Концепция и механизмы патогенного действия кальций-фосфатных бионов на систему кровообращения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, доктор наук Кутихин Антон Геннадьевич

• Кутихин Антон Геннадьевич
• доктор наук
• 2022

Оглавление диссертации доктор наук Кутихин Антон Геннадьевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 РОЛЬ НАРУШЕНИЙ МИНЕРАЛЬНОГО ГОМЕОСТАЗА В РАЗВИТИИ БОЛЕЗНЕЙ СИСТЕМЫ КРОВООБРАЩЕНИЯ, СПОСОБЫ ИХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ТЕРАПИИ И ПАТОГЕННЫЕ ЭФФЕКТЫ КАЛЬЦИЙ-ФОСФАТНЫХ БИОНОВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 НАРУШЕНИЯ МИНЕРАЛЬНОГО ГОМЕОСТАЗА КАК ФАКТОР РИСКА БОЛЕЗНЕЙ СИСТЕМЫ КРОВООБРАЩЕНИЯ

1.2 КЛИНИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ФОРМИРОВАНИЯ КАЛЬЦИЙ-ФОСФАТНЫХ БИОНОВ В КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

1.3 ПАТОГЕННЫЕ ЭФФЕКТЫ КАЛЬЦИЙ-ФОСФАТНЫХ БИОНОВ

1.3.1 Интернализация, индукция клеточной гибели и провоспалительная активация сосудистых клеточных популяций

1.3.2 Дисфункция эндотелия

1.3.3 Остеохондрогенная дедифференцировка

1.3.4 Воспаление адвентиции и околососудистой жировой ткани

1.3.5 Циркуляция КФБ в системном кровотоке

1.3.6 Перспективы патофизиологических изысканий значимости КФБ для развития дисфункции эндотелия и атеросклероза

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Искусственный синтез КФБ и их количественная оценка

2.2 Физико-химическая характеризация СКФБ и ИКФБ

2.3 Клиникопатологическое и биохимическое обследование пациентов с болезнями системы кровообращения, пациентов с хронической болезнью почек 5 стадии и условно здоровых доноров крови

2.4 Оценка способности КФБ вызывать формирование неоинтимы и внесосудистые патогенные эффекты у свободных от факторов сердечнососудистого риска лабораторных животных

2.5 Оценка способности КФБ вызывать повреждение эндотелия у свободных от факторов сердечно-сосудистого риска лабораторных животных

2.6 Оценка способности КФБ вызывать воспаление адвентиции и околососудистой жировой ткани у свободных от факторов сердечнососудистого риска лабораторных животных

2.7 Оценка способности КФБ вызывать дисфункцию эндотелия у свободных от факторов сердечно-сосудистого риска лабораторных животных

2.8 Оценка способности КФБ вызывать атеросклероз у лабораторных животных с гипер/дислипидемией

2.9 Культивирование эндотелиальных клеток

2.10 Моделирование воздействия КФБ на эндотелиальные клетки в условиях потока и анализ их интернализации

2.11 Оценка способности КФБ вызывать нарушение целостности эндотелиального монослоя и гибель эндотелиальных клеток

2.12 Оценка способности КФБ провоцировать адгезию мононуклеарных клеток периферической крови к эндотелиальным клеткам в потоке

2.13 Моделирование воздействия КФБ на эндотелиальные клетки в статических условиях

2.14 Моделирование паракринных эффектов эндотелиальных клеток, подвергшихся воздействию КФБ

2.15 Выделение РНК и белка из эндотелиальных клеток для последующей оценки транскрипционного и белкового профиля

2.16 Анализ изменения генной экспрессии в эндотелиальных клетках и аортах крыс после воздействия КФБ

2.17 Анализ изменения белковой экспрессии в эндотелиальных клетках и аортах крыс после воздействия КФБ

2.18 Анализ изменений секреторного профиля эндотелиальных клеток после воздействия КФБ

2.19 Протеомное профилирование эндотелиальных клеток после воздействия КФБ

2.20 Оценка способности КФБ вызывать окислительный стресс в эндотелиальных клетках

2.21 Оценка эффективности нейтрализации активных форм кислорода после воздействия КФБ на эндотелиальные клетки

2.22 Оценка эффективности экспериментальной терапии коррекции минерального гомеостаза, в том числе путем элиминации КФБ

2.23 Статистический анализ

ГЛАВА 3 АНАЛИЗ НАРУШЕНИЙ МИНЕРАЛЬНОГО ГОМЕОСТАЗА У ПАЦИЕНТОВ С БОЛЕЗНЯМИ СИСТЕМЫ КРОВООБРАЩЕНИЯ

ГЛАВА 4 АНАЛИЗ ПАТОГЕННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ КФБ НА СОСУДИСТУЮ СТЕНКУ

ГЛАВА 5 АНАЛИЗ МЕХАНИЗМОВ ДИСФУНКЦИИ ЭНДОТЕЛИЯ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ КФБ

ГЛАВА 6 ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ОСНОВЫ МЕХАНИЗМОВ ДИСФУНКЦИИ ЭНДОТЕЛИЯ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ КФБ

ГЛАВА 7 ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КОРРЕКЦИИ МИНЕРАЛЬНОГО ГОМЕОСТАЗА В КОНТЕКСТЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА КФБ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Концепция и механизмы патогенного действия кальций-фосфатных бионов на систему кровообращения»

Актуальность темы исследования

В зависимости от своей тяжести нарушения минерального гомеостаза могут привести к повышению молярной концентрации ионизированного кальция и фосфора до «высоких нормальных» значений, что ассоциировано с высоким риском острых сердечно-сосудистых событий, хронической сердечной недостаточности и смерти от болезней системы кровообращения (БСК) [11, 13, 14, 30, 34, 60, 75, 129, 131, 132, 136, 139, 140, 172, 185, 186, 205, 207, 208, 209, 210, 211, 213, 214, 220, 243]. При этом физиологической и патофизиологической важностью в первую очередь обладает ионизированный (не связанный с белками или фосфором) кальций [164], превышение физиологической нормы которого по аналогии с превышением физиологической нормы молярной концентрации фосфора также способствует развитию быстро развивающегося, жизненно опасного и необратимого патологического процесса - кальцификации внутренних органов, в том числе артерий [145, 169].

Наиболее важными белковыми компонентами системы минерального гомеостаза крови являются превалирующий белок крови человека альбумин, связывающий циркулирующие ионы кальция [226], и фетуин-А, представляющий собой уникальный минеральный шаперон с двумя механизмами антикальцифицирующего действия, обладающими приблизительно одинаковой емкостью связывания ионов кальция и фосфат-анионов крови [100]: формированием кальципротеиновых мономеров (зарождающихся кластеров фосфата кальция, связанных с мономерами фетуина-А) [100, 101] и кальций-фосфатных бионов (КФБ) - частиц карбонат-гидроксиапатита от 50 до 500 нм в диаметре, адсорбирующих белки крови при своей циркуляции в кровотоке [40, 100, 101, 110, 226].

В последнее десятилетие активно проводятся работы по исследованию физиологической и патофизиологической значимости КФБ, поскольку, с одной стороны, данные минерало-органические частицы отвечают за агрегацию

избыточных ионов кальция и фосфора и их выведение из организма, а с другой -ускоренное их формирование в крови ассоциировано с развитием артериальной гипертензии [201, 202], инфаркта миокарда (ИМ) [33] и сердечно-сосудистой смертью [181, 199] у субъектов без хронической болезни почек, а также с развитием заболеваний периферических артерий, ИМ и сердечно-сосудистой смертью у пациентов с хронической болезнью почек 5 стадии (ХБП5), в том числе после трансплантации почки [42, 49, 143, 198, 200]. На клиническую значимость циркуляции КФБ в крови также указывают результаты проводимых клинических испытаний (N0100044213, N0103565913, N0102216877, N0102977117, ОТЯ 5226, N0102745340, N0103010072, Еиёга0Т 2013-000488-95, А0ТКШ2617000881336, ]К0Тв051180156), которые продемонстрировали фармакологическую возможность [22, 67, 72, 78, 91, 93, 155, 232, 234] и эффективность их элиминации из кровотока для профилактики острых сердечно-сосудистых событий и сердечно-сосудистой смерти [90, 230, 231]. Тем не менее, адекватное проведение клинических испытаний способов элиминации КФБ из кровотока после выполнения ими своей гомеостатической функции прежде всего требует методов объективной оценки содержания КФБ в крови. Кроме того, успешная клиническая трансляция способов детекции КФБ в крови человека и терапевтических режимов их элиминации из системного кровотока едва ли возможна без надлежащего понимания механизмов их протективных и патогенных эффектов. Несмотря на значительное количество посвященных этому вопросу исследований в имеющейся литературе и активное изучение различных аспектов данной проблемы в последние годы, концепция КФБ как причины нарушений системного гомеостаза в целом (несмотря на поддержание ими конкретно минерального гомеостаза) все еще далека от окончательного формирования.

Степень разработанности темы исследования

Ранее было показано, что КФБ могут быть выделены из сыворотки пациентов посредством ультрацентрифугирования [28, 65, 73, 103, 175, 245] или быть синтезированы искусственно путем перенасыщения сывороточной культуральной среды солями кальция и фосфора [40], что позволяет осуществлять анализ их

количества, структурных и химических свойств, а также последующие эксперименты по анализу их патогенности на моделях in vitro и in vivo. Также было доказано, что выделенные из атеросклеротических бляшек и искусственно синтезированные КФБ структурно и химически идентичны.

