Функционально-морфологическая характеристика и экспериментальная профилактика развития модели нефропатического амилоидоза у крыс тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат медицинских наук Габуева, Алина Акимовна

• Габуева, Алина Акимовна
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Габуева, Алина Акимовна

Введение.

Глава 1. Современные взгляды на этиопатогенез, морфологию и методы коррекции амилоидоза (обзор литературы).

1.1.История изучения и современные данные о морфологических и биохимических свойствах амилоида. 11,

1.2.Классификация амилоидоза.

1.3. Клинико-морфологические формы амилоидоза.

1.4. Этиологическая характеристика и методики воспроизведения амилоидоза в эксперименте.

1.5. Методы коррекции амилоидоза.

1.6. Обоснование применения минеральной воды и янтарной кислотьг для профилактики амилоидоза. ^

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1 .Основные серии опытов.

2.2. Общие методы исследования.

2.3.Методики определения концентрации исследуемых веществ и функциональных показателей.

Глава 3. Функционально-морфологическая характеристика моделей амилоидной нефропатии, воспроизводимой при введении чужеродного белка.

3.1.Влияние длительного введения нативного яичного альбумина в дозе 0,025 мл/г на основные процессы мочеобразования и экскрецию электролитов у крыс.

3.2. Морфологические изменения в органах животных, подвергшихся длительному введению яичного альбумина.

3.3. Влияние однократного введения яичного альбумина и полного адъюванта Фрейнда в дозе 1 мл на основные процессы мочеобразования и экскрецию электролитов у крыс.

3.4. Морфологические изменения в органах животных, подвергшихся однократному введению яичного альбумина и полного адъюванта

Фрейнда.

Глава 4. Анализ протекторного и корригирующего влияния минеральной воды и янтарной кислоты при амилоидной нефропатии, моделируемой длительным введением чужеродного белка.

4.1. Влияние введения сульфидной минеральной воды в дозе 10 мл/кг массы тела животного на фоне длительного введения чужеродного белка на основные процессы мочеобразования и экскрецию, электролитов у крыс.

4.2. Морфологические изменения в органах опытных животных; подвергшихся воздействию минеральной воды на фоне длительного' введения нативного яичного альбумина.

4.3. Влияние введения янтарной кислоты в дозе 1,5 ммоль/кг массы тела животного массы тела животного на фоне длительного введения чужеродного белка на основные процессы мочеобразования и экскрецию электролитов у крыс.

4.4. Морфологические изменения в органах опытных животных, подвергшихся воздействию янтарной кислоты на фоне длительного введения* нативного яичного альбумина. ^

4.5. Влияние сочетанного введения сульфидной минеральной воды и янтарной кислоты на фоне длительного введения чужеродного белка на основные процессы мочеобразования и экскрецию электролитов у крыс.

4.6. Морфологические изменения в органах опытных животных, подвергшихся воздействию янтарной кислоты и сульфидной минеральной воды на фоне длительного введения нативного яичного 102 альбумина.

Глава 5. Анализ протекторного и корригирующего влияния минеральной воды при амилоидной нефропатии, моделируемой однократным введением чужеродного белка

5.1. Влияние введения сульфидной минеральной воды в дозе 10 мл/кг массы тела животного на фоне однократного введения яичного альбумина и полного адъюванта Фрейнда на основные процессы 108 мочеобразования и экскрецию электролитов у крыс.

5.2. Морфологические изменения в органах опытных животных, подвергшихся воздействию минеральной воды на фоне однократного введения нативного яичного альбумина с полным адъювантом

Фрейнда.

Глава 6. Обсуждение результатов исследования и

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Функционально-морфологическая характеристика и экспериментальная профилактика развития модели нефропатического амилоидоза у крыс»

Актуальность проблемы. Несмотря на более чем столетнюю историю изучения, проблема амилоидоза продолжает привлекать внимание исследователей (F.Ferrario, M.Rastaldi, 2006), что обусловлено помимо достаточно широкой распространенности тяжестью клинических проявлений со склонностью к развитию почечной недостаточности (R. Rysava, 2007).

