Определение витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в премиксах, биологически активных добавках и пищевых продуктах тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Шелеметьева, Ольга Владимировна

• Шелеметьева, Ольга Владимировна
• кандидат химических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат химических наук Шелеметьева, Ольга Владимировна

Введение

Глава 1 Литературный обзор.

1.1. Основные свойства витаминов.

1.2. Аналитические возможности физико-химических методов определения витаминов.

1.3. Современное состояние определения витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Экспериментальная часть

Глава

2.1. Приборы, оборудование и методика выполнения эксперимента.

2.2. Растворители и реактивы.

2.3. Объекты исследования.

Глава

3.1. Выбор рабочих условий для определения водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ.

3.2. Изучение взаимного влияния водорастворимых витаминов и расчет их предельно допустимых соотношений в методе ВЭЖХ.

Глава

4.1. Исследование влияния рН среды при пробоподготовке исследуемых объектов.

4.2. Изучение мешающего влияния органической матрицы при определении водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ.

4.3. Оптимизации условий подготовки пробы при определении витаминов методом ВЭЖХ.

4.4. Алгоритм пробоподготовки при определении водорастворимых витаминов методом

ВЭЖХ.

Глава 5 Методики определения витаминов методом

ВЭЖХ.

5.1. Методика определения водорастворимых витаминов в премиксах, БАД и пищевых продуктах методом ВЭЖХ.

5.2. Методика определения жирорастворимых витаминов в премиксах, БАД и пищевых продуктах методом ВЭЖХ.

5.3. Расчет массовых концентраций витаминов.

5.4. Метрологическое обеспечение хроматографического анализа.

Обсуждение результатов.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Определение витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в премиксах, биологически активных добавках и пищевых продуктах»

Актуальность. Водорастворимые и жирорастворимые витамины -незаменимые органические вещества, биологические катализаторы химических реакций, протекающих в организме человека; они активно участвуют в обмене веществ и поступают в организм человека практически полностью из внешней среды.

Для поддержания баланса витаминов в организме широкое применение нашли витаминизированные продукты и биологически активные добавки к пище (БАД). Одним из важнейших показателей потребительского качества продукции подобного рода является соответствие содержания биологически активных веществ согласно заявленной рецептуре. Для восстановления качества продуктов питания был принят документ «Основы государственной политики в области здорового питания граждан Российской Федерации на период до 2020 года», пришедший на смену «Концепции здорового питания населения России до 2005 года».

Разработка и совершенствование методов определения витаминов является актуальной задачей, от решения которой зависит качество и безопасность подобной продукции. Выбор инструментального метода анализа для определения водо- и жирорастворимых витаминов в пищевых продуктах обусловлен рядом общих соображений, например: пределами обнаружения метода в зависимости от определяемых содержаний, требованием многоэлементности, допускаемой погрешностью, временными затратами, стоимостью анализа. Безусловно, предпочтение отдается методам, требующим минимальной подготовки пробы к анализу при максимальной информативности. Таким требованиям максимально удовлетворяет метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Современное развитие метода ВЭЖХ расширило аналитические возможности определения витаминов в обогащенных пищевых продуктах. Необходимая подготовка пробы образца весьма проста относительно других методов, что связано прежде всего с исключительной универсальностью, высокой эффективностью разделения, благоприятными условиями анализа (низкая температура, инершый растворитель, отсутствие контакта с кислородом).

Однако, несмотря на интенсивное развитие этого метода в последние 10 лет, в литературных источниках практически отсутствуют методики определения витаминов в таких объектах, как БАД. Трудности в создании методик во многом обусловлены сложностью объектов анализа, таких как обогащенные продукты, в состав которых входят лекарственное растительное сырье (JIPC), растительные экстракты (РЭ), различные минеральные добавки, красители и другие наполнители; низкими концентрациями витаминов в объектах анализа и высокой чувствительностью к термическому, фотоокислительному и химическому воздействиям. Поэтому разработка экспрессных методик одновременного количественного определения водо- и жирорастворимых витаминов в БАД является актуальной задачей.

