Фармакокинетика антгельминтика гексахлорпараксилола в организме животных при даче его в лекарственных формах - гексихол и гексихол 1 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.20, кандидат биологических наук Савченко, Надежда Николаевна

• Савченко, Надежда Николаевна
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Савченко, Надежда Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Эффективность гексахлорпараксилола при гель-минтозах животных. II

2. Механизм действия гексахлорпараксилола на гельминтов

3. Фармакология гексахлорпараксилола

4. Токсикология гексахлорпараксилола

5. Краткая характеристика методов, применяемых для определения остаточных количеств антгельминти

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА I. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕКСАХЛОРПАРАКСИЛОЛА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ.

1. Разработка методики определения гексахлорпараксилола в молоке, органах и тканях животных методом тонкослойной хроматографии

2. Разработка методики определения гексахлорпараксилола на основе газожидкостной хроматографии

3. Разработка методики определения гексахлорпараксилола в кормо-лекарственных смесях

4. Изыскание метода дифференциации гексахлорпараксилола от сопутствующих пестицидов.

ГЛАВА П. ФАРМАКОКИНЕТИКА ГЕКСАХЛОРПАРАКСИЛОЛА В

ОРГАНИЗМЕ ЖИВОТНЫХ

1. Всасывание, распределение и выделение гексахлорпараксилола при даче гексихола а) опыт на кроликах б) опыт на овцах

2. Динамика выведения гексахлорпараксилола с молоком при даче гексихола

3. Динамика выведения гексахлорпараксилола с молоком при применении гексихола с солью

4. Изучение проникновения гексахлорпараксилола в плаценту и плод при даче гексихола

5. Всасывание и динамика выведения гексахлорпараксилола при даче гексихола I

6. Изучение накопления гексихола I в фасциолах

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакокинетика антгельминтика гексахлорпараксилола в организме животных при даче его в лекарственных формах - гексихол и гексихол 1»

Актуальность работы. Постановлениями партии и правительства предусмотрена широкая программа охраны окружающей среды, включающая разработку мероприятий по предотвращению неблагоприятного воздействия различных факторов окружающей среды на здоровье человека и животных.

Продукты питания являются составной частью среды, окружающей человека и поэтому чистота этой среды - необходимая предпосылка чистоты внутренней среды организма.

Поиски новых источников и резервов питания, совершенствование сельскохозяйственного производства- пораждают поток неизвестных ранее веществ - гербицидов, инсектицидов, стимуляторов роста, лекарственных препаратов, в частности, антгельминтжов. Это создает опасность загрязнения окружающей среды биологически активными веществами и в конечном итоге возникает угроза для здоровья человека. Поэтому установлению степени потенциальной опасности для человека различных ксенобиотиков привлечено внимание ученых всего мира, о чем свидетельствуют обширные материалы ФА0/В03.

Знание фармакокинетики лекарственных средств в организме животных дает возможность использовать человеком безвредных продуктов питания, так как на основании остаточных количеств в молоке, мясе устанавливается максимально допустимый уровень содержания их в этих продуктах, что позволяет решать вопрос о реализации продуктов животноводства.

Принимая во внимание ущерб, наносимый животноводству гельминтоз ами и, как следствие, все более увеличивающееся применение для дегельминтизации животных различных антгельминтжов, становится очевидным, что проблема охраны продуктов питания от загрязнения

- 5 антгельминтжами является актуальной.

Для борьбы с фасциолезом применяется гексихол - лекарственная форма гексахлорпараксилола (1,4-бис-трихлорметилбензол), на стадии изучения находится новая лекарственная форма - гексихол I.

Вопросы всасывания и выведения гексахлорпараксилола ранее изучались на лабораторных животных - Лебедевой М.Н., Крыловой А.С. (1968Д970), Веселовой Т.П. (1970), Chung Huei-lan et al. (1965); John Liu, Wang Chi-non et al. (1965); Yokogawa M., Kayama H., Furusawa A. (1968). Но в этих работах отсутствуют данные по остаточным количествам в продуктах питания - мясе, молоке. Причем указанные авторы в своих исследованиях использовали недостаточно чувствительные методы анализа. Кроме того, новые лекарственные формы гексахлорпараксилола - гексихол и гексихол I, могли быть фармако-кинетически неэквивалентны, так как это зависит от состава и свойств компонентов лекарственной формы. Получение же новых лекарственных форм гексахлорпараксилола как раз и преследовало цель увеличения антигельминтной активности путем улучшения всасывания в результате микронизации частиц, добавления ПАВ и других компонентов.

Все это затрудняло решение вопроса о реализации молока, мяса от дегельминтизированных гексихолом или гексихолом I животных, а также и вопроса о наличии антгельминтика в продуктах питания.

Разработка кормолекарственных смесей с гексихолом для дегельминтизации животных и приготовление их на установке УКС-I (ВИГИС ) требовало методики для контроля за качеством этой смеси по содержанию в ней антгельминтика.

Цель и задачи работы. Целью нашей работы являлось изучение фармакокинетики лекарственных форм гексахлорпараксилола (гексихол, гексихол I ) используя современные высокочувствительные методы анализа.

В задачу наших исследований входило:

- разработать методику определения гексахлорпараксилола в биосубстратах на основе тонкослойной и газожидкостной хроматографии;

- используя разработанную методику, изучить всасывание, распределение и выведение гексахлорпараксилола у животных при даче им гексихола и гексихола I;

- изучить возможность проникновения гексахлорпараксилола через плаценту в плод при введении животным гексихола;

- изучить динамику выведения гексахлорпараксилола с молоком при разных способах дачи препарата;

- разработать методику определения гексахлорпараксилола в кормолекарственных смесях;

- изыскать способ дифференциации гексахлорпараксилола от сопутствующих пестицидов;

- изучить динамику накопления гексихола I в теле Р.Ьера^са.

Научная новизна. Впервые наиболее полно изучена фармакокине-тика гексахлорпараксилола в организме трех видов животных (крысы, кролики, овцы) после введения игл гексихола, а также динамика выведения антгельминтика с молоком из организма коров при разных способах дачи препарата с использованием высокочувствительного метода газожидкостной хроматографии.

Впервые изучены основные закономерности всасывания, распределения и выведения новой лекарственной формы - гексихола I.

Разработана методика определения гексахлорпараксилола в органах, тканях, молоке животных и кормолекарственных смесях на основе тонкослойной хроматографии.

В; результате использовании разработанной наш методики на основе газожидкостной хроматографии впервые изучена динамика накопления гексихола I в теле фаециол.

Практическая ценность. Полученные в результате исследований данные по остаточным количествам гексахлорпараксилола явились основой для установления максимально допустимого уровня (МДУ) ант-гельминтика в продуктах питания.

Даны теоретические предпосылки для применения новой лекарственной формы - гексихола I в уменьшенных дозах, по сравнению с гек-сихолом, и против молодых форм фаециол, как препарат, обладающий большей биологической доступностью.

На основе методов газожидкостной и тонкослойной хроматографии нами разработаны методики определения гексахлорпараксилола в органах, тканях, молоке животных и кормолекарственных смесях и широко внедрены в ветеринарную практику:

- по методикам с использованием тонкослойной хроматографии (утверждены ИВ МСХ СССР 16.06.1980г., диплом ВДНХ 1982г.) проведены практические занятия с токсикологами краевых, республиканских, областных лабораторий во время прохождения Всесоюзного семинара токсикологов (г.Алма-Ата,1980г.) и демонстрация на Всесоюзном семинаре по технологии црименения кормолекарственных смесей (г.Москва,ВДНХ,1983г.). Указанные методики вошли в "Методические рекомендации по проведению исследований в гельминтологии" (Отделение ветеринарии ВАСХНИЕ,1983г., с.77-81);

- методика с использованием газожидкостной хроматографии была показана на Ш Всесоюзном совещании по анализу остатков пестицидов (г.Москва,1979г.).

Кроме того, разработанные нами методики используются в Университете Дружбы народов им.П.Лумумбы (медицинский факультет, кафедра фармакологии) при изыскании лекарственных форм хлоксила синоним гексахлорпараксилола) для применения человеку.

Все практические предложения, вытекающие из проведенных исследований, необходимы для дальнейшего широкого применения гекси-хола, а также успешного внедрения в ветеринарную практику новой более эффективной лекарственной формы - гексихола I.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Одной из главных задач в настоящее время является обеспечение населения полноценными пищевыми продуктами. Для решения этой задачи необходимо обеспечить успешное выращивание и полное сохранение высокопродуктивных животных. Однако это осуществимо лишь при условии успешной ликвидации целого ряда широко распространенных заболеваний сельскохозяйственных животных, в частности, гельминтозов, среди которых немаловажную роль играют фасциолез, вызываемый гельминтами F.hepatica, F.gigantica, Дикроцелиоз - Dicrocoelium lanceatum и описторхоз - Opistorchis felineus. Данные заболевания причиняют огромный экономический ущерб народному хозяйству снижением всех видов продуктивности. Как отмечает Сазанов A.M. (1961,1962) в местностях с интенсивным распространением фасциоле-за, при интенсивности инвазии равной 90$, бракуется полностью 22% печеней крупного рогатого скота и 68% - частично, при этом 68% от общего веса печеней идет в техническую утилизацию. Фасциолез при субклиническом течении вызывает снижение молочной продуктивности коров, на 7,5% в среднем снижает мясную продуктивность. Наиболее сильное патогенное влияние фасциол наблюдается при острой форме заболевания, когда возникают глубокие и труднообратимые патологические изменения, которые остаются и после лечения, поэтому упитанность и качество мяса долго не восстанавливается. Общий годовой ущерб, причиняемый народному хозяйству СССР фасциолезом у крупного рогатого скота, составляет свыше 707 млн.руб. (Сазанов A.M.,1962).

Архиповым И.А. (1976) в опытах на овцах было установлено,что у животных, зараженных фасциолами, убойный выход мяса на 2,9% ниже, чем у здоровых животных такого же возраста и упитанности.

Коэффициент ущерба при подострой форме фасциолеза овец составляет 11,57 руб., в том числе от недополучения шерсти - 6,71 руб., привесов - 2,16 руб., приплода - 1,92 руб., печени - 0,58 руб., от снижения качества овчин - 0,2 руб. Кроме того, мясо больных фас-циолезом овец более водянистое и менее питательное.

Основной мерой борьбы с данными гельминтозами является дегельминтизация животных. Распространенность фасциолеза и других гельминтозов требует от антгельминтиков помимо высокой эффективности, еще и малой токсичности, так как это дает возможность проводить дегельминтизацию наиболее экономичным групповым методом. Всеми этими свойствами обладает гексихол, который в настоящее время широко применяется в ветеринарной практике для борьбы с фасциоле-зом и дикроцелиозом крупного и мелкого рогатого скота, а также описторхозом пушных зверей (песцов и лисиц).

Гексахлорпараксилол (под названием хлоксил) также применяется и в медицинской практике при описторхозе и фасциолезе человека.

Гексахлорпараксилол был ресинтезирован в СССР в Государственном Союзном научно-исследовательском институте хлорной промышленности в 1962 году по типу гетола, выпускаемого в ФРГ фирмой "Hoechst" и представляющего собой суспензию, в состав которых входит 85% 1,4-бис-трихлорметилбензола и 15% эмульгатора. Фирма рекомендует применять данный препарат индивидуально, что для нашей страны с высокоразвитым животноводством является не всегда приемлемым.

