Взаимоотношения Paramecium bursaria (Ciliophora) с вирусами хлорелл (cem. phycodnaviridae) в трехкомпонентной симбиотической системе Paramecium bursaria - Chlorella sp. - вирус тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.08, кандидат биологических наук Ященко, Варвара Владимировна

• Ященко, Варвара Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ященко, Варвара Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1 Введение.

2 Цели и задачи.

3 Обзор литературы.

3.1 Феномен симбиоза P. bursaria - Chlorella.

3.2 Общая характеристика P. bursaria.

3.3 Общая характеристика симбиотических водорослей Chlorella sp.

3.4 Систематическое положение симбиотических хлорелл.

3.5 Формирование и поддержание симбиоза P. bursaria — Chlorella.

3.6 Координация жизненных циклов хозяина и симбиотических хлорелл.

3.7 Специфичность взаимоотношений P. bursaria- Chlorella.

3.8 Общая характеристика вирусов хлорелл.

3.9 Филогенетические отношения вирусов хлорелл.

3.10 Жизненные циклы вирусов.

3.11 Литический цикл вирусов хлорелл P. bursaria.

3.12 Протесты и вирусы.

3.13 Поддержание вирусов хлорелл в природных водоемах и в симбиотической системе P. bursaria - Chlorella.

4 Материалы и методы.

4.1 Материалы.

4.1.1 Клоны P. bursaria.

4.1.2 Клоны P. caudatum.

4.1.3 Штаммы хлорелл.

4.1.4 Штаммы вирусов хлорелл.

4.2 Методы.

4.2.1 Методы культивирования инфузорий.

4.2.2 Тестирование клонов P. bursaria на наличие вирусов и определение титра вирусов.

4.2.3 Пульс-Электрофорез.

4.2.4 Гибридизация по Саузерну.

4.2.5 Антитела и непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание клеток P. bursaria.

4.2.6 Визуализация вирусов при помощи красителей SYTOX.

4.2.7 Конфокальная микроскопия.

4.2.8 Трансмиссионная электронная микроскопия (ТЭМ).

4.2.9 Метод количественного стереологического анализа.

Результаты.

5.1 Скрининг клонов P. bursaria на наличие вирусов.

5.2 Обнаружение вирусов в клонах P. bursaria разных сингенов.

5.3 Идентификация вирусов хлорелл в симбиотической системе P.bursaria - Chlorella методом пульс-электрофореза.

5.3.1 Сравнительный анализ ПЭФ-профилей P.bursaria и хлорелл.

5.3.2 Исследование природы полосы размером около 300 т.п.н. на электрокариотипах клонов P. bursaria.

5.3.3 Локализация интегрированной ДНК вируса в симбиотической системе P. bursaria — Chlorella - вирус.

5.3.4 Локализация неинтегрированной ДНК в симбиотической системе P. bursaria - Chlorella - вирус.

5.3.5 Оценка количества вирусных геномов.

5.4 Исследование локализации вирусных частиц в ассоциации с клеткой P. bursaria.

5.4.1 Идентификация вирусов в трехкомпонентной симбиотической системе P. bursaria - Chlorella - вирус методом непрямой иммунофлюоресценции.

5.4.2 Конфокальная микроскопия клеток P. bursaria окрашенных красителем SYTOX in vivo.

5.4.3 Конфокальная микроскопия клеток P. bursaria in vivo инкубированных с вирусами, предварительно окрашенными красителем SYTOX.

5.5 Исследование вирусов и парамеций методом ТЭМ.

5.5.1 Локализация вирусных частиц в симбиотической системе P. bursaria - Chlorella - вирус.

5.5.2 Распределение вирусных частиц на поверхности P. bursaria.

5.5.3 Локализация вирусов в безвирусной системе P. bursaria — Chlorella.

5.5.4 Локализация вирусов в ассоциации с P. caudatum.

Обсуждение.

6.1 Исследование симбиотической системы P. bursaria - Chlorella -вирус методом ПЭФ и гибридизации по Саузерну.

6.2 Локализация вирусных частиц в симбиотической системе P. bursaria -Chlorella — вирус.

6.3 Специфичность взаимодействия вирусов хлорелл парамеций и Р. bursaria.

6.4 Ассоциация вирусных частиц с цилиатурой ротового аппарата Р. bursaria.

6.5 Распределение вирусных частиц на поверхности клетки парамеции.

6.6 Роль P. bursaria в системе P. bursaria - Chlorella - вирус.

6.7 Роль вирусов в эволюции и экологии симбиоза P. bursaria — Chlorella.

