Микроэлементозы крупного рогатого скота на откорме в условиях Республики Беларусь тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.01, доктор ветеринарных наук Ковалёнок, Юрий Казимирович

• Ковалёнок, Юрий Казимирович
• доктор ветеринарных наук
• 2012

Оглавление диссертации доктор ветеринарных наук Ковалёнок, Юрий Казимирович

Условные обозначения и сокращения

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Микроэлементозы: история вопроса, классификация и распространение в Республике Беларусь

1.2. Современное представление о роли микроэлементов и происхо- ^ ждении микроэлементозов

1.3. Механизмы поступления микроэлементов в организм и патоге- ^ нетические аспекты микроэлементозов

1.4. Диагностика микроэлементозов у сельскохозяйственных живот

1.5. Эффективность лечебно-профилактических мероприятий при микроэлементозах

2. МЕТОДОЛОГИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Методология экспериментальных и производственных исследо- ^ ваний . I

2.2. Методика изучения распространения недостаточности микроэлементов у крупного рогатого скота

2.3. Совершенствование способа диагностики микроэлементозов у крупного рогатого скота

2.4. Разработка устройства для изучения всасывания веществ тонкой ^ кишкой животных

2.5. Создание, испытание и изучение фармакодинамики комплексо- ^ натов металлов для применения в ветеринарной медицине

2.6. Разработка, совершенствование и внедрение лечебно-профилактических мероприятий при гипомикроэлементозах крупно- 100 го рогатого скота на откорме

2.7. Оценка экономической эффективности разработанных лечебно-профилактических мероприятий

2.8. Методы клинических и лабораторных исследований, использованные при выполнении работы

2.9. Методология и методы биометрического анализа данных 114 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Разработка способа диагносики микроэлементозов у крупного рогатого скота

3.1.1. Характеристика волосяного покрова крупного рогатого скота

3.1.2. Разработка способа пробоподготовки волоса крупного рогатого скота для проведения химического элементного анализа

3.1.3. Зависимость химического элементного состава волос и крови от времени перорального поступления эндогенных элементов

3.1.3.1. Влияние перорального поступления эндогенных минеральных веществ на элементный состав волос и крови лабораторных жи- 127 вотных

3.1.3.2. Производственная оценка зависимости элементного состава волос и крови крупного рогатого скота от времени перорального по

I ' ' ступления эндогенных элементов

3.2. Клинико'биохимический профиль здорового крупного рогатого скота на откорме в Республике Беларусь

3.2.1. Определение нормативных значений некоторых показателей гомеостаза посредством регрессионного анализа

3.2.2. Возрастной клинико-биохимический профиль и минералог-рмамма крупного рогатого скота на откорме в Республики Беларусь

3.3. Причины микроэлементной недостаточности у крупного рогатого скота на откорме в Республике Беларусь

3.3.1. Эндемическая характеристика территории Республики Беларусь посредством анализа кормов, используемых для крупного рога- 163 того скота на откорме

3.3.2. Изучение обеспеченности питательными и биологически активными веществами кормов, как основных факторов обуславлиг , I v,,t ' I»' , ■ о », * "( ,11, 'V S вающих возникновение микроэлементозов у крупного рогатого скота на 1-ом технологическом этапе (выращивания) откорма

3.3.3. Анализ алиментарных причин микроэлементозов у бычков 2 технологического этапа (доращивания) откорма в условиях промыш- 175 ленного типа мясного скотоводства Беларуси

3.3.4. Определение обеспеченности рационов питательными и биологически активными веществами, как основных этиологических факторов микроэлементозов на заключительном этапе откорма крупного рогатого скота

3.4. Фитолектины, как этиологический фактор микроэлементозов крупного рогатого скота

3.4.1. Антипитательный профиль кормовых культур как фактор нарушения трансмембранного транспорта веществ

3.4.2. Изучение влияния лектинов на кишечный транспорт микроэлементов в условиях in vitro

3.4.3. Определение влияния фитолектинов на усвояемость микроэле- ^ ментов в условиях in vivo

3.5. Мониторинг распространения и нозологический профиль микроэлементозов у крупного рогатого скота на откорме в Рес- 226 публике Беларусь

3.5.1. Клинико-биохимический профиль крупного рогатого скота на откорме с обменными нарушеними в различных регионах Беларуси

3.5.2. Распространение и сочетанность микроэлементозов у крупного рогатого скота на откорме в условиях Беларуси

3.6. Экспериментальные исследования всасываемости микроэлементов в различных формах тонкой кишкой крупного рогато- 253 го скота

3.6.1. Разработка методики определения всасывания микроэлементов 253 в тонком кишечнике крупного рогатого скота

3.6.1.1. Функциональная деятельность устройства для изучения всаi i !> V <

1 i 'i I i t I сываемости веществ кишечником животных

3.6.1.2. Кинетические константы использования устройства

3.6.1.3. Определение оптимального времени инкубации кишки в устройстве

3.6.1.4. Биохимические свойства мукозной жидкости и морфологические свойства кишечной стенки в зависимости от времени ее инкуба- 259 ции в устройстве

3.6.2. Определение растворителя для исследуемых в устройстве веществ

3.6.3. Механизмы всасывания и транспорта микроэлементов в соле- ^^ вой и хелатной формах через эпителиальный барьер кишки

3.6.4. Пути преимущественного всасывания микроэлементов в солевой и хелатной формах через эпителиальный барьер кишки

3.6.5. Количественные характеристики сорбируемости и всасываемости микроэлементов кишкой в зависимости от химической их формы 283 в условиях модельного эксперимента

3.7. Разработка и токсикологическая оценка комплексонатов металлов

3.7.1. Синтез этилендиаминтетрацетжелезо (III) натрия, этилендиа-минтетрацеткобальт (И) натрия, этилендиаминтетрацетмедь (II) на- 287 трия и этилендиаминтетрацетцинк (II) натрия

3.7.2. Токсикологические исследования комплексонатов металлов

3.7.2.1. Изучение острой токсичности комплексонатов металлов

3.7.2.2. Изучение хронической токсичности комплексонатов метал

3.7.2.3. Оценка местно-раздражающих свойств комплексонатов металлов

3.7.2.4. Изучение кумулятивных свойств комплексонатов металлов

3.7.2.5. Аспекты фармакокинетики и фармакодинамики комплексона- ^ тов металлов

V 11' I

3.7.2.6. Влияние комплексонатов металлов на качество животноводческой продукции

3.8. Лечение и профилактика гипомикроэлементозов у крупного рогатого скота на откорме с использованием хелатных форм микроэлементов

3.8.1. Разработка способа лечения и профилактики недостаточности меди у крупного рогатого скота на откорме

3.8.1.1. Способ лечения крупного рогатого скота на откорме, больного гипокупрозом с использованием ветеринарного препарата «Ку- 306 провет»

3.8.1.2. Способ профилактики гипокупроза крупного рогатого скота на откорме с использованием ветеринарного препарата «Купровет»

3.8.2. Разработка способа лечения и профилактики железо дефицитных состояний у крупного рогатого скота на откорме с использова- 321 нием ветеринарного препарата «Феравет»

3.8.2.1. Способ терапии крупного рогатого скота, больного железодефицитной анемией с использованием ветеринарного препарата , 321 «Феравет»

3.8.2.2. Способ профилактики железодефицитной анемии крупного рогатого скота с использованием ветеринарного препарата «Феравет»

3.8.3. Разработка способа лечения и профилактики недостаточности кобальта у крупного рогатого скота на откорме с использованием ве- 331 теринарного препарата «Кобальвет»

3.8.3.1. Способ терапии крупного рогатого скота на откорме, больного гипокобальтозом с использованием ветеринарного препарата «Ко- 331 бальвет»

3.8.3.2. Способ профилактики гипокобальтоза крупного рогатого скота на откорме с использованием ветеринарного препарата «Ко- 339 бальвет»

3.8.4. Разработка способа лечения и профилактики недостаточности 1 [ 1< *," цинка у крупного рогатого скота на откорме с использованием ветеринарного препарата «Цинковет»

3.8.4.1. Способ терапии крупного рогатого скота, больного паракера- ^ тозом с использованием ветеринарного препарата «Цинковет»

3.8.4.2. Способ профилактики паракератоза крупного рогатого скота ^^ с использованием ветеринарного препарата «Цинковет»

3.8.5. Разработка способа лечения и профилактики сочетанных ги-помикроэлементозов крупного рогатого скота на откорме с использо- 357 ванием ветеринарного препарата «Тетрамикроэлемент К»

3.8.5.1. Способ терапии крупного рогатого скота на откорме, больного сочетанными гипомикроэлементозами с использованием ветери- 357 нарного препарата «Тетрамикроэлемент К»

3.8.5.2. Способ профилактики сочетанных гипомикроэлементозов крупного рогатого скота с использованием ветеринарного препарата 375 «Тетрамикроэлемент К»

3.8.6. Разработка способа использования созданных ветеринарных препаратов в составе лечебно-профилактических премиксов для ' ' 385 крупного рогатого скота

3.8.6.1. Использование разработанных ветеринарных препаратов в технологии получения премиксов на производственном оборудова- 386 нии предприятий комбикормового производства

3.8.6.2. Испытание показателей качества комбикормов в лабораторных и экспериментальных условиях

3.8.6.3. Производственные испытания концентрированных кормов для крупного рогатого скота на откорме с использованием в качестве ^^ минеральных компонентов премиксов разработанных ветеринарных препаратов

3.9. Экономическая эффективность использования разработанных ветеринарных препаратов

3.9.1. Экономическая эффективность использования ветеринарного препарата «Купровет»

3.9.2. Экономическая эффективность использования ветеринарного препарата «Кобальвет»

3.9.3. Экономическая эффективность использования ветеринарного препарата «Цинковет»

3.9.4. Экономическая эффективность использования ветеринарного препарата «Феравет»

3.9.5. Экономическая эффективность использования ветеринарного ^ препарата «Тетрамикроэлемент К»

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Микроэлементозы крупного рогатого скота на откорме в условиях Республики Беларусь»

Актуальность темы исследования. Приоритетной позицией безопасности единого экономического пространства, как интеграционного объединения государств Таможенного союза - Беларуси, Казахстана и России является продовольственная. Необходимость высокого уровня импорта продовольствия ставит государства в сильную экономическую и даже политическую зависимость от стран экспортеров.