Высокая антгельминтная активность гексахлорпараксилола была установлена Веселовой Т.П.,Дорошиной М.В.,Воробьевым М.А. (1963, 1965); Веселовой Т.П.,Дорошиной M.B. (1966); Фетисовым В.И. (1966, 1969); Веселовой Т.П. (1968). Малая токсичность препарата позволяли применять его групповым методом. Но недостатком являлось то, что он быстро слеживался. Поэтому была продолжена работа по улучшению препарата. В результате в 1973 г. была предложена лекарственная форма - гексихол (Веселова Т.П.,Доронина М.В.,Требухин М.В.,1973; Требухин М.В.,1974).

Гексихол (синонимы: гетол, АТ-Ф-801, хлоксил) - мельчайший порошок белого цвета с добавлением 0,1$ поверхностно-активного ве щества, предотвращающего слеживаемость. Препарат обладает слабым медикаментозным запахом, нерастворим в воде, но хорошо растворяется в органических растворителях (ацетон, гексан), температура плавления П0-111°С, молекулярный вес 312,87. В химическом отношении представляет собой 1,4-бис-трихлорметилбензол.

Получение гексихола позволило снизить терапевтическую дозу, что дало большой экономический эффект (6 млн.в год при ежегодном объеме выпуска в среднем 600 т). Крупному рогатому скоту гексихол назначается в дозе 0,3 г/кг, мелкому рогатому скоту - 0,2 г/кг.

Многочисленные работы различных авторов свидетельствуют о высокой терапевтической эффективности гексахлорпараксилола и гексихола при ряде гельминтозов животных и человека.

I. Эффективность гексахлорпараксилола при гельминтозах животных

Фасциолез

Структурная формула

Эмпирическая формула

В опыте, при учете эффективности методом гельминтологического вскрытия 663 и трехкратной копрологии 699 голов крупного рогатого скота, спонтанно инвазированного фасциолами, установлено,что гексахлорпараксилол абладает выраженной терапевтической эффективностью при фасциолезе крупного рогатого скота. Наиболее выраженный терапевтический эффект (94,5-100$) получен у молодняка при даче препарата в дозах 0,4-0,5 г/кг однократно; у коров старшего возраста 100$ ЭЭ получена при двукратной даче антгельминтика с промежутком между дачами один месяц (Веселова Т.П.,Воробьев М.А., Дорошина,1964; Веселова Т.П.,Дорошина М.В.,1966; Веселова Т.П., 1967).

При дегельминтизации около 1,5 тыс.крупного рогатого скота в хозяйствах, неблагополучных по фасциолезу, получен лучший (92,0100$) терапевтический эффект у молодняка при однократном скармливании им гексахлорпараксилола в дозе 0,5 г/кг, а у взрослых животных 100$ ЭЭ была получена при двукратном введении препарата в дозе 0,5 г/кг с промежутком между дачами 10 суток (Веселова Т.П., Дорошина М.В.,1966; Веселова Т.П.,Дорошина М.В.Долиев М.Ф. и др.,1968).

Кроме того, цри фасциолезе у коров старшего возраста наблюдается снижение терапевтической эффективности гексахлорпараксилола, что объясняется сильной петрификацией желчных ходов печени, препятствующей проникновению препарата в их полость и, следовательно, паразитирующие в них фасциолы находятся как-бы в недоступном месте для действия на них препарата.

В эксперименте на овцах и козах (свыше I тыс.голов), спонтанно инвазированннх фасциолами установлена высокая терапевтическая эффективность гексахлорпараксилола: при индивидуальном введении и групповом вольном скармливании в дозе 0,4 г/кг однократно препарат обеспечивает 100$ ЭЭ (Веселова Т.П.Воробьев М.А., Дорошина М.В.,1964; Веселова Т.П.,Дорошина М.В.Воробьев М.А.,

- 13

1965; Веселова Т.П.,1968).

В условиях производственного опыта, проведенного на большом поголовье мелкого рогатого скота (свыше 20 тыс.), получен высокий терапевтический эффект 83,3-100$ при однократной и 100$ при двукратной даче препарата (Веселова Т.П.,1967; Шеремета Д.М.,1970).

Высокую эффективность показал гексахлорпараксилол при лечении буйволят, зараженных фасциолезом (Ханкишиев A.M.,1974).

Каболоев А.Д. (1968) рекомендует гексахлорпараксилол как высокоэффективный антгельминтик при фасциолезе свиней в дозе 0,5 г/кг с кормом.

При изучении терапевтической эффективности гексихола на овцах и крупном рогатом скоте, спонтанно инвазированных фасциолами, 100$ эффективность была получена при дозе 0,2 г/кг мелкому рогатому скоту и 0,3 г/кг - крупному рогатому скоту.

Высокая терапевтическая эффективность гексихола, но при дозе в два раза ниже, чем у гексахлорпараксилола (гексахлорпараксилол применяли в дозе крупному рогатому скоту - 0,5 г/кг, мелкому рогатому скоту - 0,4 г/кг) объясняется тем, что он более мелкий, это повысило всасываемость препарата, чему способствовало также и добавление поверхностно-активного вещества.

И.А.Архипов, Т.П.Веселова (1976а,б), изучая экономическую эффективность применения антгельминтиков при подострой и хронической формах фасциолеза, указывают, что наиболее целесообразно и экономически выгодно применять именно гексихол. Так, при подост-ром течении фасциолеза гексихол дает наибольший экономический эффект: окупаемость дегельминтизавдонных мероприятий равна 185,33 руб.

В медицинской практике гексахлорпараксилол (хлоксил) успешно применяется при фасциолезе человека (Плотников Н.Н.,Карнаухов В.К.,

Зальнова Н.С. и др.,1965; Алексеева М.И.,Карзин В.В.»Карнаухов В.К. и др.Д970; Камардинов Х.К.Д974; Chung Huei-lan, Wu-Hsüen--tsung, K'uang Ghi-hurig and oth., 1965).

Диктзоцелиоз

Гексахлорпараксилол - первый антгельминтик, показавший высокую терапевтическую эффективность при дикроцелиозе животных. Впервые гексахлорпараксилол как дикроцелиоцидный антгельминтик был изучен и предложен в ветеринарную практику (Фетисов В.И. Д964а,б; Фетисов В.И. ,Урумова В.Д. ,Кармоков Д.В.Д969; Фетисов В.И., Хами-зов Х.Х.,Урумова В.Д. Д970).

В работах различных авторов отмечается высокая эффективность гексахлорпараксилола при дикроцелиозе крупного (Петроченко В.И., Твердохлебов П.Т.»Филимонов В.М.Девагин В.И.Д97Х; Твердохлебов П.Т. Д971; Шильников В.И.,Фетисов В.И.,Нисенбаум И.А.,1971) и мелкого рогатого скота (Згардан Е.С.,Мунтяну Н.А.,Караре М.В.Д968; Акопян В.Д.,Бадеян Г.0.Д969; Акопян В.Д.,Саркисян С.И.,1977; СогЪа J., Legeny J., Stoffа P. and oth., 1978).

При изучении сроков действия препарата на дикроцелиев было установлено, что выделение дикроцелиев начиналось через 24-48 часов и продолжалось 8-40 дней. Наибольшее количество паразитов выделялось на 5-6 день (Аюпов Х.В.,Нурхаметов Х.Г.Д968).

Фетисов В.И. (1965) наблюдал выход дикроцелий из печени уже через 20 часов после дачи антгельминтика, а на 4 день обнаруживались лишь единичные дикроцелии в печени, в желчном пузыре и двенадцатиперстной кишке. Также и Веселова Т.П. (1968) наблюдала выход многочисленных дикроцелий в желчный пузырь и тонкий отдел кишечника через одни сутки после введения гексахлорпараксилола (0,6 г/кг), а через трое суток только единичных экземпляров паразитов, находящихся в печени, желчном пузыре и тонком отделе кишечника.

По данным Фетисова В.И. (1964), Акопяна В.Д.»Саркисяна С.И. (1978) гексахлорпараксилол значительно снижает экстенсивность и интенсивность дикроцелиозной инвазии, однако не освобождает полностью животных от молодых форм дикроцелий.

При испытании новой лекарственной формы гексахлорпараксило-ла - гексихола - при дикроцелиозе наиболее эффективным он оказался в дозе 0,6 г/кг при однократном применении и из рас счета 0,3 и 0,4 г/кг при двукратной даче (Лукин А.К.,Худошин В.И.,1975)•

Описторхоз

В экспериментальных опытах на кошках Плотниковым H.H. »Ялдыги-ной З.С. (1962,1964) была впервые обнаружена эффективность гекса-хлорпараксилола при описторхозе. В дальнейшем было установлено,что гексахлорпараксилол в дозах 0,4-0,6 г/кг обеспечивает 100$ ЭЭ при описторхозе лисиц и песцов (Соколов В.А.,1965,1966; Каденации А.Н., Соколов В.А.»Мамаев И.С.,1974,1975) и в дозе 0,4 г/кг обладает профилактическим действием при описторхозе кошек, задерживая рост, развитие и яйцекладку паразитов (Зубов H.A.,1965; Дроздов В.Н., Реуцкий И.А.»Соколов В.А.,1967).

Многие авторы получили высокую эффективность гексахлорпарак-силола при описторхозе человека, отмечая при этом его безвредность и хорошую переносимость больными (Плотников Н.Н.,0зерецковекая H.H.»Карнаухов В.К. и др.,1964; Доронин A.B.,Панова Е.С.,Скаред-нов Н.И.»1965; Пантюхов А.М.,1966; Дроздов В.Н.,1967; Плотников H.H.»Озерецковская H.H.,Крылова А.С.,1969; Петренко A.A.,1969; Скареднов Н.И. ,1969; Фейгинова Ф.А.»Кривонос А.Ф.,1969; Озерецковская Н.Н.,Фирсова P.A.Карнаухов В.К.Д974).

Гексахлорпараксилол обладает гельминтоцидным действием только в отношении описторхисов, достигших половой зрелости (Доронин A.B.,1972).

Клонорхоз

Гексахлорпараксилол был применен с хорошим результатом при клонорхозе животных и человека (Плотников H.H.,Озерецковская H.H., Карнаухов B.K.,I969; Chung- Huei-lan, Hsü Chin-piao, Ts'ao Weich! et al., 1965; John Lin, Wang Chi-nan and oth., 1965; Wang Sheng--miao, Chang Ehei-ning, Shen Sung-lin and oth., 1965; Purusawa A., 1970; Yokogawa M., Kbyama H., Furusawa A., 1968).

Меторхоз

Хорошая эффективность гексахлорпараксилола была получена при экспериментальном меторхозе кошек (Плотников H.H.»Литвинов С.К., 1971).

Нарагонимоз

Chung Huei-lan, К'о Hsiao-ying, Ts-ao Wi-chi et al. (1965). установили эффективность гексахлорпараксилола при парагонимозе кошек и человека.

Эуритроматоз

По данным Надыкто М.В. (1973) гексахлорпараксилол эффективен при эуритроматозе жвачных.

Нанофиетоз

Эффективность препарата при данном гельминтозе отмечена в работе Мишакова Н.Е. (1968,1970).

Шистосомоз и малярия

Avido D.M., Cho J.W., Smith J.M. (1968); Eljager E.F., Hütt M.P., We riel L.M. (1970) выявили активность гексахлорпараксилола против Schistosoma mansoni, Plasmodium berghei.

