ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ПЛАСТИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ НА ОСНОВЕ КОСТНОГО КОЛЛАГЕНА ИМПРЕГНИРОВАННОГО СУЛЬФАТИРОВАННЫМИ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНАМИ НА РЕГЕНЕРАЦИЮ КОСТНОЙ ТКАНИ (экспериментально-клиническое исследован тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.15, кандидат медицинских наук ВАСИЛЬЕВ, МАКСИМ ГЕННАДЬЕВИЧ

• ВАСИЛЬЕВ, МАКСИМ ГЕННАДЬЕВИЧ
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук ВАСИЛЬЕВ, МАКСИМ ГЕННАДЬЕВИЧ

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Принципы тканевой инженерии.

1.2. Пластические материалы.

1.3. Роль сульфатированных гликозаминогликанов в процессе регенерации соединительной ткани.

1.4. Биокомпозиционные материалы на основе костного коллагена, сГАГ и гидроксиапатита.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Оценка цитотоксичности сГАГ и их влияние на пролиферацию стромальных клеток костного мозга in vitro (МТТ-тест).

2.2. Влияние сГАГ на морфологию клеточных культур стромальных клеток костного мозга и пролиферацию клеток in vitro.

2.3. Исследование свойств костного коллагена импрегнированного сульфатированными гликозаминогликанами на модели гетеротопической имплантации.

2.4. Исследование свойств костного коллагена импрегнированного сульфатированными гликозаминогликанами на модели ортотопической имплантации.

2.5. Оценка внедрения костнопластических материалов на основе костного коллагена импрегнированного сульфатированными гликозаминогликанами в клиническую практику.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СВОЙСТВ СУЛЬФАТИРОВАННЫХ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ НА КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК IN VITRO.

3.1. Влияние сГАГ на морфологию клеточных культур стромальных клеток костного мозга и пролиферацию клеток in vitro.

3.2. Оценка цитотоксичности сГАГ и их влияние на пролиферацию стромальных клеток костного мозга in vitro (МТТ-тест).

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

СВОЙСТВ МАТЕРИАЛА НА МОДЕЛИ ОРТОТОПИЧЕСКОГО И ГЕТЕРОПИЧЕСКОГО ОСТЕОГЕНЕЗА.

4.1. Исследование свойств костного коллагена импрегнированного сульфатированными гликозаминогликанами на модели гетеротопической имплантации.

4.1.1. Опытная серия.

4.1.2. Состояние контрольных образцов.

4.2. Исследование свойств костного коллагена импрегнированного сульфатированными гликозаминогликанами на модели ортотопической имплантации.

4.2.1 Рентгенологическое исследование.

4.2.2. Гистологический анализ контрольной группы.

4.2.3. Гистологический анализ опытной группы.

ГЛАВА 5. ОЦЕНКА ВНЕДРЕНИЯ КОСТНОПЛАСТИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ НА ОСНОВЕ КОСТНОГО КОЛЛАГЕНА ИМПРЕГНИРОВАННОГО СУЛЬФАТИРОВАННЫМИ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНАМИ В КЛИНИЧЕСКУЮ ПРАКТИКУ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ПЛАСТИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ НА ОСНОВЕ КОСТНОГО КОЛЛАГЕНА ИМПРЕГНИРОВАННОГО СУЛЬФАТИРОВАННЫМИ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНАМИ НА РЕГЕНЕРАЦИЮ КОСТНОЙ ТКАНИ (экспериментально-клиническое исследован»

Актуальность работы. Разработка новых биопластических материалов для проведения реконструктивных хирургических операций в травматологии и ортопедии, эффективных для получения желаемого результата лечения, остаются актуальными до настоящего времени. Актуальность рассматриваемой темы имеет общепризнанный характер, которая отражается во многих публикациях, дискуссиях, разработках и оценках новых биокомпозиционных материалов, способных активно влиять на течение костной регенерации (Снетков А.И. с соавт. 2001; Миронов С.П. 2007; Baas J. et al. 2008; Greiner S.H. et al. 2008; Савельев В.И. с соавт. 2009; Gao Y. et al. 2009).

Многолетний опыт травматологии и ортопедии показал, что биологические материалы часто являются решающим фактором достижения положительного результата лечения патологии костной системы. Известно, что уровень современной медицины и сопредельных научных направлений позволяют создавать костнопластические материалы, которые по своим свойствам не уступают аутотканям, т.н. «золотому стандарту», используемых до настоящего времени для замещения дефектов костной ткани у больных с костной патологией (Langer R. et al. 1993; Spector M. 1999). При этом одним из серьезных требований к материалам является способность обеспечения надежности опорной и/или структурообразующей функции в поврежденной области ткани или органа (Yannas I.V. et. al. 1984; Reddi A.H. et. al. 1987; Reddi A.H. 1998). Во-вторых, наличие у материала остеоидуктивности, то есть способности побуждения остеобластов и других мезенхимальных клеток к формированию кости. И, в-третьих, обладать свойствами биосовместимости, то есть быть биодеградируемыми и не вызывать у реципиента воспалительных и иммунологических реакций. Последнее качество обычно достигается в процессе изготовления материала за счет снижения его антигенных составляющих (Bruck S.D. et al. 1989; Vacanti С.A. et al. 1992; Friess W. 1998). Совокупность этих свойств позволяет подобным имплантатам параллельно с опорной (остеокондуктивной) функцией, обеспечивать биоинтеграцию, т.е. 4 врастание клеток и сосудов в структуры имплантированного материала (Thomson R.C. et. al. 1998).

Считается, что наиболее подходящими для трансплантации и последующей биоинтеграции являются аутоткани, чье использование полностью исключает иммунологические реакции после заполнения ими тканевых дефектов (Enneking W.F. et. al. 1980; Reddi A.H. 1985; Summers B.N. et al. 1989; Goldberg V.M. 2000). Однако их получение возможно только непосредственно в процессе оперативного вмешательства, где количество тканей ограничено, особенно у детей, а процедура их забора сопровождается рядом негативных последствий, как в процессе забора, так и после него. Все это существенно ограничивает широкое применение аутотканей (Bos G.D. et. al. 1983; Horowitz M.C. et al. 1991, 1993). Таким образом, задача создания биокомпозиционных материалов, применение которых может обеспечить формирование и восстановление кости в местах ее повреждения с одновременным снижением трудовых и финансовых затрат процесса устранения костных повреждений у больных с костной патологией во многом остается открытой.

