Изучение генетического контроля и молекулярных механизмов устойчивости к индуктору окислительного стресса менадиону у цианобактерии Synechocystis sp. штамм РСС 6803 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Семина, Мария Евгеньевна

• Семина, Мария Евгеньевна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Семина, Мария Евгеньевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Механизмы действия ингибиторов хинонного типа.

1.1. Ингибирование электронного транспорта.

2. Механизмы защиты от ингибирующего действия хинонов.

2.1. Антиоксидантные системы.

2.2. Восстановление хинонов с участием НАБ(Р)Н:хинон-оксидоредуктаз

3. Электрон-транспортная цепь тилакоидной мембраны цианобактерий.

3.1. Фотосинтетическая ЭТЦ.

3.2. Дыхательная ЭТЦ.

3.2Л. Доноры электронов для дыхательной ЭТЦ.

3.2.2. МАО(Р)Н-дегидрогеназы.

3.2.2.1. NAD(P)H -дегидрогеназа типа 1 (NDH-1).

3.2.2.2. NADH-дегидрогеназа типа 2.

3.3. Сукцинатдегидрогеназа.

3.4.Комплекс цитохромов b/.

3.5. Цитохромоксидазы дыхательной цепи.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Штаммы и плазмиды.

Условия роста.

Трансформация Escherichia coli.

Трансформация Synechocystis 6803.

Выделение плазмидной ДНК методом кипячения (Holmes, Quigley, 1981)

Выделение хромосомной ДНК из клеток цианобактерий.

Ферментативная обработка ДНК.

Электрофорез в агарозном геле.

Элюирование ДНК из агарозного геля.

Полимеразная цепная реакция.

Измерение МТТ-редуктазной активности.

Выделение тилакоидных мембран из клеток Synechocystis 6803.

Измерение ферментативной активности.

ЭПР спектроскопия.

Northern-блоттгибридизация.

ОТ-ПЦР.

Компьютерная обработка данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ.

Дегидрогеназная активность в клетках дикого типа и мутантов.

Анализ устойчивости к менадиону клеток дикого типа и мутантов.

Конструирование двойных мутантов.

Конструирование рекомбинантной плазмиды pUC19::cfrg/i::Cm pBHS::CmR).

Конструирование рекомбинантной плазмиды pUC 19::drgA::GmR pBHS::GmR).

Трансформация клеток мутантов NDH-1, SDH, NDH-2 и Ox.

Проверка сегрегации мутаций.

Физиологические характеристики двойных мутантов.

Анализ устойчивости к менадиону.

Ферментативная активность в бесклеточных препаратах дикого типа и мутанта DrgA.

Восстановление Р700+ в клетках дикого типа и мутантов.

Экспрессия гена drgA.

Изучение функции гена drgA с помощью очищенного белка DrgA-12His.

ОБСУЖДЕНИЕ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение генетического контроля и молекулярных механизмов устойчивости к индуктору окислительного стресса менадиону у цианобактерии Synechocystis sp. штамм РСС 6803»

Хиноны, такие как менадион (2-метил-1,4-нафтохинон) и плумбагин (5-гидрокси-2-метил-1,4-нафтохинон), индуцируют окислительный стресс в клетках аэробных организмов. Ингибирующее действие хинонов обусловлено одноэлектронным восстановлением до семихинонов. Семихинон может взаимодействовать с молекулярным кислородом с регенерацией исходного хинона и образованием супероксида, который индуцирует окислительный стресс (Hassan, Fridovich, 1979). При восстановлении хинонов по двухэлектронному механизму образуется нетоксичный гидрохинон (Lind et al., 1982).