Эксперименты по внутривенному введению флюоресцентно меченных КФБ свободным от факторов сердечно-сосудистого риска мышам продемонстрировали, что КФБ относительно быстро выводятся из крови и депонируются эндотелиальными клетками синусоидных капилляров печени, клетками Купфера и резидентными макрофагами селезенки [63, 68, 133]. При внутривенном введении флюоресцентно меченных КФБ мышам с сочетанным нокаутом генов ApoE и Ahsg (модель внескелетной кальцификации и кальцинирующего атеросклероза) было выявлено, что данные частицы аккумулируются в интактной интиме и в бляшках, колокализуясь с эндотелиальными клетками и макрофагами [68]. При этом в мышечном слое артериальной стенки КФБ выявлено не было, что доказывает отсутствие ассоциации сосудистых гладкомышечных клеток с КФБ. Клиническая релевантность повышения уровня циркулирующих в крови КФБ иллюстрируется значимой корреляцией между повышенной склонностью крови к формированию КФБ, а также повышенной концентрацией циркулирующих КФБ, с повышенным риском неблагоприятного исхода, включая острые сердечно-сосудистые события и смерть [42, 196, 198, 200, 204, 248]. Тем не менее, несмотря на ряд достижений в направлении изучения патогенных эффекторов КФБ на сердечно-сосудистую систему, концепция КФБ как патогенного фактора, способствующего развитию БСК, все еще отсутствует.

Работы различных авторов показали, что КФБ обладают выраженным патогенным действием на различные типы сосудистых клеток, включая адвентициальные фибробласты [128] и макрофаги [133], а также на эндотелиальные и интерстициальные клетки клапанов сердца [80]. Данные литературы также указывают на способность КФБ оказывать цитотоксическое действие на сосудистые гладкомышечные клетки и вызывать их остеохондрогенную дедифференцировку [48, 51, 65], однако вопрос

физиологической релевантности этих исследований остается неясным. Объективно представляется маловероятным, что КФБ преодолевают и эндотелиальный барьер, и внутреннюю эластическую мембрану.

Для формирования концепции патогенного действия КФБ в организме человека после выполнения ими своей гомеостатической функции (аккумулирование избыточных ионов кальция и фосфора с последующим их выведением из организма) необходимым является комплексное изучение воздействия КФБ на артериальное русло системы кровообращения. При этом такие исследования требуют всестороннего анализа физико-химических свойств патофизиологически релевантных типов КФБ, применения патофизиологически релевантных моделей (в том числе культивирования первичных артериальных эндотелиальных клеток в условиях пульсирующего потока) и высокопроизводительных технологий получения больших массивов данных (к примеру, протеомное профилирование). Кроме того, необходима комплексная оценка воздействия КФБ на различные слои сосудистой стенки и протекающие в них патологические процессы, включая дисфункцию эндотелия, воспаление адвентиции и околососудистой жировой ткани и развитие атеросклероза, в нормолипидемических и гиперлипидемических условиях. С точки зрения этиологии и патогенеза дисфункции эндотелия представляется важной расшифровка ее механизмов на клеточном уровне, а также молекулярных основ, лежащих в основе данных патогенетических механизмов.

Помимо патофизиологических изысканий на тканевом и клеточном уровнях организации, особого внимания также требует и изучение клинико-патофизиологических аспектов нарушений минерального гомеостаза у пациентов с БСК - в частности, оценка выраженности нарушений фосфорнокальциевого гомеостаза, склонности крови к преципитации КФБ и исходной концентрации КФБ в сыворотке крови таких больных. Клиническая значимость этих исследований заключается в разработке полноценного патогенетического обоснования для внедрения методов детекции КФБ в клинико-лабораторную диагностику, а также для разработки новых и апробации уже имеющихся способов элиминации КФБ из

кровотока. Такие лекарственные средства, вероятно, могут способствовать первичной и вторичной профилактике атеросклероза и связанных с ним сердечно -сосудистых событий.

Цель исследования - формирование и обоснование концепции физиологической и патофизиологической значимости КФБ и расшифровка механизмов патогенного действия данных частиц на систему кровообращения. Задачи исследования:

1. Исследовать выраженность нарушений минерального гомеостаза у пациентов с БСК, включая цереброваскулярную болезнь (ЦВБ) и ишемическую болезнь сердца (ИБС); определить роль КФБ в системе минерального гомеостаза в контексте развития БСК.

2. Изучить патогенные эффекты КФБ на сосудистую стенку на моделях нормолипидемических и нормотензивных крыс Wistar и гиперлипидемических ApoE-нокаутных (ApoE-/-) мышей.

3. Идентифицировать патогенетические механизмы и патологические последствия дисфункции эндотелия при воздействии КФБ in vitro (на культурах первичных эндотелиальных клеток атерочувствительной коронарной артерии и атерорезистентной внутренней грудной артерии человека) и in vivo, исследуя лизат эндотелия дуги аорты (сосудистый сегмент с турбулентным кровотоком) и нисходящей аорты (сосудистый сегмент с ламинарным кровотоком) нормолипидемических и нормотензивных крыс Wistar.

4. Расшифровать патофизиологические основы механизмов вызываемой КФБ дисфункции эндотелия на субклеточном уровне.

5. Обосновать способы коррекции нарушения минерального гомеостаза, в том числе направленные на элиминацию КФБ из крови с обязательным сохранением их гомеостатической функции.

Научная новизна исследования

Показано, что пациенты с БСК (ЦВБ и ИБС) характеризуются сниженной концентрацией общего белка, кальций-связывающего белка альбумина и КФБ, что

отражается повышением уровня ионизированного кальция в крови и ее повышенной склонностью к преципитации КФБ в условиях минерального стресса.

Продемонстрировано, что регулярное внутривенное введение КФБ приводит к формированию неоинтимы и воспалению адвентиции и околососудистой жировой ткани у нормолипидемических и нормотензивных крыс и к

развитию атеросклероза у гиперлипидемических АроЕ-/- мышей.

Выявлено, что патогенетическими механизмами КФБ-индуцированной дисфункции эндотелия являются провоспалительная активация эндотелия, развитие эндотелиально-мезенхимального перехода, нарушение эндотелиальной механотрансдукции и нарушения функционирования эндотелиальной NO-синтазы.

Обнаружено, что выделяемые в результате интернализации КФБ провоспалительные цитокины вызывают дисфункцию интактного эндотелия без дальнейшего участия КФБ.

Доказано, что причиной указанных механизмов вызываемой КФБ дисфункции эндотелия на субклеточном уровне является патологическая пермеабилизация лизосом и митохондрий, приводящая к запуску внутреннего пути апоптоза.

Показано, что добавление к сыворотке крови доноров ионов магния (в частности, М§Б04) и хелатных соединений (в частности, №2-ЭДТА) способствует элиминации КФБ из крови.

Теоретическая и практическая значимость работы

Сформирована концепция о физиологической и патологической важности КФБ, являющихся природным механизмом защиты организма от внескелетной кальцификации, но вместе с тем вызывающих дисфункцию эндотелия и развитие атеросклероза при своей циркуляции в системном кровотоке.

Доказана клиническая релевантность формирования КФБ в крови человека вследствие выраженности нарушений минерального гомеостаза у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями, предложены скрининговые параметры для анализа минерального гомеостаза крови, разработан оригинальный способ оценки

склонности сыворотки крови к преципитации КФБ в условиях минерального стресса и метод анализа концентрации КФБ в сыворотке крови.

Расшифрованы механизмы КФБ-индуцированной дисфункции эндотелия на клеточном и субклеточном уровне, предложена панель молекул для скрининга дисфункции эндотелия в эксперименте.

Продемонстрирована возможность фармакологической коррекции нарушений минерального гомеостаза, в том числе посредством элиминации КФБ из сыворотки крови.

Методология и методы исследования

Для достижения цели исследования проведен искусственный синтез сферических и игольчатых КФБ (СКФБ и ИКФБ соответственно), а также нетоксичных магний-фосфатных бионов (МФБ) в качестве контрольной группы и их количественная оценка при помощи измерения оптической плотности, колориметрического определения количества ионизированного кальция и проточно-цитометрической детекции количества частиц в суспензии КФБ.

С целью физико-химической характеризации МФБ, СКФБ и ИКФБ выполнены визуализация частиц (методами сканирующей и просвечивающей электронной микроскопии, а также атомно-силовой микроскопии), определение распределения размерности и поверхностного заряда СКФБ и ИКФБ (методами динамического и электрофоретического рассеяния света соответственно), анализ химических элементов, входящих в состав СКФБ и ИКФБ (методами энергодисперсионной рентгеновской спектроскопии, атомно-эмиссионной спектроскопии и CHNSO-анализа посредством высокотемпературного каталитического окисления), определение химических функциональных групп в составе СКФБ и ИКФБ (методом инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье), определение химических соединений в составе СКФБ и ИКФБ (методом рентгеновской порошковой дифрактометрии), определение кристалличности СКФБ и ИКФБ (методом просвечивающей электронной микроскопии посредством анализа рассеяния рентгеновских лучей дифракционной решеткой) и анализ белков, входящих в состав СКФБ и ИКФБ (методом электрофореза в

полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия с последующим окрашиванием нитратом серебра).

