Биологически активные вещества из личинок GALLERIA MELLONELLA и продуктов жизнедеятельности пчел как потенциальные кардиопротекторы и адаптогены при действии гиподинамических и стрессорных факторов на организм экспериментальных животных и человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.51, кандидат биологических наук Баканева, Валентина Федоровна

• Баканева, Валентина Федоровна
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Баканева, Валентина Федоровна

Введение.

Обзор литературы.

ГЛАВА 1. Биологически активные вещества в личинках Gallería mellonella и продуктах жизнедеятельности пчел.

1.1. Биологически активные вещества в личинках Gallería mellonella.

1.1.1. Антимикробные факторы.

1.1.2. Стероидные гармоны и у-аминомаслянная кислота в личинках Gallería mellonella.

1.2. Биологически активные вещества в продуктах жизнедеятельности пчел

1.2.1. Ферменты.

1.2.2. Антибиотические вещества.

1.2.3. Гормоны и медиаторы.

1.2.4. Витамины.

ГЛАВА 2. Стероидные гормоны насекомых и их действие в организме млекопитающих

ГЛАВА 3. Сердечно-сосудистая система как модель поиска новых средств лечения болезней сердца.

Экспериментальная часть.:.

ГЛАВА 4. Материалы и методы исследования.

4.1. Выращивание личинок Gallería mellonella и экстракция биологически активных веществ (БАВ).

4.2. Выделение и очистка биологически активных компонентов личинок Gallería mellonella.

4.3. Скрининг и изучение химического состава биологически активных компонент экстракта восковой моли

ГЛАВА 5. Объекты исследования.

5.1. Изучение сократительной активности сердца крысы in vitro и гладких мышц миометрия и сосудов.

5.2. Изучение энергетического обмена в сердце крысы.

5.3. Изучение цитотоксичности клеточных культур лимфобластоидных клеток человека линии Raj i.

ГЛАВА 6. Результаты и обсуждение.

6.1. Химическое разделение экстракта из большой восковой моли.

6.2. Биохимическая характеристика биологически активных фракций из личинок Gallería mellonella.

6.2.1. Молекулярная масса протеазы.

6.2.2. Оптимум рН протеазы.

6.2.3. Ингибиторный анализ протеазы.

6.2.4. Влияние ионов двухвалентных металлов на активность протеазы

6.2.5. Стабильность протеазы и устойчивость к действию органических растворителей.

6.3. Локализация протеазы в организме личинок Gallería mellonella.

6.4. Щелочная сериновая протеаза из личинок Gallería mellonella.

6.5. Физико-химическая характеристика биологически активной фракции 7-А

6.5.1. Растворимость и элементный состав.

6.5.2. Химический состав фракции 7-А-25.

6.6. Биологическая характеристика биологически активной фракции 3LH

6.6.1. Происхождение фактора стимулирующего сокращение гладких мышц миометрия и сосудов.

6.7. Влияние экстракта из личинок Gallería mellonella на гладкие мышцы миометрия и сосудов.

6.8. Влияние экстракта из личинок Gallería mellonella (большая восковая моль) на сердце крысы in vivo и in vitro.

6.8.1. Влияние экстракта большой восковой моли на сердце при физических нагрузках.

6.8.2. Влияние экстракта большой восковой моли на давление и свертываемость крови.

6.8.3. Кардиозащитное действие экстракта большой восковой моли.

6.8.4. Влияние на энергетический обмен и токсичность.

6.9. Растительные источники: что получают пчелы от медоносных растений

6.9.1. Влияние продуктов жизнедеятельности пчел на сердце, гладкие мышцы миометрия и сосуды.

6.9.2. Скрининговый анализ продуктов жизнедеятельности пчел.

6.9.3. Цитотоксичность продуктов пчелиной семьи на культурах лимфо-бластоидных клеток человека линии Raji.

6.9.4. Витаминно-лекарственные мёды. Реальность и перспектива их использования.

