Микробиологические и экологические особенности штаммов иерсиний, циркулирующих на территории Якутии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Софронова, Октябрина Николаевна

• Софронова, Октябрина Николаевна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Софронова, Октябрина Николаевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространение иерсиниозов в мире и в России

1.2. Источники и факторы передачи инфекции

1.3. Особенности полиморфизма клиники иерсиниозов

1.4. Характеристика биологических свойств иерсиний

1.5. Молекулярно-генетическая характеристика бактерий рода Yersinia..46 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ ИЕРСИНИОЗАМИ НА

ТЕРРИТОРИИ ЯКУТИИ

Глава 3. ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ИЕРСИНИЙ НА ТЕРРИТОРИИ ЯКУТИИ

3.1. Распространение иерсиний в объектах окружающей среды

3.1.1.Распространение иерсиний в популяциях грызунов

3.1.2. Распространение иерсиний в объектах окружающей среды (смывах с овощей, воде открытых водоемов, почве, смывах с оборудования общественного питания)

3.2. Микробиологический мониторинг объектов окружающей среды в осваеваемых промышленных районах Якутии

Глава 4. ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ИЕРСИНИЙ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В ЯКУТИИ

4.1. Принадлежность штаммов Yersinia различного происхождения к био- и серотипам

4.2. Применение молекулярно-генетических методов для определения патогенных свойств иерсиний

4.2.1. Применение ПЦР при исследованиях проб из объектов окружающей среды и клинического материала от больных

4.2.2. Молекулярно-генетическая характеристика штаммов по наличию

некоторых генетических детерминант вирулентности

4.2.3. Изучение генетических характеристик штаммов, обусловленных

генами %угВ и отрЕ

Глава 5. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ СКРИНИНГ АНТИТЕЛ К ВОЗБУДИТЕЛЯМ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗА И КИШЕЧНОГО ИЕРСИНИОЗА В СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ И ПРОМЫШЛЕННЫХ УЛУСАХ (РАЙОНАХ) ЯКУТИИ

5.1. Серологическая диагностика иерсиниозов у больных

5.2. Серологический скриниг иерсиниозов у здорового населения

5.3. Серологический скриниг иерсиниозов у сельскохозяйственных животных

Глава 6. РАЗРАБОТКА СИСТЕМЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА ЗА ЦИРКУЛЯЦИЕЙ ИЕРСИНИЙ В УСЛОВИЯХ

ЯКУТИИ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Микробиологические и экологические особенности штаммов иерсиний, циркулирующих на территории Якутии»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Ежегодно в мире инфекционные и паразитарные болезни регистрируются более чем у 2 млрд. людей. В результате глобализации экономической деятельности, открытия границ, миграции населения, роста объемов международных сообщений и торговли возрастает тенденция распространения инфекционных болезней в будущем. Одним из важных факторов, способствующих росту заболеваемости, является изменение вирулентности и токсинообразующей способности патогенных микроорганизмов [33]. В четвертом оценочном Докладе Межправительственной группы экспертов по изменению климата (МГЭИК - IPCC) в 2008 г. особое внимание уделяется опасности увеличения инфекционной заболеваемости на Севере, в связи с изменением климата и, как следствие, смещение границ леса к северу, равно как и смещение ареала возбудителей и переносчиков инфекционных болезней. В арктических городах происходит рост как среднегодовых и среднемесячных температур, так и числа дней с аномально высокой температурой. В г. Якутске в период с 1999 по 2007 гг. по сравнению с 1961 -1990 гг. средняя температура января увеличилась на 5° С, июля на - 1,4° С, число экстремально жарких дней возросло в 1,7 раза; в результате климатических изменений происходит сокращение территории вечной мерзлоты, и место тундры может занять тайга. С эпидемиологической точки зрения это означает возможность расширения ареалов обитания ряда видов грызунов, являющихся источниками возбудителей многих инфекций [24, 41]. В этой связи реально появление новых подвидов микроорганизмов с измененными биологическими, в том числе генетическими свойствами [52].

Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia enterocolitica широко распространены во многих странах мира, являясь причиной спорадической и групповой заболеваемости. При этом псевдотуберкулез характерен, в основном, для территорий с умеренным и холодным климатом, а кишечный иерсиниоз

распространен повсеместно. Следует подчеркнуть, что фактическая заболеваемость этими инфекциями выше, однако, на ряде территорий регистрация иерсиниозов не проводится, диагностика иерсиниозов осуществляется не на должном уровне и не по единой схеме [7, 52]. Существующие малоактивные природные очаги трансформируются в структурно сложные антропургические очаги, с эпизоотическим процессом в популяциях синантропных грызунов, действующих на территории населенных пунктов [59].

На территории Якутии в период 1979-1998 гг. зарегистрировано 13 вспышек псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза [15].

Значительным итогом научных исследований последних десятилетий являются доказательства этиологической роли ряда представителей вида У. еМегосоИНса в качестве возбудителя кишечного иерсиниоза.

Проблема острых кишечных инфекций (ОКИ) для Якутии актуальна. В период 2002-2011 гг. в структуре всех ОКИ, как среди взрослого, так и детского населения, доминировали острые кишечные инфекции неустановленной этиологии (ОКИНЭ), которые составили 77,8±1,6 и 66,5±2,3%, соответственно [2]. Выявлены региональные особенности возбудителей ОКИ: из 20 широко распространенных бактерий, вызывающих кишечные заболевания, в Якутске наиболее часто встречаются 11 видов энтеробактерий, в том числе У. еМегосо1Шса.

По данным ряда исследователей природные очаги бактериальных инфекций на Севере отличаются значительным своеобразием: циркумполярным распространением, адаптацией возбудителей к типичным для Севера представителям фауны, способностью к размножению в переносчиках и во внешней среде при низких температурах, в изменчивом климате (влажность, оттаивание «вечномерзлых» грунтов (вечная мерзлота). Проблема инфекционной заболеваемости продолжает оставаться актуальной для региона. Многие микробиологические и экологические аспекты, связанные с иерсиниями в условиях Севера, остаются неизученными, и официальная статистика не отражает их истинного распространения [15, 47]. Отсутствуют данные о циркуляции этих

бактерий в условиях повышения среднегодовых температур в Якутии, их роли в возникновении заболеваний ОКИНЭ. Практически нет данных о распространении иерсиний среди диких, синантропных и сельскохозяйственных животных. Ограничены данные об обсемененности объектов окружающей среды на территории Якутии. Не исследованы экологические особенности сохранения иерсиний в условиях низких температур и в условиях повышения среднегодовых температур. В этой связи организация и проведение микробиологических мониторинговых исследований на территории Якутии представляется актуальной.

Степень разработанности темы исследования

В Якутии первая вспышка псевдотуберкулеза была зарегистрирована в сентябре 1974 г. в Мирнинском районе. В дальнейшем до 1998 г. было зарегистрировано еще 13 вспышек псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза [6].

В 90-х годах в Якутии при групповых заболеваниях кишечным иерсиниозом от людей выделяли Y. b'istensenii. По данным литературы, этот вид иерсиний способен продуцировать энтеротоксин YKST, вызывающий симптомы пищевого отравления. Данные по распространению редких видов иерсиний в различных географических зонах ограничены, требовалось уточнение значимости этиологической роли У. b'istensenii, Y. intermedia, Y. frederiksenii [90].