Проведено клиникопатологическое и биохимическое обследование пациентов с ЦВБ (включая пациентов с хронической ишемией головного мозга (ХИГМ) и ишемическим инсультом (ИИ)) и ИБС (включая пациентов с хроническим коронарным синдромом (ХКС) и ИМ), пациентов с ХБП5 и условно здоровых доноров крови, включая анализ параметров минерального гомеостаза: молярной концентрации общего и ионизированного кальция, молярной концентрации фосфора, концентрации общего белка, альбумина и фетуина-А, склонности сыворотки крови к преципитации КФБ в условиях минерального стресса, исходной концентрации КФБ в сыворотке крови.

Оценка патогенных эффектов воздействия КФБ на сосудистую стенку выполнена на четырех экспериментальных моделях: 1) крысах свободных

от хирургического вмешательства и других сопутствующих факторов сердечнососудистого риска, с введением физиологического раствора N01, нетоксичных МФБ, СКФБ или ИКФБ 1 или 3 раза в неделю на протяжении 5 недель и выводом животных из эксперимента после 5-й недели; 2) крысах после баллонной

ангиопластики брюшной аорты с введением физиологического раствора №01, нетоксичных МФБ, СКФБ или ИКФБ ежедневно в течение недели и выводом животных из эксперимента через 5 недель после начала эксперимента; 3) крысах после баллонной ангиопластики брюшной аорты с введением физиологического раствора №01, нетоксичных МФБ, СКФБ или ИКФБ ежедневно в течение недели и выводом животных из эксперимента в конце недели; 4) гиперлипидемических АроЕ-/- мышах, свободных от хирургического вмешательства, с введением физиологического раствора N01, СКФБ или ИКФБ 3 раза в неделю на протяжении 5 недель и выводом животных из эксперимента через еще 7 месяцев наблюдения. Гистологический анализ проведен посредством окрашивания гематоксилином и эозином, окрашивания по ван Гизону, окрашивания ализариновым красным, иммунофлюоресцентного окрашивания и ЕМ-ББЕМ (оригинальному методу пробоподготовки тканей с их окрашиванием

тетраоксидом осмия, уранилацетатом и цитратом свинца с заливкой в эпоксидную смолу и визуализацией при помощи сканирующей электронной микроскопии в обратно-рассеянных электронах). Биохимический анализ проведен при помощи измерения трансаминаз в сыворотке крови и иммуноферментного анализа. Проведены анализ целостности эндотелия аорт при помощи окрашивания синим Эванса и анализ липидной инфильтрации аорт гиперлипидемических мышей при помощи окрашивания масляным красным. Количественный анализ изображений проведен в программе ImageJ (National Institutes of Health).

Анализ механизмов дисфункции эндотелия выполнен с использованием экспериментальных моделей инкубации первичных эндотелиальных клеток коронарной артерии (HCAEC) и внутренней грудной артерии (HITAEC) с контрольным однократным фосфатно-солевым буфером (ФСБ), нетоксичными МФБ, СКФБ и ИКФБ в системе пульсирующего потока и в статических условиях, а также на модели регулярного внутривенного введения физиологического раствора NaCl, СКФБ или ИКФБ нормолипидемическим и нормотензивным крысам Wistar, свободным от хирургического вмешательства (3 раза в неделю на протяжении 5 недель и вывод животных из эксперимента после 5-й недели), с последующим выделением РНК и белка из клеточной массы и различных аортальных сегментов (дуга аорты с турбулентным кровотоком и нисходящая аорта с ламинарным кровотоком). Анализ интернализации МФБ, СКФБ и ИКФБ проведен с использованием ФИТЦ-меченного альбумина при искусственном синтезе бионов при помощи конфокальной микроскопии. Анализ адгезии мононуклеарных клеток периферической крови к эндотелиальным клеткам проведен посредством предварительного мечения выделенных в градиенте фиколла моноцитов и лимфоцитов флюоресцентным зондом с последующей инкубацией с эндотелиальными клетками в условиях потока и флюоресцентной микроскопией. Моделирование паракринных эффектов эндотелиальных клеток, подвергшихся воздействию КФБ, выполнено при помощи добавления к интактным клеточным культурам полной кондиционированной среды (культуральной среды от клеток, предварительно инкубированных с ФСБ, МФБ, СКФБ или ИКФБ),

внеклеточных везикул и кондиционированной среды, очищенной от внеклеточных везикул. Анализ генной экспрессии проведен при помощи количественной полимеразной цепной реакции после обратной транскрипции (ОТ-кПЦР), анализ белковой экспрессии - при помощи иммуноблоттинга и протеомного профилирования методом жидкостной хроматографии, совмещенной с тандемной масс-спектрометрией с ионной подвижностью. Изменения секреторного профиля эндотелиальных клеток после воздействия КФБ выполнены путем скринингового профилирования белков методом дот-блоттинга и высокоточного иммуноферментного анализа. С целью идентификации нарушений синтеза и функционирования NO-синтазы дополнительно применены

иммунофлюоресцентное окрашивание и колориметрический анализ нитратов и нитритов в культуральной среде.

Анализ способности КФБ вызывать регулируемую гибель клеток производили путем измерения экспрессии и посттрансляционных модификаций белков при помощи иммуноблоттинга и дот-блоттинга, а также посредством добавления специфичного ингибитора каспазы-3 и пан-каспазного ингибитора к культурам эндотелиальных клеток. Анализ способности КФБ вызывать окислительный стресс в эндотелиальных клетках проводили посредством окрашивания активных форм кислорода с использованием специфичных флюоресцентных зондов и конфокальной микроскопии, количественного анализа продуктов реакции с тиобарбитуровой кислотой (ПР-ТБК) и добавления антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы и каталазы к клеточным культурам.

Фармакологические подходы к коррекции минерального гомеостаза (в том числе путем элиминации КФБ) анализировали на модели сыворотки условно здоровых доноров крови ex vivo с добавлением к ней кальций-связывающего белка альбумина, донора ионов магния сульфата магния (MgSO4) либо хелатного соединения - динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (№2-ЭДТА), с последующим опциональным перенасыщением CaCl2 и Na2HPO4 и 24-часовой инкубацией в физиологических условиях. После этого проводили измерение

биохимических параметров минерального гомеостаза: молярной концентрации общего и ионизированного кальция, молярной концентрации магния, молярной концентрации фосфора, концентрации общего белка, альбумина и фетуина-А, склонности сыворотки крови к преципитации КФБ в условиях минерального стресса, исходной и итоговой концентрации КФБ в сыворотке крови. Для количественного анализа результатов экспериментов применялись классические методы статистической обработки.

Анализ литературы по теме диссертации, разработка дизайна исследования, клинических и экспериментальных протоколов, составление регистров пациентов и условно здоровых доноров крови, физико-химический анализ КФБ, гистологический анализ, эксперименты на клеточных культурах, анализ способов экспериментальной терапии для коррекции нарушений минерального гомеостаза, анализ результатов экспериментов, статистическая и графическая обработка данных, написание статей, доклады результатов диссертационного исследования на научных мероприятиях и написание диссертационной работы выполнены лично автором.

Эксперименты по физико-химическому анализу КФБ были проведены совместно с сотрудниками Института углехимии и химического материаловедения Федерального исследовательского центра угля и углехимии СО РАН (г. Кемерово): канд. хим. наук. О. С. Ефимовой и канд. хим. наук А. Н. Поповой. Набор пациентов в клинико-патофизиологическое исследование, анализ параметров минерального гомеостаза, а также эксперименты на лабораторных животных и клеточных культурах были проведены совместно с сотрудниками Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний» (г. Кемерово): докт. мед. наук. О. В. Груздевой, канд. биол. наук Д. К. Шишковой, канд. биол. наук Е. А. Великановой, канд. биол. наук. Р. А. Мухамадияровым, канд. биол. наук. М. Ю. Синицким, канд. биол. наук. А. В. Синицкой, мл. науч. сотр. Л. А. Богдановым и мл. науч. сотр. В. Е. Марковой. Протеомное профилирование эндотелиальных клеток было проведено на базе ресурсного центра «Развитие молекулярных и

клеточных технологий» Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Санкт-Петербургский государственный университет» (г. Санкт-Петербург).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Нарушения минерального гомеостаза являются распространенным коморбидным состоянием у пациентов с БСК и характеризуются патологическим повышением склонности крови к преципитации КФБ в условиях минерального стресса на фоне исходно повышенного уровня ионизированного кальция, исходно сниженной концентрации общего белка и кальций-связывающего белка альбумина, а также исходно сниженной концентрации скевенджеров избыточных ионов кальция (КФБ).

2. Регулярное внутривенное введение КФБ свободным от факторов сердечно-сосудистого риска и гиперлипидемическим лабораторным животным приводит к формированию неоинтимы, воспалению адвентиции и околососудистой жировой ткани и развитию атеросклероза.

3. Патологическими последствиями интернализации КФБ эндотелиальными клетками являются провоспалительная активация эндотелия, развитие эндотелиально-мезенхимального перехода, нарушение эндотелиальной механотрансдукции и нарушение функционирования эндотелиальной NO-синтазы, в совокупности свидетельствующие о развитии дисфункции эндотелия.

4. Внутриклеточной основой развития механизмов дисфункции эндотелия в результате интернализации КФБ на субклеточном уровне является патологическая пермеабилизация лизосом и митохондрий.

5. Связанные с избыточным формированием КФБ в крови нарушения минерального гомеостаза могут быть скорректированы посредством введения в кровь доноров ионов магния и препаратов с хелатирующим действием.

