Особенности иммуногематологического статуса у больных хроническим вирусным гепатитом С тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.10, кандидат медицинских наук Леонова, Леся Милетиевна

• Леонова, Леся Милетиевна
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Леонова, Леся Милетиевна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы. Современные аспекты HCV.

1.1. Эпидемиология и социальное значение HCV.

1.2. Этиология и структурные особенности HCV.

1.3. Пути передачи вируса гепатита С.

1.3.1. Посттрансфузионный HCV.

1.4. Вопросы патогенеза HCV.

1.5. Иммунный ответ при НСV.

21 1.5.1. Специфический Т-клеточный иммунный ответ при HCV.

1.5.2. Специфический гуморальный иммунный ответ при HCV.

1.6. Вопросы диагностики HCV.

1.7. Иммуногематология групп крови человека и сопряжённость HCV инфекции с фенотипом эритроцитов человека.

1.7.1. Изоантигенный полиморфизм эритроцитов человека.

1.7.2. Антигены системы АВО и их значение.

1.7.3. Антигены системы Резус и системы

Kell-Cellano их значение.

Глава 2. Характеристика больных и методы исследований.

2.1. Клинический материал исследования.

2.2. Организация и протокол исследования больных HCV.

2.2.1. Методы исследования.

2.2.1.1. Генотипирование HCV.

2.2.1.2. Общеклиническое исследование количественных показателей периферической крови.

2.2.1.3. Биохимическое исследование периферической крови.

2:2.1.4. Определение осмотической резистентности эритроцитов.

2.2.1.5. Определение свободного гемоглобина в плазме крови.

2.2.1.6. Определение кислотной резистентности эритроцитов.

2.2.1.7. Определение групп крови по системе АВО.

2.2.1.8. Определение групп крови по системе Rh-Hr.

2.2.1.9 Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Особенности иммуногематологического статуса и периферического звена эритрона у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.1. Экспрессия антигенов системы АВО на эритроцитах у здоровых доноров и больных HCV г. Нижневартовска.

3.2 Экспрессия антигенов системы Резус (Rh) на эритроцитах у здоровых доноров и больных HCV г.Нижневартовска.

3.3. Заболеваемость вирусными гепатитами на территории за прошедший период с 1996 по 2005 гг.

3.4. Оценка практической значимости «суррогатных» маркеров в диагностике вирусных гепатитов у клинически здоровых доноров.

3.5. Генотипические особенности HCV у больных вирусным гепатитом.

Глава 4. Влияние HCV инфекции на состояние периферического звена эритрона

4.1. Гематологические показатели у больных HCV-инфекцией.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности иммуногематологического статуса у больных хроническим вирусным гепатитом С»

В России больных хроническими формами HCV инфекции, включая носителей не менее 2 миллионов человек [79]. Хроническая инфекция с длительной персистенцией HCV - одна из наиболее частых причин развития цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы [37, 103, 124, 146, 201]. Оценка летальности при хронических заболеваниях печени позволяет предположить, что доля смертей от ХВГС составляет около 70% [201]. Частота развития цирроза печени при ХВГС достигает 50-60% от численности всей популяции вирусоносителей [32, 34, 37, 103]. По прогнозам специалистов, через 10-20 лет заболеваемость HCV-инфекцией в мире окажется ещё более серьёзной медицинской и экономической проблемой [39, 95, 122].

Несмотря на определённые успехи, достигнутые в изучении HCV, он остаётся загадочным вирусом — «ласковым убийцей». Не выяснен до конца патогенез гепатита С, дискурабельны представления о механизме гепатотропного действия вируса и выздоровлении больных хроническим гепатитом С [124]. Особые трудности изучения HCV связаны с гетерогенностью вируса, обусловленной чрезвычайно быстрым изменением его антигенной структуры [86, 98, 102, 104], слабой иммуногенностью HCV, не приводящей к выработке полноценного протективного иммунитета [89, 181], циркуляцией вируса в минимальных концентрациях [107], отсутствием адекватной культуры клеток [94, 97, 98, 161]. Данные факты объясняют трудности создания вакцины против гепатита С [152]. Кроме того, насущной задачей остаётся стандартизация методов индикации маркёров вирусных гепатитов, а также повышение эффективности и надежности их определения.

Всё вышесказанное свидетельствует о том, что исследовательские работы, посвящённые вопросам патогенеза течения HCV-инфекции, оценки и роли иммуногематологического статуса, диагностики и лечения заболевания, будут иметь важное научно-практическое значение.

Цель исследования.

Исследовать особенности иммуногематологического статуса у больных хроническим вирусным гепатитом С.

Задачи исследования.

1. Провести ABO/Rh-типирование и охарактеризовать распределение ABO/Rh - антигенов, их комбинаций у больных хроническим вирусным гепатитом С.

2. Изучить сопряжённость фенотипа эритроцитов системы ABO/Rh у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3. Выяснить значимость аланинаминтрансферазы (AJIT), как «суррогатного» маркера вирусного гепатита у доноров.

4. Определить особенности, состояния1 периферического звена эритрона у больных хроническим вирусным гепатитом С.

Научная новизна.

Выявлено распределение антигенов системы ABO, Rh у больных хроническим вирусным гепатитом С.

Определена диагностическая значимости «суррогатного» маркера (AJIT) в диагностике заболеваемости гемотрансмиссивными инфекциями населения.

Установлено снижение эластичности периферического звена эритрона у больных хроническим вирусным гепатитом С.

Научно обоснованы принципы выбора схемы антигенной совместимости эритроцитов системы резус при планируемых гемотрансфузиях у больных хроническим вирусным гепатитом С.

Практическая значимость работы.

По результатам изучения сопряжённости фенотипа эритроцитов системы ABO, Ph установлено, что HCV не оказывает влияния на результаты тестирования при определении групп крови и Rh-фактора у больных хроническим вирусным гепатитом С, что необходимо учитывать при гемотрансфузиях.

Установлена низкая диагностическая значимость «суррогатных» маркеров в диагностике заболеваемости гемотрансмиссивными инфекциями, что требует введения дополнительных методов ранней диагностики,

Установлено снижение минимальной резистентности эритроцитов у больных хроническим вирусным гепатитом С, более выраженное при генотипе lb. Полученные данные могут быть использованы для прогнозирования и профилактики посттрансфузионных осложнений, планирования лечебно-профилактических мероприятий.

