Оптимизация методов криоконсервации спермы для сохранения генофонда осетровых рыб тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.06, кандидат биологических наук Богатырева, Мария Михайловна

• Богатырева, Мария Михайловна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Богатырева, Мария Михайловна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Применение методов криобиологии для сохранения биоразнообразия

1.2. Общие принципы криоконсервации генетического материала рыб

1.3. Криоконсервация спермы лососевых рыб

1.4. Криоконсервация спермы карповых рыб

1.5. Криоконсервация спермы осетровых рыб

1.6. Криоконсервация спермы перспективных объектов аквакультуры

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА III. ОПТИМИЗАЦИЯ СОСТАВА КРИОПРОТЕКТОРА ДЛЯ СПЕРМЫ ОСЕТРОВЫХ РЫБ

3.1. Использование криопротекторов для краткосрочного хранения спермы

3.2. Подбор криопротекторов для глубокого замораживания половых клеток в жидком азоте

ГЛАВА IV. УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ПРОЦЕССА КРИОКОНСЕРВАЦИИ РЕПРОДУКТИВНЫХ КЛЕТОК ОСЕТРОВЫХ РЫБ

4.1. Исследование метода электростимуляции половых клеток осетровых рыб

4.2. Выведение протектора из клеток после криоконсервации спермы осетровых рыб

4.3. Определение оптимальных параметров усовершенствованной схемы криоконсервации половых клеток осетровых рыб

ГЛАВА V. РЕЗУЛЬТАТЫ ОСЕМЕНЕНИЯ ЯЙЦЕКЛЕТОК ОСЕТРОВЫХ РЫБ ДЕФРОСТИРОВАННОЙ СПЕРМОЙ

5.1. Оплодотворение икры дефростированной спермой в лабораторных условиях

5.2. Оплодотворение икры дефростированной спермой в 89 условиях рыбоводного завода

5.3. Поведенческие реакции молоди русского осетра, полученной с 95 помощью нативной и криоконсервированной спермы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оптимизация методов криоконсервации спермы для сохранения генофонда осетровых рыб»

Актуальность проблемы. Антропогенное влияние на гидрологические условия и трофику рыб привело не только к снижению численности ценных видов пресноводных, солоноводных, проходных и морских рыб, но и к исчезновению отдельных видов. Обеднение генофонда происходит и в результате селекционных мероприятий, предполагающих отбор для разведения лишь части наиболее продуктивных рыб.

В последние годы в экосистемах водоемов наблюдаются существенные изменения, в результате которых произошло снижение численности осетровых рыб. В связи с этим основным источником формирования и поддержания запасов осетровых стало их искусственное воспроизводство. Однако в настоящее время отмечается снижение масштабов заводского воспроизводства. Одной из причин этого является отсутствие возможности заготовки производителей с высокими рыбоводно-продуктивными показателями.

Возникла необходимость разработки разнообразных подходов использования и сохранения популяционного генофонда производителей естественной генерации для целей искусственного воспроизводства.

Криоконсервация остается одним из наиболее привлекательных и быстроразвивающихся направлений сохранения редких исчезающих видов. Наличие в криобанке генетически репрезентативных коллекций геномов рыб и маточных стад на осетровых рыбоводных заводах позволяет с максимальным эффектом сохранить генетическое разнообразие этих ценных промысловых объектов.

В настоящее время разработаны методики криоконсервации половых продуктов рыб, в частности осетровых (Копейка, 1986; Цветкова и др., 1997; Linhart et., 2009). Однако результаты часто невоспроизводимы и не всегда обеспечивают высокий процент выживаемости дефростированных сперматозоидов. Это связано с тем, что на процесс криоконсервации оказывает влияние большое количество факторов: физиологическое состояние производителей, качество половых продуктов, индивидуальные особенности рыб разных популяций, физические факторы и т.д. Кроме того, отрицательное воздействие на клетки оказывает охлаждение, поэтому очень важно подобрать криозащитные среды и криопротекторы. В сложившейся ситуации проблема сохранения генофонда осетровых рыб путем глубокого замораживания является актуальной.

Целью работы явилась разработка новых методов криоконсервации половых клеток осетровых рыб для сохранения их генофонда.

Поставленная цель определила следующие задачи:

- исследовать компоненты криосред и подобрать оптимальные протекторы для криоконсервации спермы осетровых видов рыб (русский осетр, севрюга);

- изучить действие электростимуляции на половые клетки осетровых рыб для увеличения проницаемости мембран;

- разработать метод выведения криопротектора из дефростированных половых клеток осетровых рыб;

- усовершенствовать стандартную технологию криоконсервации при введении новых биотехнологических методов;

- установить возможность использования криоконсервированного генетического материала для оплодотворения икры в целях искусственного воспроизводства в лабораторных условиях и на рыбоводных предприятиях;

Научная новизна. Подобран оптимальный состав криосреды, способствующий увеличению выживаемости дефростированных клеток осетровых рыб: Научно обосновано использование метода электростимуляции в процессе криоконсервации для усиления проникновения протекторов внутрь половых клеток осетровых рыб, определен механизм усиления протекторного действия при воздействии низкочастотным током, установлены оптимальные параметры электрического сигнала. Обосновано использование метода выведения криопротектора из дефростированных половых клеток рыб. Использование новых методов криоконсервации позволило усовершенствовать стандартную биотехнологию сохранения клеточного материала редких и исчезающих видов осетровых рыб. Дефростированный клеточный материал, сохраненный по новой технологии, впервые использован для оплодотворения крупной партии икры русского осетра и получения жизнеспособного потомства.

