Современные подходы к оценке качества клеточных линий, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Водякова Марина Андреевна

• Водякова Марина Андреевна
• кандидат наук
• 2023

Оглавление диссертации кандидат наук Водякова Марина Андреевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Оценка качества препаратов на основе жизнеспособных клеток человека

1.2. Аналитический обзор особенностей типов клеточных линий, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека

1.3. Анализ современного состояния и актуальных вопросов стандартизации клеточных линий, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека

1.4. Анализ мирового опыта создания и функционирования коллекций и клеточных банков

Выводы по главе

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования

2.2. Материалы исследования

2.2.1. Оборудование

2.2.2. Реактивы

2.2.3. Прочие материалы

2.3. Методы исследования

2.3.1. Условия культивирования клеточных линий

2.3.2. Методика ЯТСА-про филирования

2.3.3. Статистический анализ

ГЛАВА 3. ТРЕБОВАНИЯ К КАЧЕСТВУ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ, ВХОДЯЩИХ В СОСТАВ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

3.1. Перечень требований к клеточным линиям как к исходному материалу для производства препаратов на основе жизнеспособных клеток человека

3.1.1. Требования к донорам биологического материала

3.1.2. Требования к культуральным средам, сывороткам, вспомогательным веществам, использующимся в производстве препаратов на основе жизнеспособных клеток человека

3.1.3. Основные подходы и параметры стандартизации клеточных линий, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека

3.2. Требования общих фармакопейных статей/монографий из различных фармакопей для оценки качества клеточных линий, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека

3.3. Подлинность как один из важнейших показателей качества препаратов на основе жизнеспособных клеток человека

3.3.1. Применение ЯТСЛ-профилирования в качестве методики для оценки подлинности клеточных линий

Выводы по главе

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА И ОЦЕНКА СПЕЦИФИЧНОСТИ МЕТОДИКИ ЯТСЛ-ПРОФИЛИРОВАНИЯ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОДЛИННОСТИ СТАНДАРТИЗОВАННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ

4.1. Разработка методики ЯТСЛ-профилирования для оценки стандартизованных клеточных линий

4.1.1. Определение оптимального количества образца стандартизованных клеточных линий для анализа

4.1.2. Определение продолжительности инкубационного периода

4.1.3. Разработка методики ЯТСЛ-профилирования

4.2. Оценка специфичности методики ЯТСЛ-профилирования

4.2.1. Оценка возможности отличить разные стандартизованные клеточные линии

4.2.2. Оценка возможности отличить одну стандартизованную клеточную линию на разных пассажах

4.2.3. Оценка наличия ложных результатов

Выводы по главе

ГЛАВА 5. СОЗДАНИЕ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКОЙ БАЗЫ ОБРАЗЦОВ СТАНДАРТИЗОВАННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ, ВХОДЯЩИХ В СОСТАВ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

5.1. Формирование информационно-аналитической базы образцов стандартизованных клеточных линий

5.2. Применение информационно-аналитической базы образцов стандартизованных клеточных линий в оценке качества препаратов на основе

жизнеспособных клеток человека

Выводы по главе

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

ПРИЛОЖЕНИЕ А

ПРИЛОЖЕНИЕ Б

ПРИЛОЖЕНИЕ В

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Современные подходы к оценке качества клеточных линий, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Поиск новых препаратов и методов лечения серьезных жизнеугрожающих заболеваний/состояний, осуществляемый научным и медицинским сообществом всего мира с использованием достижений в области молекулярной, клеточной биологии и генетической инженерии, обусловил внедрение в клиническую практику препаратов на основе жизнеспособных клеток человека.

На сегодняшний день в мире существует около 30 препаратов на основе жизнеспособных клеток человека, которые предназначены для лечения онкологических, генетических и орфанных заболеваний, а также жизнеугрожающих состояний. В Российской Федерации на сегодняшний день зарегистрирован в 2023 г. всего лишь один такой препарат - КутпаИ (Novartis), поэтому их разработка и внедрение в медицинскую практику являются одними из приоритетных направлений в соответствии с Указом Президента Российской Федерации от 06 июня 2019 г. № 254 «О Стратегии развития здравоохранения в Российской Федерации на период до 2025 года» [1].