Существенным фактором, сдерживающим рост объемов производства животноводческой продукции и ее рентабельность являются микроэлементозы. Широкое их распространение на рубеже XX - XXI столетий привело к необходимости масштабных научных исследований данной проблемы. Плеядой выдающихся ученых Вернадский В.И. (1960), Виноградов А.П. (1960), Ковальский В.В. (1991), Судаков H.A. (1974), Георгиевский Г.И. (1979), Самохин В.Т. (2003), Кальницкий Б.Д. (1985), Кузнецов С.Г. (1989), Конопатов Ю.В. (1996),

Ковалев С.П. (1999), Алиев A.A. (1997), Кабыш A.A. (2007), Кондрахин И.П. б' ',

2007), Бушов А. В. (2005), Логинов Г.П. (2005), Арсанукаев Д;Л. (2006), Ку-чинский М.П. (2007), Карпенко Л.Ю. (2008) накоплен колоссальный объем знаний о микроэлементах, их роли в организме, микроэлементозах и спосабах борьбы с ними. Труд указанных и многих других исследователей составляет фундаментальную базу современной ветеринарной микроэлементологии.

Сложность борьбы с нарушениями обмена микроэлементов в организме заключается в том, что до настоящего времени нет четко отработанных методологических подходов к их диагностике. Информативность большинства применяющихся клинико-лабораторных методов диагностики значима на стадиях развития клинически выраженного процесса, что в условиях современного ведения скотоводства бывает весьма редко. Очевидно, что для получения убедительных ответов на данные и многие другие вопросы требуется проведение дополнительных исследований и экспериментов.

Базой практикующихся способов борьбы с дефицитом микроэлементов продолжает оставаться использование их неорганических форм в составе сульфатов, карбонатов, хлоридов, фосфатов, что влечет за собой ряд негативных последствий (Кальницкий Б.Д., 1985; Алиев A.A., 1997; Кузнецов С.Г., 2008; Бабич В.А., 2002). В этой связи последние годы активно ведутся работы над конструированием, изучением свойств и постановкой на производство элемен-торганических препаратов второго поколения, в которых минеральные вещества содержатся в виде комплекса с биолигандами - веществами, сходными с природными носителями микроэлементов (Логинов Г.П., 2005; Бушов A.B., 2005; Фурлетов С., 2008; Surai P.F., 2002), что представляется перспективным и производственно значимым.

В контексте изложенного, теоретические и экспериментальные концепции настоящей работы направлены на решение крупной научной проблемы -совершенствования мер диагностики микроэлементозов животных; разработки устройств оценки пероральной доступности веществ в условиях in vitro; синтеза, на основе полученных новых знаний, ветеринарных препаратов хелатиро-ванных биогенных элементов Си, Zn, Со и Fe. Разработка системы лечебно-профилактических мероприятий при микроэлементозах крупного рогатого скота с использованием созданных ветеринарных препаратов позволяет решить важную производственную задачу - увеличение производства продукции животноводства за счет повышения продуктивности и сохранности животных.

Решение указанных проблем согласуется с принятыми в последние годы программами Союзного государства, постановлениями и научно-техническими программами Министерств сельского хозяйства и Академий наук, стран-участниц единого экономического пространства.

Цели и задачи исследования. Цель работы - разработка современных способов диагностики, лечения и профилактики наиболее распространенных микроэлементозов у крупного рогатого скота на откорме, путем установления особенностей трансэпителиального транспорта микроэлементов и разработки на этой основе новых ветеринарных препаратов.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Установить особенности минерального обмена у крупного рогатого скота на откорме в условиях Республики Беларусь и провести мониторинговые исследования нозологического профиля и сочетаемости разных микроэлемен-тозов.

2. Определить клиническую значимость и взаимодействие различных этиологических факторов микроэлементозов крупного рогатого скота на откорме в условиях промышленного скотоводства Беларуси, установить их особенности в зависимости от технологического производственного этапа и региона хозяйствования.

3. Усовершенствовать диагностику микроэлементозов и методику определения содержания минеральных веществ в волосяном покрове крупного рогатого скота.

4. Сконструировать устройство для изучения всасываемости веществ тонкой кишкой животных in vitro и оценить энтеральную биодоступность микроэлементов в разных химических формах. (

И',

5. Разработать новые ветеринарные препараты для лечения и профилактики наиболее распространенных гипомикроэлементозов, определить их токсичность, влияние на метаболизм животных и качество продуктов убоя.

6. Разработать способы лечения и профилактики гипомикроэлементозов у крупного рогатого скота с использованием созданных препаратов, оценить их эффективность.

7. Организовать промышленное производство и применение созданных препаратов на специализированных предприятиях Беларуси.

Научная новизна исследований. Впервые разработано устройство изучения всасываемости веществ тонкой кишкой животных, позволяющее в условиях in vitro количественно определять аспекты фармакокинетического профиля и биодоступности создаваемых ветеринарных препаратов.

Установлены новые закономерности путей и механизмов всасывания микроэлементов в разных химических формах. Показано, что биодоступность разных химических форм элементов зависит от путей трансэпителиального их транспорта и механизмов его реализации. Хелатокомплексные соединения Си, Ъп, Со и Бе на основе этилендиаминтетрауксусной кислоты транспортируются парацеллюлярно за счет формирующегося градиента концентрации.

Усовершенствован метод диагностики микроэлементозов крупного рогатого скота путем формулировки концепции о преимущественном типе использования биологических субстратов. Экспериментально доказано, что исследование крови как биомаркера минерального статуса организма животных более уместно для оценки лечебно-профилактических свойств ветеринарных препаратов, в то время как элементный анализ волосяного покрова более информативен для оценки обеспеченности организма минеральными веществами. Оптимизирован способ подготовки волосяного покрова крупного рогатого скота к исследованию на макро- и микроэлементный состав.

Установлено взаимное расположение и взаимовлияние (констелляция) факторов, определяющих субклинические обменные нарушения у крупного рогатого скота на откорме в условиях промышленного мясного скотоводства Республики Беларусь.

Доказано, что лектины кормовых культур рационов крупного рогатого скота на откорме нарушают усвояемость минеральных веществ путем блокирования механизмов активного транспорта веществ через апикальную мембрану энтероцитов. Это является ранее не известным этиологическим фактором микроэлементозов.

Установлено распространение и сочетанность микроэлементозов у крупного рогатого скота в промышленном мясном скотоводстве Беларуси.

Разработаны способы использования в терапевтических и профилактических целях хелатокомплексных соединений натрийэтилендиаминтетраацетатов цинка, меди, кобальта и железа, установлены их токсикологические свойства, влияние на клинико-биохимический статус лабораторных и продуктивных животных, а также качество продуктов убоя.

Научная новизна исследований подтверждена тремя патентами: № 12220 «Способ лечения гипомикроэлементоза кобальта, меди, цинка и железа у сельскохозяйственных животных» от 30 августа 2008 г; № 2451926 «Способ подготовки проб волос крупного рогатого скота к исследованию на макро- и микроэлементный состав» от 23 декабря 2010 г; № 111427 «Устройство для изучения всасываемости веществ кишечником животных» от 20 декабря 2011 г.

Практическая значимость работы. Разработаны, зарегистрированы в установленном порядке и в условиях государственных ветеринарных фармацевтических предприятий УП «Витебская биофабрика» и УП «Витебский завод ветеринарных препаратов» (Республика Беларусь) налажен промышленный выпуск ветеринарных препаратов «Феравет» (ТУ ВУ 390123511.080-2012), «Ко-бальвет» (ТУ ВУ 390123511.081-2012) , «Цинковет» (ТУ ВУ 390123511.0822012) и «Купровет» (ТУ ВУ 390123511.083-2012) и «Тетрамикроэлемент К» (ТУ ВУ 390123593.021-2009). Инструкции по применению этих препаратов утверждены Ветбиофарсоветом МСХиП РБ - протокол № 48 от 14 июля 2009 г и №51 от 12 февраля 2010 г. ' . ; 5 ^'¿й',

В условиях ОАО «Экомол» (Республика Беларусь) освоено серийное производство лечебно-профилактических премиксов с использованием разработанных ветеринарных препаратов. I

Способы лечения и профилактики гипомикроэлементозов крупного рогатого скота с применением разработанных ветеринарных препаратов, а также совершенствование методов диагностики микроэлементозов изложены в 3 рекомендациях, утвержденных ГУВ МСХиП РБ и одобренных научным Координационным Советом по животноводству и ветеринарии Северо-Западного регионального научного центра Россельхозакадемии.