Композиция материала может включать в себя несколько составляющих. Как один из вариантов, этими составляющими могут стать гликозами-ногликаны (ГАГ), которые являются компонентом костного матрикса регулирующие репаративные процессы. Известно, что полисахариды, входящие в состав протеогликанов, линейные полимеры, построенные из дисахаридных субъединиц, образованные уроновыми кислотами (глюкуроновой, галактуро-новой и идуроновой), N-ацетилгексозаминами (N-ацетилглюкозамин, N-ацетилгалактозамин) и нейтральными сахаридами (галактозой, маннозой и ксилозой) называются гликозаминогликанами (Стейси М. с соавт. 1965). Обоснованием включения ГАГ в состав биокомпозиционных материалов является многолетняя история экспериментальных исследований, которая показала положительное влияние гликозаминогликанов на регенерацию костной, хрящевой, нервной и других тканей (Гамалея Н.Ф. 1946; Richterich R. et al. 1958; Слуцкий Л.И. 1969; Касавина Б.С. с соавт. 1970; Серов В.В. с соавт. 5

1981; Kalbhen D.A. et al. 1990; Glade M.J. 1990; Bassleer С. et al. 1992; Омель-яненко Н.П. с соавт. 2009). Известно, что зрелая костная ткань содержит в основном сульфатированные гликозаминогликаны (сГАГ) — хондроитин-4- и хондроитин-6-сульфаты, дерматансульфат и кератансульфат. Они представляют собой линейные полисахаридные полимеры, в физиологических состояниях представленные в виде комплексов с белками. Костный матрикс зрелой кости содержит коллагены, неколлагеновые белки, гликопротеиды и протеогликаны, в состав последних и входят сГАГ (Панасюк А.Ф. с соавт. 2000). Биосинтез протеогликанов в костной ткани осуществляется активиро-ваными остеобластами и в незначительной степени зрелыми остеоцитами (Juliano R. et al. 1993; Wendel M. et al. 1998). Сульфатированные ГАГ участвуют практически во всех процессах обмена соединительной ткани в первую очередь в формировании коллагеновых и эластиновых волокон (Панасюк А.Ф. с соавт. 2000). Очевидно, что роль сГАГ в регуляции остеогенеза достаточно значительная (Burger М. et al. 1962). В последнее время эти положения нашли свое подтверждение по итогам исследования процессов регенерации костной ткани (Pieper J.S. et. al. 2000; Омельяненко Н.П. с соавт. 2009).

Для выполнения опорной функции биокомпозиционного материала может быть использован искусственный или натуральный гидроксиапатит (ГА). В настоящее время для замещения костных дефектов в травматологии и ортопедии активно используются различные формы гидроксиапатита, отличающиеся по форме, величине частиц, пор и т.д. (Jarcho М. et al. 1977; Klein С.Р. et al. 1983; Parsons J. et al. 1988; Ripamonti U. et al. 1992; Воложин А.И. с соавт. 1993; Friess W. 1998). В этой связи логично использовать природный ГА, который входит в состав костной ткани наряду с коллагеном. Последний при этом сохраняет свою архитектонику. К основным достоинствам коллагена - как пластического биоматериала следует отнести его низкую токсичность и антигенность, высокую механическую прочность и устойчивость к тканевым протеазам (Истранов Л.П. 1976). Известно, что коллаген и ГА взятые по отдельности обладают в основном лишь остеокондуктивными свойст6 вами (Parsons J. et al. 1988; Mehlisch D.R. 1989). При объединении этих соединений в комплекс, они способны оказывать определенный остеоиндук-тивный эффект, хотя имеющиеся в литературе данные по этому вопросу достаточно противоречивы. И, наконец, если в данном комплексе будут присутствовать ещё и сГАГ, то такая композиция может иметь дополнительные ос-теоиндуктивные свойства.

Взяв за основу три основных компонента - костный коллаген и ГА, полученные из костной ткани животных (телята и свиньи), а также выделенные сГАГ (Панасюк с соавт. 2000; Панасюк А.Ф. с соавт. 2004) фирма «Конек-тбиофарм» разработала биокомпозиционный материал, который был представлен на рынок медицинских услуг. Продолжением этого направления стала совместная разработка «Конектбиофарма» с тканевым банком ЦИТО им. H.H. Приорова биокомпозиционного материала на основе аллогенных тканей (Снетков А.И. с соавт. 2001).

Настоящая экспериментально-клиническая работа посвящена оценке свойств биокомпозиционного материала нового поколения на основе алло-генного костного коллагена импрегнированного сГАГ, предназначенного для клинического использования в травматологии и ортопедии.

Цель исследования.

Экспериментальное изучение влияния пластических материалов на основе костного коллагена импрегнированного сульфатированными гликоза-миногликанами на процесс регенерации костной ткани с использованием различных экспериментальных моделей и внедрение данного вида материалов в клиническую практику.

Задачи исследования.

1. Оценить влияние сГАГ на пролиферацию культур стромальных клеток костного мозга.

2. Изучить влияние сГАГ на свойства имплантатов на модели гетерото-пической имплантации.

3. Сравнить интенсивность и характер замещения имплантатов на основе костного коллагена с сГАГ и без них.

4. Разработать и внедрить в клиническую практику биокомпозиционный материал на основе костного аллоколлагена импрегнированного сГАГ.

5. Оценить результаты применения разработанного биокомпозиционного материала в клинике.

Научная новизна.

1. Проведено исследование влияния сГАГ на пролиферацию культуры стромальных клеток костного мозга.

2. На экспериментальных моделях гетеротопической и ортотопической имплантации показана целесообразность включения сГАГ в состав остеопла-стических биокомпозиционных материалов.

3. Разработан и внедрен в клиническую практику новый биокомпозиционный материал на основе костного аллоколлагена импрегнированного сГАГ.

4. Показана эффективность клинического применения имплантатов на основе костного аллоколлагена импрегнированного сГАГ при замещении пострезекционных дефектов костной ткани.

Практическая значимость.

1. Дана экспериментальная оценка влияния сГАГ на процессы регенерации костной ткани.

2. Доказана целесообразность введения сульфатированных гликозами-ногликанов в состав остеопластических биокомпозиционных материалов

3. Разработан и внедрен в клиническую практику биокомпозиционный материал «Остеоматрикс» на основе аллогенных тканей, включающий костный коллаген и сГАГ.

Внедрение результатов работы.

Биокомпозиционный материал на основе аллогенных тканей, включающий костный коллаген, сГАГ и гидроксиапатит внедрен в работу отделений косной патологии ФГУ ЦИТО им. Н.Н.Приорова, Московской областной детской ортопедохирургической больницы восстановительного лечения, ДГКБ №13 им. Н.Ф.Филатова г. Москвы.

Апробация работы.

Материалы исследования доложены на:

- Симпозиуме «Биоимплантология на пороге XXI века», Москва, 2001;

- Third World Congress on Tissue Banking and 26th Annual Meeting AATB, Boston, 2002;

- 11th International Conference on Tissue Banking and EATB Annual Meeting, Bratislava, 2002;

- II Всероссийском Симпозиуме с международным участием «Клинические и фундаментальные аспекты тканевой терапии», Самара, 2004;

- 13th International Congress of the European Association of Tissue Banking, Prague, 2004;

- 4th World Congress on Tissue Banking, Rio de Janeiro, 2005;

- 5th Congress of Baltic Association for maxillofacial and plastic surgery, Kaunas, 2005;

- 3 Международном Конгрессе «Современные технологии в травматологии и ортопедии», Москва, 2006;

- III Всероссийском Симпозиуме «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии», Москва, 2007;

- IV Всероссийском Симпозиуме с международным участием: «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии», Санкт-Петербург, 2010;

Публикации.