6.8 Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Взаимоотношения Paramecium bursaria (Ciliophora) с вирусами хлорелл (cem. phycodnaviridae) в трехкомпонентной симбиотической системе Paramecium bursaria - Chlorella sp. - вирус»

Термин «симбиоз» был предложен Де Бари в 1979 году. Симбиоз (от Греч, cruv - вместе, {Згсоак; - жизнь) - форма взаимоотношений при сожительстве неродственных организмов (Вагу, 1879). Сегодня под термином симбиоз понимают совместное сосуществование двух или более видов (Margulis, Fester, 1992; Douglas, 1995). Понимание симбиотических отношений имеет большое фундаментальное значение, как в зоологии, так и в микробиологии, а также практическую значимость для медицинской микробиологии (Осипов, Подлипаев, 1981; Margulis, Chapman, 1998).Симбиотические отношения можно рассматривать как модель для изучения межклеточных взаимодействий, иммунных механизмов (Gerasheiiko et al., 2000). Признано, что симбиоз - это один из основных механизмов прогрессивной эволюции в биосфере (Bhattacharya et al., 2007).Протисты представляют широкий спектр возможностей для исследований симбиотических отношений и симбиогенеза. Они формируют симбиотические ассоциации как с про- , так и с эукариотическими организмами, включая бактерии, археи, грибы и микроводоросли (Epstein et al., 1998; Осипов, Подлршаев, 1981; Reisser et al., 1985).Симбиотические отношения Paramecium bursaria (Ciliophora, Oligohymenophorea) и зеленой водоросли Chlorella (Chlorellaceae, Trebouxiophyceae) представляют собой пример классического симбиоза (Karakashian et all, 1968; Reisser, 1986). Эта симбиотическая система является одной из наиболее активно изучаемых систем. Исследования проводятся во многих лабораториях мира уже более полувека.Хлореллы, выделенные из клеток парамеций, специфически инфицируются гигантскими ДНК-содержащими вирусами из рода Chlorovirus семейства Phycodnaviridae (Van Etten, Meints, 1999). Это активные литические вирусы, они не инфицируют свободноживущие хлореллы и не атакуют хлореллы, находящиеся в симбиотических вакуолях внутри Р. bursaria (Van Ettenetal, 1991).Система P. bursaria - Chlorella sp. представляет особый интерес в качестве модельной вирус-содержащей симбиотической системы.Исследования данной многокомпонентной симбиотической системы невозможны без представления об особенностях каждого из партнеров как отдельного организма. Для многих систем раздельное культивирование участников симбиоза весьма трудоемко, а часто и невозможно. В выбранной нами системе этой проблемы не возникает. Участников симбиоза можно разделить и культивировать отдельно (Douglas, Huss, 1986; Kavako et al., 2005). С другой стороны, при изоляции клонов инфузорий и их культивировании сохраняются все три компонента симбиотической системы (Мигунова и др., 2000). Методика культивирования инфузорий Р.bursaria в лабораторных условиях давно отработана (Sonnebom, 1970).В распоряжении лаборатории кариологии одноклеточных Биологического НИИ СПбГУ (после 2008 года лаборатории кариологии одноклеточных биолого-почвенного факультета СПбГУ) имеется уникальная коллекция клонов P.biirsaria из разных районов земного шара (Европа, Европейская часть России, практически все республики бывшего СССР, Япония, Китай, США). Коллекция ежегодно пополняется. Для каждого клона Р.bursaria определена сингенная принадлежность. В сотрудничестве с лабораторией микробиологии БиНИИ СпбГУ (после 2008 года лаборатории микробиологии биолого-почвенного факультета СПбГУ), которая обладает коллекцией симбиотических хлорелл и вирусов, значительная часть (около 100) клонов P.biirsaria была протестирована на наличие вируса. Материалы этих коллекций стали базой для масштабного исследования симбиотической системы Р. bursaria - Chlorella sp. и вирусов хлорелл.2 ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ. Целью настоящей работы стало исследование роли Р. bursaria в трехкомпонентной симбиотической системе Р. bursaria - Chlorella - вирус. В связи с этим были поставлены следующие задачи: 1. выбрать адекватные методы и адаптировать их для работы с полноценной трехкомпонентной симбиотической системой Р. bursaria - Chlorella - вирус; 2. детектировать вирусную ДНК в симбиотической системе Р. bursaria -Chlorella - вирус с помощью метода пульс-электрофореза, определить, в интегрированном или свободном состоянии вирусная ДНК находится в системе.3. определить с помощью световой и электронной микроскопии локализацию вирусных частиц в симбиотической системе Р. bursaria -Chlorella - вирус.4. определить, существует ли специфичность между парамециями (видами, внутривидовыми группами) и вирусами симбиотических хлорелл парамеций.

Заключение диссертации по теме «Зоология», Ященко, Варвара Владимировна

6.8 Выводы

Впервые, с применением широкого спектра методик, было проведено исследование трехкомпонетной симбиотической системы P. bursaria -Chlorella - вирус. Полученные данные позволили сделать следующие выводы:

1. Вирусы хлорелл не являются обязательным компонентом природных симбиотических ассоциаций P. bursaria - Chlorella; в природе встречаются как вируссодержащие так и безвирусные клетки парамеций

2. Существует специфичность вируса по отношению к P. bursaria определенного сингена: вирусы Pbi типа (северный экотип)

139 характерны для сингенов 1 и 2, вирусы NC64A типа (южный экотип) - для сингенов 3 и 4.

3. В вируссодержащей симбиотической системе методом пульсэлектрофореза выявляется препаративное количество неинтегрированной вирусной ДНК, которая ассоциирована с клеткой P. bursaria. На одну клетку P. bursaria приходится порядка 100 копий вирусного генома. Интегрированные копии не выявляются.

4. Вирусные частицы находятся только на поверхности клетки Р. bursaria. Они располагаются преимущественно в ресничных карманах и могут быть прикреплены к плазматической мембране тонкими фибриллами.