- 17

2. Механим действия гексахлорпараксилола на гельминтов

Гексахлорпараксилол в опытах in vitro в концентрации 1x10""^ оказывает возбуждающее действие на мускулатуру тела фасциол, усиливая сократительное и ундулнрующее движения. Присоска после нескольких редких сотфащений открывается и полностью теряет способность прикрепляться. При длительном воздействии препарата ритмический характер сокращений фасциол нарушается и трематоды обездвиживаются (Ткач В.И.,1968; Ткач В.И.,Мелихова А.Г.,1969).

По данным Rauchbach G. (1964), Chung Huei-lan, Wu Hsiien-tsung, K'uang Chi-hung et al. (1965); Wang Sheng-miao, Chang Kuei-ning, Shen Sang-lin and oth. (1965), Yokogawa M. et al. (1968) при поступлении препарата внутрь паразита Fasciola hepatica, Clonorchis sinensis наступает деструкция репродуктивных органов - семенников, яичника, матки и семяприемника, а при воздействии в концентрации 1x10""^ наступает их гибель.

После действия гексахлорпараксилола у гомогенатов фасциол отсутствует ацетилхолинэстеразная активность (Полякова О.И.»Ладынина Н.В., 1966).

Резник Г.К. (1966а,1968) отмечает, что гексахлорпараксшюл вызывает у фасциол деструкцию нуклеопротеидов в клетках паренхимы и кишечного эпителия, а также оказывает угнетающее действие на углеводный обмен. При своем проникновении препарат вызывает у фас- . циол патоморфологические изменения в тегументе, паренхиме, пищеварительной и экскреторных системах. Причем, губительное действие препарата у овец начиналось через 18-20 часов и было более выражено через 27-28 часов с полной гибелью паразитов через 46 часов. Данным автором также было установлено (19666), что,;у дикроцелий дистрофические и некротические изменения распространяются постепенно от хвостового к переднему концу их тела.

Гевондян B.C. (1972) предполагает, что хлорированные углеводороды угнетают антиоксидазные системы фасциол. Повышенная чувствительность к ним трематод, по сравнению с организмом хозяина, может зависеть от высокого содержания у паразитов ненасыщенных жирных кислот.

• У дикроцелий гексахлорпараксилол вызывает резкое торможение яйцекладки (Аюпов Х.В.,Резник Г.К.,1966). Под действием препарата развиваются дистрофические изменения в виде набухания мультиполяр-ных клеток и десквамации кишечного эпителия, в результате чего происходит резкое уменьшение выделения мукополисахаридов, а в дальнейшем даже полное прекращение их выработки (Арутюнова А.Л.Д974).

В опытах Веселовой Т.П. (1968) было показано, что гексахлорпараксилол действует на фасциол целой молекулой, так как терефта-левая кислота образующаяся в результате гидролиза гексахлорпараксилола в присутствии кислот, не обладает фасциолоцидной активностью. То, что гексахлорпараксилол в организме не метаболизирует,а является стабильным, липофильным веществом, отмечают Konrod Н. und and« (1978).

3. Фармакология гексахлорпараксилола

Достаточно полное изучение влияния гексахлорпараксилола на организм животных было проведено Веселовой Т.П., в работах которой показано действие препарата на сердечно-сосудистую, центральную нервную системы, желудочно-кишечный тракт (Веселова Т.П. Д968а,б). Так, при изучении влияния на высшую нервную деятельность мелкого рогатого скота установлено, что увеличение дозы антгельминтика (0,8-2 г/кг) как у коз, так и у овец не вызывают изменений в длительности латентного периода жвачного рефлекса (Веселова Т.П.,

1970). Опытами, проведенными на овцах методом электрокардиографии, установлено, что гексахлорпараксилол в терапевтических, а также в десять и более раз увеличенных дозах, не вызывает каких-либо изменений в сердечно-сосудистой системе (при анализе ЭКГ учитывали характер и амплитуду зубцов Р, Q, R, амплитуду и полярность зубца Т, длительность интервалов r-r, P-Q, QRST).

На лабораторных животных, овцах и коровах было показано отсутствие патологического влияния на моторную функцию желудочно-кишечного тракта. Секреторная функция кишечника как у овец, так и у коров не изменяется под влиянием терапевтических доз препарата. Даже очень большие дозы (8 г/кг) вызывают лишь кратковременное увеличение количества кишечных ферментов - щелочной фосфатазы и энтерокиназы (Веселова Т.П.,1970).

Отсутствие влияния гексахлорпараксилола на моторную функцию кишечника кролика было показано также в работе Лебедевой М.Н.,Кузнецовой И.А. (1963). Этими же авторами установлено, что внутривенное введение препарата в дозах 1-5 мг/кг сопровождалось проходящим снижением артериального давления и угнетением дыхания. Перфузия в концентрации ixlO""5 - 2x10""® г/кг через коронарные сосуды вызывала угнетение сердечной деятельности изолированного сердца морской свинки. Но необходимо отметить, что антгельминтик вводился в Ю%-ном спиртовом растворе.

Цветаевой Н.П.,Бузмаковой P.A.»Фетисовым В.И. (1971) установлено, что гексахлорпараксилол в дозе 0,6 г/кг не оказывает неблагоприятного действия на организм овец, естественно инвазированных дикроцелиями, а в дозе 6 г/кг возможно токсическое действие препарата у ослабленных инвазией животных.

Помимо хорошего антгельминтного действия, гексахлорпараксилол обладает еще и выраженным противовоспалительным действием. Под действием хлоксила происходит нормализация структуры эпителия панкреатических протоков (Козлова С.И. ,1972), увеличивается объем панкреатического сока (Имамкулиев К.Д.,1972).

Гексахлорпараксилол усиливает желчеотделение в течение четырех часов (Аюпов Х.В.Нурхаметов X.Г.,1968; Лычко Н.Д.Д974), при этом отмечается нормализация эпителиальной выстилки внутрипеченоч-ных желчных протоков (Зубов Н.А.,Муканов В.H.,1976).

Противовоспалительное действие хлоксила на слизистую оболочку желудка и 12-перстной кишки указывается в работах Комаровой Н.М., Садковой Т.Н.(1971); Дунаева П.В.,Ковальчук Е.И.»Бычковой JI.C. (1976); Дерябиной М.С.(1977).

4. Токсикология гексахлорпараксилола

Основными вопросами современной токсикологии антгельминтшсов являются: параметры острой токсичности, кумулятивные свойства, остаточные количества в биологических жидкостях, органах и тканях животных, их эмбриотоксическое, тератогенное и мутагенное действия (Веселова Т.П.,1978). а) параметры острой токсичности и кумулятивные свойства

Работами советских и зарубежных авторов показана малая токсичность, хорошая переносимость гексахлорпараксилола различными видами животных и человека. Мыши, крысы, морские свинки, кошки, кролики переносили дозы 6-8 г/кг при однократном введении, не вызывая токсического действия. Единичная гибель животных была отмечена от доз Ю-16 и 20 г/кг (Лебедева М.Н.Кузнецова И.А.,1963). Также гексахлорпараксилол не вызывал токсикоза у мышей при пероральном введении в дозах 1-5 г/кг и у кошек при ежедневном (в течение 5-6 дней) введении в дозе I г/кг (Lin John, Wang Chi-non and oth.,1965).

Эти же авторы не наблюдали токсичности у человека при даче препарата в дозах 0,25-0,5 г/кг в течение 5-Ю дней. Chung Huei-lan, Hsu Chin-piao and oth.(I965) не отмечали токсического действия при много1фатной даче человеку (21 человек) в дозе 0,5 г/кг (сред-некурсовая доза 342,18 г или 5,85 г/кг); ДД5q для мышей равна 16,58 г/кг. Кроме этого, данные авторы не наблюдали кумулятивное .действие при многократной даче его человеку (в течение Ю и более дней) в дозе 0,5 г/кг.

В опытах Беселовой Т.П. (1963,1968) на мышах, морских свинках, кроликах - установлено, что ЛД^ гексахлорпараксилола находится в пределах 18-20 г/кг и по принятой в настоящее время классификации (Веселова Т.П.,1978) он относится к разряду малотоксичных веществ.

При изучении токсичности гексахлорпараксилола на ягнят биохимическими и токсикологическими методами Гольдбергене М. и др. (1965) отмечали кратковременный характер изменений вызываемые в дозе 0,85 г/кг. Также проходящие клиндоеские явления наблюдала Веселова Т.П. (1968) при введении препарата овцам в предельно увеличенной по объему дозе - 40 г/кг и коровам в дозах от 0,5 до 5 г/кг (свыше 2 кг на животное) Yokogawa М., Voshimura Н., Koyama Н. et al. (1969) отмечали снижение веса у крыс и жировую дегенерацию печени и почек при длительном введении (в течение недели) гексахлорпараксилола в дозе 300 мг/кг и выше (до 500 мг/кг), но введение Ю0 мг/ кг ежедневно в' течение 12 недель изменений веса, морфологической картины крови и гистологических нарушений не вызывали.

Для выявления скрытых явлений интоксикации были проведены специальные опыты Веселовой Т.П. (1971), в которых гексахлорпаракси-лол вводили в дозах 0,8-1 г/кг на фоне функциональных нагрузок: двухсуточное голодание у овец и проба "сахарная нагрузка" у коров, не показавших серьезных отклонений от нормы. Гистопатологическая картина внутренних органов овец и коров, получавших препарат в этих же дозах, существенно не отличалась от таковой контрольных животных (Бузмакова Р.А.»Цветаева Н.П.,1968). б) побочное действие

Однако наряду с хорошей переносимостью препарата, была отмечена несовместимость дачи его с такими кормами, как силос, пивная дробина, сенаж, свекловичный жом, патока, барда, картофель, а также любыми кормами пониженного качества или пораженными грибами родов Fusarium и Aspergillus, то есть кормами, которые усиливают бродильные процессы в желудочно-кишечном тракте (Веселова Т.П., 1970,1971; Веселова Т.П. Дребухин М.В.,1975). При этом отклонение от общего состояния у животных проявлялось от слабого угнетения, отсутствия аппетита до расстройства желудочно-кишечного тракта и в отдельных случаях тимпании желудка.

В медицинской практике также в отдельных случаях были отмечены побочные явления, проявляющиеся в виде головокружения, тошноты, слабости и ухудшения аппетита, желудочно-кишечных расстройств в легкой форме, усиления болей в области печени (Яровая Р.И.,1968; Плотников Н.Н.,0зерецковская Н.Н.,Крылова А.С.,1969; Пуртова З.Д., '1972; Chung Huei-lan, Hsu Chin-piao, Ts'ao Wei-chi et al., 1965; Yokogawa M., Koyama Н», Araku K. et al., 1969).

Введение гексахлорпараксилола с растительным маслом резко ухудшает состояние животных и приводит к снижению его переносимости в 5-Ю раз, тогда как дача его с молоком не изменяет переносимости (Лебедева М.Н.,Крылова А.С.,1968). Однако серьезных нарушений, как изменение функционального состояния печени, сердечно-сосудистой системы и в сыворотке крови авторами отмечено не было.

- 23 в) влияние на качество молока и мяса

Гексахлорпараксилол не оказывает влияния на качество молока, то есть не изменяет вкуса, запаха его, жирности, кислотности,плотности при 20°С, общий белок и казеин, сычужной свертываемости, способности его к брожению (Веселова Т.П.Дорошина М.В.,1966), а также не снижает молочной продуктивности коров (Баширов Р.Г.Д978).