6.9.5. Практическое исследование препарата из экстракта большой восковой моли Gallería mellonella на автоматизированном компьютерном комплексе экспресс-диагностики.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологически активные вещества из личинок GALLERIA MELLONELLA и продуктов жизнедеятельности пчел как потенциальные кардиопротекторы и адаптогены при действии гиподинамических и стрессорных факторов на организм экспериментальных животных и человека»

В связи с негативными изменениями экологической ситуации во всем мире, особое внимание уделяется репродуктивному здоровью населения, как интегральному показателю развития и сохранения всего человечества. Коренным образом изменился характер лекарственных веществ. Пища и лекарства, слившись вместе в единый поток биологически активных веществ все больше выходят из-под контроля природы и попадают под господство технологии. Природная среда меняется в связи с трудовыми процессами человека. Проблема чистых экологических продуктов, лекарств стала актуальной на сегодняшний день. Встает вопрос, как найти такой оптимальный подход к природе, при котором противоречия между человеком и средой не стало бы губительным для жизни началом?

Данная работа предлагает альтернативное решение проблемы в области биологии и медицины, обратившись к изучению старинного народного целительного средства из восковой моли.

Восковая моль (Gallería mellonella) одно из немногих живых существ, эволюционно приспособленных к обитанию в пчелином улье. Своё название она получила за универсальную способность переваривать и усваивать пчелиный воск. Развиваясь в улье, личинки большой восковой моли разрушают соты и повреждают расплод пчел. По этой причине большая восковая моль не пользуется любовью пасечников, однако, мало кому известны её лечебные свойства, способные перекрыть наносимый ущерб. А между тем, личинки восковой моли издавна используются в русской народной медицине для лечения возрастных заболеваний и туберкулёза. Возрождению старинного средства мы обязаны московскому врачу-гомеопату С.А.Мухину.

Согласно клиническим данным препарат из личинок восковой моли способен заживлять туберкулезные каверны в легких, залечивать свежие рубцы миокарда, способствуя их рассасыванию и замещению сократительной тканью.

Чтобы ответить на вопрос об активном начале экстракта личинок Gallería mellonella, необходимы сравнительные данные о влиянии продуктов жизнедеятельности пчел на препарат сердечно-сосудистой системы, а также проанализировать, какой вклад вносят продукты пчеловодства, являясь одновременно и естественным кормом личинок, и продуктом питания и лечения человека, в создании лечебного препарата из личинок Gallería mellonella.

На основании полученных нами результатов и литературных данных представляется возможным высказать некоторые предположения о механизме терапевтического действия 5 экстракта личинок (Gallería mellonella), а также расширить спектр биологического действия продуктов жизнедеятельности пчел на клеточном уровне и на уровне целого организма млекопитающих и человека.

Цель работы заключалась в изучении биологически активных веществ из личинок (Gallería mellonella) и продуктов жизнедеятельности пчел (меда, цветочной пыльцы, перги, прополиса, маточного молочка) на сердечно-сосудистую систему и гладкие мышцы миометрия при действии гиподинамических и стрессорных факторов на организм экспериментальных животных и человека. Задачи:

- Изучить биохимический состав и физико-химические свойства биологически активных веществ (БАВ) в экстракте из личинок (Gallería mellonella);

- Исследовать действие экстракта из личинок (Gallería mellonella) на сердечнососудистую систему и гладкие мышцы миометрия экспериментальных животных (in vivo, in vitro) с целью оценки кардиопротекторных и адаптогенных свойств;

- Изучить влияние продуктов жизнедеятельности пчел (меда, перги, цветочной пыльцы, прополиса) на сократительную активность сердца и гладкие мышцы для оценки вклада продуктов пчеловодства в биологически активную добавку из личинок (Gallería mellonella);

- Использовать возможности автоматизированного компьютерного комплекса экспресс-диагностики при массовом мониторинге функционального состояния человека при приеме БАД (в виде экстракта из личинок Gallería mellonella). Научная новизна и практическая ценность работы:

В настоящей работе исследовано действие БАВ экстракта из личинок (Gallería mellonella) на сердечно-сосудистую систему и гладкие мышцы животных, а также расширен спектр биологического действия продуктов жизнедеятельности пчел.

Определено количественное содержание ацетилхолина и серотонина в продуктах пчеловодства (меде, перге, цветочной пыльце, прополисе).

Проведена оценка факторов, стимулирующих сократительную активность на препаратах гладких мышц и сердца крысы. Исследован химический состав выделенных биологически активных фракций. Показано, что присутствие данных факторов в экстракте обусловлено поглощением личинками (Gallería mellonella) продуктов жизнедеятельности пчел. Из личинок (Gallería mellonela) впервые выделен протеолитический фермент (сериновая протеаза), исследованы его биохимические характеристики (молекулярный вес, оптимум рН, влияние ионов 2-х валентных металлов и температуры на ферментативную активность), выявлена его локализация в организме насекомого. 6

На основании собственных и литературных данных обсуждается вопрос о терапевтическом действии препарата из личинок (Gallería mellonela).

