Изучение тканевого распределения фуллеренов в эксперименте и их токсиколого-гигиеническая характеристика тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.02.01, кандидат наук Шипелин, Владимир Александрович

• Шипелин, Владимир Александрович
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Шипелин, Владимир Александрович

ОГЛАВЛЕНИЕ

1 ВВЕДЕНИЕ

1.1 Актуальность темы

1.2 Научная новизна работы

1.3 Практическая значимость

1.4 Апробация работы

1.5 Публикации

1.6 Личный вклад соискателя

1.7 Объём и структура диссертации

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Физико-химические свойства фуллеренов

2.2 Характеристика токсичности и биологического действия фуллеренов в экспериментах in vitroia in silico

2.3 Характеристика токсичности и биологического действия фуллеренов in vivo

2.4 Изучение биораспределения и метаболизма фуллеренов в экспериментах in vivo

2.5 Краткое заключение

3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1 Животные, состав экспериментальных рационов

3.2 Характеристика используемых материалов и реактивов

3.2.1 Фуллерен С во и фуллеренол Сво(ОН)24

3.2.2 Прочие материалы и реактивы

3.3 Список использованного оборудования

3.4 Схемы экспериментальных моделей использованные в биологических экспериментах

3.4.1 Токсикологический эксперимент с фуллереном Сбо продолжительностью 28 дней

3.4.2 Токсикологический эксперимент с фуллереном Сбо продолжительностью 92 дня

3.4.3 Токсикологический эксперимент с фуллеренолом Сбо(ОН)24 продолжительностью 28 дней

3.4.4 Методика острого эксперимента по введению дисперсии фуллерена Свое изолированную петлю тонкой кигики крысы

3.4.5 Исследование стабильности фуллерена Сво в биологических субстратах с использованием модельных систем in vitro

3.5 Методы отбора субстратов и пробоподготовки биологических образцов используемые в подострых токсикологических экспериментах

3.6 Биохимические и гематологические методы исследования

3.7 Метод определения проницаемости кишечной стенки для антигенного белка ОВА

3.8 Метод изучения биораспределения фуллерена Сбо по органам и тканям животных с использованием ВЭЖХ

3.9 Метод определения содержания селена в биологических образцах

3.10 Метод лазерной конфокальной флуоресцентной микроскопии

3.11 Методы статистической обработки экспериментальных данных

4 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1 Характеристика размера частиц фуллерена Сбо и фуллеренола Сбо(ОН)24

4.2 токсиколого-гигиеническая характеристика немодифицированного фуллерена Сбо в эксперименте продолжительностью 28 дней

4.2.1 Влияние фуллерена Сбо на интегральные показатели и массу внутренних органов

4.2.2 Влияние фуллерена Сбо на содержание гемоглобина цельной крови и небелковых тиолов печени

4.2.3 Влияние фуллерена Сбо на проницаемость кишечного барьера для ОВА

4.3 токсиколого-гигиеническая характеристика немодифицированного фуллерена сбо в эксперименте продолжительностью 92 дня

4.3.1 Влияние фуллерена Сво на интегральные показатели и на массу внутренних органов80

4.3.2 Влияние фуллерена СбО на содержание гемоглобина цельной крови и небелковых тиолов печени

4.3.3 Влияние фуллерена Сбо на пронш^аемость кишки для ОБА

4.3.4 Влияние фуллерена СбО на содержание селена в организме крыс

4.3.5 Изучение биомаркеров токсического действия фуллерена С60 методом конфокальной флуорес1(ентной микроскопии

4.4 Изучение биораспределения фуллерена Сбо по органам и тканям в токсикологических экспериментах

4.5 токсиколого-гигиеническая характеристика фуллеренола Сбо(ОН)24 в эксперименте продолжительностью 28 дней

4.5.1 Влияние фуллеренола Сбо(ОН)24 на интегральные показатели и на массу внутренних органов

4.5.2 Влияние фуллеренола Сво(ОН)24на содержание гемоглобина цельной крови и небелковых тиолов печени

4.5.3 Влияние фуллеренола Сбо(ОН)24 на проницаемость кишечного барьера для ОБА

4.6 Эксперимент по исследованию стабильности фуллерена Сбо в биологических

субстратах с использованием модельных систем in vitro

5 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

6 ВЫВОДЫ

7 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

8 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение тканевого распределения фуллеренов в эксперименте и их токсиколого-гигиеническая характеристика»

1 ВВЕДЕНИЕ

1.1 Актуальность темы

Развитие нанотехнологий способствует появлению новых ультравысокодисперсных форм веществ (наноматериалов), многие свойства которых, в том числе действие на живые системы, отличает их от соединений в виде сплошных фаз или дисперсий с частицами макроскопических размеров. Поскольку человек не сталкивался с подавляющим большинством продуктов современной нанотехнологии в ходе своей предшествующей биологической эволюции, их влияние на здоровье человека может быть непредсказуемым, в том числе, возможны проявления острой и хронической токсичности [13]. В этой связи, характеристика потенциального риска полученных искусственным путём наночастиц и наноматериалов для здоровья человека и состояния окружающей среды обитания является обязательной [13; 21]. Важность оценки потенциальных рисков наноматериалов для здоровья человека отмечается в приказе Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека № 340 от 30.11.2007 г. Систематические исследования безопасности нанотехнологий и продуктов наноиндустрии были проведены за последние годы в Российской Федерации в рамках Федеральной целевой программы «Развитие инфраструктуры наноиндустрии в Российской Федерации на 2008-2011 годы» и программы РАМН «Нанотехнологии и наноматериалы в медицине» [14]. За рубежом, безопасности нанотехнологий и наноматериалов уделяется большое внимание в рамках исследований, проводимых под эгидой Европейской комиссии, US FDA, OECD, ФАО-ВОЗ, ILSI и других правительственных и международных органов [61].

Среди разнообразных видов продукции наноиндустрии особое место занимают фуллерены, представляющие собой новую аллотропическую форму углерода [19]. Молекулы фуллеренов образованы строго определённым (обычно 60 или 70) числом атомов углерода, соединённых в замкнутый симметричный каркас с формой, близкой к сферической. После открытия фуллеренов в 1985

году, их химические свойства были изучены самым подробным образом и синтезировано значительное число их модифицированных производных, включая фуллерены с привитыми боковыми алкильными цепями, гидроксилированные и карбоксилированные, эндоэдральные (с внедренными атомами металла) фуллерены, аддукты фуллеренов с аминокислотами и многое другое. Области практического применения фуллеренов постоянно расширяются и включают химический синтез и катализ, электронику, оптику, полиграфическую, лакокрасочную промышленность, фармакологию, производство парфюмерно-косметической продукции, биосенсоров, упаковочных материалов, средств защиты растений и т.д [105]. Поиск среди производных фуллеренов новых биологически-активных соединений, обладающих антиоксидантным, гепатопротекторным, радиопротекторным и другими видами защитного действия на организм человека послужил целью для разработки водорастворимых форм фуллеренов на основе их комплексов с у-циклодекстрином, поливинилпироллидоном, а также полигидроксилированного фуллерена -фуллеренола Сбо(ОН)г4. Сравнительная простота и технологичность производства фуллеренов, возможность их получения в высокоочищенной (99% чистоты и выше) форме делает их одним из наиболее популярных продуктов современной наноиндустрии. С другой стороны, это приводит к постепенному превращению фуллеренов в значимые контаминанты окружающей среды и к постоянному возрастанию рисков экспозиции человека фуллеренами при различных путях их поступления (кожном, пероральном, ингаляционном), на этапах их производства, использования и утилизации образующихся отходов. Актуальным на сегодняшний день является вопрос экотоксичности фуллеренов и возможности их переноса по трофическим цепям в биосфере [119, 182]. К сожалению, все эти опасения до настоящего времени не сопровождаются нигде в мире какими-либо попытками регуляции фуллеренов; в частности, полностью отсутствует их гигиеническое нормирование в продукции и объектах окружающей среды.

Сведения о возможной токсичности фуллеренов и их действии на биологические системы в настоящее время неполны и противоречивы. Главная

причина этого - сложности при проведении токсикологических экспериментов, связанные с введением фуллеренов в организмы экспериментальных животных, что определяется очень низкой растворимостью немодифицированных фуллеренов в воде и физиологических жидкостях, а также проблема их идентификации, связанная с их возможной биоконверсией под действием ферментных систем организма [126, 114] Вместе с тем, имеется ряд данных, указывающих на возможность поглощения фуллеренов клетками живых организмов и в культурах, их накопление в субклеточных структурах, влияние на ряд метаболических процессов и возможном кумулятивном эффекте [156, 77]. Согласно некоторым работам, фуллерены, выступая в роли ловушек свободных радикалов, могут обладать мощным антиоксидантным действием [74, 140]. Вместе с тем, в условиях внешнего освещения фуллерены могут выступать в качестве агентов фотокаталитической генерации свободных радикалов, то есть прооксидантов [36]. Сравнительная значимость этих противоположно направленных эффектов для биологических систем изучена недостаточно. Особо существенным является тот факт, что практически полностью отсутствуют экспериментальные данные, полученные после продолжительного воздействия фуллеренов на организм животных.