У фотосинтезирующих организмов менадион может влиять на транспорт электронов, как в фотосинтетической, так и в дыхательной электрон-транспортной цепи (далее ЭТЦ). Липофильные хиноны с низкими окислительно-восстановительными потенциалами, такие как менадион и плумбагин, легко проникают в тилакоидные мембраны цианобактерий и хлоропластов растений, где они могут акцептировать электроны из фотосинтетической цепи на уровне разных компонентов. У цианобактерии Synechocystis sp. РСС 6803 (далее Synechocystis 6803), дыхательная и фотосинтетическая системы транспорта электронов совмещены в тилакоидной мембране. Общими переносчиками, являются пул пластохинона (PQ), комплекс цитохромов и пластоцианин. Главными компонентами дыхательной ЭТЦ являются дегидрогеназный комплекс NDH-1, окисляющий преимущественно NADPH и восстанавливающий пул PQ, и цитохромоксидаза, которая восстанавливает кислород до воды. В восстановлении пула пластохинона также принимают участие дегидрогеназный комплекс NDH-2, окисляющий NADH (Howitt et al., 1999), и сукцинатдегидрогеназа (SDH), окисляющая сукцинат и функционирующая главным образом в темноте (Cooley, Vermaas, 2000). Фотосинтетическая ЭТЦ содержит два типа реакционных центров: фотосистему I (ФС1) и фотосистему II (ФСП). Нециклический фотосинтетический транспорт 6 электронов от воды через ФСК, пул PQ, комплекс цитохромов b$f и ФС1 приводит к восстановлению NADPH. В отсутствие активности ФСН в тилакоидной мембране может осуществляться циклический транспорт электронов вокруг ФС1, в котором участвует дегидрогеназный комплекс NDH-1, окисляющий NADPH и возвращающий электроны в фотосинтетическую ЭТЦ через PQ и комплекс цитохромов b$f.

В основе противодействия клеток окислительному стрессу лежит активация защитных систем, к которым относится ряд ферментов, таких как супероксиддисмутазы, каталазы и пероксидазы. Кроме того, важную роль в защите клеток как прокариотических, так и эукариотических организмов от ингибирующего действия хинонов играют дегидрогеназы, способные осуществлять двухэлектронное восстановление этих агентов с образованием нетоксичных гидрохинонов (Lind et al., 1982). В клетках млекопитающих обнаружен эффективный механизм защиты от токсического действия хинонов. Цитозольный фермент КАБ(Р)Н:хинон-оксидоредуктаза (DT-диафораза) восстанавливает хиноны по двухэлектронному механизму, препятствуя их одноэлектронному восстановлению другими ферментами (Prochaska et al., 1985; Tedeschi et al., 1995). Функциональный гомолог DT-диафоразы -МАО(Р)Н:хинон-оксидоредуктаза, кодируемая геном drgA, - был обнаружен у цианобактерии Synechocystis sp. PCC 6803 (Чеснавичене и др., 1994; Elanskaya et al., 1998; Matsuo et al., 1998). У нефотосинтезирующих организмов менадион взаимодействует, главным образом, с дыхательной ЭТЦ. У фотосинтезирующих организмов менадион может акцептировать электроны из фотосинтетической ЭТЦ на уровне ферредоксин:КАОР+-оксидоредуктазы, ФС1, ФСИ и комплекса цитохромов 6/ (Hauska, 1977; Samuilov et al., 1997). Роль дегидрогеназ и оксидаз в устойчивости к менадиону клеток фотосинтезирующих организмов оставалась не ясной.

Целью данной работы было выяснение роли генов, кодирующих дегидрогеназы и оксидазы, в контроле устойчивости клеток цианобактерии Synechocystis 6803 к индуктору окислительного стресса менадиону.