Практическая значимость. Результаты настоящей работы могут быть использованы для создания криобанков редких и исчезающих видов рыб с целью сохранения их генофонда, для увеличения эффективности процесса криоконсервации репродуктивных клеток осетровых рыб, для повышения выживаемости сперматозоидов после оттаивания. Усовершенствованная технология низкотемпературного консервирования половых клеток может применяться на предприятиях, занимающихся воспроизводством и товарным выращиванием осетровых видов рыб.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Новый криораствор для половых клеток осетровых рыб с оптимальным подбором протекторов.

2. Метод электростимуляции для усиления проникновения криопротекторов через клеточные мембраны.

3. Метод выведения протектора из дефростированных клеток.

4. Усовершенствованная биотехнология криоконсервации половых клеток осетровых рыб.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы докладывались на ежегодных студенческих научных конференциях Астраханского государственного технического университета (АГТУ) в 20052006 гг., на ежегодных научных конференциях студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН (Ростов-на-Дону, 2006-2009 гг.), на международной конференции «Состояние и перспективы развития фермерского рыбоводства аридной зоны» (Азов, 2006 г.), на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных» (Дубровицы, 2007 г.), на 11-й и 12-й Пущинской международной школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2007-2008 гг.), на международной научно-практической конференции «Инновационные технологии аквакультуры» (Ростов-на-Дону, 2009 г.), на VI международном симпозиуме по осетровым: Гармония и взаимоотношения между деятельностью человека и природой: на примере осетровых (Китай, г. Ухань, 2009 г.).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 28 работ, 2 из перечня, рекомендованного ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, пяти глав, содержащих описание результатов и обсуждения собственных исследований, заключения, выводов и рекомендаций производству, приложения. Общий объем 126 страниц с 30 рисунками, 11 таблицами, 2 приложениями. Список литературы включает 178 источников, из них 94 иностранных.

Заключение диссертации по теме «Ихтиология», Богатырева, Мария Михайловна

выводы

1. В результате исследований подобраны криопротекторы и оптимальный состав криосред, способствующий сохранению половых клеток в процессе криоконсервации. Установлена видоспецифичность в подборе протекторов для спермы осетровых рыб.

2. Использование цианокобаламина (витамин В12) в сочетании со средой Штайна на начальных этапах замораживания позволяет сохранить живые клетки осетровых рыб до 57%, что на 10% выше по сравнению с чистой средой Штайна.

3. Установлено увеличение показателей жизнеспособности дефростированных спермиев русского осетра при введении в криораствор протектора № 4 (БР — 80%, яичный желток - 10%, ДМСО - 10%), севрюги -протектора № 3 (БР - 80%, сахароза - 1,71 г/л, маннит - 0,98 г/л, яичный желток - 10%, ДМСО - 10%). При этом активность спермиев русского осетра составила 14%, время жизни - 270 с, севрюги - 50% и 430 с, соответственно.

4. Установлено, что при воздействии электрическим сигналом прямоугольной формы частотой 20 Гц, амплитудой сигнала 150 мВ на этапе эквилибрации увеличивается проникновение протектора в клетки. При воздействии электрическим сигналом в течение 1 минуты выживаемость дефростированной спермы русского осетра составляет 50%, время жизни 290 с, севрюги — 60% и 680 с, соответственно.

5. Показано, что выведение протектора из половых клеток после дефростации с использованием физиологического раствора оказывает положительное воздействие на качество биологического материала, при этом активность спермиев осетровых рыб увеличивается в 1,6 раза; время жизни в 1,5 раза.

6. Введение двух новых звеньев (электростимуляция и выведение протектора из дефростированных половых клеток) в процесс криоконсервации позволило усовершенствовать классическую биотехнологию замораживания и длительного хранения спермы осетровых рыб в жидком азоте, и повысить выживаемость спермиев в 1,5 раза.

7. Глубокое замораживание спермы осетровых рыб и хранение ее в жидком азоте при температуре -196°С в течение 2-х лет не оказывает негативного влияния на качество дефростированных клеток и их оплодотворяющую способность. При осеменении икры дефростированной спермой оплодотворение в лабораторных условиях у русского осетра составило 80-96%, в заводских условиях — 30%, выживаемость личинок составила 20%.

8. Оценка поведенческих реакций молоди, полученной из криоконсервированной спермы, которая заморожена по новой технологической схеме, выявила различия в двигательной активности и не показала различий по реактивности ЦНС от контрольной партии (Р>0,05), что подтверждает ее физиологическую полноценность.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для замораживания на начальных этапах и краткосрочного хранения спермы при температуре до -20°С рекомендуется использовать среду Штайна в сочетании с цианокобаламином в концентрации 0,5 мг/л.

2. Для глубокой заморозки и длительного хранения спермы осетровых рыб при температуре -196°С целесообразно использовать криорастворы следующего состава: № 4 для русского осетра (БР - 80%, яичный желток -10%, ДМСО - 10%), № 3 для севрюги (БР - 80%, сахароза - 1,71 г/л, маннит - 0,98 г/л, яичный желток - 10%, ДМСО - 10%).

3. Для увеличения проницаемости мембран половых клеток необходимо проводить электростимуляцию спермы прямоугольным электрическим сигналом частотой 20 Гц, амплитудой 150 мВ в течение 1 минуты.