В России препараты на основе жизнеспособных клеток человека могут быть зарегистрированы как биомедицинские клеточные продукты (БМКП) в соответствии с Федеральным законом от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах» [2] или как высокотехнологичные лекарственные препараты (ВТЛП) на основе соматических клеток (в том числе генетически модифицированных) в соответствии с Решением Совета Евразийской экономической комиссии от 3 ноября 2016 г. № 78 «О Правилах регистрации и экспертизы лекарственных средств для медицинского применения» в рамках Евразийского экономического союза (ЕАЭС) [3]. Основным компонентом ВТЛП/БМКП является клеточная линия (клетки) (КЛ) человека, определение критериев пригодности которой направлено на достижение воспроизводимого состава готового продукта высокого качества. Стандартизованная КЛ (СКЛ), используемая в составе ВТЛП/БМКП, значительно отличается от СКЛ, используемых в качестве субстратов для получения классических биологических

лекарственных препаратов (биотехнологических и других), ввиду персонализации аутологичных ВТЛП/БМКП; вариабельности характеристик клеток одного типа, используемых для производства и полученных от доноров с различными физиологическим состоянием при наличии или отсутствии сопутствующих заболеваний; особенностей получения биопсийного материала, а также условий культивирования и возможности хранения КЛ. Таким образом, СКЛ в составе ВТЛП/БМКП представляет собой индивидуально охарактеризованную КЛ и применяемую по конкретному медицинскому назначению. Поэтому в рамках стандартизации и контроля качества при разработке, производстве, государственной регистрации и последующем применении таких препаратов особое внимание должно быть уделено определению характеристик клеток. В России на данный момент не сформулированы единые требования для оценки качества СКЛ, которые используются в составе препаратов на основе жизнеспособных клеток. Учитывая многообразие типов КЛ, которые могут быть использованы в составе ВТЛП/БМКП, ограниченные сроки проведения оценки качества, возникает необходимость организации электронного учета, хранения, обработки и анализа накопленной информации о КЛ, методах оценки их показателей качества, нормативно-правовых и методических документах, регламентирующих требования к показателям качества с целью последующей унификации подходов к стандартизации КЛ, которые входят или могут входить в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека, определению параметров качества и методов их оценки. Кроме того, в настоящее время в связи с новизной нормативно-правовой и методической базы в области ВТЛП и БМКП, а также, учитывая наличие в их составе жизнеспособных клеток человека, обуславливающее необходимость особых подходов к определению характеристик качества СКЛ (в частности, подлинности), актуальным является разработка и внедрение методик, позволяющих определить тот или иной показатель (или комплекс показателей) при минимальной обработке СКЛ.

Таким образом, актуальность темы исследования обусловлена необходимостью обоснования современных подходов к оценке качества КЛ,

входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека, включающих в себя (1) обобщение и систематизацию требований к качеству СКЛ в составе ВТЛП/БМКП, включая требования к исходному сырью и донорам; (2) разработку методики, позволяющей определить подлинность при минимальной обработке СКЛ и (3) создание информационно-аналитической базы (ИАБ) образцов СКЛ, позволяющей накапливать сведения о свойствах СКЛ, показателях и методах контроля их качества с целью последующей разработки методических подходов к унификации требований к качеству СКЛ, используемых в составе ВТЛП/БМКП.

Степень разработанности темы исследования. Вследствие отсутствия единого подхода к оценке качества препаратов на основе жизнеспособных клеток человека в нашей стране до сих пор нет четких требований к СКЛ, входящих в их состав. Например, ни национальная фармакопея [4], ни Фармакопея ЕАЭС [5] пока что не содержат ни одной статьи, касающейся напрямую ВТЛП/БМКП. Такие требования описаны в зарубежных фармакопеях [6, 7] и других документах и могут быть использованы для оценки качества СКЛ, поэтому необходимо детальное изучение международного опыта.

Одним из важных вопросов вследствие особого состава (наличия жизнеспособных клеток) и, как правило, коротких сроков хранения/применения как при производстве ВТЛП/БМКП, так и при оценке качества готового продукта в ходе всего жизненного цикла является оперативность и надежность проводимых анализов при минимальной обработке готового препарата и КЛ, входящих в их состав, для подтверждения подлинности, что делает важным внедрение в оценку качества таких препаратов быстрых и достоверных качественных и количественных анализов. При работе с КЛ наиболее значимыми потенциальными проблемами являются генотипическая и фенотипическая нестабильность. Поэтому подлинность является критическим показателем качества, гарантирующим эффективность и безопасность таких препаратов, как ВТЛП/БМКП, а также отражающим их специфику.