Степень достоверности результатов

О достоверности результатов диссертационного исследования свидетельствуют достаточный объем экспериментального материала, широкий спектр проведенных клинико-лабораторных исследований, неоднократно

повторенные эксперименты in vitro и in vivo, использование современных методов исследования и статистической обработки полученных результатов.

Апробация материалов диссертации

Результаты диссертационного исследования доложены и обсуждены на Конгрессе молодых ученых «Актуальные вопросы фундаментальной и клинической медицины» (24-25 мая 2018, г. Томск), Восьмой Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (1618 октября 2018, г. Новосибирск), Второй совместной конференции Голландского и Немецкого обществ сосудистой биологии (Second Dutch German Vascular Biology Meeting, 21-23 ноября 2018, г. Амстердам, Нидерланды), Третьей конференции Европейского общества микроциркуляции и Европейского общества сосудистой биологии (3rd European Society for Microcirculation-European Society for Vascular Biology Conference, 15-18 апреля 2019, г. Маастрихт, Нидерланды), XIX Ежегодном научно-практическом семинаре молодых ученых «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической кардиологии» (5 июня 2019, г. Томск), XII Международной конференции «Микроциркуляция и гемореология» (30 июня - 3 июля 2019, г. Ярославль), VIII съезде кардиологов Сибирского федерального округа «От первичной профилактики до высоких технологий в кардиологии» (1011 октября 2019, г. Кемерово), отчетной конференции Немецкого общества микроциркуляции и сосудистой биологии (German Society for Microcirculation and Vascular Biology Meeting, 25-27 октября 2019, г. Гейдельберг, Германия), I Всероссийском Конгрессе с международным участием «Физиология и тканевая инженерия сердца и сосудов: от клеточной биологии до протезирования» (4-7 ноября 2019, г. Кемерово), Алмазовском молодежном медицинском форуме - 2020 (21-23 мая 2020, г. Санкт-Петербург), 21-й Международной конференции по сосудистой биологии (21st International Vascular Biology Meeting, 9-12 сентября 2020, г. Сеул, Южная Корея), 88-й конференции Европейского общества атеросклероза (88th European Atherosclerosis Society Congress, 4-7 октября 2020, г. Женева, Швейцария), Всероссийском Конгрессе молодых ученых «Актуальные

Список литературы диссертационного исследования доктор наук Кутихин Антон Геннадьевич, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Артериальная жесткость и "сосудистое старение" во взаимо-связи с коагулогическими факторами риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, показателями липидного и углеводного обмена в популяции взрослого населения Томска по данным исследования ЭССЕ-РФ / А. Р. Заирова, А. Н. Рогоза, А. Б. Добровольский, и др. // Кардиологический вестник. - 2018. - Т. 13, № 1. - С. 5-15.

2. Бойцов, С. А. Смертность от сердечно-сосудистых заболеваний в Российской Федерации и возможные механизмы ее изменения / С. А. Бойцов, С. А. Шальнова, А. Д. Деев // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. -2018. - Т. 118, № 8. - С. 98-103.

3. Больные с ранним развитием сердечно-сосудистых заболеваний в амбулаторной практике: возрастные и гендерные характеристики, коморбидность, медикаментозное лечение и исходы (данные регистра РЕКВАЗА) / Е. Ю. Андреенко, М. М. Лукьянов, С. С. Якушин, и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2019. - Т. 18, № 6. - С. 99-106.

4. Взаимосвязь висцерального ожирения и коронарного кальциноза при ишемической болезни сердца / Н. К. Брель, О. В. Груздева, А.Н. Коков, и др. // Терапевтический архив. - 2021. - Т. 93, № 12. - С. 1428-1434.

5. Взаимосвязь экспрессии генов адипоцитокинов и кальцификации коронарных артерий у пациентов с ишемической болезнью сердца / О. В. Груздева, Е. В. Белик, Ю. А. Дылева, и др. // Сибирский журнал клинической и экспериментальной медицины. - 2021. - Т. 36, № 3. - С. 68-77.

6. Влияние артериального давления на смертность мужчин и женщин среднего и пожилого возраста: когортное исследование / А. Э. Имаева, Ю. А. Баланова, А. В. Капустина, и др. // Экология человека. - 2020. - № 9. - С. 49-56.

7. Гемодинамический статус пациентов с различными вариантами коморбидности ишемической болезни сердца до и после коронарного

шунтирования / Б. И. Гельцер, Е. А. Сергеев, В. Н. Котельников, и др. // Бюллетень сибирской медицины. - 2021. - Т. 20, № 3. - С. 29-37.

8. Динамика коронарной кальцификации и ее связь с клиническим течением ишемической болезни сердца и остеопеническим синдромом / М. В. Зыков, О. Н. Хрячкова, В. В. Кашталап, и др. // Кардиология. - 2019. - Т. 59, № 4.

- С. 12-20.

9. Зыков, М. В. Воспаление и коморбидность. Есть ли шансы улучшить прогноз у пациентов с экстремальным сердечно-сосудистым риском? / М. В. Зыков, О. Л. Барбараш // Рациональная фармакотерапия в кардиологии. - 2021. - Т. 17, № 4. - С. 606-611.

10. Зыков, М. В. Роль коморбидности в оценке долговременного прогноза после инфаркта миокарда / М. В. Зыков, Н. В. Дьяченко, О. Л. Барбараш // Медицинский алфавит. - 2021. - № 29. - С. 28-32.

11. Каштанова, Е. В. Кальцификация и атеросклероз коронарных артерий / Е. В. Каштанова, Я. В. Полонская, Ю. И. Рагино // Терапевтический архив. - 2021.

- Т. 93, № 1. - С. 84-86.

12. Клинико-биохимические маркеры прогрессирования коронарной кальцификации после планового коронарного шунтирования / О. Л. Барбараш, Д. Ю. Седых, В. В. Кашталап, и др. // Российский кардиологический журнал. - 2021.

- Т. 26, № 12. - С. 11-18.

13. Маслацов, Н. А. Биомаркеры кальцификации, их связь с заболеваниями сердечно-сосудистой системы и значение в клинической практике / Н. А. Маслацов, Ю. И. Рагино // Атеросклероз. - 2021. - Т. 17, № 2. - С. 72-82.

14. Мосягина, А. И. Модели ГЭБ in vitro: преимущества и недостатки, текущее положение и перспективы развития / А. И. Мосягина, А. В. Моргун, А. Б. Салмина // Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. - 2021. - Т. 10, № 3. - С. 109-120.

15. Ранняя кардиоваскулярная мультиморбидность в амбулаторной и госпитальной практике: возрастные характеристики и медикаментозное лечение пациентов (данные регистров РЕКВАЗА и РЕКВАЗА-КЛИНИКА) / Е. Ю.

Андреенко, М. М. Лукьянов, С. С. Якушин, и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2020. - Т. 19, № 5. - С. 195-203.

16. Система управления сердечно-сосудистыми рисками: предпосылки к созданию, принципы организации, таргетные группы / Е. В. Шляхто, Н. Э. Звартау, С. В. Виллевальде, и др. // Российский кардиологический журнал. - 2019. - Т. 24, № 11. - С. 69-82.

17. Скорость клубочковой фильтрации, ее ассоциации с факторами риска и сердечнососудистыми заболеваниями. Результаты исследования ЭССЕ-РФ-2 / С. А. Шальнова, С. А. Максимов, Ю. А. Баланова, и др. // Рациональная фармакотерапия в кардиологии. - 2020. - Т. 16, № 2. - С. 240-249.

18. Фенотипы сосудистого старения в российской популяции -биологические и социально-поведенческие детерминанты. / О. П. Ротарь, М. А. Бояринова, К. М. Толкунова, и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2021. - Т. 20, № 5. - С. 175-184.

19. A novel fluorescent probe-based flow cytometric assay for mineral-containing nanoparticles in serum / E. R. Smith, T. D. Hewitson, M. M. X. Caiе, et al. // Sci. Rep. - 2017. - Vol. 7, № 1. - P. 5686.

20. A shielding topology stabilizes the early stage protein-mineral complexes of fetuin-A and calcium phosphate: a time-resolved small-angle X-ray study/ C. N. Rochette, S. Rosenfeldt, A. Heiss, et al. // Chembiochem. - 2009. - Vol. 10, № 4. - P. 735-740.

21. A story told by a single nanoparticle in the body fluid: demonstration of dissolution-reprecipitation of nanocrystals in a biological system / C. Y. Wu, D. Young, J. Martel, et al. // Nanomedicine (Lond). - 2015. - Vol. 10, № 17. - P. 2659-2676.

22. Acetate-free, citrate-acidified bicarbonate dialysis improves serum calcification propensity-a preliminary study / G. Lorenz, C. C. Mayer, Q. Bachmann, et al. // Nephrol. Dial. Transplant. - 2018. - Vol. 33, № 11. - P. 2043-2051.

23. Acetylated low-density lipoprotein stimulates human vascular smooth muscle cell calcification by promoting osteoblastic differentiation and inhibiting

phagocytosis / D. Proudfoot, J. D. Davies, J. N. Skepper, et al. // Circulation. - 2002. -Vol. 106, № 24. - P. 3044-3050.