Оценка безопасности новых наноматериалов в Российской Федерации осуществляется по единому плану в соответствии с утверждёнными Роспотребнадзором нормативно-методическими документами. При этом ни один из представителей семейства фуллеренов до настоящего времени не был тестирован в достаточном объёме. Наибольшую значимость и актуальность в свете возможных сценариев воздействия фуллеренов на организм человека имеет их токсиколого-гигиеническая оценка при естественных путях поступления в организм, то есть, в первую очередь, через желудочно-кишечный тракт, а также при ингаляции и эпикутанном воздействии.

В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы являлась оценка возможных воздействий важнейших представителей семейства фуллеренов -немодифицированного фуллерена Сбо и его водорастворимого производного

фуллеренола Сбо(ОН)г4, на показатели состояния организма лабораторных животных при естественном пути поступления через желудочно-кишечный тракт.

В задачи работы входило:

1. Разработка методов введения фуллерена животным в составе коллоидных систем, стабилизированных биологически совместимыми полимерами и поверхностно-активными веществами.

2. Адаптация метода количественного определения фуллерена в составе биологических образцов с использованием ВЭЖХ.

3. Изучение поступления фуллерена во внутреннюю среду организма через пищеварительный тракт, биораспределение и бионакопление в условиях острых и подострых экспериментов.

4. Изучение в подостром эксперименте на лабораторных животных продолжительностью от 1 до 3 месяцев возможного токсического действия фуллерена Сбо и фуллеренола Сбо(ОН)24, в том числе на интегральные показатели организма, состояние защитного барьера желудочно-кишечного тракта, некоторые биохимические и гематологические показатели.

5. Изучение в модельных экспериментах возможности биодеградации и биотрансформации фуллерена Сбо под действием ферментных систем организма лабораторных животных.

В качестве объектов изучения были выбраны наиболее широко практически используемые в настоящее время представители семейства фуллеренов - немодифицированный фуллерен Ceo и его полигидроксилированное производное фуллеренол Сбо(ОН)г4 • В качестве основой биологической модели при исследовании использовали лабораторных крыс линии Вистар.

Применяемые методы исследования включали высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), динамическое лазерное светорассеяние, спекторакустическое исследование, токсикологические, биохимические, иммунохимические, гематологические и цитологические.

1.2 Научная новизна работы

Впервые проведена систематическая токсиколого-гигиеническая оценка фуллерена Сбо в подостром 28- и 92-дневном эксперименте на лабораторных животных с определением показателей, характеризующих возможное общетоксическое действие данного соединения, включая интегральные, физиологические, биохимические, гематологические и иммунологические показатели. Впервые показано, что при пероральном введении наноразмерной дисперсии фуллерена Сбо в дозе от 0,1 до 10 мг/кг массы тела в течение 28 и 92 дней данное соединение обладает общетоксическим действием на организм животных, что проявляется в частности в дозозависимом повышении проницаемости стенки тонкой кишки для макромолекул белка, увеличении числа CD 106+ гранулярных клеток в паренхиме печени. На основании полученных данных определена максимальная недействующая доза фуллерена Сбо при подостром пероральном поступлении, находящаяся в интервале от 1 до 10 мг/кг массы тела/сут. В подостром эксперименте продолжительностью 28 дней впервые в нанотоксикологии проведена токсиколого-гигиеническая оценка перорально вводимого фуллеренола Сбо(ОН)24 с определением показателей, характеризующих предполагаемое общетоксическое действие этого соединения. На основании полученных результатов исследований фуллерена Сбо и фуллеренола Сбо(ОН)г4 впервые определена величина максимальной недействующей дозы этого вещества при многократном поступлении через желудочно-кишечный тракт, находящаяся в интервале от ОД до 1 мг/кг массы тела/сут. В модельных экспериментах in vitro, воспроизводящих условия биотрансформации и биодеградации фуллерена Сбо в организме, впервые установлена быстрая деградация этого вещества под действием ферментных систем организма с образованием недетектируемых при хроматографическом анализе производных. С использованием этих данных объяснены причины противоречий в имеющихся данных литературы относительно процессов бионакопления, биотрансформации и физиологического действия фуллеренов в организме.

1.3 Практическая значимость

С использованием результатов проведенных исследований были разработаны, утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации и внедрены в работу учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, следующие нормативно-методические документы:

- МУ 1.2.2876-11 «Порядок выявления и идентификации наноматериалов в растениях»;

- МР 1.2.0048-11 «Порядок и методы определения органотропности и токсикокинетических параметров искусственных наноматериалов в тестах на лабораторных животных»;

- МР 1.2.0052-11 «Оценка воздействия наноматериалов на функцию иммунитета;

- МР 1.2.0054-11 «Порядок и методы оценки воздействия искусственных наночастиц и наноматериалов на токсическое действие химических веществ»;

- МР 1.2.0053-11 «Оценка воздействия наноматериалов на протеомный профиль и биосинтетические процессы в тестах на лабораторных животных».

1.4 Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:

- XII Всероссийском Конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» (Москва, 2010);

- XIII Всероссийском Конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» с международным участием (Москва, 2011);

- XIV Всероссийском Конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» с международным участием (Москва, 2012);

- IV Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье. Молодые ученые за устойчивое развитие страны в глобальном мире» с международным участием (Москва, 2012);

- - 10

- Пленуме по экологии человека и гигиене окружающей среды Российской Федерации «Научно-методологические и законодательные основы совершенствования нормативно-правовой базы профилактического здравоохранения: проблемы и пути их решения» (Москва, 2012);

- X научно-практической конференции с международным участием «Экспертиза, оценка качества, подлинности и безопасности пищевых продуктов» на базе ГОУ ВПО МГУПП (Москва, 2012);

- IX научно-практической конференции «Нанотехнологии производству» (Фрязино, 2013);

- IV съезде токсикологов России (Москва, 2013).

1.5 Публикации

По теме диссертации опубликовано 14 работ, в том числе 4 статьи в рецензируемых научных журналах рекомендованных ВАК Минобрнауки России, 1 методические указания и 4 методических рекомендаций.

1.6 Личный вклад соискателя

Планирование, организация, проведение экспериментов и исследований на лабораторных животных, работа с методами гравиметрии, спектрофотомерии, ВЭЖХ, ИФА, лазерной конфокальной флуоресцентной микроскопии, спектроакусического исследования, динамического рассеяния света, статистическая обработка полученных данных и их интерпретация. Все изложенные в диссертации материалы получены непосредственно самим соискателем, или при его участии.

1.7 Объём и структура диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, разделов материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов и выводов. Список литературы содержит 194 источника, из них 21

российских и 173 зарубежных источников. Объем работы составляет 138 страниц машинописного текста, содержит 22 рисунка и 25 таблиц.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Физико-химические свойства фуллеренов

Фуллерены и их производные, обладающие рядом уникальных и

потенциально полезных свойств, относятся к числу наиболее интенсивно

изучаемых наноматериалов. Фуллерены впервые были получены в 1985 г. путём

электродугового пиролиза графита в среде инертного газа [19]. Они представляют

собой индивидуальные однослойные сферические углеродные структуры,

содержащие 60, 70 (Рисунок 1) и более (до 540) атомов углерода, заключенных в

замкнутый каркас. Диаметр молекул низших фуллеренов составляет около 0,7 нм,

высших - до 15 нм [6]. В настоящее время большой интерес во всем мире вызывают перспективы использования фуллерена Сбо; его молекула представляет

собой усеченный икосаэдр, состоящий из 20 шестиугольников и 12

пятиугольников, внутри которого располагается полость диаметром около 0,5 нм.

Благодаря этому уникальному свойству получают такие топологические

соединения как эндоэдральные фуллерены, группы атомов в которых

расположены именно внутри молекулы фуллерена Сбо [131]. Фуллерены являются

высоко реакционно-способными молекулами, у которых атомы углерода в составе

сферического каркаса находятся в гибридизации 8р2, чем достигается высокая

стерическая напряженность молекулы и значительная склонность к вступлению в

реакции присоединения нуклеофилов [68].

VI "¿V \ \ \ Гм • ^ 1 ' Шяш&ж, 1/7 Ч

Сбо_Сто_Сбп(ОН

Рисунок 1. Фуллерены Сбо, С70 и фуллеренол Сбо(ОН)24

Для немодифицированных фуллеренов характерна практически полная нерастворимость в воде и биологических жидкостях и существенная (или даже высокая) растворимость в малополярных органических растворителях (толуол, бромбензол и др.) [19], а также достаточно неплохая растворимость в эфирах жирных кислот [42]. Но даже в растворенном состоянии, молекулы фуллеренов имеют высокую склонность к агрегации, что усложняет любые исследования их свойств [181]. Для решения этих задач существуют подходы к подготовке стоковых растворов фуллерена Сбо [133] (Таблица 1), не содержащих органических растворителей. Последнее обстоятельство существенно при проведении экспериментов на живых организмах, поскольку следы органического растворителя, прочно связанные агрегатами частиц фуллерена, способны проявлять собственное токсическое действие, что затрудняет корректную интерпретацию получаемых результатов.

