собой женское ожерелье. Стрептококки, "выросшие на плотных питательных среах и полужидком агаре, в мазках располагались парами, короткими цепочками или скоплениями, ¡ напоминающими Гроздь винограда. " - ^ •'•'•

Стрептококки, выделенные от нутрий, оказались нетребовательШми к питательным средам и хорошо росли на средах, обогащенных глюкозой.

В первые часы после инфицирования бульонных культур стрептококки растут в виде мелкйХ- снеговиднйх взвесей, через 18-24 ч. образуется придонный белый (ватный) осадок в прозрачном бульоне, который при тщательном встряхивании полностью разбивается. На МГГА растут в виде мелких возвышающихся (о 1мм), очень нежных серовато-прозрачных колоний с ровными краями. На агаре с кровью вокруг колоний образуется зона пЬлнош'просветления (р-гемолиз). При посеве на среде Гисса характерны следующие биохимические свойства: Глюкоза -Инсулин Мальтоза - Ксилоза Лактоза -Арабиноза Сахароза + Галактоза

- Манит - Инозит Сорбит - Молоко r 1 ИЧ Л * -vi Дульцит Красно-желтое Лакмусовое мойЬко

-Индол -H2S

- Раминоза - Желатина - положительная реакция - - отрицательная реакция

Выделенные стрептококки были чувствительны к пенициллину, стрептомицину, эретромицину, мономицину, неомицину, тетрациклину, ампицилину. Апотогенны для белых крыс и кроликов и верулентны для нутрий, морских свинок и белых мышей, DCL

Все испытуемые изоляты стрептококков хорошо окрашивались анилиновыми красками, были неподвижные и спор не образовывали.

Подавляющее большинство свежевыделенных культур стрептококков образовывали капсулу, которую обнаруживали при окраске по Гинсу.

Сравнительное интенсивное капсулообразование отмечали у стрептококов, выделенных из крови, сердца, легких и печени.

Результаты исследований представлены в таблице 1. Из выделенных 3099 изоляторов стрептококков в 98,9% случаев они отнесены к JB-гемолитическим стрептококкокам серогруппы С.

С целью получения гипериммунных актистрептококковых сывороток в качестве продуцентов были отобраны клинически здоровые массой 3-4 кг кролика советская шиншила. f

Антиген для иммунизации готовили из эталонных штаммов стрептококков групп А, В, С, Д по методу, предложенному Москаликом P.C. /1974/. Для 1-го цикла гипериммунизации суточную бульонную культуру стрептококка центрифугировали при 300 об/мин 20 мин и трижды промывали физиологическим раствором. Этим же растворбм разбавляли микробную массу до концентрации 2 млрд. м. т./мл и взвесь прогревали в водяной бане при 56° С в течений 1,5 часа. Для П.-го цикла гипериммунизации антиген готовили также, но без прогревания / живой антиген/.

Антигены из эталонных штаммов стрептококков групп А, Б, С, Д готовили по методу, описанному Бородиюком H.A. и Лямпертом И.М. /1986/,. при этом антиген для I и II циклов гипериммунизации готовили одинаково: 18-часовую культуру центрифугировали при 3000 об/мин в течение 30 мин и трижды отмывали физиологическим раствором, из микробной массы готовили взвесь в физрастворе, содержащую Ю10 м. т./мл и прогревали в водяной бане при 56-58°С в течении 45 мин, к осадку добавляли 0,25%-ым раствором пепсина и оставляли при 37°С в термостате на 4 часа, после чего трехкратно отмывали от пепсина физраствором и готовили 2-109 м. т./мин взвесь стрептококков в физрастворе.

В сравнительном аспекте испытали четыре схемы гепириммуни-зации /таблица 2/.

Были изучены оптимальные условия, влияющие на проявление и ход реакции. Установлено, что для получения более четких и специфических результатов в РДП оптимальными параметрами постановки реакции были: 0,85% содержания хлорного натрия, 1%-й агаровый гель, рН геля 7,0-7,5, комнатная температура, 4 мм-ые лунки, находящиеся друг от друга на расстоянии 4 мм. Для нормального течения РДП оптимальная величина рН преципитогена должна находиться в пределах 6,8-7,2.

С помощью разработанного метода РДП и с помощью реакции кольцепреципитации оценивали специфичность и чувствительность полученных сывороток и антигенов. Для' этого ставили перекрестные реакции с гомологичным и геторологичным антигенами и сыворотками.

Преципитирующие сыворотки групп В, Д были специфичны и реагировали с антигенами, приг .отовленными только из гомологичных групп стрептококков. Антистрептококковые сыворотки против эталонных штаммов стрептококков групп А и С положительно реагировали с гомологичными штаммами, но также вступали в перекрестную реакцию друг с другом, которую удалось устранить методом разведения сывороток уже при 1:4.

При изучении специфичности и активности полученных гипериммунных сывороток результаты РКП и РДП были идентичны. Активность гипериммунных сьгвороток в РКП и РДП полученные по схеме I и IV, с антигенами, приготовленными по методу Ленсфилд и по способу Кунтера, имели наиболее высокие титры антител в разведении 1:64. Сыворотки групп С и А оказались более активными, чем сыворотки групп В и Д.

Наши исследования показали, что титры преципитинов антистрептококковых сывороток группы С и А после II цикла иммунизации возросли до разведения 1:64, тогда как после Г цикла они составляют только 1:4 -1:8.

Сравнительный анализ полученных результатов показал, что группоспецифический полисахаридный антиген для РКП и РДП, приготовленный путем замораживания и оттаивания, по своей активности уступает антигену, приготовленному термической экстракцией, который сам по себе по этим же свойствам не уступает антигену, приготовленным кислотным гидролизом.

Таблица №

РЕЗУЛЬТАТЫ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПАТМАТЕРИАЛА ОТ НУТРИЙ

Хозяйство Кол-во исследованных трупов Возраст Выделенные микробы Положительный результат ■ % выделения

1 Северинский 22 щенки - -

159 взрослые стрептококки 138 86, кишечная палочка 21 13,

2 ОПХ Родники 2! щенки кишечная палочка 11 52, стрептококки 3 ■ 14, сальмонеллы 3 14,

210 взрослые сальмонеллы 48 22, кишечная палочка 32 - . 15, стрептококки 133 Ч 58, кишечная палочка, стрептококки . 7 3;,

3 с-з Луганский 5 взрослые кишечная палочка 5 100,

4 с-з Кощаковский ,'7 взрослые кишечная палочка 2 : .У 28, стрептококки 5 . г 71,

5 с-з Восточный 4 щенки сальмонеллы 2 5 ' 50,

10 взрослые кишечная палочка 1 10, стрептококки 2 20,

6 с-з Бокаревский 5 взрослые - -

7 с-з Авангард 2 взрослые - -

8 с-з Майский 23 46 щенки стрептококки . 10 43, кишечная палочка, стрептококки . 13 56, взрослые стрептококки . 46 100,