В практическом производственном секторе скотоводческих предприятий Беларуси, хозяйствах Смоленской области и Краснодарского края внедрены разработанные способы борьбы с микроэлементозами крупного рогатого скота.

Основные положения диссертационной работы внедрены в учебный процесс аграрных ВУЗов России, Беларуси и Литвы.

Апробация результатов исследования. Основные положения и результаты диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на следующих конференциях, симпозиумах и съездах: VI Международной научно-практической конференции «Исследования молодых учёных в решении проблем животноводства», г. Витебск, 24-25 мая 2007 г; XI Международной научно-практической конференции «Современные проблемы сельскохозяйственного производства» (Гродно, 2008); Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения д.б.н., профессора В.М. Же-денова (Одесса, 2008); Международной научно-практической конференции по патофизиологии животных, посвящённой 200-летию ветеринарного образования в России и 200-летию СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2008); Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития» (Ульяновск, 2009); Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы электрофизиологии и незаразной патологии животных», посвященной 70-летию заведующего кафедрой терапии и клинической диагностики профессора Ю.А. Тарнуева (Улан-Удэ,

И| I < k

2009); Международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве», посвященной 50-летию ВНИИФБиП (Боровск, 2010); X М1жнароднай конференцй' сшвргобкников та асшранив HHI ветеринарно'1 ме-дицини та якосп i безпеки продукци тваринництва (Кшв, 2011); Международной конференции по патофизиологии животных, посвященной 90-летию кафедг ры патологической физиологии ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» (Санкт-Петербург, 2011); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы приграничных районов Беларуси и Российской Федерации» (Витебск, 2011); III Съезд фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной, фармакологии, токсикологии и фармации» (Санкт-Петербург, 2011); International scientific conference „Actualities in veterinary and animal science", for celebrating 75 year anniversary of Lithuanian Veterinary Academy and

Veterinary Year 2011 (Kaunas, 2011); Международной научно-практической конференции «Инновационные технологии производства и переработки сельi к. скохозяйственной продукции» (Владикавказ, 2012); VII Международной научно-практической конференции «Аграрная наука - сельскому хозяйству» (Барнаул, 2012).

Публикации результатов исследований. По результатам диссертационной работы опубликованы 68 научных работ, из них 15 - в журналах из списка, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ; трёх рекомендациях, 2 из которых утвержденны и рекомендованны к изданию Главным управлением ветеринарии МСХиП РБ, 1 - научным Координационным Советом по животноводству и ветеринарии Северо-Западного регионального научного центра Россельхо-закадемии.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на 495 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 9 разделов результатов исследований, заключения, выводов, практических предложений и списка литературы, включающего 561 источник. Работа иллюстрирована 86 таблицами и 33 рисунками, приложением.

Заключение диссертации по теме «Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных», Ковалёнок, Юрий Казимирович

5. ВЫВОДЫ:

1. Микроэлементозы широко распространены в условиях промышленного мясного скотоводства Беларуси. Они составляют на этапе выращивания от 18,6 до 25,65%, у бычков групп доращивания - от 40,80 до 69,02% и на заключительном этапе откорма от 31,52% до 61,4%. Структура микроэлементозов определяется технологическим этапом. У бычков этапа выращивания мономикро-элементозы в среднем по стране за период 2007 - 2011 гг. составляют 26,9%, недостаток 2-х элементов констатирован у 58,7% животных, дефицит 3 и более элементов у 18,3% бычков. У животных этапа доращивания соответственно: 7,4% - мономикроэлементозы, 34,7% - дефицит двух элементов, 58,2% - 3-х и более. На заключительном этапе: 6,6% - мономикроэлементозы, 31,7% - недостаток двух элементов, 64,3% - дефицит 3-х и более минералов.

2. Клинико-биохимический профиль крови здорового крупного рогатого скота на откорме в условиях Республики Беларусь определеяется региональными особенностями алиментарного типа. Гематологические (лейкоциты, эритроциты, гемоглобин, гематокрит), биохимические (общий белок, альбумины, глюкоза, триглицириды, активность АлАТ, АсАТ) и показатели минерального (Са, Р, Na, К, Mg, Al, Mn, Fe, Со, Ni, Си, Zn) обмена имеют статистически значимые (р<0,05-0,01) вариативные межрегиональные различия, указывающие на необходимость дифференцированного суждения о норме того или иного показателя применительно к региону хозяйствования. Причины массовых микроэлементозов бычков на каждом из технологических этапов откорма вариативны и определяются констелляцией факторов, характерных для каждого региона Беларуси. К ним в ранговом порядке убывания (Std. Est. от -0,3536 до -0,1921; р<0,05-0,0001) относятся: уровень Fe, общего белка и глюкозы сыворотки крови, Со, Са, Си, эритроцитов, триглицеридов, отношения Co/Cu, Co/Zn, Cu/Zn.

3. Лектины кормов нарушают функционирование системы транспорта микроэлементов через апикальную мембрану энтероцитов, чем на 4,6% снижают всасывание Со, на 11 - 12 % меди и цинка (Р<0,05), на 16,4% - железа

Р<0,01), что является одним из факторов развития гипомикроэлементозов у животных.

4. Биодоступность микроэлементов, определяется их химической формой и сопряжена с разностью путей трансэпителиального транспорта, а также механизмов его реализации. Так, хелатные формы Си, Zn, Со и Ре на основе этилендиаминтетрауксусной кислоты транспортируются парацеллюлярно за счет формирующегося градиента концентрации. Это подтверждается сохраняющейся способностью данных соединений к кишечному транспорту в модельных условиях аноксии и повышению (РОД) 1-0,001) интенсивности процесса всасывания на 36,9% для Ъп\ 26,4% для Си; 16% для Со и на 9% для Бе, за счет включением в инкубационные растворы глюкозы.

5. Разработанные ветеринарные препараты по токсичности относятся к умеренно опасным веществам. Среднесмертельная доза (ЛД50) при внутриже-лудочном введении белым мышам и крысам составляет (соответственно): для ветеринарного препарата «Феравет» 2931,3 и 2300,0 мг/кг, «Купровет» 455,0 и 525,0 мг/кг, «Цинковет» 2425,0 и 2075,0 мг/кг, «Кобальвет» 1244,4 и 811,36 мг/кг, «Тетрамикроэлемент К» 880 и 739,2 мг/кг живой массы. Предельно допустимые дозы препаратов при энтеральной их даче белым мышам на протяжении 120 суток составляют: «Феравет» 29,4 мг/кг, «Купровет» 2,9 мг/кг, «Цинковет» 29,4 мг/кг, «Кобальвет» 6,7 мг/кг, «Тетрамикроэлемент К» 62,5 мг/кг. Разработанные препараты не обладают кожно-резорбтивным действием и местно-раздражающими свойствами на кожные покровы и слизистые оболочки, относятся к веществам с умеренной кумуляцией - коэффициент кумуляции по Л.Н. Медведю составляет от 4,23 до 3,15.

6. Ветеринарные препараты «Феравет», «Купровет», «Цинковет» и «Кобальвет» положительно влияют на микроэлементный состав продуктов убоя животных, значимо (Р<0,05-0,01) повышая содержание эссенциальных элементов в печени, мышечной ткани и почках. Получаемое после применения препаратов мясо имеет общую микробную обсемененность в допустимых СанПиН 11

- 63 РБ 98 пределах, не содержит возбудителей зооантропонозов, пищевых токсикозов, токсикоинфекций и может использоваться без ограничений.

7. Ветеринарный препарат «Купровет» при лечении крупного рогатого скота, больного гипокупрозом, позволяет нормализовать к 21 дню количество эритроцитов (до 6,47±0,264х1012/л, р<0,05), гемоглобина (до 102,5±8,149 г/л, р<0,05), уровня Си в крови (до 0,62±0,036 мг/кг, р<0,05), концентрацию церу-лоплазмина (до 2,38±0,191 г/л, р<0,05) и его активность (до 121,4±7,094 Ш, р<0,01). Препарат сокращает непроизводственное выбытие животных и на 18,5% повышает (р<0,05) приросты их массы.

Способ профилактики гипокупроза крупного рогатого скота, состоящий в использовании ветеринарного препарата «Купровет» позволяет снизить заболеваемость животных на 21%, статистически значимо (р<0,01) повысить среднесуточные приросты массы тела на 78 г, существенно сократить непроизводственное выбытие животных, а также значимо (р<0,05-0,01) повысить уровень: активности церулоплазмина (на 50,2%), среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците (на 35%), концентрациию церулоплазмина (27,5%), среднее содержание гемоглобина в эритроците (26%), гемоглобина (на 25,6%), эритроцитов (на 21,2%) и Си (на 16%).

Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий при использовании ветеринарного препарата «Купровет» в расчете на 1 рубль затрат по технологическим этапам откорма составляет: на 1-ом - от 2,86 до 3,89 рублей; на 2-ом - от 3,97 до 4,98 рублей и на 3-ем - 3,97 до 4,98 рублей.

8. Ветеринарный препарат «Феравет» при лечении крупного рогатого скота, больного железодефицитной анемией позволяет повысить к 21 дню концентрацию Ре в сыворотке крови до 17,06±0,892 мкмоль/л, р<0,01, насыщение железом трансферрина до 22,2±0,892 %, р<0,01, количество эритроцитов до 1

4,7±0,244 х10 /л, р<0,05, концентрацию гемоглобина до 111,8 ±7,629 г/л и снизить общую железосвязывающую способность сыворотки крови до 76,9±5,602 мкмоль/л, р<0,05.