Предложен аналитический метод подбора антигенной совместимости эритроцитов крови доноров и реципиентов при планировании гемотрансфузий.

Личное участие автора в получении результатов.

Выбор научной задачи, определение темы, цели, задач исследования, подбор методов исследования полностью выполнено диссертантом. Автором лично отрабатывалась схема обследования пациентов, проведено формирование базы данных и ее статистический анализ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Распределение антигенов системы ABO/Rh у больных хроническим вирусным гепатитом С соответствует иммуногематологическим показателям доноров.

2. Стабильно высокая заболеваемость хроническим вирусным гепатитом С у лиц молодого возраста и нецелесообразность использования уровня фермента аланинаминотрансферазы в качестве скринингового критерия в диагностике вирусного гепатита при обследовании доноров, требует введения дополнительных методов диагностики.

3. Потенцирующее влияние HCV инфекции на качественные показатели периферического звена эритрона обусловливает снижение эластичности мембран эритроцитов, которое максимально выражены у больных хроническим вирусным гепатитом С с генотипом lb.

Реализация и внедрение полученных результатов работы.

Материалы диссертации внедрены в практику работы Муниципального учреждения «Городская поликлиника» г. Нижневартовска, «Нижневартовская станция переливания крови». Разработанные методы подбора антигенной совместимости эритроцитов крови доноров и реципиентов применяются на станции переливания крови г. Нижневартовска при подборе крови реципиентам с хроническим вирусным гепатитом С.

Апробация и публикация материалов исследования.

Основные положения диссертации были представлены в докладах на VI съезде аллергологов и иммунологов СНГ (Москва, 2006), Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство. Урал-2007» (г. Тюмень, 2007).

По теме публикации опубликовано 7 работ, из них 3 статьи — в журнале, входящем в Перечень ВАК.

Заключение диссертации по теме «Инфекционные болезни», Леонова, Леся Милетиевна

Выводы

1. У больных хроническим вирусным гепатитом С распределение антигенов системы ABO/Rh соответствует иммуногематологическим показателям доноров. Фенотипы системы АВО: О (I) - 19%, А (П) — 17%, В(Ш) -13%, АВ (IV) - 3%. Фенотипы системы резус CCDee -26,9% , CcDEe - 23,1%, ccdee - 13,5 % ccDee- 9,6 %, ccDee - 9,6%, CcDee-23,1%.

2. Отсутствие сопряжённости фенотипа эритроцитов крови системы ABO/Rh и HCV инфекции не позволяет выделить группу риска у доноров.

3. Низкая значимость аланинаминнтранферазы (АЛТ), скринингового критерия в диагностике вирусного гепатита у доноров (14,4%), не позволяет рассматривать ее, как маркера ранней диагностики.

4. Потенцирующее влияние HCV инфекции на качественные показатели периферического звена эритрона, обусловливает снижение эластичности мембран эритроцитов, которое максимально выражено у больных хроническим вирусным гепатитом С с генотипом lb и является фактором риска развития посттрансфузионных и лекарственных гемолитических осложнений при проведении комбинированной противовирусной терапии.

Практические рекомендации

1. Определение группы крови и резус фактора у больных HCV инфекцией при планируемых гемотрансфузиях целесообразно проводить стандартными методами в виду отсутствия влияния HCV на экспрессию поверхностных антигенов эритроцитов крови.

2. Низкая диагностическая значимость «суррогатного» маркера (АЛТ) в диагностике заболеваемости гемотрансмиссивными инфекциями на станции переливания крови, требует введения дополнительных методов диагностики - ПЦР, ИФА и др., рассматривая каждого донора, как потенциально больного вирусным гепатитом.

3. У больных HCV с генотипом lb, ввиду снижения эластичности мембран эритроцитов, необходимо расширение комплексной терапии за счёт стабилизаторов мембран клеток.

4. Для подбора доноров с целью профилактики у больных HCV инфекции lb генотипом посттрансфузионных осложнений, целесообразно применять схему антигенной совместимости эритроцитов системы резус крови человека.

Схема совместимых фенотипов эритроцитов в системе донор-реципиент

Фенотип эритроцитов реципиента Совместимые фенотипы эритроцитов донора

CcDee CcDee; CCDee; ccDee; ccdee

CCDee CCDee

CcDEe CcDee; CCDee; CcDEe; ccDee; ccdee ccDee ccDee; ccdee

Ccdee ccdee

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Леонова, Леся Милетиевна, 2009 год

1. Афанасьев, А.Ю. Индикация антител к вирусу гепатита С с разделением на классы lgM и lgG и ее клиническое значение / А.Ю. Афанасьев // Клинич. лаб. Диагностика. -1996. № 2. — С. 43-44.

2. Афанасьев, А.Ю. ИФА диагностика в разграничении гепатита С острого и хронического течения / А.Ю. Афанасьев, С.В. Зубов, Ю.Е. Жданов // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. — 1995. -Т. 5. -№3. —С. 12.

3. Башлай, А.Г. Иммуносерология (нормативные документы) / А.Г. Башлай, С.И. Донсков // М.: Союзинфорбиология «Калина» ВИНИТИ РАН. 1998. -195 с.

4. Бочков, Н.П. Клиническая генетика / Н.П. Бочков // М.Медицина. -1997. С.15-165.

5. Гепатит С: диагностика эпидемиология, лечение, профилактика / Гепатитинфо.-2000. № 11. - С. 2-13.

6. Гланц, С.А Медико-биологическая статистика / Пер. с англ. Ю.А. Данилова. М.: Практика, 1998. 459 с.

7. Ю.Губенко, Д.М. Особенности серологической диагностики гемоконтактных гепатитов в условиях многопрофильного госпиталя / Д.М. Губенко, В.В. Карюков, Н.П. Карюкова // Информационный бюллетень «Новости «Вектор-Бест»». 2004. - 2 (32).-С.8-9.