Таблица 1

Обзор подходов к подготовке стоковых растворов фуллерена Сбо [133], не

содержащих органических растворителей

Приготовление Характеристика Определение количества

Метод приготовления стоковой суспензии Фильтрация Размер частиц (нм) Заряд (Мв) Конц. (мг/л) Метод анализа

1 2 3 4 5 6

Измельчение: фуллерен Сбо + деионизованная вода + БОБ + УЗ обработка Нет данных 235 -39,0±1,4 473 Нет данных

Обмен растворителями: Этанол/Сбо + деионизованная вода + УЗ обработка + отгонка на роторном испарителе 0,45 мкм 121,8±0,8 -31,6±2.3 4,20±0,86 Жидкостная хроматомасс-спектрометрия с жидкостной экстракцией

1 2 3 4 5 6

Длительное перемешивание, 2 недели - 11 месяцев: Сбо + деионизованная вода 0,45 мкм 178,6±1,2 211,8±1,9 -13,5±1,1 -44,5±0,4 0,22±0,07 0,23±0,05 1 .УФ-спектроскопия по светорассеянию испарённого образца 2.УФ-спектроскопия с ультрафильтрацией

Перемешивание 13 дней: Сбо в 10 мМ NaCl, рН=4,7, 10 Нет данных 513-1270 -61,8 до -43 250 Нет данных

Перемешивание 4 недели: Сбо + деионизованная вода + SDS Отстаивание + 10 мкм 380 Нет данных 50 Взвешенная масса вещества на добавленный объем растворителя

Перемешивание 5 недель: Сбо + деионизованная вода Нет данных 360±210 Нет данных Нет данных Нет данных

Перемешивание 40 дней: Сбо + деионизованная вода 0,45 и 0,22 мкм 83,1 -60 до -30 (при рН 5,5) 3,34 Общий органический анализ углерода

УЗ-обработка: Сбо + кукурузное масло Нет данных 234-3124 Нет . данных Нет данных Нет данных

УЗ-обработка: Сбо + солевой раствор Нет данных 407-5117 Нет данных Нет данных Нет данных

УЗ-обработка: Сбо + деионизованная вода 0,45 мкм 130±1 -40±1 1.7±0.12 Жидкостная хроматомасс-спектрометрия с жидкостной экстракцией

В ряде исследований были предприняты попытки повышения растворимости фуллеренов в воде для их введения в биологические системы. Этого можно было достичь за счёт использования поверхностных модификаций, растворителей, длительного перемешивания и механических воздействий (механоактивации). Однако способность этих процессов также влиять на токсичность фуллеренов требует оценки, особенно при рассмотрении использования растворителей, которые сами по себе могут обладать токсичностью. В качестве примера можно привести работу [48], выполненную на Е.соИ, в которой для проведения тестов осуществляли подборку комбинации

органического растворителя/ПАВ для солюбилизации фуллерена. Среди шести комбинаций растворителя, сочетание диметилсульфоксида с Твин-80 было оптимальным для определения отношения «доза-эффект», с целью оценки его воздействия на кишечную палочку.

Для изучения свойств фуллеренов в биологических системах используют их стабильные коллоидные растворы в воде [27, 110, 111, 112, 115, 101], мономолекулярные плёнки, нанесённые на поверхности различного вида [46, 62, 128, 137], водорастворимые комплексы с у-циклодекстрином или синтетическими полимерами [3, 20, 35, 94, 95, 132, 178, 186, 36], включение фуллеренов в липосомы [51].

В настоящее время получено значительное число химически модифицированных производных фуллеренов, включая их полигидроксилированные формы или фуллеренолы Сбо(ОН)п (Рисунок 1) [146], модифицированные фуллерены с «привитыми» боковыми органическими группами [169], аддукты с у-циклодекстрином [168], соединения включения, представляющие собой фуллерены с заключенным в полости молекулы атомом металла [53], и многие другие. Исследования, посвященные биологическому действию химически модифицированных водорастворимых производных фуллеренов, также довольно многочисленны.

2.2 Характеристика токсичности и биологического действия фуллеренов в экспериментах in vitro и in silico

Опасности для здоровья человека, связанные с воздействием фуллеренов, в данный момент недостаточно охарактеризованы, и необходимы дальнейшие исследования для того, чтобы количественно охарактеризовать эти эффекты в целях полноценной оценки риска. Характеристика токсических свойств фуллеренов и их разнообразных химически модифицированных производных имеет большое значение в свете существующих попыток использования фуллеренов в качестве пищевых добавок и ингредиентов [154], в косметической продукции [88], перспектив применения фуллеренов в медицине [29, 106], в

частности, в качестве радиопротекторных агентов [80, 38], антиоксидантов и акцепторов свободных радикалов [19, 74, 140, 153, 86], в качестве компонентов лекарственных препаратов, обладающих в некоторой степени антипролиферативными [59, 190], противоопухолевыми [75, 73, 72, 180, 183], противовирусными [150, 139] и нейропротекторными свойствами [148, 149, 184], а также для эффективной доставки лекарственных средств [96, 104, 50]. Следует также иметь в виду, что по мере расширения производства и промышленного применения фуллеренов их определённые количества смогут поступать в окружающую среду и становиться значимыми контаминантами экосистем и пищевой продукции [25].

Как показали исследования на клетках E.coli, фуллерен Сбо не был генотоксичен в SOS-хромотесте [8]. Этим результатам, однако, противоречат данные работы [54], в которой воздействие водных дисперсий Сбо на клетки бактерий Pseudomonas putida и Bacillus subtilis в концентрации 0,01 - 0,5 мг/л, вызывало значительную модификацию свойств клеточных мембран и значимое ингибирование их роста. Согласно [36] солюбилизированный поливинилпирролидоном фуллерен вызывал повреждение клеток E.coli по механизму развития оксидантного стресса.

В основе наблюдаемой токсичности фуллерена лежат фотоиндуцированные физико-химические и клеточные процессы, включая окислительные, генотоксические [97, 175] и цитотоксические реакции, одной из главных причин которых является образование фуллеренами активных форм кислорода [91]. В исследовании [36] на бесклеточных системах немодифицированный фуллерен Сбо, солюбилизированный поливинилпирролидоном, обладал способностью генерировать синглетный кислород и супероксид анион, но не радикалы гидроксила. Аналогичная активность установлена для фуллеренола.

Для выяснения параметров токсичности коллоидных частиц фуллерена Сбо и С70 [83] проводили эксперименты в бесклеточной системе, содержащей фуллерен и молекулы белков (БСА). С использованием метода ядерного магнитного резонанса с импульсным градиентом магнитного поля, метода

асимметрического фракционирования течением под влиянием поля (AFFFF) и метода динамического лазерного светорассеяния (фотонная корреляционная спектроскопия, ФКС) показано, что наночастицы комплексов фуллеренов с белком в культуральной среде не принимают жесткую сферическую структуру, а имеют скорей гибкую структуру. Поскольку углеродные наноматериалы одинакового химического состава, но с различными геометрическими структурами обладают абсолютно разной биологической активностью и цитотоксичностью, это может оказывать разнообразные воздействия на процессы поглощения этих частиц клетками, что имеет немаловажное значение для оценки токсичности in vitro.

В исследовании [93] с использованием методов пространственного компьютерного моделирования показано, что фуллерены могут выступать в качестве блокаторов или модуляторов мембранных К+ каналов. Данный эффект, сопряжённый с возможным цитотоксическим действием, послужил основанием для другого исследования методом компьютерного моделирования, где были выявлены наиболее благоприятные белки-мишени для производных фуллерена [66].

По современным представлениям для фуллеренов характерна способность к взаимодействию с биологическими макромолекулами с возможной модификацией их свойств. Путем компьютерного моделирования в работе [189] установили, что молекулы Сбо могут препятствовать репарации ДНК. Для взаимодействия фуллеренов с белками характерен, по-видимому, эффект их солюбилизации в гидрофобном ядре глобулы таких крупных белков, как сывороточный альбумин (М=67кД). По данным [49] в растворе сывороточного альбумина удалось получить стабильную дисперсию Сбо концентрацией 9,3*10"6 М (6,7 мкг/мл). Этот результат может означать, что, несмотря на практически полную нерастворимость фуллеренов в воде, во внутриклеточной среде в определенных условиях концентрация этих веществ в молекулярной форме может быть довольно значительной.

Существует значительное число экспериментальных результатов, показывающих, что немодифицированные фуллерены, как в виде индивидуальных молекул, так и мультимолекулярных коллоидных частиц, могут поглощаться различными клетками высших животных в культуре. Так, кератиноциты человека быстро захватывали 14С-меченный фуллерен Сбо, вводимый в виде мультимолекулярных ассоциатов диаметром 3 мкм [145]. По мнению авторов работы после адгезии этих ассоциатов (не относящихся с точки зрения их размера к НЧ) к плазматической мембране клетки может происходить диффузия отдельных молекул фуллерена Сбо через липидный бислой. Согласно данным [110] наблюдается активный фагоцитоз полиморфноядерными нейтрофилами мультимолекулярных коллоидных частиц фуллерена Сбо- Авторы исследования [162] наблюдали поступление молекул фуллерена Сбо в клетки зачатков конечностей эмбриона крысы; в качестве формы введения использовали дисперсию частиц фуллерена Сбо, стабилизированную поливинилпирролидоном. Как показано в работах [129, 130] агрегированные частицы фуллерена Сбо захватываются макрофагами человека и выявляются затем методом просвечивающей электронной микроскопии в цитоплазме, лизосомах и, что наиболее существенно, в ядре клеток.