Использование многопраймерной ПЦР - перспективное направлением детекции видов бактерий рода Yersinia. Обнаружение генетического материала непатогенных - Y. kristensenii, Y. frederiksenii, Y. intermedia, Y. bercovieri, Y. mollaretii, Y. rohdei в биологических образцах больного человека может свидетельствовать о том, что клинические проявления инфекционного заболевания могут быть вызваны видами иерсиний, считавшимися ранее непатогенными [43].

Важной эпидемиологической особенностью возбудителей является изменение пейзажа циркулирующих иерсиний, уменьшение доли ранее

доминировавших серотипов, а также появление новых серо-биотипов Y enterocolitica, ранее считавшихся непатогенными [79].

Считалось, что патогенные организмы не могут размножаться во внешней среде, а лишь сохраняются в ней. Вопреки установившемуся мнению, что температурный оптимум для размножения патогенных микробов находится в пределах +37 °С, и они являются мезофилами, полученные данные на модели (Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica) позволили подтвердить концепцию в экологии этих микробов. Культивирование Y. pseudotuberculosis при +8 °С в условиях низкой аэрации увеличивает их адгезивную и инвазивную активность [41]. Эти свойства могут быть следствием адаптации микроорганизма к разным условиям обитания в различных географических зонах, в том числе в условиях Крайнего Севера.

Между тем, сведения о распространении ведущих серо-биотипов и их биологических характеристиках по отдельным географическим зонам России представлены не полностью.

Y. enterocolitica 1А не имеет классических факторов вирулентности: плазмиды (pYV), гена адгезии (ail) и гена энтеротоксина (ystA). Однако, у непатогенных представителей биотипа 1А обнаружен ген ystB, кодирующий термостабильный энтеротоксин YST В, который может играть роль в патогенезе диарей [79]. До настоящего времени циркулирующие на Севере Y. enterocolitica биотипа 1А по признаку патогенности не изучались, равно как и больные с диарейным синдромом на иерсиниозы не обследовались.

Цели н задачи

Цель исследования: микробиологическая характеристика штаммов иерсиний, циркулирующих на территории Якутии, и разработка тактики микробиологического мониторинга иерсиниозов.

Задачи исследования:

1. Установить распространенность представителей рода Yersinia на территории Якутии в различных объектах окружающей среды, в том числе в популяциях мелких млекопитающих.

2. Охарактеризовать штаммы по наличию генетических детерминант вирулентности. Оценить генетическое родство штаммов иерсиний различных видов, изолированных в антропургических и природных очагах Якутии.

3. Оценить заболеваемость иерсиниозами и этиологическую значимость иерсиний, циркулирующих на территории Якутии, при ретроспективном иммунологическом обследовании людей и сельскохозяйственных животных.

4. Разработать тактику микробиологического мониторинга за циркуляцией иерсиний для территорий Якутии.

Научная новизна исследования

На основе комплексного микробиолого-эпидемиологического изучения возбудителей иерсиниозов у людей, животных и в объектах окружающей среды установлена циркуляция различных видов бактерий рода Yersinia (Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica, Y. kristensenii, Y.intermedia, Y.frederiksenii) на территориях народно-хозяйственного освоения Якутии.

Получены новые знания о выделении и частоте распространения иерсиний «редких» видов (Y. kristensenii; Y.intermedia) от грызунов и из воды открытых водоемов. Выделенные на территории Якутии Y. enterocolitica биотипа 1А от грызунов, из овощей и других объектов окружающей среды, ранее, отнесенные к непатогенным иерсиниям, обладают патогенным потенциалом.

Выявлено, что в 80% случаев штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А, считающиеся непатогенными, содержат ген ystB, опосредующий продукцию термостабильного энтеротоксина, что позволяет судить о наличии патогенного потенциала у бактерий, и может обуславливать диарейные проявления у больных с острыми кишечными инфекциями неустановленной этиологии.

На основе выявленных положительных результатов серологических исследований проб больных, страдающих ОКИ, гастроэнтероколитами, здоровых людей, а также животных, получена информация о распространенности иерсиниозов на территории Якутии, которые свидетельствуют о широкой циркуляции иерсиний на изученной территории.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Установлена широкая распространенность бактерий рода Yersinia различных видов (Y. enterocolitica, Y. kristensenii, Y. pseudotuberculosis; Y. intermedia; Y frederiksenii; Yersinia spp.) на территории Якутии в условиях «вечной мерзлоты». Доказано, что наиболее часто встречается Y enterocolitica и Y. kristensenii, основным резервуаром которых в природных и антропургических очагах являются разные виды мелких млекопитающих (серые крысы, полевки, лемминги), что является особенностью территории.

Для исследованных штаммов Y. kristensenii и Y. intermedia раскрыты филогенетические связи и установлены генетические различия, обусловленные полиморфизмом гена gyrB, что вносит существенный вклад в характеристику популяции иерсиний данных видов.

На основе полученных данных, комплексного изучения иерсиний на территории Якутии, был разработан алгоритм микробиологического мониторинга за иерсиниями, включающий порядок организации и проведения лабораторной диагностики с учетом климатических условий, который будет способствовать осуществлению эффективного эпидемиологического надзора за иерсиниозной инфекцией.

Изученные штаммы и их характеристики представлены в коллекции Референс центра по мониторингу за иерсиниозами при ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера.

Для повышения эффективности диагностики псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза в организациях здравоохранения Якутии внедрены методы

ИФА (акт внедрения от 26.12.2011 г. и 26.11.2013 г.) и ПЦР (акт внедрения от 25.12.2012 г.).

В ФГБУ «НЦЭСМП» МЗ России депонирован штамм К kristensenii № 1511, выделенный со смыва из местного картофеля и содержащий хромосомный ген термостабильного энтеротоксина ykst, который может быть использован в качестве тест-штамма при проведении мониторинга за Y. kristensenii.

Полученные данные были использованы при создании документов:

1. Профилактика иерсиниоза: санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.7.2615-10 / Ю.В. Демина, C.B. Сенников, Г.Я. Ценева, Е.А Воскресенская, Е.

A. Богумильчик, О.Н. Софронова, М.В. Чеснокова, В.Т. Климов, К.А Тирских, O.A. Бургасова, JI.K. Иванова, Т.В. Каримова, J1.B. Саяпина - М.: Изд-во ФГУЗ «ФЦГЭ Роспотребнадзора». - 2010. - 19 с.

2. Микробиологический мониторинг циркуляции иерсиний в Республике Саха (Якутия): республиканские методические рекомендации. (МР) / И.Ю. Самойлова,

B.И. Григорьева, О.Н. Софронова, В.Ф. Чернявский, О.Н. Никифоров, И.А.Романова, П.С. Дьячковская, Е.А. Воскресенская, Г.Я, Ценева - СПб.: ВМемА - 2013. - 84 с.

Методология и методы исследования

Методология данной работы соответствует поставленной цели. Предметом исследования явилось выделение с целью изучения распространения штаммов иерсиний, обитающих на территории Якутии, их молекулярно-генетическая характеристика. Анализ научной литературы, посвященной проблеме, проведен на основе формально-логических методов исследования. Планирование и проведение исследований, направленных на решение поставленных задач проводилось на основе общенаучных и специфических методов. Материал, методы исследований, использованные для работы представлены в таблице 1.