Ускорение государственной регистрации препаратов на основе жизнеспособных клеток человека без потери качества является приоритетной задачей национального здравоохранения. На данный момент не существует никакой базы данных СКЛ, которые входят или могут входить в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека, для формирования унифицированных подходов к их качеству и стандартизации.

Цель исследования: научно-экспериментальное обоснование современных подходов к оценке качества КЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека.

Задачи исследования:

1. Провести анализ современного состояния вопроса стандартизации и последующей оценки качества КЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека.

2. Определить основные подходы к стандартизации КЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека, и установить параметры стандартизации, учитывающие требования к исходному сырью, полученному от доноров.

3. Провести изучение основных показателей качества КЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека, гарантирующих определение их специфичности.

4. Научно-методически и экспериментально обосновать методику RTCA-профилирования (профилирование с помощью клеточного анализатора в режиме реального времени (real-time cell analyzer)), используемую для оценки подлинности СКЛ как основного показателя их специфичности.

5. Сформировать ИАБ образцов СКЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека, позволяющую накапливать и систематизировать сведения о свойствах СКЛ, показателях и методах контроля их качества с целью последующей разработки методических подходов к унификации требований к качеству СКЛ, используемых в составе ВТЛП/БМКП.

Научная новизна исследования:

На основе проведенного анализа международных и национальных стандартов, руководств, фармакопей впервые обобщены особенности требований к качеству КЛ как к исходному материалу для разработки и производства препаратов на основе жизнеспособных клеток человека.

Впервые разработана и обоснована методика RTCA-профилирования для оценки подлинности СКЛ при контроле качества препаратов на основе жизнеспособных клеток человека, позволяющая провести анализ подлинности СКЛ на основе сравнения RTCA-профилей.

Впервые сформирована ИАБ образцов СКЛ и разработана Программа «Стандартизованные клеточные линии» на интранет-портале, позволяющие накапливать сведения о свойствах СКЛ, показателях и методах контроля их качества с целью последующей разработки методических подходов к унификации в РФ требований к качеству СКЛ, используемых в составе ВТЛП/БМКП.

Теоретическая и практическая значимость. Теоретическая значимость диссертационной работы состоит в обосновании современных подходов к оценке качества КЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека. Обобщены требования к качеству СКЛ в составе ВТЛП/БМКП. Разработана методика RTCA-профилирования для оценки подлинности СКЛ в составе ВТЛП/БМКП. Обоснованы принципы формирования ИАБ образцов СКЛ для накопления и систематизации сведений о свойствах СКЛ, показателях и методах контроля их качества с целью последующей разработки методических подходов к унификации в РФ требований к качеству СКЛ, используемых в составе ВТЛП/БМКП.

Практическая значимость исследования заключается в разработке на основании ИАБ образцов СКЛ Программы «Стандартизованные клеточные линии» на интранет-портале и ее внедрении в практическую деятельность ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России для экспертизы качества при государственной регистрации препаратов на основе жизнеспособных клеток человека (ВТЛП/БМКП).

Методология и методы исследования. Методология исследования заключалась в анализе отечественных и международных законодательных и нормативных документов по обеспечению качества СКЛ в составе продуктов на основе жизнеспособных клеток человека.

Основными методами исследования являлись: литературный поиск, сравнительный анализ, метод системного подхода, ЯТСЛ-профилирование и статистический анализ данных.

Диссертация основана на современном состоянии национального и международного нормативно-правового регулирования ВТЛП/БМКП.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Требования к исходному сырью, включая доноров, используемому для получения СКЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека (ВТЛП/БМКП).

2. Научно-методические подходы к стандартизации КЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека (ВТЛП/БМКП).

3. Методика ЯТСЛ-профилирования, выполненная с использованием клеточного анализатора, и доказательство возможности ее применения для оценки подлинности СКЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека (ВТЛП/БМКП).

4. ИАБ образцов СКЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека (ВТЛП/БМКП), позволяющая накапливать и систематизировать сведения о свойствах СКЛ, показателях и методах контроля их качества с целью последующей разработки методических подходов к унификации в РФ требований к качеству СКЛ, используемых в составе ВТЛП/БМКП.