Полученные данные расширяют представления о возможности использования БАВ экстракта из личинок (Gallería mellonela) для повышения устойчивости организма к неблагоприятным условиям и коррекции с его помощью патологических состояний.

Результаты работы могут представлять интерес для специалистов в областях: экологии биоресурсов, физиологии и биохимии насекомых, биологически активных соединений и медицины (профилактики и лечения заболеваний, используя альтернативные методы народной медицины), а также специалистов в области фармакосанации - разделе фармакологии о действии БАВ, поступающих в организм с пищей или в виде лекарственных препаратов. 7

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Восстановительная медицина, спортивная медицина, курортология и физиотерапия», Баканева, Валентина Федоровна

ВЫВОДЫ

1. Исследовано действие экстракта из личинок (Gallería mellonella Z.) на сердечнососудистую систему и гладкие мышцы миометрия. В составе экстракта обнаружены биологически активные вещества: а) фактор, стимулирующий сократительную активность сердечно-сосудистой системы и гладких мышц миометрия, - содержит кислые пептиды, имеет экзогенное происхождение и содержится в естественном корме личинок (Gallería mellonella) - темная восковая сушь; б) установлено, что сериновая протеаза, участвующая в рассасывании и растворении бляшек и тромбов в сосудах, миокардиальных клетках и легочной ткани, - локализована в кишечнике личинок и является их пищеварительным ферментом. Определена молекулярная масса сериновой протеазы (26 тыс.дальтон) , с оптимумом активности в сильнощелочной области между рН= 11-12.

2. Экстракт из личинок (Gallería mellonella) обладает выраженными адаптогенными свойствами, повышая выносливость животных к физическим нагрузкам, не содержит токсических компонентов, о чем свидетельствует LD 50 = 9,6.

3. В продуктах жизнедеятельности пчел (мед, перга, прополис цветочная пыльца) частично входящих в экстракт личинок определено количественное содержание ацетилхолина и серотонина. Установлено, что цитотоксическое действие прополиса проявляется в более низких концентрациях (50 мкг/мг), чем его антимикробное (500мкг/мг) действие.

4. Экстракт из личинок (Gallería mellonella) оказывает на сердечно-сосудистую систему и гладкие мышцы экспериментальных животных кардиопротекторные свойства, устраняя отрицательный эффект при передозировке сердечными гликозидами. Установлено, что экстракт из личинок (Gallería mellonella) стимулирует сократительную активность сердца (папилярные мышцы) на 55%, предсердия на 20%, гладкие мышцы (миометрия) на 80%, что свидетельствует о высокой эффективности экстракта.

5. Экстракт из личинок (Gallería mellonella) вызывает снижение артериального давления на кроликах, подвергавшихся гиподинамическим и стрессорным факторам, в среднем на 17%.

6. В процессе анализа динамики функционального состояния человека полипараметрическим методом отмечено позитивное влияние экстракта из личинок (Gallería mellonella) на функциональное состояние испытуемых, находящихся под действием гиподинамических и стрессорных факторов. Установлено, что:

57 а) в исходном состоянии у здоровых людей, в покое, соотношение пневмоцикла, кардиоцикла и вазоцикла характеризуется гармонической пропорцией с инвариантным коэффициентом; б) при развитии функционального напряжения возникают различные виды синхронизации автоколебаний по принципу резонанса; в) при перенапряжении и истощении адаптационных процессов (стресс-факторы) возникает десинхронизация автоколебаний с различной степенью отклонения от инвариантного коэффициента Прием БАД в виде экстракта их личинок (Gallería mellonella) снижает негативные явления десинхронизации колебательных процессов в сердечно-сосудистой системе.

58

Практические рекомендации.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Баканева, Валентина Федоровна, 2002 год

1. Апитерапия сегодня. Междунар. Ин-т пчеловодства. Бухарест, Апимоидия, 1982, 88 с.

2. Блатнер Р., Классен X, Денерт X., Дёринг X. Эксперименты на изолированных препаратах гладких мышц. М: Мир, 1983.

3. Коваленко Е.А., Березовский В.А., Энштейн И.М. Полярографическое определение кислорода в организме. М: Медицина, 1975.