Таблица 1. Методы, материалы и объем исследований

Методы Число

1. Бактериологический: * *

1.1. Исследование проб из объектов окружающей среды 44709 пробы

(мелкие млекопитающие, смывы, овощи, фрукты, вода

открытых водоемов, почва, погадки хищных птиц, гнезда,

помет грызунов, фекалии крупного рогатого скота,

свиней).

1.2 Исследование биоматериала от людей (испражнения, 1634 пробы

моча, кровь)**

1.3. Биохимическая идентифицикация выделенных штаммов

бактерий рода Yersinia из объектов окружающей среды:** 237 штаммов

• У. pseudotuberculosis 4 штамма

• Y. enterocolitica 122 штамма

• Y. kristensenii 85 штаммов

• Y.intermedia 2 штамма

• Yfrederiksenii 3 штамма

• Бактерии рода Yersinia 21 штамм

1.4. Определение фаголизиса псевдотуберкулезным

бактериофагом ** 4 штамма

1.5. Идентификация вирулентных иерсиний (РА на стекле) с

использованием СВИ *** 102 штамма

1.6. Серотипирование выделенных штаммов (РА): *** 102 штамма

• Y. pseudotuberculosis 3 штамма

• Y. enterocolitica 99 штаммов

2. Молекулярно-генетический:

2.1. Выделение бактериальной ДНК из штаммов

стандартным методом фенол-хлороформной

депротеинизации *** 68 штаммов

2.2. Идентификация до вида бактерий рода Yersinia

методом многопраймерной ПЦР на основе выявления

гена ompF *** 68 штаммов

2.3. Серотипирование выделенных Y. pseudotuberculosis

методом мультиплексной ПЦР *** 2 штамма

2.4. Секвенирование участка гена gyrB:*** 18 штаммов

• Y. pseudotuberculosis 6 штаммов

• Y. enterocolitica биотипов 1A, 2, 4 4 штамма

• Y. kristensenii 2 штамма

• Yersinia spp. 2.5.. Исследование штаммов методом ПНР на наличие генов***: yscQ (pYV), урт А/С, irp2, ail, ystA,ystB,ykst 2.6. Исследование методом ПЦР проб **: - из объектов окружающей среды (мелкие млекопитающие, смыв, овощи - фрукты, вода открытых водоемов, почва, погадки хищных птиц, гнезда, помет грызунов, фекалии крупного рогатого скота, свиней); - биоматериал (испражнения) от людей 6 штаммов 171 штамм 3257 пробы 203 пробы

3. Иммунологический: 3.1. Определение уровня антител в сыворотках крови людей: реакция непрямой гемагглютинации (РИГА) ** иммуноферментный анализ (ИФА) **; *** 3.2. Определение уровня антител в сыворотках крови животных методом РНГА ** 3.2. Детекция антигенов Y. pseudotuberculosis*: - метод флуоресцирующих антител (МФА) -ИФА* 1687 образцов сыворотки крови (ОСК) 170 ОСК 125 ОСК 4 штамма 40 проб

5. Биоинформатические: *** 5.1. Анализ последовательностей, полученных при секвенировании участка гена gyrB с использованием программы MEGA v.4.

6. Анализ историй болезни 2 истории болезни

**- обработка данных исследования выполнялась в лаборатории ЦГи Э в РС(Я) ***- обработка данных исследования выполнялась на базе ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, С-Петербург; ФГБУН ТИБОХ

ДВО РАН, г. Владивосток.

Материалы

Фекалии от людей и животных

Испражнения (1-2 г) помещали в пептоно-калиевую среду накопления, встряхивали, ставили в холодильник при температуре +4 °С и выдерживали в ней до высева на плотную дифференциально-диагностическую среду (СБТС) до 10-14

дней. Дальнейшие исследования материала проводили в соответствии действующими методическими указаниями МУ 3.1.1.2438-09 «Эпидемиологический надзор и профилактика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза».

Сыворотки крови людей и животных

Образцы сывороток крови (ОСК) исследовали на наличие антител к Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis. При диагностических исследованиях антитела определяли в динамике, первую пробу отбирали в конце 1-й недели, вторую — на 14 день. При серологическом скрининге людей и животных антитела к иерсиниям определяли методами РИГА и ИФА в одном ОСК.

Материал от мелких млекопитающих

Образцы органов мелких млекопитающих растирали в асептических условиях в ступке с песком и фосфатно-буферным раствором; 1,5 мл взвеси переносили в 5 мл среды накопления и исследовали в соответствии с методическими указаниями МУ 3.1.1.2438-09 «Эпидемиологический надзор и профилактика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза».

Объекты внешней среды

Пробы смывов с объектов внешней среды пищеблоков ДДУ, ОУ, ЛПО, предприятий общепита, овощных магазинов, цехов, складов, в очагах иерсиниозной инфекции, отбирали, стерильным тампоном, помещали в 5 мл среды накопления.

Образцы проб из помета, гнезд грызунов, погадки растирали в ступке с песком и фосфатно-буферным раствором; 1,5 мл взвеси переносили в 5 мл среды накопления для исследования.

Воду открытых водоемов в количестве 1-2 л. исследовали методом концентрации на мембранных фильтрах.

Почву 50-100 г помещали в среду накопления в соотношении 1:10 и для посева использовали надосадочную жидкость.

Исследования проводили в соответствии с методическими указаниями МУ 3.1.1.2438-09 «Эпидемиологический надзор и профилактика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза».

Образцы овощей, фруктов

Измельченные образцы овощей и фруктов помещали в 0,85% физиологический раствор, на следующий день 1 мл раствора помещали в 5 мл среды накопления. Исследования проводили в соответствии методическими указания МУ 3.1.1.2438-09 « Эпидемиологический надзор и профилактика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза».

Культуры иерсиний

Всего на территории Якутии бактериологическим методом выделено 237 штаммов бактерий рода Yersinia.

Исследовано молекулярно-генетическими методами 171 свежевыделенных штаммов, в том числе Y. pseudotuberculosis - 3, Y. enterocolitica - 99, Y. kristensenii - 50, Y. intermedia - 2, Y. frederiksenii - 2, и неидентифицированные до вида Yersinia —15 штаммов.

Y. pseudotuberculosis - 3 штамма:

- 3 штамма выделены из органов серых крыс в г. Якутске (птицеферма — Племобъединение) в 2009 г.

Y. enterocolitica - 99 штаммов:

- Y. enterocolitica биотипа 1А - 89, в том числе 37 штаммов, выделенных из органов мелких млекопитающих (Горный, Намский, Мегино-Кангаласский, Ленский, Алданский, Анабарский районы, Якутск); 40 штаммов из овощей (овощные ларьки, склады - Нерюнгринский, Алданский, Мегино-Кангаласский, Амгинский, Намский районы, Якутск); 12 штаммов из объектов окружающей среды и с объектов общепита (смывы с тары, поддона, стеллажей, весов, таза для салатов, мешка, доски для резки овощей, подтоварника, стола для разделки овощей - Вилюйский, Нерюнгринский, Амгинский районы, Якутск);

- Y enterocolitica - биотипов 2, 4 - 10 штаммов, в том числе 2, выделенные из овощей, 3 штамма из смывов, 5 штаммов от грызунов (Анабарский, Амгинский, Горный, Нерюнгринский районы, Якутск).