8. П.Гусев, Д.А. Сравнительный анализ некоторых показателей иммунитета при желтушных формах гепатитов В, С и В+С / Д.А. Гусев, К.В. Жданов, Ю.В. Лобзин // Мед. иммунология. 2001. - Т.З. - №2. - С. 217.

9. Дизрегуляционная патология: руководство для врачей и биологов / Под ред. Г.Н. Крыжановского. —М. : Медицина, 2002. — 632 с.

10. Долгих, В.Т. Основы иммунопатологии / В.Т. Долгих // М.: Медицинская книга. 2003. - 229 с.

11. Донсков, С.И. Сенсибилизация населения к трансфузионно опасным антигенам эритроцитов / С.И. Донсков, А.Г. Башлай, В.И. Червяков // Тез. конф. «Трансфузиология и служба крови». СПб. - 1998. - С. 69.

12. Донсков, С.И. Пути обеспечения иммунологической безопасности переливания эритроцитов / С.И. Донсков, В.И. Червяков, Т.М. Пискунов // Новое в трансфузиологии. 1998. вып. 21. — С. 35-39.

13. Дуданова, О. П. Распространенность генотипов HCV и особенности течения хронического гепатита С в зависимости от генотипа вируса / О. П. Дуданова, О. И. Яхонтова, Л. Н. Валенкевич // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. 2006. - №1 2. - С. 49-50.

14. Ефашкина, Т.А. К вопросу о необходимости обследования реципиентов перед переливанием крови на Келл-фактор / Т.А. Ефашкина // Тез. конф. «Трансфузиология и служба крови», СПб. 1998. — С. 71.

15. B. А. Нагорнев, С. В. Мальцева // Мед. акад. журнал. 2005. — Т. 5, № 4. —1. C. 93 99.21.3отиков, Е.А. Антигены форменных элементов крови и антитела к ним / Е.А. Зотиков //Клин. лаб. Диагностика. 1999. - №12. - С. 25 - 30.

16. Ильина, Е.Н. Некоторые аспекты долабораторной диагностики вирусных гепатитов В и С / Е.Н. Ильина, В.М. Говорун, И.О. Иваников // Тер.арх. -2003.-№4.-С. 84-86.

17. Иммуногенетика человека. Основные принципы и клиническое значение. В 2-х томах. Т.2. перевод с англ. /Под ред. С. Литвина //М.: Мир. 1994. -С. 215 - 293.

18. Кайданов, Л.З. Генетика популяций / Л.З. Кайданов // Под ред. С.Г. Инге-Вечтомова. -М.: Высшая школа. 1996. - 320 с.

19. Каландаров, Р.С. Разработка автоматизированного метода определения групп крови и резус-фактора с применением ультразвука / Р.С. Каландаров : автореф. дис. канд. мед. наук / Р.С. Каландаров. -Москва, 1999:-22 с.

20. Качество клинических лабораторных исследований. Новые горизонты и ориентиры / Под ред. В.В. Меньшикова. М.: Аналитика, 2002. - 304 с.

21. Киселев, О. И. Отчет о проведении научно-практического семинара «Проблема вирусных гепатитов. Диагностика и лечение»/ О. И. Киселев, О. И. Яхонтова, О. П. Дуданова // Мед. акад. журнал. 2003. - Т. 3. - № 3. - С. 142 - 143.

22. Кишкун, А.А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике / А.А. Кишкун // М.: ООО «Медицинское информационное агентство». 2006. — 536 с.

23. Козинец, Г.И. Кровь и инфекция / Г.И. Козинец и др. // М.: Триада-фарм, 2001.-с. 456.

24. Лобзин, Ю.В. Вирусные гепатиты / Ю.В. Лобзин, К.В. Жданов, В.М. Волжанин. -СПб.: «Фолиант». 1999. -С.72 - 78.

25. Логинов, А.С. Интерлейкины при хроническом вирусном гепатите / А.С. Логинов, Т.М. Царегородцева, М.М. Зотина // Тер.архив. 2001. №2. - С. 17-20.

26. Лопаткина, Т.Н., Клиника гепатита С / Т.Н. Лопаткина // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. — 1997. № 1. - С. 12 - 16.

27. Лопаткина, Т.Н. Вирусные гепатиты / Т.Н. Лопаткина // Информ. бюлл. -2000. № 2(9). - С. 5 - 6.

28. Лукина, Е.А. Вирус гепатита С в клетках крови и костного мозга у больных с цитопеническим и миелопролиферативным синдромами / Е.А. Лукина, Е.П. Сысоева, А.Е. Гущин //Рос. журнал гастроэнтерол., гепатол. и колонопроктол. 2000. - №1. — С. 23 - 28.

29. Майер, К.П. Гепатит и его последствия : практич.рук.: пер. с нем. / К.П. Майер. М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999.- 432 с.

30. ЗБ.Майер, Ф.П. Естественное течение и диагностика вирусного гепатита С /Ф.П. Майер// Рос. журнал гастроэнтерол., гепатол. и колонопроктологии. -2000. -№4.- С. 21 -24.

31. Макарик, Т.В. Вирусный гепатит С: новое в эпидемиологии, методах диагностики и терапии (обзор литературы) / Т.В. Макарик и др. // Гематология и трансфузиология. 2001. Т.46, №3. — С. 86 - 90.

32. Макарова, Н.В. Статистика в Excel / Н.В. Макарова. -М.: Финансы и статистика, 2002. 368 с.

33. Медицинская вирусология: учебное пособие / Под ред. A.M. Королюка и В.Б. Сбойчакова. -СПб. 2002. - 163 с.

34. Меныпиков, В.В. Национальные дни лабораторной медицины России — 2005 / В.В. Меньшиков // Клин. лаб. диагностика. 2005. - № 9. С. 2 - 6.

35. Мифы о гепатите С./ Гепатитинфо. 2001. - № 2. - С. 9 - 11.

36. Михайленко, А.А. Профилактическая иммунология /А.А. Михайленко и др. // М.: Триада. 2004. - 448 с.

37. Назаренко, Г.И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований / Г.И. Назаренко, А.А. Кишкун // М.: Медицина, 2002. — 544 с.