24. Activation of adventitial fibroblasts contributes to the early development of atherosclerosis: a novel hypothesis that complements the "Response-to-Injury Hypothesis" and the "Inflammation Hypothesis" / F. Xu, J. Ji, L Li, et al. // Med. Hypotheses. - 2007. - Vol. 69, № 4. - P. 908-912.

25. Adverse effects of simulated hyper- and hypo-phosphatemia on endothelial cell function and viability / A. Peng, T. Wu, C Zeng, et al. // PLoS One. - 2011. - Vol. 6, № 8. - e23268.

26. Ahmadieh, S. Potential role of perivascular adipose tissue in modulating atherosclerosis / S. Ahmadieh, H. W. Kim, N. L. Weintraub // Clin. Sci (Lond). - 2020. - Vol. 134, № 1. - P. 3-13.

27. Aortic Msx2-Wnt calcification cascade is regulated by TNF-alpha-dependent signals in diabetic Ldlr-/- mice / Z. Al-Aly, J. S. Shao, C. F. Lai, et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2007. - Vol. 27, № 12. - P. 2589-2596.

28. Assessment of calciprotein particle formation by AUC of the absorbance change: effect of FYB-931, a novel bisphosphonate compound / K. Ishida, N. Ashizawa, S. Morikane, et al. // J. Pharm. Pharmacol. - 2021. - Vol. 73, № 7. - P. 947-955.

29. Association between fetuin-A and prognosis of CAD: A systematic review and meta-analysis / W. M. Xie, L. S. Ran, J. Jiang, et al. // Eur. J. Clin. Invest. - 2019. -Vol. 49, № 5. - e13091.

30. Association between serum calcium concentration and risk of incident and fatal cardiovascular disease in the prospective AMORIS study / S. Rohrmann, H. Garmo, H. Malmstrom, et al. // Atherosclerosis. - 2016. - Vol. 251. - P. 85-93.

31. Association between serum fetuin-A level and erectile function / M. Karabakan, A. Bozkurt, M. Gunay, et al. // Andrologia. - 2016. - Vol. 48, №7. - P. 787792.

32. Association of aortic perivascular adipose tissue density with aortic calcification in women with systemic lupus erythematosus / K. J. Shields, S. R. El Khoudary, J. M. Ahearn, et al. // Atherosclerosis. - 2017. - Vol. 262. - P. 55-61.

33. Association of calciprotein particles measured by a new method with coronary artery plaque in patients with coronary artery disease: A cross-sectional study / J. Nakazato, S. Hoshide, M. Wake, et al. // J. Cardiol. - 2019. - Vol. 74, № 5. - P. 428435.

34. Associations of serum magnesium levels and calcium-magnesium ratios with mortality in patients with coronary artery disease / Q. Li, Q. Chen, H. Zhang, et al. // Diabetes Metab. - 2020. - Vol. 46, № 5. - P. 384-391.

35. Atorvastatin protects vascular smooth muscle cells from TGF-p1-stimulated calcification by inducing autophagy via suppression of the P-catenin pathway / D. Liu, W. Cui, B. Liu, et al. // Cell. Physiol. Biochem. - 2014. - Vol. 33, № 1. - P. 129-141.

36. Atorvastatin reduces calcification in rat arteries and vascular smooth muscle cells / Li H., H. R. Tao, T. Hu, et al. // Basic. Clin. Pharmacol. Toxicol. - 2010. - Vol. 107, № 4. - P. 798-802.

37. Avila, M. D. Chelation therapy after the trial to assess chelation therapy: results of a unique trial / M. D. Avila, E. Escolar, G. A. Lamas // Curr. Opin Cardiol. -2014. - Vol. 29, № 5. - P. 481-488.

38. Biochemical transformation of calciprotein particles in uraemia / E. R. Smith, T. D. Hewitson, E. Hanssen, et al. // Bone. - 2018. - Vol. 110, № 7. - P. 355-367.

39. Biological niches within human calcified aortic valves: towards understanding of the pathological biomineralization process / V. Cottignoli, M. Relucenti, G. Agrosi, et al. // Biomed. Res. Int. - 2015. - 2015. - P. 542687.

40. Bions: a family of biomimetic mineralo-organic complexes derived from biological fluids / C. Y. Wu, L. Young, D. Young, et al. // PLoS One. - 2013. - Vol. 8, № 9. - e75501.

41. Blaine, J. Renal control of calcium, phosphate, and magnesium homeostasis / J. Blaine, M. Chonchol, M. Levi // Clin. J. Am. Soc. Nephrol. - 2015. - Vol. 10, № 7. -P. 1257-1272.

42. Blood Calcification Propensity, Cardiovascular Events, and Survival in Patients Receiving Hemodialysis in the EVOLVE Trial / A. Pasch, G. A. Block, M. Bachtler, et al. // Clin. J. Am. Soc. Nephrol. - 2017. - Vol. 12, № 2. - P. 315-322.

43. BMP-2 promotes phosphate uptake, phenotypic modulation, and calcification of human vascular smooth muscle cells / X. Li, H. Y. Yang, C. M. Giachelli // Atherosclerosis. - 2008. - Vol. 199, № 2. - P. 271-277.

44. BMP2 regulates Osterix through Msx2 and Runx2 during osteoblast differentiation / T. Matsubara, K. Kida, A. Yamaguchi, et al. // J. Biol. Chem. - 2008. -Vol. 283, № 43. - P. 29119-29125.

45. Bone morphogenetic protein-2 activates NADPH oxidase to increase endoplasmic reticulum stress and human coronary artery smooth muscle cell calcification / M. Liberman, R. C. Johnson, D. E. Handy, et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -2011. - Vol. 413, № 3. - P. 436-441.

46. Bone morphogenetic protein-2 decreases microRNA-30b and microRNA-30c to promote vascular smooth muscle cell calcification / J. A. Balderman, H. Y. Lee, C. E. Mahoney, et al. // J. Am. Heart. Assoc. - 2012. - Vol. 1, № 6. - e003905.

47. Bostrôm, K. I. Where do we stand on vascular calcification? / K. I. Bostrôm // Vascul. Pharmacol. - 2016. - № 84. - P. 8-14.

48. Calcification of vascular smooth muscle cells is induced by secondary calciprotein particles and enhanced by tumor necrosis factor-a / P. Aghagolzadeh, M. Bachtler, R. Bijarnia, et al. // Atherosclerosis. - 2016. - № 251. - P. 404-414.

49. Calcification Propensity and Survival among Renal Transplant Recipients / C. A. Keyzer, M. H. de Borst, E. van den Berg, et al. // J. Am. Soc. Nephrol. - 2016. -Vol. 27, № 1. - P. 239-248.

50. Calcifications in atherosclerotic plaques and impact on plaque biomechanics / H. E. Barrett, K. van der Heiden, E. Farrell, et al. // J. Biomech. - 2019. - № 87. - P. 112.

51. Calcifying nanoparticles promote mineralization in vascular smooth muscle cells: implications for atherosclerosis / L. W. Hunter, J. E. Charlesworth, S. Yu, et al. // Int. J. Nanomedicine. - 2014. - № 9. - P. 2689-2698.

52. Calciprotein Particle Formation in Peritoneal Dialysis Effluent Is Dependent on Dialysate Calcium Concentration / M. M. X. Cai, E. R. Smith, A. Kent, et al. // Perit. Dial Int. - 2018. - Vol. 38, № 4. - P. 286-292.

53. Calciprotein particle inhibition explains magnesium-mediated protection against vascular calcification / A. D. Ter Braake, C. Eelderink, L. W. Zeper, et al. // Nephrol. Dial. Transplant. - 2020. - Vol. 35, № 5. - P. 765-773.

54. Calciprotein particle-induced cytotoxicity via lysosomal dysfunction and altered cholesterol distribution in renal epithelial HK-2 cells / R. Kunishige, M. Mizoguchi, A. Tsubouchi, et al. // Sci. Rep. - 2020. - Vol. 10, № 1. - P. 20125.

55. Calciprotein Particles Induce IL-lbeta/alpha-Mediated Inflammation through NLRP3 Inflammasome-Dependent and -Independent Mechanisms / F. Anzai, T. Karasawa, T. Komada, et al. // Immunohorizons. - 2021. - Vol. 5, № 7. - P. 602-614.

56. Calcium affinity, cooperativity, and domain interactions of extracellular EF-hands present in BM-40 / E. Busch, E. Hohenester, R. Timpl, et al. // J. Biol. Chem. -2000. - Vol. 275, № 33. - P. 25508-25515.

57. Calcium Intake and Cardiovascular Disease Risk: An Updated Systematic Review and Meta-analysis / M. Chung, A. M. Tang, Z. Fu, et al. // Ann. Intern. Med. -2016. - Vol. 165, № 12. - P. 856-866.

58. Calcium phosphate crystals induce cell death in human vascular smooth muscle cells: a potential mechanism in atherosclerotic plaque destabilization / A. E. Ewence, M. Bootman, H. L. Roderick, et al. // Circ. Res. - 2008. - Vol. 103, № 5. - P. e28-e34.

59. Calcium phosphate nanoparticles primarily induce cell necrosis through lysosomal rupture: the origination of material cytotoxicity / Z. Liu, Y. Xiao, W. Chen, et al. // J. Mater. Chem. B. - 2014. - Vol. 2, № 22. - P. 3480-3489.

60. Calcium-phosphate levels and cardiovascular disease in community-dwelling adults: the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study / R. N. Foley, A. J. Collins, A. Ishani, et al. // Am. Heart J. - 2008. - Vol. 156, № 3. - P. 556-563.