4. Кузнецова Ю.И. Цели и методы разведения вощиной моли (Galleria mellonella L.). В кн. Массовое разведение насекомых. Кишенев, 1981. С. 26-30.

5. Иойриш H.H. Пчелы крылатые фармацевты. М., Наука, 1966, с. 101-105.

6. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессовых и ишемических повреждений сердца. М., Медицина, 1984, с. 125-130.59

7. Меерсон Ф.З., Казан В.Е., Козлов Ю.П., Белкина JI.M., Архипенко Ю.В. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе ишемического повреждения и анти-оксидантной защиты сердца. Кардиология, 1982, № 2, с. 81-93.

8. Меерсон Ф.З. Адаптация к стрессовым ситуациям и стресс-лимитирующие системы организма. В кн. Физиология адаптационных процессов. М., Наука, 1986, с. 521-631.

9. Поправко С.А. Прополис. Химический состав, биологическая активность. -В кн. Труды междунар. симпозиума по применению продуктов пчеловодства в медицине и ветеринарии. Бухарест, Апимоидия, 1972, с. 133-137.

10. Поправко С.А., Тихомирова В.И., Вулъфсон Н.С. Сравнительное изучение химического состава и биологической активности прополиса и его источников. В кн. Ценный продукт пчеловодства: прополис. Ред. Харнопс 4-е изд. Бухарест, Апи-мовдия, 1981, с. 35-37.

11. Поправко С.А., Соколов Н.В., Торгов И.В. Производные ненасыщенных ароматических спиртов в прополисе и смоле росного ладана. Химия природ, соед., 1984, №2, с. 152-160.

12. Росс Г., Росс Ч, Росс Д. Эпимоидия. М., Мир, 1988, 572 с.

13. Сырое В.Н. К механизму анаболического действия фитоэкдистероидов в организме млекопитающих. Биолог, науки, 1984, т. 251, № 11, С. 16-20.60

14. Сыров В.Н., Курмуков А.Г. Об анаболических и андрогенных свойствах эк-дистерона, циастерона и метиландростендиола. В кн. Вопросы фармакологии и токсикологии. Ред. Закирова У.Б. Ташкент, 1975, с. 92-94.

15. Сыров В.Н., Курмуков А.Г. Об Об анаболической активности фитоэкдизона экдистерона. Фармаколог, и токсикол., 1976, т. 39, № 6, с. 690-693.

16. Глинник А.Н., Гопанович В.Я. Антибактериальные свойства прополиса. Журн. ушн. нос. горл. Болезни, 1981, № 4, с. 75-76.

17. Маликов М.М., Есенбаева В.З., Асанова Д.Т. Влияние экдистерона на показатели углеводного обмена печени и миокарда в возрастном аспекте. Мед. журн. Узбекистана, 1982, № 11, с. 68-69.

18. Ташмухамедова М.А., Алшатов К. Т., Сыров В.Н. и др. Влияние фитоэкди-стероидов и стерооноболов на дыхание и окислительное фосфорелирование митохондрий печени крыс при аллоксановом диабате. Биол. науки, 1988, т. 261, № 9, с. 37-39. л

19. Тыщенко В.П. Физиология насекомых. М., Высшая школа, 1986, с. 303.

20. Шамрай Е.Ф., Федуров В.В. Витамин Д. Химическая природа и механизм физиологического действия. Успехи совр. биолог., 1968, т. 65, № 2, с. 186-201.

21. Харборн Д.Ж. Введение в экологическую биохимию. М., Мир, 1985, с. 312.

22. Холодова И. Д. Фитоэкдизоны биологически активные полигидроксилиро-ванные стерины. Укр. биохим. журн., 1979, т. 51, № 5, с. 560-575.

23. Ahmad Z., Sallemuddin М., Siddigt М. Alkaline protease in the larvae of thearmy worm, spodoptera litura Insect Biochem., 1976, v. 6, p. 501-505.

24. Ahmad Z. et al. Purification and characterization of three alkaline proteases from the gut of the larva of army worm, spodoptera linura insect Biochem., 1980, v. 10, p. 667-673.61

25. Addel-Wahab S.M., Selim M.A. Shenata M.M. Detection and estimation of neurohor-monal substance in Noney and royat jilly. Egypt. J. Pharm. Sei., 1979 (publ. 1982), v. 20, p. 353-363.

26. Ban J., Popovic S., May singer D. Cytostatis effects of propolis in vitro. Acta Pharm. Jugoslav., 1983, v. 33, p. 245-255. Chem. Abs. 100: 61486t.