В задачи работы входило:

- идентификация генов, ответственных за устойчивость к менадиону, с помощью мутантов Synechocystis 6803, лишенных функционально активных дегидрогеназ NDH-1, NDH-2, SDH, DrgA, а также цитохром- и хинолоксидаз;

- выяснение механизмов устойчивости к менадиону;

- выяснение роли гена drgA, кодирующего растворимую NAD(P)H:xhhoh-оксидоредуктазу, в регуляции электронного транспорта в тилакоидной мембране Synechocystis 6803.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Генетика», Семина, Мария Евгеньевна

выводы

• Мутации в гене drgA, кодирующем ЫАО(Р)Н:хинон-оксидоредуктазу (DrgA), и в гене ndhB, кодирующем субъединицу NAD(P)H-дегидрогеназы NDH-1, повышают чувствительность клеток цианобактерии Synechocystis sp. РСС 6803 к менадиону. Мутации в генах, кодирующих NADH-дегидрогеназу NDH-2, сукцинатдегидрогеназу (SDH) и оксидазы Ctal, Ctall и Cyd не влияют на устойчивость клеток цианобактерии к менадиону.

• Введение мутации по гену drgA повышает чувствительность к менадиону мутантов по дегидрогеназе NDH-2 и оксидазам. Двойной мутант SDH/DrgA нежизнеспособен, т.е. наличие хотя бы одной из дегидрогеназ, SDH или DrgA, необходимо для фотоавтотрофного роста клеток цианобактерии.

• Ген drgA транскрибируется совместно с геном sir 1718, кодирующим кислую фосфатазу ComB-семейства. Экспрессия drgA и sir 1718 подавляется при инкубации клеток в темноте и индуцируется в присутствии глюкозы. Менадион и диносеб не влияют на уровень экспрессии генов drgA и sir 1718.

• Продукт гена drgA восстанавливает менадион по двухэлектронному механизму, препятствуя одноэлектронному восстановлению, приводящему к окислительному стрессу. Чувствительность к менадиону у мутанта по гену ndhB, кодирующему субъединицу комплекса NDH-1, может быть связана с нарушением транспорта электронов в тилакоидной мембране.

• Мутант по гену drgA характеризуется сниженной NAD(P)H:xhhoh-редуктазной активностью, отсутствием НАВ(Р)Н:диносеб-редуктазной активности и низкой скоростью послесветового восстановления реакционного центра фотосистемы I (Р700+).

• Экспрессированный в клетках Е. coli белок DrgA-12His осуществляет перенос электронов от NADPH в пул пластохинона в изолированных тилакоидных мембранах Synechocystis 6803. Менадион ускоряет этот процесс и, по-видимому, является промежуточным переносчиком электронов. Таким образом, продукт гена drgA является NAD(P)H:плacтoxинoн-oкcидopeдyктaзoй, способной передавать электроны от цитоплазматических дыхательных субстратов в пул пластохинона тилакоидной мембраны.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Семина, Мария Евгеньевна, 2007 год

1. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж, под редакцией Баева А.А. и Скрябина К.Г. Методы генетической инженерии: Молекулярное клонирование.//-1984.-М.Мир.

2. Скулачев В.П. Энергетика биологических мембран.//-1989.-М.Наука.

3. Чеснавичене Э.А., Еланская И.В., Барцевич В.В., Шестаков С.В. Молекулярный анализ нового гена, контролирующего устойчивость цианобактерии Synechocystis 6803 к метронидазолу и нитрофенольным гербицидам.//-1994.-Докл. Наук.-334(5):657-659.

4. Badger M.R., Spalding M.H., Leegood R.C., Sharkey T.D., von Caemmerer S. C02 acquisition, concentration and fixation in cyanobacteria and algae. In

5. Advances in Photosynthesis: Physiology and Metabolism.//-2000.-Dordrecht: Kluwer Acad. Publ.- 9:399-434.

6. Battchikova N., Zhang P., Rudds S., Ogawa Т., and Aro E.M. ^identification of NdhL and Ssll690 (NdhO) in NDH-1 L and NDH-1 M complexes of Synechocystis sp. strain PCC 6803.//-2005.-280(4):2587-2595.

7. Bendall D.S., and Manasse R.S. Cyclic photophosphorylation and electron transport.//- 1995.-Biochim. et Biophys. Acta.-1229: 23-38.