Анализом мяса на содержание влаги, сухого вещества, общего бежа, полноценных и неполноценных белков, азота экстрактивных веществ, установлено, что гексахлорпараксилол не вызывает изменений в содержании влаги и не снижает белковую питательную ценность мяса (Карлова Н.Г.»Веселова Т.П.,Дорошина М.В.,1968). г) эмбриотоксическое, тератогенное и мутагенное действие

Наблюдениями, проводимыми на суягных овцах и стельных коровах отмечено, что гексахлорпараксилол не вызывает нарушений течения беременности и послеродового периода у животных (Веселова Т.П.,1967; Требухин М.В.,Веселова Т.П.,1974). Кроме того, Хрусталевой Л.И., Лаптевой Л.А.,Веселовой Т.П. (1982) был проведен опыт на крысах, которым вводили гексихол в течение всей беременности в три раза увеличенной максимально терапевтической дозе 900 мг/кг и было установлено, что препарат не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием.

Генетическая безопасность гексихола установлена Хрусталевой Л.И. (1983) в опытах, проведенных методами метафазного учета аберраций хромосом в клетках костного мозга мышей и доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках мышей. В указанных опытах гексихол вводили в дозе 1/2 от ЛД^д, то есть 9000 мг/кг, в то время как максимально терапевтическая доза его - 300 мг/кг. д) фармакокинетжа

Вопросы всасывания, выделения гексахлорпараксилола из организма изучались Лебедевой М.Н. »Крыловой А.С.(1968,1970); Веселовой Т.П. (1970), Chung Huei-lan et al. (1965) ï John Liu, Wang Chi-non and othjCE965); Yokogawa M., Koyama H,, Furusawa A. (1968).

Всасывание гексахлорпараксилола в кровь происходит сравнительно быстро, хотя и ограничивается нерастворимостью его в воде. В крови человека после приема внутрь 0,5 г/кг препарата концентрация его составляла через 4 часа 0,75 мг% и через 24 часа 0,50 шг% ( Chung Huei-lan, Hsïï Chin-piao et al., 1965).При однократном введении 1,5 г/кг антгельминтика белым крысам концентрация его в сыворотке крови определялась уже через 15-30 мин и максимум наблюдался через 1 сутки (Лебедева М.Н.,Крылова А.С.,1970). У овец при даче в дозе 0,4 г/кг всасывание препарата в основном происходило в течение первых двух суток, уменьшаясь к 5 суткам, когда обнаруживали лишь его следы (Веселова Т.П.,1970).

Idu J., Wang Chi-nan and oth.(I955) отмечают повышение всасывания гексахлорпараксилола при введении его с жирами, но переносимость его при этом снижается. Лебедева М.Н.,Крылова А.С.(1968,1970) сравнивали всасывание препарата при даче в водной взвеси, с растительным маслом и молоком и установили, что при введении с растительным маслом концентрация препарата в печени значительно больше по сравнению с введением в водной взвеет, но при этом переносимость хлоксила снижалась в 5-Ю раз. При введении с молоком сравнительно с введением в водной взвести концентрация препарата в печени увеличивается почти в 2 раза, не изменяя переносимости.

Динамика распределения гексахлорпараксилола в организме животных изучалась Yokogawa M. et al. (1968) радиоизотопным методом. Однако авторы показывают лишь относительное изменение содержания препарата.

Лебедева М.Н.,Крылова А.С. (1970) изучали динамику содержания хлоксила в сыворотке крови, печени, почках белых крыс спектро-фотометрическим методом и определяли его в незначительных количествах до 17 суток.

Chung Huei-lan et al.(I965) без указания способа определения препарата приводят данные о содержании антгельминтика в крови, желчи и моче человека, отмечая, что он задерживается в организме до 28 дней.

Все эти авторы указывают на низкое содержание препарата в сыворотке крови. В печени антгельминтик задерживается дольше, чем в почках, то ееть отмечается неравномерность распределения по органам и тканям.

Выделение гексахлорпараксилола из организма происходит в основном с фекалиями, с желчью и в незначительных количествах с мочой. Причем по данным Chung Huei-lan et al.(I965) через 24 часа после введения с фекалиями выделялось 50,3-93,1% антгельминтика, по данным Liu J. and oth. (1965) - 38,4%.

В опытах на крысах установлено, что основное количество гек. сахлорпараксилола выделялось с фекалиями в течение первых двух суток, постепенно уменьшаясь к пятым суткам, когда определялись лишь его следы. Выделение препарата после введения его в крахмальном клейстере и с молоком заканчивалось в течение 3 суток и выводилось соответственно 48,0 и 42,2% от введенной дозы (1,5 г/кг) в то время как после дачи с растительным маслом выведение заканчивалось на 2 сутки и выводилось всего 6% (Лебедева М.Н., Крылова А.С.,1968).

Выделение гексахлорпараксилола с фекалиями у овец (определение препарата проводили спектрофотометрическим методом) начиналось через 12 часов, достигая максимума через сутки (II49-I475 ^/мг).

Через 5-6 суток препарат определялся лишь в следовых количествах (Веселова Т.П.,1970).

Изучение выделения гексахлорпараксилола с молоком было проведено немецкими исследователями Konrod Н. und and. (1978) » которые давали коровам препарат "Аграмед ней" (субстанция гексахлорпараксилола) 1,5 г на Ю кг веса. Определение проводили методом тонкослойной хроматографии (чувствительность 0,002 мг/кг). Исследования показали, что препарат является стабильным, быстро всасывается и накапливается в молочном жире.'На 2 день после применения в среднем отмечалось Ю мг/кг его в молоке, через 40 дней -количество препарата находилось на уровне близком к чувствительности метода.

Анализ данных выявляет общие закономерности в фармакокинетике гексахлорпараксилола, а именно: достаточно быстрое всасывание из желудочно-кишечного тракта, неравномерное распределение по органам, низкое содержание в сыворотке крови и выведение из организма с фекалиями, желчью и в небольших количествах с мочой.

Однако все эти данные не отражают полной картины фармакоки-нетики препарата в организме как лабораторных и особенно сельскохозяйственных животных. Тем более совершенно нет содержания остаточных количеств антгельминтика в мясе и других органах, что является необходимым при установлении сроков убоя животных после дегельминтизации и разработке максимальнно допустимого уровня (МДУ).

5. Краткая характернотика методов, применяемых для определения остаточных количеств антгельминтиков

Для изучения распределения, выведения антгельминтиков в организме животных используются методы с различной точностью и чувствительностыо. Б зависимости от задач, стоящих перед исследователем, они относятся больше к количественным или качественным методам. Достоверность же результатов находится в прямой зависимости от чувствительности применяемого метода. То есть при определении остаточных количеств веществ важным как раз является выбор метода их определения.

К настоящему времени методы весьма многочисленны, насчитывается более 66 химических, физических, биологических, биохимических методов. Чувствительность их постоянно растет и достигает 0,0001 мг на I кг исследуемого продукта (Таланов Г.А.,1975; Edwards M.J., 1975; Rogstag Astri, 1975).

Остатки антгельминов в биологических субстратах определяют в нескольких последовательных этапах: экстракция, очистка экстрактов от сопутствующих веществ, концентрация экстрактов, качественное и количественное определение ( Загородный М.В., 1976).

Биологические методы

В основе этих методов положена высокая чувствительность различных членистоногих (личинки комаров и дафний,плодовые мухи-дрозофилы, комнатные мухи и т.д.) к некоторым группам химических веществ. После экстракции препаратов, очистки экстракта, членистоногих различными путями приводят в контакт с экстрактами. По количеству погибших насекомых определяют уровень содержания остатков в исследуемой пробе. Этот метод не нашел широкого применения, так как неспецифичен, точность его невелика, хотя и обладает высокой чув с твительно с тью.

Биохимические методы

Основаны на количественной оценке токсического действия некоторых антгельминтиков в малых концентрациях на активность ферментов.

Наиболее распространены методы определения остатков фосфорорга-нических и карбаматных соединений (к каким относится, например, хлорофос), основанные на их способности подавлять активность хо-линэстеразы. Недостаток этих методов в их неспецифичности и невысокой точности, но они просты, удобны по выполнению и довольно чувствительны - 1-0,001 мг/кг.

Химические методы

К этой группе относятся методы, основанные на титрометрии,на реакции осаждения и на фотометрии (определение остаточных количеств маретина, Anderson R.J, Anderson С.А., 1966). Наиболее распространены фотометрические методы анализа, которые основаны на измерении интенсивности светопоглащения окрашенными растворами полихроматического света (колориметрические методы. Например, на этом принципе основана методика определения гексахлорпараксило-ла - (Лебедева М.Н.,Крылова А.С.Д968; гексахлорофена - Полякова В.Н. Д973) или монохроматического света в видимой области спектра (спектрофотометрические методы). На основе спектрофотометри-ческого метода разработаны методики определения таких антгельмин-тиков как тетрамизол, дибромсалициланилид, трибромсалициланилид, оксиклозанид, тетрахлорметан, пирантелатартрат (Guthörlein I.,

Kaemmerer К., 1966; Vodraska J», Sutiak V., Cruz Ü.M., 1979; Lit-chman M.A., 1977).

Химические методы специфичны, но длительны по времени, требуют тщательной очистки экстрактов и обладают сравнительно слабой чувствительностью - 5-Ю мкг в пробе.

Физико-химические методы

К этим методам относятся различные виды хроматографии, полярография, методы нейтронно-активационного анализа, ультрафиолетовая и инфракрасная спектрометрия, атомно-абсорбционная спектрометрия, а также метод радиоактивных изотопов. Эти методы наиболее чувствительны.

Но наибольшее распространение при анализе остатков антгель-минтиков получили хроматографические методы и из них тонкослойная, газожидкостная и жидкостная хроматографии.

Тонкослойная хроматография занимает особое место благодаря простоте методики, доступности оборудования, высокой экономичности, гибкости метода.

Тонкослойная хроматография - вид жидкостной хроматографии. Роль подвижной фазы здесь выполняет жидкая фаза, а распределение происходит на слое сорбента, толщина которого существенно меньше его ширины (не менее, чем в пять раз). В наиболее распространенном варианте слой сорбента открыт, а движение подвижной фазы происходит под действием капиллярных сил.

Методика тонкослойной хроматографии включает в себя несколько операций: I) нанесение анализируемой пробы на слой сорбента; 2) разделение компонентов пробы на отдельные зоны в потоке подвижной фазы; 3) обнаружение зон на слое сорбента (обычно химическим реагентом, образующим с разделенными веществами окрашенные соединения); 4) качественная и количественная оценка полученного разделения. По величине (отношение длины пробега вещества к длине пробега растворителя) проводят качественную, а по размерам образовавшегося пятна и интенсивности окрашивания - количественную оценку вещества. Метод обладает высокой чувствительностью -0,05-0,1 мкг в пробе, но все же имеет низкую точность и полуколичественен (Шаршунова М.,Шварц В.,Михалец Ч.Д980; Китрхнер Ю., 1981).

Как пример использования тонкослойной хроматографии для анализа остатков антгельминтиков можно привести методики определения тетрамизола, парбендазола, гексахлорэтана, фенотиазина, бенацила (Богомолова 3.н.д973; Новик Т.е.,1979; Guthohrlein I.,Kaemmerer К., 1966; Fowler J.S.L.,1969, Di Cuollo G.J., Miller J. et al., 1972).