38. Насырова, Р.В. Посттрансфузионное осложнение, обусловленное фактором с (hr ) / Р.В. Насырова и др. // Новое в трансфузиол. 1997. -№18.-С. 75-77.

39. Никитин, В.Ю. Изучение особенностей иммунопатогенеза латентных форм хронических вирусных гепатитов В и С / В.Ю. Никитин, К.В. Жданов, И.А. Сухина // Мед. иммунол. 2001. - Т.З. - №2. - С. 229 - 230.

40. Николаева, Л.И. Новые данные о ВГС-инфекции / Л.И. Николаева // Информационный бюллетень «Новости «Вектор-Бест»». — 2000. №3 (17). -С. 5-7.

41. Николаева, Л.И. Новости с XI международного симпозиума по вирусному гепатиту С и родственным вирусам / Л.И. Николаева // «Новости «Вектор-Бест»». 2005. №2 (36). - С. 5 - 8.

42. Николенко, Н.И. Вирусный гепатит и его серологическая диагностика / Н.И. Николенко // Новости «Вектор-Бест». — 1997. №6. — С. 3 - 4.

43. НС-инфекция у детей и подростков : учебное пособие. -СПб.: Санкт-Петербургская торгово-промышленная палата. 2002. — 43 с.

44. Панченко, О.Н. Естественные антитела. Их биологическое значение и свойства / О.Н. Панченко, Т.В. Абраменко, М.Н. Мягкова // Гематология и трансфузиология. 2000. - Т. 45. - №2. - С. 16 - 18.

45. Пашкова, И.А. Активация антителогенеза при резус-гемоспецифической беременности / И.А. Пашкова, Г.В. Козина // Гематология и трансфузиология. 2000. - Т.45. - №5. - С. 45 - 46.

46. Приказ Минздрава РФ № 293 от 20.12.93. «О внедрении в практику здравоохранения тест-систем для диагностики гепатита С».

47. Приказ Департамента Здравоохранения г. Москвы № 493/96 от 29.09.94 г. «О совершенствовании системы эпиднадзора за вирусными гепатитами В и С».

48. Приказ Минздрава РФ № 282 от 29.09.98 г. «Об использовании иммуноферментных тест-систем для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) и антител к вирусу гепатита С (анти-ВГС) в сыворотке крови человека».

49. Рахманова, А.Г. Вирусные гепатиты : пособие для врачей / А. Г. Рахманова, В.А. Неверов, Г.И. Кирпичникова. — Кольцово: «Вектор-Бест», 2002. - 57 с.

50. Рахманова, А.Г. Хронические вирусные гепатиты / А.Г. Рахманова, А.А. Яковлев, Е.Н. Виноградова. -СПб, 1997. 29 с.

51. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. М.: МедиаСфера, 2003. 312 с.

52. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл // -М. : Мир. -2000. 582 с.

53. Рындина, Е.И. Некоторые механизмы формирования иммунологической недостаточности при вирусных гепатитах В,С / Е.И. Рындина : автореф. дис. канд. мед. наук / Е.И. Рындина. — Владиавказ, 2001. — 23 с.

54. Соломаха, А.А. «Организация генотипирования вирусного гепатита С в службе крови многопрофильной больницы» / А.А. Соломаха // Клин. лаб. диагн. 2003. - № 9. - С. 34.

55. Соринсон, С.Н. Вирусные гепатиты в клинической практике / С.Н. Соринсон. СПб.: "ТЕЗА", 1996. - 304 с.

56. Соринсон, С.Н. Вирусные гепатиты / С.Н. Соринсон. СПб.: "ТЕЗА", 1998.-325 с.

57. Стельмах, В.В. Морфофункциональное состояние мононуклеарных фагоцитов у больных хроническим вирусным гепатитом В и С при проведении этиопатогенетической терапии : автореферат дис. канд. мед. наук / В.В. Стельмах. — Санкт-Петербург, 2003. 23 с.

58. Стратегия и тактика диагностики и лечения вирусных гепатитов / Рахманова А.Г. и др., СПб., 1998. -32 с.

59. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович // М.: Медицина. 2000. - 432 с.

60. Хаитов, P.M. Оценка иммунного статуса в норме и при патологии / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2001. - №4. — С. 61 - 64.

61. Шарара, А. Гепатит С. / А. Шарара, С. Хант, Д. Гамильтон // Междунар. журн. мед. практики. 1997. - №2. - С. 35 - 37.

62. Шахгильдян, Д.И. Эпидемиология парентеральных вирусных гепатитов в России / Д.И. Шахгильдян // Рос. журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колонопроктологии. — 2001. №4. — С. 46 - 47.

63. Шевченко, Ю.Л. Безопасное переливание крови: руководство для врачей / Ю.Л. Шевченко, Е.Б. Жибурт. -СПб.: «Питер». 2000. - С. 14 - 37.

64. Ющук, Н.Д. Закономерности персистенции HCV в плазме и лейкоцитах при хронической HCV-инфекции / Н.Д. Ющук, О.О. Знойко, Е.А. Климова // Рос. журн. гастроэнерол., гепатол., колопроктол. 2000, № 4. -С.59-63.

65. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин // М. : Медицина. -1999.-608 с.

66. Aizaki, Н., Characterization of the hepatitis С virus RNA replication complex associated with lipid rafts / H. Aizaki, K. Lee, V. M.-H. Sung // Virology. -2004. -V. 324. -P.450 461.

67. Alary, M. Lack of evidence of sexual transmission of hepatitis С virus in a prospective cohort study of men who have sex with men / M. Alary, J.R. Joly, J. Vincelette // Am. J. Public Health. 2005. - Vol. 95. - P. 502 - 505.

68. AH, N. Cell-free replication of the hepatitis С virus subgenomic replicon / N. Ali, K. D. Tardif, A. Siddiqui // J. Virol. 002. - Vol. 76. - P. 12001 - 12007.

69. Allander, T. Hepatitis С virus envelope protein E2 binds to CD81 of tamarins / T. Allander, X. Forns, S. U. Emerson // J. Virology. 2000. -Vol. 277. - P. 358 - 367.

70. Alter, H. J. Hepatitis С virus and eliminating post-transfusion hepatitis / H.J. Alter, M. Houghton // Nat. Med. 2000. - Vol. 6. - P. 1082 - 1086.