8. Berry S., Schneider D, Vermaas W.F.J., Rogner M. Electron transport routes in whole cells of Synechocystis sp. strain PCC 6803: the role of the cytochrome bd- type oxidase.//-2002.-Biochemistry.-41:3422-3429.

9. Biggins J. Respiration in blue-green algae.//-1969.-J. Bacteriol.-99:570-575.

10. Bowler Ch., Montagu M., Inze D. Superoxide dismutase and stress tolerance. //-1992,-Plant Phisiol. Plant Mol. Biol.-43:83-l 16.

11. Brandt U, Kerscher S, Drose S, Zwicker K, Zickermann V. Proton pumping by NADH:ubiquinone oxidoreductase. A redox driven conformational change mechanism.//-2003.-FEBS Lett.-545(1):9-17.

12. H.Broedel S.E. and Wolf R.E.Jr. Genetic tagging, cloning, and DNA sequence of the Synechococcus sp. strain PCC 7942 gene (gnd) encoding 6-phosphogluconate dehydrogenase.//-1990.-J. Bacteriol.-172(7):4023-4031.

13. Bryant C. and Deluca M. Purification and characterization of an Oxygen-intensitive NAD(P)H nitroreductase form Enterobacter cloacae//-1990.-J. Biol. Chem.-266(7):4119-4125.

14. Cenas N., Anusevicius Z., Beronaite D., Bachmanova G.I., Archakov A.I., and Ollinger K. //-1994.-Arch. Biochem. Biophys.-315:400-406.

15. Chesis P.L., Levin D.E., Smith M.T., Ernster L., Ames B.N. Mutagenicity of quinones: pathways of metabolic activation and detoxification.//- 1984.-Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-6(81): 1696-1700.

16. Chiou T.J., Zhang J., Ferrans V.J., Tszeng W.F. Cardiac and renal tozicity of menadione in rat.//-1997.-Toxicology.-31:124(3): 193-202.

17. Cooley J.W., Howitt C.A., Vermaas W.F J. Succinate: quinol oxidoreductases in the the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803: presence and function in metabolism and electron transport.//-2000.-J. Bacteriol.-3(182):714-722.

18. Gardner P. Superoxide production by the mecobacterial and pseudomonad quinoid pigments phiocol and pyocyanine in human lung cells//-1996.- Arc. Biochem. and Biophys.-333(l):267-74.

19. Farr S. and Kogoma T. Oxidative stress responses in Escherichia coli and Salmonella typhimurium.il-1991 .-Microbiol. Rev.-55(4):561-585.

20. Friedrich Т. and Weiss H. Modular evolution of the respiratory NADH:ubiquinone oxidoreductase and the origin of its modules.//-1997.-J Theor Biol.-187(4):529-540.

21. Freidrich Т., Scheide, D. The respiratory complex I of bacteria, archaea and eukarya and its module common with membrane-bound multisubunit hydrogenases.//-2000.-FEBS Lett.-479(l-2): 1-5.

22. Forti G. NADPH-cytochrome / reductase from spinach.//-197l.-Meth. Enzymol .-23:447-451.

23. Graham D.E., Graupner M., Xu H., White R.H. Identification of coenzyme M biosynthetic 2-phosphosulfolactate phosphatase. A member of new class of Mg2+-dependent acid phosphatases.//-2001.-Eur. J. Biochem.-268:5176-5188.

24. Hagemann M., Richter S., Mikkat S. The ggtA gene encodes a subunit of the transport system for the osmoprotective compound glucosylglycerol in Synechocystis sp. strain РСС 6803.//-1997.-J. Bacteriol.-179:714-720.

25. Hassan H.M., Fridovich I. Intracellular production of superoxide radical and of hydrogen pyroxide by redox active compounds.//-1979,-Arch.Biochem Biophys.-l 96:385-395.

26. Hauska. Plasto- and ubiquinone as translocators of electrons and protons through membranes: a facilitating role of the isoprenoid side chain.//-1977.-FEBS Lett.-79(2):345-7.

27. Hinterstoisser В., Missbichler A., Pineau В., Peschek G. A. Detection of chlorophyllide in chlorophyll-free plasma membrane preparations from Anacystis nidulans.ll- 1988,-Biochem. Biophys. Res. Commun.-l54:839-846.

28. Holmes D.S. and Quigley M. A rapid boiling method for the preparation of bacterial plasmids.//-1981.-Anal. Biochem.-114: 193-197.

29. Howitt C.A. and Vermaas W.F.J. Quinol and cytochrome oxidases in the the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803.//-1998.-Biochemistry.-37:17944-17951.

30. Howitt C.A., Udall P.K, Vermaas W.F.J. Type 2 NADH dehydrogenases in the the cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC 6803 are involved in regulation rather than respiration.//-1999.-J. Bacteriol.-13(181):3994-4003.

31. Jaiswal A.K. Regulation of genes encoding NAD(P)H:quinone oxidoreductases.//.-2000.-Free Radic Biol Med.- 29:254-262.

32. Joseph P., Long DJ 2nd, Klein-Szanto A.J., Jaiswal A.K. Role of NADPH:quinone oxidoreductase 1 (DT diaphorase) in protection against quinine toxicity.//-2000.-Biochem. Pharmacol.- 60:207-214.

33. Kaplan A., Reinhold L. C02 concentrating mechanisms in photosynthetic microorganisms.//- 1999.-Annu Rev. Plant. Physiol. Plant. Mol. Biol.-50:539-570.

34. Kim K., Lee J., Park K., Kim M.J., Chung J.H. Mechanism of menadione-induced cytotoxicity in rat platelets .//-1996.-Toxicology and Applied Pharmacology.-138(1): 12-19.

35. Kleczkowski L.A. Inhibitors of photosynthetic enzymes carriers and metabolism.//-1993.-Plant Physiol. Plant Mol. Biol.-45:339-367.

36. Lane D.J., Stackebrandt E., Goodfellow, M. 16S/23S rRNA sequencing Nucleic acid techniques in bacterial systematics.//-1991.-ChichesterUnited Kingdom:John Wiley & Sons.-l 15-175.

37. Lind C., Hochstein P.and Ernster L.DT-diaphorase as a quinone reductase: a cellar control device against semiquinone and superoxide radical formation.//-1982.-Arch. Biochem. Biophys.-216:178-185.

38. Maeda S., Badger M., Price G.D. Novel gene products associated with NdhD3/D4-containing NDH-1 complexes are involved in photosynthetic C02 hydration in the cyanobacterium Synechococcus sp. PCC 7942.//-2002.-Mol. Microbiol.-43:425-435.

39. Matsuo M., Endo Т., Asada K. Isolation of a novel NAD(P)H-quinine oxidoreductase from the cyanobacterium Synechocystis PCC 6803.//-1998.-Plant Cell Physiol.-39(7):751-755.

40. Mi H., Endo Т., Schreiber U., Asada K. Donation of electrons form cytosolic components to the intersystem chain in the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 7002 as determined by the reduction of P700.//-1992,-Plant Cell Physiol.-33(8): 1099-1105.

41. Mi H., Endo Т., Oqawa Т., Asada К. Thylakoid membrane-bound, NADPH-specific pyridine nucleotide dehydrogenase complex mediates cyclic electron transport in the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803.//-1995.-Plant Cell Physiol.-36(4): 661-668.

42. Molitor V., Trinka M., Peschek G. A. Isolated and purified plasma and thylakoid membranes of the cyanobacterium Anacystis nidulans contain immunologically cross-reactive aa3-type cytochrome oxidase.//-1987.-Curr. Microbiol.-14:263-268.

43. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.//-1983.-J. Immunol. Methods.-65:55-59.

44. Nakamura M., Hyashi T. One- and two-electron reduction of quinones by rat liver subcellular fractions.//- 1994.-J. Biochem.-l 15(6).i 141-1147.

45. Ogawa T. A gene homologous to the subunit-2 gene of NADH dehydrogenase is essential to inorganic carbon transport of Synechocystis PCC 6803.//-1991.-Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-88:4275-4279.

46. Pearce J., Leach С. K., Carr N. G. The incomplete cirtic acid cycle in the blue-green alga Anabaena variabilis.//- 1969.-J. Gen. Microbiol.-49:301-313.

47. Peschek G.A., Hinterstoisser В., Wastyn M., Kunter O., Pineau В., Missbichler A., Lang J. Chlorophyll precursors in the plasma membrane of a cyanobacterium, Anacystis nidulans.//-1989.- J. Biol. Chem.-246:11827-11832.

48. Peschek, G.A., Obinger C., Paumann M. The respiratory chain of blue-green algae//-2004.-Physiol. Plant.-120: 358-369

49. Pils D., Schmetterer G. Characterization of three bioenergetically active respiratory terminal oxidases in the cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC 6803.//-2001. FEMS Microbiol. Lett.-203:217-222.

50. Price GD, Klughammer В., Ludwig M., Badger M.R. The functioning of the C02 concentrating mechanism in several cyanobacterial strains: a review of general physiological characteristics, genes, proteins and recent advances.//-1998.-Can. J. Bot.-973-1002.

51. Price G.D., Maeda S., Omata Т., and Badger M.R. Modes of active inorganic carbon uptake in the cyanobacterium Synechococcus sp. PCC 7942.//-2002.-Funct. Plant Biol.-29:131-149.

52. Pritsos C.A., and Gustafson D.L. Xantine dehydrogenase and its role in cancer hemoteraphy.//-1994.-Oncol Res.-6(10-11):477-481.

53. Prochaska H. J., De Long M. J., Talalay P.On the mechanism of induction of cancer-protective enzymes: a unifying proposal.//-1985.-Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-82:8232-8236.

54. Prommeenate P., Lennon A.M., Markert C., Hippler M., Nixon P.J. Subunit composition of NDH-1 complexes of Synechocystis sp. PCC 6803.//-2004.-J. Biol. Cem.-27(279):28165-28173.

55. Radjendirane V., Joseph P., Lee Y., Kimura S., Klein-Szanto A. J. P., Gonzales F.J., Jaiswal A.K. Disruption of the DT diaphorase (NQOl) gene in mice leads to increased menadion toxicity.//-1998.-J. Biological Chemistry.-273(13):7382-7389.

56. Rich P.R. Electron and proton transfers//-1984,-Biohym. Biophys. Acta.-768:53-79.

57. Rippka R., Deruelles J., Waterbury J.B., Herdman M., Stanier R.Y. Generic assignments, strain histories and properties of pure cultures of cyanobacteria.//-1979.-J. Gen. Microbiol-111:1-61.

58. Samuilov V.D., Barsky E.L., Kitashov A.V. Hill reaction in pea chloroplasts: contribution of photosystem II and photosystem I to ferricyanide reduction.//-1997.-M. Biochem.-62(8):909-913.

59. Scandalios J.G. Response of plant antioxidant defence gene to environmental stress.//-1990,-Adv. Gen.-28:1-41.

60. Shibata M., Katoh H., Sonoda M., Ohkawa, H., Shimoyama, M., Fukuzawa, H., Kaplan, A., and Ogawa, T. Genes essential to sodium-dependent bicarbonate transport in cyanobacteria: Function and phylogenetic analysis.//-2002.-J. Biol. Chem.-277:18658-18664.

61. Schmetterer G. Cyanobacterial respiration. The Molecular Biology of Cyanobacteria//-1994,-Kluwer Academ. Publ. Dordrecht.(Netherlands).-409-435.

62. Schmetterer G., Algae D. and Gregor W. Deletion of cytochrome с oxidase genes from the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803.//-1994.-42:43-50.