Амилоидоз почек является одной из основных причин нефротического синдрома у взрослых (M.A.Gertz et al, 2002). Однако выявление амилоидоза и на современном уровне развития методов диагностики представляет значительные трудности (С.И.Овчаренко, Е.А.Сон, Е.А.Окишева, 2007), в частности по причине малой изученности его этиологии, что и обусловливает ту важную роль, которую отводят созданию новых моделей амилоидоза с целью изучения особенностей его патогенеза. В этом плане перспективными могут явиться экспериментальные исследования, направленные на создание моделей амилоидоза с использованием животных совмещающих в себе два качества: достаточный размер и доступность.

На сегодняшний день существует большое количество способов воспроизведения амилоидоза, большинство из которых основывается- на введении животным биологических или химических агентов раздельно и в различных их сочетаниях (D. Cui, Н. Kawano, М. Takahashi et al., 2002) с целью запуска иммуно-патобиохимичеких механизмов образования* амилоидных фибрилл (М. Garcia-Garcia, G. Mourad, М. Durfort et al., 2003). Получены модели экспериментального генерализованного амилоидоза при заражении животных возбудителями хронических инфекций (Mycobacterium butiricum), а также методом подкожного введения белым мышам нативного яичного альбумина. Положительную оценку получило моделирование экспериментального амилоидоза почек при помощи бычьей плазмы (Гиоева З.В., Брин В.Б, Козырев К.М., 2007). Есть данные о развитии амилоидоза при помощи введения свиной плазмы (Пухова И.У., Брин В.Б., Козырев К.М., 2008). При моделировании амилоидоза таким способом исследования функционального состояния различных систем затруднено ввиду малых физиологических объемов и анатомических размеров используемых экспериментальных животных. Попытки моделирования амилоидоза на крысах ранее были безуспешными ввиду особенностей иммунитена и высокой скорости обменных процессов у данного вида животных. Исключить этот аспект можно при использовании старых особей, ткани которых находятся в состоянии естественной брадитрофии. Также вызывает интерес возможность воспроизведения генерализованного амилоидоза у крыс введением нативного яичного альбумина в сочетании с полным адъювантом Фрейнда методом однократного введения амилоидогена. Необходимым в данном случае является анализ степени вовлечения почек в патологический процесс.

Положительные результаты экспериментальных исследований подтверждают возможность приостановки дальнейшего накопления амилоида в тканях и органах и даже его рассасывания. Это позволяет ставить вопрос о поиске методов и средств, действующих относительно избирательно на определенные звенья его патогенеза и направленных на. стимуляцию амилоидоклазии.

В литературе имеются данные об успешном применении сероводородных минеральных вод для лечения нефротоксического и аутоиммунного>нефрита в экспериментах на животных и в клинике, что объясняется высокой фармакологической активностью сероводорода в минеральной воде в свободном, т.е. молекулярном состоянии. Сульфидная бальнеотерапия широко рекомендована и используется для лечения заболеваний, в основе которых лежит тотальная системная дезорганизация соединительной ткани (Хетагурова З.В., Беликова И.М., 1979).

Механизм лечебного действия сульфидных вод на организм в целом сложен, многообразен и подлежит дальнейшему изучению. Доказано, что в организме сероводород, даже в очень малой концентрации, вызывает изменения различных функций организма. В результате капилляры и сосуды расширяются, кровообращение в них ускоряется, приток крови к сердцу возрастает, а отток облегчается. Это способствует рассасыванию остатков воспалительных заболеваний и ускорению восстановительных процессов (Лавров А.П., 1946).