Достоверность научных положений и выводов базируется на достаточных по своему объему данных и количеству материала, современных методах исследования и статистической обработке данных.

Апробация результатов исследования. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Научно-практической конференции «Современные подходы к экспертизе лекарственных средств» (Москва, 2018), Международной научно-

практической конференции «Разработка лекарственных средств - традиции и перспективы» (Томск, 2021), Vth Sechenov International Biomedical Summit 2021 (SIBS-2021) (Москва, 2021), XII Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург, 2022) и V Национальном Конгрессе по Регенеративной Медицине (Москва, 2022).

Личный вклад автора. Автор лично принимал участие в постановке задач исследования, обсуждении результатов, написании научных статей и тезисов. Автором самостоятельно проанализировано национальное и международное законодательство, нормативно-правовые документы, публикации, посвященные качеству КЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток (ВТЛП/БМКП). Автором лично проведена разработка информационного наполнения ИАБ образцов СКЛ и алгоритма ее использования, а также разработка методики RTCA-профилирования для оценки подлинности СКЛ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Результаты диссертационной работы получены при выполнении двух НИР ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России, направленных на осуществление прикладных научных исследований и разработок:

- НИР «Научное обоснование и разработка методологии биомедицинской экспертизы биомедицинских клеточных продуктов» № госрегистрации АААА-121021800098-4, 2018-2020 гг.

- НИР «Разработка руководств по проведению научной экспертизы новых и зарегистрированных лекарственных препаратов для медицинского применения» № госрегистрации АААА-А18-118021590045-2, 2021-2022 гг.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют паспорту специальности 3.4.2 -Фармацевтическая химия, фармакогнозия (фармацевтические науки) по следующим пунктам: 2. Формулирование и развитие принципов стандартизации и установление нормативов качества, обеспечивающих терапевтическую активность и безопасность лекарственных средств; 3. Разработка новых,

совершенствование, унификация и валидация существующих методов контроля качества лекарственных средств на этапах их разработки, производства и потребления.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 6 статей в журналах, рекомендованных ВАК при Минобрнауки России, из них 5 статей - в изданиях, включенных в международные базы данных, и 1 свидетельство Российской Федерации о государственной регистрации программы для ЭВМ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 193 страницах машинописного текста, содержит 8 таблиц, 17 рисунков и включает: введение, литературный обзор (глава 1), собственные исследования (глава 2 - 5), общие выводы, список сокращений и условных обозначений, список литературы, содержащий 208 библиографических источника, из которых 143 - работы зарубежных авторов.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Оценка качества препаратов на основе жизнеспособных клеток

человека

Увеличение продолжительности жизни и улучшение ее качества являются главными задачами современной медицины. Новые заболевания и жизнеугрожающие состояния, отсутствие терапии для известных заболеваний или реакции на стандартное лечение представляют собой вызовы современному здравоохранению. Прогресс в области медицины связан с возможностью противостоять этим вызовам с помощью развития науки, а также достижений в таких областях, как молекулярная, клеточная биология и генетическая инженерия и стремится к персонализации и таргетированию терапии.

Одним из наиболее перспективных решений для лечения онкологических, генетических и орфанных заболеваний, а также жизнеугрожающих состояний является поиск и внедрение в клиническую практику препаратов на основе жизнеспособных клеток человека. К преимуществам таких препаратов можно отнести снижение тяжести течения заболеваний, облегчение проявляемых симптомов, более позднее их проявление, улучшение качества жизни или даже полное выздоровлению пациентов.

На сегодняшний день в мире зарегистрировано и применяется около 30 таких препаратов, в то время как в Российской Федерации зарегистрирован только один. Кроме того, на заключительном этапе государственной регистрации (закончены клинические исследования) находится БМКП на основе хондроцитов человека для лечения дефектов хряща коленного сустава компании «Генериум» [8]. В настоящее время имеется также опыт клинического применения в России, например, препаратов на основе жизнеспособных клеток человека на основе фибробластов, кардиомиобластов, мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток из жировой ткани, костного мозга, плаценты [9], кератиноцитов [10]. Несколькими российскими научными клиническими центрами разрабатываются инновационные методы лечения онкологических

заболеваний, основанные на применении клеток иммунной системы (натуральные киллеры, дендритные клетки, Т- и В-лимфоциты), терапевтическое действие которых может быть усилено генетической модификацией [11-17].