Целью работы являлось исследование параметров хроматографического определения водорастворимых витаминов группы В, выбор оптимальных условий их определения и разработка экспрессных методик аналитического контроля БАД, пищевых продуктов и премиксов на содержание жиро- и водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

• исследовать хромато графическое поведение водорастворимых витаминов при элюировании бинарными водосодержащими подвижными фазами на основе ацетонитрила, тетрагидрофурана и метанола, провести оценку коэффициентов емкости, асимметрии и разрешения пиков витаминов;

• установить параметры хроматографического определения водорастворимых витаминов группы В;

• оптимизировать основные стадии и предложить алгоритм пробоподготовки для определения витаминов в БАД, обогащенных пищевых продуктах и премиксах; разработать и метрологически аттестовать методики количественного химического анализа БАД, пищевых продуктов и премиксов на содержание витаминов

Научная новизна:

• впервые исследовано хроматографическое поведение водорастворимых витаминов при элюировании бинарными водосодержащими подвижными фазами на основе ацетонитрила, тетрагидрофурана и метанола и установлены условия определения водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ;

• показана применимость универсальной квазихимической модели удерживания для оценки роли межмолекулярных взаимодействий сорбат-сорбент, модификатор-сорбент в хроматографической системе и проведен расчет параметров хроматографического разделения: коэффициентов емкости, асимметрии и разрешения пиков водорастворимых витаминов;

• проведена оценка мешающего влияния водорастворимых витаминов группы В при их совместном присутствии, рассчитаны предельные соотношения водорастворимых витаминов в пробе при заданной систематической погрешности и оценены основные составляющие органической матрицы при определении витаминов методом ВЭЖХ;

• впервые установлены и оптимизированы условия ультразвуковой обработки проб для интенсификации стадии экстракционного извлечения пищевых продуктов и премиксов для последующего определения содержания водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ;

• впервые разработаны методики количественного химического анализа проб Б АД, пищевых продуктов и премиксов на содержание воДО" и жирорастворимых витаминов методом ВЭЖХ.

Практическая значимость работы состоит в том, что:

• на основании проведенных исследований проведена метрологи:^©01^51 аттестация методик количественного химического анализа водорастворимых витаминов (ВРВ) и жирорастворимых витаминов (ЖРВ) для широкого крУга объектов: премиксов, БАД и витаминизированных продуктов пиидевои промышленности. Методики позволяют экспрессно (в течение 45-60 ivhHHут) проводить определение 6 водорастворимых витаминов в сложной матрице БАД;

• разработанные методики: «Биологически активные добавки, пиисхевые продукты, премиксы. Хроматографический (ВЭЖХ) метод опреде.л©ния массовой концентрации водорастворимых витаминов Вь В (никотинамид, никотиновая кислота ), В5, В6 и фолиевой кислотен» и «Биологически активные добавки, премиксы. Хроматографический

ВЭ^Х) метод определения массовой концентрации жирорастворимых витамин: cz>& ^ Е и Д3» метрологически аттестованы и внесены в государстве^^113111 Федеральный реестр методик выполнения измерений, допущеннь»х^< к применению в сфере государственного метрологического контроля и надх^з°Ра под номерами ФР. 1.31.2005.01917, МУ 08-47/185 и ФР.1.31.2005.0181 О 3VH/ 08-47/184 и используются в практике аналитических лабораторий «Эвалар» (г. Бийск), ЗАО «Алтайвитамины» (г. Бийск),

ООО

Внешторгфарма» (г. Москва) и НИИ фармакологии (г. Томск), подтверждается соответствующими актами о внедрении.

Положения, выносимые на защиту:

1. Описание удерживания водорастворимых витаминов с позиций теории универсальной квазихимической модели удерживания в ВЭЖХ.

2. Закономерности удерживания водорастворимых витаминов группы В в условиях градиентной обращенно-фазовой (ОФ) ВЭЖХ и выбор рабочих условий хроматографического определения водорастворимых витаминов.

3. Условия пробоподготовки Б АД, пищевых продуктов, премиксов и алгоритм оптимизации стадии УЗ-экстрагирования при определении витаминов.

4. Методики хроматографического определения водо- и жирорастворимых витаминов.

Апробация работы.

Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на международном симпозиуме «Федеральный и региональный аспекты политики здорового питания» (Кемерово, 2002), международной конференции «Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий» (Томск, 2006), региональной научно-практической конференции «Электрохимические методы анализа в контроле и производстве» (Томск, 2007), II Всероссийской конференции по аналитической химии» с международным участием (к юбилею академика Ю.А.Золотова) (Краснодар, 2007), международной выставке и научно-практической конференции «Аналитические методы измерений и приборы в пищевой промышленности» (Москва, 2007), VII Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным участием «ЭМА-2008» (Уфа-Абзаково, 2008), II Международном Форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж , 2008), VIII научной конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока» (Томск, 2008), IV Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2009).

Структура и объем диссертации.