В последние годы возникает вопрос о возможности применения антигипоксических препаратов для профилактики развития амилоидоза, в частности, по литературным данным получен положительный терапевтический эффект от применения янтарной кислоты при экспериментальном амилоидозе у хомяков (Пухова И. У., Брин В.Б. 2009). Антиоксидантное действие янтарной кислоты, представляющей собой универсальный метаболит, широко изучается в последнее десятилетие. Выполняя каталитическую функцию по отношению к циклу Кребса, янтарная кислота снижает концентрацию лактата, пирувата и цитрата, накапливающихся на ранних стадиях гипоксии. Биологическое значение феномена ускоренного окисления янтарной кислоты сукцинатдегидрогеназой заключается в быстром' ресинтезе АТФ. Янтарная кислота нормализует содержание гистамина и серотонина, повышает микроциркуляцию в органах и тканях, прежде всего в мозге; не оказывая влияния на артериальное давление и показатели работы сердца (Суслин 3. А., Румянцев С. А. М., 2005).

Исходя из описанных положительных многофакторных свойств янтарной кислоты (A.A. Хадарцев, 2003,2004; A.JI. Коваленко, А.Ю. Петров, М.Г. Романцов, 2005), в частности, ее иммуномодулирующего и цитомембраностабилизирующего действия, она получила широкое применение в медицине. Диапазон действия янтарной кислоты очень широк: она стимулирует нервную систему, применяется как противострессовое, противовоспалительное и антитоксическое средство. Используется янтарная кислота для лечения различного рода анемий, острых радикулитов, хронических сердечно-сосудистых заболеваний, не оказывая при этом побочных действий.

Можно предположить, что через механизмы своего действия, минеральная сероводородная- вода и янтарная кислота могут способствовать в определенной степени торможению отдельных звеньев амилоидогенеза, тем самым ограничивая процесс дальнейшего накопления субстрата.

В связи с этим представляется обоснованным изучение влияния на процессы амилоидогенеза и амилоидоклазии янтарной кислоты и сероводородной минеральной воды, в частности сульфидной воды Северной Осетии редантского месторождения, раздельно и в их сочетании.

Цель работы - создание моделей экспериментального нефропатического типа амилоидоза, изучение их функциональных и патогистоструктурных характеристик, анализ возможности корригирующего влияния на амилоидогенез сульфидной минеральной воды «Редант-4» отдельно и в сочетании с янтарной кислотой.

Задачи исследования. Для достижения указанной цели в работе решались следующие задачи:

1. Создать модель экспериментального генерализованного нефропатического амилоидоза' у крыс, методом длительного введения нативного яичного альбумина старым животным. Провести функциональное и морфологическое ее сопоставление с ранее созданными в лаборатории моделями амилоидоза.

2. Создать модель экспериментального нефропатического генерализованного амилоидоза у крыс, методом однократного введения нативного яичного альбумина и полного адъюванта Фрейнда. Провести функциональное и морфологическое ее сопоставление с ранее созданными в лаборатории моделями амилоидоза.

3. Изучить характер функционально-структурных изменений у животных, получавших в процессе моделирования амилоидоза минеральную воду «Редант-4».

4. Изучить характер функционально-структурных изменений у животных, получавших в процессе моделирования амилоидоза янтарную кислоту.

5. Изучить характер функционально-структурных изменений у животных, получавших в процессе моделирования амилоидоза минеральную воду «Редант-4» с янтарной кислотой.

Научная новизна. Впервые разработан метод моделирования амилоидоза путем длительного (60 дней) подкожного введения старым крысам нативного яичного альбумина в дозе 0,025 мл/г массы тела, при котором развивается системный амилоидоз с преимущественным поражением почек, сердца, печени, селезенки.

Впервые разработан метод моделирования амилоидоза путем однократного подкожного введения крысам равнодолевой смеси нативного яичного альбумина и полного адъюванта Фрейнда из расчета по 0,2 мл в пять точек инъекций, при котором развивается системный амилоидоз с преимущественным поражением почек, сердца, печени, селезенки.

Показаны особенности развития амилоидоза почек, сопровождающегося снижением основных показателей электролито-водовыделительной функции.