63. Shutz К., Happe Т., Troshina 0., Lindblad P., Leitao E., OlivieraP. Tamagnini P. Cyanobacterial H2 production a comparative analysis.//-2004.-Planta.-218:350-359.

64. Seal S.N., Rose Z.B. Characterization of phosphoenzyme intermediate in the reaction of phosphoglycolate phosphatase.//-1987.-J. Biol. Chem.-262:13496-13500.

65. Smeitink J, Sengers R, Trijbels F, van den Heuvel L. Human NADH:ubiquinone oxidoreductase.//-2001.-J Bioenerg Biomembr.-33:259-266.

66. Smith A.J., London J., Stanier R.Y. Biochemical basis of obligate autotrophy in blue-green algae and thiobacilli.//-1967.-J. Bacteriol.-94:972-983.

67. Sun J.S, Tsuang Y.H., Huang W.C, Chen L.T., Hang Y.S., Lu F.J. Menadione-induced cytotoxicity to rat osteoblasts//-1997.-Cell Mol Life Sci.-(11-12):967-976.

68. Sparla F., Tedeschi G., Pupillo P., Trost P. Cloning and heterologous expression of NAD(P)H:quinone reductase of Arabidopsis thaliana, a functional homologue of animal DT-diaphorase.//-1999.-FEBS Letters.-463:382-386.

69. Youn-Sook Cho, Mee-Jeong Kim, Joo-Young L. and Jin-Ho C. The role of thiols in protectiong against simultaneous toxicity of menadione to platelet plasma and intracellular membranes//-1997.-Toxicol. Scien.-280(3):1335-1340.

70. Tamagnini P., Axelsson R., Lindberg P., Oxelfelt F., Wunschiers R., Lindblad P. Hydrogenases and hydrogen metabolism of cyanobacteria.//-2002,-Microbiol. and Mol. Biol. Rev.- 66:1-20.

71. Tedeschi G., Shiuan Ch., and Vincent M. DT-diaphorase: redox potential, steady-state, and rapid reaction studies.//-1995.-J. of Biol.Chem.-270(3): 1198-1204.

72. Thor H., Smith M. Т., Hartzell P., Bellomo G., Jewell S. A., Orrenius S. The metabolism of menadione (2-methyl-l,4-naphthoquinone) by isolated hepatocytes.//-l 982.-J. Biologycal Chemistry.-257(20): 12419-12425.

73. Trost P., Bonera P., Scagliarini S., Pupillo P. Purification and properties of NAD(P)H: (quinone-acceptor) oxidoreductase of sugarbeet cells.//-1995.-Eur. J. Biochem.-234:452-458.

74. Vermaas, W.F.J. Molecular-genetic approaches to study photosynthetic and respiratory electron transport in thylakoids from cyanobacteria.//-1994.-Biochim. Biophys. Acta.-l 187:181-186.

75. Vermaas W., Shen G., Styring S. Electrons generated by photosystem II are utilized by an oxidase in the asence of photosystem I in the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803.//-1994.-Febs letters.-337:103-108.

76. Vermaas W. Molecular genetics of the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803: principles and possible biotechnology applications.//-1996.-J. App. Phyc. -8:263-273.

77. Zhang P., Battchikova N., Paakkarinen V., Katoh H., Iwai M., Ikeuchi M., Pakrasi H., Ogawa Т., Aro E-M. Isolation, subunit composition and interaction of the NDH-1 complexes from Thermosynechococcus elongatus BP-1.//-2005.- J. Biochem.-390:513-520.

78. Wingler A., Lea P.J., Quick W.P., Leegood R.C. Photorespiration: metabolic pathways and their role in stress protection.//-2000.-Phil. Trans. R. Soc. Lond. В.- 355:1517-1529.1. БЛАГОДАРНОСТИ

79. Выражаю также благодарность сотруднику Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН Топоровой Викторие Александровне за предоставление экспрессированного в клетках E.coli и очищенного белка DrgA-12His.