Таким образом, высокая гидрофобность фуллеренов, с одной стороны, ограничивает возможность их контакта с клетками ввиду малой растворимости в воде и, с другой стороны, является причиной высокой мембранотропности этих веществ. В модельной системе показано [134], что фуллерен Сбо способен проходить через липидный бислой мембраны в течение нескольких миллисекунд, в то время, как водорастворимый фуллеренол Сбо(ОН)2о через мембрану практически не проникает [152]. Судя по результатам представленных выше работ, следует предполагать наличие двух механизмов проникновения фуллеренов в клетки: 1) трансмембранная диффузия молекул фуллеренов из состава мультимолекулярных комплексов, «прилипающих» к внешней поверхности плазматической мембраны, и 2) фагоцитоз крупных

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шипелин, Владимир Александрович, 2014 год

8 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Андреев С.М., Бабахин A.A., Петрухина А.О. и др. Иммуногенные и аллергенные свойства коньюгатов фуллерена с аминокислотами и белком // ДАН. - 2000. - Т.370, № 2 . - С.261-264.

2. Арчаков А.И. Микросомальное окисление. - М.: Наука. - 1975. - С.327.

3. Виноградова Л.В., Меленевская Е.Ю., Хачатуров А.С и др. Водорастворимые комплексы фуллерена Сбо с поли-1Ч-инилпирролидоном // Высокомол. соед-

1998. - Т.40. - С.1854-1862.

4. Гмошинский И.В., Смирнова В.В., Хотимченко С.А. Современное состояние проблемы оценки безопасности наноматериалов //Российские нанотехнологии. -2010.-Т.5,№ 9-10.-С.6-10.

5. Голубкина H.A. Флуориметрический метод определения селена // Журн. аналитической химии. - 1995. - Т.50, № 8. - С.492^197.

6. Елецкий A.B., Смирнов Б.М. Фуллерены и структуры углерода // Успехи физических наук. - 1995. - Т.165, № 9. - С.977-1009.

7. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. Лабораторные животные, их разведение, содержание и использование в эксперименте. - Киев: Медгиз УССР. -1962.- 180 с.

8. Захаренко Л.П., Захаров И.К., Васюнина Е.А. и др. Определение генотоксичности фуллерена Сбо и фуллерола методом соматических озаиков на клетках крыла Drosophila melanogaster и в SOS-хромотесте // Генетика. - 1997. -Т.ЗЗ. - С.405-409.

9. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита // Соросовский образовательный журн. -

1999.-№ 1.-С.2-7.

10. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник. - М.: Медицина. - 1987. - 368 с.

11. Мазо В.К., Гмошинский И.В., Саблина В.В. и др. Проницаемость стенки тонкой кишки для белковых антигенов у человека и лабораторных животных // Вопросы питания. - 2008. - Т.77, № 2. - С. 10-21.

12. Микроскопическая техника: Руководство / Под ред. Саркосова Д.Л. и Перова Ю.Л. - М.: Медицина, 1996. - 544 с.

13. Онищенко Г.Г., Тутельян В.А. О концепции токсикологических исследований, методологии оценки риска, методов идентификации и количественного определения наноматериалов // Вопросы питания. - 2007. - Т.76, № 6. - С.4-8.

14. Онищенко Г.Г., Тутельян В.А., Гмошинский И.В. и др. Развитие системы оценки безопасности и контроля наноматериалов и нанотехнологий в Российской Федерации // Гигиена и санитария. - 2013. - № 1. - С.4-11.

15. Первушин Ю.В., Рогова С.Ш., Ковалевич Н.И. и др. Лабораторные методы исследования системы гемостаза и диагностика нарушений системы гемокоагуляции. Учебное пособие. Ставрополь-Москва. Издательство Москва. -2009. - 60 с.

16. Перцов С.С., Коплик Е.В., Калиниченко Л.С. Сравнительный анализ действия цитокинов на состояние тимуса, надпочечников и селезенки у крыс с разными поведенческими характеристиками // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010. - №9. - С. 244-247.

17. Пестова М.И., Гмошинский И.В., Мазо В.К. Влияние потребления молока на активность системы детоксикации формальдегида при сенсибилизации этим соединением // Вопросы питания. - 1992. - № 5-6. - С.41-44.

18. Пиотровский Л.Б., Еропкин М.Ю., Еропкина Е.М. и др. Механизмы биологического действия фуллеренов - зависимость от агрегатного состояния // Психофармакология и биологическая наркология. - 2007. - № 2. - С. 1548-1554.

19. Пиотровский Л.Б., Киселёв О.И. Фуллерены в биологии // СПб: ООО Издательство «Росток». - 2006. - 336 с.

20. Пиотровский Л.Б., Киселев О.И., Кезелецкая К.Н. и др. Противовирусная активность фуллерена Сбо в комплексе с поли(1Ч-винилпирролидоном) // ДАН. -1998. - Т.361, № 4. - С.547- 549.

21. Хотимченко С.А., Гмошинский И.В., Тутельян В.А. Проблема обеспечения безопасности наноразмерных объектов для здоровья человека // Гигиена и санитария. - 2009. - № 5. - С.7-11.

22. Ali Ansari-Lari M., Kickler T.S., Borowitz M.J. Immature granulocyte measurement using the Sysmex XE-2100. Relationship to infection and sepsis // Am. J. Clin Pathol. - 2003. - Vol.120. - P.795-799.

23. Andrievsky G., Klochkov V., Derevyanchenko L. Is C60 fullerene molecule toxic? // Fullerenes, Nanotubes, Carbon Nanostruct. - 2005. - V.13. - P.363-376.

24. Aoshima H., Yamana S., Nakamura S. et al. Biological safety of water-soluble fullerenes evaluated using tests for genotoxicity, phototoxicity, and pro-oxidant activity // J Toxicol Sci. - 2010. - Vol.35, N.3. - P.401^09.

25. Avanasi R., Jackson W.A., Sherwin B. et al. C60 fullerene soil sorption, biodégradation, and plant uptake // Environ Sci Technol. - 2014. - Vol.48, N.5. -P.2792-7.

26. Baati T., Bourasset F., Gharbi N. et al. The prolongation of the lifespan of rats by repeated oral administration of [60]fullerene // Biomaterials. - 2012. - Vol.33, N.19. -P.4936^16.

27. Baierl T., Drosselmeyer E., Seidel A., Hippeli S. Comparison of immunological effects of fullerene Côo and raw soot from fullerene production on alveolar macrophages and macrophage like cells in vitro // Exp. Toxicol. Pathol. - 1996. - V.48. - P.508-511.

28. Baker G.L., Gupta A., Clark M.L. et al. Inhalation toxicity and lung toxicokinetics of Côo fullerene nanoparticles and microparticles // Toxicol. Sci. - 2008. - V.101, N.l. -P.122-131.

29. Bakry R., Valiant R.M., Najam-ul-Haq M. et al. Medicinal applications of fullerenes // Int. J. Nanomedicine. - 2007. - N. 2(4). - P.639-649.

30. Baron J.L., Reich E.P., Visintin I. et al. The pathogenesis of adoptive murine autoimmune diabetes requires an interaction between alpha 4-integrins and vascular cell

adhesion molecule-1 // The Journal of clinical investigation. - 1994. - V.93. - N.4. -P.1700-1708.

31. Baun A., Sorensen S.N., Rasmussen R.F. et al. Toxicity and bioaccumulation of xenobiotic organic compounds in the presence of aqueous suspensions of aggregates of nano-C60 // Aquat. Toxicol. - 2008. - V.86, N.3. - P.379-387.

32. Behrens I., Pena A.I., Alonso M.J. et al. Comparative uptake studies of bioadhesive and non-bioadhesive nanoparticles in human intestinal cell lines and rats: the effect of mucus on particle adsorption and transport // Pharm. Res. - 2002. - Vol.19, N.8. -P.1185-1193.

33. Blickley T.M., McClellan-Green P. Toxicity of aqueous fullerene in adult and larval fundulus heteroclitus // Environ. Toxicol. Chem. - 2008. - V.24, N.l.

34. Borbala D., Gabor K., McAleer F.M. et al. In vivo radioprotection by the fullerene nanoparticle DF-las assessed in a Zebrafish model // Clin. Cancer Res. - 2006. - V.12, N.23.

35. Braun T., Buvari-Barcza A., Barcza L. et al. Mechanochemistry: a novel approach to the synthesis of fullerene compounds. Water soluble buckminster-fullerene-y-cyclodextrin inclusion complexes via a solid-solid reaction // Solid State Ionics. - 1994. - V.74.-P.47-51.

36. Brunei L., Lyon D.Y., Hotze E.M. et al. Comparative photoactivity and antibacterial properties of C60 fullerenes and titanium dioxide nanoparticles. Environ Sei Technol. - 2009. - Vol.43, N.12. - P.4355^1360.

37. Cagle D.W., Kennel S.J., Mirzadeh S. et al. In vivo studies of fullerene-based materials using endohedral metallofullerene radiotracers // Proc Natl Acad Sei USA. -1999. - Vol.96, N.9. P.5182-7.

38. Cai X., Hao J., Zhang X. et al. The polyhydroxylated fullerene derivative C60(OH)24 protects mice from ionizing-radiation-induced immune and mitochondrial dysfunction // Toxicol Appl Pharmacol. - 2010. - Vol.243, N.l. - P.27-34.

39. Canesi L., Ciacci C., Vallotto D. et al. In vitro effects of suspensions of selected nanoparticles (C60 fullerene, Ti02, Si02) on Mytilus hemocytes. // Aquat Toxicol. -2010. - Vol.96, N.2. - P.151-158.