Показано, что применение сульфидной минеральной воды, способствует уменьшению выраженности признаков поражения почек при экспериментальном амилоидозе, приводя к частичному восстановлению электролите- и водовыделительной функции и снижению уровня- протеинурии. Использование минеральной воды уменьшает выраженность патогистологических изменений в тканях внутренних органов (почки, сердце, печень, селезенка).

Установлено, что применение сульфидной минеральной воды, отдельно и в сочетании с янтарной кислотой уменьшает изменения водовыделительной и ионовыделительной функции почек, вследствие ослабления выраженности изменений канальцевой реабсорбции воды, значительно снижает степень протеинурии. Показано, что применение сульфидной минеральной воды и янтарной кислоты уменьшает выраженность структурных повреждений тканей почек, сердца, печени и селезенки, вызванных введением равнодолевой смеси нативного яичного альбумина и полного адъюванта Фрейнда.

По теме диссертационной работы, на основании результатов исследования получены 3 патента на изобретение Федерального института промышленной собственности от 20 ноября 2009 г под № 2373581; №2410764 от 27.01.2009г.; № 2410761 от 27.01.2011г.

Научно-практическая значимость работы. Исследование носит экспериментальный характер и полученные результаты, демонстрирующие эффекты длительного введения старым крысам нативного яичного альбумина, а также однократного подкожного введения старым крысам равнодолевой смеси нативного яичного альбумина и полного адъюванта Фрейнда, сопровождающиеся развитием амилоидоза почек, относятся к области фундаментальных знаний, так как расширяют представления о возможностях моделирования амилоидоза почек, вносят определенный вклад в теорию этиологии и патогенеза амилоидоза. Выявленные эффекты применения сульфидной минеральной воды «Редант-4» и янтарной кислоты, демонстрируют возможность их лечебного и профилактического применения с целью нормализующего влияния на измененное состояние электролито-водовыделительной функции почек при экспериментальном амилоидозе.

Результаты исследования могут быть использованы при преподавании патофизиологических и гистоструктурных основ стромально-сосудистых диспротеинозов, при разработке способов профилактики и лечения амилоидоза в клинике.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Длительное (60 дней) подкожное введение старым крысам нативного яичного альбумина в дозе 0,025 мл/г массы тела приводит к развитию системного амилоидоза с преимущественным поражением почек, сердца, печени, селезенки.

2. Однократное введение старым крысам равнодолевой смеси нативного яичного альбумина и полного адъюванта Фрейнда из расчета по 0,2 мл в 5 точек инъекций приводит к развитию системного амилоидоза с преимущественным поражением почек, сердца, печени, селезенки.

3. Формирование экспериментального амилоидоза сопровождается протеинурией, изменением показателей электролито- и водовыделительной функции почек.

4. Применение сульфидной минеральной воды одновременно с нативным яичным альбумином способствует уменьшению выраженности признаков поражения почек, приводя к частичному восстановлению электролито- и водовыделительной функции и снижению уровня протеинурии.

5. Применение сульфидной минеральной воды одновременно с равнодолевой смесью нативного яичного альбумина и полного* адъюванта Фрейнда уменьшает изменения водовыделительной и ионовыделительной функции почек, вследствие ослабления выраженности; изменений канальцевой реабсорбции воды. Показано, что применение минеральной воды, значительно уменьшает степень протеинурии.

6. Применение сульфидной минеральной воды в сочетании: с янтарной, кислотой одновременно, с нативным яичным альбумином способствует более выраженному уменьшению признаков поражения почек, приводя? к частичному восстановлению электролито- и водовыделительной функции и< снижению уровня протеинурии.

Апробация диссертационной работы.

1 Материалы исследований доложены и обсуждались на 10-й Юбилейной научной сессии, посвященной 70-летию СОГМА. ГОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия Росздрава» (Владикавказ, 2009).