9 к-з Сыпрус 20 взрослые : стрептококки 20 100,

10 х-во Павловское 15 взрослые стрептококки 15 100,

11 Агрокомпяекс Кресты 31 щенки - стрептококки 11 35,

13 взрослые стрептококки 13 100,

12 х-во Акншшческое 35 взрослые стрептококки 35 100,

13 Агрофирма Родина 10 взрослые стрептококки 10 100,

14 х-во Ставропольское 23 взрослые стрептококки 23 100,

Исходя из полученных результатов, можно сделать заключение, что испытанные схемы гипериммунизации обеспечивают накопление антител в достаточно высоком титре, однако наибольшее Предпочтение следует отдать I и IV ;схемам. Гипериммунизация кроликов по этим схемам д

§т возможность достигать высокого уровня антител, они более рациональны а могут быть использованы Для: определения групповой принадлежности стрептококков разных серогрупп. Гипериммунные сыворотки проявляли максимальную активность в РКП и РДП с полисахаридным антигеном, приготовленным путем кислотного гидролиза по Ленсфильду д. и термической экстракцией актоклавированием по Кунтеру. Эти антигены по своей специфичности и активности были идентичны.

Таким образом, все изоляты отнесены к ^-гемолитическим стрептококками серогруппы С на основании культурно- морфологических и биохимических свойств. Антигенные исследования в реакциях кольцеприципитации, диффузной приципитации й латекс агглютинации в <■ 100% случаев эти данные подтвердились.

Эпизоотологические данные и меры борьбы при стрептококковI нутрий.

Изучение географических и климатических факторов внешней среды указывает на определенное их влияние на возникновение и течение болезни среди нутрий. На Кубани в период дождей (март, октябрь) звери, находясь в выгулах на полях с бетонным покрытием и в бетонных домиках с постоянной мокрой подстилкой, переохлаждаются и ; как .правело, заболевают. В центральной России заболевание регистрировали круглогодично, однако наибольший падеж приходится на октябрь - ноябрь и апрель - май из-за больших перепадов ;температуры воздуха в дневное и ночное время. ;

Установлены выраженные различия в смертности нутрий при стрептококкозе в зависимости от технологии разведения и г типа сооружений для их размещения (вольеры, загоны, 2-х рядные шеды, 4-х рядные 'шеды, одно - двухъярусные шеды ). Типичная клиническая картина стрептококкоза нутрий особенно четко и с наибольшей частотой проявляется в период максимального развития эпизоотии, стрептококкозом болеют нутрии всех возрастных групп, начиная с первых дней жизни, но наиболее часто и характерно поражаются щенки после ! отсадки (50-60 дней), инкубационный период при естественном заражении 1 5-7 дней, при экспериментальном -1-1,5 дня.

-•: й ■ Таблица Лй

Схемы гипериммунизации кроликов с целью получения антистрептококковых сывороток

Цикл Метод Место Неделя и доза антигена Иммунизации иммунизаци и приготовлени я введения мл млрд. м. т. . в антигена антигена 1 2 з 4 1 2 3 4 неделю

1 .Схема гипериммунизации

1. Убит нагреванием Краевая вена уха 0,5 1,0 2,0 3,0 1,0 2,0 4,0 6,0 4 дня подряд 3 дня перерыв

2. ЖИВОЙ — II „ 0,25 0,5 1,0 1,5 0,5 1,0 2,0 3,0 — "

2. Схема пшеу жммунизацик

1. Убит нагреванием Краевая вена уха 1,0 1,0 1,0 1,0 . 2,0 V 4,0 8,0 16,0 Один раз

2. ЖИВОЙ „ II 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 2,0 4,0 6,0 — п ~

3 . Схемг гипё] зиммун изацир ■ У" Г.

1. Обработка пепсином Краевая вена уха 0,25 0,5 0,75 1,0 0,5 1,0 - 1'5 . 2,0 4 дня подряд ; 3 дня перерыв

•ягьтели п П 0 п

4. Схема гипериммунизации

1. Обработка пепсином Подкожно и внутривенно 0,25, 0,5 0,75 1,0 0,5 1,0 1,5 2,0 ; 4 дня подряд 3 дня перерыв

2. п !? . 0,25 0,5 0,75 1,0 0,5 1,0 1,5 2,

Выявлено острое и подострое течение стрептококкоза, а также четыре клинические формы: септическая, легочная, кишечная и нервная. У новорожденных щенков стрептококкоз Протекает без характерных клинических признаков и преимущественно с летальным исходом. У взрослых нутрий болезнь., проявляется септическими явлениями со смертельным исходом, у беременных: самок - абортами (до 80%) и-рождением мертвых щенков ( 7-10%). h - i I

При патологоанатомическом, вскрЫтии, Нутрий, павших в результате естественного заболевания стрептококковом,, отмечали следующие изменения органов дыхания: серозный отек легких, геморрагическую пневмонию, скопление кровянистой жидкости в трудной полости (до 150 мл) - при остром течении;' катаральную пневмонию плевропневмонию, трахея заполнена пенистой кровянистой жидкостью, скопление кровянистой жидкости в грудной ролости ^до 100 мл)- при хроническом . течении. Всегда отмечали воспаление средостенных лимфоузлов. Сердечная мышца дряблой .консистенции, под эндо- и перикардо-точечные кровоизлияния. Печень застойно гипёремирована. Селезенка темно-красного цвета и увеличена 2-5 раз. У беременных самок часто находили гнойную пневмонию, миокардит, застойную геПеримию печени, нефрит, катаральный гастроэнтерит, метриты. Гистологически в легких отмечена очаговая серозно-катаральная бронхопневмония, иногда с геморрагическим акцентом,1 В средостенных лимфоузлах - серозный лимфаденит. В трахее - отек подслизистой оболочки, воспалительные инфильтраты, в некоторых случаях - слущивание мерцательного эпителия. В сердечной мышце - диапедезные кровоизлияния в соединительную ткань, гиперемия межмышечных капилляров, очаговая миокардиодистрофия. В почках - мутное набухание эпителия коркового слоя. В печени - застойная геперимия, круглоклеточные инфильтраты по триадам, зернистая дистрофия гепатоцитов. Лимфоцитоз селезенки.

Доказана возможность передачи возбудителя стрептококкоза от больных животных здоровым в ^условиях совместного содержания в близкоразмещенных клетках. Ис|очником возбудителя стрептококкоза являлись больные нутрии. Частые улучай гибели от стрептококкоза диких голубей среди местной популяции, имеющей доступ на нутрееводческую ферму, также свидетельствует о возможности подключения их в эпизоотический процесс в качестве!источника возбудителя стрептококкоза.