71. Analysis of a successful immune response against hepatitis С virus / S. Cooper et al. // Immunity. 1999. - Vol.10. - P.439 - 449.

72. Analysis of successful immune responses in persons infected with hepatitis С virus / Lechner, F., J. et al. // Exp. Med. 2000. - V. 191. - P. 1499 - 1512.

73. Analysis of the binding of hepatitis С virus genotype la and lb E2 glycoproteins to peripheral blood mononuclear cell subsets / EJ.Yamada et al. // J. Gen. Virol. 2005. -Vol. 86. - P. 2507 - 2512.

74. Association of hepatitis С virus-specific CD8+ T cells with viral clearance in acute hepatitis С / N. H. Griiner et al. // J. Infect. Dis. -2000. Vol. 181. -P. 1528 - 1536.

75. Bartenschlager, R. Efficient hepatitis С virus cell culture system: What a difference the host cell makes / R. Bartenschlager, T. Pietschmann // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. - Vol. 102. - P. 9739 - 9740.

76. Bartenschlager, R. Replication of hepatitis С virus / R. Bartenschlager, V. Lohmann//J. Gen. Virol. -2000.-Vol. 81.-P. 1631 1648.

77. Bartosch, B. Infectious hepatitis С vims pseudo-particles containing functional E1-E2 envelope protein complexes / B. Bartosch, J. Dubuisson, F. L. Cosset // J. Exp. Med. 2003. Vol. 197. - P. 633 - 642.

78. Blight, K. J. Efficient replication of hepatitis С virus genotype la RNAs in cell culture / K.J. Blight, J. A. McKeating, J. Marcotrigiano J. Virol. 2003. -Vol.77.-P.3181 -3190.

79. Blight, K. J. Highly permissive cell lines for subgenomic and genomic hepatitis С virus RNA replication / KJ. Blight, J. A. McKeating, С. M. Rice // J. Virol.-2002. Vol. 76. - P. 13001 - 13014.

80. Bressanelli, S. Structural analysis of the hepatitis С vims RNA polymerase in complex with ribonucleotides / S. Bressanelli, S., L. Tomei, F. A. Rey // J. Virol. -2002. Vol. 76. -P. 3482-3492.

81. Brodsky, F.M. Tissue antigens / F.M. Brodsky et al. // Hum. Immunol. 1996. - Vol.47. -P.464 - 471.

82. Brossard, Y. Incompatibilites foeto-maternelles erythrocytaires: role du biologiste / Y. Brossard, V. de Lachaux // Caf. Format. Boil. Med. 1995. N1. - P. 95 - 97.

83. Brown, R. J. P., Cross-genotype characterization of genetic diversity and molecular adaptation in hepatitis С virus envelope glycoprotein genes / R. J. P. Brown, A. W Tarr, C. P. McClure // J. Gen. Virol. 2007. - Vol. 88. - P. 458 -469.

84. Budhu, A. The role of cytokines in hepatocellular carcinoma / A. Budhu, X.W. Wang // J. Leukoc. Biol. 2005. - Vol. 80. - P. 1197 - 213.

85. Bullm, J J. Theory of Lethal Mutagenesis for Viruses / J. J. Bull, R. Sanjuan, С. O. Wilke // Journal of Virology. 2007. - Vol. 81. - No. 6. - P. 2930 - 2939.

86. Burton, D. R. A model for neutralization of viruses based on antibody coating of the virion surface / D.R. Burton, E. Q. Saphire, P. W. H. I. Parren // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 2001. - Vol. 260. - P. 109 - 144.

87. CD ld-restricted NfCT cells express a chemokine receptor profile indicative of ТЫ-type inflammatory homing cells / S.Y. Thomas et al. J. Immunol. Vol. 171.-P. 2571 -2580.

88. Cerny, A. Pathogenesis of chronic hepatitis C: immunological features of hepatic injury and viral persistence / A. Cerny, F. V. Chisari // Hepatology. -1999. Vol. 30.-P. 595 - 601.

89. Chemello, L. Hepatitis С serotype and response to interferon therapy / L. Chemello, A. Alberti, K. Rose//NEngl J Med. 1994.-Vol.330.-P. 143 -144.

90. Chin, J. Immune response to orally consumed antigens and probiotic bacteria / J. Chin et al. // Immunol. And cell boil. 2000. - Vol. 78. - N1. -P.55 - 56.

91. Clinical application of hepatitis С virus core protein in early diagnosis of acute hepatitis С / M. Kobayashi et al. // J. Gastroenterology. -1998. Vol. 33.-№4.-P. 508-511.

92. Cocquerel, L. Hepatitis С virus entry: potential receptors and their biological functions // L. Cocquerel, C. Voisset, J. Dubuisson // J. Gen. Virol.2006.-Vol.87.-P. 1075 1084.

93. Comparative analysis of anti-hepatitis С virus activity and gene expression mediated by alpha, beta, and gamma interferons / I.W. Cheney, et al. // J. Virol. 2002. - Vol.76. - P. 11148 - 11154.

94. Compartmentalization of Hepatitis С Vims Quasispecies in Blood Mononuclear Cells of Patients with Mixed Cryoglobulinemic Syndrome /G. Zehender et al.// Journal of Virology. July 2005. Vol. 79. - No. 14. - P. 9145-9156.

95. Conte, D. Prevalence and clinical course of chronic hepatitis С virus infection and rate of HCV vertical transmission in a cohort of 15, 250 pregnant women / D. Conte // Hepatology. -2000. -Vol.31. -P.751-755.

96. Cost effectiveness of interferon a2b combined with ribavirin for the treatment of chronic hepatitis С / Z.M.Younossi et al. // Hepatology. 1999. -Vol. 30.-P. 1318- 1324.

97. Cross-genotype characterization of genetic diversity and molecular adaptation in hepatitis С virus envelope glycoprotein genes / R.J. Brown, et al. // J. Gen. Virol. 2007. - Vol. 88. - P. 458 - 469.

