Сопряжение между фотосистемой 1 и цитохромным b6f комплексом в модельных системах тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Витухновская, Лия Алексеевна

• Витухновская, Лия Алексеевна
• кандидат биологических наук
• 0

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Витухновская, Лия Алексеевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Структурные особенности цитохромного btf комплекса

1.1.1. Дополнительный гем на стромальной поверхности Qj сайта (гем х) и его функции

1.1.2. Хлорофилл а, /?- каротинойд и эндогенные липиды

1.1.3. Сходство и различие цитохромного b$f комплекса с цитохромным Ъс\ комплексом

1.2. Перенос электронов в цитохромном b<f комплексе

1.2.1. Перенос электронов от хинола к высокои низкопотенциальным цепям

1.2.2. Перенос электронов к цитохрому/ через протеид Риске

1.2.3. Электрогенные реакции в к/ и в b$f комплексе

1.2.4. Циклический транспорт электронов

1.2.5. Ингибиторы b$f комплекса

1.3. Перенос электронов от цитохрома/ к фотосистеме

1.4. Структурные аспекты ФС

1.4.1. Строение цианобактериальной ФС

1.4.2. Строение эукариотической ФС

1.5. Электрон- транспортная цепь 35 1.5.1. Современные данные по переносу электронов в ФС

1.5.1.1. Первичный перенос электронов (от возбужденного Р700 черезАокА])

1.5.1.2. Вторичный перенос электронов ( от Ai" к железо- серным кластерам Fx Fa FB)

1.5.1.3. Перенос электронов от FB на ферредоксин/ флаводоксин

1.6. Фотосинтетические гибридные системы в растворе

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. ПРЕПАРАТИВНЫЕ МЕТОДЫ

2.1.1. Используемые реактивы

2.1.2. Выращивание клеток Synechocystis sp. РСС

2.1.3. Выделение фотосистемы

2.1.4. Выделение цитохромного b$f комплекса

2.1.5. Измерение активности цитохромного b$f комплекса

2.1.6. Выделение пластоцианина

2.1.7. Выделение цитохрома ев

2.1.8. Химическое восстановление децилпластохинола

2.1.9. Получение протеолипосом

2.2. АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

2.2.1. Измерение спектров оптического поглощения

2.2.2. Светоиндуцированные изменения оптического поглощения

2.2.3. Регистрация светоиндуцированной кинетики генерации трансмембранного потенциала в гибридных системах

2.2.4. Кинетический анализ сигналов

2.2.5. Измерения спектров ЭПР

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Кинетические исследования переноса электрона в гибридной системе, состоящей из цитохромного b$f комплекса и ФС 1 в растворе.

3.1.1. Взаимодействие ФС 1 в гибридной системе с донором электронов цит ев в растворе

3.1.2. Исследование гибридной системы в растворе с помощью импульсной абсорбционной спектрометрии

3.2. Кинетические исследования переноса электрона в гибридной системе, состоящей из цит btf комплекса и ФС 1 в протеолипосомах.

3.2.1 Ориентация цитохромного b(f комплекса и ФС 1 в протеолипосомах

3.2.2. Исследование сопряжения белков в протеолипосомах методом импульсной абсорбционной спектрометрии

3.2.3. Изучение гибридной системы методом электронного парамагнитного резонанса

3.2.4. Исследование гибридных протеолипосом, содержащих ФС 1 и цит b(f комплекс методом ЭПР

3.2.4.1. Регистрация Д\|/ в протеолипосомах

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сопряжение между фотосистемой 1 и цитохромным b6f комплексом в модельных системах»

Актуальность проблемы. Исследование фотосинтеза, как комплекса реакций превращения солнечной энергии в энергию химических связей, представляет собой одну из наиболее актуальных проблем современной биологии.

В фотосинтетической электрон-транспортной цепи (ЭТЦ) высших растений, водорослей и цианобактерий функциональными блоками являются фотосистемы (ФС) 1 и 2, а таюке цитохромный (цит) b$f комплекс, осуществляющий перенос электронов от липофильного двухэлектронного донора пластохинола на одноэлектронный водорастворимый белок пластоцианин (ПЦ) или цит сс (альтернативный переносчик электронов у цианобактерий). Согласно классической линейной Z-схеме фотосинтетическая ЭТЦ обеспечивает расщепление воды с образованием кислорода на донорной стороне ФС 2 и восстановление НАДФ до НАДФН на акцепторной стороне ФС 1.

В некоторых условиях (присутствие ингибиторов ФС 2, анаэробные условия) наблюдается циклический транспорт электронов, включающий только два пигмент-белковых комплекса фотосинтетической цепи - ФС 1 и цит b$f комплекс. Однако механизм этого процесса недостаточно изучен, поэтому исследование взаимодействия между ФС 1 и цит b$f комплексом представляется важной и актуальной проблемой.

ФС 1 осуществляет фотоиндуцированное трансмембранное разделение зарядов, сопряженное с транспортом электронов от периферических белков - цит с6 или ПЦ к природным акцепторам - ферредоксину (или альтернативному акцептору электронов у цианобактерий - флаводоксину) от первичного донора электронов - димера хлорофилла Р700 через цепь кофакторов - Ао (хлорофилл а), Aj (филлохинон или витамин К) и железосерные кластеры Fx, Fa, Fb.

Цит btf комплекс, согласно схеме Q-цикла, предложенной Митчелом (Mitchell, 1975), окисляет молекулу пластохинола (PQH2) в хинол-оксидазном Qo-сайте. Окисление PQH2 сопровождается депротонированием, при этом один электрон поступает на высокопотенциальный участок цепи (железо-серный центр Риске - цит /), а другой - на цит Ъ, восстанавливая связанную с хинон-редуктазным сайтом Q; молекулу пластохинона (PQ) с образованием семихинона. При повторном обороте фермента семихинон анион-радикал восстанавливается до PQH2. Таким образом, в результате полного цикла работы b<f комплекса происходит окисление двух молекул PQH2, за которым следует выброс 4 Yt в люмен, поглощение 2 Н- из стромы и восстановление одной молекулы PQ в Q; сайте.