Профилактика железодефицитной анемии крупного рогатого скота, путем использования препарата «Феравет», позволяет на 17,2% сократить (р<0,05) заболеваемость животных, на 13,1% (р<0,05) повысить среднесуточные приросты массы тела за счет повышения в крови на 29% (р<0,01) уровня Ре до 21,33±1,190 мкмоль/л, насыщения железом трансферрина на 14,3% (р<0,01) до 26,31±0,244 %, общего белка в сыворотке крови на 23,6% (р<0,01) до 70,61±0,498 и НвВ на 22,9% (р<0,01) до 107,9±6,211 г/л. Препарат позволяет на 1-ом этапе откорма на 1 вложенный рубль получать от 2,07 до 4,67 рублей выгоды; на втором - от 2,15 до 3,62 рублей, а на третьем этапе - 2,67 - 4,28 рубля.

9. Ветеринарный препарат «Кобальвет» при лечении крупного рогатого скота, больного гипокобальтозом, позволяет стабилизировать клиническое состояние животных за счет значимого (р<0,05-0,01) роста концентрации Со в волосяном покрове до 64,33±5,379 мкг/кг и крови животных - до 28,90±1,810 мкг/кг, гемоглобина до 99,35±4,963 г/л и общего белка в сыворотке крови до 66,38±0,412 г/л. Это позволяет вдвое снизить непроизводственное выбытие и на 6,7% повысить продуктивность животных в сравнении с применением СоБО^

Способ профилактики гипокобальтоза крупного рогатого скота с использованием ветеринарного препарата «Кобальвет» позволяет на 12,5% снизить заболеваемость животных и повысить (р<0,05) средние суточные приросты массы тела животных на 5,4% в сравнении с использованием Со804, сократить непроизводственное выбытие животных, а также значимо (р<0,05-0,01) повысить уровень Со в волосяном покрове животных до 120,8±7,435 мкг/кг и крови - до 34,1±0,177 мкг/кг; концентрацию общего белка в сыворотке крови до 74,4±0,407 г/л и гемоглобина крови до 108,2±5,453 г/л. Препарат «Кобальвет» для лечения и профилактики гипокобальтозов у крупного рогатого скота позволяет получить на первом технологическом этапе откорма 2,21 - 3,96 рубля на 1 рубль затрат; на втором - 3,27 - 4,32 и на третьем - 3,94 - 4,90 рубля на 1 рубль затрат, что на 35 - 131 % выше таковых значений в контроле.

10. Ветеринарный препарат «Цинковет» при лечении крупного рогатого скота, больного паракератозом, позволяет нормализовать активности щелочной фосфатазы (до 2298± 152,06 нкат/л), сорбитолдегидрогеназы (до 160,1 ±8,809 нкат/л) и супероксиддисмутазы (до 1,32±0,038 усл. ед. /мг ЬЮВ), концентрации Хп в крови (до 3,61±0,282 мг/кг) и волосяном покрове (до 83,18±5,367 мг/кг). Препарата устраняет непроизводственное выбытие животных и на 7,1% повышает (р<0,05) среднесуточные приросты массы тела в сравнении с 2пБ04.

Профилактические мероприятия паракератоза крупного рогатого скота с использованием ветеринарного препарата «Цинковет» обеспечивают 97,3% профилактический эффект, позволяют на 6,7% (р<0,05) повысить среднесуточные приросты массы тела за счет повышения на 7,6% (р<0,05) уровня Ъп в волосяном покрове до 91,94±6,099 мг/кг и крови на 7,3% (р<0,05) до 3,65±0,020 мг/кг; роста активности щелочной фосфатазы на 35,1% (р<0,01) до 2294± 166,3 нкат/л, сорбитолдегидрогеназы на 13,8% (р<0,05) до 164,5±9,411 нкат/л и супероксиддисмутазы на 18,4% (р<0,05) до 1,3±0,083 нкат/л.

Ветеринарный препарат «Цинковет» для лечения и профилактики цин-кдефицита крупного рогатого скота, находящегося на откорме, позволяет получить экономическую эффективность ветеринарных мероприятий в расчете на 1 рубль затрат по технологическим этапам открома: на 1-ом - от 3,06 до 3,72 рублей; на 2-ом - от 2,72 до 5,17 рублей и на 3-ем - 3,08 до 5,31 рублей.

11. Способ терапии крупного рогатого скота, больного полигипомикро-элементозами, заключающийся в ежедневной энтеральной даче ветеринарного препарата «Тетрамикроэлемент К» сокращает на 3,6-10,7% непроизводственное выбытие животных, позволяет дополнительно получить 27 г в сутки приростов (р<0,05) массы тела за счет более эффективной (в сравнении с солями соответствующих элементов) усвояемости Си, Ъх\, Со и Бе, приводящей к повышению (р<0,05-0,001) в крови и волосяном покрове: уровня Си до 0,54-0,61 и 5,19-5,86 мг/кг соответственно; уровня Ъп до 3,73-3,80 и 80,7 и 90,7 мг/кг соответственно; уровня Со до 34,8-38,0 и 111,2 и 142,8 мг/кг соответственно; это приводит к стабилизации метаболических расстройств, выражающейся снижением (р<0,05-0,001) активности ферментов-маркеров цитолиза аланин- и аспартатами-нотрансферазы, как результат уменьшения количества продуктов липопероксидации: диеновых конъюгатов (до 0,1-0,25 усл.ед.оп.пл/мг липидов), кетодиенов и триенкетонов (до 0,09-0,14 усл.ед.оп.пл/мг липидов), малонового диальдегида (до 1,12-1,17 мкмоль/л), оснований Шиффа (до 0,31 усл.ед.оп.пл/мг липидов), на фоне роста (р<0,05-0,001) таких показателей как активность щелочной фос-фатазы (до 2037-2507 нкат/л), супероксиддисмутазы (до 1,09-1,19 усл.ед./мг гемоглобина), сорбитолдегидрогеназы (до 144,8-158,9 нкат/л), активности це-рулоплазмина (до 5,39-6,09 нкат/л), количества эритроцитов (до 4,39-4,47x109/л), гемоглобина (до 93,8 г/л), общего белка в сыворотке крови (до 68,472,6 г/л) и степени насыщения железом трансферрина (до 24,3-29,0 %).

Способ профилактики сочетанных гипомикроэлементозов крупного рогатого скота с использованием препарата «Тетрамикроэлемент К» позволяет снизить заболеваемость животных на 48,6% и сократить непроизводственное их выбытие на 8,6%, а также на 8,85% (р<0,01) повысить средние суточные приросты массы тела в сравнении с использованием солей микроэлементов, за счет значимого (р<0,05-0,01) повышения уровня Со в волосяном покрове животных до 135,3±6,856 мкг/кг и крови - до 32,33±0,181 мкг/кг; Си в волосяном покрове животных до 5,22±0,328 мг/кг и крови - до 0,65±0,045 мг/кг; Ъп в волосяном покрове животных до 93,1±4,605 мг/кг и крови - до 3,65±0,222 мг/кг; Бе в сыворотке крови до 23,27±0,172 мкмоль/л. Это приводит к более скоординированному течению обменных реакций, определяемых уровнем общего белка в сыворотке крови (73,9±0,299 г/л), альбумина (32,1 ±0,173 г/л), общих липидов (2,98±0,147 г/л), эритроцитов (5,66±0,303, 109/л), гемоглобина (113,0±5,989 г/л), аланинаминотрансферазы (404±34,423 нкат/л), аспартатаминотрансферазы (1151±71,59 нкат/л) и щелочной фосфатазы (2119±102,22 нкат/л), а также сбалансированному уровню течения оксидантно-прооксидантных реакций.

Тетрамикроэлемент К» для борьбы с комплексными гипомикроэлемен-тозами позволяет получить на 1 рубль затрат - 2,90-5,45 рублей на этапе выращивания животных; 4,45-5,30 рублей на этапе доращивания и на заключительном этапе откорма - 4,85-5,69 рублей.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ:

1. Оценку популяционного минерального профиля крупного рогатого скота осуществлять посредством определения содержания минеральных веществ в волосах, оценки фактического кормления и результатов клинических исследований контрольных групп животных. Для установления эффективности лечебно-профилактических мероприятий при микроэлементозах проводить определение содержания макро- и микроэлементов, минимум в двух биосубстратах - в волосах и крови.

2. Для достижения полной очистки волоса животных от экзогенных загрязнений без потерь эндогенных макро- и микроэлементов при их химическом анализе пользоваться способом, состоящим в последовательном применении промывающих сред: бидистиллированная вода - 40%-ный этиловый спирт-ректификат - бидистиллированная вода с обработкой в ультразвуковой ванне акустической волной с рабочей частотой колебания 35 кГц (патент № 2451926).

3. Для изучения всасываемости веществ кишкой животных, использовать устройство состоящее из корпуса, выполняющего функцию водяной бани, внутри которого, перпендикулярно его продольной оси находятся автономные рабочие камеры, заполненные испытуемым раствором вещества, в которых на специальной пластине монтируется участок тонкой кишки животного, вывернутый слизистой оболочкой наружу, что позволяет судить об энтеральной всасываемости веществ (патент № 111427).

4. При разработке мероприятий по борьбе с недостаточностью цинка, меди, кобальта и железа у крупного рогатого скота следует руководствоваться инструкциями по применению ветеринарных препаратов «Тетрамикроэлемент К», «Цинковет», «Купровет», «Кобальвет» и «Феравет», утвержденных Вет-биофарсоветом Министерства сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь (протокол № 48 от 14 июля 2009 г и № 51 от 12 февраля 2010 г), а также рекомендациями по совершенствованию диагностики, лечения и профилактики микроэлементозов крупного рогатого скота, одобренными научным

Координационным Советом по животноводству и ветеринарии СевероЗападного регионального научного центра Российской академии сельскохозяйственных наук.