Бактериологическим исследованием смывов из носовых полостей, кожи анальной области и слизистой, оболочки влагалища здоровых животных нами также доказано среди нутрии неблагополучных хозяйств широкое стрептококконосительствр. j ''

В результате проведенных исследований установили, что аэрозоли, полученные при смешивании хлорной извести и скипидара, а также из молочной кислоты, обладают значительным дизонфицирующем действием по, отношению к воздушному бассейну помещений, где содержались инфицированные стрел гококкоками нутрии. Обеззараживание воздуха при расходе хлорной извести, 1,22 г.и скипидара 0,4 мл на 1м3 достигает 97%, а при расходе 20 , мг/м3Молочной кислоты - 83% при экспозиции в обоих случаях 30 мин. Во всех опытах при испытании указанных доз мы не отмечали паде^са нутрий и каких-либо клинических, изменений у животных в период обработки. При контрольном убое паталогоанотамическом вскрытии видимых изменений во внутренних органах также , це находили.

0дедующий: опыт был поставлен с целью выяснения совместного дер^вия антибиотикотерапии ,щ адрозрльной обработки нутрий в период заболеваний стрептококкозом. В опытной группе было 200 животных, а в контрольной - 50 аналогов по живой массе 45 - дневного возраста. Уход и содержание в обоих группах были одинаковыми. С пятого дня заболевания -стрептококкозом животных опытной группы в течение трех дней однократно внутримышечно вводили неовит в дозе 20000 ед/кг живой массы. Животных опытной и контрольной групп обрабатывали аэрозолью молочной кислоты из расчета 30 мг/м3. Дезинфекцию проводили ежедневно в течение семи дней. В конце опыта падеж нутрий в опытной фугше составил 17%, а в контрольной - 52%, т.е. падеж животных при проведении комплексных мероприятий сократился на 35%.

Получив положительные результаты в лабораторных условиях, мы решили провести производственные испытания. В неблагополучном по стр^птококкоку , помещении находилось 426 нутрий разного возраста. Наряду с антибиотикотерапией, в присутствии животных ежедневно пробил!/ в течение 5 дней аэрозолью обработку помещения хлор-скипидаром, в соотношении 1,6 г и 0,4 мл на 1 м3 при экспозиции 30 мин, а также влажную дезинфекцию навозных каналов и проходов 3%-ным раствором едкого натра. До обработки помещения стрептококк был выделен в 100% проб воздуха, а после проведения ветеринарно-санитарных мероприятий в 7-9%. Падеж нутрий прекратился на вторые сутки с начала проведения лечебно-профилактических мероприятий.

В целях оздоровления хозяйства от заболеваний нутрий стрептококкозом, работу нутрееводческой фермы переводили на санитарный,режр&1 .предприятия закрытого типа. Категорически запрещали ввозить , нутрий, корма, клетки, подстилку, транспортные средства из неблагополучных по стрептококкозу сельскохозяйственных предприятий. Два, раза в год в помещении для содержания нутрий предусматривали "санитарный разрыв" в пять дней, в это время освободившиеся от животных помещения подвергали механической очистке, мойке и дезинфекции.

С целью повы1дения .резистертности организмэ ^утрий к стрепто.коккозу и предел вращении их заражения организовали полноценное кормление, , при недостатке в дермах витаминов и минеральных дещёств рацион обогащали соответствующими добавками; во второй половине беременности нутрий их рацион должен содержать на 30 - 35% больше перевариваемого протеина, в 1,3-1,5 раза больше.фосфора и кальция, чем в рационе холостых-самок. ' ,,, ■ ! - ' 1ЛГ.:,

При переводе животных из одного помещения в другое (карантинирование или по условиям технологии) Помещение и зверей обрабатывали чрдвд№; из дезрсреств:, Д% -ный хлорамин или 2%- ный дезмол. Помещения с вновь размещенными животными ежедневно в течение пяти дней обрабатывали аэрозолями хлор-скипидара из расчета 1,22 г хлорной извести и 0,4 мл скипидара или молочной кислоты 20 мг на 1 м3. , , "

Заболевших нутрий изолировали, а при массовом заболевании неблагополучные помещения, превращали в изолятор, где и проводили лечебные мероприятия. Всем животным вводили антибиотики по 20-30 тыс. ед/кг живой массы в/м, к которым чувствителен возбудитель болезни, однократно в течение 3-5 дней подряд. Ежедневно в течение пяти дней проводили аэрозольную дезинфекцию хлор-скипйдаром из расчета 1,6 г хлорной извести и 0,4 мл скипидара на 1м3 помещения или молочной кислотой из расчета 30 мг при экспозиции 30 мин.

Съемку шкурок нутрий, павших от стрентококкоза проводили специально выделенные люди в обособленном помещений. После окончания работы трупы и; жйр после обезжиривания шкур сжигали. Шкурки ,снятые с павших зверей, разрешали вывозить из хозяйства после обеззараживания их высушиванием при температуре 37 °С в течение 72 ч. Убой животных на мясо после лечения, проводили не ранее, чем через 14 дней. Лиц, обслуживающих зверей в неблагополучных по стрсптококкозу хозяйствах^ обязательно инструктировали о правилах личной гигиены и технике безопасности. Проведенные мероприятия позволили оздоровить ряд хозяйств от стрентококкоза нутрий.

В целях определения экономической эффективности оздоровительных мероприятий проводили учет затрат, продуктивность зверей, выручку от реализации шкур и мяса, терапевтическую эффективность лечебных мероприятий и др.,Материалы обрабатывали на персональном компьютере марки 1ВМ-РС по специально разработанной программе. Полученные данные свидетельствуют о высокой экономической эффективности проведенных мероприятий, т.к. экономический эффект на каждый затраченный рубль составил 68,05 рубля (1986).

Полученные результаты вошли во "Временную инструкцию о мероприятиях по профилактике и ликвидации стрептококкоза нутрий",(утверждена Г.УВ Грсагропрома СССР 21.04.1988 г.). В ее основу положены ветеринарно-санитарные и лечебно-профилактические мероприятия с использованием антимикробных средств.

Разработка средств специфической профилактики.

На последнем этапе нашей работы была поставлена задача разработать инактивированную вакцину с тем, чтобы существующую систему профилактических и оздоровительных мероприятий дополнить вакцинацией . поголовья и добиться более эффективного эпизоотологичеекот контроля стрептококкрза нутрий.1 Вакцину готовили из ^-гемолитического стрептококка серогруппы С/6,0 млрд. м. т./мл/ штамма, выделенного от больных сфентококкозом нутрий и депонированного в институте ревматологи^ АМН СССР(1984), а также во ВГНКИ. 26 апреля 1993 г. штамму был присвоен регистрационный номер "КтДегг. ,х. , ;;;;; ;

С этой целью выращивали на мясо-пептонном бульоне штамм К-ДЕП: стрептококков, при. температуре 37,5вС. по истечении 18-22 ч. инкубацию прекращали, выросшие культуры , в каждом баллоне (2,5 л) проверяли на чистоту посевами на МПА.МПБ и МНБ под вазелиновым маслом микроскопией мазков, окрашенных по Граму; рН устанавливали электрометрическим методом и концентрацию микробных клеток - по оптическому стандарту мутности (ГИСК им. Тарасевича). Бакмассу хранили до получения результатов исследования при температуре ,4°С. В суспензии бактерий ; вносили 0,4 % коммерческого формалина. Инактивацию культур проводили в течение 48 часов при температуре 16-18°С, взбалтывая каждый баллон до 3-4 раз в течение суток. После инактивации отбирали пробы культур из каждого баллона для контроля полноте! инактивации. Культуры высевали в пробирки с МПА.МПБ,МППБ плод вазелиновым маслом. За посевами наблюдали в течение 10 дней, по истечении срока инактивации и получения положительных результатов контроля чистоты (полноты инактивации) в бактериальную массу вносили стерильный адъювант - 3%-ный раствор гидрооккися-алюминия - из расчета 10% к объему инактивированной культуры. Через трое суток после внесения адъюванта формировали серию вакцины.