Работа изложена на 138 страницах, иллюстрирована 25 рисунками и содержит 27 таблиц. Диссертация состоит из введения и пяти глав, включая литературный обзор. Список цитируемой литературы содержит 180 библиографических названий работ отечественных и зарубежных авторов. Во введении обоснована актуальность проблемы, определены цели и задачи исследования. Первая глава представляет собой обзор литературы по физико-химическим методам определения водорастворимых и жирорастворимых витаминов в различных объектах. На основании литературного обзора формируются задачи исследования. Описание используемого оборудования, растворителей, реактивов и объектов исследования приведены во второй главе. Третья глава посвящена выбору рабочих условий определения водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ, изучению взаимного влияния водорастворимых витаминов и расчету их предельно допустимых соотношений в методе ВЭЖХ. В четвертой главе проведены исследования по влиянию рН среды при подготовке проб, изучено влияние органической матрицы при определении водорастворимых витаминов, изложены результаты оптимизации условий подготовки проб и алгоритм пробоподготовки при определении витаминов методом ВЭЖХ. В пятой главе представлены методики определения водо- и жирорастворимых витаминов и метрологическое обеспечение хроматографического анализа. Анализ полученных экспериментальных данных приведен в обсуждении результатов. В заключении сделаны выводы. В приложении представлены таблицы обобщенных данных по определению показателей повторяемости (сходимости) и показателей внутрилабораторной прецизионности,

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Шелеметьева, Ольга Владимировна

Выводы

1. Исследованы условия определения водорастворимых витаминов группы В методом ВЭЖХ при элюировании бинарными водосодержащими подвижными фазами на основе ацетонитрила, тетрагидрофурана и метанола. Рассчитаны коэффициенты емкости, асимметрии и разрешения пиков витаминов с применением универсальной квазихимической модели удерживания в ВЭЖХ. Установлено, что оптимальное значение параметров удерживания витаминов наблюдается при содержании модификатора - 5 об. %.

2. Сделана сравнительная оценка коэффициентов удерживания водорастворимых витаминов, рассчитанных различными методами: по программе ACD-Lab/Log Р Version 1.0 и с применением универсальной квазихимической модели и проведено их сопоставление с литературными данными. Выбраны условия хроматографического определения водорастворимых витаминов группы В: колонка Simmetry-Ci8, водно-ацетонитрильный элюент.

3. Исследовано мешающее влияние водорастворимых витаминов и проведен расчет их предельных соотношений при определении методом ВЭЖХ с систематической погрешностью не более 15 %.

4. Изучено влияние органической матрицы в модельных системах на основе белка, сахара, жира и пектина при определении водорастворимых витаминов и проведена оценка предела обнаружения витаминов Вь В2, Вз, В5, Вб, В9 при совместном определении их методом ВЭЖХ. Установлено, что стандартное отклонение определяемого содержания большинства водорастворимых витаминов не превышает 20 %, а для витамина В9 - 40 %.

5. Разработан алгоритм пробоподготовки, предложена дополнительная стадия УЗ-экстрагирования и проведена ее оптимизация на примере витамина В9 в БАД, обогащенных пищевых продуктах и премиксах.

6. Разработаны методики количественного химического определения В], В2, В3, В5, Вб В9, А, Е и D3 в биологически активных добавках, премиксах и пищевых продуктах. Методики метрологически аттестованы и внесены в Федеральный Реестр МВИ, что подтверждается свидетельствами об аттестации и внедрением в ряде аналитических лабораторий.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Шелеметьева, Ольга Владимировна, 2009 год

1. Сенов П.Л. Фармацевтическая химия// М.: Медицина -1978. С. 431-448.

2. НД 42-10173-99 Тиамина гидрохлорид//Фармакопейный Государственный комитет.- М.:-1999. 10 с.

3. НД 42-10207-01 Рибофлавин// Фармакопейный Государственный комитет.- М.-.-2001.- 14 с.

4. НД 42-10360-99 Никотинамид// Фармакопейный Государственный комитет.- М.:-1999.-7 с.

5. НД 42-7050-97 Ниацин// Фармакопейный Государственный комитет.-М.:-1997. -9 с.

6. НД 42-10171-99 Кальция D-пантотенат// Фармакопейный Государственный комитет,- М.:-1999.-9 с.

7. НД 42-7593-97 Пиридоксина гидрохлорид// Фармакопейный Государственный комитет.- М.:-1997.- 7 с.

8. НД 42-10174-99 Фолиевая кислота// Фармакопейный Государственный комитет,- М.:-1999,- 10 с.

9. Мелентьева Г.А. Фармацевтическая химия// М: Медицина. 1976. - 828 с.

10. ГОСТ 7047-55. Витамины А, С, Д, Вь В2 и PP. Отбор проб, методы определения витаминов и испытания качества витаминных препаратов// М.: -Госстандарт России. -1981. -45 с.