61. Calcium-sensing receptor-mediated NLRP3 inflammasome response to calciprotein particles drives inflammation in rheumatoid arthritis / E. Jäger, S. Murthy, C. Schmidt, et al. // Nat. Commun. - 2020. - Vol. 11, № 1. - P. 4243.

62. cAMP stimulates osteoblast-like differentiation of calcifying vascular cells. Potential signaling pathway for vascular calcification / Y. Tintut, F. Parhami, K. Boström, et al. // J. Biol. Chem. - 1998. - Vol. 273, № 13. - P. 7547-7553.

63. Cellular clearance and biological activity of calciprotein particles depend on their maturation state and crystallinity / S. Köppert, A. Büscher, A. Babler, et al. // Front. Immunol. - 2018. - № 9. - P. 1991.

64. Characterization of granulations of calcium and apatite in serum as pleomorphic mineralo-protein complexes and as precursors of putative nanobacteria / J.

D. Young, J. Martel, D. Young, et al. // PLoS One. - 2009. - Vol. 4, № 5. - e5421.

65. Chronic kidney disease circulating calciprotein particles and extracellular vesicles promote vascular calcification: a role for GRP (Gla-Rich Protein) / C. S. B. Viegas, L. Santos, A. L. Macedo, et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2018. - Vol. 38, № 3. - P.-587.

66. Cinacalcet, Fibroblast Growth Factor-23, and Cardiovascular Disease in Hemodialysis: The Evaluation of Cinacalcet HCl Therapy to Lower Cardiovascular Events (EVOLVE) Trial / S. M. Moe, G. M. Chertow, P. S. Parfrey, et al. // Circulation.

- 2015. - Vol. 132, № 1. - P. 27-39.

67. Citric-acid dialysate improves the calcification propensity of hemodialysis patients: A multicenter prospective randomized cross-over trial / K. J. Ter Meulen, M. J.

E. Dekker, A. Pasch, et al. // PLoS One. - 2019. - Vol. 14, № 12. - P. e0225824.

68. Clearance of fetuin-A-containing calciprotein particles is mediated by scavenger receptor-A / M. Herrmann, C. Schäfer, A. Heiss, et al. // Circ. Res. - 2012. -Vol. 111, № 5. - P. 575-584.

69. Collin-Osdoby, P. Regulation of vascular calcification by osteoclast regulatory factors RANKL and osteoprotegerin / P. Collin-Osdoby // Circ. Res. - 2004.

- Vol. 95, № 11. - P. 104б-1057.

70. Comorbidity Networks in Cardiovascular Diseases / H. A. Cruz-Ávila, M. Vallejo, M. Martínez-García, et al. // Front. Physiol. - 2020. - Vol. 11. - P. 1009.

71. Comorbidity phenotypes and risk of mortality in patients with ischaemic heart disease in the UK / F. Crowe, D. T. Zemedikun, K. Okoth, et al. // Heart. - 2020. -Vol. 106, № 11. - P. 810-816.

72. Comparative Effects of Etelcalcetide and Maxacalcitol on Serum Calcification Propensity in Secondary Hyperparathyroidism: A Randomized Clinical Trial / T. Shoji, S. Nakatani, D. Kabata, et al. // Clin. J. Am. Soc. Nephrol. - 2021. - Vol. 16, № 4. - P. 599-612.

73. Comprehensive proteomic analysis of mineral nanoparticles derived from human body fluids and analyzed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry / J. Martel, D. Young, A. Young, et al. // Anal. Biochem. - 2011. - Vol. 418, № 1. - P. 111-125.

74. Computed tomography-based perivascular fat phenotyping identifies unstable coronary lesions and active vascular calcification / E. K. Oikonomou, S. Thomas, J. Mancio, et al. // Eur. Heart J. - 2018. - Vol. 39, № . - P. ehy565.1182.

75. Conjoint effects of serum calcium and phosphate on risk of total, cardiovascular, and noncardiovascular mortality in the community / T. E. Larsson, H. Olauson, E. Hagstrom, et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2010. - Vol. 30, № 2. - P. 333-339.

76. Contribution of adventitial fibroblasts to neointima formation and vascular remodeling: from innocent bystander to active participant / S. Sartore, A. Chiavegato, E. Faggin, et al. // Circ. Res. - 2001. - Vol. 89, № 12. - P. 1111-1121.

77. Contribution of vascular cells to neointimal formation / F. Yuan, D. Wang, K. Xu, et al. // PLoS One. - 2017. - Vol. 12, № 1. - e0168914.

78. Control of metabolic predisposition to cardiovascular complications of chronic kidney disease by effervescent calcium magnesium citrate: a feasibility study / H. Quinones, T. Hamdi, K. Sakhaee, et al. // J. Nephrol. - 2019. - Vol. 32, № 1. - P. 93100.

79. Coronary artery calcification, statin use and long-term risk of atherosclerotic cardiovascular disease events (from the Multi-Ethnic Study of Atherosclerosis) / M. A. Rifai, M. J. Blaha, J. Patel, et al. // Am. J. Cardiol. - 2020. - Vol. 125, № 6. - P. 835-839.

80. Crystallinity of hydroxyapatite drives myofibroblasts activation and calcification in aortic valves / J. M. Richards, J. A. M. R. Kunitake, H. B. Hunt, et al. // Acta Biomater. - 2018. - № 1. - P. 24-36.

81. D'Marco, L. Cardiovascular biomarkers in chronic kidney disease: state of current research and clinical applicability / L. D'Marco, A. Bellasi, P. Raggi // Dis. Markers. - 2015. - 2015. - 586569.

82. Dada, L. A. Mitochondrial Ca2+ and ROS take center stage to orchestrate TNF-a-mediated inflammatory responses / L. A. Dada, J. I. Sznajder // J. Clin. Invest. -2011. - Vol. 121, № 5. - P. 1683-1685.

83. Daily variability in serum levels of calciprotein particles and their association with mineral metabolism parameters: A cross-sectional pilot study / H. Yamada, M. Kuro-O, S. E. Ishikawa, et al. // Nephrology (Carlton). - 2018. - Vol. 23, № 3. - P. 226-230.

84. Davignon, J. Role of endothelial dysfunction in atherosclerosis / J. Davignon, P. Ganz // Circulation. - 2004. - Vol. 109, № 23 Suppl 1. - P. III27-32.

85. Deleterious effects of phosphate on vascular and endothelial function via disruption to the nitric oxide pathway / K. K. Stevens, L. Denby, R. K. Patel, et al. // Nephrol. Dial. Transplant. - 2017. - Vol. 32, № 10. - P. 1617-1627.

86. Diethyl citrate and sodium citrate reduce the cytotoxic effects of nanosized hydroxyapatite crystals on mouse vascular smooth muscle cells / C. Y. Zhang, X. Y. Sun, J. M. Ouyang, et al. // Int. J. Nanomedicine. - 2017. - № 12. - P. 8511-8525.

87. Differential association between the progression of coronary artery calcium score and coronary plaque volume progression according to statins: the Progression of AtheRosclerotic PlAque DetermIned by Computed TomoGraphic Angiography Imaging (PARADIGM) study / S. E. Lee, J. M. Sung, D. Andreini, et al. // Eur. Heart J. Cardiovasc. Imaging. - 2019. - Vol. 20, № 11. - P. 1307-1314.

88. Discovery of a high molecular weight complex of calcium, phosphate, fetuin, and matrix gamma-carboxyglutamic acid protein in the serum of etidronate-treated rats / P. A. Price, G. R. Thomas, A. W. Pardini, et al. // J. Biol. Chem. - 2002. - Vol. 277, № 6. - P. 3926-3934.

89. Distinct roles of Ca2+, calmodulin, and protein kinase C in H2O2-induced activation of ERK1/2, p38 MAPK, and protein kinase B signaling in vascular smooth muscle cells / A. Blanc, N. R. Pandey, A. K. Srivastava / Antioxid. Redox Signal. - 2004. - Vol. 6, № 2. - P. 353-366.

90. Effect of disodium EDTA chelation regimen on cardiovascular events in patients with previous myocardial infarction: the TACT randomized trial / G. A. Lamas, C. Goertz, R. Boineau, et al. // JAMA. - 2013. - Vol. 309, № 12. - P. 1241-1250.

91. Effect of Sevelamer on Calciprotein Particles in Hemodialysis Patients: The Sevelamer Versus Calcium to Reduce Fetuin-A-Containing Calciprotein Particles in Dialysis (SCaRF) Randomized Controlled Trial / E. R. Smith, F. F. M. Pan, T. D. Hewitson, et al. // Kidney Int. Rep. - 2020. - Vol. 5, № 9. - P. 1432-1447.

92. Effects of phosphate on vascular function under normal conditions and influence of the uraemic state / I. Six, J. Maizel, F. C. Barreto, et al. // Cardiovasc. Res. -2012. - Vol. 96, № 1. - P. 130-139.

93. Efficacy and Safety of a Novel Nicotinamide Modified-Release Formulation in the Treatment of Refractory Hyperphosphatemia in Patients Receiving Hemodialysis-A Randomized Clinical Trial / M. Ketteler, A. Wiecek, A. R. Rosenkranz, et al. // Kidney Int. Rep. - 2020. - Vol. 6, № 3. - P. 594-604.