Y. kristensenii - 50 штаммов, в том числе 47 штаммов из органов грызунов, 1 штамм из воды открытых водоемов, 2 из помета куньих (Анабарский, Булунский, Горный районы, Якутск).

Y intermedia - 2 штамма, выделенные из органов грызунов (Якутск).

Y. frederiksenii - 2 штамма, в том числе 1 выделен из смыва с тары (Якутск), 1 из органов грызунов (Булунский район).

Бактерии рода Yersinia, вид которых установить не удалось -15 штаммов, выделенные из органов грызунов (Горный, Намский, Мегино-Кангаласский, Анабарский районы, Якутск).

Также, кроме выше перечисленных культур иерсиний 3 штамма Y. pseudotuberculosis были дополнительно использованы при генотипировании гена gyrB, которые хранились при -80 °С:

- 2 штамма выделены из испражнений больных в 1994г., 2000г. в Алданском районе и в г. Якутске;

- 1 штамм выделен из органа серой крысы в Алданском районе п. Томмот в 2001г.

Также использованы референс - штаммы Y. enterocolitica IP 8081 (из коллекции института Пастера, Париж); охраноспособный штамм Y. enterocolitica КМ 205 и охраноспособный штамм Y. pseudotuberculosis КМ 211 (из Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб», г. Саратов).

Методы

Бактериологический метод

Выделение иерсиний из материала проводили по схеме (Рисунок 1) посевом в пептонно-калиевую среду с «Холодовым» обогащением при температуре +4 - +8 °С и с последующим высевом материала на 3, 7, 10 сутки на

плотную питательную среду СБТС (производство ФБУН «ГНЦ ПМБ», п. Оболенск) . При использовании среды Эндо проводили щелочную обработку.

Исследуемый материал

V7

нативный на среды

V7

после холодового обогащения

\7

высев на среды

V7

щелочная

( СБТС)

обработка

высев на среды Эндо

-О-

Определение родовых признаков

мочевина+

видовая дифференциация

О

Определение: - биотипа -серотипа - вирулентности

Рисунок 1. Схема выделения и идентификации иерсиний

Высевы проводили на дифференциальные среды, содержащие мочевину: Олькеницкого, Клиглера, Любарева; универсальный скошенный столбик (УСС). Идентификацию и дифференциацию уреазоположительных культур проводили при помощи тестов: методом флуоресцирующих антител (МФА) для детекции Y. pseudotuberculosis. Определение оксидазного теста, образование индола (+28 °С), ферментативной активности на средах Гисса (+28 °С), проводили с использованием набора реактивов питательных сред для идентификации энтеробактерий (производство ФБУН ГНЦ ПМБ, п. Оболенск; ФГУЦ НПО «Микроген», г. Махачкала; « Медис», г. Ростов-на- Дону). Использовали системы

индикаторные бумажные для идентификации энтеробактерий (производство ФГУП НПО «Микроген», г. Нижний Новгород).

Определение подвижности проводили при +22 и +37 °С. Проводили реакции с псевдотуберкулезным фагом при +28 °С (производство ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб», Саратов).

Для определения биохимических свойств исследованных штаммов использовали среды и реагенты согласно общепринятым методикам [28, 29]. Дифференциацию 7. pseudotuberculosis 0:1 и У. enterocolitica пяти биоваров и других видов бактерий рода Yersinia проводили в соответствии с методическими указаниями МУ 3.1.1.2438-09 «Эпидемиологический надзор и профилактика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза».

Видовую принадлежность выделенных культур устанавливали на основании комплекса типичных морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, антигенных свойств.

Штаммы Y. pseudotuberculosis и, так называемых, Y. enterocolitica-like видов (близкородственных Y. enterocolitica видов иерсиний), исследовали также с помощью тестов, включенных в состав «Тест-системы для внутриродовой и внутривидовой дифференциации бактерий рода Yersinia», разработанной в лаборатории бактериальных инфекций ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера [5].

В таблице 2 приведен набор биохимических тестов, использованных для окончательной идентификации выделенных культур.

Серотипирование культур Y. pseudotuberculosis проводили с использованием диагностических иммуноглобулинов для РА на стекле «Иммуноглобулины диагностические псевдотуберкулезные поливалентные адсорбированные лошадиные для реакции аглютинации на стекле, лиофилизат для диагностических целей», предназначенных для идентификации Y. pseudotuberculosis I-VI сероваров (производство ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб», г. Саратов) в соответствии прилагаемой инструкцией, а также с использованием набора коммерческих моновалентных сывороток к серотипам Y.

pseudotuberculosis 0:1 и 0:3 в реакции агглютинации (РА) на стекле (производство ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г. Санкт-Петербург).

Таблица 2 Биохимические свойства изолированных штаммов Yersinia

\ Тест Вид \ Уреаза Орнитин Лизин Триптофан Сахароза Ксилоза Сорбитол Салицин Мелибиоза Рамноза Раффиноза Твин 80 Р. Фогеса Проскауера (26 °С) Образование индола

Y. enterocolitica 1А + + — — + + + + — - - + + +

Y. enterocolitica 2 б/т + + — — + + + + +

Y. enterocolitica 4 б/т + + — — + — + — - — — — + —

Y. frederiksenii + + — — + + + + — + В В + +

Y. kristensenii + + — — — + + В — — - (-) — В

Y. intermedia + + — — + + + + В В В В + +

Y. pseudotuberculosis + - - — + - + + В — - -

Культуры Y. enterocolitica серотипировали с использованием набора коммерческих моновалентных сывороток к серотипам 0:3; 0:4; 0:4,32; 0:4,33; 0:5; 0:5,27; 0:6,30; 0:6,31; 0:7,8; 0:9; 0:13; 0:13,7 (производство ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г. Санкт-Птербург) с помощью реакции агглютинации на стекле по общепринятой методике.

Серотипирование 2 культур Y. pseudotuberculosis осуществляли в мультиплексной ПЦР с использованием специфичных праймеров по методике Bogdanovich Т. [66].

Идентификация вирулентных иерсиний Идентификацию вирулентных иерсиний проводили с использованием промышленных серий диагностической сыворотки к вирулентным иерсиниям (СВИ) (производство ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени

Пастера, Санкт-Петербург). Реакция со СВИ основана на выявлении белков наружной мембраны иерсиний, детерминированных плазмидой pYV 46 MDa в реакции агглютинации (РА) на стекле, в соответствии с методическими рекомендациями «Псевдотуберкулез и иерсиниозы» - СПб, 2005.

Идентификация бактериофагом диагностическим псевдотуберкулезным

Идентификацию возбудителя псевдотуберкулеза проводили с использованием диагностического псевдотуберкулезного бактериофага (производство ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб», г. Саратов). Ориентировочную пробу с бактериофагом псевдотуберкулезным ставили методом «стерильного пятна» в соответствии с прилагаемой инструкцией.

Молекулярно-генетические методы

Для выделения ДНК из образцов фекалий, эмульсий органов грызунов, помета птиц, погадок хищных птиц использовали коммерческий набор "ДНК-сорб-В" (производство ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, г. Москва); для выделения ДНК из смывов, овощей, воды открытых водоемов, почвы использовали коммерческий набор "ДНК-сорб-С" (производство ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, г. Москва), согласно прилагаемой инструкции.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Софронова, Октябрина Николаевна, 2015 год

Список литературы

1. Арзуманян, В.Г. Антагонистическое взаимодействие стрессорных факторов при росте микроорганизмов в условиях, имитирующих параметры их природных экотопов / В.Г. Арзуманян, Н.А. Воронина, О.В. Гейдебрехт // Микробиология. - 2002. - вып. 71. - С. 160 - 165.