4. При оттаивании образцов спермы и возвращении клеток в нормальные условия жизнедеятельности необходимо постепенное выведение криопротекторов в отмывающем растворе - 0,65% раствор NaCl.

5. Для получения стабильных результатов по выживаемости сперматозоидов после дефростации необходимо проводить криоконсервацию половых клеток осетровых рыб по усовершенствованной схеме.

6. Для оплодотворения яйцеклеток спермой, криоконсервированной по усовершенствованной технологии, рекомендуется использовать половые клетки высокого репродуктивного качества.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Богатырева, Мария Михайловна, 2010 год

1. Адлер Ю.П. Введение в планирование эксперимента // М.: Металлургия, 1969. 155 с.

2. Андреев А.А., Андреева Л.А., Тараховский И.С., Салихов И.С. Замерзание водных растворов в присутствии липосом // Биофизика живой клетки, 2000. Т. 9. - С. 20.

3. Андреев А.А., Петропавлов Н.Н. Замерзание растворов антифризных веществ рыб и ракообразных // Биофизика живой клетки, 1994. -Т. 6.-С. 65-67.

4. Андрияшева М.А., Черняева Е.В. Сохранение генетического разнообразия при производстве сиговых рыб. Сб. Инрыбпром, 2000. - Т. 2. -С. 62-63.

5. Артюхов в.Г., Ковалева Т.А., Шмелев В.П. Биофизика: учеб. пособие. Воронеж: Изд-во ВГУ, 1994. 336с.

6. Баранникова И.А., Никаноров С.И., Белоусов А.Н. Проблема сохранения осетровых России в современный период // Международ, конф. «Осетровые на рубеже XXI века». Тез. докл. Астрахань, КаспНИРХ, 2000. -С. 7-8.

7. Белоус A.M., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Биохимия мембран: Уч. пособие для биологических и медицинских специальностей вузов / Под ред. А.А. Болдырева. Кн.З. Замораживание и криопротекция. М.: Высшая Школа, 1987.-80с.

8. Бурцев И.А., Серебрякова Е.В. Долгосрочное хранение спермы при низкой температуре. Методическое пособие. М., 1969. 5 с.

9. Васнецов В.В. Этапы развития костистых рыб // Очерки по общим вопросам ихтиологии. М.-Л.: Изд-во АН СССР, 1953. С. 207-217.

10. Вепринцев Б.Н., Ротт Н.Н. Проблема сохранения генофонда // Консервация генетических ресурсов. Пущино: ИБК РАН. - 1984. - 48 с.

11. Вернадский В.И. Биосфера и ноосфера. М.: Астрис-пресс, 2004.576 с.

12. Глаговски Я., Кольман Р., Сечиньски П., Пирос П. Оценка качества криоконсервированных молок сибирского осетра // «Осетровые на рубеже XXI века». Астрахань, 2000. С. 229-230.

13. Дзюба Б., Боришполец С., Стейскал В., Линхарт О. Криоконсервация спермы европейского окуня Perca fluviatilis L. с использованием метанола в качестве криопротектора // Биофизика живой клетки, 2008. Т. 9.- С. 48.

14. Дрокин С.И., Черепанов В.В., Копейка Е.Ф., Шилин Н.И. Сахалинский осетр: как сохранить генофонд // Рыбное хозяйство, 1991. № 7. - С. 38-39.

15. Желтоножко О.В. Криоконсервация и создание низкотемпературного банка спермы лососей Дальнего Востока: Автореф. дис. канд. биол. наук. Лесные Поляны, Моск. обл., 1997. - 24 с.

16. Иванов А.П. Рыбоводство в естественных водоемах М.: Агропромиздат, 1988. - 367 с.

17. Калабухов Н.И., Никольский Г.В. Возможен ли анабиоз у рыб при замораживании // Рыбное хозяйство СССР, 1934. № 2- С. 24-26.

18. Карнаухов А.В. К вопросу об устойчивости химического состава атмосферы и теплового баланса Земли // Биофизика. Пущино, 1994. Т. 39, № 1.-С. 148-152.

19. Карнаухов В.Н., Карнаухов А.В. Катастрофы XXI века // Биофизика, 1999. Т. 44., № 1. - С. 147-148.

20. Касимов Р.Ю. Некоторые физиологические показатели естественной и заводской молоди, выращиваемой в различных условиях // Осетровые СССР и их воспроизводство, 1967. Вып. 1. - С. 18-20.

21. Касимов Р.Ю. Сравнительная характеристика поведения дикой и заводской молоди осетровых в раннем онтогенезе. Баку: Элм, 1980. - 135 с.

22. Катасонов В.Я., Ананьев В.И., Гахова Э.А. Низкотемпературный генетический банк редких и исчезающих видов рыб и водных беспозвоночных // Научно-практ. конференция. Пущино, 1995. С. 5-17.

23. Катасонов В.Я., Воронина В.П., Генералова Л.П. Влияние плотности посадки сеголеток и двухлеток на качество выращиваемых производителей карпа // III Всесоюз. совещ. по генетике, селекции и гибридизации рыб. Тарту, 1986. С. 244-246.

24. Катасонов В.Я., Пилиев С.А., Копейка Е.Ф. Коллекционный банк криоконсервированной спермы рыб // Рыбное хозяйство, 1988. № 6. - С. 6668.