5. Вирусные частицы встречаются во всех зонах поверхности клетки парамеции, но распределены неравномерно: предпочтительно локализуются в средней, правой зоне на брюшной стороне клетки P. bursaria, а также в буккальной полости.

6. Ассоциация с клеткой P. bursaria обеспечивает надежное воспроизведение вирусов: в момент гибели парамеции и высвобождения в среду хлорелл вирусы всегда находяться в области гарантированно высокой локальной концентрации их хозяев - хлорелл.

7. Предложена схема жизненного цикла вируса в трехкомпонентной симбиотической системе P. bursaria — Chlorella - вирус:

1) вирусные частицы аккумулируются на поверхности клетки парамеции, содержащей в цитоплазме симбиотические хлореллы;

2) клетка P. bursaria разрушается, хлореллы попадают во внешнюю среду; вирусные частицы диссоциируют от ПМ парамеции и прикрепляются к клеточной стенке хлорелл;

3) популяция вышедших во внешнюю среду хлорелл инфицируется вирусом, вирусы мультиплицируются и, в результате лизиса клеток хлорелл, оказываются во внешней среде;

4) (соответствует пункту 1) вирусные частицы аккумулируются на поверхности клетки парамеции, содержащей в цитоплазме симбиотические хлореллы.

БЛАГОДАРНОСТЬ Автор глубоко признателен научному руководителю Раутиан Марии Сергеевне за терпение, поддержку и критические замечания, Потехину Алексею Анатольевичу и Некрасовой Ирине Владимировне за ценные критические замечания и всестороннюю поддержку, Инне Исааковне Скобло за внимание и ценные советы. Автор благодарит за помощь в выполнении данной работы и предоставление материала Ольгу Владимировну Гаврилову, Константина Васильевича Квитко и Александру Владимировну Мигунову, Светлану Анатольевну Галкину, Татьяну Вадимовну Куликову. Автор благодарен коллективам лаборатории кариологии одноклеточных БиНИИ СПбГУ и центра «ХРОМАС» СПбГУ.

Автор благодарит за сотрудничество и критические замечания: Джеймса Ван Эттена, Дэвида Данигана и Ирину Агаркову, Department of Plant Pathology, University of Nebraska, Линкольн, США; Кьетиля Якобсена, Center for Ecological and Evolutionary Synthesis (CEES), Department of Biology, Осло, Норвегия, Норберта Pooca и Тове Маргарет Бакар, Department of Molecular Biosciences, Осло, Норвегия.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ященко, Варвара Владимировна, 2009 год

1. Инге-Вечтомов С.Г., Андрианова В.М. Каталог Петергофской генетической коллекции дрожжей Saccharomyces cerevisiae. J1.: Изд-во Ленинградского Университета. 1988. 53 с.

2. Квитко К.В., Громов Б.В. Новые находки титруемого инфекционного вируса хлореллы // Докл. АН СССР. 1984. Т. 279, № 4. С. 998-999.

3. Макино Т., Охаси М., Докэ X., Макино К. Контроль качества с помощью персональных компьютеров// Москва. Машиностроение. 1986.224 с.

4. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование.// Москва. Мир. 1984. 479 с.

5. Межевая Е.В., Бериташвили Д.Р., Степанова В.П., Яровой Б.Ф., Захаров И.А. Изучение интеграции плазмиды pYF91 в дрожжевые хромосомы методом пульс-фореза // Биополимеры и клетка. 1990. Т.6, № 3. С. 90-93.

6. Мигунова А.В., Квитко К.В., Прокошева М.Ю., Литвинов Д.Б. Влияние температуры на размножение Paramecium bursaria,

7. Chlorella, PBCV-1 вирусов в системе тройного симбиоза// Вестник СПбГУ. 2000. Сер.З. Биол. вып. 1, № 3. С. 65-75.

8. Мигунова А.В., Квитко К.В., Скобло И.И., Прокошева М.Ю. Экология симбиотической системы: Paramecium bursaria — Chlorella -virus // Вестник СПбГУ. 1999. Сер.З. Биол. вып. 3, № 17. С. 131-144.

9. Ю.Мигунова А.В. Исследование водорослей в симбиотической систмеме Paramecium bursaria — Chlorella sp. вирус PBCV (сем. Phycodnaviridae) //Канд. Дисс. СПбГУ.Санкт-Петербург. 2000. 123 с.

10. П.Осипов Д.В. Подлипаев С.А. Теоретические и практические аспекты изучения взаимоотношений простейших с микроорганизмами. // В кн.: Протозоология. Вып. 6. Л.: Наука. 1981. С. 5-30.

11. Осипов Д.В., Скобло И.И., Борхсениус О.Н., Раутиан М.С., Подлипаев С.А. Holospora acuminata — новый вид симбиотической бактерии микронуклеуса инфузории Paramecium bursariaH Цитология. 1980. Т. 22, № 8. С. 922-929.

12. З.Осипов Д.В., Борхсениус О.Н., Скобло И.И., Лебедева Н.А.// Цитология. 1994. Т. 36, № 7. С. 718-725.

13. Пичугин A.M., Галкина С.А., Потехин А.А., Пунина Е.О., Раутиан М.С., Родионов А.В. Определение минимального размера микрохромосом курицы Gallus gallus domesticus методом пульс-электрофореза // Генетика. 2001. Т. 37, № 5. С. 657-660.