2. Астафьев, В.А. Оценка заболеваемости острыми кишечными инфекциями по интегральному показателю в Республике Саха (Якутия) / В.А. Астафьев, М.Е. Игнатьева, И.Ю. Самойлова, JT.A. Степаненко, Е.В. Анганова, А.В. Духанина // Якутский медицинский журнал. - 2012. - №3 (39). - С. 55 - 58.

3. Бахолдина, С.И. Экологические аспекты вирулентности бактерий псевдотуберкулеза / С.И. Бахолдина, Т.Ф. Соловьева // Вестник Дальневосточного отделения РАН. - Владивосток, 2009. -№3. - С. 85 - 90.

4. Богумильчик, Е.А. Современные аспекты внутривидовой дифференциации бактерий рода Yersinia / Е.А. Богумильчик, М.В. Афанасьев, М.Б. Ярыгина, Г.Я. Ценева, Е.А. Воскресенская // Молекулярная эпидемиология актуальных инфекций: Материалы межд. конф. - СПб., 2013. - Т. 3. - №2. - С. 116.

5. Богумильчик, Е.А., Патент на изобретение «Тест-система для дифференциации видов и биотипов бактерий рода Yersinia» № 2518297 от 08.04.2014. Авторы: Е.А. Богумильчик, Г.Я. Ценева, Е.А. Воскресенская.

6. Воскресенская, Е.А. Генетические особенности Yersinia pseudotuberculosis, вызвавших групповое заболевание в организованном коллективе на Крайнем Севере / Е.А. Воскресенская, Г.Я. Ценева, А.П. Ивашиненко, JI.B. Литвинова, Е.А. Шиманская, А.А. Козаренко // Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: Материалы IV межд. конф. - СПб., 2008. - С. 77.

7. Воскресенская, Е.А. Генетические особенности Yersinia pseudotuberculosis и эпидемиологические черты групповых заболеваний псевдотуберкулезом в организованных коллективах / Е.А. Воскресенская, Г.Я. Ценева, А.А. Козаренко, А.П. Ивашиненко, Л.В. Литвинова, Е.А. Шиманская // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2009. -№3. - С. 31 - 34.

8. Вострикова, О.П. Структура и функция порообразующих белков бактерий рода Yersinia / О.П. Вострикова, Н.Ю. Ким, Г.Н. Лихацкая, К.В. Гузев, Т.И. Вакорина, В.А. Хоменко, О.Д. Новикова, Т.Ф. Соловьева // Биоорганическая химия. - 2006. - Т. 32. - №4. - С. 371-383.

9. Вострикова, О.П. Патент на изобретение «Способ дифференциальной диагностики псевдотуберкулеза и иерсиниоза и диагностический набор для его осуществления» № 2339952 РФ МПК 7 G 01 №33/53, 33/569. Авторы: О.П. Вострикова, O.IO. Портнягина, В.Г. Малашенкова, В.А. Хоменко, О.Д. Новикова,

A.B. Гордеец, Т.Ф. Соловьева.

10. Грачева, И.В. Современное состояние классификации некоторых патогенных представителей родов Bacillus, Brucella, Burkholderia, Francisella, Vibrio, Yersinia / И.В. Грачева, Т.Г. Караваева, Т.К. Меркулова, О.П. Плотников // Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 2009. - вып. 99. - С. 42-49.

11. Гузев, К.В. Молекулярная характеристика OmpF- подобных поринов патогенных Yersinia / К.В. Гузев, М.П. Исаева, О.Д. Новикова, Т.Ф. Соловьева,

B.А. Рассказов //Биохимия. - 2005. - Т. 70 а. - вып. 10.-С. 1338-1345.

12. Данилина, Л.Н. О групповой заболеваемости ОКИ в специальной общеобразовательной школе-интернате г. Тулы / Л.Н. Данилина, H.A. Бажажина, Л.А. Ульянова, Е.В. Ушакова, Т.А. Попова // Итоги и перспективы обеспечения эпидемиологического благополучия населения РФ: Материалы X съезда ВНПОЭМП. - Москва, 2012. - Т. 2. - №1-2. - С. 257.

13. Демина, Ю.В. Эпидемиологический надзор и профилактика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза: методические указания МУ 3.1.1.2438-09 / Ю.В. Демина, Г.Я. Ценева, Е.А. Воскресенская, Е.А. Богумильчик, А.Л. Панин, Л.В. Саяпина, А.Н. Малахаева, М.В. Чеснокова, В.Т. Климов, К.А. Тирских, Л.К. Иванова, М.Б. Черепанова -Москва, 2010. - 52 с.

14. Дробященко, М.А. Колонизация и размножение Yersinia enterocolitica 09 в пищевых продуктах, изготовленных в современных технологических условиях / М.А. Дробященко, В.И. Пушкарева, Д.С. Юрьев, В.Ю, Поляков // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2010. - №4 (53). - С. 51-56.

15. Егоров, И.Я. Псевдотуберкулез и кишечный иерсиниоз / И.Я. Егоров, A.C. Марамович, А.Д. Ботвинкин // Эпидемиологический надзор за особо опасными и природно-очаговыми инфекциями в условиях Крайнего Севера. — Якутск: Кудук, 2000. - С. 123-133.

16. Егоров, И.Я. Влияние природных и социальных условий на эпидемический процесс на Крайнем Севере / И.Я Егоров // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. - Хабаровск, 2006. - №8. - С. 8.

17. Ермолаева, С.А. Вариабельность функциональных доменов факторов патогенности как молекулярная основа полигостальности возбудителей сапронозов / С.А. Ермолаева, Е.А. Зайцева, P.P. Агдамов, Н.Ф. Тимченко // Актуальные проблемы природной очаговости болезней. Национальные приоритеты России. - Омск, 2009. - спец. выпуск №2. - С. 161-163.

18. Зайцев, В.М. Прикладная медицинская статистика / В.М Зайцев, В.Г. Лифляндский, В.Н. Маринкин. - СПб.: Фолиант, 2003. - 432 с.

19. Иванов, Л.И. Мониторинг природно-очаговых инфекций на сопредельных территориях России и Китая в Дальневосточном регионе / Л.И. Иванов, Н.П. Высочина, Н.И. Здановская, Ю.С. Мусатов, A.A. Кондаков, Н.М. Пуховская, В.Т. Смирнов, H.H. Жукова, Т.В. Булатова, Т.Ю. Нехрюк, В.А. Ott, A.C. Зимин, Ян Ливэй, Ху Консинь, Ван Баолинь, Ван Цзинь // Журнал инфекционной патологии. - Иркутск, 2009. - Т. 16. - №3. - С. 117-118.

20. Иванова, Л.К. Псевдотуберкулез в Новосибирской области / Л.К. Иванова, М.В. Чеснокова, В.Т. Климов, Т.В. Каримова, Л.И. Козловский, О. Ю. Якунина // Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: Материалы IV межд. конф. -СПб., 2008.-С. 93.