11. Колосова И.Ф., Филимонов В.Н., Балятинская JI.H. Разделение синтетических витаминов группы В методом ион-парной высокоэффективной жидкостной хроматографии// Ж. физ. химии 1994. - Т. 68. - N 10. - С. 1832-1834.

12. Государственная фармакопея СССР, XI изд., вып.2// М.: Медицина.- 1998. -397 с.

13. Sane R.T., Ghorpade U.A. Colorimetric estimation of vitamin B, pharmaceutical preparations //Acta vitaminol et enzymol. 1983. - V.5, №1.-P. 29-34.

14. Abdel-Hamid M., Baraiy M., Hassan E. Spectrophotometry determination of ascorbic acid and thiamine hydrochloride in pharmaceutical products using derivative spectrophotometry//Analyst. 1985. - V.110, №7. -P. 831-835.

15. Lopez Gimenez J. M., Bosch Serrat Y.F. Nuevo metodo colorimetrico dedeterminacion de vitamina B. en medicamentos//An. Real. Acad. Farm. -1987. -V.53, №2. -P. 261-268.

16. Viswanan M.V. A colorimetric method for the estimation of vitamin B, in some pharmaceutical dosage forms//Indian J. Pharm. Sci. 1986. - V.48, №3.-P. 80-82.

17. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов// Под ред. И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна.-М'.: Брандис, Медицина, 1998.-324 С.

18. Bognar A. Bestimmung von Riboflavin und Thiamin in Lebensmittel mit Hilfe Hochdruch Flussigkeits - Chromatografie (HPLC)//Detsch. Lebensmittel Rasch. - 1981. - V. 77, №12. - P. 431-436.

19. Fellman J.K., Artz W.E. Simultaneous determination of thiamin and riboflavin in selected foods by high-performance liquid chromatography.// J. Food Sci. -1982. V.47, №6. -P. 2048-2050.

20. Augustin Y. Simultaneous determination of thiamin and riboflavin infoods by liquid chromatography//!. Assoc. Offic. Anal.Chem. 1984. - V.67, №5. -P. 1012-1015.

21. Arella F., Lahely S. Liquid chromatography determination of vitamins B, and B2 in foods// Food Chem. 1996. - V.56, №1.-P. 81-86.

22. Halmingh O., Kerkdijk H., Supel H. Automated determination of vitamin A and E in serum by on-line SPE-HPLC// Pittsburg Conf. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc. Atlanta. - 1997. P1TTC097: Book Abstr. - P. 561.

23. Amin ML, Reusch J. High-performance liquid chromatography of water-soluble vitamins. Simultaneous determination of vitamins Bb B2, B6 and Bi2 in pharmaceutical preparations//!. Chromatogr. 1987. - V.390, №2. - P. 448-453.

24. Maeero D.Y., Wetzel D.L. Simultaneous determination of thiamin and riboflavin in enriched cereal based products by high-performance liquid chromatography using selective detection// J. Chromatogr. 1984. - V.29, №1.- P. 281-287.

25. Chase G.W., Landen O., Errenmitter R.R., Soliman A.G. Liquid chromatographic determination of thiamine, riboflavin and pyridoxine in infanl formula// J. AO AS. Int. 1992. - V.75, №3. - P. 561-565.

26. Vandenberg H., Vanschaik F., Finglas P. 3rd EuMat intercomparison on methods for the determination of vitamins Bb B2 and B6 in food// Food Chem. -1996. V.57, №L- P. 101-108.

27. ГОСТ 26573-93. Премиксы. Методы определения витамина А// М.: -Госстандарт России. 1993.- 50 с.

28. Государственная фармакопея СССР, X изд.// М.: Медицина.-1998. -397 с.

29. Walkers М.С., Carpenter В.Е., Cooper E.L. Simultaneousdetermination of thiamin and riboflavin in multivitamin product by high-performance liquid chromatography/Л. Pharm Sci. 1981. - V.70, №1. -P. 99-101.

30. Vedrina-Dragojevic Irena, Sebecic Blazenka. Modifid lumiflavin procedure for determination of riboflavin in soyabeat// Z. Lebensm.-Untersuch. und Forsch.-1986.-V. 182,№2.-P. 127-13 0.

31. Ahmad Jgbal, Rapson David H. Multicomponent spectrophotometry assay of riboflavine and photoproducts// J. Pharm. And Biomed. Anal. 1990. -V.8,№>3.-P. 217-223.

32. Olmedilla В., Granado F., Blanco I., Rojas-Hidalgo E. Determination of nine carotenoids, retinol, retinyl palmitate and a-tocopherol in control human serum using two internal standards// Food Chem. 1992. - V.45, №3. - P. 205-213.