По материалам диссертации опубликованы 22 работы. В том числе 4 статьи в журналах рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, получено 7 патентов на изобретения.

Объем и структура.

Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста. Состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, списка использованной литературы, включающего 46 работ из отечественных и 100 работ из зарубежных источников, приложения. Иллюстрирована 71 рисунками, 4 таблицами, 4 диаграммами.

Заключение диссертации по теме «Травматология и ортопедия», ВАСИЛЬЕВ, МАКСИМ ГЕННАДЬЕВИЧ

выводы

1. Растворы сульфатированных гликозаминогликанов в концентрации 50 мкг/мл, 250 мкг/мл, 500 мкг/мл не влияют на пролиферацию стромальных клеток костного мозга in vitro.

2. При гетеротопической имплантации образцы, содержащие сульфатироо ванные гликозаминогликаны дозой 700 мкг/см , стимулируют развитие более выраженной сосудистой сети по сравнению с контрольными образцами и, возможно, индуцируют гетеротопическое костеобразование.

3. Сульфатированные гликозаминогликаны дозой 700 мкг/смЗ препятствуют резорбции коллагена, входящего в состав имплантированных образцов.

4. При ортотопической имплантации образцы, содержащие сульфатированные гликозаминогликаны дозой 700 мкг/смЗ, достоверно увеличивают образование хрящевой ткани и способствуют заживлению костной раны через энхондральный тип костеобразования, что указывает на выраженные остеокондуктивные свойства материала.

5. Применение биокомпозиционного материала «Остеоматрикс» разработанного на основе костного коллагена аллогенного происхождения им-прегнированного сульфатированными гликозаминогликанами позволило добиться положительных результатов лечения у пострезекционными дефектами костей в подавляющем (89%) числе случаев.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Современная травматология и ортопедия остро нуждается в костнопластических материалах, способствующих восстановлению целостности костной ткани при любых ситуациях, будь то травма или хроническое заболевание, ведущие к повреждению костной системы. Драматизм каждой конкретной ситуации, где существует необходимость в костнопластических материалах, может быть представлен или несрощенным переломом или значительным дефектом кости, вызванный онкологическим заболеванием, а также другими ситуациями, где для восстановления костной ткани нужны «импланта-ты». Выбор оптимально удобного материала с точки зрения хирурга для возмещения костного дефекта всегда представляет для последнего определенные трудности. Известно, что современные костнопластические материалы должны быть безопасными, где возможность переноса инфекций материалом полностью исключена. Они должны обеспечивать опорную и структурообразующую функцию в области поврежденной костной ткани, обладать остео-индуктивностью и биологической совместимостью, быть биодеградируемы-ми и не вызывать у реципиентов воспалительных и иммунологических реакций. К сожалению, большинство используемых в России материалов в реконструктивной хирургии не отвечают в полной мере всем вышеперечисленным требованиям.

Известно, что в процессе остеогенеза принимают активное участие основные компоненты межклеточного матрикса такие, как протеогликаны, гли-копротеины и коллаген, а также костные морфогенетические белки и факторы роста. Протеогликаны представляют собой белки, в состав которых входят сложные полисахариды, главным образом сульфатированные гликозами-ногликаны (сГАГ). В кости сГАГ представлены хондроитин-, дерматан- и ке-ратансульфатами, именно они и определяют основные функциональные характеристики костных протеогликанов. В ряде работ было показано, что сГАГ способны модулировать обмен клеток соединительной ткани и влиять на их дифференцировку (Серов В.В., Шехтер А.Б. 1981; Панасюк А.Ф. с со

96 авт. 2000). В научной литературе существуют единичные сообщения о влиянии сГАГ на репарацию костной ткани (Burger М. et al. 1962) при этом их роль в процессах её восстановления остается недостаточно изученной. Учитывая теоретическую обоснованность включения сГАГ в биокомпозиционные материалы и хорошие результаты использования подобных материалов в челюстно-лицевой хирургии, мы были вправе ожидать от «Остеоматрикса» подобных результатов в травматологии и ортопедии. В данной работе были рассмотрены возможность, эффективность и целесообразность использования сульфатированных гликозаминогликанов в составе биокомпозиционного материала, предназначенного для полноценного (органотипического) восстановления поврежденной опорной костной ткани. С этой целью были сделаны предварительные экспериментальные исследования.

Для исследования свойств сульфатированных гликозаминогликанов, выделенных в соответствие с патентом РФ № 2162331, в клеточных культурах стромальных клеток костного мозга мы использовали культуры стро-мальных клеток костного мозга с эксплантационной плотностью 5x105 ядерных клеток костного мозга по 4 флакона в каждой серии.

Проводили 3 серии исследований сГАГ в клеточных культурах. В культуральные флаконы с клеточной культурой с 10 мл ростовой среды добавляли сГАГ с конечной концентрацией (с учетом количества среды) 50 мкг/мл - 1 серия опытов, 250 мкг/мл — 2 серия, 500 мкг/мл — 3 серия. Каждая серия опытов включала по 4 флакона клеточных культур. В контрольной группе во флаконы с клеточной культурой раствор сГАГ не добавляли. Культивирование проводили в течение 7 дней.

Клетки из 3 флаконов из каждой серии опытов на 7 день культивирования снимали трипсином и подсчитывали количество клеток во флаконе в камере Горяева. По одному флакону клеточных культур из каждой серии опытов на 7 день культивирования фиксировали и окрашивали по методу Гимза-Романовскому для морфологического исследования клеточных культур.

Одновременно была проведена оценка возможной цитотоксичности растворов сульфатированных гликозаминогликанов и пролиферативной активности образцов. Для фотометрической оценки пролиферации и гибели клеток в культуре использовали МТТ-тест. МТТ (3-(4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенил-тетразолий бромид) восстанавливается в митохондриях живых клеток под действием сукцинатдегидрогеназы до водонерастворимого тем-ноокрашенного формазана. Формазан был элюирован из клеток с помощью ДМСО. Определено, что оптическая плотность элюатов при длине волны 570 нм (максимум поглощения формазана) пропорциональна количеству жизнеспособных клеток в образце.

Результаты проведенных исследований с использованием культураль-ных сред показали отсутствие какого-либо стимулирующего влияния растворов сГАГ на скорость деления стромальных клеток костного мозга барана не зависимо от концентрации растворов сульфатированных гликозаминогликанов (50 мкг/мл, 250 мкг/мл и 500 мкг/мл). Между тем, очевидно, что сульфа-тированные гликозаминогликаны, выделенные в соответствие с патентом РФ № 2162331, не обладают цитотоксичностью, что, в свою очередь, не препятствует их использованию в клинической практике.