В России существует два пути регистрации препаратов на основе жизнеспособных клеток человека: как биомедицинские клеточные продукты (БМКП) в соответствии с Федеральным законом от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах» (далее 180-ФЗ) [2] или как высокотехнологичные лекарственные препараты (ВТЛП) на основе соматических клеток (в том числе генетически модифицированных) в соответствии с Решением Совета Евразийской экономической комиссии от 3 ноября 2016 г. № 78 «О Правилах регистрации и экспертизы лекарственных средств для медицинского применения» (далее - Решение № 78) в рамках Евразийского экономического союза (ЕАЭС) [3]. Основные отличия понятий, терминов и требований к производству для ВТЛП и БМКП описаны в статье Меркулова В.А. и Мельниковой Е.В. [18].

Достижение требуемого профиля качества, эффективности и безопасности продуктов на основе жизнеспособных клеток требует оценки качества на всех этапах: от разработки и производства до конца жизненного цикла готового продукта. Таким образом, это станет гарантией получения ВТЛП/БМКП, способных удовлетворять установленные и предполагаемые потребности здравоохранения в нашей стране.

На каждый разработанный ВТЛП/БМКП производителем составляется спецификация, содержащая сведения о профиле качества (показателях качества и методах их контроля).

Одним из критических этапов оценки качества ВТЛП/БМКП является экспертиза качества. Для БМКП правила ее проведения описаны в приказах Минздрава России № 30н и № 195н (для БМКП со сроком хранения/применения менее 15 суток) [19, 20]. Характеристики БМКП по показателям качества для проведения экспертизы качества БМКП определены в приказе Минздрава России № 14н [21]. Для ВТЛП правила проведения и показатели качества в общем виде

описаны в Решении № 78 [3]. Для ВТЛП, содержащих жизнеспособные клетки человека, конкретные требования к содержанию спецификации и перечню унифицированных характеристик и показателей качества КЛ в настоящее время нормативными актами и методическими рекомендациями не определены.

Основным компонентом ВТЛП/БМКП является клеточная линия (клетки) (КЛ) человека, качество которых напрямую влияет на достижение воспроизводимого состава готового продукта высокого качества.

Производство ВТЛП/БМКП в большинстве случаев предполагает персонализированный подход, особенно касающийся аутологичных препаратов, когда материалом для приготовления служат собственные клетки человека. В этом случае характеристики и объем получаемого ВТЛП/БМКП будут значительно варьировать. Необходимо отметить ограниченную стабильность ВТЛП/БМКП и короткие сроки хранения/применения, связанные с наличием в составе жизнеспособных клеток.

Стандартизованная КЛ (СКЛ) в составе ВТЛП/БМКП, значительно отличается от СКЛ, используемых в качестве субстратов для получения классических биологических лекарственных препаратов (биотехнологических и других), и представляет собой индивидуально охарактеризованную КЛ, применяемую по конкретному медицинскому назначению, показатели качества которой находятся в диапазоне приемлемых значений для конкретного препарата. КЛ могут быть различных типов, для каждого из которых существуют свои характеристики, свойства, источники и особенности получения, применение в клинической практике. Кроме того, при описании характеристик КЛ для составления спецификации на ВТЛП/БМКП разработчик обосновывает необходимые параметры КЛ (поверхностные маркеры, экспрессируемые гены и другие) в соответствии с конкретными показаниями к применению ВТЛП/БМКП. Одним из критических элементов для производства ВТЛП/БМКП и оценки качества КЛ в их составе является создание банков КЛ, представляющих собой каталоги хранящихся КЛ или базы данных.

В целом, при определении современных подходов к оценке качества КЛ, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека, необходимо рассмотреть типы КЛ, которые могут входить в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток, мировой опыт создания и функционирования коллекций и клеточных банков, а также проблемы стандартизации таких КЛ.

1.2. Аналитический обзор особенностей типов клеточных линий, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека

Классификация препаратов на основе жизнеспособных клеток человека в зависимости от типов КЛ, входящих в их состав, является основополагающей для понимания механизма действия ВТЛП/БМКП, показаний к применению и степени их безопасности (таблица 1). В составе ВТЛП/БМКП могут применяться как мезенхимальные стволовые клетки (МСК) из различных источников, клетки-предшественники, терминально дифференцированные клетки, так известно уже и применение в клинической практике трансдифференцированных клеток из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) [22, 23].