25. Кловач Н.В. Экологические последствия крупномасштабного разведения кеты Oncorynchus keta: Автореф. дис. докт. биол. Наук. М., 2002. -48 с.

26. Кокоза А.А. Методы и критерии качества молоди осетровых рыб, выращенной на осетровых рыбоводных заводах // Биологические основы осетроводства. М.: Наука, 1983. - С. 178-190.

27. Копейка Е.Ф. Инструкция по низкотемпературному консервированию спермы карпа. М.: ВНИИПРХ, 1986. - 11 с.

28. Копейка Е.Ф., Белоус A.M., Пушкарь Н.С. Криоконсервация спермы рыб // Криоконсервация клеточных суспензий. Киев: Наукова Думка, 1983. - С. 204 - 216.

29. Копейка Е.Ф., Дрокин С.И., Черепнин В.А., Бех В.В., Грициняк И.И., Линник Т.П., Ишков Г.С. Опыт получения качественной спермы веслоноса (Polyodon spathula Walbaum 1792) и ее криоконсервация // Биофизика живой клетки, 2008. Т. 9. - С. 65-66.

30. Копейка Е.Ф., Новиков А.Н. Криоконсервирование спермы рыб // Криоконсервирование клеточных суспензий. Под ред. А.А. Цуцаевой. -Киев: Наукова Думка, 1983. С. 204-215.

31. Корниенко Е.М., Бондаренко В. А., Забродский Р.Ф. Использование двухкомпонентных сред для повышения осмотической устойчивости клеток в условиях низкотемпературной консервации // Биофизика живой клетки, 2008. Т. 9. — С. 67.

32. Коханская Е.М. Метод воспроизводства рыб с клейкими яйцевыми оболочками без предварительного обесклеивания. М.: Наука, 1980.-76 с.

33. Лакин Г.Ф. Биометрия. Учебное пособие для университетов и пед.институтов. М.: «Высшая школа», 1973. - 343 с.

34. Литвиненко А.И., Палубис С.Э. Сибирь край рыбный // Рыбоводство и рыболовство, 2000. - № 26. - С. 6-7.

35. Лозина-Лозинский Л.К. Очерки по криобиологии (Адаптация и устойчивость организмов и клеток к низким и сверхнизким температурам). -Л.: Изд-во «Наука», 1972. 288 с.

36. Лукьяненко В.И., Касимов Р.Ю., Кокоза А.А. Возрастно-весовой стандарт каспийских осетровых. Волгоград, 1984. - 228 с.

37. Манохина М.С., Ананьев В.И. Криоконсервация яйцеклеток и эмбрионов рыб // Рыбное хозяйство. Серия «Воспроизводство и пастбищное выращивание гидробионтов». -М., 2001. Вып. 3. — С. 33-35.

38. Манохина М.С., Ананьев В.И. Криоконсервация эмбрионов и личинок гидробионтов. Проблемы и перспективы // Биофизика живой клетки, 2008.-Т. 9.-С. 88-89.

39. Манохина М.С., Ананьев В.И. О криобиологических подходах к разработке методов криосохранения гамет и эмбрионов гидробионтов // Рыбное хозяйство. Серия «Воспроизводство и пастбищное выращивание гидробионтов». М., 2002. - Вып. 3. - С. 29-32.

40. Мирзоян А.В., Небесихина Н.А., Войнова Н.В., Чистяков В.А. Аскорбиновая кислота и лизин подавляют генотоксический эффект глубокой заморозки спермы русского осетра // Цитология. Санкт-Петер-бург: Наука, 2004. Т. 46, № 9. - С. 821-822.

41. Мухачев И.С. Биологические основы рыбоводства: учеб. пособие. Тюмень: Изд-во Тюменского государственного университета, 2004. 300 с.

42. Никоноров С.И., Витвицкая JI.B. Эколого-генетические проблемы искусственного воспроизводства осетровых и лососевых рыб. М.: Наука, 1993.-251с.

43. Персов Г.М. Дозирование спермиев как способ управления оплодотворением яйцеклеток осетровых // Доклады АН СССР, 1953. Т. 90, №6.-С. 1183-1185.

44. Пономарева Е.Н., Богатырева М.М., Антонова Н.А., Осипова В.П. Оптимизация процесса криоконсервации спермы осетровых рыб при использовании различных сред // Известия Самарского научного центра Российской академии наук, 2009. Т. 11, № 1(2). - С. 132-134.

45. Пронина, Н.Д., Цветкова Л.И., Савушкина С.И., Докина О.Б. Использование дефростированной спермы для осеменения икры карпа, сибирского осетра и белуги // Проблемы рыбного хозяйства АО внутренних водоемах. СПб., 1999. С. 180-182.

46. Пушкарь Н.С., Белоус A.M. Введение в криобиологию. Киев: Наукова Думка, 1978. - 127 с.

47. Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Копейка Е.Ф. Способ консервирования спермы рыб. А.с. 818578 (СССР). Опубликовано в Б.И., 1981.-М> 13.

48. Пушкарь Н.С. Вопросы криоконсервирования биологических объектов. Киев: Наукова Думка, 1978. - 131с.

49. Розанова Н.А., Розанов С.И. Биохимические аспекты проблемы криоконсервации // Биофизика живой клетки, 1994. Т. 6. - С. 40-46.

50. Розанов С.И. Место генетических криобанков в решении проблемы сохранения биоразнообразия // Биофизика живой клетки, 1994. Т. 6.-С. 8-13.