33. Gamache P.H., Acworth I.N. Simultaneous analysis of fat-soluble carotenoids, retinoids, tocopherols, vitamin К and coenzyme Qio in plasma// Pittsburg Conf. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc. New Orleans. - 1998. РГГКХЖ98: Book Abstr. - P. 1619.

34. Abd El- Gawad LA., El-Abd M.M., Kagab F.H. Study on vitamin B2 in milk and some milk products// Egypt. J. Food. Sci. 1998. - V.16, №1-2. - P. 175-192.

35. Артемченко С.С, Петренко В.В. Способ количественного определения тиамина бромида// А.С. 1163225. СССР. - 1985. - МКИ G 01 N 21/78.

36. Barua А.В., Furr Н.С., Jamickbuckner D., Olson J.A. Simultaneous analysis of individual carotenoids, retinol, retinyl esters and tocopherols in serum by isocratic nonaqueous reversed-phase HPLC// Food Chem. 1993. - V.46, №4.-P. 419-424.

37. Будников Г.К., Улахович H.A., Медянцева Н.П. . Основы электрохимической химии// Из-во Казанского ун-та. -1986. -288 с.

38. ФР. 1.31.2004.01071, МУ 08-47/141 «Биологически активные добавки. Вольтамперометрический метод определения массовых концентраций витаминов С, В., В2 и кверцетина». -2004. -55 с.

39. Тенчева Ж. и др. Способы количественного определения витаминов В. В2, В6, РР в препаратах В-комплекса методом жидкостной хроматографии// Фармация. 1990. - Т.40, №3. - С. 6-11.

40. Ульянова С.В., Щавлинский А.Н., Морев С.Н., Дмитренко Т.С., Финкельштейн Е.И. Анализ водорастворимых витаминов В., В2, Вб и никотинамида в драже "Гексавит" методом ВЭЖХ// Фармация. 1993. - Т. 42. -N3. - С. 50-51.

41. Лутцева А.И. и др. Анализ и стандартизация водорастворимых витаминов// Фармация. 1998. - Т.47, №5. - С. 22-29.

42. Филимонов В.Н., Сирицо С.И. Хроматографическое разделение при аналитическом контроле водорастворимых витаминов и физиологически активных кислот в многокомпонентных рецептурах// Сорбц. и хроматогр. процессы 2005. - Т. 5. - N 2. - С. 188-201.

43. Староверов В.М., Дейнека В.И., Григорьев А.М1, Прохода Е.Ф., Покровский М.В., Иванов В.В. ВЭЖХ-анализ водорастворимых витаминов в составе поливитаминного сиропа "Олиговит"// Хим.-фармац. ж. 2004. - Т. 38.-N3.-C. 54-56.

44. Голубицкий Г.Б. Одновременное количественное определение водо- и жирорастворимых витаминов и консервантов и использованием колонки нового типа Chromolith// Заводская лаборатория 2008. - Т. 74. - N 3. - С. 10-14.

45. Власова И.В., Масякова Е.Н., Богданова Л.А., Пермякова НЛО. Определение водорастворимых витаминов в премиксах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии// Заводская лаборатория -2007.-Т. 73.-N9.-С. 25-27.

46. Лутцева А.И., Маслов Л.Г., Евтушенко Н.С., Середенко В.И. Анализ и стандартизация водорастворимых витаминов// Фармация 1998. -Т. 47,-N5.-С. 22, 27-29.

47. J. Microniet. Chase G. William, Soliman A. M. Analysis of thiamin and riboflavin, pyridoxine and niacine in multivitamin premixes and supplemens by high-performance liquid chromatography// Anal.- 1990. V.7, №1. -P. 15-25.

48. Сапрыкин JI.B., Гусаров A.A., Киселева H.B. Определение витамина В6 и полупроводников его синтеза методом ВЭЖХ в ион-парном варианте и с применением динамически модифицированного силикагеля// Ж. анал. химии 1992. - Т. 47. - N 12. - С. 2066-2071.

49. Vails Felicidad, Sancho M.Teresa, Fernandez-Muino Miguel A., Checa Martin A.Determination of vitamin B6 in cooked sausages.//Oпpeдeлeниe витамина B6 в вареной колбасе// J. Agr. and Food Chem. 2001. - Vol. 49. - N 1. -P. 38-41.

50. НД 42-11946-01. Поливитаминная смесь// Фармакопейный Государственный комитет.- М.-.-2001. -29 с.

51. Ang Catharina Y.W., Moseley Frederick A. Determination of thiamin and riboflavin in meat products by high-pressure liquid chromatography// J.Agr. and Food Chem. 1980. - V.26, №3. - P. 483-486.