2 IX Конференции молодых ученых СОГМА (Владикавказ, 2010);

3 X Конференции молодых ученых и специалистов СОГМА (Владикавказ, 2011).

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Габуева, Алина Акимовна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

За последние два десятилетия существенно изменились многие представления, касающиеся проблемы амилоидоза, что прежде всего относится к установлению механизмов развития отдельных форм амилоидоза, и получению возможности обосновать дифференцированные подходы к лечению (Я.А.Ку1е, М.А.СеНг, 1997).

Амилоид накапливается в органах и тканях в больших количествах, что приводит к атрофии, склерозу и функциональной недостаточности органов. Клинические проявления амилоидоза разнообразны и зависят от локализации амилоидных отложений, степени их распространенности в органах, наличия сопутствующих осложнений. Особенно1 развернутой клиническая картина становиться при поражении почек - наиболее частой локализации амилоида. Хотя в последние годы в. качестве причины смерти-при амилоидозе все чаще описывается недостаточность различных жизненно важных органов, особенно сердечная, все же, несомненно, что наиболее типична при этой болезни смерть от уремии. Вот почему поражение почек при амилоидозе по-прежнему представляет преимущественный интерес.

Постепенное распространение амилоидных отложений и все большее вовлечение в процесс сосудистой стенки обусловливают развитие ведущих симптомов амилоидоза почек - нарастание и развитие протеинурии, постепенного снижения кровотока, уменьшения клубочковой фильтрации и появления азотемии, нередко нефрогенной гипертонии.

В связи с тем, что патогенез и лечение амилоидоза не до конца изучены, следует считать актуальным как в фундаментальном, так и в прикладном плане поиск эффективных способов профилактики и коррекции нефропатического типа генерализованного амилоидоза, что объясняет целесообразность изучения препаратов янтарная кислота и минеральная вода «Редант-4».

Целью настоящего исследования было моделирование нефропатического типа генерализованного амилоидоза и изучение профилактического влияния фармакологических препаратов янтарная кислота и сульфидная минеральная вода «Редант-4» раздельно и в их сочетании на изменение водо- и электролитовыделительной функции почек при амилоидной нефропатии.

Опыты проводились на крысах-самцах массой 330-380 гр, отбирались старые особи (возраст 18-24 месяца) с целью исключения влияния на процесс моделирование особенностей обменных процессов данного вида животных. Амилоидную нефропатию вызывали путем подкожного введения нативного яичного альбумина в дозе 0,025 мл/г массы тела животного, (через день)' на протяжении 2-х месяцев, а также методом однократных инъекций равнодолевой смеси нативного яичного альбумина и полного адъюванта Фрейда в дозе по 0,2 мл в« пять, точек инъекций (подкожно в,подмышечные и паховые области слева и справа и внутрибрюшинно). Сульфидную минеральную воду «Редант-4» в дозе 10 мл/кг массы тела животного вводили ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение 2-х месяцев. Янтарную кислоту вводили энтерально через день в дозе 1,5 ммоль/кг массы тела на протяжении 2-х месяцев. Через 1 и 2 месяца проводили изучение водо- и элетролитовыделительной функции почек в условиях спонтанного шестичасового диуреза.

При исследовании функционального состояния почек у животных при моделировании амилоидоза методом как длительного подкожного введения нативного яичного альбумина в дозе 0,025 мл/г массы тела, так и однократного введения его в смеси с адъювантом Фрейнда в дозе 1 мл, выявлялось достоверное снижение диуреза вследствие снижения скорости клубочковой фильтрации воды.

При изучении ионовыделительной функции почек выявлялось достоверное снижение экскреции натрия во все сроки эксперимента, относительно интактных животных. Уменьшение экскреции катиона было обусловлено снижением его фильтрационного заряда, при этом снижалась и канальцевая реабсорбция катиона. Концентрация натрия в плазме крови повышалась, по сравнению с данными интактного контроля.