98. Dahari, H. Mathematical Modeling of Subgenomic Hepatitis С Virus Replication in Huh-7 Cells / H. Dahari, R.M. Ribeiro, C.M. Rice // J. Virol.2007. Vol. 81. - P. 750 - 760.

99. Determinants of viral clearance and persistence during acute hepatitis С virus infection / R.D. Thimme et al. // J. Exp. Med. -2001. V.194. - P. 1395 - 1406.

100. Di Bisceglie, A. M. Optimal therapy of hepatitis С / A. M. Di Bisceglie, J. H. Hoofnagle // Hepatology. 2002. - Vol. 36. - P. S121 - S127.

101. Diedrich, G. How does hepatitis С virus enter cells? / G. Diedrich // FEBS J. -2006. -Vol. 273. -P. 3871-3885.

102. Di Stefano, R. Endemic hepatitis С virus infection in a Sicilian town: Further evidence for iatrogenic transmission / R. Di Stefano, T. Stroffolini, D. Ferraro // J. Med Virol. -2002. Vol.67. - P. 339 - 344.

103. Diverse CD81 Proteins Support Hepatitis С Virus Infection / M .J. Flint et al.// J. Virol. 2006. - Vol. 80. - P. 11331 - 11342.

104. Flint, M. Characterization of hepatitis С virus E2 glycoprotein interaction with a putative cellular receptor, CD81 / M. Flint, C. Maidens, L. D. Loomis-Price // J. Virol. -1999. Vol. 73. - P. 6235 - 6244.

105. Forns, X. Nosocomial transmission of HCV in the liver unit of a tertiary care center / X. Forns, E. Martinez-Bauer, A. Feliu // Hepatology. 2005. -Vol. 41.-P. 115-122.

106. Functional properties of a monoclonal antibody inhibiting the hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase / D.E. Moradpour // J. Biol. Chem. -2002. Vol.277. - P. 593 - 601.

107. Gardner, J. P. L-SIGN (CD 209L) is a liver-specific capture receptor for hepatitis С virus / J.P. Gardner, R. J. Durso, R. R. Arrigale // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2003. Vol. 100. P. 4498 - 4503.

108. Genetic drift in hypervariable region 1 of the viral genome in persistent hepatitis С virus infection / N. Kato et al. // J. Virol. -1994. Vol. 68. - P. 4776 - 4784.

109. Genomic analysis of the host response to hepatitis С virus infection / A. I. Su et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. - Vol. 99. - P. 15669 -15674.

110. Gosert, R. Identification of the hepatitis С virus RNA replication complex in Huh-7 cells harboring subgenomic replicons / R. Gosert, D. Egger, V. Lohmann // J. Virol. 2003. - Vol. 77. - P. 5487 - 5492.

111. Gresswell, P. Antigen recognition / P. Gresswell// Curr. Opinion Immunol. -1999. Vol. 11. - N1. - P.61 - 63.

112. Gu, B. Replication studies using genotype la subgenomic hepatitis С virus replicons /В. Gu, A. T. Gates, O. Isken // J. Virol. 2003. - V.77. - P. 5352 - 5359.

113. Guidotti, L. G. Noncytolytic control of viral infections by the innate and adaptive immune response / L.G. Guidotti, F. V. Chisari //Annu. Rev. Immunol. 2001. - Vol.19. - P. 65-91.

114. Guo, J. Т., V. V. Bichko, and C. Seeger. 2001. Effect of alpha interferon on the hepatitis С virus replicon. J. Virol. 75:8516 8523.

115. Hepatitis С Virus (HCV) Core Protein-Induced, Monocyte-Mediated Mechanisms of Reduced IFN-{alpha} and Plasmacytoid Dendritic Cell Loss in

116. Chronic HCV Infection / A. Dolganiuc et al. // J. Immunol. 2006. - Vol. 177.-P. 6758-6768.

117. Hessner, M. Genotyping of KEL1 and KEL2 of human Kell blood group system by the polymerase chain reaction with sequence-specific primers /М. Hessner et al.//Transfusion, 1996. V.36. -N6.-P.495 - 499. US.

118. High Density Lipoprotein Inhibits Hepatitis С Virus-neutralizing Antibodies by Stimulating Cell Entry via Activation of the Scavenger Receptor BI / M. Dreux et al.// J. Biol. Chem. 2006. - Vol.281. - P. 18285 - 18295.

119. Human monoclonal antibody to hepatitis С virus El glycoprotein that blocks virus attachment and viral infectivity / Z. Y. Keck et al. // J Virol. -2004. Vol. 78. r P. 7257 - 7263.

120. Identification and biological characterization of heterocyclic inhibitors of the hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase / D. Dhanak et all. // J. Biol. Chem. 2002. - Vol.277. - P. 38322-38327.

121. Immunoglobulin M and A antibodies to hepatitis С core antigen in chronic hepatitis С virus infection / G.K. Lau et al. // J. Med. Virol. 1994. -V. 44.-P. 1-4.

122. Impaired effector function of hepatitis С virus-specific CD8+ T cells in chronic hepatitis С virus infection / H.X. Wedemeyer et all. // J. Immunol. -2002. -Vol. 169. P. 3447-3458.

123. Inhibition of hepatitis С virus RNA replication by 2'-modified nucleoside analogs / S.S. Carroll et al. // J. Biol. Chem.-2003. Vol.278. -P. 11979- 11984.

124. Interferon alfa-2b alone or in combination with ribavirin as initial treatment for chronic hepatitis С / J.G. McHutchison et al. // N. Engl. J. Med. 1998. - Vol.339. - P. 1485 - 1492.

125. Interferon-gamma inhibits replication of subgenomic and genomic hepatitis С virus RNAs / M.V. Frese et all.// Hepatology. 2002. - Vol. 35. -P. 694 - 703.

126. Issit, P.D. Applited blood group serology / P.D. Issit, D. Anstee // 4th ed. Scientific Publucation. USA. 1998. - 1208 p.

127. Kapprell, H.P. Demonstration of specific detection of anti-HCV IgM core antibodies / H.P. Kapprell, G. Michel, H. Hampl // J. Virol. Methods. — 1996. V.59.№ 1-2.-P.121 - 126.