52. Lumley I.D., Wiggins R.A. Determination thiamin and riboflavin in foodtuuffs using high performance liquid chromatography// Analyst. 1981. -V.106, №1267.-P. 1103-1108.

53. Bognar A. Bestimmung von Riboflavin und Thiamin in Lebensmittel mit Hilfe Hochdruch Flussigkeits - Chromatografie (HPLC)// Lebensmittechen und gerichte Chem. - 1982. - V. 36, №2. - P. 33-34.

54. Wimmalasiri P., Wilis R. Simultaneous analysis of thiamin and riboflavin in foods by high-performance liquid chromatography.// J. Chromatogr. -1985.-V.32, №18. P. 412-416.

55. Vails Falicidad, Sancho M. Teresa, Fernandez-Muino Migel. Determination of thiamin and riboflavin in cooked sausages// J. Agr. and Food Chem. 1999. -V.47, №3.-P. 1067-1070.

56. Ujile Takashi, Tsutake Yukiko, Morita ICohei// Vitamins. 1990.1. V.64, №7.-Р. 379-385.

57. Motoe К// Vitamins. 1994. - V.68, №7. - P. 379-384.

58. Vails Felicidad, Checa Martin A// J. Agr. and Food Chem. 1999. -V.47, №1.-P. 170-173.

59. Hurst W. Jeffrey, Mekim J.M. The HPLS analysis of thiamin in milk chocolate// Int. J. Vitam. and Nutr Res. 1983. - V.53, №3. - P. 239-242.

60. Vidal-Valverde Conception, Reche Angelina. An improved high performance liquid chromatographic method for thiamine analysis in foods// Z. Lebensm.-Untersuch und Forsch. 1990. - V.191, №4-5. -P. 313-318.

61. Whitworth Vivienne A., Metcalfe Lorraine. A rapid method for the determination of thiamine in various foods using high-pressure liquid chromatography// Can. Inst. Food. Sci. and Technol. J. 1985. - V.18, №3.

62. Ishiguro Kozo. The determination of thiamine and ascorbic acid contents in sweet potato by high performance liquid chromatography// Bull. Fac. Educ. Kanazawa Unit. Nat. Sci. 1987. - №36. - P. 1-5.

63. Nicolas Edgar C, Peender Kathleen A. Fast and simple liquid chromatographic determination of thiamine in infant formula, milk and other foods// J. Assoc. Offic. Anal. Chem. 1990. - V.73, №5. - P. 792-798.

64. Ofles Semik. Analysis of thiamin in foods by high-pressure liquid chromatography// 35th IUPAC Congr. Istambul. - 1995 - P. 15.

65. Blanco D., Laneza M.B., Gutternez M.D. A paired ion liquid chromatographic method for thiamine determination in selected foods// J. Lig. Chromatogr. andRelat. Technol. 1996. - V. 19, №13. -P. 2155-2164.

66. J. Assoc. Ashoor Samy H., Knox Michael J. Improved liquid chromatographic determination of riboflavin in milk and dairy products// Offlc. Anal. Chem. 1985. - V.68, №4. - P. 693-696.

67. Stancher В., Zonta F.J. High performance liquid chromatographic analysis of riboflavin with visible absorbance detection in Italian cheeses// Food Sci. -1986.-V.51 ,№3.-P. 857-858.

68. Moll N. Reversed phase high-performance liquid chromatography determination of riboflavin in alcoholic beverages// J. Assoc. Offic. Anal. Chem. -1988. V.66, №3. - P. 753-769.

69. Арбатский А.П., Афоньшин Г.Н., Востоков В.М. Определение витаминов в кормовых и пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии// Ж. анал. Химии 2004.Т.59.- N 12. - С. 13041307.

70. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок// М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России.- 2004.-240 с.

71. Sampson D.A., Wen Q.B., Lorenz K. Vitamin B6 and pyridoxine glucoside content of wheat and wheat flours// Содержание витамина Вб и глюкозида пиридоксина в зерне пшеницы и пшеничной муке// Cereal Chem. -1996. Vol. 73. - N 6. - P. 770-774.

72. Kocs Е., Fekete J. Bres, В2.- vitamin meghatarozasa premixben hagyhatekonysaqy folyadekkromatograflaval// Magy kern folyorirat. 1988. -V.94,№ 311.-P. 505-510.

73. Щукина О.Г., Моргун B.A., Левицкий Ю.А. Применение хроматографии в пищевой, микробиологической и медицинской промышленности// Материалы Всес. конф. Геленжик. - 1990.

74. Fernando Sharma M., Murphy Patricia A. HPLC determination of thiamin and riboflavin in soyeans and tofu/7 J.Agr. and Food Chem. 1990. - V.38, №1.-P. 163-167.