Таблица 1 - Типы клеточных линий, входящих в состав препаратов на основе жизнеспособных клеток человека

Мезенхимальные стволовые клетки

Признаки МСК, принятые в 2006 г. Международным обществом клеточной терапии (КСТ) - способность клеток к росту in vitro в качестве адгезионной культуры - способность к дифференцировке в остеобласты, адипоциты, хондроциты в условиях in vitro - экспрессия поверхностных маркеров CD105/CD90/CD73 и сниженная экспрессия CD34/CD45(^ некоторых MCK)/CD11b/CD14/CD19, CD79a/HLA-DR1/CD90 [24]

Источник выделения КМ, ЖТ, эндометрий, пульпа зуба, менструальная кровь, грудное молоко; из тканей плода: амниотической жидкости, ворсинок хориона, пуповины, Вартонова студня и ПК; и т.д. [2527]

Маркеры согласно Американской коллекции типовых культур (АТСС) МСК ЖТ: CD29+, CD44+, CD73+, CD90+, CD105+, CD166+, CD14-, CD31-, CD34-, CD45-МСК КМ: CD29+, CD44+, CD73+, CD90+, CD105+, CD166+, CD14-, CD19-, CD34-, CD45- -

Секретом и его свойства - VEGF (ангиогенез) - тканевые ингибиторы металлопротеиназ 1 и 2 (ингибирование ангиогенеза); - хемокины CCL5, CXCL12 или CCL8 (хемоаттрактант моноцитов), белок MCP-2 (хемотаксис иммунных клеток) - факторы роста: HGF, IGF-1, CINC-3, тканевый ингибитор металлопротеиназ 1 и 2, остеопонтин, BDNF, HGF, EGF, NGF и M-CSF (регенерация) - факторы роста: HGF, VEGF и ангиопоэтин-1, хемокин CXCL12, IGF-1, EGF, NGF и TGF (ингибирование фиброза тканей во время регенерации) - антибактериальные свойства секретома - токсическое действие секретома на клетки некоторых типов опухолей i—i -

Способы применения Внутривенные инъекции, местное применение -

Применение в медицинской практике Регенерация различных тканей, лечение онкологии [34]

Препараты, разрешенные к применению 6 препаратов (примеры): Hearticellfram-AMI (Pharmicell), Cupistem (Antrogen), Neuronata-R inj (Medipost Co., Ltd.), Cartistem (Medipost Co., Ltd.), Республика Корея; Alofisel (TiGenix), ЕС; Temcell (HS injection JCR Pharmaceuticals Co., Ltd.) Япония -

Дифференцированные клетки

Клетки эпителиальной ткани

Название Кератиноциты

Локализация Во всех слоях эпидермиса (до 90 %) [35]

Особенности строения Терминально дифференцированные кератиноциты имеют удлиненную и нерегулярную морфологию; отличаются по морфологии в разных слоях эпидермиса, пролиферация практически отсутствует [36]

Источник выделения Кожный биоптат -

Методы получения (примеры) 1) традиционный in vitro метод Грина (позволяет создавать эпителиальные лоскуты для трансплантации) с использованием фидерного слоя (в качестве фидерного слоя фибробласты кожи человека или мыши) in vitro метод, основанный на культивировании в бессывороточной среде без фидерных клеток [37]

Маркеры Терминально дифференцированные кератиноциты: инволукрин Отличие кератиноцитов от эпителиальных СК (положительны у СК): кератин 19, интегрин в-1, внутриклеточный белок p63 [3840]

Секретом - факторы роста: KGF и FGF7, EGF, TGF-a - интерлейкины 1 и 6 [41]

Способы применения Внутрикожные инъекции, в виде кожных эквивалентов или путем распыления -

Применение в медицинской практике Лечение ожогов (обширных, глубоких), ран, рубцов и диабетических язв -

Препараты, разрешенные к применению 10 препаратов: Gintuit (Organogenesis Inc.), Apligraf (Organogenesis Inc.), Stratagraft (Stratatech Corporation), Epicel (Genzyme Biosurgery), Composite Cultured Skin (Ortec International Inc), США; JACE (Tissue Engineering Co. (J-TEC)), Япония; Holoderm (Tego Science, Inc.), KeraHeal, KeraHeal-Allo (Biosolution), Kaloderm (Tego Science, Inc), Республика Корея -