Значительный прогресс в изучении этих двух белковых комплексов был связан с проведением рентгеноструктурного анализа кристаллов ФС 1 из термофильной цианобактерии Synechococcus elongatus с разрешением 2,5 А (Jordan et al, 2001), и цит b<f комплекса из термофильной цианобактерии Mastigocladus laminosus с разрешением 3,5 A (Kurisu et al., 2003) и из водоросли Chlamydomonas reinhardtii с разрешением 3,1 A (Stroebel et al., 2003). Были оценены расстояния между кофакторами ферментов, а также выявлены основные структурные особенности b$f комплекса, в частности, был найден новый, ковалентно-связанный гем х, по-видимому, относящийся к гемам типа с'. Предполагается, что гем х может участвовать в циклическом перенос электронов.

Транспорт электронов между b$f комплексом и ФС 1 ранее изучали, главным образом, на нативных объектах: листьях высших растений, хлоропластах, субхлоропластных частицах и клетках цианобактерий. Перенос электронов между выделенными из высших растений белками ФС 1 и b<f исследовали только в растворе (Rich et al, 1987). В нашей работе впервые была предпринята попытка изучить взаимодействие между этими двумя пигмент-белковыми комплексами в мембранах протеолипосом с помощью импульсной абсорбционной спектрометрии, ЭПР спектроскопии и прямого электрометрического метода.

Перенос электронов при функционировании b$f комплекса сопряжен с генерацией трансмембранной разности электрических потенциалов (Ау), образование которой до настоящего момента изучалось методом регистрации электрохромного сдвига полос поглощения каротиноидов в тилакоидах хлоропластов (Jones & Whitmarsh, 1988) и целых клетках (Joliot & Joliot, 1994, 1998). Этот метод, несмотря на широкое применение, является косвенным, и при интерпретации данных не вполне однозначным. Было предположено, что основная электрогенная стадия (70-75%) обусловлена переносом электрона между двумя темами b, в то время как оставшиеся 25-30% электрогенеза, вероятно, связаны с окислением цитохрома b и/или с поглощением протонов из стромы при восстановлении PQ в сайте Qj. Тем не менее, анализ литературных данных показывает, что как механизмы сопряжения электронного транспорта с образованием Д\|/ в цит btf комплексе, так и природа наблюдаемых электрогенных стадий остаются невыясненными.

Более прямым способом регистрации образования мембранного потенциала является электрометрический метод, разработанный в НИИ ФХБ им. А.Н. Белозерского МГУ. Ранее этот метод был успешно применен для изучения природы и механизмов электрогенных реакций в функциональном аналоге комплекса - цитохромном bci комплексе пурпурных фотосинтезирующих бактерий. Однако электрометрический метод не применим к целым клеткам и хлоропластам. Для регистрации мембранного потенциала этим методом необходимо было выделить комплексы b$f и ФС 1, встроить их в мембраны протеолипосом и подобрать условия эффективного взаимодействия. В настоящей работе электрогенные реакции, сопровождающие перенос зарядов в цит b$f комплексе были впервые исследованы в модельной системе. Применение прямого электрометрического метода позволяет с большей достоверностью определить природу электрогенных реакций в b$f комплексе и относительный вклад отдельных реакций переноса зарядов в суммарный электрогенез.

Целью настоящей работы явилось изучение генерации трансмембранной разности электрических потенциалов в цит b$f комплексе с промощью прямого электрометрического метода, разработанного в НИИ ФХБ им А.Н. Белозерского

МГУ, в модельной системе, состоящей из выделенных белков ФС 1 и b$f комплекса. Для этого были проведены предварительные эксперименты с использованием методов импульсной абсорбционной спектрометрии и ЭПР спектроскопии.

Были поставлены следующие задачи:

1) Сконструировать функционально-активную гибридную систему, состоящую из ФС 1 и цитохромного b$f комплекса, а также продемонстрировать ее функционирование с помощью импульсной абсорбционной спектрометрии.

2) Подобрать условия встраивания ФС 1 и цитохромного b$f комплекса в мембраны протеолипосом и определить их ориентацию в мембранах.

3) Исследовать индуцированные светозависимым окислением Р700 в ФС 1 редокс реакции цитохромов b и/ в растворе и в гибридных протеолипомах.

4) Продемонстрировать взаимодействие между ФС 1 и цитохромным b$f комплексом в протеолипосомах путем регистрации светозависимых сигналов ЭПР от катион-радикала Р700+.

5) С помощью прямого электрометрического метода изучить индуцированное лазерными вспышками образование трансмембранной разности электрических потенциалов, генерируемое цит b/f комплексом в гибридных протеолипосомах.

Научная новизна работы. Впервые была сконструирована функционально-активная модельная система, включающая выделенные пигмент-белковые комплексы цит b<f и ФС 1 в мембранах протеолипосом. На основании результатов, полученных с помощью импульсной абсорбционной спектрометрии, продемонстрировано эффективное взаимодействие двух белков в этой системе. Окислительно-восстановительные реакции цит b и / инициировались светоиндуцированным окислением Р700.

Были подобраны условия встраивания, при которых цит / b<f комплекса и Р700 ФС 1 оказались локализованными вблизи от внешней поверхности протеолипосомальной мембраны. Это условие было необходимо для сопряженного электронного транспорта, опосредованного экзогенным цит eg.

Светозависимый перенос электронов в гибридных протеолипосомах был исследован с помощью ЭПР спектроскопии в Х-полосе. Взаимодействие между белковыми комплексами регистрировали по изменениям сигналов ЭПР от катион-радикала Р700+ при включении освещения. Сопряжение наблюдалось только в присутствии цит сб и химически восстановленного DPQH2. Ингибитор Q0 сайта стигмателлин уменьшал амплитуду сигнала ЭПР и замедлял темновой спад, что свидетельствовало о сопряженном переносе электронов от b$f комплекса к ФС 1.

С помощью прямого электрометрического метода впервые были исследованы электрогенные реакции в гибридных протеолипосомах, содержащих ФС 1 и цит b<f. Продемонстрировано наличие, по крайней мере, двух электрогенных стадий, обусловленных работой b$f комплекса: 1) NQNO-чувствительной, связанной с протонированием PQ в сайте Qj; 2) стигмателлин-чувствительной, связанной с переносом электрона между высокопотенциальным гемом bi и низкопотенциальным гемом Ьи, или с электрогенным выбросом протонов в сайте Q0 при окислении PQH2.