21. Каримова, Т.В. Молекулярно-биологическая характеристика Yersinia enterocolitica, циркулирующих в различных регионах Российской Федерации / Т.В. Каримова, Е.А. Богумильчик, Е.А. Воскресенская, В.Т. Климов, Г.Я. Ценева, М.В. Чеснокова, Л.И. Иванов, Т.Б. Поутонен, A.B. Васильева, Т.В. Громова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2012. - № 1-3. — С. 16-21.

22. Климов, В.Т. Молекулярно- генетический мониторинг на основе ПЦР О- генотипирования / В.Т Климов., М.В. Чеснокова // Молекулярная генетика. — 2007.-№4.-С. 14-17.

23. Кокорина, Г.И. Патотипы возбудителя псевдотуберкулеза их значение в инфекционном процессе / Г.И. Кокорина, Е.А. Воскресенская, В.Т. Климов, М.В. Чеснокова // Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины: Материалы Росс. науч. практич. конф., посвященной 100-летию кафедры инф. болезней ВМА им. С.М. Кирова. - СПб., 2006. - С. 154.

24. Кокорина, Г.И. Генотипы штаммов Yersinia pseudotuberculosis и их клинические и диагностичекое значение: автореф. дисс. ... канд. мед. наук: 03.02.03 / Кокорина Галина Ивановна. - СПб., 2012. - 22 с.

25. Кокорина, Г.И. Генотипы штаммов Yersinia pseudotuberculosis и их клиническое и диагностическое значение: дисс. ... канд. мед. наук: 03.02.03 / Кокорина Галина Ивановна. - СПб., 2013. — 142 с.

26. Коренберг, Э.И. Происхождение возбудителей природноочаговых болезней / Э.И. Коренберг // Природа. Эпидемиология. — 2006. - №10. - С. 33-^40.

27. Куклева, JI.M. Бактериальная биопленка и особенности ее образования у возбудителя чумы и других, патогенных иерсиний / JT.M. Куклева, Г.А. Ерошенко, Н.А. Видяева, В.В. Кутырев // Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 2011. - вып. №110. - С. 5-11.

28. Лабинская, А.С. Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга I / под ред. А.С. Лабинской., Е.Г. Волиной -М.: Издательство БИНОМ, 2008. - 1080 с.

29. Лабинская, А.С. Руководство по медицинской микробиологии. Частная медицинская микробиология и этиологическая диагностика инфекций. Книга II / под ред. А.С. Лабинской, Н.Н. Костюковой, С.М. Ивановой. - М.: Издательство БИНОМ, 2010. - 1152 с.

30. Литвин, В.Ю. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий. / В.Ю. Литвин, А.Л. Гинцбург, В.И. Пушкарева, Ю.М. Романова, Б.В. Боев. - М: Фармарус-Принт, 1998. -256 с.

31. Литвин, В.Ю. Сапронозы и природная очаговость болезней / В.Ю.Литвин, Г.П. Сомов, В.И. Пушкарева // Актуальные проблемы природной очаговости болезней. Национальные приоритеты России. - Омск, 2009 - спец. выпуск №2.-С. 11-12.

32. Некрасова, Л.И. О северной границе ареала Yersinia pseudotuberculosis в Евразии / Л.И. Некрасова, Г.В. Ющенко // Инфекции, обусловленные иерсиниями (иерсиниоз, псевдотуберкулез и другие актуальные инфекции): Материалы межд. конф. - СПб., 2000. - С. 42.

33. Онищенко, Г.Г. Борьба с инфекционными болезнями — приоритетная тема председательства Российской Федерации в «группе восьми» в 2006 г. // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. - Хабаровск, 2006 - №8. — С. 3-4.

34. Панин, А.Л. Микробный пейзаж иерсиний, изолированных на территории Ленинградской военно-морской базы / А.Л. Панин, В.Б. Сбойчаков, Г.Я. Ценева, В.Н. Болехан, М.Г. Муравьева, С.В. Борисенко // Итоги и перспективы обеспечения эпидемиологического благополучия населения РФ: Материалы X съезда ВНПОЭМП. - Москва, 2012. - Т 2. - № 1-2. - С. 310.

35. Портнягина, О.Ю. Диагностика псевдотуберкулеза с помощью иммуноферментной тест-системы на основе белка порина из Yersinia pseudotuberculosis / О.Ю. Портнягина, О.П. Вострикова, В.А. Хоменко, О.Д. Новикова, Т.Ф. Соловьева, С.Н. Бенио, В.Г. Малашенкова, А.В. Гордеец // Тихоокеан. мед. журн. - 2001. - № 2. - С. 23-25.

36. Портнягина, О.Ю. Разработка и апробация высокоэффективной тест-системы для диагностики иерсиниозов и внедрение их в практику здравоохранения / О.Ю. Портнягина, О.П. Вострикова, О.Д. Новикова // Тихоокеан. мед. журн. - 2010. -№ 3. - С. 85-90.

37. Сиволодский, Е.П. Систематика и идентификация энтеробактерий / Е.П. Сиволодский. - 3-е изд., перераб. и дополн. - СПб., 2011. - 56 с.

38. Смирнова, Е.Ю. Этиологическая значимость отдельных серотипов Yersinia enterocolitica в патологию людей и животных на Европейском Севере

России / Е.Ю. Смирнова, В.В. Сочнев, H.A. Рыбакова, Д.А. Мамлеева // Ветеринарная патология. - 2004. - №4. - С. 69-73.

39. Смирнов, И.В. Возбудитель иерсиниоза и близкие к нему микроорганизмы // Клиническая микробиология, антимикробная химиотерапия. -2004.-Т. 6.-№1.- С. 10-15.

40. Соколов, П.Н. Оптимизация бактериологической диагностики в осуществлении эпидемиологического надзора за иерсиниозами в Тюменской области / П.Н. Соколов, В.В. Черемных, Б.Ф. Медведев, Н.С. Панова // Актуальные проблемы природной очаговости болезней. Национальные приоритеты России. — Омск, 2009. - спец. выпуск №2. - С. 157—158.

41. Сомов, Г.П. Псевдотуберкулез / Г.П. Сомов, П.И. Покровский, H.H. Беседнова, Ф.Ф. Антоненко. — М.: Медицина, 2001. — 256 с.

42. Старостина, Н.В. Эпидемиологические и экологические особенности заболеваний, вызываемых Yersinia frederiksenii, Yersinia kristensenii, Yersinia intermedia: автореф. дис. ...канд. мед. наук: 14.00.30 / Старостина Наталья Валерьевна - Москва, 2000. - 23 с.

43. Стенкова, A.M. Разработка многопраймерной ПНР для идентификации бактерий рода Yersinia и дифференциации патогенных видов Y.pestis, Y.pseudotuberculosis, Y. enterocolitica / A.M. Стенкова, М.П. Исаева, В.А. Рассказов. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2008. -№3. - С. 18-23.

44. Стенкова, A.M. Генетический полиморфизм неспецифических поринов Yersinia enterocolitica'. Молекулярная мимикрия и аутоиммунные заболевания / A.M. Стенкова, Н.М. Тищенко, М.П. Исаева, В.А. Рассказов. A.B. Ракин, С.Е. Hargreaves, J.P.Banga // Гетерогенность популяций бактерий и вирусов и ее отражение в эпидемиологии и клинике инфекционных болезней: Материалы первой всероссийской конф. - Владивосток, 2013. - С. 96-98.