14. Потехин А.А., Раутиан М.С., Бригге Т. Геном инфузории Paramecium caudatum: анализ методом пульс-электрофореза// Генетика. 1999. Т. 35, № 12. С. 1413-1420.

15. Скобло И.И. Распространение сингенов инфузории Paramecium bursaria на территории Советского союза // Тезисы докладов П-го всесоюзного симпозиума протозоологов. Экология морских и пресноводных простейших. 1989. С. 63.

16. Скобло И.И., Лебедева Н.А. Инфекция ядерного аппарата инфузории Paramecium bursaria симбиотическими бактериями Holospora curviuscula П Цитология. 1986. Т. 28. № 3. С.367-372

17. Тимофеева А.С., Раутиан М.С. Определение размера генома внутриядерной симбиотической бактерии Holospora undulata методом пульс-электрофореза // 1997. Т. 39, № 7. С. 634-639.

18. Agarkova I.V., Dunigan D.D., Van Etten J.L. Virion-associated restriction endonucleases of Chloroviruses // Journal of Virology. 2006. Vol. 80, № 16. P. 8114-8123.

19. Allen R. D. Food vacuole membrane growth with microtubule associated membrane transport in Paramecium II J. Cell Biol. 1974. Vol. 63. P. 904922.

20. Allen RD., Schroeder CC., Fok AK. Endosomal system of Paramecium: coated pits to early endosomes // J. of Cell Science. 1992. Vol. 101. P.449-461.

21. Вагу G.H. Die Erscheinung der Symbiose // Strassburg. 1879

22. Beisson J. Cytoskeleton and molecular basis of patterning in Ciliates // In Haussmann K, Hulsmann N (eds) Progress in Protozoology. Gustav Fischer Verlag. Stuttgart. 1994. c. 15-24.

23. Beisson J., Clerot J.-C., Fleury-Aubusson A., Nicole Garreau De Loubresse, Ruitz F., Klotz C. Basal body-associated nucleation center for the centrin-based cortical cytoskeletal network in Paramecium // Protist. 2001.Vol. 152. P. 339-354.

24. Benchimol M., Monteiro S.P., Chang T.-H., Alderete J. F. Virus in Trichomonas an ultrastructural study. // Parasitology International. 2002. Vol. 51. P. 293-298

25. Bhattacharya D., Archibald J.M., Weber Andreas P.M., Reyes-Pietro A. How do endosymbionts become organelles? Under standing early events in plastid evolution// Bio Essays. 2007. Vol. 29. P. 1239-1246.

26. Bomford R. The Syngen of Paramecium bursaria: New mating types and intersyngenic mating reactions // J. Protozool.1966. Vol. 13, № 3. P. 497501.

27. Brussaard C.P.D. Viral Control of Phytoplankton Population a Review // J. Eucariot. Microbiol. 2004. Vol.51, №.2. P. 125-138.

28. Bubeck J.A., Pfitzner A.J.P. Isolation and characterization of a new type of chlorovirus that infects an endosymbiotic Chlorella strain of the heliozoon Acanthocystis turfacea II Journal of General Virology. 2005. Vol. 86. P.2871—2877.

29. Carle G.F., Olson M.V. An electrophoretic caryotype for yeast // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1985. Vol.82, № 11. P.3756-3760.

30. Chen F., Suttle C.A. Amplification of DNA Polymerase gene fragments from viruses infecting microalgae // Applied and Enviromental Microbiology. 1995. Vol.61, №.4. P. 1274-1278.

31. Chen F., Suttel C.A. Evolutionary relationships among large double-stranded DNA viruses that infect macroalgae and other organisms as inferred from DNA polymerase genes// Virology. 1996. Vol. 219. P. 170178.

32. Clarke K.J. Virus particle production in lysogenic bacteria exposed to protozoan grazing // FEMS Microbiology Letters. 1998. Vol. 166. P. 177180.

33. Clerot J.C, Iftode F., Budin K., Jeanmaire Wolf R., Coffe G., Fleury-Aubusson A. Fine oral filaments in Paramecium: a biochemical and immunological analysis // J. Eukaryot Microbiol. 2001. Vol. 48, № 2. P.234-245.

34. Corliss J.O. Concept, definition, prevalence, and host-interactions of xenosomes (cytoplasmic and nuclear endosymbionts) // J. Protozol. 1985. Vol. 32. P. 373-376.

35. Delaroque N., Maier I., Knippers R., Muller DG. Persistent virus integration into the genome of its algal host, Ectocarpus siliculosus (Phaeophyceae) // J Gen Virol. 1999. Vol.80. P.1367-1370.

36. Dimitrov D.S. Virus entry: molecular mechanisms and biomedical applications//Microbiolog. 2004. Vol. 2. P. 109-122.

37. Douglas A.E. The ecology of symbiotic microorganisms // Adv. Ecol. Res. 1995. Vol. 26. P. 69-103.

38. Douglas A.E., Huss V.A.R. On the characteristics and taxonomic position of symbiotic Chlorella.il Arch. Microbiol. 1986. Vol.45. P. 80-84.

39. Douglas A., Smith D.C. The green Hydra symbiosis. VIII. Mechanisms in symbioht regulation//Proc. R. Soc. Lond. B.1984. Vol. 221. P.291-319.