Практическое значение работы. Результаты исследования существенно углубляют современные знания о природе и механизмах электрогенных реакций в цит b$f комплексе. Использование модельной системы позволяет более точно выявить относительный вклад отдельных реакций переноса зарядов в суммарный электрогенез в b$f комплексе. Определение оптимальных условий встраивания и взаимной ориентации ФС 1 и b$f комплекса в мембранах протеолипосом может быть использовано для изучения взаимодействия между другими мембранными белками в модельных системах. Кроме того, фотосинтетические модельные системы могут быть использованы для мониторинга окружающей среды, в частности для детектирования загрязнений гербицидами и ионами тяжелых металлов.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Витухновская, Лия Алексеевна

ВЫВОДЫ

1. Исследование гибридной системы, содержащей цит b$f комплекс, ФС 1, цит с6 и химически восстановленный децил-пластохинол (DPQH2), с помощью метода импульсной абсорбционной спектрометрии продемонстрировало светозависимый перенос зарядов в b$f комплексе, обусловленный сопряжением между ФС 1 и цит b$f. Ингибитор хинон-редуктазного сайта (Qs) NQNO предотвращал окисление цит Ь, а ингибитор хинол-оксидазного сайта (Q0) стигмателлин на фоне NQNO полностью подавлял работу цит b(f комплекса.

2. Показано, что комплексы цит b$f и ФС 1, встроенные в мембраны протеолипосом, ориентированы таким образом, что первичный донор ФС 1 -димер хлорофилла Р700 и цит / доступны для экзогенных непроникающих доноров и акцепторов.

3. Методом ЭПР на гибридных протеолипосомах продемонстрированы светоиндуцированные изменения редокс-состояния Р700, сопряженные с переносом электронов от цит b$f комплекса к ФС 1. Сопряжение наблюдалось только в присутствии цит с<$ и химически восстановленного DPQH2, донора электронов для цит b<f комплекса. Ингибитор Q0 сайта стигмателлин замедлял кинетику быстрой компоненты спада сигнала ЭПР и существенно уменьшал ее вклад, что также свидетельствовало о сопряженном переносе электронов от btfкомплекса к ФС 1.

4. С помощью прямого электрометрического метода на гибридных протеолипосомах выявлены генерируемые цит b$f комплексом электрогенные фазы, которые обусловлены следующими процессами: (1) переносом электрона между низко- и высокопотенциальным темами b и выбросом протонов при окислении PQH2 в пластохинол-оксидазном сайте Q0, (2) восстановлением пластохинона PQ в пластохинон-редуктазном сайте Qi, сопровождающимся его протонированием.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Целью диссертационной работы явилось изучение образование трансмембранной разности электрических потенциалов в цитохромном b$f комплексе с помощью прямого электрометрического метода, разработанного в НИИ ФХБ им А.Н. Белозерского МГУ. Для этого было исследовано взаимодействие между выделенными пигмент-белковыми комплексами ФС 1 и цит b$f с использованием методов импульсной абсорбционной спектрометрии и ЭПР спектроскопии в растворе и в мембранах протеолипосом.

Значительный прогресс в изучении ФС 1 и цит b$f комплекса был связан с проведением рентгеноструктурного анализа кристаллов ФС 1 из термофильной цианобактерии Synechococcus elongatus с разрешением 2,5 A (Jordan et al, 2001), и цит b$f комплекса из термофильной цианобактерии Mastigocladus laminosus с разрешением 3,5 A (Kurisu et al., 2003) и из водоросли Chlamydomonas reinhardtii с разрешением 3,1 A (Stroebel et al., 2003). Однако транспорт электронов между b$f комплексом и ФС 1 ранее изучали, главным образом, на нативных объектах: листьях высших растений, хлоропластах и субхлоропластных частицах. Перенос электронов между выделенными из высших растений белками ФС 1 и b<f исследовали только в растворе (Rich et al, 1987).

В первом разделе экспериментальной части работы была предпринята попытка сконструировать функционально-активную гибридную систему, содержащую ФС 1 из цианобактерии Synechocystis sp. РСС 6803, b(f комплекс из шпината, цит с6 и химически восстновленный DPQH2. С помощью метода импульсной абсорбционной спектрометрии было показано эффективное сопряжение между белковыми комплексами в растворе. При добавлении NQNO, ингибитора Q; сайта, наблюдалась ингибирование окисления цит Ь, и некоторое замедление восстановления цит f. Добавление ингибитора Q0 сайта стигмателлина на фоне NQNO полностью блокировало работу b<f комплекса.

На втором этапе работы была осуществлена реконструкция цит b$f комплекса и ФС 1 в протеолипосомы. Были подобраны условия встраивания, при которых цит / b<f комплекса и Р700 ФС 1 оказались локализованными вблизи от внешней поверхности протеолипосомальной мембраны. Это условие было необходимо для сопряженного электронного транспорта, опосредованного экзогенным цит с6.

Третьим эпатом работы было исследование светозависимого переноса электронов в гибридных протеолипосомах с помощью ЭПР спектроскопии в 3-х см диапазоне. Взаимодействие между белковыми комплексами регистрировали по изменениям сигнала ЭПР от катион-радикала Р700+ при включении освещения. Сопряжение наблюдалось только в присутствии цит с6 и химически восстановленного DPQH2. Ингибитор Q0 сайта стигмателлин уменьшал амплитуду сигнала ЭПР и замедлял темновой спад, что свидетельствовало о сопряженном переносе электронов от b$f комплекса к ФС 1.

В четвертой части работы исследовались электрогенные реакции в гибридных протеолипосомах, содержащих ФС 1 и цит b$f с помощью прямого электрометрического метода. Нами было продемонстрировано наличие, по крайней мере, двух электрогенных стадий, обусловленных работой b$f комплекса: 1) NQNO- чувствительной, вероятно, связанной с протонированием PQ в пластохинон-редуктазном сайте Qs; 2) стигмателлин-чувствительной, связанной с переносом электрона между темами Ь\ и Ь}„ и с электрогенным выбросом протонов в сайте пластохинол-оксидазном сайте Q0 при окислении PQH2.