75. Кожанова JI.А., Барам Г.И., Федорова Г.А. Определение водо- и жирорастворимых витаминов в премиксах методом ВЭЖХ// Всерос. конф. "Хим. анал. веществ и матер.", Москва, 16-21 апр., 2000. М.: Изд-во ГЕОХИ РАН, 2000. - С. 70.

76. Tabekha М.М., El-Bastawesy М.А. A modified method for analysis thiamine, riboflavin and niacin content in rise and product by HPLC// Food.Chem. 1995. - V.12,№5. - P. 34-37.

77. Panijapan Bhinyo, Kimura Mieko, Itokawa Yoshihori. Separation and determination of thiamine by reversed-phase high performance liquid chromatography// J. Chromatogr. 1983. - V.258, №2. - P. 307-309.

78. Bontemps Jose, Bettendorff Lucien, Lombet Jacques.// J. Chromatogr. -1984. V.295, №2. - P. 486-491.

79. Bomtemps J., Bettendorff L., Dandrifosse G. Sensitization of thiamine analysis by the peak compression technique// J. High Resolut. Chromatogr. And Chromatogr. Commun. 1984. - V.7, №8. - P. 490-491.

80. Utecht Ronald E. Identification and quatitation of riboflavin in vitamin tablets by total luminescence spectroscopy// J. Chem. Educ. 1993. - V.70, №8.-P. 673.

81. Sastiy C.S.P., Singh N.R., Reddy M.N. New spectrophotometric metods of for the determination of riboflavin// Analysis. 1986. - V.14, №7. - P. 355-356.

82. Бекжанова E.E., Тахиров M.T. Определение рибофлавина в воде водоемов флуоресцентным методом// Гигиена и санитария. 1993. - № 6, -С. 72-73.

83. Barary М., AbdeJ-Hamid М., Hassan Е. Simultaneous spectrofluorimetric determination of thiamine in pharmaceuticals multivitamin preparations// Pharmazie. 1986. - V.41, №7. - P. 483-485.

84. Racegly A. S., Eryilmaz H. Determination of vitamin Bi by the thiochrome reaction using copper (II)// Fen bilimler derg. Marmara Univ. 1987. -№4. - 125-129.

85. Gonsales V., Rubio S., Gomes-Hens A. Fluorimetric determination of thiamine and cocarboxylase by a differential rate method// Anal. Lett. 1988. -V.21, №6.-P. 993-1008.

86. Ay din A., Goksel F. Thiamine determination with hypobromide by the thiochrome reaction// Chim. acta turc. 1988. - V.16, №3. - P. 313-325.

87. Saracogly A.S., Kunduz N. A new reagent for the conventional thiochrome reaction// Fen bilimler derg. Marmara Univ. 1988. - №5. - P. 159-167.

88. Marquez M., Silva M., Perez-Bendito D. Performance of the continuous addition of reagent technique in fluorimetric reaction-rate methods. Determination of thiamine at the nanamolar level//Anal. Lett. 1989. -V.22, №112.-P. 2485-2500.

89. Takasuka S., Kawahara A., Wakida S// Бунсэки катаку. 1991. -V.40, №3.-P. 115-118.

90. Jie N., Yang J., Zhang Z. Fluorimetric determination of thiamine with cobalt (II)// Anal. Lett. 1993. - V.26, №10. - P. 2283-2289.

91. Goksin A., Goksel F., Ibis С Thiamine determination// 35th IUPAC Congr. -Istambul.-1995.-P. 686.

92. Mellurray C.H., Blanchflower W.J., Rice D.A. Influence of extraction techniques on determination of a-tocopherol in animal feedstuffs//J. Assoc. Offic. Anal. Chem. 1980. - V.63, № 6. -P. 1258-1261.

93. Полянский K.K., Рудаков О.Б. Современные методы контроля качества и безопасности молочных продуктов// 41 Отчетная научная конф. за 2002 год., Воронеж, 2002 Изд-во ВГТА, 2003. -257 с.

94. Gliszczynska-Swiglo A., Sikorska Е. Simple reversed-phase liquid chromatography method for determination of tocopherols in edible plant oils// J. Chromatogr. 2004. Vol. 1048. - N 2. - P. 195-198.

95. Макаров В.Г., Краснов К.А., Пименов A.E., Северцев В.А., Габидова А.Э., Косенко Н.В. Исследование химического состава масла шиповника// 5-й Рос. нац. конгр. "Человек и лекарство", Москва, 21-25 апр.,1998.: М.- Фармединфо, 1998. 659 с.