40. Canesi L., Fabbri R., Gallo G. et al. Biomarkers in Mytilus galloprovincialis exposed to suspensions of selected nanoparticles (Nano carbon black, C60 fullerene, Nano-TiO(2), Nano-SiO(2)) // Aquat Toxicol. - 2010. - Vol.100, N.2. P. 168-77.

41. Carter R.A., Wicks I.P. Vascular cell adhesion molecule 1 (CD 106): a multifaceted regulator of joint inflammation // Arthritis and rheumatism. - 2001. - V.44. - N.5. -P.985-94.

42. Cataldo F. Solubility of fullerenes in fatty acids esters: a new way to deliver in vivo fullerenes. Theoretical calculations and experimental results // Carbon Materials: Chemistry and Physics. - 2008. - Vol.1. - P.317-335.

43. Chang X., Ruan L., Yang S. et al. Quantification of carbon nanomaterials in vivo: direct stable isotope labeling on the skeleton of fullerene C60 // Environ. Sei. - 2014. -Vol.1.-P.64-70.

44. Chen C., Xing G., Wang J. et al. Multihydroxylated [Gd@C82(OH)22]n nanoparticles: antineoplastic activity of high efficiency and low toxicity // Nano. Lett. -2005. - V.5, N. 10. - P.2050-2057.

45. Chen H.H., Yu C., Ueng T.H. et al. Acute and subacute toxicity study of water-soluble polyalkylsulfonated C60 in rats // Toxicol. Pathol. - 1998. - V.26, N.l. -P. 143- 151.

46. Cheng X., Kan A. T., Tomson M. B. Naphthalene adsorbtion and desorption from aqueous C60, fullerene // J. Chem. Eng. Data. - 2004. - V.49. - P.675-683.

47. Chiron J., Lamande J., Moussa F. et al. Effect of «micronized» C60 fullerene on the microbial growth in vitro // Ann. Pharm. Fr. - 2000. - V.58. - P. 170-175.

48. Cook S.M., Aker W.G., Rasulev B.F. et al. Choosing safe dispersing media for C60 fullerenes by using cytotoxicity tests on the bacterium Escherichia coli // J Hazard Mater. - 2010. - Vol.176, N.l-3. - P.367-373.

49. Deguchi S., Yamazaki T., Mukai S.A. et al. Stabilization of C60 nanoparticles by protein adsorption and its implications for toxicity studies // Chem. Res. Toxicol. -2007. - V.20, N.6. - P.854-858.

50. Dellinger A., Zhou Z., Connor J. et al. Application of fullerenes in nanomedicine: an update. // Nanomedicine (Lond). - 2013. - Vol.8, N.7. - P. 1191-208.

51. Doi Y., Ikeda A., Akiyama M. et al. Intracellular uptake and photodynamic activity of water-soluble [60] and [70]fullerenes incorporated in liposomes // Chemistry. -2008.-V.12.

52. Dukhin A.S., Goetz P.J. Characterization of liquids, nano- and microparticulates and porous bodies using ultrasound // Studies in interface science, Vol.24. - 2010. -Amsterdam et al.: Elsevier. - 518 p.

53. Dunk P.W., Adjizian J.J., Kaiser N.K. et al. Metallofullerene and fullerene formation from condensing carbon gas under conditions of stellar outflows and implication to stardust // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 2013. - Vol.110, N.45. -P.18081-18086.

54. Fang J., Lyon D.Y., Wiesner M.R. et al. Effect of a fullerene water suspension on bacterial phospholipids and membrane phase behavior // Environ Sei. Technol. - 2007. - V.41, N.7. - P.2636-2642.

55. Faulstich H., Zobeley S., Rinnerthaler G. et al. Fluorescent phallotoxins as probes for filamentous actin // Journal of muscle research and cell motility. - 1988. - Vol. 9, N.5.-P. 370-383.

56. Fiorito S., Serafino A., Andreola F., Bernier P. Effects of fullerenes and single wall carbon nanotubes on murine and human macrophages // Carbon. - 2006. - Vol.44. -P.1100-1105.

57. Gao J., Wang H.L., Shreve A. et al. Fullerene derivatives induce premature senescence: a new toxicity paradigm or novel biomedical applications // Toxicol Appl Pharmacol. - 2010. - Vol.244, N.2. - P.130-143.

58. Gharbi N., Pressac M., Hadchouel M. et al. [60]Fullerene is an in vivo powerful antioxidant with no acute or sub acute toxicity // Nano Letters. - 2005. - V.5. - P.2578-2585.

59. Gelderman M.P., Simakova O., Clogston J.D. et al. Adverse effects of fullerenes on endothelial cells: fullerenol C60(OH)24 induced tissue factor and ICAM-I membrane expression and apoptosis in vitro // Int. J. Nanomedicine. - 2008. - N.3. - P. 59-68.

60. Gitsov I., Simonyan A., Wang L. et al Polymer-Assisted Biocatalysis: Unprecedented Enzymatic Oxidation of Fullerene in Aqueous Medium // J. Polymer Sci. Part A. - 2011. - Vol.50. - №1. - P.l 19-126.

61. Gmoshinski I.V., Khotimchenko S.A., Popov V.O. et al. Nanomaterials and nanotechnologies: methods of analysis and control // Russian Chemical Reviews. -2013. - Vol.82, N.l. - P.48-76.

62. Golub A., Matyshevska O., Prylutska S. et al. Fullerenes immobilized at silica surface: topology, structure and bioactivity // J. Mol. Liquids. - 2003. - V.105, N.2-3. -P.141-147.

63. Grebowski J., Kazmierska P., Krokosz A. Fullerenols as a New Therapeutic Approach in Nanomedicine // Biomed Res Int. - 2013. - ID 751913.

64. Grebowski J., Kazmierska P., Krokosz A. Fullerenol - properties and applications in biomedical sciences // Postepy Hig Med Dosw (Online). - 2013. - N.67. - P.859-872.

65. Griendling K.K., Minieri C.A., Ollerenshaw J.D. et al. Angiotensin II stimulates NADH and NADPH oxidase activity in cultured vascular smooth muscle cells // Circ Res. - 1994. - Vol.74. - P.l 141-1148.

66. Gupta S.K., Dhawan A., Shanker R. In silico approaches: prediction of biological targets for fullerene derivatives // J Biomed Nanotechnol. - 2011. - Vol.7, N.l. P.91-2.

67. Henry T.B., Menn F.M., Fleming J.T. et al. Attributing effects of aqueous C60 nano-aggregates to tetrahydrofuran decomposition products in larval zebrafish by assessment of gene expression // Environ. Health. Perspect. - 2007. - V.115, N.7. -P.1059-1065.

68. Hirsch A. Principles of Fullerene Reactivity // Topics in Current Chemistry. -Vol.199. - 1999.-P.l-65.

69. Hu Z., Guan W., Wang W. et al. Protective effect of a novel cystine C60 derivative on hydrogen peroxide-induced apoptosis in rat pheochromocytoma PC 12 cells // Chem. Biol. Interact. - 2007. - V.167, N.2. - P. 135-144.

70. Hu Z., Guan W., Wang W. et al. Synthesis of beta-alanine C60 derivative and its protective effect on hydrogen peroxide-induced apoptosis in rat pheochromocytoma cells // Cell Biol. Int. - 2007. - V.31, N.8. - P.798-804.

71. Huang Z.J., Haugland R.P., You W.M. et al. Phallotoxin and actin binding assay by fluorescence enhancement // Analytical biochemistry. - 1992. - Vol.200, N.l. - P. 199204.

72. Injac R., Boskovic M., Perse M. et al. Acute doxorubicin nephrotoxicity in rats with malignant neoplasm can be successfully treated with fullerenol C60(OH)24 via suppression of oxidative stress // Pharmacol. Rep. - 2008. - Vol.60, N.5. - P.742-749.

73. Injac R., Perse M., Cerne M. et al. Protective effects of fullerenol C60(OH)24 against doxorubicin-induced cardiotoxicity and hepatotoxicity in rats with colorectal cancer // Biomaterials. - 2009. - N.30. - P. 1184-1196.

74. Injac R., Radie N., Govedarica B. et al. Bioapplication and activity of fullerenol C60(OH)24 // African J. of Biotechnology. - 2008. - Vol.7, N.25. - P.4940^1050.

75. Injac R., Radie N., Govedarica B. et al. Acute doxorubicin pulmotoxicity in rats with malignant neoplasm is effectively treated with fullerenol C60(OH)24 through inhibition of oxidative stress // Pharmacol. Rep. - 2009. - N.61. - P. 335-342.

76. Irie K., Nakamura Y., Ohigashi H. et al. Photocytotoxicity of water-soluble fullerene derivatives // Biosci. Biotechnol. Biochem. - 1996. - V.60. - P.1359-1361.

77. Isaacson C.W., Usenko C.Y., Tanguay R.L., Field J.A. Quantification of fullerenes by LC/ESI-MS and its application to in vivo toxicity assays // Anal. Chem. - 2007. -V.79, N.23 - P.9091-9097.

78. Isakovic A., Markovic Z., Todorovic-Markovic B. et al. Distinct cytotoxic mechanisms of pristine versus hydroxylated fullerene // Toxicol. Sci. - 2006. - V.91, N.l. - P.173-83.