Нужно отметить, что при запуске переноса зарядов в b$f комплексе в нативных системах соотношение амплитуд отдельных электрогенных фаз не вполне определено вследствие трудности определения стехиометрии работающих btf комплексов и инициирующих их работу фотосистем. Следствием этого является неопределенность числа оборотов b$f комплекса в ответ на вспышку. В то же время, при запуске b$f комплекса от ФС 1 в модельной системе соотношение электрогенных фаз можно оценить с большей достоверностью. В пользу этого утверждения свидетельствует тот факт, что чувствительная к NQNO электрогенная фаза в модельной системе вносит больший вклад в суммарный электрогенез по сравнению с нативными системами (см. Jones & Whitmarsh, 1985). Действительно, при большем числе оборотов цит b(f комплекса, вероятно происходящих в нативных системах, относительный вклад электрогенного протонирования пластохинона в Q; сайте должен быть меньше, чем в нашей модельной системе.

На основании полученных данных, для объяснения того факта, что кинетика индуцированного вспышкой света переноса электронов в btf комплексе в модельной системе сравнима с кинетикой этого процесса в нативных мембранах, нами было высказано предположение, что в гибридных протеолипосомах либо происходит образование суперкомплексов между цит b$f, ФС 1 и цит с6, либо взаимодействие между цит b$f и ФС 1 осуществляется через локальный пул цит сб.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Витухновская, Лия Алексеевна, 0 год

1. Драчев Л. А., Каулен А.Д., Самуилов В.Д., Северина И.И., Семенов А.Ю., Скулачев В.П., Чекулаева Л.Н. (1976) Встраивание протеолипосом и хроматофоров в мембраны на основе фильтров. Биофизика, 24, 1035-1042.

2. Драчев Л.А., Мамедов М.Д., Семенов А.Ю. (1987) Электрогенез при трансмембранном переносе зарядов в убихинол: цитохром с2-оксидоредуктазном комплексе хроматофоров Rhodopseudomonas sphaeroides. Биологические мембраны, 4, 825-830.

3. Драчев Л.А., Семенов А.Ю., Скулачев В.П. (1979) Генерация разности электрических потенциалов хроматофорами, индуцируемая лазерной вспышкой. Докл. АН СССР, 245, 991-994.

4. Мамедов М.Д., Витухновская Л.А., Заспа А.А., Семенов А.Ю. (2003) Исследование электрогенных реакций в цитохромных b$f комплексах в модельной системе. Биофизика, 44, 1044-1051.

5. Попова Е.Ю., Константинов А.А. (1986) Исследование ориентации комплекса bci в протеолипосомах. Биологические мембраны, 3, 489-497.

6. Скулачев В.П. (1989) Энергетка биологических мембран Москва, «Наука».

7. Allen J.F. (2002) Photosynthesis of ATP electrons, proton pumps, rotors, and poise. Cell, 110, 273-276.

8. Anderson В., Anderson J.M. (1980) Lateral heterogeneity in the distribution of chlorophyll-protein complexes of the thylakoid membranes of spinach chloroplasts. BBA, 593, 427-440.

9. Anion D.I. (1949) Copper enzymes in isolated chloroplasts Polyphenoloxidase in Beta vulgaris. Plant Physiol., 24, 1-15.

10. Barbagallo R.P., Finazzi G., Forti G. (1999) Effects of inhibitors on the activity of the cytochrome b<f complex: evidence for the existence of two binding pockets in the luminal site. Biochemistry, 38, 12814-12821.

11. Bendall D.S., Manasse R.S. (1995) Cyclic photophosphorilation and electron transport. BBA, 1229, 23-38.

12. Bowyer J.R., Trumpower B.L. (1981) Rapid reduction of cytochrome c} in the presence of antimycin and its implication for the mechanism of electron transfer in the cytochrome bcj segment of the mitochondrial respiratory chain. JBC, 256, 2245-2251.

13. Brandt U., Okun J.G. (1997) Role of deprotonation events in ubihydroquinone: cytochrome с oxidoreductase from bovine heart and yeast mitochondria. Biochemistry, 36, 11234-11240.

14. Brandt U., Schagger H., von Jagow G. (1988) Characterisation of binding of the methoxyacrylate inhibitors to mitochondrial cytochrome с reductase. Eur J Biochem, 173, 499-506.

15. Brettel K. (1997) Electron transfer and arrangement of the redox cofactors in PS1. BBA, 1318, 322-373.

16. Brettel K., Leibl W. (2001) Electron transfer in photosystem I. BBA, 1507, 100114.

17. Brettel K., Setif P. (1987) Magnetic field effects on primary reactions in photosystem I. BBA, 893, 109-114.

18. Brettel K., Vos M.H. (1999) Spectroscopic resolution of the picosecond reduction kinetics of the secondary electron acceptor A1 in photosystem I. FEBS letters, 447, 315-317.

19. Breyton C. (2000) Conformational changes in the cytochrome btfcomplex induced by inhibitor binding. JBC, 275, 13195-13201.

20. Breyton C., Tribet C., Olive J., Dubacq J.-P., Potort J.-L. (1997) Dimer to monomer conversion of the cytochrome b<f complex. JBC, 272, 21892-21900.

21. Carrillo N., Vallejos R.H. (1983) The light -dependent modulation of photosynthetic electron-transport. Trends. Biochem Sci., 8, 52-56.

22. Choquet Y., Zito F., Wostrikoff K., Wollman F.-A. (2003) Chytochrome / translation in Chlamydomonas chloroplast is autoregulated by carboxyl-terminal domain. Plant Cell, 15, 1443-1454.

23. Cramer W.A. Girvin M.E., Widger W.R., Mende D., Black M.T. (1987) On the transmembrane electron transport pathway of cytochrome be in progress, in the Photosynthesis Research (Biggins J., ed.) II, 481-484, Martinus Nijhoff, Dordrecht.

24. Crofts A.R., Wraight C.A. (1983) The electrochemical domain of photosynthesis. BBA, 726, 149-185.

25. Crofts A.R. (2004) The cytochrome bc: complex: function in the context of structure. Annu. Rev. Physiol., 66, 689-733.

26. Ding H., Robertson D.E., Daldal F., Dutton P.L. (1992) Cytochrome Ьсг complex 2Fe-2S. cluster and its interaction with ubiquinone and ubihydroquinone at the Q0 Site: a double-occupancy Q0 site model. Biochemistry, 31, 3144-3158.