27. Bennet R.D., Ko S.T., Heftmann E. Isolation of estrone and cholesterol from the date palm Phoenix dactylifera L. Phytichem., 1966, v. 5, p. 231-235.

28. Bergner K.G., Sahir D.M. Proteins of honey. IV. Fractionation and characterization of honey amylase by electrophoresis and isoelectrric focusing. -Z.Lebensm. Unters.Forsch., 1979, Dl. 169, s. 159-164. Chem.abs. 91: 188494 v.

29. Bogdanov S. Characterization of antibacterial substrances in honey. Lebensm.-Wiss.Technol., 1984, v. 17(2), p. 74-76.

30. Burdette W.J. Bioassay of human tissue for ecdysone. Proc.Soc.Exptl.Biol.Med., 1962, v. 110, p. 730-731.

31. Burdette W.J. The concept of hormonal heterophylly. In: Invertebrate endocrynology and hormonal heterophylly. Ed. by Burdette W.J. Berlin etc., Springer, 1974(a), p. 331-337.

32. Burdette W.J. Invertebrate hormones and tumors. In: Ibidus, 1974(b), p. 351367.

33. Burdette W.J., Coda R.L. Effect of ecdysone on inverparation of 14C-leucine into hepatic protein in vitro. Proc.Soc.Exptl.Biol.Med., 1963, v. 112, p. 216-217.

34. Catalan R.E., Aragones M.D., Martinez A.M. Effect of ecdysterone on the cyclic AMP and cyclic GMP in mouse plasma. Biochim.Biophys.Res.Commun., 1979(a), v. 87, p. 1018-1023.62

35. Catalan R.E., Aragones M.D., Martinez A.M. Effect of ecdysterone on the cyclic AMP-protein kinase system in mouse liver. Biochim.Biophys.Res.Commun., 1979(b), v. 89, p. 44-49.

36. Catalan R.E., Martinez A.M., Aragones M.D., Miguel B.G., Robles A., GodoyJ.E. Effect of ecdysterone treatment on the cyclic AMP-protein kinase system in adipose tissue. J.Steroid Biochem., 1982(a), v. 16, p. 573-576.

37. Catalan R.E., Martinez A.M., Aragones M.D. In vitro effect of ecdysterone on protein kinase activity. Comp.Biochem.Physiol., 1982(b), v. 71B, p. 301-303.

38. Gizmarik J., Trupl J. Propolis-Wirkung auf Hautpilze. Pharmazie, 1976, Bd. 31, No 1, s. 55.

39. Cohen J.A., Oosterbaan R.A., Berends F. Organophosphorus compounds. In: Methods in enzymology. N.Y. and London, Academic Press, 1967, v. 11, p. 686-702.

40. Davis B.J. Disc electrophoresis II. Method and application to himan serum proteins. Ann.N.Y.Acad.Sci., 1964, v. 121, p. 404-427.

41. Dixit P.K., Patel N.G. Insulin-like activity in larval foods of the honeybee. -Nature, 1964, v. 202, p. 189-190.

42. Dudziak B., Jozwik Z., Paszewski A. Experiments on the activity of several extracts from the larvae of Galleria mellonella L. On Mycobacterium tuberculosis 607. -Ann.Univ.M.CurieSklodowska, 1962, v. 17, No 14C, p. 454-461.

43. Eguchi M., Iwamoto A. Alkaline proteases in the midgut tissue and digestive fluid of the silkworm, Bombyx mori. Insect Biochem., 1976, v. 6, p. 491-496.

44. Eguchi M., Iwamoto A. Comparison of three alkaline proteases from digestive fluid of the silkworm, Bombyx mori. Comp.Biochem.Physiol., 1982, v. 71B, p. 663668.63

45. Ellnain-WojtaszekM., Hladon B., Bulka W., Skrzypczak L., SzafarekP., Chodera A., Kowalewski Z. Isolation and study of cytostatic activity of components of propolis DEEP ether fraction. HerbaPol., 1982, v. 28 (1-2), p. 51-59. Chem.abs. 98: 122857d.

46. Esanu V., Prahoveanu E., Grisan I., Cioca A. The effect of aqueous propolis extract, of rutin and of rutin-quercetin mixture on experimental influenza virus infection in mice. Rev.Roum.Med. Virol., 1981, v. 32(3), p. 213-215, Chem.abs. 96: 135370y.