Амилоидная нефропатия сопровождалась повышением экскреции калия. Рост катиона, вероятно, был обусловлен повышением канальцевой секреции калия в условиях гиперкалиемии.

Экскреция кальция с мочой при подкожном введении амилоидогена была достоверно выше контрольных данных. Увеличение экскреции кальция было связано со снижением канальцевой реабсорбции катиона, при этом фильтрационный заряд кальция снижался. Уменьшение фильтрационного заряда было обусловлено снижением скорости клубочковой фильтрации воды и уменьшения содержания кальция в плазме крови.

Экскреция белка с мочой на фоне введения амилоидогена увеличилась почти в 3 раза, по сравнению с данными контрольной группы животных.

Прежде чем приступить к анализу данных, полученных при изучении влияния минеральной воды «Редант-4» на функции почек у крыс при амилоидной нефропатии, отметим некоторые особенности, выявленные нами в результате проведения контрольных исследований у животных с изолированным введением названной минеральной воды.

Результаты 2-х месячного введения воды «Редант-4» в дозе 10 мл/кг массы тела у интактных животных показали, что длительное её применение вызывает достоверный рост диуреза за счет увеличения скорости клубочковой фильтрации при имеющейся тенденции к росту канальцевой реабсорбции. При изучении ионовыделительной функции почек отмечался достоверный рост натриуреза, тенденция к увеличению экскреция калия и кальция. Содержание электролитов и степень протеинурии достоверно от интактного контроля не отличались.

Применение минеральной воды на фоне введения нативного яичного альбумина препятствовало изменениям диуреза. Профилактические эффекты воды «Редант-4» были обусловлены увеличением канальцевой реабсорбции воды и скорости клубочковой фильтрации, по сравнению с амилоидной группой животных.

Исследования показали, что применение минеральной воды «Редант-4» на фоне эффектов амилоидогена во всех группах опытных животных, оказывало существенное влияние на обмен и показатели почечной обработки натрия, калия и кальция, нивелирует изменения ионовыделительной функции почек у крыс при амилоидной нефропатии. Применение минеральной воды значительно уменьшало степень протеинурии.

Таким образом, проведенные исследования позволяют предложить следующую- схему механизмов профилактирующего действия сульфидной минеральной воды (рис. 6.1.). В результате введения минеральной, воды в желудок, через зонд ежедневно в дозе 10 мл/кг одновременно с воспроизведением, модели амилоидоза проявляются эффекты сульфидных минеральных вод, известные из литературы в виде способности улучшать обменные процессы в клетке, кровоснабжение и иннервацию органов, повышать потребление кислорода * тканями; усиливать регенераторные процессы, активизировать ферментные системы, микроциркуляцию, подтверждает их противовоспалительный и диуретический эффект (Маныпина Н.В, 2007; Хетагурова З.В., Амбалова С.А., 1983). Этим объясняется их положительное влияние на изменения водо- и электротлито выделительную функции почек, полученное в ходе эксперимента (увеличение относительной канальцевой реабсорбции и скорости клубочковой фильтрации, частичное восстановление изменений ионовыделительной функции почек, уменьшение степени протеинурии) (рис. 6.1.).

Профилактическое применение сульфидной^4 4 минеральной воды при моделировании нефропатического типа амилоидоза

Улучшение обменных процессов в клетке, улучшени кровоснабжения и иннерва я

Повышение энергоресурсов клетки, непосредственное включение ЭН-групп в биохимические реакции, активизация ферментных систем V к I I

Снижение гиперемии, отека в печени, сердце, селезенке

Повышение потребления кислорода тканями, усиление регенераторных процессов

Уменьшение отложения амилоида в почках

Ослабление нарушения у,,,,.,. микроциркуляции

I . . — мшшшшж

КШШ

1,

Восстановление скорости клубочковой льтрации и канальцевой реабсорбции воды

ШИИдИнШи Г н

Снижение протеинурии I I

Рис.6.1 Влияние сульфидной минеральной воды Р-4 на повреждающее действие нативного яичного альбумина при нефропати ческом типе амилоидоза