96. ГОСТ P 50928-96. Премиксы. Методы определения витаминов А, D, Е// М.: -Госстандарт России. 1996,- 11 с.

97. В.Н. Скурихин, С.В. Шабаев. Методы анализа витаминов А, Е, D и каротина// М.: Химия, 1996. 95 с.

98. Филимонов В.Н., Балятинская JI.H., Колосова И.Ф. Определение жиро- и водорастворимых витаминов в промышленных водах методом ВЭЖХ// Тез. докл. 1 экол. симп. "Анал. вод", 26-28 июня, 1990 Воронеж, 1990.-С. 134.

99. Стыскин E.JL, Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография// М.: 1986. 214 с.

100. Современные методы анализа и оборудование в санитарно-гигиенических исследованиях// М.:- Министерство здравоохранения Российской Федерации. 1999.-495с.

101. Finglas P.M., Faulks R.M. The HPLC analysis of thiamin and riboflavin in potatoos// Food.Chem. 1984. - V.15, №1. - P. 37-44.

102. ГОСТ P 50929-96. Премиксы. Методы определения витаминов группы В// М.: -.Госстандарт России. 1997.-35 с.

103. Яшин Я.И., Яшин А.Я. Анализ пищевых продуктов и напитков методами высокоэффективной жидкостной и ионной хроматографии с электрохимическими детекторами// Ж. анал. химии 2004. - Т. 59. - N 12. - С. 1237-124.

104. Филимонов B.H., Сирицо С.И., Макрушин H.A. Особенности хроматографического разделения водорастворимых витаминов в изократической ОФ ВЭЖХ// Сорбц. и хроматогр. процессы 2006. - Т. 6. - N 2.-С. 191-197.

105. Zhang Yantu, Zhang Zhujun, Yang Weiping, Tian Suikang// Определение тиамина и рибофлавина методом высокоэффективными хроматографиями с обращенным детектированием// SepuChin. J. Chromatogr. = Chin. J. Chromatogr. 2003. - Vol. 21. - N 4. - P. 391-393.

106. Huang Xiang-dong, Li Zhen-yu. Разделение и определение водорастворимых витаминов в комплексной таблетке витаминов В с помощью ВЭЖХ ионных пар на обращенной фазе// Chin. Pharm. J. 1991. -Vol. 26.-Nl.-P. 34-36.

107. С.Н.Ланин, Ю.С.Никитин. Прогнозирование удерживания в высокоэффективной жидкостной хроматографии. Межмолекулярные взаимодействия в подвижной фазе// Ж. анал. химии 1991. - Т. 46. - N 10. - С. 1971-1980.

108. Замуруев О.В. Нормально-фазовая изократическая ВЭЖХ жирорастворимых витаминов: закономерности удерживания, оптимизация состава подвижной фазы и разработка аналитических методик// Автореф. дис. канд. хим. Наук. М., 2003. 21 с.

109. Филимонов В.Н.,Замуруев О.В., Балятинская Л.Н. Интерпретация закономерностей удерживания жирорастворимых витаминов с позиций квазихимической модели.// Сорбционные и хроматографические порцессы-2004. Т. 4. - N 3. - С. 263-272.

110. Матусова C.M., Брыкина Г.Д., Шпигун О.А. Изучениемеханизмов взаимодействия сорбатов с новой неподвижной фазой на основе фталоцианата цинка// Теория и практика хроматографии. Применение в нефтехимии. Самара: Универс-групп, 2005. - С. 74.

111. Демидова О.А. Оценка содержания водорастворимых витаминов в лекарственных препаратах и биологических жидкостях методом ВЭЖХ// Автореф. канд. фармацевт, наук. М., 2002. 26 с.

112. Степанова E.H., Сапожникова Г.А., Нефедова P.C. Сравнительное изучение различных методов определения рибофлавина в пищевых продуктах//Вопросы питания. 1969. - Т.28, № 5. - С. 14-18.

113. Адлер Ю.П., Маркова Е.В., Грановский Ю.В. Планирование эксперимента при поиске оптимальных условий. М.: Наука, 1976. -280 с.

114. Короткова Е.И. Планирование и организация эксперимента// Учебное пособие, Томск: Изд-во ТПУ, 2003, 92 с.

115. Румшинский JI.3. Математическая обработка результатов эксперимента// М: Наука, 1971.-192 с.

116. НД 42-11946-01. Поливитаминная смесь// Фармакопейный Государственный комитет.- М.:-2001. -29 с.

117. В заключение выражаю огромную благодарность д.т.н., профессору, директору ООО «Артлайф» Австриевских А.Н. за предоставленную возможность выполнения работы на базе лаборатории предприятия.