Примечание Отдельно кератиноциты используют крайне редко, чаще они входят в состав кожного эквивалента совместно с фибробластами и, например, коллагеновым матриксом, что позволяет достигать сходства с условиями in vivo. В настоящее время эпителиальные аутотрансплантаты используются, в первую очередь, как мера спасения жизни, а не как [42, 43]

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Водякова Марина Андреевна, 2023 год

Акты

внедрения результатов научно-исследовательской работы «Научное обоснование и разработка методологии биомедицинской экспертизы биомедицинских клеточных продуктов», № госрегистрации АААА-А18-118021590045-2

Министерство здравоохранения Российской Федерации ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ «НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ЭКСПЕРТИЗЫ СРЕДСТВ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ» (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России)

Утверждаю И.о. генерального директора

ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России д-р мед. наук, ст. науч. сотр.

Ю.В. Олефир

ч;

Акт

внедрения результатов научно-исследовательской работы «Научное обоснование и разработка методологии биомедицинской экспертизы биомедицинских клеточных продуктов», № госрегистрации АААА-А18-118021590045-2

24 декабря 2020 г.

г.Москва

Комиссия ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России в составе: председатель комиссии - заместитель генерального директора по научной работе д-р мед. наук, доц. Б.К. Романов; заместитель председателя комиссии - директор Центра планирования и координации научно исследовательских работ канд. мед. наук, ст. науч. сотр. В.Н. Климов; члены комиссии: начальник Управления экспертизы безопасности лекарственных средств д-р мед. наук, проф. Р.Н. Аляутдин; директор Центра экспертизы и контроля медицинских иммунобиологических препаратов д-р мед. наук, проф. В.П. Бондарев; директор Центра экспертизы и контроля готовых лекарственных средств д-р мед. наук Д.В. Горячев; начальник Управления информатизации канд. биол. наук K.A. Кошечкин; начальник Испытательного центра экспертизы качества лекарственных средств канд. фарм. наук А.И. Лутцева; начальник Испытательного центра экспертизы качества медицинских иммунобиологических препаратов д-р мед. наук, проф. A.A. Мовсесянц; директор Центра клинической фармакологии д-р мед. наук, проф. А.Б. Прокофьев; заместитель директора Института фармакопеи и стандартизации в сфере обращения лекарственных средств д-р фарм. наук, проф. М.В. Гаврилин; начальник Управления обеспечения качества Т.Ф. Щербакова; главный метролог C.B. Макаров; секретарь комиссии - начальник отдела научно-методического обеспечения экспертизы лекарственных средств и интеллектуальной собственности Центра планирования и координации научно-исследовательских работ канд. мед. наук, доц. В.В. Блинов, действуя на основании приказа ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России от 27.11.2020 г. № 226, в период с 8 декабря 2020 г. по 24 декабря 2020 г. провела оценку внедрения в практику результатов научно-исследовательской работы «Научное обоснование и разработка методологии биомедицинской экспертизы биомедицинских клеточных продуктов», полученных в 2020 году при выполнении

ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России государственного задания № 056-00003-2003, утвержденного Минздравом России 23 октября 2020 г., часть 2 раздел 22 «Проведение прикладных научных исследований».

Руководствуясь Федеральным законом от 23.08.1996 г. № 127-ФЗ «О науке и государственной научно-технической политике», Главой 38 «Выполнение научно-исследовательских, опытно-конструкторских и технологических работ» части 2 Гражданского кодекса Российской Федерации, Частью 4 «Права на результаты интеллектуальной деятельности и средства индивидуализации» Гражданского кодекса Российской Федерации, приказом Минздрава России от 30.04.2013 г. № 281 «Об утверждении научных платформ медицинской науки», комиссия установила:

- результаты прикладных научных исследований, выполненных под руководством д-ра мед. наук, проф. В.А. Меркулова по теме «Научное обоснование и разработка методологии биомедицинской экспертизы биомедицинских клеточных продуктов», № госрегистрации АААА-А18-118021590045-2, используются в деятельности ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России экспертами для усовершенствования методологии экспертизы качества, эффективности и безопасности биомедицинских клеточных продуктов в соответствии с разработанными правилами и рекомендациями, систематизированными в научно-методическом издании «Руководство по биомедицинской экспертизе биомедицинских клеточных продуктов»;