Контрольные исследования у животных с введением янтарной кислоты в дозе 1,5 ммоль/кг массы тела интактным животным достоверно не изменяло показатели водовыделительной функции почек, ионоосмотических показателей плазмы крови, выявлялась лишь тенденция к увеличению экскреции электролитов по сравнению с интактным контролем: Профилактическое применение янтарной кислоты на фоне введения нативного яичного альбумина вызывало повышение уровня спонтанного диуреза, вследствие повышения скорости клубочковой фильтрации воды относительно амилоидной группы животных группы животных, но данные все же были ниже результатов интактных животных. Внутрижелудочное введение янтарной кислоты на фоне применения амилоидогена способствует уменьшению выраженности изменений экскреции электролитов, вследствие уменьшения выраженности изменений канальцевой реабсорбции катионов.

При изучении электролитовыделительной функции, почек выявлялось увеличение экскреции кальция и натрия, что было обусловлено ростом фильтрационного заряда катионов, несмотря на то что при этом происходило и увеличение их канальцевой реабсорбции Экскреция- белка с мочой по сравнению с данными амилоидной группы снизилась вдвое.

Таким образом, полученные результаты подтверждают сведения о значительном диуретическом эффекте янтарной кислоты, которые проявляются в условиях патологии (В.И.Малюк, A.A. Цыганий, З.Г.Овруцкая, 1976), а также положительный терапевтический эффект от применения янтарной кислоты при экспериментальном амилоидозе у хомяков (Пухова И. У., Брин В.Б. 2009). Модифицирующее влияние янтарной кислоты на процессы тканевого метаболизма - клеточное дыхание, ионный транспорт, синтез белков (Хадарцев A.A., 2003,2004; Коваленко A.JL, Петров А.Ю.,„ 2005) могли способствовать уменьшению признаков нефропатии в эксперименте, приводя к частичному восстановлению электролито- и водовыделительной функции и снижению уровня протеинурии (рис.6.2)

Профилактическое применение янтарной кислоты при моделировании нефропатического типа амилоидоза

Улучшение тканевого дыхания, увеличение потребления кислорода

Ч1заа^у» л1!й? Я - У

Снижение концентрации лактата, улучшение энергообеспечения клетки, усиление ^ транспорта электронов в

Активация ферментных и транспортных С£СТ£М ■-.- .^

Снижение конгофилии, гиперемии, отека в печени сердце, селезеике

Уменьшение отложения амилоида в почках п

Ослабление нарушения микроцир

Восстановление скорости кпубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции воды

ЩНМнНЙВнННМЙНН

Снижение

Рис.6.2 Влияние янтарной кислоты на повреждающее действие нативного яичного альбумина при нефропатическом типе амилоидоза

Сочетанное применение минеральной воды и янтарной кислоты на фоне введения нативного яичного альбумина оказывало более выраженный терапевтический эффект на процессы мочеобразования при моделировании экспериментального амилоидоза, чем раздельное применение названных препаратов, за счет более полного восстановления канальцевой реабсорбции и клубочковой фильтрации. В частности, было отмечено более выраженное корригирующее влияние сочетанного применения янтарной кислоты и минеральной воды на канальцевую реабсорбцию по сравнению с введением на фоне амилоидогена только янтарной кислоты, и на скорость клубочковой фильтрации - по сравнению с профилактическим применением только минеральной воды.

Отмечено более выраженное корригирующее влияние на нарушение экскреции с мочой натрия, по сравнению с изолированным применением на фоне яичного альбумина минеральной воды или янтарной кислоты. На нарушение почечной обработки и экскреции с мочой' калия сульфидная минеральная вода и янтарная- кислота оказывают незначительный профилактирующий эффект, выраженный в одинаковой степени при раздельном или сочетанном применении названных препаратов. Сочетанный профилактический прием названных препаратов нивелировал нарушения экскреции с мочой кальция, в той же степени, что и введение на фоне амилоидогена только минеральной воды.