5. При производстве ветеринарных микроэлементных препаратов «Цин-ковет», «Купровет», «Кобальвет», «Феравет» и «Тетрамикроэлемент К» следует руководствоваться ТУ ВУ 390123511.080-2012, ТУ ВУ 390123511.081-2012, ТУ ВУ 390123511.082-2012 и ТУ ВУ 390123511.083-2012 и ТУ ВУ 390123593.0212009.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Теоретические и экспериментальные концепции диссертации посвящены изучению фундаментальной научной проблемы - трансэпителиальному транспорту микроэлементов кишкой крупного рогатого скота и разработке на основе полученных знаний ветеринарных препаратов для эффективных мер борьбы с широко распространенной производственной проблемой - микроэлементозами крупного рогатого скота.

Оценка распространения микроэлементозов крупного рогатого скота осуществлялась в условиях промышленного мясного скотоводства Республики Беларусь в ходе мониторинговых исследований 2007-2011 г.

Широкие клинические, лабораторные и биометрические исследования показали, что степень распространенности микроэлементозов у крупного рогатого скота на откорме имеет выраженную зависимость от биогеохимических характеристик местности и возраста животных, а соответственно и типа их кормления. Нами установлено, что наиболее широко микроэлементозы распространены в сельскохозяйственных предприятиях юго-восточного, восточного и северного регионов Беларуси (45-48,5%) - меньше (28,0-32,8%) данная проблема стоит перед животноводами центрального, северо-западного и юго-западного регионов хозяйствания. Отмечено, что при высокой общей вариабельности широты охвата животных болезнями минерального типа по этапам откорма - наибольшая степень вовлечения бычков в данные процессы констатировалась на втором и третьем технологических этапах (52 и 43% - соответ-свенно), что может быть связано с переходом на растительные корма. Обращает на себя внимание также и факт того, что в рамках одного географического региона страны констатированы некоторые увеличения или снижения степени охвата животных болезнями минерального типа в зависимости от года проведения мониторинговых исследований. Так, наиболее неблагополучным в данном контексте явился 2010 год (средняя заболеваемость - 52%), в то время как в 2009 году выявлен наименьший средний уровень микроэлементозов - 30,7%.

Для оценки нозологической структуры нарушений обменного типа у животных, протекающих в субклинической форме, нами был избран метод логистической и линейной регрессии 52 признаков качественного и количественного типов с пошаговыми алгоритмами включения и исключения предикторов, ранжирующим признаки в соответствии с их результирующим вкладом в тип констатируемой болезни. Проведенные исследования показали, что нозологическую структуру выявляемых болезней можно охарактеризовать как весьма дисперсную, зависящую от многих обстоятельств - регион мониторинговых исследований, производственный этап, год проведения исследований и т.п. Констатированные коэффициенты детерминации от 0,6997 до 0,8599 для уравнений множественной линейной регрессии позволяют заключить что структура болезней минеральной недостаточности определяется, прежде всего, дихотомическим фактором «регион исследования - технологический производственный этап». Так, у бычков этапа выращивания в Беларуси за период 2007 - 2011 гг. мономикроэлементозы составили 26,9%, недостаток 2-х элементов констатирован у 58,7% животных того же технологического этапа, а дефицит 3 и более элементов отмечен у 18,3% исследовавшихся особей. У животных этапа дора-щивания вышеприведенная структура сочетанности следующая: 7,4% - мономикроэлементозы, 34,7% - дефицит двух элементов, 58,2% - 3-х и более. Заключительный этап, собственно откорма представлен следующей структурой сочетанностей: 6,6% - мономикроэлементозы, 31,7% - недостаток двух элементов, 64,3% - дефицит 3-х и более минеральных веществ.

Анализ этиологической сущности представленной в работе степени распространения болезней обменного типа в целом и минерального в частности показал, что статистически значимыми предикторами являются, прежде всего те факторы, которые иллюстрируют общую обеспеченность животных пластическими и энергетическими веществами (уровень альбумина, глюкозы, тригли-церидов и т.п.), активность ферментов-маркеров цитолиза и т.д. Вместе с тем, в структуре признаков, указывающих на происхождение СОН, большой удельный вес занимают показатели минерального обмена и в частности А1,

К, Бе, Со, Си и др. Обращает на себя внимание и прогностическая значимость расчетных отношений уровень Бе к Со и Си к Zn. Что с весьма высоким (84,5 — 92,1%) уровнем вероятности указывает на существенную роль минеральных веществ в метаболических расстройствах субклинического типа. Обращает на себя внимание и тот факт, что каждый из предикторов, вошедших в конечное уравнение имел статистически значимый коэффициент регрессии (Рг > ChiSq гораздо меньше критического уровня).

Резюмируя констелляцию факторов, играющих роль в возникновении СОН у откормочного крупного рогатого скота Беларуси в ранговом порядке убывания можно выразить следующим образом: уровень глюкозы, А1, Бе, общего белка сыворотки крови, Со, Са, Си, лейкоцитов, эритроцитов, триглице-ридов, отношения Со/Си, Со!Ъп,

Особо необходимо отметить, что в условиях Беларуси определенную (712%) этиологическую роль в развитие микроэлементозов вносят лектины кормов, входящие в состав рационов животных - в частности лектины кукурузы.

Исследования демонстрируют, что сложившаяся широкая практика отбора крови, как универсального биомаркера микроэлементного обмена представляемая в большинстве литературных источников справочного и учебного типов в определенной степени не верна. По результатам наших исследований можно заключить, что реакция крови на пероральное поступление минеральных веществ является весьма оперативной, но не продолжительной. Эксперименты демонстрируют значимый (р<0,05) рост концентрации элементов в крови уже через 2-3 часа после энтерального их поступления. Полученные нами данные указывают так же и на то, что время, в течение которого по картине крови можно констатировать уровень обеспеченности веществом определяется как гомеостатическими механизмами организма, так и особенностями элемента как такового. Так, об уровне обеспеченности (равно как и об эффективности осуществляемых лечебно-профилактических мероприятий) организма крупного рогатого скота Бе и Си можно судить только на протяжении 7-8 суток от начала использования соответствующих средств коррекции. В то время как пероральные нагрузки бычков Хп приводят к стойкому повышению (р<0,05) концентрации данного элемента в крови на протяжении 40 - 50 (!) суток, в то время как двухнедельная энтеральная дача животным Со — статистически значимо не отражается на уровне данного элемента в крови. Вышеизложенное дает основание полагать, что исследование крови, как диагностического биосубстрата имеет высокую значимость, только в краткосрочных временных форматах, поскольку ориентировочно с 8 - 9 дня продолжающейся внешней пероральной нагрузки элементом уровень его в крови стабилизируется и не отражает продолжающееся накопление (получено нами экспериментально) организмом.

Вместе с тем, наши исследования показывают, что элементный анализ волосяного покрова также имеет свои диагностические особенности. Мы полагаем, что ХЭСВП оправдан только в случае проведения популяционных исследований, поскольку отражает интегральное состояние минерального обмена и химического состава кормов, воды и воздуха. По-видимому, ХЭСВП отражает глобальные биогеохимические изменения в биосфере и может использоваться также для оценки экологической ситуации отдельных территорий.

Проведенные нами исследования позволяют заключить, что наиболее приемлемым подходом для массовых исследований минерального обмена у крупного рогатого скота является интегральная оценка обеспеченности организма микроэлементом, включающая определение его содержание в волосяном покрове, оценку фактического кормления и клинические исследования. В случае оценки обеспеченности отдельного животного или необходимости построения суждений об эффективности лечебно-профилактических мероприятий необходимо определение содержания изучаемого микроэлемента, по крайней мере, в двух субстратах, например, в волосах и крови, чтобы получить представление о «ретроспективном» и существующем на момент исследования характере обеспеченности. При этом, разумеется, также предполагается оценка функционального состояния организма и проведение соответствующих ситуации лабораторно-клинических исследований. V к( л'*

А1*.

1,4

Мы полагаем, что для диагностически адекватного суждения о количественном содержании элементов в волосяном покрове животных крайне важна тщательно отработанная система предварительной его подготовки к исследованию. Результаты наших опытов показали, что малейшие погрешности пробо-подготовки ведут к недостаточной и неравномерной степени очистки волоса, существенному повышению значений отдельных элементов и разбросу показателя в весьма широком диапазоне (от 34 до 172 %), что демонстрирует неоднородность получаемого значения в пределах выборки и может служить источником диагностических ошибок. Разработанный нами способ подготовки проб волос крупного рогатого скота к исследованию на макро- и микроэлементный состав состоит в последовательном использовании промывающих сред: биди-стиллированная вода - 40%-ный этиловый спирт-ректификат - бидистиллиро-ванная вода с обработкой в ультразвуковой ванне акустической волной с рабочей частотой колебания 35 кГц. Серия проведенных исследований показывает, что применение в качестве промывающего агента воды исключает вымывание из волоса эндогенных макро- и микроэлементов. Очищающее воздействие ультразвука заключается в образовании в моющей жидкости чередующихся высоких и низких волн давления, которые создают кавитацию, то есть образуют множество микроскопических пузырьков, при соприкосновении с волосом обеспечивающих возникновение множества микровзрывов, отрывающих экзогенные частицы, не повреждая при этом структуру самого волоса, а 40%-ный этиловый спирт является хорошим растворителем, при этом не повреждает структуру волоса и не приводит к потерям эндогенных макро- и микроэлементов. Данный, патентованный нами способ (Коваленок Ю.К. и др., 2012) позволяет достичь необходимой степени чистоты пробы (CV=28-32%) с минимальными временными, энергетическими и трудовыми затратами.