Особенно перспективным оказалось применение метода газовой и жидкостной хроматографии, так как позволяет разделить смеси сложного состава с близкими физическими и химическими свойствами.

Газовая хроматография - разделение компонентов анализируемой смеси основано на их много1фатном распределении между двумя различными фазами. Неподвижной фазой служит нелетучая жидкость, нанесенная в виде пленки на поверхность инертного носителя, компоненты анализируемой смеси разделяются за счет их различной растворимости в неподвижной фазе. Подвижной фазой всегда является газ. Разделение происходит при определенной температуре в термостате газового хроматографа. Выход вещества из колонки регистрируется с помощью детектора, сигнал с которого в виде электрического импульса усиливается и регистрируется как пик на диаграмной ленте. По высоте пика или его площади определяют количественное содержание анализируемого соединения. Метод обладает высокой точностью и чувствительностью. Современные приборы отечественных марок "Цвет-Ю6" и ЛХМ—8 МДП позволяют определять 0,005-0,01 нг вещества в анализируемом объеме или менее 0,001 мг/кг субстрата (Литвинов Л.Д.,Руденко Б.А.,1971; Шаршунова М.,Шварц В.,Михалец Ч.1980;

Жидкостная хроматография под давлением - метод разделения веществ, в котором подвижная фаза - жидкость, а неподвижная фаза -твердое вещество или другая жидкость, не смешивающаяся или частично смешивающаяся с первой. Разделение обусловлено тем, что одни компоненты анализируемой смеси сорбируются неподвижной фазой лучше, чем другие. Данная хроматография используется для разделения веществ с высокими температурами кипения. Чувствительность - 1-2 нг

- SI

Шаршунова M., Шварц В., Михалец Ч.,1980).

Методы газожидкостной и жидкостной хроматографии были применены для изучения, например, фармакокинетики антгельминтиков ле-вамизола, албендазола, оксифензидола, мебендазола С Marriner s.е., Bogan J.A., Vandaele W., 1981; Marriner S.E., Bogan J.A., I98I;Galtier P., Escoula L., Camgylhem R. et al.,1981; Behm С.A., Cornish K.A., Bryant C., 1985).

Из физикохимических методов большое распространение получил также метод радиоактивных.изотопов. Однако этот метод является чисто научным, так как требует специального дорогостоящего оборудования и, главное, дорогостоящих реактивов. Метод высокочувствительный, точный. Данным методом изучался кинетический обмен таких антгельминтиков, например, как тиабендазол, сульфоксид гексида, рафоксанид, негувон, оксифендазол, ацемидофен, бунамидин (Бабонас ИЛ.,1975; Вишняускас А.И.,1981; Henney R.W., Tewari H.С., 1975; Dedek W., Schwarz H., Liebaung E., 1977; Lazarov V., 1975; Bribion J., 1977; Virji A.S., Zaverty H., 1972).

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Настоящая работа выполнена в лаборатории экспериментальной терапии и подсобном хозяйстве ВИГИС "Курилово", подсобном хозяйстве ВНИИВС "Милет", а также во время комиссионного опыта дегельминтизации коров гексихолом с хлоридом натрия, который проходил в колхозе "Перемога" (село Конятин) Путильского района Черновицкой области Украинской ССР.

Опыты проведены на 54 крысах, 62 кроликах, 5 овцах, 17 коровах. Опытные и контрольные группы животных были сформированы по принципу аналогов. До начала опыта в течение недели животные находились на карантине, за ними вели клинические наблюдения и в опыт отбирали только здоровых животных.

Заключение диссертации по теме «Гельминтология», Савченко, Надежда Николаевна

ВЫВОДЫ

1. Разработаны методики определения гексахлорпараксилола (при даче лекарственных форм - гексихол, гексихол I) в органах, тканях и молоке животных: на основе высокочувствительного метода газожидкостной хроматографии (нижний предел определения 0,05 мг/кг в органах и тканях и 0,03 мг/кг в молоке; размах варьирования 70+10^) и на основе точного и специфичного метода тонкослойной хроматографии (нижний предел определения 0,05 мг/кг).

На основе тонкослойной хроматографии разработана методика для контроля за приготовлением кормолекарственной смеси с гекси-холом.

2. Изучена фармакокинетика гексахлорпараксилола в организме животных при введении гексихола крысам и кроликам в дозе 0,3 г/кг, овцам - 0,2 г/кг и гексихола I кроликам в дозе 0,125 г/кг. Установлена неравномерность их распределения по органам и тканям и образование "депо" в жщювой ткани. Максимум концентрации антгель-минтиков приходится на I сутки, после 5 суток во всех органах и тканях наблюдается резкое снижение уровня их концентрации.

3. Выделение гексахлорпараксилола, как при введении гексихола, так и гексихола I, происходит в основном через желудочно-кишечный тракт, а также почки, легкие, у овец - с жиропотом.

4. Значительная концентрация гексахлорпараксилола, при введении животным гексихола, установлена в желчи, что соответствует высокой антгельминтной активности препарата. Показано, что гексихол I обладает большей биологической доступностью - более длительно и в большем количестве содержится в желчи, печени и крови, что способствует более эффективному действию препарата на гельминтов.

5. Значительное количество гексахлорпараксилола (гексихол,

- 118 гексихол I) из организма животных выделяется через 5 суток, через 15-20 суток в органах и тканях выявляются фактически следы препарата,

6. Выделение гексахлорпараксилола с молоком после обработки коров гексихолом в терапевтической дозе 0,3 г/кг интенсивно происходит в течение 5 дней, после 15 дней определяются фактически следы.

7. При сравнении динамики выделения гексахлорпараксилола с молоком после введения коровам гексихола с хлоридом натрия (доза гексихола - 0,3 г/кг, хлорида натрия - 0,15 г/кг) и без него отмечено, что при этом способе дегельминтизации в молоко попадает меньшее количество препарата.

8. Благодаря использованию высокочувствительного метода газожидкостной хроматографии установлено проникновение гексахлорпараксилола (гексихол) через плаценту в плод, но в количествах, находящихся на уровне чувствительности метода (0,05 мг/кг).

9. Установлено, что губительное действие гексахлорпараксилола (гексихол I в дозе 0,125 г/кг) на фасциол начинается уже через 3-6 часов после введения препарата и значительно выражено к 24 часам. Максимум концентрации препарата в теле гельминта совпадает с максимумом содержания его в желчи.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработанные нами методики определения гексахлорпараксилола (гексихол, гексихол I) в кормолекарственных смесях, органах, тканях и молоке животных внедрены в ветеринарную практику: на основе тонкослойной хроматографии (утверждена 1УВ МСХ СССР) показана на Всесоюзном семинаре токсикологов (1980г., г.Алма-Ата), на Всесоюзном семинаре по технологии применения кормолекарственных смесей (1983г., ВДНХ, г.Москва), вошли в "Методические рекомендации по проведению исследований в гельминтологии" (Отделение ветеринарии ВАСХНИП, 1983г.); на основе газожидкостной хроматографии была демонстрирована на Ш Всесоюзном совещании по анализу остатков пестицидов (1979г., ВДНХ, г.Москва). Данные методики используются для санитарного контроля за остаточным содержанием препарата в мясе, молоке животных, а также для контроля за приготовлением кормолекарственных смесей.

2. Полученные нами данные по фармакокинетике гексахлорпараксилола были использованы при проведении в ВИГИСе работы по установлению максимально допустимого уровня (МДУ) этого антгельминтика (300 мг/человека) в продуктах питания, что послужило основанием для реализации мяса и молока от дегельминтизированных гексихолом и гексихолом I животных практически без ограничений.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Представление об остаточных количествах в органах и тканях и всей фармакокинетики в целом антгельминтиков, применяемых или предлагаемых для применения в животноводстве, тесно связано с характеристикой используемых для этих целей аналитических методов. Применение высокочувствительных методов позволяет избежать ошибок при оценке безопасности веществ. Газожидкостная хроматография, на которой основана разработанная нами методика определения гексахлорпараксилола в органах, тканях и молоке животных, как раз и относится к таким высокочувствительным, точным и специфичным методам. Данная методика позволяет определять такие незначительные количества препарата, которые невозможно уловить другими методами (например, используя спектрофотометриго). Поэтому полученные данные по всасыванию, распределению, выделению гексахлорпараксилола (гексихола и новой лекарственной формы - гексихола I) отражают максимально полную картину судьбы препарата в организме кроликов, овец, крыс, коров.

Установлено, что фармакокинетика гексахлорпараксилола в организме изученных видов животных в основном сходна: распределение неравномерное с преимущественным содержанием препарата в богатых липидами органах, несущих большую функциональную нагрузку; максимум концентрации в органах и тканях приходиться на первые сутки после дачи препарата. Выведение происходит в основном через желу-дочно кишечный тракт с желчью, через почки, с мочой. Основная масса выделяется в течение 5 суток, после 15 суток, количество гексахлорпараксилола (гексихола, гексихола I), в молоке,' мясе, то есть основных продуктах питания, находится на таком уровне, который можно определить лишь высокочувствительным методом.

Кроме того, только благодаря применению газожидкостной хрома

- 115 тографщ было установлено проникновение гексахлорпараксилола через плаценту в плод, так как количество это такое незначительное, что находится на уровне чувствительности метода.

При сопоставлении данных по фармакокинетике гексихола и новой лекарственной формы - гексихола I установлено, что гексихол I обладает большей биологической доступностью. Концентрация гексихола I выше в крови, ткани печени и, что очень важно, в желчи, что способствует более эффективному действию препарата на фасциол, локализующихся в желчных ходах печени. Подтверждением этого как раз и являются данные по изучению накопления гексихола I непосредственно в теле фасциолы. Обладая лучшей способностью проникать через биологические мембраны, гексихол I лучше проникает и в фасциолу и действие его начинается уже через 3-6 часов, достигая максимума к 24 часам, что совпадает с максимумом концентрации в желчи. К этому времени все тело фасциолы захвачено некрозом.

Газожидкостная хроматография требует наличия специального ' оборудования - газожидкостного хроматографа. Более простой по технике, исполнения, но достаточно чувствительный и специфичный является другой вид хроматографии - тонкослойная, которая и была взята за основу при разработке методики определения гексахлорпараксилола в органах, тканях и молоке животных. Данная методика позволяет правильно решать вопрос о наличии антгельминтика в молоке или мясе от дегельминтизированных животных.

Надо отметить, хлорорганические пестициды такие как ДДТ и/ТХЦГ, зачастую попадают в организм животных, загрязняя молоко и мясо, поэтому необходимо дифференцировать гексахлорпараксилол от сопутствующих пестицидов. Это позволяют сделать разработанные нами методики на основе газожидкостной и тонкослойной хроматографии.

-116

После разработки методики приготовления кормолекарственной смеси для дегельминтизации животных на передвижной установке УКС-Г (ВИГИС), стал необходим контроль за качеством этой смеси. Разработанная нами методика на основе тонкослойной хроматографии проста по технике исполнения, достаточно чувствительна и может с успехом применяться для этих целей.