79. Jani P., Halbert G.W., Langridge J. et al. Nanoparticle uptake by the rat gastrointestinal mucosa: quantitation and particle size dependency // Pharm. Pharmacol. - 1990. - Vol.42. - P.821-826.

80. Johnston H.J., Hutchison G., Christensen F.M. et al. A review of the in vivo and in vitro toxicity of silver and gold particulates: particle attributes and biological

mechanisms responsible for the observed toxicity. // Crit Rev Toxicol. - 2010. - Vol.40, N.4. - P.328-346.

81. Kamat J.P., Devasagayam T.P., Priyadarsini K.I. et al. Oxidative damage induced by the fullerene C60 on photosensitization in rat liver microsomes // Chem. Biol. Interact. - 1998. - V.l 14, N.3. - P. 145-159.

82. Kapuscinski J. // Biotechnic & histochemistry: official publication of the Biological Stain Commission. - 1995. - Vol.70, N.5. - P. 220-233.

83. Kato H., Shinohara N., Nakamura A. et al. Characterization of fullerene colloidal suspension in a cell culture medium for in vitro toxicity assessment // Mol Biosyst. -2010. - Vol.6, N.7. - P.1238-1246.

84. Kato S., Aoshima H., Saitoh Y. et al. Biological safety of liposome-fullerene consisting of hydrogenated lecithin, glycine soja sterols, and fullerene-C60 upon photocytotoxicity and bacterial reverse mutagenicity // Toxicol. Ind. Health. - 2009. -Vol.25, N.3.-P. 197-203.

85. Kato S., Aoshima H, Saitoh Y. et al. Defensive effects of fullerene-C60 dissolved in squalane against the 2,4-nonadienal-induced cell injury in human skin keratinocytes HaCaT and wrinkle formation in 3D-human skin tissue model // J Biomed Nanotechnol. - 2010. - Vol.6, N.l. - P.52-58.

86. Kato S., Aoshima H., Saitoh Y. et al. Fullerene-C60/liposome complex: Defensive effects against UVA-induced damages in skin structure, nucleus and collagen type I/IV fibrils, and the permeability into human skin tissue // J Photochem Photobiol B. - 2010. -Vol.98, N.l.-P.99-105

87. Kato S., Aoshima H., Saitoh Y. et al. Highly hydroxylated or gamma-cyclodextrin-bicapped water-soluble derivative of fullerene: the antioxidant ability assessed by electron spin resonance method and beta-carotene bleaching assay // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2009. - Vol. 19, N.l8. - P.5293-5296.

88. Kato S., Taira H., Aoshima H. et al. Clinical evaluation of fullerene-C60 dissolved in squalane for anti-wrinkle cosmetics // J Nanosci Nanotechnol. - 2010 - Vol.10, N.10. - P.6769-74.

89. Kim K.T., Jang M.H., Kim J.Y. et al. Embryonic toxicity changes of organic nanomaterials in the presence of natural organic matter // Sci Total Environ. - 2012. -Vol.426.-P.423-9.

90. Klaper R., Crago J., Barr J. et al. Toxicity biomarker expression in daphnids exposed to manufactured nanoparticles: changes in toxicity with functionalization // Environ. Pollut. - 2009. - Vol. 157, N.4. - P. 1152-1156.

91. Kong L., Zepp R.G. Production and consumption of reactive oxygen species by fullerenes // Environ Toxicol Chem. - 2012. - Vol.31, N. 1. - P. 136-143.

92. Koni P.A., Joshi S.K., Temann U.A. et al. Conditional vascular cell adhesion molecule 1 deletion in mice: impaired lymphocyte migration to bone marrow // The Journal of experimental medicine. - 2001. - V.193. -N.6. - P.741-754.

93. Kraszewski S., Tarek M., Treptow W. et al. Affinity of C(60) neat fullerenes with membrane proteins: a computational study on potassium channels // ACS Nano. - 2010. -Vol.4, N.7.-P.4158-^1164.

94. Kuroda Y., Nozawa H., Ogoshi H. Kinetic behavior of solubilization of C60, into water by complexation with y-cyclodextrin // Chem. Lett. - 1995. - P.47-48.

95. Kutner W., Boulas P., Kadish K.M. Solubilization of buckminsterfullerene, C60, in water and some polar organic solvents by cytodextrin inclusion chemistry // J. Electrochem. Soc. - 1992. - V.139. - P.243.

96. Labuzek K., Gorki K., Jaroszek H. et al. Highly Organized Nanostructures for Brain Drug Delivery - New Hope or Just a Fad? // CNS Neurol Disord Drug Targets. -2013 Aug. 27 [Epub ahead of print],

97. Landa P., Vankova R., Andrlova J. et al. Nanoparticle-specific changes in Arabidopsis thaliana gene expression after exposure to ZnO, Ti02, and fullerene soot. // J. Hazard Mater. - 2012. - Vol.30, N.241- 242. - P.55-62

98. Lin A.M., Chyi B.Y., Wang S.D. et al. Carboxyfullerene prevents iron-induced oxidative stress in rat brain // J. Neurochem. - 1999. - V.72, N.4. - P. 1634-1640.

99. Liu Y., Jiao F., Qiu Y. et al. The effect of Gd@C82(OH)22 nanoparticles on the release of Thl/Th2 cytokines and induction of TNF-alpha mediated cellular immunity // Biomaterials. - 2009. - Vol.30, N.23- 24. - P.3934-3945.

100.Lovern S.B., Klaper R. Daphnia magna mortality when exposed to titanium dioxide and fullerene (C60) nanoparticles // Environ Toxicol. Chem. - 2006. - V.25, N.4.-P.1132-1137.

101. Ma X., Bouchard D. Formation of aqueous suspensions of fullerenes // Environ. Sci. Technol. - 2009. - Vol.43, N.2. - P.330-336.

102.Maeda R., Noiri E., Isobe H. et al. A water-soluble fullerene vesicle alleviates angiotensin II-induced oxidative stress in human umbilical venous endothelial cells // Hypertens. Res. - 2008. - V.31, N. 1. - P. 141-151.

103. McQualter J.L., Brouard N., Williams B. et al. Endogenous fibroblastic progenitor cells in the adult mouse lung are highly enriched in the sca-1 positive cell fraction // Stem cells. - 2009. - V.27. -N.3. - P.623-633.

104.Medrek M., Pluciriski F., Mazurek A.P. Endohedral complexes of fullerene C60 with small convalent molecules (H20, NH3, H2, 2H2, 3H2, 4H2, 02, 03) in the context of potential drug transporter system // Acta Pol. Pharm. - 2013. - Vol.70, N.4. -P.659-65.

105. Michalitsch R., Kallinger C., Verbandt Y. et al. The Fullerene Patent Landscape in Europe // Nanotechnology Law & Business. - 2008. - Vol.5, N.l. - P.85-94.

106.Montanez M.I., Ruiz-Sanchez A.J., Perez-Inestrosa E. A perspective of nanotechnology in hypersensitivity reactions including drug allergy // Curr Opin Allergy Clin. Immunol. - 2010. - Vol.10, N.4. - P.297-302.

107. Moriguchi T., Yano K., Hokari S., Sonoda M. Effect of repeated application of C60 combined with UVA radiation onto hairless mouse back skin // Full. Sci. Technol. - 1999.-V.7.-P.195-202.

108.Morimoto Y., Hirohashi M., Ogami A. et al. Inflammogenic effect of well-characterized fullerenes in inhalation and intratracheal instillation studies // Part Fibre Toxicol. - 2010. - Vol.7, N.4.

109. Morton D.B., Abbot D., Barelay R. et al. Removal of blood from laboratory mammals and birds // Laboratory animals. - 1993. - Vol. 27. - P.l-22.

1 lO.Moussa F., Chretien P., Dubois P. et al. The influence of C60 powders on cultured human leukocytes // Full. Sci. Techno. - 1995. - V.3. - P.333-342.

111.Moussa F., Chretien P., Pressac M., et al. Preliminary study of the influence of cubic C60 on cultured human monocytes: lack of interleikin-lB secretion // Full. Sci. Technol. - 1997. - V.5. - P.503-510.

112. Moussa F., Pressac M., Chretien P. et al. C60 fullerene toxicity: preliminary account of an in vivo study // Abstracts of Joint International Meeting the Electrochemical Society and the International Society of Electrochemistry. - 1997. -V.97, N.2. - P.1589.

113.Moussa F., Pressac M., Genin E. et al. Quantitative analysis of C60 fullerene in blood and tissues by high- performance liquid chromatography with photodiode-array and mass spectrometric detection // J. Chromatogr. B. Biomed. Sci. Appl. - 1997. -Vol. 696, N.l. - P.153-159.

114. Moussa F., Roux S., Pressac M. et al. In vivo reaction between [60] fullerene and vitamin A in mouse liver // New J. Chem. - 1998. - Vol.22. - P.989-992.

115. Moussa F., Trivin F., Ceolin R. et al. Early effects of C60 administration in Swiss mice: a preliminary account for in vivo C60 toxicity // Full. Sci. Technol. - 1996. - V.4. - P.21-29.

116. Mrdanovic J., Solajic S., Bogdanovic V. et al. Effects of fullerenol C60(OH)24 on the frequency of micronuclei and chromosome aberrations in CHO-K1 cells // Mutat. Res. - 2009. - Vol.680, N. 1- 2. - P.25-30.