Фундаментальными истоками синтеза высоко эффективных ветеринарных препаратов преорального типа является понимание путей и механизмов, посредством которых реализуется предполагаемый эффект усвояемости. В этой связи совершенствование методологических истоков функционирования изучения и понимания данных процессов представляется научно и производственно значимым.

Реализуя данный кластер научного интереса, нами создано устройство для изучения всасываемости веществ кишкой в условиях in vitro (патент РФ 111427). Сконструировано устройство, представляет собой систему камер, в которые помещаются участки тонкого отдела кишки. В устройстве, посредством циркуляционного термостата поддерживается постоянная температура, характерная для тела здоровых животных. Используемый участок тонкой кишки выворачивается слизистой оболочкой наружу и помещается в специальную камеру устройства, которая снаружи заполняется раствором испытуемого вещества в известной концентрации. Внутрь кишки, со стороны серозной оболочки, помещается вещество-растворитель. Рабочая камера устройства находится в условиях постоянно заданной температуры, которая поддерживается посредством эффекта водяной бани. Эксперимент осуществляется в присутствии кислорода (оксигенация) или азота (аноксия).

Результатами исследований показана работоспособность созданного нами модельного устройства. Так, показано, что в условиях созданной модели значимое поглощение кишечной стенкой испытуемого вещества и отсутствие сквозного его движения в направлении серозной оболочки, что констатировано некоторыми учеными (Wilson Т.Н., Wiseman G., 1954; Уголев A.M. и др., 1970; Эккерт Л.Г., Уголев A.M., 1985; Громова Л.В., 2003 и др.), выполнявшими исследования в условиях in vitro с использованием кишки лабораторных животных. Мы полагаем, что данный факт сопряжен с наличием дополнительных барьеров для транспорта веществ в данном направлении: стромы ворсинок, подслизистой основы, более мощной, в сравнении с лабораторными животными, мышечной и серозной оболочек, которые не являются барьером для всасывания in vivo.

Исследованиями установлено, что в первые 20-30 минут инкубации кишки в условиях созданной модели происходит статистически значимое, двух-трех кратное поглощение кишечной стенкой испытуемого вещества. Надо от

Н|,!

Ii „fv i » г1 „и, yhití метить, что данный временной период сопряжен со сравнительно низкими значениями коэффициента вариации (15,4-30,4%) по выборкам, что может трактоваться как высокая степень однородности числового ряда и закономерная устойчивость механизмов, определяющих данный эффект. Нами доказано, что последующее ослабление, вплоть до полного прекращения всасывания испытуемых веществ кишкой сопряжено с индукцией процессов протеолиза и пере-кисного окисления липидов в инкубацонной системе. Установлено, что значимая активация данных процессов начинается уже с 20 минуты опыта, не сказываясь существенно на позициях кишечного транспорта. В тоже время после получасовой инкубации кишки происходит прогрессирующий (Р<0,001) рост кинетических критериев биохимической формы выражения деструкции кишечной стенки. Констатированное нами повышение общей протеолитической активности исследуемого раствора до 95% ДИ от 1,06 до 2,41 ммоль/л/с наряду с кратно прогрессирующим уровнем концентрации легко окисляемых субстратов в реакционной смеси (ПА2) до 18616-22121 имп. с/с; суммы наработанных радикалов (ПА 3) в ответ на индукцию ПОЛ до 40528-41773 имп. с при нарастающем истощении антиокислительного потенциала (ПА 4) и отсутствии динамики со стороны буферных мощностей АОС мы связываем с морфологической деструкцией ворсинок (получено и подтверждено нами экспериментально) и высвобождением мембранно-связанных многочисленных тетра-, ди- и трипептидаз, аминопептидаз и др. ферментов протеолитического типа.

Экспериментально установлено также, что наиболее оптимальным растворителем, используемым для функционирования модели, является изотонический раствор натрия хлорида, поскольку испытывавшиеся более сложные элементные композиции не оказали значимого влияния на отмечавшиеся количественные характеристики всасывания.

Определив функциональную состоятельность созданного нами устройства, как модельного для изучения всасываемости веществ, установив оптимальные константы его функционирования мы реализовали серию экспериментов по изучению всасываемости Си, Ъа, Со и Бе в солевой и разрабатываемой нами хелатной формах. Целью указанного кластера исследований явилось создание высокоэффективных ветеринарных препаратов для борьбы с наиболее распространенными в условиях Беларуси микроэлементозами крупного рогатого скота.

Сопоставление позиций кишечного транспорта минеральных веществ в солевой и хелатной формах, осуществляемое в условиях оксигенации и аноксии показало, что испытуемые классы минеральных соединений всасываются посредством реализации разных механизмов. Иллюстрацией данного вывода явились статистически значимые (Р<0,001) различия в кумуляции испытуемого субстрата кишечной стенкой после ее инкубации в условиях аноксии. Количественные значения испытуемых элементов в кишечной стенке кумулирующей их из солевых форм возросли до 95% ДИ по меди (4,38-5,64 мг/кг), цинку (26,232,4 мг/кг), кобальту (0,032-0,004 мг/кг) и железу (27,6-34,5 мг/кг), что в целом превышало исходные значения на 24-36% и в сравнении с условиями эксперимента, осуществляемого в условиях оксигенации можно охарактеризовать как ничтожно малый рост показателя, поскольку в последнем увеличение количества элементов констатировано нами на уровне 147-263%. Вместе с тем, анализируя полученные числовые значения испытуемых элементов, входивших в рабочие растворы разработанных нами ветеринарных препаратов можно отметить сохранившуюся (в сравнении с условиями оксигенации) закономерность. Так, 95% ДИ для меди, аккумулированной кишечной стенкой из купровета составил 14,7-19,1 мг/кг, для хелатной формы цинка 95% ДИ составил 89,4-110,6 мг/кг, кобальта - 0,039-0,051 мг/кг и железа 90,1-111,9 мг/кг. Указанные значения превышали исходные на 136-318%, что определило весьма значимый (Р<0,001) уровень различий как в сравнении с исходными величинами, так и с конечными, полученными для солей.

Приведенный цифровой материал полученных в условиях аноксии результатов позволяет предполагать белково-опосредованный (вторичный активный) механизм кишечного всасывания микроэлементов в солевой форме и его блокировку подачей в систему азота. Данное заключение мы связываем с известным (Морозов И.А. и др., 1988, БгаЬо С., 1996; Wu Ь., Gokden N. Мауеих Р. Я., 2007) фактом того, что подача азота в инкубационную смесь неизбежно приводит к окислительному шоку и блокирует возможные механизмы активного транспорта веществ. Вместе с тем, аноксия не оказала значимого влияния на позиции кишечного транспорта разработанных нами хелатных соединений меди, цинка, кобальта и железа, что может выступать свидетельством принципиальных различий в механизмах всасывания солей и комплексонатов.

Полученные нами результаты исследований демонстрируют существенную и статистически значимую дихотомическую степень различий в кишечном транспорте испытуемых элементов. На наш взгляд, указанные различия могут быть сопряжены с принципиально различными путями и механизмами кишечного поглощения элементов в разных химических формах. Так, результаты исследований, демонстрирующие значимые различия в позициях кишечного транспорта в зависимости от присутствия или отсутствии в модели глюкозы со всей очевидностью в цифровом выражении демонстрируют статистически значимую (Р<0,05-0,001) активизацию всасываемости испытуемых веществ в хе-латной их форме и отсутствие таковой для солей элементов при наличии в инкубационной смеси глюкозы. Сопоставляя научные наработки ученых (Мазо В.К., Гмошинский И.В., Ширина Л.И., 2009), указывающие на преимущественно белково-опосредованный механизм кишечной резорбции элементов, поступающих в желудочно-кишечный тракт в виде солей с результатами собственных исследований (практическое отсутствие всасываемости элементов из состава солей в условиях аноксии и отсутствие существенного влияния наличия глюкозы в реакционной смеси), можно предположить, что всасываемость солевых форм испытанных элементов реализуется преимущественно по трансцел-люлярному пути, главным образом за счет реализации механизмов вторичного активного транспорта.

Вместе с тем, экспериментально показанный кишечный транспорт элементов из разработанных нами хелатных форм в условиях аноксии выступает свидетельством принципиально иных путей и механизмов их всасываемости.

Прежде всего, можно предположить, что всасываемость созданных ветеринарных препаратов не сопряжена трансцеллюлярным путем и его активными механизмами, поскольку подача азота в инкубационную смесь неизбежно приводит к окислительному стрессу и блокирует возможные механизмы активного транспорта веществ, чего в случае с разработанными нами веществами не происходило. А это, в свою очередь, может служить свидетельством только того, что данный феномен реализуется по парацеллюлярному пути. Далее, имевшее место увеличение количественных характеристик всасываемости хелатных форм элементов при наличии в инкубационной смеси глюкозы указывает и подтверждает, на наш взгляд, теорию всасываемости их по межклеточным (плотным) контактам. Мотивацией подобного рода заключения является доказанный факт преимущественно парацеллюлярного переноса глюкозы (Pappenheimer J.R. 1987-2001) на потоке всасывающейся воды. В силу указанных обстоятельств резонно предполагать, что испытуемые нами халаты в силу размерности их молекул и определенного сродства к Са2+ изменяют физико-химические характеристики плотных контактов и всасываются тем самым на потоке всасываемой воды, сопряжено с глюкозой, а также за счет формирования в пристеночном слое высокого осмотического давления и реализуя котрас-порт по данному механизму.