94. Emerging roles of fibroblasts in cardiovascular calcification / W. Li, S. A. Su, J. Chen, et al. // J. Cell. Mol. Med. - 2021. - Vol. 25, № 4. - P. 1808-1816.

95. Endemann, D. H. Endothelial dysfunction / D. H. Endemann, E. L. Schiffrin // J. Am. Soc. Nephrol. - 2004. - Vol. 15, № 8. - P. 1983-1992.

96. Endogenous Calcification Inhibitors in the Prevention of Vascular Calcification: A Consensus Statement From the COST Action EuroSoftCalcNet / M. Back, T. Aranyi, M. L. Cancela, et al. // Front. Cardiovasc. Med. - 2019. - № 5. - P. 196.

97. Enhanced neointimal fibroblast, myofibroblast content and altered extracellular matrix composition: implications in the progression of human peripheral artery restenosis / P. Krishnan, K. R. Purushothaman, M. Purushothaman, et al. // Atherosclerosis. - 2016. - Vol. 251. - P. 226-233.

98. Fatty acids and small organic compounds bind to mineralo-organic nanoparticles derived from human body fluids as revealed by metabolomic analysis / J. Martel, C. Y. Wu, C. Y. Hung, et al. // Nanoscale. - 2016. - Vol. 8, № 10. - P. 55375545.

99. Fetuin-A and albumin alter cytotoxic effects of calcium phosphate nanoparticles on human vascular smooth muscle cells / Y. Dautova, D. Kozlova, J. N. Skepper, et al. // PLoS One. - 2014. - Vol. 9, № 5. - e97565.

100. Fetuin-A is a mineral carrier protein: small angle neutron scattering provides new insight on Fetuin-A controlled calcification inhibition / A. Heiss, V. Pipich, W. Jahnen-Dechent, et al. // Biophys. J. - 2010. - Vol. 99, № 12. - P. 3986-3995.

101. Fetuin-A regulation of calcified matrix metabolism / W. Jahnen-Dechent, A. Heiss, C. Schafer, et al. // Circ. Res. - 2011. - Vol. 108, № 12. - P. 1494-1509.

102. Fetuin-A-containing calciprotein particles reduce mineral stress in the macrophage / E. R. Smith, E. Hanssen, L. P. McMahon, et al. // PLoS One. - 2013. - Vol. 8, № 4. - e60904.

103. Fully phosphorylated fetuin-A forms a mineral complex in the serum of rats with adenine-induced renal failure / I. Matsui, T. Hamano, S. Mikami, et al. // Kidney Int. - 2009. - Vol. 75, № 9. - P. 915-928.

104. Functional cooperation between vitamin D receptor and Runx2 in vitamin D-induced vascular calcification / M. S. Han, X. Che, G. H. Cho, et al. // PLoS One. -2013. - Vol. 8, № 12. - e83584.

105. GBD 2017 Causes of Death Collaborators. Global, regional, and national age-sex-specific mortality for 282 causes of death in 195 countries and territories, 19802017: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017 / GBD 2017 Causes of Death Collaborators // Lancet. - 2018. - Vol. 392, № 10159. - P. 1736-1788.

106. Gimbrone, M. A. Jr. Endothelial cell dysfunction and the pathobiology of atherosclerosis / M. A. Jr. Gimbrone, G. Garcia-Cardena // Circ. Res. - 2016. - Vol. 118, № 4. - P. 620-636.

107. Gla-rich protein acts as a calcification inhibitor in the human cardiovascular system / C. S. Viegas, M. S. Rafael, J. L. Enriquez, et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2015. - Vol. 35, № 2. - P. 399-40S.

10S. Global Burden of Cardiovascular Diseases and Risk Factors, 1990-2019: Update From the GBD 2019 Study / G. A. Roth, G. A. Mensah, C. O. Johnson, et al. // J. Am. Coll. Cardiol. - 2020. - Vol. 76, № 25. - P. 29S2-3021.

109. Hayakawa, H. Relationship between hypercholesterolaemia, endothelial dysfunction and hypertension / H. Hayakawa, L. Raij // J. Hypertens. - 1999. - Vol. 17, № 5. - P. 611-619. 134.

110. Hierarchical role of fetuin-A and acidic serum proteins in the formation and stabilization of calcium phosphate particles / A. Heiss, T. Eckert, A. Aretz, et al. // J. Biol. Chem. - 200S. - Vol. 2S3, № 21. - P. 14S15-14S25.

111. High dose and long-term statin therapy accelerate coronary artery calcification / M. Henein, G. Granâsen, U. Wiklund, et al. // Int. J. Cardiol. - 2015. - Vol. 184, № - P. 5S1-5S6.

112. High-serum phosphate and parathyroid hormone distinctly regulate bone loss and vascular calcification in experimental chronic kidney disease / N. Carrillo-López, S. Panizo, C. Alonso-Montes, et al. // Nephrol. Dial. Transplant. - 2019. - Vol. 34, № 6. - p. 934-941.

113. Holt, S. G. Fetuin-A-containing calciprotein particles in mineral trafficking and vascular disease / S. G. Holt, E. R. Smith // Nephrol. Dial. Transplant. - 2016. - Vol. 31, № 10. - P. 15S3-15S7.

114. Homocysteine promotes migration of adventitial fibroblasts via angiotensin ii type 1 receptor activation to aggravate atherosclerosis / Z. Zhu, X. Hao, T. Li, et al. // BMC Cardiovasc. Disord. - Preprint posted online December 17. - 2020.

115. Hortells, L. Cell phenotype transitions in cardiovascular calcification / L. Hortells, S. Sur, C. St Hilaire // Front. Cardiovasc. Med. - 201S. - № 5. - P. 27.

116. Huang, L. H. Shape-dependent toxicity and mineralization of hydroxyapatite nanoparticles in A7R5 aortic smooth muscle cells / L. H. Huang, X. Y. Sun, J. M. Ouyang // Sci. Rep. - 2019. - Vol. 9, № 1. - 1S979.

117. Human-derived nanoparticles and vascular response to injury in rabbit carotid arteries: proof of principle / M. A. Schwartz, J. C. Lieske, V. Kumar, et al. // Int. J. Nanomedicine. - 2008. - Vol. 3, № 2. - P. 243-248.

118. Hydrogen sulfide attenuates calcification of vascular smooth muscle cells via KEAP1 /NRF2/NQO1 activation / P. Aghagolzadeh, R. Radpour, M. Bachtler, et al. // Atherosclerosis. - 2017. - № 265 - P.78-86.

119. Hyperphosphatemia-induced nanocrystals upregulate the expression of bone morphogenetic protein-2 and osteopontin genes in mouse smooth muscle cells in vitro / A. P. Sage, J. Lu, Y. Tintut, et al. // Kidney Int. - 2011. - Vol. 79, № 4. - P. 414-422.

120. Hyperuricemia induces endothelial dysfunction via mitochondrial Na+/Ca2+ exchanger-mediated mitochondrial calcium overload / Q. Hong, K. Qi, Z. Feng, et al. // Cell. Calcium. - 2012. - Vol. 51, № 5. - P. 402-410.

121. Impact of statins on serial coronary calcification during atheroma progression and regression / R. Puri, S. J. Nicholls, M. Shao, et al. // J. Am. Coll. Cardiol. - 2015. - Vol. 65, № 13. - P. 1273-1282.

122. Inactivation of the osteopontin gene enhances vascular calcification of matrix Gla protein-deficient mice: evidence for osteopontin as an inducible inhibitor of vascular calcification in vivo / M. Y. Speer, M. D. McKee, R. E. Guldberg, et al. // J. Exp. Med. - 2002. - Vol. 196, № 8. - P. 1047-1055.

123. Increased calcification in osteoprotegerin-deficient smooth muscle cells: dependence on receptor activator of NF-kB ligand and interleukin / A. Callegari, M. L. Coons, J. L. Ricks, et al. // J. Vasc. Res. - 2014. - Vol. 51, № 2. - P. 118-131.

124. Inflammation drives retraction, stiffening, and nodule formation via cytoskeletal machinery in a three-dimensional culture model of aortic stenosis / J. Lim, A. Ehsanipour, J. J. Hsu, et al. // Am. J. Pathol. - 2016. - Vol. 186, № 9. - P. 2378-2389.

125. Inflammatory potential of four different phases of calcium pyrophosphate relies on NF-kB activation and MAPK pathways / L. Campillo-Gimenez, F. Renaudin, M. Jalabert, et al. // Front. Immunol. - 2018. - № 9. - 2248.

126. Influence of lipid-lowering therapy on the progression of coronary artery calcification: a prospective evaluation / S. Achenbach, D. Ropers, K. Pohle, et al. // Circulation. - 2002. - Vol. 106, № 9. - P. 1077-1082.

127. Insights into the association of Gla-rich protein and osteoarthritis, novel splice variants and y-carboxylation status / M. S. Rafael, S. Cavaco, C. S. Viegas, et al. // Mol. Nutr. Food Res. - 2014. - Vol. 58, № 8. - P. 1636-1646.

128. Kajander, E. O. Nanobacteria: an alternative mechanism for pathogenic intra- and extracellular calcification and stone formation / E. O. Kajander, N. Cift?ioglu // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. - 1998. - Vol. 95, № 14. - P. 8274-8279.

129. Kobylecki, C. J. Plasma Ionized Calcium and Risk of Cardiovascular Disease: 106 774 Individuals from the Copenhagen General Population Study / C. J. Kobylecki, B. G. Nordestgaard, S. Afzal // Clin. Chem. - 2021. - Vol. 67, № 1. - P. 265275.