117.Mroz P., Pawlak A., Satti M. et al. Functionalized fullerenes mediate photodynamic killing of cancer cells: Type I versus Type II photochemical mechanism // Free Radie. Biol. Med. - 2007. - V.43, N.5. - P.711-719.

118. Murakami M, Hyodo S, Fujikawa Y et al. Photoprotective effects of inclusion complexes of fullerenes with polyvinylpyrrolidone // Photodermatol Photoimmunol Photomed. - 2013. - V.29, N.4. - P. 196-203.

119. Navarro D.A., Kookana R.S., Kirby J.K. Behaviour of fullerenes (C60) in the terrestrial environment: potential release from biosolids-amended soils // J Hazard Mater. - 2013. - Vol.262. - P.496-503.

120. Nelson M.A., Domann F.E., Bowden G.T. et al. Effects of acute and subchronic exposure of topically applied fullerene extracts on the mouse skin // Toxicol. Ind. Health. - 1993. - V.9, N.4. -P.623-630.

121. Newman P.J. The biology of PECAM-1 // The Journal of clinical investigation. -1997. - V.99. -N.l. - P.3-8.

122.Nikolic N., Vranjes- Duric S., Jankovic D. et al. Preparation and biodistribution of radiolabeled fullerene C60 nanocrystals // Nanotechnology. - 2009. - Vol. 20, N.38. -P.385102.

123. Oberdörster E. Manufactured nanomaterials (fullerenes, C60) induce oxidative stress in the brain of juvenile largemouth bass // Environ. Health. Perspect. - 2004. -V.112, N.10. -P.1058-1062.

124. Oberdörster E., Zhu S., Blickley T.M. et al. Ecotoxicology of carbon-based engineered nanoparticles: Effects of fullerene (C60) on aquatic organisms // Toxicology of Carbon Nanomaterials. - 2006. - Vol.44, N.6. - P. 1112-1120.

125. Oberdörster G., Sharp Z., Elder A.P. et al. Translocation of inhaled ultrafine particles to the brain // Inhal. Toxicol. - 2004. - V.16, N.4. - P.437^145.

126.Panina L.K., Kurochkin V.E., Bogomolova E.V. et al. Biotransformation of Fullerenes // Doklady Biological Sciences. - 1997. - Vol.357. - N.2. - P.530-532.

127. Park E.J., Kim H., Kim Y. et al. Carbon fullerenes (C60s) can induce inflammatory responses in the lung of mice. // Toxicol. Appl. Pharmacol. - 2010. - Vol.244, N.2. -P.226-233.

128. Piotrovsky L.B. Biological activity of pristine fullerene C60 // Carbon Nanotech. / Ed. L. Dai: Elsevier. - 2006. - P.235-253.

129. Porter A., Gass M., Muller K. et al. Visualizing the uptake of C60 to the cytoplasm and nucleus of human monocytederived macrophage cellsusing energy- filtered transmissionelectron microscopy and electrontomography // Environ. Sei. Technol. -2007. - V.41, N.8. - P.3012-3017.

130. Porter A.E., Muller K., Skepper J. et al. Uptake of C60 by human monocyte macrophages, its localization and implications for toxicity: studied by high resolution

electron microscopy and electron tomography // Acta. Biomater. - 2006. - V.2, N.4. -P.409-419.

131. Popov A.A., Shangfeng Y., Dunsch L.. Endohedral Fullerenes // Chem. Rev. -2013.- 113(8).-P.5989-6113

132. Priyadarsini K.I., Monan H., Tyagi A.K., Mittai J.P. Inclusion complex of y-cyclodextrin-C60: formation, characterization, and photo-physical properties in aqueous solution // J. Phys. Chem. - 1994. - V.98. - P.4756^t759.

133.Pycke B.F., Benn T.M., Herckes P. et al. Strategies for quantifying C(60) fullerenes in environmental and biological samples and implications for studies in environmental health and ecotoxicology // Trends Analyt. Chem. - 2011. - Vol.30, N.l.

- P.44-57.

134. Qiao R., Roberts A.P., Mount A.S. et al. Translocation of C60 and its derivatives across a lipid bilayer // Nano Lett. - 2007. - V.7, N.3. - P.614-619.

135. Reeves P.G., Nielsen F.H., Fahey G.C. AIN-93 purified diets for laboratory rodents: final report of the American Institute of Nutrition ad hoc writing committee on the reformulation of the AIN-76A rodent diet // J Nutr. - 1993. - Vol.123, N.ll. -P. 1939-51.

136.Rieux A., Fievez V., Theate I. et al. An improved in vitro model of human intestinal follicle-associated epithelium to study nanoparticle transport by M cells // Eur. J. Pharm. Sci. - 2007. - Vol.30, N.5. - P.380- 391.

137. Richmond R. C., Gibson U.J. Fullerene coated surfaces and uses thereof. - US Patent № 5.310.669.- 1994.

138. Roberts J.E., Wielgus A.R., Boyes W.K. et al. Phototoxicity and cytotoxicity of fullerol in human lens epithelial cells // Toxicol. Appl. Pharmacol. - 2008. - V.228, N.l. - P.49-58.

139. Rud Y., Buchatskyy L., Prylutskyy Y. et al. Using C60 fullerenes for photodynamic inactivation of mosquito iridescent viruses // J Enzyme Inhib Med Chem.

- 2012. - Vol.27, N.4. - P.614-617.

140. Saitoh Y., Miyanishi A., Mizuno H. et al. Super-highly hydroxylated fullerene derivative protects human keratinocytes from UV-induced cell injuries together with the

decreases in intracellular ROS generation and DNA damages // J. Photochem. Photobiol. - 2011. - Vol. 102, N.l. - P.69-76.

141.Sakai A., Yamakoshi Y.N., Miyata N. The effects of fullerenes on the initiation and promotion stages of BALB/3T3 cell transformation // Full. Sci. Technol. - 1995. -V.3. - P.377-388.

142. Sayes C.M., Gobin A.M., Ausman K.D. et al. Nano-C60 cytotoxicity is due to lipid peroxidation // Biomaterials. - 2005. - V.26, N.36. - P.7587-7595.

143. Sayes C.M., Marchione A.A., Reed K.L., Warheit D.B. Comparative pulmonary toxicity assessments of C60 water suspensions in rats: few differences in fullerene toxicity in vivo in contrast to in vitro profiles // Nano. Lett. - 2007. - V.7, N.8. -P.2399-2406.

144. Sayes C.M., Reed K.L., Warheit D.B. Assessing toxicity of fine and nanoparticles: comparing in vitro measurements to in vivo pulmonary toxicity profiles // Toxicol. Sci.

- 2007. - V.97, N.l. - P. 163-180.

145. Scrivens W.A., Tour J.M., Creek K.E., Pirisi L. Synthesis of 14C-labeled C60, its suspension in water and its uptake by human keratinocytes // J. Am. Chem. Soc. - 1994.

- V.116. -P.4517-4518.

146.Semenov K.N., Charykov N.A., Keskinov V.N. Fullerenol synthesis and identification. Properties of the fullerenol water solutions // J. Chem. Eng. Data. - 2011. -Vol.56, N.2. - P.230-239.

147. Sera N., Tokiwa H., Miyata N. Mutagenicity of the fullerene C60-generated singlet oxygen dependent formation of lipid peroxides // Carcinogenesis. - 1996. - V.17, N.10.

- P.2163-2169.

148. Silva G.A. Neuroscience nanotechnology: progress, opportunities and challenges // Nat. Rev. Neurosci.- 2006. - N.7. - P. 65-74.

149. Silva G.A. Nanotechnology approaches for the regeneration and neuroprotection of the central nervous system // Surg. Neurol. - 2005. -N.63. - P.301-306.

150. Shoji M., Takahashi E., Hatakeyama D. et al. Anti-Influenza Activity of C60 Fullerene Derivatives // PLoS ONE. - 2013. - Vol.8, N.6. - P.e66337.

151.Spohn P., Hirsch C., Hasler F. et al. C60 fullerene: a powerful antioxidant or a damaging agent? The importance of an in-depth material characterization prior to toxicity assays // Environ. Pollut. - 2009. - Vol.157, N.4. - P. 1134-1139.

152. Spurlin T.A., Gewirth A.A. Effect of C60 on solid supported lipid bilayers // Nano Lett. - 2007. - V.7, N.2. - P.531-535.

153. Srdjenovic В., Milic-Torres V., Grujic N. et al. // Toxicol. Mech. Methods. - 2010. -Vol. 20, N.6. - P.298-305.

154. Steffensen I.L., Alexander J., Binderup M.L. et al. Opinion of the Panel on Food Additives, Flavourings, Processing Aids, Materials in Contact with Food and Cosmetics of the Norwegian Scientific Committee for Food Safety. Evaluation of an application to use fullerene C60 as a food additive. [Электронный ресурс] 17.12.2010. Doc. no.: 10406-5 final. ISBN: 978-82-8259-010-5. URL: http://www.vkm.no/dav/732f564c58.pdf

155. Stuart C.A., Twistelton R., Nicholas M.K. et al. Passage of cow's milk proteins in breast milk // Clin.Allergy. - 1984. - Vol.14, N6. - P.533-535.