Разработанные нами и изученные в условиях вышеизложенных модельных экспериментов образцы этилендиаминтетраацетатов железа, кобальта, меди и цинка, получившие в дальнейшем коммерческие названия ветеринарных препаратов «Феравет», «Кобальвет», «Купровет», «Цинковет» и «Тетрамикро-элемент К» подвергнуты комплексу испытаний, предусмотренных инструктивными, действующими в Республике Беларусь документами по испытанию новых ветеринарных препаратов. Исследования полученных натрийэтилендиа-минтетраацетатов проведены в объеме, включающем изучение токсичности, местно-раздражающих свойств и кумулятивных их способностей. В опытах на сельскохозяйственных животных изучена специфическая эффективность, аспекты фармакокинетики и фармакодинамики и качество продукции животноводства после применения веществ.

Реализация данного кластера исследований показала, что симптомы отравления испытуемыми веществами наступали в течение 2-3 часов после введения соответствующей дозы хелатного соединения в желудок и выражались главным образом расстройствами пищеварительной, нервной и дыхательной систем грызунов - рвота с наличием крови, диарея, коликоподобные явления, полипное, нарушения координации движений, судороги. Патологоанатомиче-ское вскрытие демонстрировало гиперемию, множественные кровоизлияния на слизистых оболочках желудка и кишек, гастроэнтерит, полнокровие внутренних органов; отёчность и эмфизематозные участки лёгких; желтоватого цвета, дряблую печень; увеличение и изменения цвета почек и др.

Расчёт параметров токсичности и среднесмертельной дозы разработанных веществ методом Беренса показал, что ЛД50 для ЫаРе(есиа) при внутриже-лудочном введении белым мышам и крысам составляет 2931,3 и 2300,0 мг/кг массы, для МаСи(НесИ:а) соответствующие значения составляют 455,0 и 525,0, для ^пСНесКа) - 2425,0 и 2075,0 и для №Со(НесИа) - 1244,4 и 811,4 мг/кг массы, что позволяет отнести вещества к 3 классу опасности, т.е. умеренно опасным. Проведенные испытания показали, что испытуемые вещества не обладает кожно-резорбтивными и местно-раздражающими свойствами. Синтезированные комплексонаты относятся к веществам с умеренной кумуляцией - коэффициент кумуляции по Л.Н.Медведю для феровета составляет 4,23; для купровета -3,15; цинковета - 3,75; кобальвета - 3,55.

Разработанные вещества не оказывают отрицательного, в ветеринарно-санитарном отношении, воздействия на продукты убоя - послеубойный осмотр туш и органов от животных, получавших курсовую дозу синтезированных веществ, показал хорошую степень упитанности со значительным отложением подкожного жира и жира в области внутренних органов (сердца, почек, пред-желудков и т.д.); обескровливание, лимфатические узлы и другие внешние характеристики туши соответствовали показателям здорового крупного рогатого скота.

Органолептические исследования показали, что мясо от телят, которым применяли испытуемые комплексонаты, является доброкачественным продуктом, использование препаратов не оказывает отрицательного влияния на органолептические, физико-химические и биологические показатели продукции. Относительная биологическая ценность мяса, полученного от животных, которым применялись разработанные вещества, имела существенные отличия от такового показателя у контрольных телят, превышая его на 4,4 - 10,7 %. При этом необходимо отметить, что для ЫаСоЩесЙа) и №2пН(ес11а) в сравнении с контролем различия были достоверны (Р<0,05).

Использование разработанных ветеринарных препаратов «Феравет», «Цинковет», «Кобальвет» и «Купровет» приводит к значимому (Р<0,01) увеличению уровня соответствующего элемента в печени на 1,2-2 раза, в почках и мышечной ткани - в 0,4 - 1,2 раза (Р<0,05-0,01), не оказывая сколь-нибудь значимого влияния на уровень соответствующих микроэлементов в миокарде.

Обращает внимание причем наиболее «яркий», рост концентрации соответствующего элемента получен в группе животных, которым применяли «Цинч ковет», а наименее выраженный - «Кобальвет». Значимый рост уровня того или иного микроэлемента именно в печени и мышечной ткани с нашей точки зрения является свидетельством эффективного всасывания поступающих элементов в хелатной форме и их накоплением в органах и тканях, как основном депо микроэлементов в организме. Таким образом, комплекс ветеринарно-санитарных испытаний показывает, что разработанные вещества положительно влияют на микроэлементный состав туш, существенно повышая содержание эссенциаль-ных и дефицитных элементов в печени, мышечной ткани и почках. Получаемое мясо имеет общую микробную обсемененность в допустимых СанПиН 1163 РБ 98 пределах и не содержит возбудителей зооантропонозов, пищевых токсикозов и токсикоинфекций и может использоваться без ограничений.

В ходе разработки способов лечения и профилактики соответствующих гипомикроэлементозов животных с использованием синтезированных нами веществ установлено, что НаСи(Неска), применяемый ежедневно в терапевтических дозах позволяет стабилизировать количество RBC (до 6,47±0,264х1012/л, р<0,05), HGB (до 102,5±8,149 г/л, р<0,05), уровня Си в крови (до 0,62±0,036 мг/кг, р<0,05), концентрации ЦП (до 2,38±0,191 г/л, р<0,05) и его активности (до 121,4±7,094 U/1, р<0,01).

Использование NaFe(edta) при лечении животных с соответствующей недостаточностью приводит к повышению концентрации Fe в сыворотке крови до 17,06±0,892 мкмоль/л, р<0,01, СНЖ до 22,2±0,892 %, р<0,01, количества RBC до 4,7±0,244 х1012/л, р<0,05, концентрации HGB до 111,8 ±7,629 г/л и снижении ОЖСС до 76,9±5,602 мкмоль/л, р<0,05. Использование же препарата в профилактическом режиме позволяет повысить в крови на 29% (р<0,01) уровень Fe до 21,33±1,190 мкмоль/л (95% ДИ 18,99-23,66 мкмоль/л), СНЖ на 14,3% (р<0,01) до 26,31±0,244 % (95% ДИ 25,8-26,8%), PRT на 23,6% (р<0,01) до 70,61±0,498 (95% ДИ 69,6-71,6 г/л) и HGB на 22,9% (р<0,01) до 107,9±6,211 (95% ДИ 95,7-120,1 г/л).

Применение NaCoH(edta) в терапевтическом плане позволяет статистически значимо (р<0,05-0,01) повысить концентрацию Со в волосяном покрове до 64,33±5,379 мкг/кг (95% ДИ от 53,8 до 74,9 мкг/кг) и крови животных -до 28,90±1,810 мкг/кг (95% ДИ от 25,3 до 32,4 мкг/кг), концентрациию HGB до 99,35±4,963 г/л (95% ДИ от 91,6 до 102,3 г/л) и Prt до 66,38±0,412 г/л (95% ДИ от 65,5 до 67,2 г/л).

Энтеральное терапевтическое применение NaZn(edta) приводит к нормализации активности ЩФ (до 2298±152,06 нкат/л), СДГ (до 160,1±8,809 нкат/л) и СОД (до 1,32±0,038 усл. ед. /мг HGB), концентрации Zn в крови (до 3,61±0,282 мг/кг) и волосяном покрове (до 83,18±5,367 мг/кг).

Комплексный ветеринарный препарат «Тетрамикроэлемент К», используемый в терапевтическом режиме при сочетанных гипомикроэлементозах влечет повышение (р<0,05-0,001) в крови и волосяном покрове: уровня Си до 0,54-0,61 и 5,19-5,86 мг/кг соответственно; уровня Zn до 3,73-3,80 и 80,7 и 90,7 мг/кг соответственно; уровня Со до 34,8-38,0 и 111,2 и 142,8 мг/кг соответственно. Следствием чего является стабилизация метаболических расстройств, выражающаяся снижением (р<0,05-0,001) активности ферментов-маркеров цитолиза АлАТ (до 95% ДИ от 413 до 424 нкат/л) и АсАТ (до 95% ДИ от 1382 до 1477 нкат/л), как результат уменьшения количества продуктов липопероксида-ции: ДК (до 0,1-0,25 усл.ед.оп.пл/мг липидов), КД+ТК (до 0,09-0,14 усл.ед.оп.пл/мг липидов), МДА (до 1,12-1,17 мкмоль/л), ОШ (до 0,31 усл.ед.оп.пл/мг липидов), на фоне роста (р<0,05-0,001) таких показателей как ЩФ (до 2037-2507 нкат/л), СОД (до 1,09-1,19 усл.ед./мг ШВ), СДГ (до 144,8158,9 нкат/л), ЦПАк (до 5,39-6,09 нкат/л), ЫВС (до 4,39-4,47x109/л), ШВ (до 93,8 г/л), РЯТ (до 68,4-72,6 г/л) и СНЖ (до 24,3-29,0 %).