На основе полученных нами данных по остаточным количествам гексахлорпараксилола в мышцах и молоке животных в ВИГИСе совместно с институтом питания АМН СССР (Отчет ВИГИС, 1983) проведена разработка допустимых остаточных количеств (ДОК) или максимально допустимого уровня (МДУ) антгелъминтика в продуктах питания. Уровень этот довольно высокий и это дает возможность использовать мясо, молоко от животных, дегельминтизированных гексихолом или гексихо-лом X, практически без ограничений, тем более, нами показано практическое непроникновение антгелъминтика в плаценту, плод, а работами Хрусталевой Л.И., Лаптевой Л.А., Веселовой Т.П. (Г982), Хрусталевой Л.И. (Х983) установлено отсутствие отдаленных последствий, то есть препарат не обладает тератогенным, эмбриотоксичес-ким и мутагенным действиями.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Савченко, Надежда Николаевна, 1984 год

1. Акопян В.Д., Бадеян Г.О. Применение гексахлорпараксилола при дикроцелиозе овец. Ветеринария, 1969, Л> 10, с.55-58.

2. Акопян В.Д., Саркисян С.И. Дегельминтизация овец при смешанной фасциолезно-дикроцелиозной инвазии. Техекагир гюхат-птесакан гитутганнер, Изв.с.-х.наук, 1977, J£ 7, с.81-86.

3. Арутюнова А.Л. Мукополисахариды в организме дикроцелиев под действием гексахлорпараксилола и гетола. Тр.Армянского НШ жив.и вет., 1974, 12, с.765-767.

4. Архипов И.А.,Веселова Т.П. Сравнительная терапевтическая эффективность гексихола и гетола при фасциолезе овец. Бюл.Всес. ин-та гельминтол., 1977, вып.20, с.5-6.

5. Архипов И.А., Веселова Т.П. Экономическая эффективность применения антгельминтиков при хронической форме фасциолеза овец,-Химия в с.-х., 1976, № 3, с.17-19.

6. Архипов И.А., Веселова Т.П. Экономическая эффективность применения антгельминтиков при подостром течении фасциолеза овец.-Бюл.Всес.ин-та гельминтол., 1976, вып.17, с.5-18.

7. Аюпов Х.В.,Резник Г.К. Дикроцелицидное действие гексахлорпараксилола, гетола и морфологическая характеристика дикроцелиев, выделившихся у овец. Тр.Башкирского с.-х. ин-та, 1966, т.12, ч.З, с.3-12.

8. Аюпов Х.В., Нурхаметов Х.Г. Опыты по изучению влияния не- 121 которых антгельминтиков на желчеотделительнуга функцию у овец. -Тр.Башкирского с.-х.ин-та, 1968, т.12, ч.З, с.22-30.

9. Бабонас ЙЛ. Фасциолоцидные свойства сульфоксида гексидаи изучение его кинетического обмена в организме животных и в гельминтах F.hepatica L. , 1758 методом радиоактивных индикаторов. -Автореф.дисс. . канд.вет.наук. -М.Д975.

10. Баширов Р.Г. Влияние дегельминтизации коров гексахлор-параксилолом и дертилом Б на молочную продуктивность в первые дни после ее проведения. Тр. Бе лору с. НИИ экспер. ветеринарии, 1978, т.16, с.96-99.

11. Богомолова З.Н. Определение микроколичеств фенотиазина в продуктах животного происхождения методом хроматографии в тонком слое. Методические указания. М., 1973.

12. Бузмакова P.A. »Цветаева Н.П. Влияние гексахлорпараксилола на организм животных. Материалы к научн.конф.Всес.о-ва гельминтологов, (декабрь 1967), М., 1968, ч.1, с.45-51.

13. Веселова Т.П.,Воробьев М.А.,Дорошина М.В. Изучение токсичности гексахлорпараксилола (ГПК).- В кн.: Гельминты человека, животных и растении и борьба с ними: К 85-летию акад.К.И.Скрябина,1963, с.434-435.

14. Веселова Т.П.»Воробьев М.А.,Дорошина М.В. Фасциолоцидный препарат гексахлорпараксилол. Ветеринария, 1963, № 4, с.52.

15. Веселова Т.П.»Воробьев М.А.»Дорошина М.В. Новый антгель-минтик гексахлорпараксилол при фасциолезе. - Доклады ВАСХНИЛ,1964, с.32-36.

16. Веселова Т.П.,Дорошина М.В. »Воробьев М.А. Сравнительная терапевтическая эффективность гексахлорпараксилола и гетола при фасциолезе. Материалы к научн.конф.Всес.о-ва гельминтологов,1965, ч.1, с.46-48.- 122

17. Веселова Т.П., Дорошина М.В. Изучение влияния дегельминтизации гексахлорпараксилолом коров при фасциолезе на качество и количество молока. Материалы к научн.конф.Всес.о-ва гельминтологов, I9SS, ч.4, с.56-64.

18. Веселова Т.П.»Дорошина М.В. Эффективность гексахлорпараксилола при фасциолезе крупного рогатого скота. Ветеринария,1966, В 5, с.44-46.

19. Веселова Т.П.,Дорошина М.В. Испытание гексахлорпараксилола при фасциолезе крупного рогатого скота. Ветеринария, 1966,1. JS 9, с.41-42.

20. Веселова Т.П. Влияние гексахлорпараксилола на пищеварительный тракт. Тр.Всес.ин-та гельминтол., 1967, т.14, с.165-175.

21. Веселова Т.П. Дегельминтизация глубокосуягных овец и глубокостельных коров гексахлорпараксилолом при фасциолезе ж дикро-целиозе. Бгал.Всес.ин-та гельминтол., 1967, вып.1, с.12-13.

22. Веселова Т.П.,Дорошина М.В.Долиев М.Ф.,Каболоев А.Д., Войденова М.П.,Ануфриев Н.П. Испытание гексахлорпараксилола при фасциолезе. Ветеринария, 1968, JS 3, с.52.

23. Веселова Т.П. Фасциолоцидные антгельминтики четырех-хлористый утлерод, гексахлорэтан и гексахлорпараксилол. - Дис. . докт.вет.наук. - М., 1968.

24. Веселова Т.П. Влияние гексахлорпараксилола на организм мелкого и крупного рогатого скота (по данным клинических исследований). В кн.: Гельминтозы человека, животных и растений и борь- 323 ба с ними: К 90-летига К.И.Скрябина, М., 1968, 0.119-123.

25. Веселова Т.П. Влияние гексахлорпараксилола на организм животных. Ветеринария, 1968, В 7, с.62-65.

26. Веселова Т.П. Изучение влияния гексахлорпараксилола на сердечно-сосудистую систему. Тр.Всес.ин-та гельминтол., 1970, т.16, с.63-65.

27. Веселова Т.П. Изучение влияния гексахлорпараксилола на центральную нервную систему овец. Материалы XI научн.конф.по фармакол.и токсикол., MBA, 1970, ч.2, с.87.

28. Веселова Т.П. Всасывание гексахлорпараксилола в кровь и выделение его из организма овец.- Тр.Всес.ин-та гелъминтол.-1970, т.16, с.67-71.

29. Веселова Т.П. Изучение влияния.гексахлорпараксилола на моторную и секреторную функции желудочно-кишечного тракта. Материалы II научн.конф.по фармокол.и токсикол., MBA, 1970, ч.2, с.88-89.

30. Веселова Т.П. Выявление токсичности гексахлорпараксилола методом условно-рефлекторной деятельности центральной нервной системы и тестом голодания животных. Юбилейный сб.работ по гельминтологии, посвященный 90-летию К.И.Скрябина, М., 1971, с.76-79.

31. Веселова Т.П.,Дорошина М.В. ,Требухин М.Ф. Эффективность нового образца гексахлорпараксилола при фасциолезе овец. Бюл. Всес.ин-та гельминтол., 1973, вып.10, с.28-29.

32. Веселова Т.П.,Требухин М.В. О возможных причинах токсического действия гексахлорпараксилола у крупного рогатого скота. -Химия в с.-х., 1975, $ 5, с.54-58.

33. Веселова Т.П. Проблемы фармакологии и токсикологии ант-гельминтиков, применяемых в ветеринарии. Серия: Животноводство и ветеринария, 1978, т.10, с.92-108.

34. Вирченко Е.П. ,Бобовникова Ц.И.Егоров В.В. О миграции ДДТ и ¿f-ГХЦГ в дерновоподзолистых почвах. Почвоведение, 1977, В 2, с.59-63.

35. Гевондян B.C. Роль липидных перекисей в механизме токсического действия хлорированных углеводородов (антгельминтиков).-Тр.Всес.ин-та гельминтол., 1972, т.19, с.69-75.

36. Гладких В.Ф. Экспериментальное исследование влияния хлоксила на функцию печени. Вопр.мед.гельминтол. М.,1976,с.76-80.

37. Гольдбергене М. »Кублицкене 0.»Малаховский А. Сравнительная оценка действия четыреххлористого углерода и гексахлорпаракси-лола (ГПК) на организм овец. Материал к Всес.научн.конф.Всес. о-ва гельминтол.,1965, ч.З, с.64-66.

38. Дерябина М.С. Пристеночное пищеварение и морфологическое состояние слизистой оболочки 12-перстной кишки и их динамика под влиянием лечения хлоксилом у больных поздней фазой описторхоза.

39. В ich.: Проблема описторхоза в Западной Сибири, JI., 1977, с.142-144.

40. Динерман A.A. Роль загрязнителей окружающей среды в нарушении эмбрионального развития, М.: Медицина, 1980.

41. Доронин A.B.,Панова Е.С.,Скареднов Н.И.,Шпилько В.Н. Результаты изучения гельминтоцидных свойств гексахлорпараксилола при описторхозе человека. Сб.научн.работ/ Тюменьский НИИ кревой инфекц.патологии, 1965, № I, с.3-7.

42. Доронин A.B. Ранняя фаза описторхоза (клиника и лечение).-Дис. . канд. мед.наук, М.,1972.

43. Дроздов В.Н. Опыт лечения описторхоза у детей хлоксилом (гексахлорпараксилолом).- Мед.паразитол.и паразитар.болезни,1967, т.36, №2, с.166-168.

44. Дроздов В.Н.,Реуцкий И.А.,Соколов В.А. Лечение описторхоза животных и человека гексахлорпараксилолом. Сб.: Прьблемы паразитологии. - Киев: Наук.думка, 1967, с.518-519.- 125

45. Дунаев П.В., Ковальчук Е.И.»Бычкова Л.С. Морфо-функцио-нальная характеристика изменений в желудке у больных описторхозом после дегельминтизации. Профилактика и лечение заболеваний желудочно-кишечного тракта. - Омск, 1976, с.25-26.

46. Загороднов М.В. Справочная книга по ветеринарной токсикологии. М.: Колос, 1976.

47. Згардан Е.С.,Мунтяну H.A.,Караре М.В. Испытание гекса-хлорпараксилола и гетолина при дикроцелиозе овец. В сб.: Паразиты животных и растений. - М.: Наука, 1968, вып.4, с.118-121.

48. Зубов H.A. О причинах снижения гельминтоцидного действия гексахлорпараксилола при лечении описторхоза у кошек: Сб.научн. работ/Тюменский научн.-исслед.ин-т краевой инфекц.патологии,1965, № I, с.8-12.

49. Зубов Н.А.,Муканов В.Н. К морфологии печени человека после успешного лечения описторхоза хлоксилом. Мед.паразитол. и паразитар.болезни, 1976, т.45, Л 5, с.536-538.