51. Руднева И.И., Чесалина Т.Л., Кузьминова Н.С. Ответные реакции молоди черноморской кефали на загрязнение мазутом // Экология, 2000. № 4. - С. 304-306.

52. Савушкина С.И. Воспроизводство осетровых рыб с использованием криоконсервированной спермы // Рыбное хозяйство. Серия «Аквакультура»: Информ. пакет ВНИЭРХ. «Проблемы сохранения геномов рыб». М., 1999. - Вып. I. - С. 39-42.

53. Савушкина С.И. Новые аспекты проблемы криоконсервации спермы рыб в связи с задачами рыборазведения // Современное состояние и перспективы развития аквакультуры в России. М., 2008. С. 188-201.

54. Савушкина С.И., Ерохин А.С. Опыт совершенствования способов криоконсервации спермы русского осетра и стерляди // Рыбное хозяйство. Серия «Аквакультура»: информ. пакет ВНИЭРХ «Проблемы сохранения геномов рыб». М., 1999. - Вып. I. - С. 43-45.

55. Тихомиров A.M. Повышение генетического разнообразия и рыбохозяйственной ценности молоди проходных рыб за счет использования криоконсервированной спермы редких и элитных производителей. // Первый конгресс ихтиологов России. М.: ВНИРО, 1997. С. 321.

56. Тихомиров A.M. Результаты криоконсервации сперматозоидов севрюги с использованием разных криопротекторов. // Консервация генетических ресурсов. Мат. XVI совещ. Пущино: ИБК РАН, 2002. - С. 5661.

57. Тихомиров A.M., Пономарева Е.Н. Электростимуляция мембран спермиев русского осетра облегчает проникновение криопротекторов внутрь клеток // Биофизика живой клетки, 2008. Т. 9 - С. 129-130.

58. Турдаков А.Ф. Воспроизводительная система самцов рыб: Развитие, строение, функционирование, свойства спермиев. Фрунзе: Илим, 1972.-280 с.

59. Фшшов В.Ю., Бучацький Л.П., Ногарев О.В. Крюконсерващя молок щуки и пл1тки // Рибогосподарська наука Укра'ши, 2009. № 3. - С. 9598.

60. Цветкова Л.И. Создание низкотемпературных коллекций геномов рыб и амфибий // Консервация генетических ресурсов: Мат. совещ. -Пущино, 1996. С. 89-93.

61. Цветкова Л.И., Савушкина СИ., Титарева Л.Н., Докина О.Б., Пронина Н.Д. Методич5еское пособие по криоконсервации спермы карпа, лососевых и осетровых видов рыб. М.: ВНИИ11РХ, 1997. - 11 с.

62. Черепанов В.В., Цветкова Л.И. Динамика криоустойчивости спермы карпа, полученной на этапах созревания молок // Тез. докл. второго симп. по экологической биохимии рыб. Ростов Великий, декабрь 1990. С. 269-270.

63. Черномашенцев А.И., Милыитейн В.В. Рыбоводство. М.: Легкая промышленность, 1983. -272 с.

64. Чуйко В. А. Механизм криозащитной эффективности и фармакологические свойства ДМСО // Криобиология, 1989. № 1. - С. 3 - 10.

65. Шмидт П.Ю., Платонов Г.П. Сезонность в отношениях рыб к низким температурам // ДАН СССР, 1938. Т. 19, № 3. - С. 177-180.

66. Штайн Г. Криоконсервация гамет рыб // Проблемы криобиологии, 1991. -№3.- С. 42-45.

67. Юрченко Т.Н. Влияние криопротекторов на биологические системы. Киев: Наукова Думка, 1989. - 98 с.

68. Alavi S.M.H., Cosson J., Karami M., Amiri B.M., Akhoundzadeh M.A. Spermatozoa motility in the Persian sturgeon, Acipenser persicus: effects of pH, dilution rate, ions and osmolality // Reproduction, 2004. V. 128. - P. 819828.

69. Alavi S.M.H., Rodina M., Viveiros A.T.M., Cosson J., Gela D., Boryshpolets S., Linhart O. Effect of osmolality on sperm morphology, motility and flagellar wave parameters in Northern pike (Esox lucius L.) I I Theriogenology, 2009.-V. 72.-P. 32-43.

70. Alavi S.M.H. Sperm motility analysis for sturgeons // Proceedings International Workshop "Cryopreservation of sturgeon sperm", 28 October 2009, Wuhan, China-P. 12-20.

71. Alderson R., Macneil AJ. Preliminary Investigations of Cryopreservation of Milt of Atlantic Salmon (Salmo salar) and its Application to Commertial Farming // Aquaculture, 1984. V. 43. - P. 351-354.

72. Aracawa Т., Carpenter J.F., Kita Y.A., Crowe J.H. The basis for toxity of certain cryoprotectants: a hypotesis // Cryobiology, 1990. V. 27. - P. 401-405.

73. Baynes S.M., Scott A.P. Cryopreservation of rainbow trout spermatozoa: the influence of sperm quality and extender composition on post-thaw fertility // Aquaculture, 1987. V. 66, № 1. - p. 53-57.

74. Billard R., Cosson J., Crim L.W., Suquet M. Sperm physiology and quality // Broodstock Management and egg and larval quality. N. Bromage and RJ. Roberts. Eds. Blackwell Science, 1995. P. 25-52.

75. Billard R., Cosson J., Noveiri S.B., Pourkazemi M. Cryopreservation and short-term storage of sturgeon sperm, a review // Aquaculture, 2004. V. 236 (1-4). - P. 1-9.