Расфасовали вакцину по 200 мл в стерильные флаконы,' которые закрывали резиновыми пробками и закатывали алюминиевыми колпачкпми, обеспечивая герметичность флакона.

Для определения качества опытной серии формолгидроокисьалюминиевой вакцины делали выборку из разных мест серии в количестве Ю флаконов, из которых 5 использовали для испытания, а 5 флаконов хранили в холодильнике. Внешний вид, цвет, наличие посторонних примесей, хлопьев, плесени, неразбиваю¿/еГЪся осадка определяли после тщательного встряхивания флаконов, просматривая последние в проходящей "свете. Одновременно флаконы!! проверяли на герметичность укупорки :и^правилыюс1*г-^кет1ф6ва!йЖ::* При проверке на стерильность использовали пять флаконов е вакЦинбй. Посевы проводили из каждого флакона в две пробирки с МПА, МПБ, МППБ и со средой Сабуро. Питательные среды с посевами выдерживали в течение 10 дней и не отмечали роста микрофлоры.

Безвредность вакцины проверяли на морских свинках массой 300350 г и белых мышах массой 16-18 г. Три флакона с вакциной встряхййали1; и из каждого с соблюдением стерильности отбирали 20-30 мл препарата,1 переносили в стерильный флакон, общую пробу использовали для определения безвредности и иммуногенности. Безвредность проверяли, вводя пяти морским свинкам подкожно в область спины по 2 мл и десяти-белым мышам - подкожно в область бедра по 0,5 мл содержимого флакона после его встряхивания. Заболевания и гибели морских свинок и белых мышей в течение 10-дневного срока не наблюдали. 1 s» i -!

При определении иммуногенной активности общую пробу вакцинй во флаконе встряхивали и вводили 20 белым мышам массой 16-18 г. подкожно в дозе 0,2 мл. Через 14 дней после иммунизации 20 опытных й 20 контрольных белых мышей аналогичной массы заражали подкожно й область бедра подтитрованной суточной культурой вакцинного штамма в дозе 5LD5o- Срок наблюдения 10 дней. Вакцину считали иммуногенной, если она предохраняла от заболевания и гибели не менее 18 иммунизированных мышей в опытной группе при заболевании всех и гибели не менее 16 белых мышей в контрольной группе в течение 10 дней; ¡ '

О реактогенных, антигенных и иммуногенных свойствах вакцины судили по результатам клинико-гематологического исследования (наблюдение за животными с ежедневным измерением температуры тела -до вакцинации и в течение 20 дней после вакцинации и контрольного заражения, определения количества гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов и лейкоцитарной формулы по Кудрявцеву А.А.,(1969). Одновременно определяли фагоцитарную реакцию нейтрофилов крови (Бермон В.М., 1958; Zeiler.et al., 1967); количество и соотношение Т-лимфоцитов, В -лимфоцитов (Boysh ,1968; Jondel М., 1972; Bianco С., 1970); титры противострептококковых антител в РДП, а также плазмоцитарные реакции селезенки и лимфатических узлов ( Покровская М.П., 1965; Меркулов С: А., 1969).

Состояние иммунитета у привитых нутрий проверяли контрольным заражением в дозе 5LDS0 вирулентным стрептококком группы С штамма "К-ДЕП" на 21 -'ый, 30-ый дни и затем каждый месяц в течение года (по 4 гол. в каждый срок).

В опытах использовали 160 нутрий, 70 морских свинок ,190 белых мышей. Пробы крови для исследования, определения фагоцитарной активности, количества Т и В -лимфоцитов брали до вакцинации и затем на 7-й, 11-й, 21-й день,'.1,2,4 и'6мес. после Введения вакцины.

Безвредность''ГОД - фбрмолвакцинй на'Лабораторных животных (белые мыши' и' морские свинки) была доказана путем подкожного введения препарата до .4-5 кратного превышения иммуногенной дозы. Общее угнетение не развивалось, животные свободно перемещались в клетках и поедали корм. При внутримышечном введении вакцины нутриям на месте инъекции появлялась тесноватая припухлость, исчезающая через 3-5 дней.

Быдо; приготовлено около 40 микросерий вакцины против стрептококкоза' нутрий. При получении положительных результатов иммуногенной активности на белых мышах мы продолжили исследование на морских свинках.

После 2-Кратного с интервалом в 7 дней внутримышечного введения 40 морским свинкам вакцины в объеме 0,2 и 0,5 мл (1,2 и 3,0 млрд. м. т.) развилась умеренная анемия, но разница ее показателей между подопытными и контрольными животными оказалась недостоверной. Количество лейкоцитов с 8,3 ±. 0,3 тыс/мкл на 41-21-й дни увеличивалось до 10,6 ± 0,3 тыс/мкл ( Р< 0,05). Сравнительный лейкоцилоз у привитых сопровождался умеренным нейгрофильным сдвигом ядра, но лимфоцитарный профиль сохранялся в течение 2-х мес. срока наблюдения за исключением 14 дня после иммунизации!

У не привитых морских свинок до вакцинации Преципитиньг " в сыворотке крови отсутствовали. РДП оставалась отрицательной,и на 7-й день прививки. На 14-й у 21-го животного Появились антитела в разведении 1:2, а на 21-й день у всех 30 исследованных: |у

§,;5ййвотных - в разведении 1:8 , у 14-ти - 1:4, у 7-ми - 1:2. В послё^1|уйщйё('1сроки преципитины сохранялись на этом уровне, но спустя 2 меЬ. закономерно "отмечали снижение до разведений 1:2 и 1:4. в ■ ротяш ч;

Контрольное заражение морских свинок возбудителем стрептококкоза в дозе 5ЬО50 /1 мл культур стрептококков С штамма "К-ДЕГГ в разведецйи 10"6 проведено на 21-й , 40-й й 60-й дни (по 10 гол.)