47. Farag R.S., Ahmed A.I., Rashad S.E., Ewies M.A. Unsaponifiable matter of six pollens collected by honeybees in Egypt. J.Aptic.Res., 1980, v. 19 (4), p. 248-254. Chem.abs.: 94: 188637f.

48. Gilbert L.I., Schneiderman H.A. Occurence of substances with juvenile hormone activity in adrenal cortex of vertebrates. Science, 1958, v. 128, p. 844.

49. Gold A.M. Sulfonylation with sulfonyl halides. In: Methods in enzymology. N.Y. and London, Academic Press, 1967, v. 11, p. 706-711.

50. Hikino H., Takemoto T. Arthopoid molting hormones from plants Achyranthes and Cyathula. Naturwissenschaften, 1972, v. 59, p. 91-98.

51. Hink W.F., Briggs J.B. Bactericidal factors in haemolymph from normal and immune wax moth larvae, Galleria mellonella. J.Insect.Physiol, 1968, v. 14, p. 10251034.

52. Hoffmann D., Hultmark D., Boman H.G. Insect immunity: Galleria mellonella and ither Lppidoptera have cecropia-P9-like factors active against gram negative bacteria. Insect. Biochem., 1981, v. 11, p. 537-548.

53. Horn D.H.S., Bergamasco D. Chemistry of ecdysteroids. In: Comprehensive insect physiology, biochemistry and pharmacology. Ed. by Kerkut G.A., Gilbert L.I. Oxford etc., Pergamon Press, 1985, v. 7, p. 185-248.64

54. Hsiao T.H., Hsiao C. Ecdysteroids in the ovary and the egg of the great wax moth. J.Insect Physiol., 1979, v. 25, p. 45-52.

55. Ionescu M., Garagiani S. Free amino acids contained in the bee-gathered pollen around the Baneasa-Lehliu area. Apic.Rom., 1977, v. 52 (10), p. 16-17.

56. Ivanov Ts. Glucose oxidase, catalase and proteolytic enzyme activity and enzyme inactivation in heated and preserved honey. Zhivotnovud.Nauki, 1981, v. 18 (6), p. 119125. Chem.abs. 96: 179755g.

57. Ishaaya I., Moore I., Joseph D. Protease and amylase activity in larvae of the Egyptian cotton worm Spodoptera littoralis. J.Insect.Physiol., 1971, v. 17, p. 945-953.

58. Kaczmarek F., Debowski W.J. a- and (3-amylase in propolis. Acta Pol.Pharm., 1983, v. 40(1), p. 121. Chem.abs. 99: 119344z.

59. Kerkut G.A., Gilbert L.I., editors. Compehensive insect physiology, biochemistry and pharmacology. Oxford etc., Pergamon Press, v. 1-13, 1985.

60. Kramer K.J., Tager H.S., Childs C.N., Speirs R.D. Insulin-like hypoglycemic and immunological activities in honeybee royal jelly. J.Insect Physiol., 1977, v. 23, p. 293295.

61. Kramer K.J., Childs C.N., Spiers R.D., Jacobs R.M. Purification of insulin-like peptides from insect hemolymph and royal jelly. Insect Biochem., 1982, v. 12, p. 9198.

62. Kvanta E. Sterols in pollen. Acta Chem.Scand., 1968, v. 22, p. 2161-2165.65

63. Kucera M., Sehnal F., Mala J. Effect of developmental derangements on the proteolytic and protease-inhibitory activities in Galleria mellonella (Insecta). -Comp.Biochem.Physiol., 1984, v. 79B, p. 255-261.

64. Kuzniecow A., Wojciehowski E. Wplyw wyciagow z larw Galleria mellonella na wzrost pratkow gruzlicy. Med.Dosw.Microbiol., 1950, v. 2, No 2, p. 246-249.

65. Laychock S.G. The biochemistry of cell activation as related to the putative actions of flavonoids. In: Plant flavonoids in biology and medicine: biochemical, pharmacological and structure-activity relationships. Alan R. Liss, Inc., 1986, p. 215-229.

66. Lecomte J., Bourdon V., Damas J., Leclercq M. Presence of noradrenaline, free and conjugated, in bees honey. Arch.Int.Physiol.Biochim., 1976, v. 84 (4), p. 877-878. Chem.abs. 86: 86417b.

67. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J.Biol.Chem., 1951, v. 193, p. 265-275.