76. Billard R. Cryopreservation of rainbow trout sperm by deep freezing // Reprod. Nutr. Dev., 1980. V. 20. - P. 1859-1868.

77. Blaxter J.H.S. Sperm storage and cross-fertilization of spring and autumn spawning herring // Nature, 1953. V. 172. - P.l 189-1190:

78. Blaxter J.H.S. Herring rearing. 1. The storage of herring gametes // Mar. Res. Scot., 1955, № 3. P. 1-22.

79. Borodin N.A. The anabiosis or phenomenon of resuscitation of fishes after being frozen // Zool. Jahrb. Abt. allg. Zool., 1934. V. 53. - P. 313-342.

80. Boryshpolets S., Dzyuba В., Rodina M., li H., Hulak M., Linhart O. Freeze-thawing as the factor of spontaneous activation of spermatozoa motility in common carp (Cyprinus carpio L.) // Cryobiology, 2009. V. 10. - P. 5-8.

81. Brown G.G., Mims S.D. Cryopreservation of paddlefish Polyodon spathula milt// Journal of World aquaculture Society, 1999. V. 30. - P. 245-249.

82. Ciereszko A., Dabrowski K., Mims S.D., Glogowski J. Characteristic of sperm acrosin-like activity of paddlefish (Polyodon spathula W.) // Comparative Biochemistry Physiology B-Biochemistry and Molecular Biology, 2000. V. 125. -P. 197-203.

83. Chen Song Lin, Liu Xianting, Lu Dachun. Cryopreservation of Chinese carps spermatozoa and fertilization success // Marly le Roi. Franct, 30 March 2 April, 1992.-P. 37.

84. Cosson J., Linhart O. Paddlefish {Polyodon spathula) spermatozoa effects of potassium and pH on motility // Folia Zoologica, 1996. V. 45. - P. 361370.

85. Cosson J., Billard R., Cibert C., Dreanno C., Suquet M. Ionic factors regulating themotility of fish sperm // Gagnon C. (Ed.) From Basic Science the Male gamete to clinical application. Cache River press Vienna IL USA, 1999. P. 161-186.

86. De Beran P.D. Dimethyl sulfoxide as a potential pool for analysis of compartmentalization in living plant cells // Plant. Physiol., 1979. V. 64, № 4. -P. 6323-6329.

87. De Bruijne A.W., Steveninck J.V. Asymmetry of the yeast cell membrane with respect to influx of dimethylsulfoxide // Biochim et biophys. Acta. 1970, V. 211, № 4. P. 555-564.

88. Drokin S.I., Kopeika E.F. Motility of and Phospholipid Content in Cryoreserved Spermatozoa of Three Sturgeon Species // Sturgeon Quarterly. Oct. -1996. V. 4, №4.-P. 8-10.

89. Duman J.G., de Vries A.L. Сотр. Biochem. and Physiol., 1976. V. 54.-P. 375-391.

90. Eharaech N., Thyagarajen B.S. Structural basis for biological activities of dimethylsulfoxide // Ann. N.Y. Acad. Sci., 1984. V. 411, № 4. - P. 391-404.

91. Erdahl A.W., Erdahl D.A., Gracam E.F. Some factors affecting the preservation of salmonid spermatozoa// Aquaculture, 1984. V. 43. - P. 341 - 350.

92. Fahy G.M. The relevance of cryoprotectent "toxicity" to cryobiology // Cryobiology, 1986. V. 23. - P. 1-13.

93. Farrant L. General observation on cell preservation // Low-Temperature Preservation in Medicine and Biology. Eds. M. J. Ashwood-Smite and J. Farrant. Pitman, Bath, UK, 1980. P. 1-19.

94. Franks F. Biophysics and biochemistry at low temperatures // Cambridge University Press, 1985. P. 1-3.

95. Fredrich F. Spermakon ervierung bei Salmoniden // Z. Binnenfischerei DDR, 1984. -Bd. 31, № l.-S. 24-31.

96. Fujita V., Izumiguchi S., Noda Y. Effect of dimethyl sulfoxide and its homologous on the thermal denaturation of lysosome as measured by differential scanning calorimetry // Int. J. Peptide a. Protein Res., 1982. V. 19, № 1. - P. 2531.

97. Gallant R.K., Richardson G. F., McNiven M.A. Comperison of different extenders for the cryopreservation of Atlantic Salmon spermatozoa // Theriogenology, 1993. V. 40, № 3. - P. 479-486.

98. Gordon C., Wise M.H. Permeation of dimethyl sulfoxide in isolated adult porcine islets of Langerhans // Cryo-Lett., 1984. V. 5, № 1. - P. 47-63.

99. Gwo J.C. Cryopreservation of aquatic vertebrates semen, review // Aquaculture res., 2000. V. 31. - P. 259-271.

100. Harvey B. Salmon gene bankining. A conservation opportunity. A review and Analysis of Salmonid gene banks for DFO // MTI Biotech. Ltd.-Internat. Fishes gene Bank. 1996. - P. 36-52.

101. Herskovitz T.T. Nonaqueous solutions of DNA factors favouring the stability of the helical configuration in solution // Arch. Biochem. Biophys., 1962. V. 97, №3.-P. 474-484.

102. Holtz W., Schmidt-Baulain R., Meiners-Gefken M. A simple saccharide extender for cryopreservation of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) // 4th International Symposium on Reproductive Physiology of Fishr. Norwich, July, 1981.-P. 25-252.

103. Holtz W. Cryopreservation of rainbow trout sperm: practical recommendations // Aquaculture, 1993. V. 110. - P. 97-100.

104. Honeyfield D.C., Krise W.F. Measurement of milt quality and factors affecting viability of fish spermatozoa // Cryopreservation in aquatic species (Tiersch R., Mazik P.M.) World Aquaculture Society, Baton Rouge, LA, 2000. -P. 49-58.

105. Jahnichen H., Warnecke D., Trolsch E., Kohlmann K., B'ergler H., Pluta H.J. Motility and fertilizing of cryopreserved Acipenser ruthenus L. sperm // Applied ichthyology, 1999. V. 15 - P. 204-206.

106. Karow A.M. Cryoprotectants. A new class of drugs // J. Pharm. Pharmacol., 1969. V. 21, № 2. - P. 209-217.

107. Koldras M., Bieniarz К. Cryopreservation of carp sperm // Pol. Arch. Hydrobiol. 1987.-V. 34, №34. -P. 125-134.

108. Kopeika E., Kopeika J., Tiantian Zh. Cryopreservation of fish sperm // Methods in molecular biology, 2007. V. 368. - P. 203-217.

109. Kopeika E.F., Novikov A.N. Cryopreservation of fish sperm // Cryopreservation of Cell suspensions (Tsutsayeva A.A., ed.). Naukova dumka, Kiev, Ukraine, 1983. P. 204-215.

110. Kopeika E.F., Tsvetkova L.I. Cryoresistance of fish sperm and methods for its improvement // Workshop on gamete and embryo storage and cryopreservation in aquatic organisms. Marly le Roi, France, 30 March 2 April 1992.-P. 53.

111. Kossman H. Versuch zur Konservierung des Karpfenspermas (Cyprinus carpio L.) //Arsch. Fisch. Wiss. 1973. -Bd. 24. S. 125-128.

112. Kurokura H., Hirano R., Tomita V., Iwahashi M. Cryopreservation of carp sperm // Aquaculture, 1984. V. 37. - P. 267-273.

113. Labbe C., Maisse G. Characteristics and Freesing tolerance of brown trout spermatozoa according to rearing water salinity // Aquaculture, 2001. V. 201.-P. 287-299.

114. Lahnsteiner F., Berger В., Weismann Т., Patzner R.A. Physiological and biochemical determination of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, semen quality for cryopreservation // Journal of Applied Aquaculture, 1996. № 6. - P. 47-73.

115. Lahnsteiner F., Berger В., Weismann Т., Patzner R.A. The influence of various cryoprotectants on semen quality of the rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) before and after cryopreservation // Journal of Applied Aquaculture, 1996. -№ 12.-P. 99-106.

116. Lahnsteiner F. Cryopreservation of Semen of the Salmonidae with special Reference to Large-Scale fertilization // Methods of molecular biology, 2004.-V. 253.-P. 1-12.

117. Lahnsteiner F. Cryopreservation protocols for sperm of Salmonid fishes // Cryopreservation in aquatic species (Tiersch R., Mazik P., eds.). World Aquaculture Society, Baton Rouge, LA, 2000. P. 91-100.

118. Lahnsteiner F. Semen cryopreservation in the Salmonidae and in the Northern pike // Aquaculture res., 2000. V. 31. - P. 245-258.

119. Lang D.S.C., Sax, Chacrabartty A., Hew C.L. Nature, 1988. V. 333 (6170). - P. 232-237.

120. Le Franfois N.R., Lamarre S.G., Tveiten H., Blier P.U., Bailey J. Sperm cryoconservation in Anarhichas sp., endangered cold-water aquaculture species with internal fertilization // Aquaculture Int., 2008. V. 16. - P. 273-279.

121. Leibo S.P., Bradley L. Comparative cryobiology on mammalian spermatozoa // Gagnon C. (Ed.) From Basic Science the Male gamete to clinical application. Cache River press Vienna IL USA, 1999. P. 501-516.

122. Legendre M., Billard R. Cryopreservation of rainbow trout sperm by deep freezing// Reprod. Nutrit. Devel. Paris. 1980. - V. 20, № 6. -P. 1859-1868.

123. Linhart O., Billard R., Proteau J.P. Cryopreservation of European catfish (iSilurus glanis L.) spermatozoa// Aquaculture, 1993. v. 115. - P. 347-359.

124. Linhart O., Cosson J., Mims S.D., Shelton W.L., Rodina M. Effects of ions on the motility of fresh and demembranated paddlefish {Polyodon spathula) spermatozoa //Journal of Reproduction, 2002. V. 124. - P. 713-719.

125. Linhart O., Dzyuba В., Boryspolets S., Ping Li. Sturgeon sperm cryopreservation methodology // Proceedings International Workshop "Cryopreservation of sturgeon sperm", 28 October 2009, Wuhan, China - P. 1-11.

126. Linhart J., Mims S.D., Gomelsky В.,Cvetkova L.I., Cosson J., Rodina M., Horvath A., Urbanyi B. // J. Applied Ichthyology, 2006. V. 22. - P. 389-394.

127. Linhart О., Rodina M., Cosson J. Cryopreservation of sperm in common carp Cyprinus carpio: Sperm motility and hatching success of embryos // Cryobiology, 2000. V. 41. - P. 241-250.

128. Linhart O., Mims S.D., Shelton W.L. Motility of spermatozoa from shovelnose sturgeon (Scaphirinchus platcnynchus Rafinesque, 1820) and paddlefish (Polyodon spathula Walbaum, 1972) // Fish biology, 1995. V. 47. - P. 902-909.

129. Liu L., Wei Q., Guo F., Zhang J., Zhang T. Cryopreservation of Chinese sturgeon (Acipenser sinensis) sperm // J. Applied Ichthyology, 2006. V. 22.-P. 384-388.

130. Lubzens E., Rothbard S., Hadani A. Cryopreservation and viability spermatozoa from the ornamental Japanese carp (nishikigoi) // The Israeli J. of Aquaculture. Bemidgen, 1993. V. 45, № 4. - P. 169-174.

131. Maisse G. Cryopreservation of fish semen; a review. Troid et Aquaculture. Refrigeration and Aquaculture, Bordeaux, France. 1996. - P. 443450.

132. Mazur P. Fundamental cryobiology and the preservation of organs by freezing // Organ preservation for transplantation. New York; Basel: Marcel Dekker, 1981.-P. 143-176.

133. McNiven M.A., Gallant R.K., Richardson G.F. Dimethyl acetamide as a cryoprotectant for rainbow trout spermatozoa // Theriogenology, 1993. V. 40, № 5. - P. 943-948.

134. Mims S.D. Evaluation of activator solutions, motility duration and short-term storage of paddlefish spermatozoa // Journal of World aquaculture society, 1991. V. 22. - P. 224-229.

135. Moczarski M. S. Deep freezing of carp Cyprinus carpio L. sperm // Dull Acad. Pol. Sci., Ser. Sci. Biol., 1977. - V. 25. - P. 187-190.

136. Moczarski M. S. The investigations on sperm quality of carp and its cryopreservation // Ph. D. Thesis, Ins. of Zootechnics. Kracow, 1976. P. 45-47.

137. Munkittrick K.R., Moccia R.D. Advances in the Cryopreservation of salmonid semen and suitability for a production scale artificial fertilization program // Theriogenology, 1984. V.21, №. 4. - P. 646-659.

138. Ott G., Horton H.F. Fertilization of Chinook and coho salmon eggs with cryopreserved sperm // J. Fish. Res. Bd. Can., 1971. V. 28. - P. 745 - 748.

139. Pavlovici L., Vlad C. Some data on the preservation of carp (Cyprinus carpio L.) seminal material by freezing // Rev. Cresterea Anim., 1976. № 4. - P. 45-48.

140. Piironen J. Report on Cryopreservation of Fish Eggs and Sperm // Nordic Council of Ministers, Copenhagen, 1992. 28 p.

141. Piironen J. Cryopreservation of sperm from brown trout (Salmo Trutta M-Lacustris L.) and arctic charr (Salvelinus Alpinus L.) // Aquaculture, 1993Г. V. 116, №2-3.-P. 275-283.

142. Polge C. Freezing of spermatozoa. In: Low-Temperature Preservation in Medicine and Biology. Eds. MJ. Ashwood-Smite and J. Farrant. Pitman Bath, U.K., 1980.-P. 45-65.

143. Policar Т., Toner D., Alavi S.M.H., Linhart O. Reproduction and spawning // Aquaculture Explained. Farming of Earasian Perch, V. 1: Juvenile production, February 2008. № 24. - P. 22-29.

144. Rana J.K. Cryopreservation of fish spermatozoa // Day J.G., Lellan M.R. (Eds.) Cryopreservation and freeze-drying protocols, Humanna Press, Totowa, New Jersey, 1995. P. 151-166.

145. Raymond J.A., Wilson P., de Vries A.L. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989.-V. 86.-P. 881-885.

146. Scott A. P., Baynes S.M. A review of the biology, handling and storage of salmonid spermatozoa // J. Fish Biol., 1980. V. 17. - P. 707-739.

147. Shlafer M. Pharmacological considerations in cryopreservation // Organ Preservation for Transplantation. New York; Basel: Marcel Dekker, 1981. P. 117-211.

148. Sin A.W. Preliminary results on cryogenic preservation of sperm of silver carp and bighead // Hong Kong Fish. Bull., 1974. V. 4. - P. 33-36.

149. Stein H., Bayrle H. Cryopreservation of the sperm of some freshwater teleosts // Ann. Biol. anim. Bioch. Biophys., 1978. V. 18. - P. 1073-1076.

150. Stoss J., Holtz W. Cryopreservation of rainbow trout (Salmo gairdneri) sperm. II. Effect of pH and presence of a buffer in the diluent //Aquaculture, 1981. V. 25.-P. 217-222.

151. Stoss J., Refstie T. Short-time storage and cryopreservation of milt from Atlantic salmon and Sea trout//Aquaculture, 1983. V. 30 -P. 229-236.

152. Terner Ch. Evaluation of salmonid sperm motility for cryopreservation // Progres. Fish-Culturist, 1986. V. 48. - P. 230-232.

153. Toth G.P., Ciereszko A., Christ S.A., Dobrowski K. Objective analysis ofsperm motility in the lake sturgeon (A. fulvescens): activation and inhibition conditions // Aquaculture, 1994. V. 154. - P. 337-348.

154. Yahnichew H. Motiliti and fertiliying capability of criopreserved Acipenser rthenus L. Sperm // Personal communication, Italian Simposium on Sturgeons, 1997.-P. 126-128.