40. Dunigan D., Fangman Т., Zhou Y., Kronshnabel В., Agarkova I., Van Etten J.L. // Abstr. at the "IVth Algal virus workshop" Amsterdam, Netherlands, 2005. P.8

41. Dunigan D.D., Fitzgerald L.A., Van Etten J.L. Phycodnaviruses: A peek at genetic diversity // Virus Research. 2006. Vol. 117. P. 119-132

42. Ehret C.F., Powers E.L. The Organization of gullet organelles in Parameciam bursaria// J. Protozool. 1957.Vol.4. P. 55-59.

43. Gerashenko B.I., Nishihara N., Ohara Т., Tosuji H., Kosaka T. and Hosoya H. Flow cytometry as a strategy to stady the endosymbiosis of algae in Paramecium bursaria// Cytometry. 2000. Vol. 41. P.209-215.

44. G6rtz H.D. Infections of Paramecium bursaria with bacteria and yeasts // J. Cell Sci. 1982. Vol. 58. P. 445-453.

45. Goetsch W. Die Symbiose der Susswasser-Hydroiden und ihre kiinstlische Beeinflussung // Zeitschr. Morph. Okol. Tirte.1924. Vol. 1. P. 660-731.

46. Grabherr R., Strasser P., Van Etten J.L., 1992. The DNA polymerase gene from chlorella viruses PBCV-1 and NY-2A contains an intron with nuclear splicing sequences.// Virology. 1992.Vol. 188. P. 721-731.

47. Graham L.E., Graham J.M. Ultrastracture of endosymbiotic Chlorella in a Vorticella //J. Protozool. 1978. Vol. 25, № 2. P. 207-210.

48. Gu F., Chen L., Ni В., Zhang X. A comparative study on the electron microscopic enzymo-cytochemistry of Paramecium bursaria from light and dark cultures // Euorop. J. Protistol. 2002. Vol. 38. P.267-278.

49. Hoshina R., Kamako S.I., Imamura N. Phylogenetic position of endosymbiotic green algae in Paramecium bursaria Ehrenberg from Japan// Plant, biol. (Stuttg). 2004. Vol.6, №.4. P.447-453.

50. Hoshina R., Kato Y., Kamako S-i., Imamura N. Genetic evidence of "American" and "European" type symbiotic algae of Paramecium bursaria Ehrenberg // Plant Biol. 2005. Vol. 7. P. 526—532.

51. Hoshina R., Imamura N. Multiple Origins of the Symbioses in Paramecium bursaria II Protist. 2008.Vol. 159. P.53—63.

52. Huss V.A.R., Holweg C., Seidel В., Reich V., Rahat M, Kessler E. There is an ecological basis for host/symbiont specificity in Chlorell a/Hydra symbioses // Endocyt. Cell. Res. 1993/94. Vol.10. P. 35—46.

53. Huss V.A.R., Ciniglia C., Cennano P., et al. Phylogenetic position of Chlorella-WkQ isolates from low pH anvironments (pH < 3.0) // BMC Evolutionary biology. 2002. Vol. 13. P.2.

54. Iftode F., Fleury-Aubusson A. Structural inheritance in Paramecium: ultrastructural evidence for basal body and associated rootlets polaritytransmission through binary fission // Biology of the Cell. 2003. Vol. 95. P. 39-51.

55. Jennings H.S. Genetics of Paramecium bursaria. I. Mating types and groups, their interrelations and distribution; mating behavior and self sterility // Genetics. 1939. Vol 24, № 2. P. 202-233.

56. Hightower R.C., Metge D.W., Santi D.V. Plasmid migration- using orthogonal-field-alteration gel electrophoresis // Nucl. Acids. Res. 1987. Vol.15, №20. P. 8387-8398.

57. Kadono Т., Kawano Т., Hosoya H., Kosaka T. Flow cytometric studies of the host-regulated cell cycle in algae symbiotic with green Paramecium // Protoplasma. 2004. Vol. 223. P. 133-141.

58. Kang M., Dunigan D.D., Van Etten J.L. 2005. Chloroviruses: a genus of Phycodnaviridae that infect certain chlorella-like green algae // Mol. Plant Path. 2005. Vol. 6. P. 213-224.

59. Karakashian S.J. Grow of Paramecium bursaria by the presence of algal symbionts//Physiol. Zool. 1963. Vol. 36. P. 52-68.

60. Karakashian S.J., Karakashian M.W., Rudninska M.A. Electron microscopic observations on the symbiosis of Paramecium bursaria and its intracellular algae // J. Protozool. 1968. Vol. 15, № 1. P. 113-128.

61. Karakashian S.J., Rudzinska M.A. Inhibition of lysosomal fusion with symbiont-containing vacuoles in Paramecium bursaria// Exptl. Cell. Res. 1981. Vol. 131. P. 387-393.

62. Kawakami H., Kawakami N. Behavior of a virus in a symbiotic system Paramecium bursaria — zoochlorella // J. Protozool. 1978. Vol. 25. P. 217-225.

63. Kodama Y. and Fujishima M. Symbiotic Chlorella sp. of the ciliate Paramecium bursaria do not prevent acidification and lysosomal fusion of host digestive vacuoles during infection// Protoplasma. 2005. Vol. 225. P. 191-203.