-;:.:-.)СГ, ■„О'ЭСП'Г п гпосле первой -прививки. Заболела и пала от стрептококкоза только одна морская свинка ( второй срок исследования), а остальные 29 привитых не чаболели И вышли из опыта здоровыми. Все 10 не привитых животных заболевали на 2-3 дни после заражения (. общее угнетение, взъерошенность, анорексия) и погибали спустя 2-5 дней после заболевания (геморрагический диатез, перитонит, увеличение селезенки в 2-3 раза). При бактериологическом исследовании во всех случаях получали чистую гемокультуру исходного стрептококка.

Основной опыт проведен на 120 нутриях, 85-м из них двукратно внутримышечно ввели по 0,5 и 1,0 мл (6,0 и 9,0 млрд. м.'т.) ипактивированной ГОД- вакцины против стрептококкоза нутрий, а остальные 35 инактцых животных служили контролем.

Клиническим наблюдением отклонений от физиологической нормы у привитых нутрий не выявлено. Количество гемоглобина и эритроцитов во все сроки исследования у опытных животных существенно не отличалось от показателей контрольных животных. Достоверный лейкоцитоз; проявился на 7-ой день после прививки(11,8 ± 0,4 тыс/мкп; контроль - 7,7 ± 0,2 ; Р< 0,05). Этот показатель достоверно повысился также после второй прививки и спустя 21 День наступила тенденция его снижения до исходной величины.

Резкий лимфоцитарный профиль крови у не привитых нутрий (66,2 ± 4,01%) оставался таковым же и на 7-й день прививки, на 14-й день кровь приобрела нейтральный профиль ( 52,0 ± 1,7%), сохраняющийся и в последующие сроки. В, поствакцинальный период изменение лейкоцитарной формулы в основном происходило за счёт увеличения количества сегментоядериых нейтрофилов (40,1 ± 3,4%) и моноцитов (8,2 ± 1,1%; контроль - 3,4± 0,71 %).

Фагоцитарная активность (ФА) и интенсивность (ФИ) нейтрофилов достоверно повысились после первой прививки, но завершенность фагоцитоза снизилась до 0,22± 0,028 (контроль - 0,12 ± 0,53; Р 0,05). После второй прививки все три показателя, характеризующие фагоцитарную реакцию, резко возросли. В отдаленные сроки после вакцинации фагоцитарная реакция нейтрофилов проявлялась на достоверно высоком уровне относительно контрольных животных. г

У вакцинированных нутрий на 7-й и 14-й дни количество Т-лимфоцитов уменьшилось до 52,4 ± 0,82 %, а на 21-й день повысилась до 53,9 ±1,27%, не достигнув исходной величины (59,0 ±,.1,61%). Количество В-лимфоцитов на 7-й, 14-й и 21-й дни прививки было достоверно выше исходного уровня (28,1± 1,11%, 25,6 ± 0,77%, 29,1 ± 1,03%, контроль -20,3 ± 1,05%). Результаты представлены в таблице 3,4.

В селезенке, подчелюстных и бронхиальных лимфоузлах на 7-й день прививки зарегистрировали пролиферацию слабодифференцированных лимфойдноретикулярных клеток, макрофагов и клеток лимфойдного и плазмоцитарных рядов. Эти процессы нарастали до 14-го дня в сторону пролиферации и дифференцировки плазматических клеток зрелых форм. На 21-й день прививки пролифирации незрелых и слабодифференцированных клеток по типу лимфоретикулярной гипоплазии ослабла, но дифференцировка клеток плазмоцитарного ряда и зрелые плазмоциты в этой группе стали преобладающими. *

Как и у морских свинок у привитых нутрий сывороточные преципитины накапливались по той же закономерности, но в более высоких титрах, у большинства нутрий на 7-14 дни антитела были невысокими или совсем не выявились, но к 21-му дню уже составили 1:8 и 1:16, а спустя 2 и 3 месяца - 1:32. Только на4-й месяц серологический ответ стал угасать, но уровни прецнпитинов не падали ниже 1:8 -1:4 в течение 12 месяцев.

При контрольном заражении через 21 и 30 дней после прививки и затем ежемесячно в течение 12 месяцев животных заражали подтитро-ванной суточной бульонной культурой вакцинного стрептококка в дозе 5 ЬБ . Вакцинированные нутрии (по 4 головы в каждый срок) на заражение клинически не реагировали и из биологической пробы вышли здоровыми. Не привитые нутрии заболевали на 2-3 день после заражения (общее угнетение, взъерошенность, явление септицемии). При патологоанотомиче-скоы вскрытии находили геморрагический диатез, крупозную пневмонию, перитонит и спленомегалию. Бактериологическим исследованием крови сердца, селезенки и печени выделяли исходную культуру стрептококка.

Результаты проведенной работы свидетельствуют о том, что опытные серии инактивнрованной ГОА-формолвакцины против стрептококкоза нутрий безвредны для белых мышей, морских свинок н нутрий и обладают одновременно антигенносью и иммуногенностью. Незначительное снижение уровня гемоглобина и количества эритроцитов, нейтрофнльный лейкоцитоз в поствакцинальный период характеризуют эту вакцину как слабореактогенный биопрепарат.

Организм нутрий, судя по высокому лимфоцитарному профилю крови и превалированию среди нейтрофилов палочкоядерных форм, обладает выраженными анаболитическими процессами, которые были лишь несколько ¡приторможены введенной вакциной. Однако катаболитические процессы в индуктивной фазе иммуногенеза проявились не ярко, о чем можно было судить по умеренному сдвигу нейтрофильного ядра, некоторому снижению завершенности фагоцитоза.

О сравнительно ранней иммунологической перестройке организма, развивающейся на фоне не снижающихся процессов анаболизма, а, следовательно, и большой способности захватывать и переваривать стрептококковые антигены . также свидетельствуют выраженный лейкоцитоз и фагоцитарная реакция нейтрофилов крови. Длительный лейкоцитоз и активность опсоно-фагоцитарной реакции в течение б месяцев исследования подтверждает иммунологическую валентность специфического фагоцитарного иммунитета при стрептококкозах животных.

В расшифровке особенностей формирования противострептококково-го имм^нитетавесьма ценны результаты цитоморфошического, иммуно-морфологического и серологического исследований.

ИЗМЕНЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА

Таблица №

Средние значения параметров иммунитета Содержание лимфоцитов (тыс/мм3) % лимфоцитов в лейкоформуле Т- лимфоциты (%) В -лимфоциты (%)

Дни исследований опыт контроль опыт . контроль п = 9 ОПЫТ п = 6 контроль достоверность различий между группами :П = 9, ОПЫТ п = 6 . контроль достоверность различий между группами

До вакцинации (1-я прививка) 7,8 ±0,61 7,01 ±0,41 66,2±4,01 60,2±5,04 59;0±1.61 5б,5±2,32 Р = 0 1 = 0,89 20,8±0,92 (17-25) ■. 21,7±1;,62 - (17-27) . Р = 0 1 = 0,

На 7-ой день'-(2-я прививка) И,8±0,4 7,70±2,1 69,0±3,01 62,4±5,41 • 53,9±1,27 (49-60) 54,3±1,47 (52-60) Р = 0 г = 0.21 28,9± 1,11 (23-33) 20,3+1,05 (17-24) ■Р < 0,001 :. 1=5,

На 14-й день !2,6±0,7 8,20±2,0 48,0±1,71 59,4±3,61 52,4±0,82 (50-56) 55,5±1,84 (50-61) Р>0,1 1 = 1,54 25,6+0,77. (22-29) 21,5+0,77 (22-29) Р<0,01 1 = 3,

На 21-й день 1'},0±0,8 8,40±2,2 48,3±2,2 61,4±3,91 57,1±1380-(47-65) " 57,2±1,62 (52-61) Р = 0 1=0,04 29,1±1,03 (24-34) 22,5±0,99 (19-26) Р < 0,001 1 = 4,

ТАБЛИЦА №

РЕЗУЛЬТАТЫ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ НУТРИЙ, ДВУКРАТНО ПРИВИТЫХ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ГОА - ВАКЦИНОЙ ПРОТИВ СТРЕПОКОККОЗА

Дни исследований Группы Кол-во Кол-во Кол-во Лейкоформула животных гемоглобина г% эритроцитов лёйкоцйтов тыс/мл Э П С Л М

До вакцинации (1-ая прививка) О 12,54±0,21 3,87±0,12 7,8±0,6 0,6±0,2 2,8±1,4 27,0+2,86 66,2±4,01 3,4±0,

К 12,84±0,62 3,77±0,14 7,0±0,6 - 0,4±0,2 3,0±1,1 32,2±2,71 60,2+5,04 4,2±0, на 7-й день (2-ая прививка) О 12,70±0,26 3,80±0,08 11,8±0,4 - 0,5±0,1 2,5±0,9 19,8+2,01 69,0±3,01 8,2±1, к 12,40±0,32 3,71±0,13 7,7±2,1 - 0,4±0,2 2,8±1,3 29,4±2,69 62,4±5,41 5,0±1, на 14-й день о 12,76±0,31 3,69±0,07 12,6±0,7 0,20±0,1 1,25±0,2 3,5±0,8 36,6+1,80 48,0±1,71 10,7+0, к 12,74±0,48 3,60±0,12 8,2±2,0 - 0,6±0,3 2,5±1,2 31,2+1,96 59,4+3,61 6,2+1,

• на 21-й день * о 12,68±0,41 3,80±0,10 11,0±0,8 0,25±0,1 0,8±0.3 4,61±1,2 37,1 ±2,8 46,3±2,2 9,0±1, к 12,60±0,61 3,40±0,15 8,4±2,1 0,25±0,1 0,6±0,4 2,8±1,б 30,0+3,81 :61,4±3,91 5,0±1, на 30-й день о 11,92±0,31 3,6$±0,19 10,8±0,9 0,25±0,1 / 0,9±0,4 4,5±1,0 40,1 ±3,2 46,3±2,2 8,0+ к 12,00±0,54 3,5010,16 8,8±1,9 0,25±0,1 0,8+0,5 3,2±1,4 34,0±4,3 "55,5+3,21 6,7±1, на 60-й день о 11,52±0,29 3;54±0,16 9,0±1,1 0,50±0,6 1,2±0,6- 3,5±1,4 :42,1±3,1 44,3±2,8 8,4±1, к 11,84±0,49 3,61 ±0,27 8,0±1,4 0,40±0,2 1,4±0,8 3,0±1,2 33,2±5,1 54,6+3,61 7,9+1, на 90-й день о 11,00±0,27 3,41 ±0,18 9,2±1,2 0,20±0,1 2,0±0,7 3,1±1,3 40,1 ±3,4 46,6±3,1 8,0±1, к 11,52±0,45 3,50±0,22 8,1±1,6 0,90±0,2 1,6±0,9 2,8±1,6 35,0±4,8 53,0±3,9 7,2±1, на 120-й день о П,20±0,29 3,40±0,17 8,8±1,4 - 3,0±0,7 2,5±1,4 39,1±4,6 48,0+4,1 7,4+1, к 11,40±0,40 3,44±0,32 7,8±1,4 0,20±0,2 2,8±0,1 2,б±1,4 34,8+5,4 52,6±5,0 7,2+1, на 150-й день о 10,00±0,28 3,20±0,21 8,0±0,1 0,40±0,1 2,8±0,6 J 2,0±0,1 34,2±5,1 54,6+4,4 6,0+1, к 11,30±0,38 3,36±0,31 8,4±1,6 0,40±0,2 2,0±0,9 2,8±1,4 35,8±6,2 51,8±4,9 7,2+1, на 180-й день о 10,90±0,27 3,40±0,28 7,8±П0 0,20±0,1 3,8±0,8 2,2±0,9 33,4+6,1 53,8±4,9 6,6±0, к 11,00±0,31 3,42±0,39 8,8±1,4 0,40±0,2 2,4±0,1 : 2,4±1.3 35,0+7,2 52,8±5,6 7,0+1,

Примечание - "О" - опытная группа

- "К"- контрольная группа

Таблица №

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВАКЦИН ДЛЯ ПРОФИЛАКТЖИ СГРЕПТОКОККОЗА НУТРИЙ

Иммунизация известной Иммунизация вакциной Иммунизация вакциной вакциной серии ЛЬ 1 серии №

Взято в Осталось Сохран- Взято в опыт Осталось Сохран- Взято в опыт Осталось Сохранность опыт голов ность . . голов ность голов к-во на конец % № к-во на конец % № к-во на конец % го. ж-ных опыта гр. ж-ных опыта ТТ» Г* ж-ных опыта

1 101 49 48,5 5 205 175 .85,4 9 903 889 98,

2 100 30 30,0 6 30 9 30,0 10 30 10 33,

3 89 43 48,3 7 163 140 85,7 .11 511 491 96,

4 40 15 37,3 8 35 15 45,

Группа № 1, 5, 9 - опытные животные после отсадки Группа № 2, 6,10 - контрольные животные после отсадки Группа № 3, 7,11 - опытные беременные самки Группа № 4,8,12 - контрольные беременные самки

Развитие в селезенке, подчелюстные,-и бронхиальных лимфоузлах в ранней пяствакйилаль.ный'лерл,0:Ц, процессов пролдферации.и диффе-р е н ни р о в к и; кл ет о к по тину- дашу н с?, 4И{ р ф о л о г и ч е сад й; р е а к ц ни.с последующей ¡далазматизадкей;т^адай^а; ррет незрелых., плазм ацитозов, а в бодее.поздней (21-й дадь) г эа;.-едя я зрелых плазмадитозов - свидетельствует ,о, переходе индуктивной фазы иммуногенеза в продуктивную. Такой дито морфологи чес кий продесс, подтверждает следующие ноложения;.;Инактивированная ГОА-формолвакцина после 2-х кратной прививки вызывает полную перестройку иммуной системы организма нутрий. Однако сероллгический ответ, ре)истрнруемый нами в РДП, все же развивался медленно, сравнительно низком уровне, хотя и длительно сохранялся. Отражение такой раобениости объясняется поствкцннальным и количественной изм.ененищи Х- и В-лимфоцитами. В динамике вакцинации кол-во Т- димфоцитов октава- , лось/почти неизменным, тогда как кол-во В-лимфоцитов достоверно повышалось, но их соотношение по-прежирму оставалось на уровне 2:1- , ~ [ , ^ ' ' '

Результаты контр одного заражения привитых:, нутрий позволяют считать, что наблюдаемая нами иммунобиологическая перестройка имед^ специфический характер и приводила к формированию активного иммунитета через 21 день после прививки продолжительностью до 12 мес. . п ,,,.