128. Kao, J.H. Immunoglobulin M antibody response to hepatitis С virus core protein in patients with chronic hepatitis С / J. H. Kao, M.Y. Lai, P.J. Chen // J. Formos Med. Assoc. -1997. -Vol. 96. -№ 10. -P.825-828.

129. Karayiannis, P. Hepatitis vaccines / P. Karayiannis, J. Main, H.C. Thomas // Br Med Bull. 2004. - Vol. 70. - P. 29 - 49.

130. Keefe, E. Differential response to treatment with consensus interferon (CIFN) and IFN a-2b in chronic HCV patients infected with different HCV serotypes / E. Keefe, L.M. Blatt, G. Dusheiko // Hepatology. 1996. Vol.24. -P.275A. Abstract.

131. Kinetics of CD4+ and CD8+ memory T-cell responses during hepatitis С virus rechallenge of previously recovered chimpanzees /М.Е. Nascimbeni et al. // J. Virol. 2003. - Vol.77. - P.4781-4793.

132. Lai, V. C. Lau In vitro RNA replication directed by replicase complexes isolated from the subgenomic replicon cells of hepatitis С virus / V. Lai, C., S. Dempsey, J. Y. Lau // J. Virol. 2003. - Vol. 77. - P. 2295 - 2300.

133. Lau, J.Y.N. Application of Hepatitis С virus (HCV) subtyping in chronic Hepatitis С in the United States / J.Y.N. Lau, G.L. Davis, T. Ohno // Hepatology. 1993. Vol. 18. - P. 149A. Abstract.

134. Lee S. Molecular basis for the high-incidence antigens of the Kell blood group system / S. Lee et al. // Transfusion. 1997. - Vol.37. - N 11/12. - P. 1117-1122. US.

135. Lerat, H. S. In vivo tropism of hepatitis С virus genomic sequences in hematopoietic cells: influence of viral load, viral genotype, and cell phenotype/ H.S. Lerat, F. Rumin, F. Habersetzer // Blood. -1998. Vol. 91. - P. 3841 -3849.

136. Levy, S. S. C. CD81 (TAPA-1): a molecule involved in signal transduction and cell adhesion in the immune system / S.S. Levy, C. Todd, H. T. Maecker // Annu. Rev. Immunol. 1998. -Vol. 16. - P. 89 - 109.

137. Liang, T. J. Pathogenesis, natural history, treatment, and prevention of hepatitis С / T.J. Liang, B. Rehermann, L. B. Seeff // Ann. Intern. Med. 2000. -Vol. 132.-P. 296-305.

138. Lindenbach, B. D., Complete Replication of Hepatitis С Virus in Cell Culture / B.D. Lindenbach, MJ. Evans, A.J. Syder // Science. -2005. -Vol. 309. -P. 623 626.

139. Lohmann, V. Replication of subgenomic hepatitis С vims RNAs in a hepatoma cell line / V. Lohmann, F. Korner, J. Koch // Science. -1999. Vol. 285. — P. 110-113.

140. L-SIGN (CD 209L) is a liver-specific capture receptor for hepatitis С virus / J.P. Gardner et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2003. -Vol.100. -P. 4498-4503.

141. Machida, K., Hepatitis С Virus E2-CD81 Interaction Induces Hypermutation of the Immunoglobulin Gene in В Cells / K. Machida, К. T-H. Cheng, N. Pavio // J. Virol.-2005. Vol. 79. - P. 8079 - 8089.

142. Machida, K. Hepatitis С Virus Induces Toll-Like Receptor 4 Expression, Leading to Enhanced Production of Beta Interferon and Interleukin-6 / K. Machida, К. T.-H. Cheng, V. M.-H. Sung // J. Virol. 2006. - Vol.80. - P. 866-874.

143. Mahaney, K. Genotypic analysis of Hepatitis С virus in American patients / K. Mahaney, V. Tedeschi, G. Maertens // Hepatology. 1994. -Vol.20.-P.1405-1411.

144. Maio, G. Hepatitis С virus infection and alanine transaminase levels in the general population: A survey in a Southern Italian town /G. Maio // J. Hepatol. 2000. - Vol.33. - P. 116 - 120.

145. Marincovich, B. Absence of hepatitis С virus transmission in a prospective cohort of heterosexual serodiscordant couples / B. Marincovich, J. Castilla, J. Del Romero// J. Sex. Transm. Dis. 2003. - Vol. 79. - P. 160 -162.

146. Martinelli, A. L. Quantitative assessment of hepatitis С virus RNA and IgM antibodies to hepatitis С core in chronic hepatitis С / A.L. Martinelli, D. Brown, H.-B. Braun // J. Hepatology. 1996. - Vol. 24. - P.21 - 26.

147. Mutations in the nonstructural protein 5A gene and response to interferon in patients with chronic hepatitis С virus lb infection / N. Enomoto et al. // N. Engl. J. Med. 1996. -Vol. 334. - P.77 - 82.

148. Okamoto, H. S. Superinfection of chimpanzees carrying hepatitis С virus of genotype Il/lb with that of genotype III/2a or I/la / H.S. Okamoto, H. Mishiro,F. Tokita//Hepatology. -1994.-Vol. 20.-P. 1131-1136.

149. Peginterferon alfa-2a plus ribavirin for chronic hepatitis С virus infection / M.V. Fried et al.//N. Engl. J. Med. 2002. - V. 347. - P. 975 - 982.

150. Peginterferon alfa-2b plus ribavirin compared with interferon alfa-2b plus ribavirin for initial treatment of chronic hepatitis C: a randomised trial / M.P.Mannus et al. // Lancet. 2001. - Vol. 358. - P. 958 - 965.

151. Pietschmann, T. Tissue culture and animal models for hepatitis С virus / T. Pietschmann, R. Bartenschlager // Clin. Liver Dis.-2003. Vol.7. - P. 23 -43.

152. Plasma chemokine levels correlate with the outcome of antiviral therapy in patients with hepatitis С/ D. Butera et al. // Blood. 2005. - Vol.106. - P. 1175- 1182.

153. Preclinical Evaluation of Two Neutralizing Human Monoclonal Antibodies against Hepatitis С Virus (HCV): a Potential Treatment To Prevent

154. HCV Reinfection in Liver Transplant Patients / R. Eren et al. // Journal of Virology. March 2006. - Vol. 80. -N 6. - P. 2654 - 2664.