Комплекс проведенных исследований и экспертиз, научно-производственных проверок и хозяйственных опытов позволил нам зарегистрировать разработанные вещества в качестве ветеринарных препаратов с соответствующими коммерческими названиями «Феравет» (ТУ ВУ 390123511.0802012), «Кобальвет» (ТУ ВУ 390123511.081-2012) , «Цинковет» (ТУ ВУ 390123511.082-2012) и «Купровет» (ТУ ВУ 390123511.083-2012) и «Тетрамик-роэлемент К» (ТУ ВУ 390123593.021-2009), а также внести их в состав нормативного республиканского документа «Классификатор сырья и продукции комбикормового производства Министерства сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь» для использования в качестве лечебно-профилактических компонентов премиксов при соответствующих показаниях. Производство налажено на государственных фармацевтических предприятиях Республики Беларусь - УП «Витебская биофабрика» и УП «Витебский завод ветеринарных препаратов», а также предприятии по производству премиксов и комбикормов - ОАО «Экомол» Оршанского района Витебской области. В условиях названных производств ежегодно серийно выпускается тонны препаратов и десятки тон премиксов (приложение), которые используются в реальном производственном секторе Беларуси и смежных областях Российской Федерации (приложение).

1 * „I Iй , , . ' 1 , ( /у, г. . Л* " * * г V ' 'М г '

Список литературы диссертационного исследования доктор ветеринарных наук Ковалёнок, Юрий Казимирович, 2012 год

1. Абдуллаев, М. Г. Динамика и профилактика субклинического гипокобальтоза и гипокупроза у телят : автореф. дис. . канд. вет. наук / М. Г. Абдуллаев. - Одесса, 1989. - 16 с.

2. Авцын, А. П. Недостаточность эссенциальных микроэлементов и ее проявление в патологии / А. П. Авцын // Архив патологии. 1990. - Т. 52, № 3. -С. 3-8.

3. Агрохимическая характеристика почв сельскохозяйственных земель Республики Беларусь / И. М. Богдевич и др. ; РУП «Институт почвоведения и агрохимии НАН Беларуси» ; под ред. И. М. Богдевича. Минск, 2006. - 288 с.

4. Агроэкология / под ред. В. А. Черникова и др.. М.: Колос, 2000. - 536 с.

5. Алексеев, Ю. В. Тяжелые металлы в почвах и растениях / Ю. В. Алексеев. -М.: Агропромиздат, 1987. 142 с.

6. Алиев, А. А. Обмен веществ у жвачных животных / А. А. Алиев ; под ред. А. А. Алиева. М.: НИЦ Инженер, 1997. - 419 с.

7. И. Антонов, Б. И. Лабораторные исследования в ветеринарии : биохимические и микологические / Б. И. Антонов. М. : Агропромиздат, 1991. — 287 с.

8. Арсанукаев Д. Л. Метаболизм различных форм микроэлементов в организме молодняка крупного рогатого скота и овец : дис. . д-ра биол. наук : 03.00.04,03.00.13 / Д. Л. Арсанукаев. Тверь, 2006. - 244 с.

9. Арчаков, А. И. Микросомальное окисление / А. И. Арчаков. М. : Наука, 1975. - 327 с.

10. Афифи, А. Статистический анализ: подход с использованием ЭВМ / А. Афифи, С. Эйзен. М.: Мир, 1982. - 488 с.

11. Ачкасов, А. И. Микроэлементы в пищевых цепях урбанизированных территорий / А. И. Ачкасов, Б. А. Самаев, Н. Я. Трефилова // Микроэлементы в медицине. 2004. - Т. 5, вып. 4. - С. 3-4.

12. Ашурбеков, Т. Р. Содержание некоторых макро- и микроэлементов в волосах различных домашних животных / Т. Р. Ашурбеков // Судебно-медицинская экспертиза. -1975.-№1.-С.З 7-3 8.

13. Бабенко, Г. А. Микроэлементозы человека: патогенез, профилактика, лечение / Г. А. Бабенко // Микроэлементы в медицине. 2001. - Т. 2, вып. 1. - С. 2-5.

14. Байматов, В. Н. Состояние здоровья крупного рогатого скота в зоне биогеохимической провинции / В. Н. Байматов, Э. Р. Исмагилова, В. А. Васяев // Ветеринария. 2005. - № 1. - С. 42-45.

15. Балым Ю. П. Гомеостаз и жизнеспособность телят от коров, получавших препараты селена в сухостойный период / Ю. П. Балым // Ветеринарный консультант. 2007. - № 23 (162). - С. 12-13.

16. Бгатов, Л. В. Биогенная классификация химических элементов / Л. В. Бгатов // Философия науки. 1999. - № 2. - С. 8.

17. Безбородкин, Н. С. Методические указания по определению экономической эффективности ветеринарных мероприятий / Н. С. Безбородкин. -Витебск, 2000. 16 с.

18. Белоусова, Е. Л. Продуктивность коров, состав и технологические свойства молока при парентеральном введении комплексного минеральногопрепарата / Е. Л. Белоусова // Весщ Нацыянальнай акадэмн навук Беларусь Серыя аграрных навук. 2005. - № 2. - С. 75-78.

19. Беляков, И. М. Факторы, определяющие состояние и уровень минерального обмена / И. М. Беляков // Кормление сельскохозяйственных животных и кормопроизводство. 2007. - № 6. - С. 66-75.

20. Бем, Э. Простая радиальная иммунодиффузия по Манчини // Иммунологические методы / под. ред. X. Фримеля. — М. : Мир, 1979. 520 с.

21. Берестов, В. Я. Минеральный состав волосяного покрова норок и песцов / В. Я. Берестов, Н. В. Тюрнина. Петрозаводск : Карелия, 1984. - 158 с.

22. Бикел, П. Математическая, статистика : пер. с англ. / П. Бикел, К. Доксам. -М. : Финансы и статистика, 1983. Вып. 1. - 278 с.

23. Бирман, Б. Я. Приобретенные иммунодефицита птиц, их лечение и профилактика : автореф. дис. . д-ра вет. наук : 16.00.03 / Б. Я. Бирман. Минск, 2003.-33 с.

24. Буслович, С. Ю. Химические вещества и качество продуктов / С. Ю. Буслович, M. М. Дубенецкая. Минск : Ураджай, 1986. - 200 с.

25. В новый век с доказательной биомедициной Электронный ресурс. / В. П. Леонов [и др]. - Режим доступа : http://www.biometrica.tomsk.ru/poisk.htm. -Дата доступа : 07.07.2011.

26. Вакар, А. H. Эффективность применения минерально-витаминной добавки «Minerala magnesium» / А. H. Вакар // Международный вестник ветеринарии. 2007. - № 3. - С. 65-67.

27. Валюшкин, К. Д. Витамины и микроэлементы в профилактике бесплодия коров / К. Д. Валюшкин. Минск : Ураджай, 1981. - 96 с.

28. Валюшкин, К. Д. Влияние витамино-минеральной подкормки на плодовитость коров, их молочную продуктивность и качество приплода / К. Д. Валюшкин, Е. А. Юшковский // Ветеринарная медицина Беларуси. 2004. - № 2 (14).-С. 29-30.

29. Вернадский, В. И. Избранные сочинения. М. : Изд-во АН СССР, 1960.-Т. 5.-422 с.

30. Вешнякова, А. Ю. Исследование белков плотных контактов в эпителии кишки крысы : дис. . канд. биол. наук : 03.00.13 / Анна Юрьевна Вешнякова ; Санкт-Петербургский государственный университет. Санкт-Петербург, 2008. -162 с.

31. Виноградов, А. П. Биогеохимические провинции // Химизация сельского хозяйства : научно-практический словарь-справочник / А. П. Виноградов. -М. : Наука, 1968. С. 36-37.

32. Виноградов, А. П. Геохимические циклы / А. П. Виноградов. М. : Госгеотехиздат, 1960. - 188 с.

33. Владимиров, Ю. А. Хемилюминесценция клеток животных / Ю. А. Владимиров, М. П. Шерстнев // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. М. : ВИНИТИ, 1989. - Т. 24. - С. 15^0.

34. Влияние алиментарного микроэлементоза на активность глутатион-пероксидазы и супероксиддисмутазы / А. В. Васильев и др. // Биомедицинскаяхимия. 2008. - Т. 54, вып. 2. - С. 236-242.

35. Влияние питания на морфофункциональное развитие репродуктивных органов животных / Л. А. Абрамова и др. // Вестник РАСХН. 2004. - № 5. - С. 55-56.

36. Войнар, А. О. Значение микроэлементов в организме человека и животных / А. О. Войнар. М.: Знание, 1965. - 24 с.

37. Вредные вещества. Классфикация и общие требования безопасности : ГОСТ 12.1.007-76. -Введ. 01.01.1977.-М.: Изд-во стандартов, 1976.-С. 81-85.

38. Врзгула, Л. Нарушения обмена минеральных веществ / Л. Врзгула, Р. Бартко // Профилактика нарушений обмена веществ у сельскохозяйственных животных. -М.: Агропромиздат, 1986. С. 81-138.

39. Всасывание и секреция в тонкой кишке : субмикроскопические аспекты / И. А. Морозов и др.; АМН СССР. М.: Медицина, 1988. - 224 с.

40. Георгиевский, В. И. Минеральное питание животных / В. И. Георгиевский, Б. Н. Анненков, В. Т. Самохин. М.: Колос, 1979. - 471с.

41. Головатый, С. Е. Тяжелые металлы в агроэкосистемах / С. Е. Головатый; РУП«Институт почвоведения и агрохимии». Минск, 2002. - 240 с.1. V, т ^1.;,""Л,1