27. Drachev L.A., Frolov V.N., Kaulen A.D., Kaulen A.D., Ostroumov S.A., Plakunova V.G., Semenov A.Yu., Skulachev V.P. (1976) Reconstitution of biological molecular generators of electric current. Bacteriorodopsin. JBC, 251, 7059-7065.

28. Drachev L.A., Kaulen A.D., Khitrina L.V., Skulachev V.P (1981a), Fast stages of photoelectric processes in biological membranes. I. Bacteriorodopsin. Eur J. Biochem, 117, 461-470.

29. Drepper F., Hippler M., Nitschke W. and Haehnel W. (1996) Binding dynamics and electron transfer between plastocyanin and photosystem I. Biochemistry, 35, 1282-1295.

30. Finazzi G., Rappaport F. (1998) In vivo characterization of the electrochemical proton gradient generated in darkness in green algae and its kinetic effects on cytochrome Z?</turnover. Biochemistry, 37, 9999-10005.

31. Fischer N., Boudreau E., Hippler M., Drepper F., Haehnel W., Rochaix J.D. (1999) A large fraction of Psa F is nonfunctional in photosystem I complexes lacking the Psa J subunit. Biochemistry, 38, 5546-5552.

32. Fischer N., Hippler M., Setif P., Jacquot J.-P., Rochaix J.-D. (1998) The PsaC subunit of photosystem I provides an essential lysine residue for fast electron transfer to ferredoxin. EMBO J., 17, 849-858.

33. Fromme P., Melkozernov A., Jordan P., Kreuss N. (2003) Structure and function of photosystem I: interaction with its soluble electron carriers and external antenna systems. FEBS Letters, 555, 40-44.

34. Furbacher P.N., Girvin M.E., Cramer W.A. (1989) On the question of interheme electron transfer in the chloroplast cytochrome b6 in situ. Biochemistry, 28, 89908998.

35. Garavito R.M., Ferguson-Miller S. (2001) Detergents as tools in membrane biochemistry. JBC, 276, 32403-32406.

36. Georgova- Kuras M., Boudreaux В., Joliot A., Joliot P., Redding K. (2001) Evidence or two active branches for electron transfer in PS1. PNAS USA, 98, 4437-4442.

37. Golbeck J.H., Bryant D.A. (1991) Photosystem I in Carrent topics in bioenegetics, 16, ( Lee C.P. ed), 83-177, Academic Press, Inc. San Diego, New York.

38. Haehnel W., Ratajczak R., Robenek H. (1989) Lateral distribution and diffusion of plastocyanin in chloroplast thylakoids. J. Cell Biol., 108, 1397-1405.

39. Heber U., Gerset U., Krieger A., Neimains S., Kobayashi Y. (1995) Coupled cyclic electron transport in intact chloroplast and leaves of C3 plants. Does it exists? If so what is its function? Photosynth res., 46, 269-275.

40. Hervas M., Navarro F., Navarro J.A., Chavez S., Diaz A., Florencio F.J., De la Rosa M.A. (1993) Synechocystis 6803 plastocyanin isolated from both the cyanobacterium and E. coli transformed cells are identical. FEBS Letters, 319, 257-260.

41. Hippler M., Reichert J., Sutter M., Zak E., Altschmied L., Schroer U., Herrmann R.G., Haehnel W. (1996) The plastocyanin binding domain of photosystem I. EMBO Journal, 15, 6374-6384.

42. Но K.K., Krogmann D.W. (1984) Electron donors to P700 in cyanobacteria and algae. An instance of unusual genetic variability. BBA, 766, 310-316.

43. Но K.K., Ulrich E.L., Krogmann D.W., Gomez-Lojero C. (1979) Isolation of photosynthetic catalysts from cyanobacteria. BBA, 545, 236-248.

44. Hope A.B., Matthews D.B., Huilgol R.R., Panizza M. and Thompson M. (1992) Flash-induced turnover of cytochrome b-563, cytochrome / and plastocyanin in chloroplasts. Models and estimation of kinetic parameters. BBA, 1100, 15-26.

45. Hope A.B., Matthews D.B., Valente P. (1994) The kinetics of the reaction around the cytochrome bf complex studied in a isolated system. Photosynthesis Research, 40, 199-206.

46. Hope A.B. (2000) Electron transfers amongst cytochrome f, plastocyanin and photosystem I: kinetics and mechanisms. BBA, 1456, 5-26.

47. Houchins J.P., Hind G. (1983) Kinetic evidence for involvement of two cytochrome b-563 hemes in photosynthetic electron transport. BBA, 725, 138-145.

48. Huang D., Everly R.M., Cheng R.H., Heymann J.B., Schagger H., Sled V., Ohnishi Т., Baker T.S., Cramer W.A. (1994) Characterization of the chloroplast cytochrome b$f complex as a structural and functional dimmer. Biochemistry, 33, 4401-4409.

49. Hurt E., Hauska G. (1982) Identification of the polypeptides in the cytochrome b$f complex from spinach chloroplasts with redox-center-carrying subunits. J. Bioenerg. Biomembr., 14, 405-424.

50. Illerhaus J., Altschmied L., Reichert J., Zak E., Herrmann R. G., and Haehnel W. (2000) Dynamic interaction of plastocyanin with the cytochrome bf complex. JBC, 275, 17590-17595.

51. Inoue Т., SugawaraH., Hamanaka S., Tsukui H., Suzuki E., Kohzuma Т., Kai Y. (1999) Crystallization and preminary X-ray analysis of the plastocyanin from cyanobacterium Synecchococcus sp. PCC 7942. Acta Crystal (D), 55, 683-684.

52. Iwata S., Lee J.W., Okada K., Lee J.K., Iwata M., Rasmussen В., Link T.A., Ramaswamy S., Jap B.K. (1998) Complete structure of the 11-subunit bovine mitochondrial cytochrome bcj complex. Science, 281, 64-71.

53. Johnson W., Shen G., Zybailov В., Rolling D., Reategui R., Beauperlant S., Vassiliv J., Bryant D., Jonesy A., J. Golbeck, Chitnis P. (2000) Recruitment of a foreign quinone into Aj site of photosystem I. JBC, 275, 8523-8530.

54. Joliot P., Joliot A. (1986) Proton pumping and electron transfer in the cytochrome b<f complex in algae. BBA, 849, 211-222.

55. Joliot P., Joliot A. (1988) The low potential electron transfer chain in cytochrome b$f complex. BBA, 933, 319-333.

56. Joliot P, Joliot A. (1994) Mechanism of electron transfer in the cytochrome b<f complex of algae: evidence for a semiquinone cycle. PNAS USA, 91, 1034-1038.

57. Joliot P., Joliot A. (1998) In vivo analysis of the effect of dicyclohexylcarbodiimide on electron and proton transfer in cytochrome b(f complex of Chlorella sorokiniana. Biochemistry, 37, 10404-10410.

58. Joliot P., Joliot A. (1999) In vivo analysis of the electron transfer within PSI: are the two phyloquinones involved? Biochemistry, 38, 11130-1136.

59. Joliot P., Joliot A. (2001) Electrogenic events associated with electron and proton transfers within the cytochrome b<f complex. BBA, 1503, 369-376.

60. Joliot P., Joliot A. (2002) Cyclic electron transfer in plant leaf. PNAS USA, 99, 10209-102140.

61. Joliot P., Lavergne J., Beal D. (1992) Plastoquinone- compartmentation in chloroplasts 1. Evidence for domains with different rates of photo-reduction, BBA, 1101, 1-12.

62. Jones R.J., Whitmarsh J. (1985) Origin of the electrogenic reactions in the chloroplast cytochrome b<f complex. Potobiochemystry and Potobiophysics, 9, 119-127.

63. Jones R.W., Whitmarsh J. (1987) The electrogenic reaction and proton release during quinol oxidation by the cytochrome b<f complex. Progress in Photosynthesis Research., 2, 445-452, ed. J. Biggins. Martin Nijhoff Publishers, Dordrecht, The Netherlands.

64. Jones R.W., Whitmarsh J. (1988) Inhibition of electron transport and the electrogenic reaction in the cytochrome b<f complex by NQNO and DBMIB. BBA, 933, 258-268.

65. Jordan P., Fromme P., Witt N.T., Klukas O., Saenger W., Krauss H. (2001) Three-demensional structure of cyanobacterial photosystem I at 2.5 A resolution. Nature, 411, 909-917.

66. Kalaidzidis Ya.L., Gavrilov A.V., Zaitsev P.V., Kalaidzidis A.L. and Korolev E.V. (1997) PLUK-An Environment for Software Development. Programming and Computer Software, 23, 206-212.

67. Karapetyan N.V., Holzwarth A.R., Rogner M. (1999) The photosystem I trimer of cyanobacteria: molecular organization, excitation dynamics and physiological significance. FEBS Letters, 460, 395-400.

68. Kim H., Xia D., Yu C.A., Xia J.Z., Kachurin A.M., Zhang L., Yu L., Deisenhofer J. (1998) Inhibitor binding changes domain mobility in the iron-sulfur protein of the mitochondrial bcj complex from bovine heart. PNAS USA, 95, 8026-8033.

69. Knaff D.B. (1996) Ferredoxin and ferredoxin-dependent enzymes, in: D.R. Ort, C. Yocun (Eds) Oxygenic Photosynthesis: The Light Reactions, Kluwer Academic Publishers, Dordercht, 331-336.

70. Kojima Y., Niinomi Y., Tsuboi S., Hiyama Т., Sakurai H. (1987) Destruction of phototsystem I iron-sulfur centers of spinach and Amacystis niduans by mercurials, Bot Mag. Tokyo, 100, 243-253.

71. Konstantinov A.A. (1990) Vectorial electron and proton transfer steps in the cytochrome be, complex. BBA, 1018, 138-141.

72. Kummerle R., Gaillard J., Kyritis P., Moulis J.-M. (2001) Intramolecular electron transfer in 4Fe-4S. proteins: estimates of the reorganization energy and electronic coupling in Chromatium vinosum ferredoxin. J. Biol. Inorg. Chem., 6, 446-451.

73. Kuras R., de Vitry C., Choquet Y., Girard-Bascou J., Culler D., Buschlen S., Merchant S., Wollman F.-A. (1997) Molecular genetic identification of a pathway for heme binding to cytochrome b6. JBC, 272, 32427-32435.

74. Kurisu G., Zhang H., Smith J.L., Cramer W.A. (2003) Structure of the cytochrome b<f complex of oxygenic photosynthesis: turning the cavity. Science, 302, 10091014.

75. Lavergne J. (1983) Membrane potential-dependent reduction reduction of cytochrome b6 in an algalmutant lacking photosystem I centres. BBA, 725, 25-33.

76. Lavergne J., Bouchaud J.-P., Joliot P. (1992) Plastoquinone- compartmentation in chloroplasts. 2. Theoretical aspects. BBA, 1101, 13-22.

77. Leong С., Setif P., Lagoutte В., Bottin H. (1994) Identification of the amino acids involved in the functional interaction between photosystem I and ferredoxin from Synechocystis sp. PCC 6803 by chemical cross-linking. JBC, 269, 10034-10039.

78. Malkin R. (1986) Interaction of stigmatellin and DNP-INT with the Rieske iron-sulfur center of the chloroplast cytochrome b<f complex. FEBS Letters, 208, 317320.

79. Malkin R. (1992) Cytochrome bcj and b<f complexes of photosynthetic membranes. Photosyn. Research., 3, 121-136.

80. Mamedov M.D., Gourovskaya K.N., Vassiliev L.R., Golbeck J.H., Semenov A.Y. (1998) Electrogenicity accompanies photoreduction of the iron-sulfur clusters FA and FB in photosystem I. FEBS Letters, 431, 219-223

81. Mamedov M.D., Gadzhieva R.M., Gourovskaya K.N., Drachev L.A., Semenov A.Yu. (1996) Electrogenicity at the donor/acceptor sides of cyanobacterial photosystem I. J. Bioenerg. Biomembr., 28, 519-523.

82. Mamedov M.D., Mamedova A.A., Chamorovsky S.K., and Semenov A.Yu. (2001) Electrogenic reduction of the primary electron donor P700 by plastocyanin in photosystem I complexes. FEBS Letters, 500, 172-176.

83. Manasse R.S., Bendall D.S. (1994) Characteristcs of cyclic electron transport in the cyanobacterium Phormidium laaminosum. BBA, 1183, 361-368.

84. Martinez S.E., Huang D., Ponamarev M.V., Cramer W.A., Smith J.L. (1996) The heme redox centre of chloroplast cyt/is linked to buried five- water chain. Protein Science, 5, 1081-1092.

85. Medina M., Diaz A., Hervas M., Navarro J.A., Gomez-Moreno C., De la Rosa M.A., Tollin G. (1993) A comparative laser-flash absorption spectroscopy study of

86. Anabaena PCC 7119 plastocyanin and cytochrome сб photooxidation by photosystem I particles. Eur. J. Biochem., 213, 1133-1138.

87. Metzger S.U., Cramer W.A., Whitmarsh J. (1997) Critical analysis of the extinction coefficient of chloroplast cytochrome f. BBA, 1319, 233-241.

88. Mitchell P. (1975) The protonmotive Q cycle: a general formulation. FEBS Letters, 57, 137-139.

89. Morand L.Z., Krogmann D.W. (1993) Large-scale preparation of pure plastocyanin from spinach. BBA, 1141, 105-106.

90. Musiani F., Dikiy A., Semenov A.Yu, Ciurli S. (2005) Structure of the intermolecular complex between plastocyanin and cytochrome / from spinach. JBC, 280, 18833-18841.

91. Myshkin E., Leontis N.B., and Bullerjahn G.S. (2002) Computational simulation of the docking of Prochlorothrix plastocyanin to photosystem I: modeling the electron transfer complex. Biophys. J., 82, 3305-3313.

92. Overfiel R. E., Wraight C. A. (1980) Oxidation of cytochromes с and by bacterial photosynthetic reaction centers in phospholipid vesicles. 1. Studies with neutral membranes. Biochemistry, 19, 3322-3327.

93. Papa S., Izzo G., Guerrieri F. (1982) The inhibition of the bcj segment on the mitochondrial respiratory chain by quinone analogues and hydroxyquinoline derivatives. FEBS Letters, 145, 93-98.

94. Peschek G.A. (1987) Respiratory electron Transport, in The Cyanobacteria (Fay, P., and Van Baalen, C., Eds.), pp.119-161, Elsevier, Amsterdam, The Netherlands: Schmetterer G.

95. Pierre Y., Breyton C., Kramer D., Popot J.L. (1995) Purification and characterization of the cytochrome b$f complex from Chlamydomonas reinhardtii. JBC, 270, 29342-29349.

96. Pierre Y., Breyton C., Lemoine Y., Robert В., Vernotte C., Popot J.L. (1997) On the presence and role of a molecule of chlorophyll a in the cytochrome b$f complex. JBC, 272, 21901 -21908.

97. Ponamarev M.V., Cramer W.A. (1998) Perturbation of the integral water chain in cytochrome / of oxygebic photosynthesis: loss of the concerted reduction of cytochromes/and b6. Biochemistry, 37, 17199-17208.

98. Prince R.G., Matsuura K., Hurt E., Hauska G., Dutton P. L. (1982) Reduction of cytochrome bg and / in isolated plastoquinol-plastocyanin oxidoreductase driven by photochemical reaction centers from Rhodopseudomonas sphaeroidas. JBC, 257,3379-3381.

99. Ramshaw J., Brown R., Scawen M., Boulter D. (1973) Higher plant plastocyanin. BBA, 303, 269-273.

100. Rich P.R. (1984) Electron and proton transfers through quinones and cytochrome be complexes. BBA, 768, 53-79.

101. Rich P.R., Heathcote P., Moss D.A. (1987) Kinetic studies of electron transfer in a hybrid system constructed from the cytochrome b$f complex and photosystem I. BBA, 892, 138-151.

102. Rich P.R., Madgwick S.A., Brown S., von Jagow G. and Brandt U. (1992) MOA-stilbene a new tool for investigation of the chloroplast cytochrome b(f complex. Photosynth Res., 34, 465-477.

103. Rich P.R., Madgwick S.A., Moss D.A. (1991) The interactions of duroquinol, DBMIB and NQNO with the chloroplast cytochrome b<f complex. BBA, 1058, 312-328.

104. Rippka R., Derulles J., Waterbury J.B., Herdman M., Stanier R.Y. (1979) Generic assignments, strain histories and properties of pure cultures of cyanobacteria. J. Gen. Microbiol., 181, 1-60.

105. Roberts A.G., Bowman M.K., Kramer D.M. (2002) Certain metal ions are inhibitors of cytochrome b$f complex 'Rieske' iron-sulfur protein domain movements. Biochemistry, 41, 4070-4079.

106. Robertson D.E., Dutton P.L. (1988) The nature and magnitude of the charge-separation reactions of ubiquinol cytochrome c2 oxidoreductase. BBA, 935, 273291.

107. Rutherford A.W., Boussac A. and Faller P. (2004) The stable tyrosyl radical in photosystem II: why D? BBA, 1655, 222-230.

108. Salamon Z., Huang D., Cramer W.A., Tollin G. (1998) Coupled plasmon-waveguide resonance spectroscopy studies of the cytochrome 6(j/7plastocyanin system in supported lipid bilayer membranes. Biophys J., 75, 1874-1885.

109. Savikhin S., Xu W., Chitnis P.R., Struve W.S. (2000) Ultrafast primary processes in PS I from Synechocystis sp. PCC 6803: roles of P700 and A0. Biophys. J., 79, pp 1573-1586.

110. Sazanov L.A., Burrows P.A., Nixon P.J. (1998) The plastid ndh genes for an NADH-specific dehydrogenase: isolation of a complex 1 analogue from pea thylakoid membranes. PNAS USA, 95, 1319-1324.

111. Scheller H.V., Jensen P.E., Haldrup A., Lunde C., Knoetzel J. (2001) Role of subunits in eukaryotic Photosystem I. BBA, 1507, 40-60.

112. Schmetterer G. (1994) Cyanobacterial respiration in The Molecular Biology of Cyanobacteria (Bryant, D.A., Ed.), pp.409-435, Kluwer, Dordrecht, The Netherlands.

113. Schoepp В., Brugna M., Riedel A., Nitschke W., Kramer D.M. (1999) The Q0-site inhibitor DBMIB favours the proximal position of the chloroplast Rieske protein and induces a pK-shift of the redox-linked proton. FEBS Letters, 450, 245-250.

114. Selak M.A., Whitmarsh J. (1982) Kinetics of the electrogenic step and cytochrome be and/redox changes in chloroplasts: Evidence for a Q-cycle. FEBS Letters, 150, 286-292.

115. Semenov A.Yu. (1993) Electrogenic steps during electron transfer via the cytochrome bcj complex of Rhodobacter sphaeroides chromatophores. FEBS Letters, 321, 1-5.

116. Sigfridsson K., Hansson O. and Brzezinski P. (1995) Electrogenic light reactions in photosystem I: resolution of electron-transfer rates between the iron -sulfur centers. PNAS USA, 92, 3458-3462.

117. Setif P. (1992) Energy transfer and trapping in photosystem I. in the Photosystems: structure, Function and Molecular Biology (Barber, J. Ed), 471-499, Elsevier Science Publishers, Amsterdam

118. Setif P., Bottin H. (1989) Identification of electron-transfer reactions involving the acceptor Aj of photosystem I at room temperature. Biochemistry, 28, 2689-2697.

119. Setif P., Bottin H. (1994) Lazer flash absorption spectroscopy study of ferredoxin reduction by photosystem I in Synechocystis sp PCC 6803: evidence for submicrosecond and microsecond kinetics. Biochemistry, 33, 8495-8504.

120. Setif P., Brettel K. (1993) Forward electron transfer from phylloquinone Aj to iron sulfur centers in spinach PS 1. Biochemistry, 32, 7846-7854.

121. Shen G., Zhao J., Reimer S, Antonkine M., Cai Q., Weiland S.W., Golbeck J.H., Bryant D.A. (2002) Assembly of photosystem I. JBC, 277, 20343-20354.

122. Shinkarev V.P., Ugulava N.B., Crofts A.R., Wraight C.A. (2000) DCCD inhibits the reactions of the iron-sulfur protein in Rhodobacter sphaeroides. Biochemistry, 39, 16206-16212.

123. Sommer F., Drepper F., Hippler M. (2002) The luminal helix 1 of PsaB is essential for recognition of plastocyanin or cytochrome c6 and fast electron transfer to photosystem I in Chlamydomonas reinhardtii. JBC, 277, 6573-6581.

124. Soriano G., Cramer W.A. (2001) Deuterium kinetic isotope effects in the p-side pathway for quinol oxidation by the cytochrome complex. Biochemistry, 40, 15109-15116.

125. Stroebel D., Choquet Y., Popot J.L., Picot D. (2003) An atypical haem in the cytochrome b<f complex. Nature, 426, 413-418.

126. Sykes G.A., Rogers L.J. (1984) Redox potentials of algal and cyanobacterial flavodoxins. Biochem. J., 44, 845-850.

127. Trebst A. (1980) Inhibitors in electron flow: tools for the functional and structural localization of carriers and energy conservation sites. Methods Enzymol., 69, 675715.

128. Trubitsin B.V., Mamedov M.D., Vitukhnovskaya L.A., Semenov A.Yu. and Tikhonov A.N. (2003) EPR study of light-induced regulation of photosynthetic electron transport in Synechocystis sp. strain PCC 6803. FEBS Letters, 544, 15-20.

129. Turro N.J. (1966) Triplet-triplet excitation transfer in fluid solution: applications to organic chemistry. J. Chem. Ed., 43, 13.

130. Ubbink M. (2004) Complexes of photosynthetic redox proteins studied by NMR Photosynt. Res., 81, 277-287.

131. Vallon О., Bulte L., Dainse P., Olive J., Bassi R., Wollman F.-A. (1991) Lateral redistribution of cytochrome btf complexes along thylakoid membranes upon state transitions. PNAS USA, 88, 8262-8266.

132. Vasiliev I.R., Jung Y.S. Mamedov M.D., Semenov A.Yu and Golbeck J.H. (1997) Near -IR absorbance changes and electorn reactions in the microsecond -to-second time domain in photosystem I. Biophys. J., 72, 301-315.

133. Vassiliev I.R, Jung Y.S., Yang F., Golbeck J.H. (1998) Psa С subunit of photosystem I is oriented with iron-sulfur cluster FB as the immediate electron donor to ferredoxin and flavodoxin. Biophys. J., 74, 2029-2035.

134. Vassiliev I.R., Antonkine M.L., Golbeck J.H. (2001) Iron -sulfur clusters in type I reaction centre. BBA, 1507, 139-160.

135. Von Jagow G., Link T.A. (1986) Use of specific inhibitors on the mitochondrial bei complex. Methods Enzymol, 126, 253-271.

136. Wang Y„ Beattie D.S. (1991) DCCD binds to cytochrome b6 of a cytochrome b<f complex isolated from spinach chloroplasts and inhibits proton translocation. Arch. Biochem. Biophys., 291, 363-370.

137. Webber A.N., Lubitz W. (2001) P700: the primary electron donor of photosystem I. BBA, 1507, 61-79.

138. Wikstrom M. and Krab К. (1986) The semiquinone cycle: a hypothesis of electron transfer and proton translocation in cytochrome be-type complexes. J. Bioenerg. Biomembr., 18, 181-193.

139. Xia D., Yu C.A., Kim H., Xia J.Z., Kachurin A.M., Zhang L., Yu L., Deisenhofer J. (1997) Crystal structure of the cytochrome bci complex from bovine heart mitochondria. Science, 277, 60-66.

140. Xu Q., Yu L., Chitnis V.P., Chitnis P.R. (1994) Function and organization of photosystem I in a cyanobacterial mutant strain that lacks Psa F and Psa J subunits. JBC, 269, 3205-3211.

141. Xue Y. F., Okvist M., Hansson O., Young S. (1998) Crystal structure of spinach plastocyanin at 1,7 A resolution. Protein Sci., 7, 2099-2105.

142. Young S., Sigfridsson K., Olesen K., Hansoon O. (1997) The involvement of the two acidic patches of spinach plastocyanin in the reaction with photosystem I. BBA, 1322, 106-114.

143. Zhang Z., Huang L., Shulmeister V.M., Chi Y.I., Kim K.K., Hung L.W., Crofts A.R., Berry E.A., Kim S.H. (1998) Electron transfer by domain movement in cytochrome bcj Nature, 392, 677-684.

144. Zhang H., Huang D., Cramer W.A. (1999) Stichiometrically bound P carotene in the cytochrome btf complex of oxygenic photosynthesis protects against oxygen damage. JBC, 274, 1581- 1587.