130. Konukoglu, D. Endothelial dysfunction and hypertension / D. Konukoglu, H. Uzun // Adv. Exp. Med. Biol. - 2017. - № 956. - P. 511-540.

131. Kunutsor, S. K. Serum magnesium and risk of new onset heart failure in men: the Kuopio Ischemic Heart Disease Study / S. K. Kunutsor, H. Khan, J. A. Laukkanen // Eur. J. Epidemiol. - 2016. - Vol. 31, № 10. - P. 1035-1043.

132. Liao, F. Is low magnesium concentration a risk factor for coronary heart disease? The Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study / F. Liao, A. R. Folsom, F. L. Brancati // Am. Heart J. - 1998. - Vol. 136, № 3. - P. 480-490.

133. Live Imaging of Calciprotein Particle Clearance and Receptor Mediated Uptake: Role of Calciprotein Monomers / S. Koeppert, A. Ghallab, S. Peglow, et al. // Front. Cell Dev. Biol. - 2021. - № 9. - P. 633925.

134. Longitudinal changes in bone and mineral metabolism after cessation of cinacalcet in dialysis patients with secondary hyperparathyroidism / I. Ruderman, E. R. Smith, N. D. Toussaint, et al. // BMC Nephrol. - 2018. - Vol. 19, № 1. - P. 113.

135. Lovastatin stimulates human vascular smooth muscle cell expression of bone morphogenetic protein-2, a potent inhibitor of low-density lipoprotein-stimulated cell

growth / L. Emmanuele, J. Ortmann, T. Doerflinger, et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2003. - Vol. 302, № 1. - P. 67-72.

136. Low serum magnesium concentrations predict cardiovascular and all-cause mortality / T. Reffelmann, T. Ittermann, M. Dorr, et al. // Atherosclerosis. - 2011. - Vol. 219, № 1. - P. 280-284.

137. Lower Plasma Fetuin-A Levels Are Associated With a Higher Mortality Risk in Patients With Coronary Artery Disease / X. Chen, Y. Zhang, Q. Chen, et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2017. - Vol. 37, № 11. - P. 2213-2219.

138. Lumenal calcification and microvasculopathy in fetuin-A-deficient mice lead to multiple organ morbidity / M. Herrmann, A. Babler, I. Moshkova, et al. // PLoS One. - 2020. - Vol. 15, № 2. - e0228503.

139. Magnesium and the risk of cardiovascular events: a meta-analysis of prospective cohort studies / X. Qu, F. Jin, Y. Hao, et al. // PLoS One. - 2013. - Vol. 8, № 3. - e57720.

140. Magnesium in man: implications for health and disease / J. H. de Baaij, J. G. Hoenderop, R. J. Bindels // Physiol. Rev. - 2015. - Vol. 95, № 1. - P. 1-46.

141. Microvascular function predicts cardiovascular events in primary prevention: long-term results from the Firefighters and Their Endothelium (FATE) study / T. J. Anderson, F. Charbonneau, L. M. Title, et al. // Circulation. - 2011. - Vol. 123, № 2. - P. 163-169.

142. Microvasculopathy and soft tissue calcification in mice are governed by fetuin-A, magnesium and pyrophosphate / A. Babler, C. Schmitz, A. Buescher, et al. // PLoS One. - 2020. - Vol. 15, № 2. - e0228938.

143. Mid-term predictive value of calciprotein particles in maintenance hemodialysis patients based on a gel-filtration assay / Y. Gatate, S. Nakano, Y. Mizuno, et al. // Atherosclerosis. - 2020. - № 303. - P. 46-52.

144. Milutinovic, A. Pathogenesis of atherosclerosis in the tunica intima, media, and adventitia of coronary arteries: an updated review / A. Milutinovic, D. Suput, R. Zorc-Pleskovic // Bosn. J. Basic. Med. Sci. - 2020. - Vol. 20, № 1. - P. 21-30.

145. Mineral Composition of Phosphate-Induced Calcification in a Rat Aortic Tissue Culture Model / T. Sonou, M. Ohya, M. Yashiro, et al. // J. Atheroscler. Thromb.

- 2015. - Vol. 22, № 11. - P.1197-1206.

146. Mitochondrial Ca(2+) transport in the endothelium: regulation by ions, redox signalling and mechanical forces / B. R. Alevriadou, S. Shanmughapriya, A. Patel, et al. // J. R. Soc. Interface. - 2017. - Vol. 14, № 137. - P. 20170672.

147. Mitochondrial reactive oxygen species promote p65 nuclear translocation mediating high-phosphate-induced vascular calcification in vitro and in vivo / M. M. Zhao, M. J. Xu, Y. Cai, et al. // Kidney Int. - 2011. - Vol. 79, № 10. - P. 1071-1079.

148. Modulation of vascular function by perivascular adipose tissue: the role of endothelium and hydrogen peroxide / Y. J. Gao, C. Lu, L. Y. Su, et al. // Br. J. Pharmacol.

- 2007. - Vol. 151, № 3. - P. 323-331.

149. Moe, S. M. Calcium Homeostasis in Health and in Kidney Disease / S. M. Moe // Compr. Physiol. - 2016. - Vol. 6, № 4. - P. 1781-1800.

150. Morgan, M. J. Crosstalk of reactive oxygen species and NF-kB signaling / M. J. Morgan, Z. G. Liu // Cell Res. - 2011. - Vol. 21, № 1. - P. 103-115.

151. Mud in the blood: the role of protein-mineral complexes and extracellular vesicles in biomineralisation and calcification / W. Jahnen-Dechent, A. Buscher, S. Koppert, et al. // J. Struct. Biol. - 2020. - Vol. 212, № 1. - P. 107577.

152. Nanoparticle-based test measures overall propensity for calcification in serum / A. Pasch, S. Farese, S. Graber, et al. // J. Am. Soc. Nephrol. - 2012. - Vol. 23, № 10. - P. 1744-1752.

153. Nosalski, R. Perivascular adipose tissue inflammation in vascular disease / R. Nosalski, T. J. Guzik // Br. J. Pharmacol. - 2017. - Vol. 174, № 20. - P. 3496-3513.

154. Oikonomou, E. K. The role of adipose tissue in cardiovascular health and disease / E. K. Oikonomou, C. Antoniades // Nat. Rev. Cardiol. - 2019. - Vol. 16, № 2.

- P. 83-99.

155. Oral Magnesium Supplementation in Chronic Kidney Disease Stages 3 and 4: Efficacy, Safety, and Effect on Serum Calcification Propensity-A Prospective

Randomized Double-Blinded Placebo-Controlled Clinical Trial / I. Bressendorff, D. Hansen, M. Schou, et al. // Kidney Int. Rep. - 2016. - Vol. 2, № 3. - P. 380-389.

156. Orriss, I. R. Pyrophosphate: a key inhibitor of mineralization / I. R. Orriss, T. R. Arnett, R. G. Russell // Curr. Opin. Pharmacol. - 2016. - Vol. 28. - P. 57-68.

157. Osteoclast differentiation by RANKL and OPG signaling pathways / N. Udagawa, M. Koide, M. Nakamura, et al. // J. Bone Miner. Metab. - 2021. - Vol. 39, № 1. - P. 19-26.

158. Osteogenesis associates with inflammation in early-stage atherosclerosis evaluated by molecular imaging in vivo / E. Aikawa, M. Nahrendorf, J. L. Figueiredo, et al. // Circulation. - 2007. - Vol. 116, № 24. - P. 2841-2850.

159. Osteopontin inhibits mineral deposition and promotes regression of ectopic calcification / S. A. Steitz, M. Y. Speer, M. D. McKee, et al. // Am. J. Pathol. - 2002. -Vol. 161, № 6. - P. 2035-2046.

160. Oxidative stress induces vascular calcification through modulation of the osteogenic transcription factor Runx2 by AKT signaling / C. H. Byon, A. Javed, Q. Dai, et al. // J. Biol. Chem. - 2008. - Vol. 283, № 22. - P. 15319-15327.

161. Oxidative stress modulates osteoblastic differentiation of vascular and bone cells / N. Mody, F. Parhami, T. A. Sarafian, et al. // Free Radic. Biol. Med. - 2001. - Vol. 31, № 4. - P. 509-519.

162. Paloian, N. J. Osteopontin protects against high phosphate-induced nephrocalcinosis and vascular calcification / N. J. Paloian, E. M. Leaf, C. M. Giachelli // Kidney Int. - 2016. - Vol. 89, № 5. - P. 1027-1036.

163. Paracrine osteogenic signals via bone morphogenetic protein-2 accelerate the atherosclerotic intimal calcification in vivo. / Y. Nakagawa, K. Ikeda, Y. Akakabe, et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2010. - Vol. 30, № 10. - P. 1908-1915.

164. Peacock, M. Calcium metabolism in health and disease / M. Peacock // Clin. J. Am. Soc. Nephrol. - 2010. - № 5 Suppl 1. - P. S23-30.

165. Peacock, M. Phosphate Metabolism in Health and Disease / M. Peacock // Calcif. Tissue Int. - 2021. - Vol. 108, № 1. - P. 3-15.

166. Perivascular adipose tissue (PVAT) in atherosclerosis: a double-edged sword / X. Y. Qi, S. L. Qu, W. H. Xiong, et al. // Cardiovasc. Diabetol. - 2018. - