Получение и стандартизация нового пробиотика "Хилафор" тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат фармацевтических наук Шевелева, Мария Александровна

• Шевелева, Мария Александровна
• кандидат фармацевтических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Шевелева, Мария Александровна

ВВЕДЕНИЕ.:.

Глава 1.

1.1 Энергетический обмен в организме человека.

1.2. Характеристика, функционирование и роль нормофлоры организма человека.

1.3. Метаболизм бактерий.

1.3.1. Общее представление о метаболизме бактерий.

1.3.2. Отличительные особенности метаболизма бактерий.

1.4. Короткоцепочечные жирные кислоты как наиболее значимые метаболит бактерий нормофлоры человека.

1.5. Пробиотики на фармацевтическом рынке. Стандартизация.

Экспериментальная часть.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Объекты исследования

2.2. Методы и оборудование.

2.3. Материалы исследования.

2.3.1. Стандартные образцы.

2.3.2. Приготовление стандартных растворов.-.

2.3.3. Приготовление рабочих стандартных растворов

2.4. Обработка полученных результатов.

2.4.1. Оценка хроматографических параметров.

2.4.2. Статистическая обработка результатов количественного определения

Глава III. Разработка методики количественного определения короткоцепочечных жирных кислот.

3.1. Выбор метода количественного определения короткоцепочечных жирных кислот.

3.2. Методика количественного определения короткоцепочечных жирных кислот с использованием газовой хроматографии.

3.2.1. Газохроматографическая методика количественного определения короткоцепочечных жирных кислот с использованием анализа паровой фазы над жидкостью.

3.2.1.1. Пробоподготовка.

3.2.1.2. Выбор оптимальных условий разделения КЦЖК.

3.2.1.3. Выбор оптимальных условий детектирования.

3.2.1.4. Количественное определение КЦКЖ.

3.2.2. Классическая газохроматографическая методика количественного определения короткоцепочечных жирных кислот.

3.2.2.1. Пробоподготовка.

3.2.2.2. Выбор оптимальных условий разделения короткоцепочечных жирных кислот.

3.2.2.3. Выбор оптимальных условий детектирования.

3.2.2.4. Количественное определение короткоцепочечных жирных кислот.

3.3.3. Выбор метода качественного и количественного определения КЦЖК.75 3.4. Качественное и количественное определение КЦЖК в разработанных рецептурах методом газовой хроматографии.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение и стандартизация нового пробиотика "Хилафор"»

Актуальность темы

Известно, что микрофлора организма человека принимает участие в поддержании его гомеостаза и осуществлении многих важных физиологических функций, обеспечивающих нормальную жизнедеятельность. При чрезмерном воздействии повреждающих факторов компенсаторные возможности системы "организм человека - нормальная микрофлора" истощаются, формируются нарушения микробно-тканевых взаимоотношений, изменяется кишечный состав нормофлоры, развиваются различные заболевания [4, 6, 9, 39].

Проблема коррекции изменённого микробиоценоза желудочно-кишечного тракта и его гомеостаза является одной из самых важных в современной клинической и профилактической медицине. Для поддержания нормофлоры применяются различные группы пробиотических, пребиотических и синбиотических препаратов. Несмотря на довольно широкое использование, бактериальные препараты на основе живых микроорганизмов не всегда оказываются высокоэффективными. Это связано, с одной стороны, с быстрой элиминацией вводимых в агрессивную среду штаммов из-за высокой толерантности иммунной системы, к собственной микрофлоре. С другой - при попадании в желудочно-кишечный тракт активизируется лишь 5% лиофилизированных бактерий, представляющих основу пробиотика [5, 7, 46].

Решение проблем коррекции дисбактериозов может заключаться в разработке и внедрении в клиническую практику принципиально новых препаратов, созданных на основе микробных метаболитов, названных по новой классификации пробиотиками метаболитного типа. Такие препараты реализуют свое положительное влияние на физиологические функции и биохимические реакции организма либо непосредственно вмешиваясь в метаболическую активность клеток соответствующих органов и тканей, либо опосредованно через регуляцию функционирования биопленок на слизистых оболочках организма;

Контроль и стандартизация данной группы препаратов осуществляется на основании качественного и количественного анализа состава с помощью физико-химических методов. Основными метаболитами бактерий, содержащимися в пробиотических препаратах, являются короткоцепочечные жирные кислоты (КЦЖК): уксусная, пропионовая, масляная, изомасляная, валериановая, изовалериановая [2, 37, 55].

Уксусная кислота обеспечивает антимикробный эффект, участвует в липогенезе, регулирует рН в полости кишечника и моторику желудочно-кишечного тракта, поступает в ткани в качестве энергетического субстрата [9, 13, 36]. Пропионовая кислота включается в гликонеогенез[48, 54]. В дистальных отделах толстой кишки масляная кислота, подвергаясь внутриклеточному окислению, является основным энергетическим субстратом для клеток слизистой оболочки [56, 80].

В литературе широко представлены методы определения короткоцепочечных жирных кислот, однако их использование в оценке качества» конкретных препаратов не всегда дает удовлетворительные результаты [2, 26, 29].

В связи с неблагоприятной экологической обстановкой, частыми нарушениями метаболизма в организме человека и распространенностью дисбактериотических заболеваний создание отечественного метаболитного пробиотика для коррекции и поддержания гомеостаза организма человека является актуальной задачей.

Все вышесказанное определило цель и задачи настоящего исследования. Цель исследования

Целью настоящего исследвания явилось получение метаболитного пробиотика «Хилафор» и разработка методов его стандартизации.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи.

Задачи исследования:

1. предложить состав метаболитного пробиотика, содержащего продукты жизнедеятельности бактерий, оказывающих положительное влияние на физиологические и биохимические функции организма человека;

2. разработать методику совместного количественного определения КЦЖК различными физико-химическими методами;

3. оценить возможность применения методов высокоэффективной жидкостной и газовой хроматографии в контроле качества препаратов, содержащих КЦКЖ, провести метрологическую оценку разработанных методик;

4. с помощью предложенного метода количественного анализа провести определение КЦЖК в образцах препарата с целью выявления оптимального состава с наибольшим их содержанием;

5. определить подходы к стандартизации препарата «Хилафор»;

6. разработать нормативную документацию на метаболитный пробиотик «Хилафор». I

Научная новизна результатов исследования.

Впервые предложен новый отечественный пробиотик «Хилафор», направленный на поддержание гомеостаза организма человека, не имеющий аналогов на отечественном фармацевтическом рынке.

Разработаны методики анализа и подходы к стандартизации по содержанию действующих веществ. Обоснован выбор состава и нормативные показатели его качества.

Внедрение результатов в практику.

На основании проведенных исследований был выбран оптимальный состав пробиотика «Хилафор». Результаты по разработке методики анализа короткоцепочечных жирных кислот вошли в нормативную документацию на пробиотик «Хилафор» (производства ЗАО «Партнер», г. Москва).

Апробация работы.

Апробация работы проведена на научно-практической конференции фармацевтического факультета ММА им. И.М. Сеченова (май 2010). Основные результаты работы доложены на межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых «Фармация в XXI веке: эстафета поколений» (Санкт-Петербург, апрель 2009 г.); VII международной научно-практической конференции и выставке «Технологии и продукты здорового питания. Функциональные пищевые продукты» (Москва, октябрь 2009 г.); XI Всероссийском Конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» (Москва, декабрь 2009 г.); XVII Российском Национальном Конгрессе "Человек и Лекарство" (Москва, апрель 2010).

Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармацевтической химии с курсом токсикологической химии фармацевтического факультета ММА им. И.М. Сеченова «Совершенствование контроля качества лекарственных средств (фармацевтические и экологические аспекты)» (№ государственной регистрации 01.2.006 06352).

Публикации. По материалам исследования опубликовано 6 печатных работ (2 из них в изданиях, рекомендованных ВАК РФ).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. методика определения КЦЖК, позволяющая с необходимой чувствительностью и селективностью проводить качественный и количественный анализ при их совместном присутствии в пробиотическом препарате;

2. результаты по выбору оптимального состава отечественного пробиотика «Хилафор»;

3. подходы к стандартизации препарата «Хилафор» и оценке его качества.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 122 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка цитируемой литературы из 143 названий (94 из которых зарубежные). Работа иллюстрирована 19 таблицами и 44 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия, фармакогнозия», Шевелева, Мария Александровна

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Предложен состав метаболитного пробиотика «Хилафор», обеспечивающий наибольший объем действующих веществ — короткоцепочечных жирных кислот, необходимых для поддержания гомеостаза организма человека.

2. С целью оценки возможного использования различных физико-химических методов для совместного определения короткоцепочечных жирных кислот в метаболитных пробиотиках были выбраны капиллярный электрофорез и хроматографические методы. Методом капиллярного электрофореза не удалось достичь полного разделения анализируемых соединений. Для дальнейшего использования были выбраны хроматографические методы (ВЭЖХ, ГХ).

3. Проведенное исследование показало возможность использования метода ВЭЖХ в анализе короткоцепочечных жирных кислот. Однако его применение для определения короткоцепочечных жирных кислот в пробиотиках метаболитного типа не представляется возможным в следствие недостаточной эффективности (N=7180 для изовалериановой кислоты и N=4986 для валериановой кислоты), а также плохого разделения пиков масляной и изовалериановой кислот (а^1,0).

4. Разработаны методики газохроматографического определения короткоцепочечных жирных кислот с использованием анализа паровой, фазы над жидкостью и с использованием эфирной экстракции. Обе разработанные методики показали хорошую эффективность (от 10000 теоретических тарелок), высокую степень разделения и селективность (R= 1,0-30,0; а >1,0). Методика с использованием эфирной экстракции предложена для определения короткоцепочечных жирных кислот в пробиотике «Хилафор» как наиболее простая, требующая меньше времени для анализа, обладающая наилучшими хроматографическими и метрологическими характеристиками.

5. Проведенный количественный анализ содержания короткоцепочечных жирных кислот в разрабатываемом пробиотике показал максимальное их содержание в составе №3, что позволило рекомендовать данный состав для дальнейшего внедрения.

6. Полученные результаты по разработке методов анализа короткоцепочечных жирных кислот в пробиотике были использованы при составлении нормативной документации на новый отечественный пробиотик «Хилафор».

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Шевелева, Мария Александровна, 2010 год

1. Агаджанян, Н. А. Физиология человека / Н. А. Агаджанян, JI. 3. Тель, В. И. Циркин, С. А. Чеснокова. М.: Медицинская книга; Н. Новгород: НГМА, 2003.-528 с.

2. Ардатская, М.Д. Клиническое значение короткоцепочечных жирных кислот при патологии желудочно-кишечного тракта: Дис. д.м.н.: 14.00.05/ Ардатская Мария Дмитриевна. М., 2003. - 275 с. - Библиогр.: с. 230 - 259.

3. Ардатская, М.Д., «Дисбактериоз кишечника»: понятие, диагностические подходы и пути коррекции. Возможности и преимущества биохимического исследования кала / М.Д. Ардатская, О.Н. Минушкин, Н.С. Иконников. -Пособие для врачей. М., 2004.

4. Бабин, В.Н. Молекулярные аспекты симбиоза в системе хозяин-микрофлора / В.Н. Бабин, О.Н. Минушкин, А.В. Дубинин и др. // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 1998. - 6. - С. 76-82. >

5. Белоусова Е.А. Синдром избыточного бактериального роста тонкой кишки в свете общей концепции о дисбактериозе кишечника. Взгляд на проблему / Е.А. Белоусова // Фарматека. 2009. - № 2. - С. 8-16.

6. Белоусова, Е.А., Возможности препаратов на основе микробных метаболитов для восстановления кишечной микробиоты / Е.А. Белоусова,

7. Н.В. Никитина, Т.С. Мишуровская, А.Р. Златкина // Консилиум. 2005 - № 1. -С. 9-13.

8. Бережной, В.В. Микрофлора человека и роль современных пробиотиков в ее регуляции / В.В. Бережной, С.А. Крамарев, Е.Е. Шунько // Здоровье женщины. — 2004. — № 1 (17). —С. 134-139.

9. Биохимия: Учебник для вузов / под ред. Северина Е.С. Изд. 4-е, испр. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 784 е.: ил.

10. И. Бондаренко, В.М. Дисбактериозы кишечника у взрослых / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич. М.: КМК Scientific Press, 2003.-224 с.

11. Бондаренко, В.М. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич. М.: «ГОЭТАР - Медиа» , 2007. - 300 с.

12. Бондаренко, В.М. Симбиотические энтерококки и проблемы энтерококковой оппортунистической инфекции / В.М. Бондаренко, А.Н. Суворов.-М., 2007,30 с.

13. Бохински, Р. Современные воззрения в биохимии. Пер с англ. / Бохински Р. М.: Мир, 1987.-544 с.

14. Бышевский, А. Щ. Биохимия для врача / А. Ш. Бышевский, О.А. Терсенов. Екатеринбург: Уральский рабочий, 1994 - 384 с.

15. Воробьев, А.А., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции // Журнал микробиол. — 1999. — №6. —С. 102-105.

16. Гончарова, Г.И. Бифидофлора человека, ее защитная роль в организме и обоснование сфер применения препарата бифидумбактерина / Гончарова Г.И. // Автореф. дис. д-ра. биол. наук. М., 1982. - 39 с.

17. Государственная фармакопея СССР, XI издание, выпуск 1. М., 1987.

18. Государственная фармакопея СССР, XI издание, выпуск 2. М., 1990.

19. Готтшалк, Г. Метаболизм бактерий / Готтшалк Г Пер. с англ.- М.:МИР, 1982.-310 с.

20. Дубинин, А.В. Трофические и регуляторные связи макроорганизма и микрофлоры / А.В. Дубинин, В.Н. Бабин, П.М. Раевский // Клин, мед,-1991.-7.-С. 24-28.

21. Изменение к статье ГФ XI, вып, 2 «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» от 28 декабря 1995 г.

22. Каширская, Н.Ю. Значение пребиотиков и пробиотиков в регуляции кишечной микрофлоры / Н.Ю. Каширская // Репринт по материалам РМЖ. -2000.- 13-14-С. 3-6.

23. Кнорре, Д. Г. Биологическая химия: Учеб. для хим., биол. и мед. спец. вузов /Д.Г. Кнорре, С.Д. Мызина.-З-е изд., испр. : учебное пособие / Д.Г. Кнорре. 3-е изд., испр. - М.: Высшая школа, 2003. - 479 с.

24. Кольман, Я. Наглядная БИОХИМИЯ / Я. Кольман, К.-Г. Рем. М.: Мир, 2009. -469 с.

25. Костюкевич, О.И. Современное представление о микробиоценозе кишечника. Дисбактериоз и его коррекция / О.И. Костюкевич // Рус. мед. журнал, 2007. № 28. - С. 2176-2182

26. Красноголовец, В.Н. Дисбактериоз кишечника / В.Н. Красноголовец. -М.: Медицина, 1989. 208 с.

27. Ленинджер, А. Биохимия. Молекулярные основы структуры и функций клетки / А. Ленинджер М.: Мир, 1974. - 956 с.

28. Мари, Р. Биохимия человека. В 2-х томах / Р. Марри, Д. Греннер, П. Мейес, В. Родуэлл. Пер. с англ. М.: Мир, 1993. - Т1 - 384с., Т2 - 415с.

29. Маянский, А.Н. Дисбактериоз: иллюзии и реальность / А.Н. Маянский // Клин, микробиол. и антимикроб, химиотерапия. -2000. Т. 2, № 2. - С. 61-64.

30. Метаболизм бактерий. Пер. с англ. / под редакцией И. Гунзалус, Р.Стайнер. М.: Издатинлит., 1963. - 450 с.

31. Мецлер, Д. Биохимия / Д. Мецлер. Пер. с англ. М., 1980. - т. 2. - С. 335338

32. М.Д. Ардатская, В.Н. Бабин, А.В. Дубинин // Материалы научно-практической конференции "Сочетанные гастроэнтерологические заболевания. Взаимосвязанные поражения органов ротовой полости и органов пищеварения". Смоленск, 1999. - С. 226-31.

33. Минушкин, О.Н. Дисбактериоз кишечника / О.Н. Минушкин, М.Д. Ардатская, В.Н. Бабин и др. // Рос. мед. журн. 1999. 3. - С. 40-45.

34. Осипов, Г.А. Невидимый орган микрофлора человека // электрон, текстовые дан. - М., 2008.

35. Осипов, Г.А. Хромато-масс-спектрометрическое исследование микроорганизмов и их сообществ / Г.А. Осипов. // Автореф. дис. д-ра биол. наук. -М., 1995.

36. Пустовалова, JI.M. Практикум по биохимии / JI.M. Пустовалова. -Ростов-на Дону: Феникс, 1999. 540 с.

37. СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов»

38. СанПиН 2.3.2.1290-03 «Гигиенические требования к организации производства и оборота биологически активных добавок к пище (БАД)»

39. Степанов, В. М. Молекулярная'биология. Структура и функции белков /

40. B. М. Степанов // М.: Высшая школа, 1996. 335 с.

41. Физиология человека: в 3 т. / под ред. Р. Шмидта, Г. Тевса. М.: Мир, 1996.-420 с.

42. Шевелева, М.А. Современные представления о применении различных групп пробиотических средств при антибиотикотерапии / М.А. Шевелева, Г.В. Раменская // Антибиотики и химиотерапия. — 2009. Т.54, №3-4.1. C.61-68.

43. Шевелева М.А. Определение летучих жирных кислот в составе пробиотических средств и БАД на основе бактериальных субстратов / М.А. Шевелева // Сборник материалов XVII Российского Национального Конгресса "Человек и лекарство" М., 2010.- С. 746.

44. Шевелева М.А. Летучие жирные кислоты в пробиотических средствах и биологически активных добавках / М.А. Шевелева // Фармация. 2010.-№3. - С. 13-14.

45. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и фунциональное питание. В 3-х томах / Б.А. Шендеров. М.: Грантъ, 1998.

46. Шлегельт Т. Общая микробиология: Пер. с нем. / Т. Шлегельт. — М., Мир, 1987.- 567 с.

47. Alvarez-Olmos MI Probiotic agents and infectious diseases: a modern perspective on a traditional therapy / MI Alvarez-Olmos, RA Oberhelman // Clin Infect Dis. 2001. -32 - Pp. 1567-1576.

48. Aube A.C. Short-chain fatty acids. Their role in intestinal pathophysiology and therapeutic potential in gastroenterology / A.C. Aube // Gastroenterol. Int. -1995.-8/4.-Pp. 167-176.

49. Baird-Parker A.C. Organic acids / A.C. Baird-Parker // Microbial Ecology of Foods (Silliker J.). Academic Press, New York. 1980, - Pp. 126-135.

50. Baldwin RL. Modeling-ruminant digestion and metabolism / RL Baldwin. -London: Chapman and Hall, 1995. Pp. 686 - 690.

51. Bengmark S. Colonic food: pre- and probiotics / S. Bengmark // Am J Gastroenterol. 2000. - 95 (1). - Pp. 5-7.

52. Berg RD. Bacterial translocation. In Blum HE, Bode JC, Bode C, Sartor RB. (eds.) Gut and Liver / RD Berg // Proceeding of the Falk Symposium 100. Kluwer Academic Publishers. 1998. - Pp. 47-60.

53. Berg RD. Bacterial translocation from the gastrointestinal tract / RD Berg // Trends Microbiol. 1995. - 3. - Pp. 149-154.

54. Bezkorovainiy A. Biochemistiy and physiology of bifidobacteria / A. Bezkorovainiy, R. Miller-Catchpole. CRC Press, Boca Raton, 1989. - 226 p.

55. Boehm G. Prebiotics in infant formulas / G. Boehm, J. Jelinek, B. Stahl, et al. // J Clin Gastroenterol. 2004. - 38(6 Suppl). - Pp. 76-79.

56. Boriello S.P., , Safety of probiotics that contain Lactobacilli or Bifidobacteria / S.P. Boriello, W.P. Hammes, W. Holzapfel // Clin Infec Dis. 2003. - 36. - Pp. 775-780.

57. British Pharmacopeia 11th ed. 2007, London

58. Casafont F. Bacterial overgrowth in the small intestine in chronic liver disease / F. Casafont, L. Martin, F. Pons-Romero // Proceeding of the Falk Symposium 100. Kluwer Academic Publishers. 1998. - Pp. 332-40.

59. Chalhoub E. A computer model of gluconeogenesis and lipid metabolism in the perfused liver / E. Chalhoub, R.W. Hanson, J.M. Belovich // Am J Physiol Endocrinol Metab. 2007. - 293. - Pp. El676 - El686.

60. Chen CC Probiotics and prebiotics: role in clinical disease states / CC Chen, WA. Walker // Adv Pediatr. 2005. - 52. - Pp. 77-113.

61. Cherbut С. Effects of short-chain fatty acids on gastrointestinal motility / C. Cherbut, A.C. Aube, Ы.М. Blottiere, J.P. Galmiche // Scand J Gastroenterology. -1997. 32 (Suppl. 222) .- Pp. 58-61.

62. Clausen MR. Kinetic studies on colonocyte metabolism of short chain fatty acids and glucose in ulcerative colitis / M.R. Clausen, P.B. Mortensen // Gut. -1995.-37.-Pp. 684-9.

63. Collins M.D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut / M.D. Collins // Am J Clin Nutr. -1999.-69(suppi). 1052S-7S.

64. Coppa G.V. The first prebiotics in humans: human milk oligosaccharides / G.V. Coppa, S. Bruni, L. Morelli, et al. // J Clin Gastroenterol. 2004. - 38(6 Suppl). - S80-3.

65. Coeuret V. Numbers and strains of lactobacilli in some probiotic products / V. Coeuret, M. Gueguen, J.P. Vernoux // Int J Food Microbiol. 2004. - 97. - Pp. 147-156.26.

66. Cowley H.M. Differential effects of shot chain fatty acids on mucosal structure of the gastrointestinal tract of gnotobiotic mice / H.M. Cowley, R.H. Hill // Abstr. Book. XIX Intern. Congress on Mucosal Ecology and disease. Rome, 1994.

67. Cummings J.A. Short chain fatty acids in the human colon / J.A. Cummings // Gut. 1991. - V.22. - Pp. 763-779.

68. Cummings J.H. Some aspects of dietary fibre metabolism in the human gut / J.H. Cummings // In: Food and Health: Sci. a. Technol. London // Eds Birch G.G., Parker K.G.-Appl. Sci. Publish. Ltd. 1995. - Pp. 441-458.

69. Cummings J.H., Short chain fatty acids in human large intestine, portal, hepatic and venous blood / J.H. Cummings, E.W. Pomare, W.J. Branch, et al. // Gut. 1987. - 28. - Pp. 1221-27.

70. Doron S. Probiotics: their role in the treatment and prevention of disease / S. Doron, SL. Gorbach // Expert Rev Anti Infect Ther. 2006. - 4 . - Pp. 261-275.

71. European Pharmacopoiea 6th ed., 2007

72. Ezendam J. Probiotics: immunomodulation and evaluation of safety and efficacy / J. Ezendam, H. van Loveren // Nutrition Reviews. 2006. - 64. - Pp. 114.

73. Fedorak RN. Probiotics and Prebiotics in Gastrointestinal Disorders / RN. Fedorak, KL. Madsen // Curr Opin Gastroenterol. 2004. - 20(2). - Pp. 146-155.

74. Frayn, K.N. Nutrition: macronutrient metabolism / Frayn K.N. // OTM. January 1,2010 . - 5(1). - Pp. med-9780199204854-chapter - med-9780199204854-chapter.

75. Fuller, R. Probiotics and prebiotics: microflora management for improved gut health / R. Fuller, G.R. Gibson// Clin Microbiol Infect. 1998.- 4. - Pp. 477-480.

76. Gibson, G.R. Aspects of in vitro and In vivo research approaches directed toward identifying probiotics and prebiotics for human use / G.R. Gibson, R. Fuller // J Nutr. 2000. - 130 (2) Suppl. - Pp. 391-395.

77. Gibson, GR, Fluman colonic bacteria: role in nutrition, physiology and pathology / GR Gibson, GT Macfarlane (edit.) // CRC Press. 1995. - Pp. 1-18.

78. Gibson, G.R. Dietary modulation of the colonic microbiota: updating the concept of prebiotics / G.R. Gibson., H.M. Probert, J.Van Loo, R.A. Rastall, M.B. Roberfroid //Nutrition Research Reviews. 2004. -17. - Pp. 259-275.

79. Gibson, G.R. Dietary modulation of the human colonic microbiota: Introducing the concept of prebiotics / G.R. Gibson, M.J Roberfroid // Nutr. -1995.-125.-Pp. 1401-12.

80. Gorbach, SL. Probiotics and gastrointestinal health / SL. Gorbach //Am. G. Gastroenterol. Jan, 2000. - 95: 1 Suppl. - Pp. 2-4.

81. Gropper, S.S. Advanced Nutrition And Human Metabolism / S.S. Gropper, J.L. Smith, J.L. Groff// Wadsworth Pub Co. 2004. - 608 p.

82. Gut Microflora. Digestive Physiology and Pathology / Ed. J-C. Rambaud, J-P. Buts et all. // JL Eurontext.- Paris.- 2006.

83. Hamilton-Miller, JM. Probiotics and prebiotics in the elderly / JM. Hamilton-Miller II Postgrad Med J. 2004.- 80(946). - Pp. 447-51.

84. Hammerman, С Safety of probiotics: comparison of two popular strains / С Hammerman, A Bin-Nun, M. Kaplan // BMJ. 2006. - 333. - Pp. 1006-1008.

85. Hentges, DJ. Human intestinal microflora in health and disease / DJ. Hentges //New York: Academic Press. 1983.

86. Heyman, M Effects of specific lactic acid bacteria on the intestinal permeability to macromolecules and the inflammatory' condition / M Heyman, К Terpend, S. Menard // Acta Paediatr Suppl. 2005. - 94(449). - Pp. 34-6.

87. Hill, MJ. (editor) Role of gut bacteria in human toxicology and pharmacology / MJ.Hill // Basingstoke: Burgess Science Press. 1995.

88. Huebner, ES Probiotics in the prevention and treatment of gastrointestinal infections / ES Huebner, CM. Surawicz // Gastroenterol Clin North Am. 2006. -35.-Pp. 355-365.

89. Husebye, E The role of normal microbial flora in control of small intestine motility / E Husebye, R Hellstrom, T. Midtvedt // Microbiol Therapy. 1990,- 20. -Pp. 389-94.

90. Imazumi, R. Effects of cultered mile products by Lactobacillus and Bifidobacterias species on secretion of the bile acids in hepatocytes and in rats / R. Imazumi, K. Hirata, M. Zommara et al. // J. Nutr. Sci. Vitaminol (Tokio). 1992. -4. - Pp.186—191.

91. Kailasapathy, K.A., Survival and therapeutic potential of probiotic organisms with reference to Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium spp. / K.A. Kailasapathy, J. Chin // Immunol Cell Biol. 2000. - 78 .- Pp. 80-8.

92. Julia, Kovsan Potential role of autophagy in modulation of lipid metabolism / Julia Kovsan, Nava Bashan, Andrew S. Greenberg, Assaf Rudich // Am J Physiol Endocrinol Metab. Jan 2010. - 298.- Pp. 1 - 7.

93. Lewis, S.J. The metabolic consequences of slow colonic transit / S.J. Lewis // , Am J Gastroenterol. 1999. - vol 94, 8. - Pp. 2010-2016

94. Lilly, D. M. Probiotics: Growth promoting factors produced by microorganisms / D. M. Lilly, R. H. Stillwell // Science. 1965. - V147. - Pp. 747748.

95. Lin, DC. Probiotics As Functional Foods / DC. Lin // BMJ. 2001. - Pp. 322:1327.

96. Macfarlane, GT Human colonic microbiota: ecology, physiology and metabolic potential of intestinal bacteria / GT Macfarlane, S. Macfarlane // Scand J Gastroenterol. 1997. - 32 (Suppl. 222). - Pp. 3-9.

97. Marini, A. Pro- and pre-biotics administration in preterm infants: colonization and influence on faecal flora / Marini A; Negretti F; et al. //Acta Paediatr Suppl. -2003.-91(441).-Pp. 80-1.

98. Marteau, P.R. Protection from gastrointestinal diseases with use of probiotics P.R. Marteau, M. de Vrese, C.J. Cellier, J. Schrezenmeir // Am. J. Clin. Nutr. -2001. 73: 2 Suppl. - Pp. 430-436.

99. Marteau, P. Tolerance of probiotics and prebiotics / P. Marteau, P. Seksik // J Clin Gastroenterol. 2004. - 38(6 Suppl). - Pp. 67-9.

100. Mercenier, A. Probiotics as biotherapeutic agent: present khuwledge and future prospects / A. Mercenier, S. Pavan, B. Pot // Curr. Pharm. Des. 2003. - 9. -Pp. 175-91.

101. Methods for Investigation of Amino Acid and Protein Metabolism/ edited by Antoine E. // El-Khoury CRC Pr I Lie. 1999. - 259p.

102. Michail, S. Lactobacillus plantamm inhibits the intestinal epithelial migration of neutrophils induced by enteropathogenic Escherichia coli / S. Michail, F. Abernathy // J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2003. - Mar36(3). - Pp. 385-91.

103. Minna, Rinne Effect of Probiotics And Breastfeeding On The Bi.dobacterium And Lactobacillus/Enterococcus Microbiota And Humoral Immune Responses / Rinne Minna et al. //Pediatrics. 2005.- 147. - Pp. 186-191.

104. Modler, H.W. Bifidobacteria and bifidogenic factors review / H.W. Modler, R.C. McKellar, M. Yagichi // Can. Inst. Food Saci Technol J. - 1990. - 23. - Pp 29-41.

105. Moon, N. J. Inhibition of the growth of acid tolerant yeasts by acetate, lactate and propionate and their mixture / N. J. Moon // J.Appl.Bacteriol. — 1983. vol. 55.-Pp. 455-460.

106. Patent JP 11-113484; 1999; "Method of improvement of survival of Bifidus bacteria."

107. Rautava, S. Probiotics during pregnancy and breastfeeding might confer immnomodulatory protection against disease in the infant / S. Rautava, M. Kalliomaki, E. Isolauri // J. Allergy Clin. Immunol. 2000. - 109 (1) - Pp. 119121.

108. Reid, G Probiotics: some evidence of their effectiveness // G Reid, JA Hammond // Can Fam Physician. 2005. - 51 - Pp. 1487-1493.

109. Resta-Lenert, S. Live probiotics protect intestinal epithelial cells from the effects of infection with enteroinvasive Escherichia coli (EIEC) / S. Resta-Lenert, KE. Barrett // Gut. 2003. - 52(7) - Pp. 988-97.

110. Roberfroid, MB. Prebiotics and probiotics: are they functional foods? / MB. Roberfroid // Am J Clin Nutr 2000. 71(6)Suppl - Pp. 1682-87.

111. Rolfe, RD. The role of probiotic cultures in the control of gastrointestinal health // J. Nutr.- 2000. Pp. 396S-402S.