155. Preferential association of Hepatitis С virus with apolipoprotein IMS-containing lipoproteins / O. Diaz et al. // J. Gen. Virol. 2006. - Vol.87. -P.2983 -2991.

156. Prevention of hepatitis С virus infection in chimpanzees by hyperimmune serum against the hypervariable region 1 of the envelope 2 protein / P. Farci et all. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol. 93. - P. 15394- 15399.

157. Qu, D. Hepatitis С virus genotypes in France: comparison of clinical features of patients infected with HCV type I and type П / D. Qu, J-S. Li, L. Vitvitski // J. Hepatol. 1994. Vol.21. -P.70 - 75.

158. Randomised trial of interferon a2b plus ribavirin for 48 weeks or for 24 weeks versus interferon a2b plus placebo for 48 weeks for treatment of chronic infection with hepatitis С virus / T. Poynard et al. // Lancet. -1998. Vol.352. - P. 1426 - 1432.

159. Ray, S. C. Genetic epidemiology of hepatitis С virus throughout / S. C. Ray, R. R. Arthur, A. Carella // Egypt. J. Infect. Dis. 2000. - V.182. - P.698 -707.

160. Real-time detection system for quantification of hepatitis С virus genome / T.A. Takeuchi // Gastroenterology. -1999. Vol. 116. - P. 636 - 642.

161. Repression of Interferon Regulatory Factor 1 by Hepatitis С Virus Core Protein Results in Inhibition of Antiviral and Immunomodulatory Genes / A.R. Ciccaglione et al. // J. Virol.- 2007. Vol.81. - P. 202 - 214.

162. Ross, R.S. Risk of hepatitis С virus transmission from an infected gynecologist to patients / R.S. Ross, S. Viazov, M. Thormalen // Arch Intern Med. 2002. - Vol. 162. - P. 805-810.

163. Sarisky, R. T. Non-nucleoside inhibitors of the HCV polymerase / R.T. Sarisky // J. Antimicrob Chemother. -2004. -Vol.54. P. 14 - 16.

164. Scavenger Receptor BI and BII Expression Levels Modulate Hepatitis С Virus Infectivity /J. Grove, et al.// J. Virol.- 2007. Vol. 81. - P. 3162 -3169.

165. Schneider-Schaulies, J. Cellular receptors for viruses: links to tropism and pathogenesis / J. Schneider-Schaulies // J. Gen. Virol. 2003. - Vol. 81. — P.1413 - 1429.

166. Shaw, M. L. Characterisation of the differences between hepatitis С virus genotype 3 and 1 glycoproteins / M.L. Shaw, J. McLauchlan, P. R. Mills // J. Med. Virol. 2003. - Vol. 70. - P. 361 -3 72.

167. Slifka, M.K. NK markers are expressed on a high percentage of virus-specific CD8+ and CD4+ T cells / M.K. Slifka, R. R. Pagarigan, J. L. Whitton // J. Immunol. 2000. - Vol.164. - P. 2009 - 2015.

168. Soni, P. Genetic, diversity of hepatitis С virus: Implication for pathogenesis treatment and prevention / P. Soni, G.M. Pusheiko, A.P. Dhillon // Lancet. 1995. Vol. 345. - P.562 - 566.

169. Strain-Specific T-Cell Suppression and Protective Immunity in Patients with Chronic Hepatitis С Virus Infection / S. Kazushi et al. // Journal of Virology. 2005. - Vol.79. - No 11. - P. 6976 - 6983.

170. Sugiyama, K. Genetic analysis of the hepatitis С virus (HCV) genome from HCV-infected human T cells / K. Sugiyama, N. Kato, T. Mizutani // J. Gen. Virol. 1997. - Vol. 78. - P.329 - 336.

171. Takada, N. Differences in the Hepatitis С vims genotypes in different countries / N. Takada, S. Takase, A. Takada // J. Hepatol. 1993. Vol. 17. - P. 277 - 283.

172. Vandelli, C. Lack of evidence of sexual transmission of hepatitis С among monogamous couples: Results of a 10-year prospective follow-up study / C. Vandelli, F. Renzo, L. Romano // Am. J. Gastroenterol. 2004. - Vol. 99. -P. 855 - 859.

173. Viral and immunological determinants of hepatitis С virus clearance, persistence, and disease / R.J. Thimme et all. Proc. Natl. Acad. Sci. USA/ -2002. Vol. 99. - P. 15661 - 15668.

174. Von Kiparski S. Rh blood group, antigens update / S. Von Kiparski et al. // Clin. Lab. - 2000. - Vol.4. - N 1-2. -P.17 - 22.

175. Wasley, A. Epidemiology of hepatitis C: geographic differences and temporal trends / A. Wasley, M. J. Alter // Semin. Liver Dis. -2000. Vol. 20. -P. 1 - 16.

176. Wong, J.B. Estimating future hepatitis С morbidity, mortality, and costs in the Unated States / J.B. Wong, G.M. McQuillan, J.G. McHutchinson // Aim J. Pulic Health. 2000. Vol.90. - P. 1562 - 1569.

177. Welbourn, S. Hepatitis С Virus NS2/3 Processing Is Required for NS3 Stability and Viral RNA Replication /S. Welbourn, R. Green, L. Gamache // J. Biol. Chem. 2005. - Vol.280. - P. 29604 - 29611.

178. Wieland, S. F., Stealth and Cunning: Hepatitis В and Hepatitis С Viruses/ S.F. Wieland, F.V. Chisari // J. Virol. 2005. - V.79. - P. 9369-9380.

179. Yi, M. Adaptive mutations producing efficient replication of genotype la hepatitis С virus RNA in normal Huh7 cells / M. Yi, S. M. Lemon // J. Virol. -2004. Vol. 78. - P. 7904 - 7915.

180. Yi, M. From the Cover: Production of infectious genotype la hepatitis С virus (Hutchinson strain) in cultured human hepatoma cells / M. Yi, R.A. Villanueva, D.L. Thomas // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. - Vol.103. - P. 2310-2315.