68. LupienP.J., Hinse C., Chaudhary K.D. Ecdysone as a hypocholesterolemic agent. Arch.Int.Physiol.Biochim., 1969, v. 77 (2), p. 206-212.

69. Malaiu A., Polos E., Cucu N. Data on the effect of temperature on activity of some honey enzymes. Apic.Rom., 1979, v. 54 (10), p. 4-7. Chem.abs. 92: 213637z.

70. Mankiewicz E. The lipidolytic enzymes of larvae of Galleria mellonella. Ca-nad.J.Res., 1949, v. 27, No 3, p. 195-201.

71. Mankiewicz E. The action of lipidolytic enzymws of larvae of Galleria mellonella on virulent Mycobacterium tuberculosis. Canad.J.Med.Sci., 1952, v. 30, No 1, p. 106112.

72. Masuoka M., Prita S., Shino A., Matsuzawa T., Nakayama R. Pharmacological studies of insect metamorphosing hormone: Ponasterone A, ecdysterone, and inokoster-one in the rat. Jap.J.Pharmacol., 1970, v. 20, p. 142-156.66

73. Matsuda H., Kawaba Т., Yamamoto Y. Pharmacological studies of insect meta-morp-hosing steroids from Achyranthis radix. Folia Pharmacol. Japon., 1970, v. 66, p. 551-563.

74. Matsuda H., Kawaba Т., Yamamoto Y, Ogawa S. Effect of ecdysterone on experimental atherosklerosis in rabbit. Folia Pharmacol. Japon., 1974, v. 70, p. 325-339.

75. Meresta L., Meresta T. Effect of pH on bactericidal activity of propolis. -Bull.Vet.Inst.Pulawy, 1980, v. 24 (1-4), p. 21-25.

76. Metalnikov S. I/immunite naturelle et acquise chez la chenille de Galleria mellonella. Annales de llnstitut Pasteur, 1920, v. 34, p. 888-909.

77. Metzner J., Bekemeier H., Paintz M., Schneidewind E. Antimicrobial activity of propolis and propolis constituents. Pharmazie, 1979, Bd. 34 (2), s. 97-102. Chem.abs. 91: 84014x.

78. Miller J.A. Call of the tumor: Chemical trigger for blood vessel growth. -Sci.News, 1985, v. 128, No 14, p. 213.

79. Miller J. W., Kramer K.J., Law J.H. Isolation and partial characterization of the larval midgut trypsin from the tobacco hornworm, Manduca sexta johannson (Lepidop-tera: Sphingidae). Comp.Biochem.Physiol., 1974, v. 48B, p. 117-129.

80. Nakanishi K, Koreeda M., Dasaki S., Chang M., Hsu H.Y. Insect hormones. I. The structure of ponasterone A, an insect molting hormone from the leaves of Podocar-pus nakaii Hay. J.Chem.Soc., Chem.Commun., 1966, p. 915-917.67

81. Ogawa S., Nishimoto N., Matsuda H. Pharmacology of ecdysones in vertebrates. In: Insect endocrynology and hormonal heterophylly. Ed. By Burdette W.J. Berlin etc., Springer, 1974, p. 341-344.

82. Olivier H.R. Antibiotic action of an extract of Galleria mellonella. Nature, 1947, v. 159, No 4046, p. 685.

83. Olivieri M., Ginocchi G. Antimicrobial effect of propolis. Cron.Farm., 1981, v. 24 (2), p. 94-96. Chem.abs. : 144577c.

84. Paintz M., Metzner J. Local anesthetic effect of propolis and some of its constituents. Pharmazie, 1979, v. 34 (12), p. 839-841. Chem.abs. 92: 174470t.

85. Paszewski A. Influence of an enzyme extract from the larvae of Galleria mellonella together with penicillin or sulphatiazole on the growth of Mycobacterium tuberculosis 607. Ann.Univ.M. Curie-Sklodowska, 1959, v. 14, No 20C, p. 435-438.

86. Plantevin G., DeReggi M., Nardon C. Changes in ecdysteroid and juvenile hormone titres in the hemolymph of Galleria mellonella larvae and pupae. -Gen.Comp.Endocrynol., 1984, v. 56, p. 218-230.

87. Powning R.F. and Davidson W.J. Studies on insect bacteriolytic enzymes-1. Ly-sozyme in haemolymph of Galleria mellonella and Bombyx mori. -Comp.Biochem.Physiol., 1973, v. 45B, p.669-681.