156. Su Y., Xu J.Y., Shen P. et al. Cellular uptake and cytotoxic evaluation of fullerenol in different cell lines //Toxicology. - 2010. - Vol.269, N.2-3. - P. 155-159.

157. Takahashi M., Kato H., Doi Y. et al. Sub-acute oral toxicity study with fullerene C60 in rats // The Journal of Toxicological Sciences. - 2012. - Vol.37, N.2. - P.353-361.

158. Theriot C.A., Casey R.C., Moore V.C. et al. Dendro[C(60)]fullerene DF-1 provides radioprotection to radiosensitive mammalian cells // Radiat Environ Biophys. -2010. -Vol.49, N.3. - P.437^145.

159. Trajkovic S., Dobric S., Jacevic V. et al. Tissue-protective effects of fullerenol C60(OH)24 and amifostine in irradiated rats // Colloids. Surf B. Biointerfaces. - 2007. -V.58, N.l. - P.39-43.

160. Tsai M.C., Chen Y.H.., Chiang L.Y. Polyhydroxylated C60, fullerenol, a novel free-radical trapper, prevented hydrogen peroxide- and cumene hydroperoxide- elicited changes in rat hippocampus in vitro // J. Pharm. Pharmacol. - 1997. - V.49, N.4. -P.438-445.

161.Tsuchiya T., Oguri I., Yamakoshi Y.N., Miyata N. Novel harmful effects of [60]fullerene on mouse embryos in vitro and in vivo // FEBS Lett. - 1996. - V.393, N.l. - P.139-145.

162.Tsuchiya T., Yamakoshi Y.N., Miyata N. A novel promoting action of fullerene C60 on the chondrogenesis in rat embryonic limd bud cell culture system // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1995. - V.206. - P.885-894.

163. Turner J.R. Molecular Basis of Epithelial Barrier Regulation: From Basic Mechanisms to Clinical Application // The American Journal of Pathology. - 2006. -V.169, N.6. - P.1901-1909.

164.Ueng T.H., Kang J.J., Wang H.W. et al. Suppression of microsomal cytochrome P450-dependent monooxygenases and mitochondrial oxidative phosphorylation by fullerenol, a polyhydroxylated fullerene C60 // Toxicol. Lett. - 1997. - V.93, N.l. -P.29-37.

165.Usenko C.Y., Harper S.L., Tanguay R.L. Fullerene C60 exposure elicits an oxidative stress response in embryonic 3e6pa4>Hiii // Toxicol. Appl. Pharmacol. - 2008. -V.229, N.l. -P.44-55.

166.Usenko C.Y., Harper S.L., Tanguay R.L. In vivo evaluation of carbon fullerene toxicity using embryonic zebrafish // Carbon N.Y. - 2007. - V.45, N.9. - P.1891-1898.

167. Volkheimer G. Persorption of particles: physiology and pharmacology // Adv. Pharmacol. Chemother. - 1977. - Vol.14. - P.163-187.

168. Wang H.M., Wenz G. Molecular solubilization of fullerene C60 in water by y-cyclodextrin thioethers // Beilstein J. Org. Chem. - 2012. - Vol.8. - P.1644-1651.

169. Wang N., Bao X., Yang C. et al. Design and synthesis of indole-substituted fullerene derivatives with different side groups for organic photovoltaic devices // Organic Electronics. - 2013. - Vol.14, N.2. - P.682-692.

170.Wielgus A.R., Zhao B., Chignell C.F. et al. Phototoxicity and cytotoxicity of fullerol in human retinal pigment epithelial cells // Toxicol Appl Pharmacol. - 2010. -Vol.242, N.1.-P.79-90.

171.Wiewrodt R., Thomas A.P., Cipelletti L. et al. Size-dependent intracellular immunotargeting of therapeutic cargoes into endothelial cells // Blood. - 2002. - V.99. -N.3. - P.912-922.

172. Wyder L., Vitaliti A., Schneider H. et al. Increased Expression of H/T-Cadherin in Tumor-penetrating Blood Vessels // Cancer Research. - 2000. - V.60. - N.17. -P.4682-4688.

173. Xia X.R., Monteiro- Riviere N.A., Riviere J.E. Intrinsic biological property of colloidal fullerene nanoparticles (nC60): lack of lethality after high dose exposure to human epidermal and bacterial cells // Toxicol Lett. - 2010. - Vol.197, N.2. - P.128-134.

174. Xiao L., Takada H., Maeda K. et al. Antioxidant effects of water-soluble fullerene derivatives against ultraviolet ray or peroxylipid through their action of scavenging the reactive oxygen species in human skin keratinocytes // Biomed. Pharmacother. - 2005.

- V.59. - P.351-358.

175. Xu X., Wang X., Li Y. et al. A large-scale association study for nanoparticle C60 uncovers mechanisms of nanotoxicity disrupting the native conformations of DNA/RNA //Nucleic Acids Res. - 2012. - Vol. 40, N.16. P.7622-32.

176.Yamago S., Tokuyama H., Nakamura E. et al. In vivo biological behavior of a water- miscible fullerene: 14C labeling, absorption, distribution, excretion and acute toxicity // Chem. Biol. - 1995. - V.2, N.6. - P.385-389.

177.Yamawaki H., Iwai N. Cytotoxicity of water-soluble fullerene in vascular endothelial cells // Am. J. Physiol. Cell. Physiol. - 2006. - V.290, N.6. - P. 1495-1502.

178. Yamakoshi Y.N., Yagami T., Fukuhara K. et al. Solubilization of fullerenes into water with polyvinylpyrrolidone applicable to biological tests // J. Chem. Soc. - 1994.

- P.517-518.

179. Yang X., Ebrahimi A., Li J. et al. Fullerene-biomolecule conjugates and their biomedicinal applications // Int J Nanomedicine. - 2014. - Vol.9. - P.77-92.

180. Yin J.J., Lao F., Meng J. et al. Inhibition of tumor growth by endohedral metallofullerenol nanoparticles optimized as reactive oxygen species scavenger // Mol. Pharmacol. - 2008. - N. 74. - P. 1132-1140.

181. Yizhak M., Smith A.L., Korobov M.V. et al. Solubility of C60 Fullerene // J. Phys. Chem. - 2001. - Vol.105. -N. 13. - P.2499-2506.

182.Yue F.N., Luo S.M., Zhang C.D. Degradation and transformation of engineering carbon nanomaterials in the environment: A review // Ying Yong Sheng Tai Xue Bao. -2013. - Vol.24, N.2. - P.589-96.

183.Yumita N., Iwase Y., Imaizumi T. et al. Sonodynamically-induced anticancer effects by functionalized fullerenes. // Anticancer Res. - 2013. - Vol. 33, N.8. -P.3145-51.

184. Zha Y.Y., Yang B., Tang M.L. et al. Concentration-dependent effects of fullerenol on cultured hippocampal neuron viability. // Int. J. Nanomedicine. - 2012. - Vol.7. -P.3099-109.

185. Zhang B., Cho M., Fortner J.D. et al. Delineating oxidative processes of aqueous C60 preparations: role of THF peroxide // Environ. Sci. Technol. - 2009. - Vol.43, N.l. - P.108-113.

186. Zhang D.D., Liang Q., Chen J.W. et al. Studies of y-cyclodextrin inclusion complexes with C60. Supramolec // Chem. - 1994. - V.3. - P.235-239.

187. Zhao B., He Y.Y., Bilski P.J. et al. Pristine (C60) and hydroxylated [C60(OH)24] fullerene phototoxicity towards HaCaT keratinocytes: type I vs type II mechanisms // Chem. Res. Toxicol. -2008.- V.21, N.5. - P.1056-1063.

188. Zhao B., He Y.Y., Chignell C.F. et al. Difference in phototoxicity of cyclodextrin complexed fullerene [(gamma-CyD)2/C60] and its aggregated derivatives toward human lens epithelial cells // Chem. Res. Toxicol. - 2009. - Vol.22, N.4. - P.660-667.

189. Zhao X., Striolo A., Cummings P. C60 binds to and deforms nucleotides // Biophys. J. - 2005. - V.89, N.6. - P.3856-3862.

190. Zhao Q.F., Zhu Y., Ran T.C. et al. Cytotoxicity of fullerenols on Tetrahymena pyriformis // Nucl. Sci. Techniq. - 2006. - N. 17. - P.280-284.

191. Zhu S., Oberdorster E., Haasch M.L. Toxicity of an engineered nanoparticle (fullerene, C60) in two aquatic species, Daphnia and fathead minnow // Mar. Environ. Res. - 2006. - 62 Suppl. - P.S5-9.

192. Zhu X.S., Zhu L., Lang Y.P. et al. Oxidative damages of long-term exposure to low level fullerenes (C60) in Carassius auratus // Huan. Jing. Ke. Xue. - 2008. - Vol. 29, N.4. - P.855-861.

193.Zhu X., Zhu L., Lang Y. et al. Oxidative stress and growth inhibition in the freshwater fish Carassius auratus induced by chronic exposure to sublethal fullerene (C60) aggregates // Environ. Toxicol. Chem. - 2008. - Vol. 27, N.9. - P. 1979-1985.

194. Zhu X., Zhu L., Li Y. et al. Developmental toxicity in zebrafish (Danio rerio) embryos after exposure to manufactured nanomaterials: buckminsterfullerene aggregates (nC60) and fullerol // Environ Toxicol. Chem. - 2007. - Vol. 26, N.5. -P.976-979.