64. Kodama Y., Fujishima M. Cycloheximide induces synchronous swelling of perialgal vacuoles enclosing symbiotic Chlorella vulgaris and digestion of the algae in the Ciliate Paramecium bursaria // Protist. 2008. Vol. 159. P. 483-494.

65. Kodama Y., Nakahara M., Fujishima M. Symbiotic alga Chlorella vulgaris of the ciliate Paramecium bursaria shows temporary resistance to host lysosomal enzymes during the early infection process // Protoplasma. 2007. Vol. 230. P. 61-67.

66. Kosaka T. Life cycle of Paramecium bursaria syngen 1 in nature// J.Protozool. 1991. Vol.38, №.2. P. 140-148.

67. Kosaka T. Life cycle of Paramecium bursaria syngen 1 in a natural pond// Zool. Sci. 1994. Vol. 11. P. 517-526.

68. Kvitko К., Zelennikova О., Migunova A. Ecological and climatic rules for PBCV-virus circulation // Abstracts of X-th International Congress of Virology. Jerusalem. Israel. 1996. P. 250.

69. Kvitko K.V., Migunova A.V., Karelov D.B., Prokosheva., M.Ju. Molecular taxonomy of virus-sensitive Clorella sp. symbionts of Paramecium bursaria 11 Protistology. 2001. Vol. 2, № 2. P. 96-104.

70. Larsen J. В., Larsen A., Bratbak G., Sandaa R.-A. Phylogenetic analysis of members of the Phycodnaviridae virus family, using amplified fragments of the Major Capsid Protein gene// Applied and Environmental Microbiology. 2008. P. 3048-3057.

71. Lee J. J., Zucker W. Alga flagelate symbiosis in formanifer Archaias //J. Protozool. 1969. Vol. 16. P. 71-80

72. Lee J.J., Soldo A.T., Reisser W., Lee M.J., Jeon K.W. & Gotzt HAD/ The extent of algal and bacterial endosymbiose in Protozoa // J. Protozoor.1985.Vol. 32. P 391-403.

73. Lehmann M.J., Sherer N.M, Marks C.B, Pypaert M., Mothes W. Actin-and myosin-driven movement of viruses along filopodia precedes their entry into cells // J. of Cell Bioljgy. 2005. Vol. 170, № 2. P. 317-325.

74. Linz В., Linz A., Migunova A.V., Kvitko K.V. Correlation between virus-sensitivity and isoenzyme spectrum in symbiotic Chlorella-like algae // Protistology. 1999. Vol.1, № 2. P. 76-81.

75. Lucocq J.M., Habermann A., Watt S., Backer J., Mayhew TM., Griffiths G. A rapid method for assessing the distribution of gold labelling on thin sections // J. Histochem Cytochem. 2004. Vol. 52. P. 991-1000.

76. Marie D., Brussaard C., Thyrhaug R., Bratbak G., Vaulot D. Enumeration of marine viruses in culture and natural samples by flow cytometry // Appl. Environ. Microbiol. 1999. Vol. 65. P. 45-52.

77. Margulis L., Chapman M.J. Endosymbioses: cyclical and permanent in evolution //Trends Microbiol. 1998. Vol. 6. P. 342-345.

78. Margulis L., Fester R. Symbiosis as a Source of Evolutionary Innovation: Speciation and Morphogenesis // MIT Press, Cambridge, Massachusetts. 1992. 454 pp.

79. Maule J. Electrophoretic karyotype analysis // Methods in Molecular Biology. 1994. Vol. 29. P. 221-252.

80. Mayhew T. Quantative Immunoelectron Microscopy // In Kuo J (ed) Methods in Molecular Biology, Electron Microscopy: Methods and Protocols. Humana press, Totowa . 2007. Vol. 369. P. 309-328.

81. McCluskey K., Graves M., Dallice M., Meints R.H. Replication of Chlorella virus PBCV-1 and host karyotype determination studied with pulsed-field gel electrophoresis // J. Phycol. 1992. Vol. 28. P. 846-850.

82. Meier R., Reissner W., Wiessner W. et al. Freeze-fracture evidence of differences between membranes of perialgal and digestive vacuoles in Paramecium bursaria HZ. Naturforsch. 1984. Vol. 35. P.l 107-1110.

83. Meier R., Wiessner W. Infection of algae-free Paramecium bursaria with symbiotic Chlorella sp. isolated from green paramecia. II. Effect of incubation period// J.Cell.Sci. 1988. Vol.24. P.69-74.

84. Meier R., Wiessner W. Infection of algae-free Paramecium bursaria with symbiotic Chlorella sp. isolated from green paramecia. II. A timed study. // J.Cell.Sci. 1989. Vol.93. P.571-579.

85. Meints R.H., Van Etten J.L., Kuczmarski D., Lee K.,and Ang B. Viral infection of the symbiotic Chlorella-like alga present in Hydra viridis// Virology. 1981. Vol.113. H. 698-703.

86. Meints R. H., Lee K., Burbank D.E. et al. Infection of a Chlorella-like alga with the virus, PBCV-1: ultrastructural studies// Virology. 1984. Vol.138. P.341-346.

87. Migunova A., Scoblo I., Kraeva E., Litvinov D., Voitsekhovski E., Kvitko K. Zoochlorella viruses carrier status of Paramecium bursaria // Abstracts of X-th International Congress of Virology. Jerusalem. Israel. 1996. P. 251.