45. Сунцов, В.В. Чума. Происхождение и эволюция эпизоотической системы (экологические, географические и социальные аспекты) /В.В. Сунцов, Н.И. Сунцова. - М.: Изд. КМК, 2006. - 247с.

46. Тимченко, Н.Ф. Роль растений в экологии Yersinia pseudotuberculosis / Н.Ф. Тимченко, Е.В. Персиянова // Биологические науки. Фундаментальные исследования. - 2013. - №6. - С. 1442-1448.

47. Тырылгин, М.А. Проблемы охраны здоровья населения Крайнего Севера, на примере региона Якутия / под редакцией М.И. Томского. -Новосибирск: Наука, 2008. - 302с.

48. Успенский, В.Б. Оценка эпидемиологической ситуации по псевдотуберкулезу в г. Иркутске / В.Б. Успенский Е.И. Демидова, В.Н. Сергеева, Л.П. Нурсоянова, И.А. Кудрявцева, М.В. Чеснокова, В.Т. Климов // Журнал инфекционной патологии. — Иркутск, 2009. - Т. 16. - №3. — С. 210-211.

49. Ценева, Г.Я. Биологические свойства иерсиний и лабораторная диагностика псевдотуберкулеза и иерсиниоза: пособие для врачей / Г.Я. Ценева, Е.А. Воскресенская, НЛО. Солодовникова - СПб., 2001. - 60с.

50. Ценева, Г.Я. Молекулярные аспекты вирулентности иерсиний / Г.Я. Ценева, Н.Ю. Солодовникова, Е.А. Воскресенская // Клиническая микробиология, антимикробная химиотерапия. - 2002. -№3. - С. 248-266.

51. Ценева, Г.Я. Псевдотуберкулез и иерсиниоз (эпидемиология, клиника, диагностика, терапия): методические рекомендации / Г.Я. Ценева, Г.И. Кокорина, Е.А. Воскресенская, О.А. Шендерович. - СПб., 2005. - 50с.

52. Ценева, Г.Я. Иерсинии и иерсиниозы / Г.Я. Ценева. - СПб.: Бастион, 2006.-168 с.

53. Чеснокова, М.В. Генотипирование Yersinia pseudotuberculosis, выделенных в Сибири и на Дальнем Востоке / М.В. Чеснокова, В.Т. Климов, А.С. Марамович // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунобиологии. - 2006. - №6. - С. 20-25.

54. Шобоева, Р.С. Эпидемиологическая характеристика вспышек псевдотуберкулеза в Республике Бурятия / Р.С. Шобоева, М.В. Чеснокова, В.Т. Климов, А.С. Марамович, Г.А. Саламатова, Л.В. Байранова, К.А. Тирских, М.Б. Черепанова // Журнал инфекционной патологии. - Иркутск, 2009. - Т. 16. - №3. -С. 49-52.

55. Шубин, Ф.Н. Плазмидная характеристика популяции Yersinia pseudotuberculosis на Юго - Западной Сибири / Ф.Н. Шубин, Г.В. Ревина // Инфекции, обусловленные иерсиниями ( иерсиниоз и псевдотуберкулез), и другие актуальные инфекции: Материалы межд. конф. - СПб., 2000. - С. 71.

56. Шурыгина, И.А. Псевдотуберкулез / И.А Шурыгина, М.В. Чеснокова, В.Т. Климов, И.В. Малов, А.С. Марамович. - Новосибирск: Наука, 2003. - 319 с.

57. Щелчкова, М.В. Анализ заболеваемости острыми кишечными инфекциями населения Республики Саха (Якутия) и г. Якутска / М.В. Щелчкова, В.К. Ядрихинская // Якутский медицинский журнал. - 2008. - № 4 (24). — С. 6467.

58. Юсупова, Р.С. Вспышка иерсиниоза в Акташынском районе Республики Татарстан / Р.С. Юсупова, Э.В. Горловская, Н.М. Хакимов // Инфекции, обусловленные иерсиниями ( иерсиниоз, псевдотуберкулез и другие актуальные инфекции): Материалы межд. конф. — СПб., 2000. — С. 74-75.

59. Ющенко, Г.В. Псевдотуберкулез и иерсиниоз: эпидемиологические и экологические аспекты // Инфекции, обусловленные иерсиниями (иерсиниоз и псевдотуберкулез), и другие актуальные инфекции: Материалы межд. конф. -СПб., 2000. - С. 2.

60. Ющук, Н.Д. Иерсиниозы / Н.Д. Ющук, Г.Я. Ценева, Г.Н. Кареткина, Л.Е. Бродов. - М: Медицина, 2003. - 206 с.

61. Alan, McNally. The outbreak that isn't an outbreak - genomic investigation of fatal bovine diarrhea to Yersinia pseudotuberculosis in Brazil / Mc.Nally Alan, Jose Francisco, Sandra Reuter. Nicolas Thomson // 11th International Symposium Yersinia. - China. - 2013. - P. 52.

62. Barral, Marta. Prevalence of pathogenic Yersinia species in wild boars of the Basgue Country (Nort of Spain) / Marta Barral, Maialen Arrausi-Subira, Jose Carlos ibobe, Raguel Axaerandio, Xeider Gerrikagaitia // 11th International Symposium Yersinia. - China. - 2013. - P. 11.

63. Batzilla, Julia. The pathogenic potential of Yersinia enterocolitica 1A / Julia Batzilla, Juergen Heesemann, Alexander Rakin // International Journal of Medical Microbiology.-2011.-vol. 301.-P. 556 - 561.

64. Bhaduri, Saumya. Prevalence of pathogenic Yersinia enterocolitica strains in pigs in the United States / Saumya Bhaduri // Appl. Envirion. Microbiol. - 2005. — № 11 - P. 7117-7121.

65. Bhaduri, Saumya. Prevalence, serotype, virulence characteristics, clonality and antibiotic susceptibility of pathogenic Yersinia enterocolitica from swine feces / Saumya Bhaduri //10 th International Symposium Yersinia. - Recife, Brazil. - 2010. — P. 36.

66. Bogdanovich, T. Use of O-Antigen Gene Cluster-Specific PCRs for the Identification and O-Genotyping of Yersinia pseudotuberculosis and Yersinia pestis / T. Bogdanovich, E. Carniel, H. Fukushima, M. Skurnik // Clin. Microbiol. - 2003. - Vol. 41.-P. 5103-5112.

67. Campioni, Fabio. Genetic diversity and pathogenic potential of Y. enterocolitica biotype 1A strains of clinical and non - clinical origins isolated from Brazil and Chile / Fabio Campioni, Juliana Pfrimer Falcao // 10 th International Symposium Yersinia. - Recife, Brazil. - 2010. - P. 78.

68. Carniel, E. Characterization of a large chromosomal high-pathogenisity island in biotype IB Yersinia enterocolitica / E. Carniel, I. Guilvout, M. Prentice // Journal of Bacteriology. - 1996. - Vol. 178 (23). - P. 6743-6751.

69. Carnoy, C. Yersinia pseudotuberculosis superantigenic toxins / C. Carnoy, M. Simonet // Bacterial protein toxins: a comprehensive sourcebook: ed. by J.E. Alouf and J.H. Freer. - London.: Academic Press, 1999. - P. 611 - 622.