После получения положительных результатов но вакцинации в лабороторных условиях морских свинок и нутрий против стр&покок-кода был проведен опыт в производственных условиях. Мы отобрали 2 серии экспериментальных вакцин, и провакцинировали в неблагополучном по стревт'олоккозу хозяйстве нутрий п(>.сде отсадки 1108 голов и 674 беременны? самок. Контрольным 260 животным вводили стерильный МПБ, 190 животным вводили вакцину против сальмоне-леза, пастереллезаи диплококковой септицемии производства Омской биофабрики. Результаты представлены в таблице №5. Большой процент эпцзоотологической эффективности получен при применении экспериментальной серии № 2 вакцины против стрептококкоза нутрий (98,4 и 96,1). Ее изготовление и применение составили основу «Времендой инструкции по изготовлению и временого наставления по применению». Вакцину начали применять в неблагоцолучных и угрожаемых хозяйствах по стрептококкозу нутрий различных регионов. СНГ. Технико-экономический эффект на 1 руб. Затрат по вакцине составил 28,5 рубля.(1997 г,). На основании полученных результатов разработана система мер борьбы и профилактики при стрептококкозе нутрий! включающая диагностику, лечебные мероприятия,влажную и аэрозольную дезинфекции помещений в присутствии животных и специфическую профилактику, которая позволила эпизоотологически контролировать эту болезнь на территории СНГ.

ВЫВОДЫ.

1: Комплексное исследование культурально-морфологи.ческих, биохимических и антигенных свойств 3099 культур стрептококков, изолированных от нутрий 14 хозяйств различных регионов страны, показало, что стрептококкоз нутрий вызывают стрептококки серогруппы С. Из числа выделенных изолятов 98,9% отнесены к названной группе.

2. Изоляты стрептококков от больных и павш их нутрий патогенны для белых мышей, морских свинок и голубей и непатогенны для белых крыс и кроликов. Стрептококкоз нутрий экспериментально воспроиз

•"■ водится при подкожном, внутримышечном, внутрнбрюшинном, назальном и оральном заражении, а также при совместном размещении в клеткай клинически больных и здоровых животных.

3. На основании комплексного эпизоотологического исследования, проведенного в 14 нутриеводческих фермах с массовым падежом зверей, и результатов лабораторного исследования впервые в СНГ (СССР) установлен и описан стрептококкоз нутрий.

4. Источником возбудителя болезни являются больные и переболевшие животные данного вида, а также дикие птицы (голуби, воробьи ) местной популяции при свободном доступе на нутриеводческую ферму.

5. Стрептококкоз нутрий характеризуется энзоотнчностью. Болезнь проявляется круглогодично с сезонными подъемами заболеваемости в осенне-зимний и весенне-летний периоды года. Нарушение технология выращивания зверей способствует массоввому возникновению, распространению и клиническому проявлению стрептококкоза.

6. Заболевают животные всех возрастных групп. Стрептококкоз у нутрий протекает остро и подостро в септической, легочной и киш ечной клинических формах. Заболеваемость молодняка до 90%, летальность до 95%, у взрослых соответственно 60-75%. При остром течении болезни беременные самки во второй половине беременности абортируют до 80%.

7. Патологонорфологические изменения при стрептококкозе нутрий характеризуются многообразием и зависят от течения и клинической формы болезни. Для острого течения наиболее типичны картины геморрагического диатеза, серозно-катарапьная бронхопневмония и ка-тарально-геморрагическая пневмония, спленомегалня и нефрит, а для подострого - фиброзно-гнойная пневмония, плевропневмония, артрит и энцефалит.

8. Диагноз на стрептококкоз нутрий ставится на основании эпизоотоло-гических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений, лабораторных исследований: выделение патогенной культуры стрептококков и их серотипизаци. до группы.

9. Разработана и с положительным результатом опробирована система оздоровительных и противострептококкозных мероприятий, основанпая на комплексном применении общенрофидактических (ветеринар-но-санитарных, лечебных, лсчебио-нрофилактических, антимикроб-пых средств) и специфических (инактивированные моно и ассоциированная ГОА - формолвакцины) средств защиты, которая обеспечивает сокращение до минимума падеж: нутрий от стрептококкоза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ. "s'4í!

Выделен от нутрий и селекционирован штамм стрептококка серо-группа С, которыйдепонированн в институте ревматологии АМН СССР (1984), атакже в В.ГНКИ 26 апреля 1996 г. Штамму присвоен регистрационный номер «К-ДЕП».

На основании результатов проведенных исследований разработаны , утверждены Департаментом ветеринарии и внедрены в ветеринарную практику: '

1. Временная инструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидации стрептококкоза нутрий (утв. 21 апреля 1998 г.).

2. Рекомендации по получению группоспецифической сыворотки для диагностики стрептококкоза нутрий (утв. 22 мая 1990 г.).

3. Вакцина против стрептококкоза нутрий формолгидроокисьалюми-невая:

- временное наставление по применению (утв. 8 января 1991г.)

- технические условия (утв. 8 января 1991 т.);

- временные инструкции по изготовлению и контролю (утв. 2 ноября 1990 г.)

4. Вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий фор-молгидроокисьалюминевая:

- временное наставление по применению (утв. 15 февраля 1990 г.)

- технические условия (утв. 15 февраля 1993 г.). - у

5. Вакцина против стрептококкоза нутрий формолгидроокирьа-люминевая: ' • , '

- наставления по применению (утв. 03 декабря 1993 г.)

- технические условия (утв. 03 декабря 1993 г.)

6. Вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий фор-молгидроокисьалюминевая:

- наставления по применению (утв. 03 декабря 1993 г.)

- технические условия (утв. 03 декабря 1993 г.).

СПИСОК НАУЧНЫХ ТРУДОВ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Есепенок В.А., Сырникойа Н.П:: ; ;"А'эрЬз0лънаЯ дезинфекция помещений ' при кокковой инфекций нутрий (научные труды НИИ113К. - М., - 1982 - Т. 27.- е.146-149) '

2. Есепенок l|.А., Сырникова Н.П. Разработать меры борьбы с кокковой инфекцией нутрий, (заключительный отчет 1983 г. - № госрегистрации 81091099.-с. 1-22).

3. Способ профилактики : стрептококкоза нутрий (Кладовщиков В.Ф„ Букина Н.С., Сырникова Н.П., Есепенок В.А. авторское свидетельство 1506617.- 1989 г.).

4. Есепенок B.Ä., Инсуасти Перидес К.А. Реактогенные и антигенныеойства вакцины противрептококкоза нутрий (реферативный журнал. - Инфекционные болезни животных. - 2,1989 27.)

5. Есепенок В.А., Канопаткин A.A. ИнактМвированная вакцина * против стрептококкоза (актуальные проблемы ветеринарной и зоотехнической науки животноводства. Материалы конференции, посвященные 70-летию МВА.-24-26 ноября 1989 г. С. 112-113).

6. Конопаткин A.A.,Есепенок В.А, Вашакидзе М.Р. серологическая идентификация возбудителей стрептококкоза нутрий. - М., 1989. -6с.(Мос.вет.акад. им. К.И.Скрябина - деп. во ВНИИТЭИ аргопром.- Ля 207 ВС- 8-9 опубл. в серии 30 "Инфекционные болезни животных". - 1989„-№ 7 - С.5.) <

7. Есепенок В.А. ФормОлгидрооКисьалюминивая вакцина против стрептококкоза нутрий (информационный журнал "Новости звероводства" - 1990. -№ 3. - С.З.)

8. Есепенок В.А.,Инсуаси Передес К.А. ЛимфОйдные формы клетки при иммунизации закцинсй против стрептококкоза • (информационный журнал "Новости звероводства".-1990, №З.С.4-9)

9. Бсепенйк В.А. Результаты бактериологического исследования пат-" материала нутрий. (Звероводство и кролиководство.- 1990. -№ 4 с-33) ■ ' ;1 '

10r,|ipg<)ijaTKHH AiA., Есепенок В.А., Горбатова Х.С. Разработка и внедрение вакцины против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (заключительный отчет 1990 г.- № госрегистрации 01860023564,-с.1-33). "'■ /гг

11. Конопаткин A.A.,Есепенок В.А., Клепинина Е.А. Стрептококкоз нутрий (звероводство и кролиководство ,-1990.-№1.-с.25)

12. Илиеш В.Д., Есепенок В.А., Клепинина Е.А. Патоморфологические изменения у нутрий при экспериментальном стрептококкозе (тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции "Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в ветеринарной медицине "- Н. Новгород 5-7 декабря 1990161-' 162). '''■" ' ' •>■ ■ о;»« ,f£

13. Есепенок В.А., Илиеш В.Д., Инсуасти Передес К.А. Изучение Ти В - лимфоцитов вакцинированных нутрий (Там же.- 194-195)

14. Конопаткин А.А.,Есепенок В.А., Инсуасти Передес К.А. Фагоцитарная реакция нейтрофилов крови нутрий;, после вакцинации (Там же.-c.l 85-186).

15. Панин А.Н., Есепенок В.А., Конопаткин A.A. Специфические меры борьбы и профилактики* Ст^ёптококкоза нутрийс'^тёзисы докладов. 3 Всесоюзной конференции по эпизоотологии.-Новосибирск;- 2425 сентября 1991V!)- 385 - 386)

16. Эпизоотические особенности выращивания нутрий (Есепенок В.А., Ннецепляева Л.И., Горбатова Х.С., Кле^инина Е.А.)-(опыт подготовки кадров для4 срд&жого хозяйства -зарубежных стран. Сборник, научных трудов (межведомственной}. <• Москва,- 1992-с.69-72) ' !ПС;1;

17. Есепенок В.А., Илиеш В.Д. Патоморфологичйские изменения при спонтанном стрептококкозе нутрий (использование физических и биологических факторов в ветеринарии и животноводстве. Материалы Всесоюзной" научной конференции Витебск 11-12 сентября.,1991 г. С. 46) *

18. Сравнительная оценка '1' реакции латексоглютинацци прирогрупповрй идентификациирептококков1 (Есепенок В.А., Щабейкин А.А, Горбатова Х.С., Мешев Э.Мл Сборник научных трудов "Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных" М.,1993108-111) • •

19. пенок; В.А'., Т£рнопаткин A.A. Формирование иммунитета у нутрий, привитых противрептококкоза нутрий 112-117 (Там же 112-116)

20. Есепенок В.А., Конопаткин А.А, Горбатова Х.С. Меры борьбы и профилактики прирептококкозе нутрий (сборник научных трудов "Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных" М. 1994 114-118)

21. ЕсепенокВ.А. Штамм бактерий Str. Zooepidemicus, используемый для изготовления диагностических и профилактических биопрепаратов против стрептококкоза нутрий (ПАТЕНТ № 2099082 на Изобретение) от 27 ноября 1997 г.)

22. Вакцина против стрептококкоза нутрий (Есепенок В.А., Панин А.Н., Конопаткин A.A., Горбатова Х.С.) (ПАТЕНТ № 2099082 на Изобретение от 22 января 1995 г.)

23. Воскобойнйк"В.Ф., Есепенок В.А., Эффективность ветеринарно-санитарных мероприятий прирептококкозе нутрий (актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных. Сборник научных трудов М.-1995 74-75) ,,■:

24. Способ получения вакцины против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (Есепенок В ¡А.,- Панин А.Н., Конопаткин A.A., Горбатова Х.С., Нецепляева Л.И. ПАТЕНТ № 2099083 на Изобретение от 20 декабря 1997 г.) J , i

25. Вакцина против стрептококкоза и, пастереллеза нутрий. (Есепенок В.А., Панин А.Н., Конопаткин А,А;., Горбатова Х.С., Нецепляева Л.И. ПАТЕНТ № 2099084 на Изобретение от 20 декабря 1997 г.) . .' .: ■

26. Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза нутрий(Есепенок В.А., Панин А.Н., Конопаткин .A.A., Горбатова Х.С., ПАТЕНТ № 2099081 на Изобретение от 20 декабря 1997 г.)

27. Есепенок В. А., Конопаткин A.A., Кириллов А. К. Стрептококкозльскохозяйственных животных (методическое пособие по диагностике М.-1997 1-20)

28. Максимом H.A., Есепенок В.А., Конопаткин A.A., Смешанная инфекция пастереллеза ирептококкоза (2-я Международная научно-практическая конференция ч.2 Актуальные проблемы ветеринарной медицины 25-27 июня 1997г. М.- 169-170)

29. Специфическая профилактикарептококкоза, и пастереллеза нутрий (Есепенок В.А., Панин А.Н., Конопаткин A.A., Горбатова Х.С., Максимов H.A. Там же 125).

30. Вакцинопрофилактикарептококкоза нутрий (Есепенок В.А., Панин А.Н., Конопаткин А.А Горбатова Х.С. Там же 7)

Подписано в печать 06.04.1998 г. Формат CßX90/t6 ■ Объем /.¿/tez п -se* ¿f~

Тираж 100.

Типография "Р0ТЭКС".