88. Pritchett D. W., Young S.Y., Geren C.R. Proteolytic activity in the digestive fluid of larvae of Trichoplusia ni. Insect Biochem., 1981, v. 11, p. 523-526.

89. Reisfeld R.A., Lewis U.J., Williams D.E. Disc electrophoresis of basic proteins and peptides on polyacrylamide gels.-Nature, 1962, v. 195, p. 281-283.

90. Riddiford L.M. Hormone action at the cellular laval. In: Comprehensive insect physiology, biochemistry and pharmacology. Ed. By Kerkut G.A., Gibbert L.I., Per-gamon Press, Oxford etc., 1985, v. 8, p. 37-84.68

91. Riordan J.F., Vallee B.L. Reactions with N-ethylmaleimide and p-mercuribenzoate. In: Methods in enzymology. N.Y. and London, Academic Press, 1967, v. 11, p. 541-548.

92. Ross R., Glomset J., Kariya B., Marker L. A platelet-dependent serum factor that stimulates the proliferation of arterial smooth muscle cells in vitro. PNAS USA, 1974, v. 71, p. 1207-1210.

93. Ross R., Vogel A. The platelet-derived growth factor. Cell, 1978, v. 14, p. 203210.

94. Saden-Krehula M., Tajic M., Kolbah D. Testosterone, episterone and andro-stenedione in the pollen of Scots pine (P.Silvestris L.). Experientia, 1971, v. 27, p. 108109.

95. Saden-Krehula M., Tajic M., Kolbah D. Investigation of some steroid hormones and their conjugates in pollen of Pinus nigra Ar.Separating steroids by thin-layer chromatography. Biol.Zbl., 1976, v. 95, p. 223-226.

96. Sasaki T., Suzuki Y. Alkaline proteases in digestive juice of the silkworm, Bom-byz mori. Biochim.Biophys.Acta, 1982, v. 703, p.1-12.

97. Schneidewind E.M., Kala H., Linzer B., Metzner J. Zur Kenntnis der Inhaltsstoffe von Propolis. Pharmazie, 1975, Bd. 30 (12), s. 803.

98. Sehnal F., Maroy P., Mala J. Regulation and significance of ecdysteroid titres fluctuation in lepidopterous larvae and puper. J.Insect Physiol., 1981, v. 27, p. 535-544.

99. Slama K Physiological effects of ecdysoids. In: Insect hormones and bioana-loques. Slama K., Romanuc M., Sorm F. Wien, Springer, 1974, p. 339-387.

100. Stephens J.M. and Marshall J.H. Some properties of an immune factor isolated from the blood of actively immunized wax moth larvae. Canad. J.Microbiol., 1962, v. 8, p. 719-725.i

101. Takenaka Т., Echigo T. Properties and transglucosidation action of a-glucosidase of honey. Part 2. Tamagawa Daigaki Nogakubu Kenkyu Hokoku, 1978, No 18, p. 22-31. Chem.abs. 91: 86208n.

102. Uchiyama M. and Otaka T. Phytoecdysones and protein metabolism in mammalia. In: Invertebrate endocrynology and hormonal heterophylly. Ed. By Burdette W.J., Springer. Berlin etc., 1974, p. 375-400.

103. Valente D., Marques L.A.C., Mendes E.G. The acetylcholine content of honeys from different bees as determined in four-point-assays. Comp.BiochemPhysiol., 1981, v.69C, p. 161-164.

104. Ward C.W. Properties and specificity of the major metal-chelator-sensitive proteinase in the keratinolytic larvae of the webbing clothes moth. BiochemBiophys.Acta, 1975(a), v. 384, p. 215-227.

105. White J. W. Jr., Composition of honey. In: Honey: a comprehensive survey. Ed. By Crane E. Crane, Russak and Company Inc., N.Y., 1975, p. 157-206.

106. Wigglesworth V.B. The principles of insect physiology. London, Methuen and Co Ltd., 1967,741р.

107. Williams C.M., MoorheadL.V., Pulis J.F. Juvenile hormone in thymus, human placenta and other mammalian organs. Nature, 1959, v. 183, p., 405.

108. Мухин С.А. О некоторых вопросах гомеопатического лечения болезней сердца (О новом подходе в лечении инфаркта миокарда). Московское научно-медицинское общество врачей-гомеопатов. М., 1961. 42 с.70