70. Conor, G. Clinical Features of Patients with Novel Yersinia Species / G. Conor, M. Loftus, C. Gavin, G. Tseneva // Digestive Diseases. - 2002. - vol. 47. — №12.-P. 2805-2810.

71. Coornhof, H.J. Yersiniosis II: The Pathogenesis of Yersinia Infections / H.J. Coornhof, R.A. Smego, Jr. M. Nicol // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 1999. -№ 18 -P.87-112.

72. De Almeida, A.M. Chromosomal irp2 gene in Yersinia: distribution, expression, deletion and impact on virulence / A.M. de Almeida, A. Guiyoule, I. Guilvout, I. Iteman, G. Baranton, E. Carniel // Microb. Pathog. - 1993. - Vol. 14. - № l.-P. 9-21.

73. Duffy, E.A. Extent of microbial contamination in United States retail pork products / E.A. Duffy, K.E. Belk, J.N. Sofos, G.R. Bellinger, A. Pape, G.C. Smith // Journal of Food Protection. -2001. -№ 64. - P. 172-178.

74. Fukushima, H. Geographical heterogeneity between Far Eastern and Western countries in prevalence of the virulence plasmid, the superantigen Yersinia pseudotuberculosis-derived mitogen, and the high-pathogenicity island among Yersinia pseudotuberculosis strains / H. Fukushima, J. Matsuda, R. Seki, M. Tsubokura, N. Takeda, F.N. Shubin, I.K. Paik, X.B. Zhend // J. Clin. Microbiol. - 2001. - vol. 39. -№ 10.-P. 541-547.

75. Markova, Yu. A. Interaction of Yersinia pseudotuberculosis with potato plants in vitro / Yu. A. Markova, A.S. Romanenko, V.T. Klimov, M.V. Thesnocova // Journal of stress physiology and biochemistry. - 2006. - vol. 2. -№ 1. - P. 21 -27.

76. Mikulskis, A.V. Regulation ot the Yersinia enterocolitica enterotoxin Yst gene. Influence of grown phase, temperature, osmolarity, pH and bacterial host factors / A.V. Mikulskis, J. Delar, H.V. Thi, G.R. Cornelis // J. Molecular Microbiology. - 1994. -Vol. 14 (Issue 5).-P. 905-915.

77. Perry, Robert D. Yersiniabactin and plague pathogenesis / Robert D. Perry, James T. Paulley, Olga Kirillina, Alexander G. Bobrov, Jasqueline D. Fetherson //10 th International Symposium Yersinia. - Recife, Brazil. - 2010. - P. 44.

78. Rakin, A.V. Gains and losses in Yersinia enterocolitica genomes / A.V. Rakin // 10 th International Symposium Yersinia. - Recife, Brazil. - 2010. - P. 88.

79. Ramamurthy, T. The novel heat-stable enterotoxin subtype gene (ystB) of Yersinia enterocolitica: nucleotide sequence and distribution of the yst genes / T. Ramamurthy, K. Yashino, X. H. Huang, Nair G. Balakrish, E. Carniel, T. Maruyama, IT. Fukushima, T.Takeda // J. Microbial. Pathog. - 1997. -N 23. - P. 189 - 200.

80. Rastawicki, Waldemar. Emergence of high patogenicity Yersinia enterocolitica bioserotype lB/0:8 infections in Poland / Waldemar Rastawicki, Jolanta Szych, Natalia Rokasz, Katarzyna Zasharczuk, Tomasz Wolkowicz, Rafal Gierczynski // 11th International Symposium Yersinia. - China. - 2013. - P. 71.

81. Rawlins, M.L. Evaluation of a western blot method for the detection of Yersinia antibodies: evidence of serological cross-reactivity between Yersinia outer membrane proteins and Borrelia burgdorferi / M.L. Rawlins, C. Gerstner, H.R. Hill, C.M. Litvin // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 2005. - Vol. 12. - P. 1269-1274.

82. Reuter, Sandra. Plasmid variation and variety in Y. enterocolitica / Sandra Reuter // 10 th International Symposium Yersinia. - Recife, Brazil. - 2010. - P. 75-76.

83. Schaake, Julia. Host-and serotype-specific colonization by Yersinia enterocolitica / Julia Schaake, Anna Drees, Petra Gruning, Frank Uuczka, Peter Valentin- Weigand, Petra Dersh // 11th International Symposium Yersinia. - China, 2013.-P. 76.

84. Singh, Itender. Production of Yersinia stable toxin (YST) and distribution ofysi genes in biotype 1A strains of Yersinia enterocolitica / Itender Singh, Jugsharan S. Virdi // J. of med. Microbiol. - 2004 - №53. - P. 1065-1068.

85. Skumik, M. Yersinia surface structures and virulence / M. Skurnik // 11th International Symposium Yersinia. - China - 2013. - P. 82.

86. Souzal de, Roberto Antonio. Characterization of the adhesion and invasion potential of Ytnassiliensis species / Roberto Antonio de Souzal, Juliana Pfrimer Falcao //10 th International Symposium Yersinia - Recife, Brazil. - 2010. - P. 73.

87. Sprague, L. D. Yersinia aleksiciae sp.nov. / L.D. Sprague, H. Neubauer. // Int. Jour. Syst. Evol. Microbiol. - 2005. - vol. 55. - P. 831-835.

88. Sprague, L.D. Yersinia similis sp.nov. / L.D. Sprague, H.C. Scholz, S. Amman, H.J. Busse, H. Neubauer // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. - 2008. - vol. 58. -P. 952-958.

89. Stenkova, A.M. The molecular phylogeny of gyr B gene: a molecular marker for systemic of Yersinia / A.M. Stenkova, M.P. Isaeva, E.P. Bystrytskay, K.V.

Gyzev, V.A. Rasskazov, A.V. Rakin // Adv. Exp. Med. Biol. - 2012. - Vol. 954. - P. 53 -56.

90. Sulakvelidze, Alexander. Yersinia other than Y. enterocolitica, Y. pseudotuberculosis and Y. pestis: the ignored species / Alexander Sulakvelidze // Microbes and infection. - 2000. - № 12. - P. 497-513.

91. Tamura, K. Molecular Evolutionary Genetics Analysis (MEGA) software version 4.0. / K. Tamura, J. Dudley, M. Ney, S. Kumar // Molecular Biology and Evolution. - 2007. - Vol. 24 - P. 1596 - 1599.

92. Thoerner, P. PCR detection of virulence genes in Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis and investigation of virulence gene distribution / P. Thoerner, CI. Bin Kingombe, K. Bogli-Stuber, B. Bissig-Choisat, T.M. Wassenaar, J. Frey, T. Jemmi // J. Appl. Environ Microb. - 2003. vol. 69 (3). - P. 1810-1816.

93. Tseneva, G.Ya. The Y. pseudotuberculosis infection in the Russian Federation / G.Ya. Tseneva, M.V. Chesnokova, O.A. Burgasova, L.V. Sayapina, T.V. Karimova //10 International Symposium Yersinia. - Recife, Brazil, - 2010. - P. 101102.

94. Uuczka Uuczka, Frank. Insights into the unique virulence gene regulation of Yersinia enterocolitica subsp. paleartica 0:3 / Frank Uuczka // 10th International Symposium Yersinia. - Recife, Brazil. - 2010. - P. 57.