50. Имамкулиев К.Д. Влияние хлоксила на внешнюю секрецию поджелудочной железы при описторхозе. Мед.паразитол. и паразитар. болезни, 1972, т.41, № 5, C.S74-S77.

51. Каболоев А.Д. Гексахлорпараксилол при фасциолезе свиней.-Ветеринария, 1968, № 5, с.47.

52. Каденации А.Н., Соколов В.А., Мамаев И.О. Борьба с гель-минтозами пушных зверей. Ветеринария, 1974, № 10, с.87-88.

53. Каденации А.Н., Соколов В.А., Мамаев И.С. Опыт борьбы с- I2G гельминтозами пушных зверей. Труды/Омский вет.ин-т, 1975, т.31, вып.З, с.9-13.

54. Камардинов Х.К. Эффективность хлоксила при фасциолезе и его побочные действия. Материалы 2-й Таджик.респ.конф. по оздоровлению внешней среды и проблемы снижения инфекц.заболеваний. Душанбе, 1974, ч.2, с.19-22.

55. Карлова Н.Г., Веселова Т.П., Дорошина М.В. Влияние гексахлорпараксилола на качество мяса. Материалы научн.конф.Всес.о-ва гельминтологов, 1969, ч.1,с. I07-II2.

56. Кей Х.Д. Биохимические проблемы образования молока. Тр. международного биохимического конгресса. М.,1961.

57. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. М.: Мир, 1981.

58. Клисенко М.А. Основные закономерности накопления и распределения пестицидов в организме теплокровных животных. В сб.: Гигиена применения, токсикология пестицидов и клиника отравлений,1970, вып.8, с.54-57.

59. Козлова С.И. Патоморфология поджелудочной железы при описторхозе и после лечения хлоксилом. Автореф. Дис. . канд. мед.наук. - Свердловск, 1972.

60. Комарова Л.И. 0 накоплении хлорорганических пестицидов в тканях эмбриона и плода человека. В сб.: Гигиена применения, токсикология пестицидов и клиника отравлений. Киев, 1970, вып.8, с.61-63.

61. Комарова Н.М., Садкова Т.Н. Морфологические изменения слизистой оболочки желудка и их динамика под влиянием лечения хлоксилом у больных описторхозом. Мед.паразитол.и паразитар.болезни,1971, т.40, & 4, с.397-401.

62. Константинова A.B., Жумамудинов С., Серов В.М., Гурксер Г.В., Гололобов В.П. Остаточные количества ДДТ и ГХЦГ в молоке ко- 127 ров хозяйств Чуйской долины. Сов.здравоохр.Киргизии, 1973, № 6, с.51-52.

63. Кравчук В.Ф., Котельников Г.А. Профилактика токсикоза при дегельминтизации гексахлорпараксилолом. Ветеринария, 1976, $ 12, с.49-50.

64. Кугенев П.В. Молочное дело. М.: Колос, 1967.

65. Лебедева М.Н. »Кузнецова H.A. К фармакологии препарата гексахлорпараксилола. Мед.паразитол.и паразитар.болезни, 1963, т.32, IS 6, с.691-696.

66. Лебедева М.Н.»Крылова A.C. К фармакологии препарата хлоксила (гексахлорпараксилола),. П. Переносимость и токсичность хлоксила при одновременном введении молока или растительного масла.- Мед.паразитол.и паразитар.болезни, 1968, т.37, № 3, с.354-359.

67. Литвинов Л.Д., Руденко Б.А. Газовая хроматография в биологии и медицине, М.: Медицина, 1971.

68. Лукин А.К., Худошин В.И. Испытание антгельминтиков при дикроцелиозе овец. Ветеринария, 1975, $ 5, с.80-81.

69. Лычко Н.Д. Экспериментальное изучение влияния хлоксила на- 128 желчеотделение и химический состав желчи. Мед.паразитол.и паразитар.болезни, 1974, т.43, JS I, с.98-104.

70. Медведь Л.И. Справочник по пестицидам. Киев, 1974.

71. Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам/под общ.ред.О.Микеш. М.: Мир, 1982.

72. Мишаков Н.Е. Лечение нанофиетоза. Мед.паразитол. и паразитар.болезни, 1968, т.37, № 4, с.399-401.

73. Мишаков Н.Е. Нанофиетоз человека в Приморском крае. -Автореф. дис. . канд.мед. наук. М., 1970.

74. Надьгкто М.В. Эурирематоз домашних жвачных животных в Приморском крае (биология Euryfcrema pariereafcicum, Janson , 1889, эпизоотология, некоторые вопросы терапии и профилактики. -Автореф.Дис. . канд.вет.наук. Владивосток, 1973.

75. Новик Т.С. Изучение фармакокинетики производных бензимид-азолкарбаматов (бенацил,БМК) и дифенилметана (гексахлорофен в организме животных. Дис. . канд.биолог.наук., М., 1979.

76. Олейник С.Ф. Противодействие организма лекарству (фармакология и выздоровление).- В сб.: Вопросы санологии. 3, М. -Львов, 1959, с.15-22.

77. Озерецковская H.H., ФирсоваР.А., Карнаухов В.К., Линевич О.М., Арнаутова В.И., Пантелеева Е.Я., Дьяконова А.М. Эффективность и переносимость 3-дневной схемы лечения описторхоза хлоксилом. -Мед.паразитол.и паразитар.болезни, 1973, т.42, № 5, с.581-585.

78. Пантюхов А.М. 0 лечении описторхоза хлоксилом. Мед.паразитол.и паразитар.болезни, 1966, т.35, № 4, с.482-483.

79. Парк Д. Диохимия чужеродных соединений /Под общ.ред. Л.Ф.Панченко .- М.: Медицина,1973.

80. Петренко A.A. Определенные результаты лечения описторхоза хлоксилом (гексахлорпараксилолом). Сов.медицина, 1969, В 3,с.137-138.

81. Петроченко В.И.,Твердохлебов П.Т., Филимонов В.М.Девагин В.И. Опыт оздоровления хозяйств от дикроцелиоза, - Ветеринария, 1971, Я 7, с.62.

82. Плотников H.H., Ялдыгина З.С. Новое в экспериментальной терапии описторхоза. Тез.докл.научн.конф.Всес.о-ва гельминтол., 1962, с.150.

83. Плотников H.H.,Зерчанинов Л.К.,Ялдыгина З.С. Экспериментальная терапия описторхоза гексахлорпараксилолом. Мед.паразитол. и паразитар.болезни, 1964, т.33, № 4, с.301.

84. Плотников H.H., Озерецковская H.H., Карнаухов В.К., Заль-нова Н.С., Файбусович Г.М., Кухта Г.И., Алексеева М.й. К специфической терапии описторхоза у человека гексахлорпараксилолом Мед.пара-зитол.и паразитар.болезни, 1964, т.33, № 6, с.676-681.

85. Плотников H.H.»Карнаухов В.К.,Залънова Н.С., Алексеева М.И. »Борисов И.А., Стромская Т.Ф. Лечение фасциолеза у человека хлоксилом (гексахлорпараксилолом). Мед.паразитол.и паразитар. болезни, 1985, т.34, № 6, с.725-729.

86. Плотников H.H.»Озерецковская H.H.,Крылова A.C.»Алексеева М.И.»Тумольская Н.И. Сравнительная эффективность лечения описторхоза человека хлоксилом при разных методах его назначения. Мед. паразитол.и паразитар.болезни, 1969, т.38, 5, с.537-539.

87. Плотников H.H., Озерецковская H.H., Карнаухов В.К., Алексеева М.И.,Тумольская Н.И., Ялдыгина З.С. К специфической терапии гельминтозов печени описторхоза, клонорхоза, фасциолеза - хлоксилом. - Тез.докл. Ш Всерос.съезда терапевтов. М., 1969, с.103.

88. Плотников H.H., Литвинов С.К. Хлоксил (гексахлорпаракси-лол) б экспериментальной терапии меторхоза. Мед.паразитол. и паразитар.болезни, 1971, т.40, № I, с.81-83.- 130

89. Полякова О.И., Дадыкина Н.В. О влиянии антгельминтиков на ацетилхолинэстеразу гельминтов. Материалы конф.Всес.о-ва гельминтол., 1966, ч.4, с.276-280.

90. Полякова В.Н. Колориметрический метод определения гекса-хлорофена в органах и тканях животных. Бюл.Всес.ин-та экспер.вет. 1973, № 16, с.133-135.

91. Пуртова З.Д. Биохимические изменения в сыворотке крови при введении хлоксила. Фармакологическая регуляция обменных процессов. Л"., 1972, с.62-63.

92. Пуртова З.Д. Влияние хлоксила на функциональное состояние печени и меры предупреждения гепатотоксических эффектов: Авто-реф. Дис. . канд биол.наук. М., 1977.

93. Резник Г.К. 0 действии гексахлорпараксилола на половозрелых фасциол. Материалы конф.Всес.о-ва гельминтол., 1966, ч.4, с.288-292.

94. Резник Г.К. О гистологических изменениях, вызываемых гексахлорпараксилолом в пограничных системах трематод, паразитирующих в печени. Мед.паразитол.и паразитар.болезни, 1966, т.35, Л> 4, с.425-427.

95. Резник Г.К. О некоторых патоморфологических изменениях, вызываемых гексахлорпараксилолом у фасциол, при дегельминтизации овец. Найотозс! рагагуЪо1ое1сгпе, 1968, Т.14, № 5-6, с.627-630.

96. Серия технических докладов ВОЗ. Биологическая доступность лекарственных средств: принципы и проблемы, - Женева, 1975, № 536.

97. Скареднов Н.И. Эффективность лечения описторхоза человека хлоксилом. Мед.паразитол.и паразитар.болезни, 1969, т.38, № 5, с.542-545.

98. Соколов В.А. К терапии описторхоза у песцов гексахлор- 181 параксилолом (предварительное сообщение). Материалы научн.конф. Бсес.о-ва гельминтол., 1965, ч.4, с.259-263.

99. Соколов В.А. К изучению новых антгельминтиков при гельминтоз ах лисиц. Труды/ Омский вет.ин-т, 1966, т.24,• 103. Соловьев В.Н.,Фирсов А.А.,Филов В.А. Фармакокинетика, -М.: Медицина, 1980.

100. Таланов Г.А. Остатки пестицидов в объектах ветеринарного надзора и их санитарно-токсикологическое значение.: Автореф.Дис. . докт.вет.иаук. -М., 1975.

101. Ташенов К.Т. Деятельность пищеварительных желез у лак-тирующих животных. Алма-Ата.: Наука, 1969.

102. Твердохлебов П.Т. Профилактика и меры борьбы с дикро-целиозом. Ветеринария, 1971, В 3, с.69.

103. Ткач В.И. Основные механизмы двигательной активности Fasciola hepatica Ь., 1758 и влияние на них некоторых антгельминтиков.: Автореф.Дис. . канд.вет.наук. М., 1968.

104. Ткач В.И.»Мелихова А.Г. К вопросу о механизме действия некоторых антгельминтиков на Fasciola hepatica. -Материалы научн. конф.Всес.о-ва гельминтол.,1969, с.296-305.

105. Требухин М.В. 0 применении гексахлорпараксилола при фасциолезе. Ветеринария, 1971, № 9, с.68-69.

106. Требухин М.В. Практические аспекты применения гексахлорпараксилола при фасциолезе крупного рогатого скота. Дис. . канд.вет.наук. -М., 1974.