Прогрессивное уменьшение степени протеинурии, развивавшейся в ходе моделирования амилоидоза, максимально проявлялось при сочетанном приеме препаратов, в меньшей степени - при изолированном введении на фоне амилоидогена минеральной воды и/или янтарной кислоты

Гистологическое исследование почек крыс при моделировании амилоидной нефропатии выявило макроскопически увеличение органа в объеме, на разрезе корковый и мозговой слои были полнокровны, граница между ними сглажена. Микроскопически при окраске гематоксилином и эозином и конго красным наблюдались явления мукоидного и фибриноидного набухания стромально-сосудистых структур, фибриноидного некроза и отложением конгофильных структур (фибриллярных белков амилоида). При окраске срезов амилоидной группы животных конго-красным в стенках клубочковых артериол и капилляров, а также в средней оболочке сосудов артериального типа, в базальной мембране чашечно-лоханочной и канальцевой системе почек выявлялись гомогенные амилоидположительные структуры, амилоидный характер которых подтверждался зеленоватым свечением с двойным лучепреломлением при поляризационной микроскопии. Все описанные изменения коррелировали с продолжительностью эксперимента.

При введении амилоидогена очаговые отложения амилоида наблюдались и в других органах: в миокарде, в стенках сосудов, в печени, в селезенке.

Энтеральное введение минеральной воды «Редант-4» в дозе 10-мг/кг массы тела животного каждый день в течение 2-х месяцев способствовало уменьшению выраженности изменений в-, исследуемых органах, и тканях. Микроскопически в корковом и мозговом слоях отмечалось некоторое снижение гиперемии, отека и плазматического- пропитывания стенок кортикальных и медуллярных сосудов. Контуры отдельных клубочков хотя и определялись не четко, но с видимыми просветами клубочковых капсул, в которых определялся серозный экссудат с рыхлыми белковыми массами.

Если в динамике микроскопических исследований у амилоидных животных выявлялась ярко выраженная конгофилия фиброзной капсулы почки, то у леченых животных этот феномен был менее выражении.

Отмечалось снижение гиперемии, плазматического пропитывания, отека и снижением конгофильной активности в сосудисто-стромальных элементах миокарда, печени, селезенки.

Микроскопическое подтверждение положительного влияния янтарной кислоты при экспериментальном амилоидозе почек корреллировало с результатами функциональных исследований. При введении животным яичного альбумина и янтарной кислоты в течение 60 дней в почках отмечалось снижение признаков конгофилии в сосудистых клубочках и базальной мембране их капсул. Уменьшились конгофилия, гиперемия, плазматическое пропитывание и отек в интерстиции. Кроме того, несколько снизилось содержание конгофильного белка в эпителии проксимальных и дистальных канальцев, а также в их просветах.

Внутрижелудочное введение янтарной кислоты в сочетании с минеральной водой «Редант-4»через день в течение 2-х месяцев вызывало у животных с моделью амилоидоза значительные морфологические изменения тканей внутренних органов экспериментальных животных. В почках происходило снижение признаков конгофилии базальной мембраны клубочков Боумена-Шумлянского и капиллярных петель сосудистого клубочка. В миокарде отмечалось уменьшение накопления амилоидпоплоительных структур в кардиомиоцитах и межуточном веществе. Происходила репарация структуры печени и регенераторная гиперплазия ретикуло-макрафагальной системы белой пульпы в селезенке.

Количество очагов слущивания эндотелия резко снижалось в отличие от модели амилоидоза. Контуры большинства клубочков определялись четко, с хорошо видимыми просветами клубочковых капсул. В просвете отдельных капсул Шумлянского-Боумена выявлялся серозный экссудат. Уменьшается гиперемия, плазматическое пропитывание и отек интерстиция внутренних органов.