112. Saier, M.H. Probiotics and prebiotics in human health / M.H. Saier, N.M. Mansour // J Mol Microbiol Biotechnol. 2005. - 10(1). - Pp. 22-25.

113. Salminen, S. Functional food science and gastro-intestinal physiology and function. / S. Salminen, C. Buly, M.C. Boutron-Ruault, et al. // Brit. J. Nutr. -1998. 80 (suppl.). - Pp. 147-171.

114. Salminen, S.J. Probiotics that modify disease risk / S.J. Salminen, M. Gueimonde E. Isolauri // J Nutr. 2005. - 135 . - Pp. 1294-1298.

115. Salminen, S. Gut flora in normal and disordered states / S. Salminen, E. Isolauri, T. Onela // Chemotherapy. 1995. - 41 (Suppl. 1). - Pp. 5-15.

116. Salminen, S. Clinical uses of probiotics for stabilization of gut mucosal barrier: successful strains and future challenges / S. Salminen, E. Isolauri, E. Salminen // Anthon Leeuwenh. 1996. - 70. - Pp. 347-358.

117. Salminen, S. Lactulose, lactic acid bacteria, intestinal microecology and mucosal protection Scand J Gastroenterol. 1997. - 32 (Suppl. 222). - Pp. 45-48.

118. Short Chain Fatty Acids / сотр. by W. Scheppach //Congress Short Report Falk Symposium. -Strasbourg, 1993. Pp. 1077-1080.

119. Siavoshian, S. Butyrate and trichostatin A effects on the proliferation/differentiation of humen intestinal epithelial cells: induction of cyclin D3 and p21 expression / S. Siavoshian at al. // Gut. 2000. - 46. - Pp. 507-514.

120. Schepach, W. The contribution of the large intestine to blood acetate in man / W. Schepach et al. // Clin. Sci. 1991. - vol. 80. - Pp. 177-182.

121. Schrezenmeir, J. "Probiotics, prebiotics, and synbiotics—approaching a definition / J. Schrezenmeir, M. de Vrese // American Journal of Clinical Nutrition. 2001.- 73(supple).-Pp. 361-364.

122. Tannock, GW. Normal microflora / GW. Tannock. London: Chapman & Hall, 1995.-410 p.

123. The United States Pharmacopeia 30 revision.

124. Tomita, M. Metabolomics: The Frontier of Systems Biology / M. Tomita, T. Nishioka. Springer, 2005. - 256 p.

125. Toshio, M. Antimicrobial activities of organic acids determined by minimum inhibitory concentrations at different ph ranged from 4.0 to 7.0 / M. Toshio, Y. Toshihiro, et al. //J.Jap. Soc.Food Sci Technol. 1994. - vol. 41, N 10.

126. Van Niel, CW. Probiotics: Not Just for Treatment Anymore / CW Van Niel // Pediatrics. 2002. - Vol. 109. - Pp. 678-684.

127. Van Niel, CW. Lactobacillus Therapy for Acute Infectious Diarrhea in Children: A Meta-analysis / CW Van Niel, C. Feudtner // BMJ. 2001. - Pp. 1322:1327.

128. Vanderhoof, JA. Current and potential uses of probiotics / JA Vanderhoof, RJ. Young // Ann Allergy Asthma Immunol. 2004. - 93(5 suppl 3). - S33-S37.

129. Welle, S. Human protein metabolism / S. Welle Springer Verlag, 1999 -288p.

130. Walker, W.A. Diet and bacterial colonization: role of probiotics and prebiotics. / W.A. Walker, L.C. Duffy // J Nutr Biochem. 1998. - 9.- Pp. 668-75.

131. Walker, W.A. Role of nutrients and bacterial colonization in the development of intestinal host defence J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2000. - 30(2). - Pp. 2-7.

132. Yaeshima, T. Benefits of bifidobacteria to human health / T. Yaeshima // Bulletin of the IDF. -1996. 313. - Pp. 36-42.

133. Yuki, N. Survival of a probiotic, Lactobacillus casei strain Shirota, in the gastrointestinal tract: Selective isolation from faeces and identification using monoclonal antibodies / N. Yuki, K. Watanabe, A. Mike, Y. Tagami, R. Tanaka,

134. M. Ohwaki, М. Morotomi // International Journal of Food Microbiology. 1999. -48.-Pp.51-57.

135. Zoetendal, EG. Molecular microbial ecology of the gastrointestinal tract from phytogeny to function / EG Zoetendal, В Cheng, S Koike, RL. Mackie // Curr Issues Intest Microbiol. 2004. - 5. - Pp. 31 -45.