107. Требухин М.В.»Веселова Т.П. Изучение возможного побочного влияния гексахлорпараксилола на генеративную функцию крупного рогатого скота. Химия в сельск.х-ве, 1974, $ II, с.60-64.

108. Фейгинова Ф.А. Кривонос A.i. Лечение больных опистор-хозом хлоксилом (гексахлорпараксилол).- Сов.медицина,1969, В 3,- 1Ей с.84-87.

109. Фетисов В.И. Гексахлорпараксилол эффективный антгель-минтик при дикроцелиозе овец. - Ветеринария, 1964, В 2, с.61-62.

110. Фетисов В.И. Испытание гексахлорпараксилола, гетола и гетолина при дикроцелиозе. Ветеринария, 1964, № II, с.47-48.

111. Фетисов В.И. Испытание антгелъминтиков при дикроцелиозе крупного и мелкого рогатого скота. Материалы научн.конф.Всес. о-ва гельминтол., 1965, ч.1, с.222-228.

112. Фетисов В.И. Дамизов Х.Х.,Урумова В.Д.»Кармоков Б.Д., Галустян Г.С. Производственные опыты по дегельминтизации мелкого рогатого скота гексахлорпараксилолом при дикроцелиозе и фасциоле-зе. Тр.Всес.ин-та гельминтол., 1970, т.15, с.313-315.

113. Хамизов Х.Х.,Урумова В.Д. »Кармоков Д.В.,Фетисов В.И. Гексахлорпараксилол при дикроцелиозе овец. Ветеринария, 1969, № 4, с.51.

114. Ханкишев А.М. Лечение буйволят при фасциолезе. Ветеринария, 1974, Л 5, с.72.

115. Ходжаныязов А. Содержание остатков ДДТ и ГХЦГ в некоторых объектах природной среды Туркменской ССР. Тр.ВНИИ вет.санитар., 1970, т.37, с.211.

116. Хрусталева Л.И. Испытание на мутагенность антгельминтика гексихола. В кн.: Профилактика и борьба с трематодозами животных в зонах мелиорации земель: Тез.докл.Всес.конф. Баку, 1983, с.161-162.

117. Хрусталева Л.И.,Лаптева Л.А., Веселова Т.П. Результаты изучения эмбриотоксического и тератогенного действия гексихола. -Химия в с.-х., 1982, $ 5, с.49-51.

118. Цветаева Н.П.,Бузмакова Р.А.,Фетисов В.И. Влияние гексахлорпараксилола на организм овец, больных дикроцелиозом. В кн.:- 133

119. Сб.работ по гельминтол., М.: Колос, 1971, с.432-435.

120. Шаршунова М.,Шварц Б.»Михалец Ч. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии. М.: Мир, 1980.

121. Шеремета Д.М. Из опыта применения гексахлорпараксилола.-Ветеринария, 1970, 16 12, с.58.

122. Шеховцов B.C.,Мишарева Т.Е.,Луценко Л.И. Профилактика осложнений при дегельминтизации гексихолом овец, инвазированных фасциолезом и дикроцелиозом. Тез.докл.9 конф.Укр.паразитол.о-ва. Киев, 1980, ч.4, с.168-170.

123. Шильников В.И.»Фетисов В.И. ,Нисенбаум И.А. Проверка эффективности антгельминтиков при дикроцелиозе. Ветеринария, 1971, № I, с. 63.

124. Шицкова А.П. »Рязанова P.A. Гигиена и токсикология пестицидов. М.: Медицина, 1975.

125. Эвранова В.Б.,Догачев Е.Д.,Эвранова Г.Б. Субмикроскопическое строение кутикулы Fasciola hepatica. -Ученые записки Каз. вет.ин-та им.Н.Э.Баумана, 1989, № 105, с.285-287.

126. I. Adamczyk E. The case of containing of DDT in hen during 2 years. Med. Weter., 1971, E.27, N 5, s. 300.

127. Anderson R.J., Anderson C.A. The photofluorometric method of determination of maretin residue in fatty layers and muscle tissues of animals. J. agr. Food. Chem., 1966, v. 14, N I, p. 45-45.

128. Avido D.M., Oho J.W., Smith J.M. Pathologic, Physiology and Chemotherapy of Plasmodium bergheni. VIII. Liver Enzymes and the Sufluence of Hexachloroparaxylene (W.P. 17206). Experimental Parasitology, 1969, v. 25, N I, s. 283-290.

129. Baggot J.D. Clinical utility and limitations of pharmacokinetics. Pharmacologie et Toxicologie Weterinaires INRA. Ptibl. Paris, 1982 Les Colloques de r'J. N.R.A., 8, s. 301-304.

130. Braun W.H,, Waechter J.M. Sources of uncertainty in pharmacokinetik prediction. J. Anim. Sei., 1983» v.56, N I, s. 235-243.

131. Chung Huei-lan, Hsü Chin-piao, Ts'ao Wei-chi et al. Hexachlorparaxylol in treatment of Clonorchiasis sinensis in animals and man, Chinese Med. J., 1965, v. 84, N 4, s. 232-248.

132. Chung Huei-lan, Wu Hsuen-tsung, K'uang Chi-hUhg, K'o Hsiaoying, Ts'ao Wei-chi. The efficacy of hexachlorparaxylol and hexachlorophene in the treatment of two human cases of Fasciolop-siasis Baski. Chinese Medical Journal, 1965, v.84, H 8, s.533--534-•

133. Chung Huei-lan, IC'o Hsiao-ying, Ts*ao Wei-chi, Hsii Ching--piao. Hexachloroparaxylol as a new specific Remedy for curing paragonimiasis in cats and man. A. preliminary report. Chinese Medical Journal, 1965, v. 84, N II, s. 756-759.

134. Corba J«, Legeny J., Stoff a P., Krupicer I., Pacenovsky J. Farmakologiche ovpeyvnenic dikroceliozy pri prezuvavcoch. -Veterinärstvi, 1978, 28, IT 6, 274-275.

135. Dawes B. The migration of juvenile forms of Pasciola hepatica L. through the wall of the intestines in the mouse, with some observations on food and feeding. Parasitology, 1963» v.53, s. 109-122.

136. Dedek W., Schwarz H», Liebaug E. Abbau und Ruckstadsdy-namik des Anthelminthikums "^I-Rafoxanid in Blut, Milch, Pleich und Fett bei unterschiedlicher Dosierung am Rind« Arch. exp. Veterin'armed., 1977, v. 31, N 3, s.365-368.

137. Dedek W., Grahl R., Schwarz H., Ludwig P. Metabolismus, Rückstände und Ausscheidung des Anthelminthikums "^^I-Rafoxanid in Blut, Milch, Fleisch unf Urin am laktieren den Rind, Arch. exper. Vet. med. Leipzig 32 (1978) November, 6, s.951-955»

138. Diöuollo C. John, Miller James A., Mendelson Wilford L., Pagano Joseph E. Metabolik and tissue residue studies on parbenda-zole in sheep. J. Agr. and Food Chem., 1974-, v.22, N 6, s.9^8-953.

139. Downey W.K., Flynn Mary P., Aherne S.A. Organochlorine content of milts dairy products and animal feed ingredients: Ireland, 1971-1972. J. Dairy Res., 1975, v. 42, N I, s.21-29.

140. Edwards C.A. Environmental Pollution by Pesticides. London, Plenum B?ess, 1973, p. 542.

141. Edwards M.I., Residues the determination of nothing in everything. "Eroc. 3th Brit. Insectic. and Fungic. Oonf.Brighton, 1975, V.3". Nottingham (1976), s. 787-792.

142. Eljager E.F., Hütt M.P., Werlal L.M. Antimalarial substances XXII« Synthetic schistosomacides XV. Antimalarial and antischistosomal effects of -hexachloroxylene dere-vatives and relatel halogenated hydrocarbons. J. Med. Chim., 1970, v.I3, N 3, 42.

143. Flock D.K., Krosigk C.M. von, PLrchner F., Landgraf Helga. Genetische Veränderungen Einsichtlich Marek-BesiStenz und Produktionseigenschaften in Leghornkreuzungen. Arch. Geflugelk., 1975» V.39, N I, s. 21-28.

144. Fowler J.S.L. Some hepatotoxic actions of hexachloroet-hane and its metabolites in sheep. Brit. J. Pharmacol., 1969, v. 35, N 3» s. 530-5^2.

145. Haiton D.W. Observation on the nutrition of digenetic tremátodos. Parasitology, v. 54, N 4, s. 639-660.

146. Hashemy-Tonkabony S.E., Mosstofian B. Chlorinated Pesticide Ee si dues in Chicken Egg. Poultry Sei., 1979, v. 58, N 6, s. I432-I434.

147. Jollow D.J. The mechanism of solution and absorption of drugs. Rev. Can. Bid., 1973, v. 32, p. 7-19.

148. Juszkiewicz T., Stec J. Residues of chlororganic insecticides in fatty tissue of broulers rared in 5 different countries (Poland). Med. Weter., 1973, v. 29, N 4, s.229-231.

149. Konrad H., Gabrio T., Brunnert Christel. Untersuchungen über die Ausscheidung von Hexachlor-p-xylol mit der Kuchmilch.- Mh. Vet.-Med., 1978, 33, s.704-705.

150. Krondl A. Pressent understanding of the interaction of drugs and food during absorption. Can. Med. Assoc. J., 1970, v.103, N 4, s. 360-364.

151. Matthews H.B., Domanski J.J., Guthril F.E. Hair and its associated lipids as an excretory pathway for chlorinated hydrocarbons. Xenobiotica, 1976, v. 6, N 7, p. 425-429.

152. Моффитт P.A. Анализ остатков пестицидов в продуктах молочной промышленности. В кн.: Методы анализа пестицидов, п/р Н.Н.Мельникова, 1967, с. 68-89.

153. Rauchbach С. Actiunea hetolului asupra fasciolor la ovine. Revlsta de zool. med. veter., 1964, v. 16, N 6,s. 63-65.173» Hogs tad A., Skare I.U. Moderne metoder for analyse av tilsetningsstoffer. Norsk veterinaertidsskr., 1975,v.87, И 7-8, p. 466-471.

154. Rüdiger A. Untersuchungen über die Ursachen hoher Hexachlorbenzol-(HCB) Werte in Milch. Bayer Landw. Jahrbuch, 1978 , 8, s. 963-977.

155. Somlyay I., Posgay J., Varnagy Ъ., Szigeti T. Per-sistens pesticid maradekok vizsgalata haztaji szarmazasu szarvasmarhak zsir, izom-es majszoveteben. - Magyar allatorvo-sok lapja, 1981, 36 (9), p. 621-623.

156. Virji A.S., Laverty R. Bunamidine uptake and distribution in rats and dogs. Austral J. Exp. Biol, and Med. Sei., 1972, v. 50, H 2, p. 209-215.

157. Vodrazka J., Sutiak V., Cruz Cruz U.M., Cellarova E. Antikelmintika Sledovanie tribromsalanu v krvnej plazme a ovplyvnenie aktivity niektorych enzymov antifasciolokami pri ovciach. - Biol. chem. Vet. (Praha), 1979, XV (XXI), 4-, s.363--574.

158. Yokogawa M., Voshimura H., Koyama H., Furusawa A., Yoshida T. Studies on subacute and chronic toxicity of 1,4--bis-trichloromethylbenzol. Z.Tropenmed. und Parasitol.,1969, v. 20, N 3, p. 554-364.