Образование или отсутствие элементов костной ткани в области помещения какого-либо материала в мягкие ткани является общепризнанным тестом на выявление остеоиндуктивных свойств исследуемых материалов — это, так называемая модель гетеропической имплантации. Для оценки эффекта остеоиндуктивности исследуемого материала 20 половозрелым крысам породы «Вистар» внутримышечно поместили коллагеновые блоки с сГАГ, коно центрацией 700 мкг/см . Блоки состояли из костного коллагена, полученного из губчатого слоя аллогенной костной ткани размером 3x3 мм. Контролем служили аналогичные образцы костного коллагена без сГАГ. Срок эксперимента составил 1 месяц.

Исследования гистологических препаратов показали, что в области помещения опытных образцах достоверных признаков остеогенеза обнаружено

98 не было. Однако в некоторых образцах имелись участки, в которых трабеку-лы были покрыты плотным слоем клеток, по своей морфологии напоминающие остеобласты. Состояние опытных образцов отличалось от контрольных большей сохранностью структур костного коллагена, состоянием межтрабе-кулярной соединительной ткани - менее зрелая, более «нежная», макрофа-гальным характером инфильтрата, который, однако, гораздо менее интенсивно резорбирует костный коллаген.

Для исследования влияния материалов на основе костного коллагена импрегнированного сульфатированными гликозаминогликанами на регенерацию костной ткани был проведен эксперимент на модели ортотопической имплантации. В качестве экспериментальных животных использовали половозрелых кроликов породы «Шиншилла». Были сформированы 2 группы эксперимента по 10 кроликов, у животных опытной группы в сегментарный дефект лучевой кости имплантировали блоки, импрегнированные сГАГ дозой 700 мкг/см , а в контрольной группе дефект заполняли аналогичным материалом только без сГАГ. Рентгенологические сроки наблюдения составили 2 недели, 1, 2 и 3 месяца. Оценку эксперимента провели по данным рентгенологического и морфологического исследований.

Визуальный анализ рентгенологических снимков не выявил каких-либо явных отличий и особенностей на стадиях восстановления костных дефектов с помощью материалов или импрегнированных сГАГ или без таковых. Сроки восстановления целостности лучевых костей в обеих группах эксперимента были схожими.

Гистоморфометрические исследования ткани в области дефекта показали, что костный коллаген, при ортотопической имплантации в костную ткань лабораторным животным вызывает умеренно выраженный остеогенез, проявляющийся в формирование костной, хрящевой или фиброзной ткани. Насыщение костного коллагена сульфатированными гликозаминогликанами достоверно стимулирует образование хрящевой ткани. Анализируя полученные результаты данного морфологического исследования, было сделано

99 предположение, что сГАГ непосредственно не индуцируют остеогенез, но создают оптимальную среду для пролиферации и дифференцировки остео-генных клеток и усиливают действие имеющихся факторов роста.

Анализ результатов исследования гетеропического остеогенеза созвучен с анализом ортотопического эксперимента — сульфатированные гликоза-миногликаны создают некоторые дополнительные благоприятные условия для регенерации костной ткани.

Для клинического использования был разработан биокомпозиционный материал «Остеоматрикс» на основе аллогенных тканей, включающий костный коллаген, сГАГ и гидроксиапатит. Клиническая оценка эффективности разработанного материала «Остеоматрикс» в травматологии и ортопедии была проведена, основываясь на результатах лечения 54 больных с различной костной патологией. Подавляющее число пациентов, вошедших в исследование, получили хирургическое лечение по поводу костных опухолей и опухо-леподобных заболеваний. Контроль восстановления костной ткани пациентов осуществляли клиническими, рентгенологическими и компьютерно-томографическими методами лучевой диагностики. Части больным имплантировали только «Остеоматрикс», другие получили исследуемый материал вместе или с ДКИ «Перфоост», изготовленными по технологии ЦИТО (Ле-кишвили М.В. 2005) или с аллоимплантатами из кортикального слоя донорских костей, изготовленными с использованием паров формалина и хранящихся при отрицательных температурах (Парфентьева В.Ф. с соавт. 1969). Также в отдельных случаях комбинацию «Остеоматриксу» составил биокомпозиционный препарат на основе синтетического гидроксиапатита «Колла-пан».

Средние сроки восстановления целостности кости небольших дефектов при изолированном использовании «Остеоматрикса» составили от 4 месяцев до 11 месяцев (Лекишвили М.В. с соавт. 2002; Васильев М.Г. с соавт. 2006), в то время когда средние сроки восстановления кости при опухолеподобных заболеваниях после пластики дефектов ДКИ «Перфоост» составили 6-13

100 месяцев (Касымов И.А. 2000, Тарасов Н.И. с соавт. 2002). При массивной пластике ДКИ очагов фиброзной дисплазии полная перестройка аллоимплантатов проходила от 16 месяцев и более. Когда с «Остеоматриксом» использовали замороженные кортикальные аллоимплантаты, сроки регенерации костной ткани были 30 месяцев и более (Снетков А.И. с соавт. 2003).

Анализируя результаты хирургического лечения с использованием различных костнопластических и иных материалов необходимо отметить, что отдельно «Остеоматрикс» применялся при сравнительно небольших костных дефектах (до 12 см ) и, как правило, в ненагружаемых отделах скелета. В нашем наблюдении общее число положительных результатов хирургического лечения с использованием «Остеоматрикса» составило 89%. Однако стоит отметить, что почти все случаи осложнений связаны с рецидивом основного заболевания, а не с применением в ходе лечения остеопластических материалов. Неудовлетворительным результатом применения «Остеоматрикса» в сочетании с «Перфоостом» можно признать один случай. В тех случаях, когда в ходе хирургического лечения кроме «Остематрикса» требовался дополнительный материал или дополнительное проведение металлоостеосинтеза вероятность удовлетворительного результата лечения снижалась. Это были больные, как правило, с наиболее тяжелыми и обширными поражениями костных структур.

Несомненно, новый материал имеет право быть допущен к использованию в клинической практике у больных с костной патологией, он не токсичен, удобен при заполнении костных дефектов, в конечном счете, способствует формированию новых тканей реципиента.

Результаты комплексных исследований в эксперименте in vivo и in vitro, сравнительный анализ использования нового костнопластического материала «Остеоматрикс» при выполнении в клинике реконструктивных операций с другими костнопластическими материалами и позволили сделать несколько выводов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук ВАСИЛЬЕВ, МАКСИМ ГЕННАДЬЕВИЧ, 2011 год

1. Аснина С.А., Агапов B.C., Панасюк А.Ф. и др. Хирургическое лечение радикулярных кист челюстных костей с использованием биокомпозиционного материала «Остеоматрикс»// Институт стоматологии 2004 - № 2(23).- С. 43-45.