- научная новизна полученных результатов состоит в том, что впервые обоснованы научные принципы и критерии экспертной оценки качества, результатов доклинических и клинических исследований при оценке эффективности и безопасности биомедицинских клеточных продукгов (БМКП) в ходе проведения биомедицинской экспертизы; научно обоснованы и разработаны стандарты качества (проекты ОФС) БМКП, руководство по биомедицинской экспертизе БМКП и информационно-аналитическая база образцов стандартизированных клеточных линий;

- новизна результатов подтверждена подачей заявки на выдачу свидетельства о государственной регистрации программы для ЭВМ «Стандартизованные клеточные линии» на интранет портале;

- использование полученных результатов позволило разработать и внедрить национальные требования к проведению экспертной оценки эффективности и безопасности биомедицинских клеточных продуктов.

Акт составлен в двух экземплярах: экз. № 1 - в Минздрав России, экз. № 2 - в дело ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава.

Приложение к настоящему акту с описанием результатов научно-исследовательской работы прилагается и является неотъемлемой частью акта.

Председатель комиссии

Члены комиссии

Форма Приложения .N"1 1 к Положению о распоряжении правам> на результаты интеллектуальной деятельности ФГЬУ «НЦЭСМП» Митдрана Рек ни

> ЛЮ

3 1Ь 1енерального

I по экспертизе

I ных средств

< 1ЭСМП»

? I России

В.А. >

ЕЗ.Л. Меркуж в

« /<Г» января 2021 г.

АКТ О ВНЕДРЕН И И результата интеллектуальной деятельности № 14/ПрЭВМ-2020667281

Ирофамма для ЭВМ «Программа «Стандартизованные клеточные линии» на и игранет- портале» (свидетельство о государственной регистрации программы для ЭВМ №2020667281, дата регистрации 22.12.2020, д.та поступления заявки 08.12.2020)

Комиссия по интеллектуальной собственности ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России (далее Комиссия по ПС) в составе: председатель Романов Б.К., секретарь Ьолох Н.И., члены Комиссии: Мурадян Р Р., Игнатова Р..В., Ашмарова Ю.В., Блинов В.В., действуя на основании приказа ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России (далее Учреждение) от 06.09.2018 № 202 (в ред. приказов Учреждения от 02.08.2019 №176, от 01.10.2019 № 223), провела оценку практической применимости вышеназванного РИД, созданного Кошечкиным К.А., Курочкиным Е.И., Захарченко М V, БурмистровоЙ Н.И., Мельниковой Е.В.. Семеновой И.С., Водяковой М V. Меркуловым 13.А., в связи с выполнением своих трудовых обязанностей в

рамках конкретного задання Учреждения по созданию РИД в соответствии с Планом создания объектов ИС в 2020 г., утвержденным 04.12.2019, и Рабочей программой на выполнение этапа К° 3 НИР «Научное обоснонани^ и разработка методологии биомедицинской экспертизы биомедицинских кле i очных продуктов», Per. № 1 ШОК IP AAA А-А18-118021590045 -2, утвержденной 20.11.2019.

Комиссия по ИС, руководствуясь Федеральным законом от 23.08.1996 г. № 127-Ф'З «О науке и государственной научно-технической полигике», Главой 38 «Выполнение научно-исследовательских, опытно-конструкторских и технологических работ» части 2 Гражданского кодекса Российской Федерации, Частью 4 «Права на результаты интеллектуальной деятельности и средства индивидуализации» Гражданского кодекса Российской Федерации, приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 05.06.2018 г. №319 «Об организации в федеральных государственных учреждениях, подведомственных Министерству здравоохранения Российской Федерации, работы ю выявлению, обеспечению правовой охраны, учету и использованию результатов интеллектуальной деятельности, созданных при выполнении научно-исследовательских, опытно-конструкторских и технологических работ», а также оценив сущность, технические и иные характеристики созданного РИД, установила следующее.

Вышеназванный РИЛ внедрен с .01.2021 г. в Испытательный ценгр экспертизы качества JIC при выполнении НИР «Научное обоснование и разработка методологии биомедицинской экспертизы биомедииинекпх клеточных продуктов» ь продукте программы для ЭВМ при проведении биомедицинекой экспертизы БМКП, гак как в п. 2.7.6 отчета о НИР (Per. № НИОКТР АААА-А18-118021590045-2) отражены назначение программы, ее воспроизведение и реализация.

Факт внедрения подтверждаю.

Начальник Испытательного центра экспертизы качества J1С