88. Mushegian A.R., Koonin E.V. A minimal gene set for cellular life derived by comparison of complete bacterial genomes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. Vol.93. P.10268-10273.

89. Naiton Y., Sugino K. Ciliary movement and its control in Paramecium // J Prorozool. 1984. Vol. 31. P. 31-40.

90. Nishihara N., Takahashi Т., Kosaka Т., Hosoya H. (1996) Characterization of endosymbiotic algae in Paramecium bursaria// Jpn. J .Protozool Vol. 29. P.35.

91. Pardy R.L., Spargo В., Crowe J.H. Release of trehalose by symbiotic Algae // Symbiosis. 1988. Vol.7. P.149-158.

92. D.T. Petrik, A Iseli, B. A. Montelone, James L. Van Etten, R. J. Clem Improving baculovirus resistance to UV inactivation: increased virulence resulting from expression of a DNA repair enzyme // J. Invert Pathology. 2004.

93. Radke К., Dohner К., Sodeik B.Viral interactions with the cytoskeleton: a hitchhiker's guide to the cell // Cellular Microbiology. 2006. Vol. 8, № 3. P. 387-400.

94. Rahat M., Reich V., A revalution of alleged requirements for the establishment of Algal/Hydra symbioses and Host/Symbiont specificity: preadaptation and VACUOLAR ecology// Endocyt.C. Res. 1987. Vol. 4. P.13-23.

95. Rahat M., Reich V. Algal endosymbiosis in brown hydra: host-symbiont specifity//J. Cell. Sci. 1986. Vol.86. P. 273-286.

96. Raoult D., Audic S., Robert K., Abergel C., Renosto P., Ogata H., Bernard La Scola, Suzan M., Claverie J.-M. The 1.2-Megabase Genome Seguence of Mimivirus // Science. 2004.Vol. 306. P. 1344-1350.

97. Rautian MS., Potekhin AA. Electrokaryotypes of macronuclei of several Paramecium species // J. Eukaryot Microbiol. 2002. Vol. 49, № 4. P. 296304.

98. Reisser W. Endosymbiotic association of freshwater protozoa and algae // Progress in Protistol. 1986. Vol. 1. P. 195-214.

99. Reisser W. Naturally occurring and artificially established associations of ciliates and algae // Endocytobiology. 1987. P. 316-329.

100. Reisser W., Meier R., Kurmeier B. The regulation of endosymbiotic algal population size in ciliate-algal association. An ecological model// Endocytobiology. 1983. Vol. II. P.533-543.

101. Reisser W., Meier R., Gortz H.D., Jeon K.W. Establishment, maintenance, and integration mechanisms of endosymbionts in Protozoa // J. Protozool. 1985. Vol. 32, № 3. P. 383-390.

102. Reisser W., Niess D. Photobehavior of ciliate-algae association: an indicator for symbiosis formation // Endocytobiology. Walter de Gruyter & Co., Berlin-New York. 1983. Vol. II. P.345-552.

103. Reymond O.L., Pickett-Heaps J.D. A routine flat embedding method for electron microscopy of microorganisms allowing selection and precisely orientated sectioning of single cells by light microscopy // J. of Microscopy. 1982. Vol. 130. P. 79-84.

104. Schuster A.M., Burbank D.E., Meister В., Skrdla M.P., Hattman S., Swindon D., Van Etten J.L. Characterization of viruses infection a eukaiyotic ChlorellaAike green alga // Virology. 1986. Vol. 150. P. 170177.

105. Schuster A.M., Waddle JA., Korth K., Meints RH. The chloroplast genome of an exsymbiotic Chlorella-Wkz green alga // Pant Molecular Biology. Vol. 14, № 5. P. 859 862.

106. Siegel RW. Hereditary endosymbiosis in Paramecium bursaria // Exp Cell Res. 1960. Vol. 19. P. 239-252.

107. Skrdla M.P., Burbank D.E., Xia Y., Meints R.H., Van Etten J.L. Structural proteins and lipids in a virus, PBCV-1, which replicates in a chlorella-like alga//Virology. 1984.Vol. 135. P. 308-315.

108. Smith A.E., Helenius A. How viruses enter animal cells // Science. 2004. Vol. 304. P. 237-242.

109. Sokal R.R., Rohlf F.J., Biometry. Yhe Principles and Practice of , Statistics in Biological Research // San Francisko: W. H. Freeman. 1981.859 p.p.

110. Sonneborn T.M. Methods in Paramecium research // Methods Cell Physiol. 1970. Vol. 4. P. 241-339.

111. Stabell Т., Andersen Т., Klaveness D. Ecological significance of endosymbionts in a mixotrophic ciliate an experimental test of a simple model of growth coordination betweenhost and symbiont // J. Plankton Res. 2002. Vol. 24. P. 889-99.

112. Summerer M., Sonntag В., Sommaruga R. An experimental test of the symbiosis specificity between the ciliate Paramecium bursaria and strains of the unicellular green alga Chlorella // Enviromental Microbiology. 2007. Vol. 9, № 8. P. 2117-2122.

113. Summerer M., Sonntag В., Sommaruga R. Ciliate symbiont specificity of freshwater endosymbiotic Chlorella (Trebouxiophyceae, Chlorophyta) // J. Phycol. 2008. Vol. 44. P. 77-84.