2. Васильев М.Г., Снетков А.И., Цуканов В.Е. и др. Теоретическое обоснование использования биокомпозиционного материала «Остеоматрикс» в лечении детей и подростков с костной патологией// Детская хирургия — 2006.- № 2.- С. 44-49.

3. Вересов А.Г., Путляев В.И., Третьяков Ю.Д. Достижения в области керамических биоматериалов// Российский химический журнал.- 2000 Т. 94.-№6, Ч. 2.-С. 32-46.

4. Воложин А.И., Дьякова C.B., Топольницкий О.З. и др. Клиническая апробация препарата на основе гидроксиапатита в стоматологии// Новое в стоматологии.- 1993.- № 3,- С. 29-31.

5. Гамалея Н.Ф. Фактор регенерации и неспецифическая терапия// Госпитальное дело,- 1946,- № 1-2- С. 22-25.

6. Грудянов А.И. Использование биокомпозиционного остеопластического материала «Аггломатрикс-имплант» при хирургическом лечении воспалительных заболеваний пародонта// Пародонтология 2003 — № 4 (29).- С. 3943.

7. Дмитриева J1.A. Современные аспекты клинической пародонтологии, «Мед. Пресс М», 2001.- С. 107-108.

8. Иванов С.Ю., Панасюк А.Ф., Панин A.M. и др. Опыт применения биокомпозиционных остеопластических материалов// Нижегородский медицинский журнал 2003- С. 244-250.

9. Иванов С.Ю., Ларионов Е.В., Панин A.M. и др. Разработка биоматериалов для остеопластики на основе коллагена костной ткани// Институт стоматологии.- 2005.- № 4 (29).- С. 108-111.

10. Истранов Л.П. Коллаген и его применение в медицине// М., «Медицина», 1976.-228 с.

11. Карпов A.B., Шахов В.П. Системы внешней фиксации и механизмы оптимальной биомеханики —2001 — Томск: STT —С. 303-360.

12. Касавина Б.С., Кольчинский Т.А., Зенкевич Г.Д. Мукополисахариды костной и хрящевой ткани в норме и патологии// Успехи современной биологии.- 1970.- Т. 69, в. 3.

13. Касавина Б.С., Бабаев Т.А., Романов Ю.А. и др.// Мукополисахариды и функциональная активность щитовидной железы- Ташкент, «Медицина» УзССР, 1973.-С. 9-43.

14. Касымов И.А. Костно-пластические оперативные вмешательства у детей с костной патологией: Автореф. дисс. . докт. мед. наук М., 2000 - 40 с.

15. Лаврищева Г.И., Оноприенко Г.А. Морфологические и клинические аспекты репаративной регенерации опорных органов и тканей: М., «Медицина».-! 996.- 208 с.

16. Лекишвили М.В., Балберкин A.B., Васильев М.Г. и др. Первый опыт применения в клинике костной патологии биокомпозиционного материала «Остеоматрикс»// Вестн. травматол. ортопед — 2002 — № 4 — С. 80-84.

17. Лекишвили М.В. Технологии изготовления костного пластического материала для применения в восстановительной хирургии: Дисс. . докт. мед. наук.- М., 2005.

18. Лекишвили М.В., Панасюк А.Ф. Новые биопластические материалы в реконструктивной хирургии// Вестник РАМН — 2008 — № 9 — С. 33-36.

19. Миронов С.П. Современное положение и перспективы развития российской биоимплантологии// Мат. III Всероссийского симпозиума с международным участием: «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии».- М., 2007.- С. 6-7.

20. Омельяненко Н.П., Слуцкий Л.И. Соединительная ткань (гистофизиоло-гия и биохимия). Т 1// под ред. С.П.Миронова, М., «Известия», 2009 379 с.

21. Онищенко H.A. Клеточные технологии и современная медицина// Патофизиология и экспериментальная терапия — 2004 № 4 - С. 2-11.

22. Панасюк А.Ф., Ларионов Е.В. Хондроитинсульфаты и их роль в обмене хондроцитов и межклеточного матрикса хрящевой ткани// Научно-практическая ревматология 2000 - № 2 — С. 46-55.

23. Панасюк А.Ф., Ларионов Е.В., Саващук Д.А. Способ выделения сульфатированных гликозаминогликанов: Патент РФ на изобретение № 2162331 от 20.05.2000.

24. Панасюк А.Ф., Иванов С.Ю., Ларионов Е.В. и др. Способ получения коллагена из костной ткани: Патент РФ на изобретение № 2161976 от 21.04.2000.

25. Панасюк А.Ф., Саващук Д.А., Ларионов Е.В. и др. Биоматериалы для тканевой инженерии и хирургической стоматологии. Часть 2// Клин, стоматология.- 2004.-N 1-2.-С. 54-57.

26. Панин A.M. Опыт применения отечественных биокомпозиционных материалов// Мат. Конгресса «Человек и лекарство».— М., 2003-С. 300.

27. Панин A.M. Биокомпозиционные остеопластические материалы. Применение и перспективы развития// Сб. тез. «Стоматология XXI века».- Н. Новгород, 2003.-С. 146-148.

28. Панин A.M., Иванов С.Ю., Сербулов В.В. Опыт использования остео-пластического материала «Биоматрикс» в качестве разобщающей резорбируемой мембраны// Российский вестник дентальной имплантологии 2003— №2.-С. 32-35.

29. Панин A.M. Новое поколение биокомпозиционных остеопластических материалов: Разработка, лабораторно-клиническое обоснование, клиническое внедрение. Автореф. дисс. . докт. мед. наук.-М., 2004.-48 с.

30. Парфентьева В.Ф., Розвадовский В.Д., Дмитриенко В.И. Консервация гомологичных костных трансплантатов.—Кишинев, 1969.— 114 с.

31. Разумовский A.B. Репаративная регенерация костной ткани под влиянием экстракта надпочечников крыс // Автореф. дисс. . к.м.н.- Горький, 1983.

32. Русаков A.B. Введение в физиологию и патологию костной ткани// Руководство по патологической анатомии.—М., «Медгиз», 1959.—Т. 5 506 с.

33. Савельев В.И., Лекишвили М.В. Тканевые банки страны, итоги и перспективы развития// Технологии живых систем.— 2009.— Т. 6, № 4 — С. 4-9.

34. Серов В.В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань// М., «Медицина», 1981.-312 с.

35. Слуцкий Л.И. Биохимия нормальной и патологически измененной соединительной ткани// Л., «Медицина», 1969 377 с.

36. Снетков А.И., Лекишвили М.В., Васильев М.Г. Биокомпозиционный материал для замещения костных дефектов// Патент РФ на изобретение № 2197974 от 25.05.2001.

37. Снетков А.И., Лекишвили М.В., Касымов И.А. и др. Использование пластического материала «Перфоост» в клинике детской костной патологии// Вестн. травматол. ортопед 2003.- №4 — С. 74-79.

38. Стейси М., Баркер С. Углеводы живых тканей (пер. с англ.)// М., «Мир», 1965.-324 с.

39. Тер-Асатуров Г.П., Рябов А.Ю., Лекишвили М.В., Юрасова Ю.Б. Экспериментальная сравнительная оценка некоторых биоматериалов, используемых в российской челюстно-лицевой хирургии// Российский стоматологический журнал 2009 — № 4 — С. 11-13.

40. Фриденштейн А.Я., Лалыкина К.С. Индукция костной ткани и остеоген-ные клетки предшественники// М., «Медицина», 1973.- 223 с.

41. Хэм А., Кормак Д. Гистология, Т. 3- М., «Мир», 1983.

42. Чайлахян Р.К. Способ восстановления целостности костей и трансплантат для его осуществления// Патент РФ на изобретение № 2167662 от 27.07.2000.

43. Шишкова Н.В. Влияние биокомпозиционных материалов на регенерацию костной ткани при заполнении дефектов челюстных костей после удаления радикулярных кист. Автореф. дисс. . канд. мед. наук М., 2005 - 20 с.

44. Agholme F., Aspenberg P. Experimental results of combining bisphospho-nates with allograft in a rat model// J Bone Jt Surg. (Br).- 2009-Vol 91, N 5.- P. 670-675.

45. Anseth A. Glycosaminoglycans in the developing corneal stroma// Experimental Eye Research.- 1961.- Vol 1, N 2.- P. 116-121.

46. Aspenberg P., Thorngren K.G., Lohmander L.S. Dose dependent stimulation of bone induction by basic fibroblast growth factor in rats// Acta Orthop Scand-1991.- Vol 62, N 3.- P. 481 -484.

47. Baas J., Elmengaard В., Bechtold J. et al. Ceramic bone graft substitute with equine bone protein extract is comparable to allograft in terms of implant fixation: A study in dogs// Acta Orthop.- 2008.- Vol. 79, N 6.- P. 841-850.

48. Balmain-Oligo N., Laval-Jeantet M. The lipids of osseous tissue. Chromatographic analysis//Pathol Biol.- 1967.-Vol 15, N 19.-P. 873-877.

49. Bassleer C., Henrotin Y., Franchimont P. In-vitro evaluation of drugs proposed as chondroprotective agents// Int J Tissue React — 1992 Vol 14, N 5 - P. 231-241.

50. Bos G.D., Goldberg V.M., Zika J.M. et al. Immune responses of rats to frozen bone allografts// J Bone Jt Surg (Am).- 1983.- Vol 65, N 2.- P. 239-246.

51. Boyne P.J. Transplantation, implantation and grafts// Dent Clin North Am — 1971.-Vol 15, N2.-P. 433-453.

52. Bouvier M., Joffre A., Magloire H. In vitro mineralization of a three-dimensional collagen matrix by human dental pulp cells in the presence of chondroitin sulphate// Arch Oral Biol.- 1990.- Vol 35, N 4.- P. 301-309.

53. Brown R.A., Kirsty D.S., McGrouther A. Strategies for cell engineering in tissue repair// Wound Rep Req.-1997.- Vol 5, N 3.- P. 212.

54. Bruck S.D., Mueller E.P. Reference standards for implantable materials: problems and needs// Med. Prog. Technol 1989 - Vol 15, N 1-2.- P. 5-20.

55. Bruder S.P., Kraus K.H., Goldberg V.M. et al. The effect of implants loaded with autologous mesenchymal stem cells on the healing of canine segmental bone defects// J Bone Jt Surg (Am).- 1998,- Vol 80, N 6.- P. 985-996.

56. Burger M., Sherman B.S., Sobel A.E. Observations of the influence of chondroitin sulfate on the rate of bone repair// J(Jarcho M. et. al. 1977) Bone Jt Surg (Br).- 1962.- Vol 44, N 3.- P. 675-687.

57. Carreno M.R., Muniz O.E., Howell D.S. The effect of glycosaminoglycan po-lysulfuric acid ester on articular cartilage in experimental osteoarthritis: effects on morphological variables of disease severity// Rheumatol.— 1986 — Vol 13, N 3 — P. 490-497.

58. Caplan A.I., Goldberg V M. Principles of tissue engineered regeneration of skeletal tissues//Clin. Orthop.- 1999.-N 367S.-P. 12-16.

59. Chvapel M. Considerations on manufacturing principles of a synthetic burn dressing// J Biomed Mat Res.- 1982.- Vol 16.- P. 275.

60. Cook S.D., Baffes G.C., Wolfe M.W. et al. Recombinant human bone morphogenetic protein-7 induces healing in a canine long-bone segmental defect model// Clin Orthop.- 1994.-N 301.-P. 302-312.

61. Damien C.J., Parsons J.R. Bone graft and bone graft substitutes: A review of current technology and applications// J Appl Biomech- 1991- N 2.-P. 187-208.

62. Damien E., Revell P.A. Coralline hydroxyapatite bone graft substitute: A review of experimental studies and biomedical applications// J Appl Biomaterials & Biomechanics.- 2004.- Vol. 2.- P. 65-73.

63. De Balso A.M. Collagen gel in osseous defects// Oral Surg Oral Med Oral Pathol.- 1976.- Vol 42, N 5.- P. 652-659.

64. DiResta G.R., Manoso M.W., Naqvi A. et al. Bisphosphonate delivery to tubular bone allografts// Clin Orthop.- 2008, N 466 (8).- P. 1871-1879.

65. Drivdahl R.H., Howard G.A., Baylink D.J. Extracts of bone contain a potent regulator of bone formation// Biochim Biophys Acta.- 1982 N 714 - P. 26-33.

66. Duthie R.B., Barker A.N. The histochemistry of the pre-osseous stage of bone repair studied by auto-radiography// J Bone Jt Surg (Br).- 1955 Vol 37 - P. 691.

67. Ellis D.L., Yannas I.V. Recent advances in tissue synthesis in vivo by use of collagen-glycosaminoglycan copolymers// Biomaterials — 1996 Vol 17, N 3 - P. 291-299.

68. Enneking W.F., Eady J.L., Burchardt H. Autogenous cortical bone grafts in the reconstruction of segmental defects// J Bone Jt Surg (Am).- 1980 Vol 62, N 7.-P. 1039-1058.

69. Friess W. Collagen-biomaterial for drug delivery// Eur. J Pharm Biopharm.-1998.- Vol 45, N 2.- P. 113-136.

70. Gaby A.R. Natural treatments for osteoarthritis// Altern Med Rev- 1999-Vol 4, N5.-P. 330-341

71. Gao Y., Zou S., Liu X. et al. The effect of surface immobilized bisphospho-nates on the fixation of hydroxyapatite-coated titanium implants in ovariectomized rats// Biomaterials.- 2009.- Vol. 30, N9.-P. 1790-1796.

72. Garg A.K., Berg R.A., Silver F.H., Garg H.G. Effect of proteoglycans on type I collagen fibre formation// Biomaterials.- 1989.- Vol 10, N 6.- P. 413-419.

73. Glade M.J. Polysulfated glycosaminoglycan accelerates net synthesis of collagen and glycosaminoglycans by arthritic equine cartilage tissues and chondrocytes// Am J Vet Res.- 1990.- Vol 51, N 5.- P. 779-785.

74. Glimcher M.J. The nature of the mineral component of bone and the mechanism of calcification// Instr Course Lect 1987 - Vol 36 - P. 49-69.

75. Goldberg V.M. Selection of bone grafts for revision total hip arthroplasty// Clin. Orthop.- 2000,-N 381.-P. 68-76.

76. Goldstein S.A., Patil P.V., Moalli M.R. Perspectives on tissue engineering of bone// Clin. Orthop.- 1999.-N 367S.-P. 419-423.

77. Greiner S.H., Wildemann B., Back D.A. et al. Local application of zoledronic acid incorporated in a poly(D,L-lactide) coated implant accelerates fracture healing in rats// Acta Orthop.- 2008.- Vol. 79, N 5.- P. 717-725.

78. Gupta D. Bridging large defects with a xenograft composited with autologous bone marrow// Int Orthop.- 1982.- Vol 6, N 2.- P. 79-85.

79. Griffith L.G. Polymeric biomaterials// Acta Mater.- 2000,- Vol 48, N 1,- P. 263-277.

80. Hayashi T. Biodegradable polymers for biomedical uses// Prog. Polym. Sci — 1994.- Vol 19, N 4.- P. 663-702.

81. Hadhazy C., Modis L., Laszlo M.B. et al. Exogenous glycosaminoglycans modulate chondrogenesis, cyclic AMP level and cell growth in limb bud mesenchyme cultures// Tissue Cell.- 1989.- Vol 21, N 5.- P. 673-685.

82. Heinemann S., Heinemann C., Bernhardt R. et al. Bioactive silica-collagen composite xerogels modified by calcium phosphate phases with adjustable mechanical properties for bone replacement// Acta Biomaterialia 2009 - Vol 5, N 6.-P. 1979-1990.

83. Hofman S., Sidqui M., Abensur D. et al. Effect on formation of calcified bone matrix in calvariae cells culture// Biomaterials — 1999 — Vol 20, N 13 P. 11551166.

84. Horowitz M.C., Friedlaender G.E. Induction of specific T-cell responsiveness to allogeneic bone// J Bone Jt Surgery (Am).- 1991.- Vol 73, N 8.- P. 1157-1168.

85. Horowitz M.C. Cytokines and estrogen in bone: anti-osteoporotic effects// Science.- 1993.-Vol 260.-P. 626-627.

86. Jarcho M. Kay J.L., Gumaer R.H. et al. Tissue cellular and subcellular events at a bone-ceramic hydroxilapatite interface// J Bioeng.- 1977 N 1— P. 79-92.

87. Juliano R., Haskell S. Signal transduction from extracellular matrix// J Cell Biol.- 1993.-Vol. 120, N3.-P. 577-580.

88. Kalbhen D.A., Jansen G. Pharmacologic studies on the antidegenerative effect of ademetionine in experimental arthritis in animals// Arzneimittelforschung — 1990.-Vol 40, N9.-P. 1017-1021.

89. Katthagen B.D., Mittelmeeir H. Experimental animal investigation of bone regeneration with collagen-apatite// Arch Orthop Trauma Surg — 1984 — Vol 103, N5,-P. 291-302.

90. Klein C.P., Driessen A.A., de Groot K. et al. Biodégradation behavior of various calcium phosphates materials in bone tissue// J Biomaterials Res 1983 - Vol 17, N5.-P. 769-784.

91. Krekel G. The healing of autologous spongiosa and heterologous materials in the periodontal bone pocket// Int J Oral Surg 1981.- Vol 10.- P. 151 -15 5.

92. Kuijer R., van de Stadt R.J., de Koning M.H. et al. Influence of constituents of proteoglycans on type II collagen fibrillogenesis// Coll Relat Res 1985 - Vol 5, N5.-P. 379-391.

93. Lakes R.S. Composite Biomaterials// The Biomedical Engineering Handbook, ed. J.D.Bronzino, «CRC Press, Second Edition, Boca Raton, FL».- 2000 P. 598610.

94. Langer R., Vacanti J.P. Tissue engineering// Science 1993 - Vol 260, N 5110.- P. 920-926. Review.

95. Layton L.L. Effect of cortisone upon chondroitin sulfate synthesis by animal tissues// Proc. Soc. Exp. Biol. N.Y.- 1951.- Vol 76.- P. 596.

96. Le Geros R.Z., Parsons J.R., Daculsi G. et al. Significance of the porosity and physical chemistry of calcium phosphate ceramics biodegradation-bioresorption// Annals of the New York Academy of Sciences.- 1988.- Vol 523 P. 268-271.

97. Lemons M.M. Synthetic hydroxylapatite and collagen combinations for the surgical treatment of bone// Biomedical Engineering III 1984 - P. 13-16.

98. Levy P., Nevins A., La Porta R. Healing potential of surgically-induced periodontal osseous defects in animals using mineralized collagen gel xenografts// J Periodontal.- 1981.-Vol 52, N 6.-P. 303-306.

99. Madden M.R., Finkelstein J.L., Staiano-Coico L. et al. Grafting of cultured allogeneic epidermis on second- and third-degree burn wounds on 26 patients// Trauma.- 1986.-Vol 127, N .-P. 955-962.

100. Mathews M.B. Genes for VA RNA in adenovirus 2// Cell 1975 - Vol 6, N 2.-P. 223-229.

101. Mehlisch D.R. Collagen-hydroxylapatite implant for augmenting deficient alveolar ridges// Oral Surg Oral Med Oral Pathol.- 1989.- Vol 68, N 4.- P. 505-514.

102. Miller E., Gay S. Collagen structure and function in wound healing: biochemical and clinical aspects. K. Cohen (ed), Saunders, Philadelphia 1992 P. 130.

103. Moreau J.L., Weir M.D., Xu H.K. Self-setting collagen-calcium phosphate bone cement: mechanical and cellular properties// J Biomed Mater Res Am — 2009,- Vol. 91, N2.-P. 605-613.

104. Nowicka-Jankowska T. Some properties of isosbestic points// J Inorg Nuclear Chemistry.- 1971.- Vol 33, N 7. P. 2043-2050.

105. Parsons J., Ricci J., Alexander H. et al. Osteoinductive composite grouts for orthopedic use// Bioceramics: materials characteristics versus in vivo behavior. Ann. N Y Acad. Sciences.- 1988.- Vol 523. P. 190-207.

106. Pieper J.S., van Wachem P.B., van Luyn M.J.A. et al. Attachment of glyco-saminoglycans to collagenous matrices modulates the tissue response in rats// Biomaterials.- 2000.- Vol. 21, N 16.- P. 1689-1699.

107. Pritchard 1974 (Pritchard J J. General anatomy and histology of bone// The biochemistry and physiology of bone, New York, «Academic Press Inc». 1956 — P. 1-26.

108. Pruitt B., Levine N. Characteristics and uses of biologic dressings as skin substitutes// Arch Surg.- 1984.- Vol 119.- P. 312-322.

109. Reddi A.H. Implant-stimulated interface reactions during collagenous bone matrix-induced bone formation// Biomed Mater Res— 1985 Vol 19, N 3— P. 233-239.

110. Reddi A.H., Weintroub S., Muthukumaran N. Biological principles of bone induction// Orthop Clin N Amer.- 1987.- Vol 18.- P. 207-212.

111. Reddi A.H. Role of morphogenetic proteins in skeletal tissue engineering and regeneration// Nat Biotechnol.- 1998.- Vol 16, N 3.- P. 247-252.

112. Richterich R., Goldstein L., Dearborn E.H. Ammonia excretion of the guinea pig and rabbit// Am J Physiol.- 1958.- Vol 192.- P. 392-400.

113. Ripamonti U., Reddi A.H. Growth and morphogenetic factors in bone induction: role of osteogenin and related bone morphogenetic proteins in craniofacial and periodontal bone repair// Crit Rev Oral Biology Med — 1992 Vol 3— P. 1-14.

114. Sachlos E., Czernuszka J.T Making tissue engineering scaffolds work. Review: the application of solid freeform fabrication technology to the production of tissue engineering scaffolds// Europ. Cells Materials 2003-N 5 - P. 29-39.

115. Schaffrath D., Stuhlsatz H.W., Greiling H. Interactions of glycosaminogly-cans with DNA and RNA synthesizing enzymes in vitro// Hoppe Seylers Z Physiol Chem.- 1976.- Vol 357, N 4.- P. 499-508.

116. Schwarz N., Schlag G., Thuenher M. et al. Decalcified and undecalcified cancellous bone block implants do not heal diaphyseal defects in dogs// Arch Orthop Trauma Surg.- 1991.-Vol l.-P. 47-50.

117. Sechriest V.F., Miao Y.J., Niyibizi C. et al. GAG-augmented polysaccharide hydrogel: a novel biocompatible and biodegradable material to support chondro-genesis// J Biomed Mater Res.- 2000.- Vol 49, N 4.- P. 534-541.

118. Setnikar I., Cereda R., Pacini M.A., Revel L. Antireactive properties of glucosamine sulfate// Arzneimittelforschung- 1991- Vol 41, N 2 P. 157-161.

119. Spector M. Basis principls of tissue engineering in tissue engineering application in maxillofacial surgery and periodontics// S.Lynch (ed). Quintessence Publis-ingCo. Inc., 1999,-P. 3-17.

120. Summers B.N., Eisenstein S.M. Donor site pain from the ilium: a complication of lumbar spine fusion// J Bone Jt Surg (Br).- 1989.- Vol 71, N 5.- P. 677680.

121. Tajima T., Iijima K., Watanabe T. Influence of calcium concentration in the medium on the cell proliferation and glycosaminoglycan synthesis of human diploid skin fibroblasts in culture// Exp Pathol.- 1983.- Vol 23, N 2.- P. 85-93.

122. Thomson R.C., Yaszemski M.J., Powers J.M. et al. Hydroxyapatite fiber reinforced poly(a-hydroxyester) foams for bone regeneration// Biomaterials.- 1998 — Vol 19.-P. 1935-1943.

123. Uebelhart D., Thonar E.J., Delmas P.D. et al. Effects of oral chondroitin sulfate on the progression of knee osteoarthritis: a pilot study// Osteoarthritis Cartilage.- 1998.- N 6, Suppl A.- P. 39-46.

124. Urist M.R. Bone formation by autoinduction// Science 1965 - Vol 150, N 3698.-P. 893-899.

125. Urist M.R., DeLange R.J., Finerman G.A.M. Bone cell differentiation and growth factors// Science.- 1983.- Vol 220.- P. 680-686.

126. Urist M.R. Bone morphogenetic protein, bone regeneration, heterotopic ossification and the bone-bone marrow consortium// W.A. Peck (ed). Bone and Mineral Research/6, New York, Elsevier Science Publishers, 1989 P. 57-111.

127. Vacanti C.A., Pins G. Cell growth on collagen: a review of tissue engineering using scaffolds containing extracellular matrix// J Long Term Eff Med Implants-1992.-Vol 2, N l.-P. 67-80.

128. Volpi N., Petrini M., Conte A. et al. Effects of glycosaminoglycans on U-937 leukemia cell proliferation and differentiation: structure-function relationship// Exp Cell Res.- 1994.-Vol 215, N l.-P. 119-130.

129. Wang G., Yang H., Li M. et al. The use of silk fibroin/hydroxyapatite composite co-cultured with rabbit bone-marrow stromal cells in the healing of a segmental bone defect// J Bone Jt Surg. (Br).- 2010.- Vol 92, N 2.- P. 320-325.

130. Weiner S., Wagner H. D. The material bone: structure-mechanical function relations//Annu. Rev. Mater. Sci 1998-N28-P. 271-298.

131. Wen J., Li Y., Zuo Y. et al. Preparation and characterization of nano-hydroxyapatite/silicone rubber composite// Materials Letters 2008,- Vol 62, N 19.-P. 3307-3309.

132. Wendel M., Sommarin Y. Isolation and characterization of a novel cell-binding keratan sulfate proteoglycan (Osteoadgerin) from bovine bone// J Cell Biol.- 1998.- Vol 4, N 3.- P. 839-847.

133. Wrenshall L.E., Stevens R.B., Cerra F.B. et al. Modulation of macrophage and B cell function by glycosaminoglycans// J Leukoc Biol.— 1999 Vol 66, N 3-P. 391-400.

134. Yang X., Oreffo R.O.C. Bone tissue engineering// World Scientific, London «Current topics in bone biology», 2005 P. 435-460.

135. Yannas I.V., Burke J.F., Gordon P.L. et al. Design of an artificial skin. II. Control of chemical composition// J Biomed Mater Res.- 1980 Vol 14, N 2.- P. 107-132.

136. Yannas I.V. What criteria should be used for designing artificial skin replacements and how well do the current grafting materials meet these criteria?// J Trauma.- 1984.- Vol 24 (9 Suppl).- P. S29-39.

137. Zambotti V., Di Donato S., Rimoldi M. et al. Enzymatic diagnosis of glycol-ipidosis// Quad Sclavo Diagn.- 1972.- Vol 8, N 1.- P. 183-198.

138. Zou X.H., Jiang Y.Z., Zhang G.R. et al. Specific interactions between human fibroblasts and particular chondroitin sulfate molecules for wound healing// Acta Biomaterialia-2009.- Vol 5,N 5.-P. 1588-1595.