114. Takahashi T.,Okubo M.A., Hosoya H. Differentiation of cortical structures and their reorganization during cell division in Paramecium trichium II J. of Eukaryotic Vicrobiology. 1998. Vol. 45, № 4. P. 369-380.

115. Tanaka M., Miwa I. Significance of photosyntheticproducts of symbiotic Chlorella to establish the endosymbiosis and to express the mating reactivity rhythm in Paramecium bursaria I I Zool. Sci. 1996. Vol. 13. P. 685-692.

116. Tonooka Y., Watanabe T.Genetics of the relationship between the ciliate Paramecium bursaria and its symbiotic algae// Invertebrate Biology. 2007. Vol. 126, № 4. P. 287-294.

117. Trench R.K. The cell biology of plant-animal symbiosis// Ann. Rev. Plant Physiol. 1979.Vol. 30. P. 485-531.

118. Van Etten J.L. Unusual life style of Giant chlorella viruses//Annu. Rev. genet. 2003. Vol. 37. P. 153-95.

119. Van Etten J.L., Burbank D.E., Kuczmarski D., Meints RH. Virus infection of culturable Chlorella-like algae and development of a plaque assay// Science. Vol. 219. 1983. P. 994-996.

120. Van Etten, J. L., D. E. Burbank, A. M. Schuster, R. H. Meints. 1985. Lytic viruses infecting a Chlorella-like alga // Virology. Vol. 40. P. 135143

121. Van Etten J.L., Graves M.V., Muller D.G. et al. Phycodnaviridae large DNA algal viruses //Arch. Virology. 2002. Vol.147. P.1479-516.

122. Van Etten J.L., Lane L.C. and Meints R.H. 1991. Viruses and virus-like particles of eukaryotic algae// Microbiological Reviews. 1991. Vol. 55. P. 586-620.

123. Van Etten J.L. and Meints R.M. Giant viruses infecting algae// Annu. Review Microbiology. 1999. Vol.53. P. 447-494.

124. Van Etten J.L., R.H. Meints, D.E. Burbank, D. Kuczmarski, D.A. Cuppels and L.C. Lane. 1981. Isolation and characterization of a virus from the intracellular green alga symbiotic with Hydra viridis И Virology. 1981. Vol. 113. P. 704-711.

125. Van Etten J.L., Meints R.H., Kuczmarski D. et al. Virus of symbiotic Chlorella-like algae isolated from Paramecium bursaria and Hydra viridis 11 Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982. Vol.79. P.3867-3871.

126. Vanchini R. G., Benchimol M. Appearance of virus-like particles in Tritrichomonas foetus after drug treatment // Tissure and Cell. 2005. Vol. 37. P. 317-323.

127. Villareal L.P., DeFilippis V.R. A hypothesis for DNA viruses as the origin of eucariotic replication proteins // J. Virol. 2000. Vol. 74. P.7079-7084.

128. Vorobyev К, Andronov E, Rautian M, Skoblo I, Migunova A, Kvitko K. Detection of an atypical Paramecium bursaria Chlorella symbiont // In press

129. Watanabe T. Electron microscopy of cell surfaces of Paramecium caudatum stained with ruthenium red // Tissue and cell. 1981. Vol. 13. № l.P. 1-7.

130. Weinbauer M.G. Ecology of prokaryotic viruses// FEMS Microbiology Reviews. 2004. Vol. 28. P. 127-181.

131. Weis D.S. Digestion of added homologous algae by Chlorella-bearing Paramecium bursaria //J. Protozool. 1976. Vol. 23, No.4. P.527-529.

132. Weis D.S. Infection in Paramecium bursaria as an inductive process// Endocytobiology. 1983. Vol. II. P. 523-532.

133. Weis D.S., Ayala A. Effect of exposure period and concentration on the frequency of infection of aposymbiotic ciliates by symbiotic algae from Paramecium bursaria H J. Protozool. 1979. Vol. 26, №2, P. 245-248.

134. Wichtermann R. The Biology of Paramecium II New York. London: Plenum Press. 1986. P. 599.

135. Wommack K.E., Colwell R.R. Virioplankon: Viruses in aquatic ecosystems // Microbiology and Molecular Biology reviews. 2000. Vol.64, №.1.P. 69-114.

136. Yamada Т., Higashiyama Т., Fucuda T. Screening of natural waters for viruses which infect Chlorella cells // Appl. Environment. Microbiol. 1991. Vol. 57, №12. P. 3433-3437.

137. Yamamoto Y, Fujimoto Y, Arai R et al. Retrotransposone-mediatad restoration of Chlorella telomeres: accumulation of Zepp retrotranspozones at termini of newly formed minichromosomes// Nucleic Asid research. 2003. Vol. 31,№ 15. P.4646-4653.

138. Yan X., Olson N.H., Van, Bergoin M, Rossman M.G., Baker T.S. Stracture and assembly of large, lipid-containing, dsDNA viruses // Nat. Struct. Biol. 2000. Vol.7. P. 101-103.

139. Zhang Y., Adams В., Sun L. Intron conservation in the DNA polymerase gene encoded by Chlorella viruses // Virology. 2001. Vol. 285. P. 313-321.

140. Zhang Y., Burbank D.E., Van Etten J.L. Chlorella viruses isolated in China//Appl. Environment. Microbiol. 1988. Vol. 54. P. 2170-2173.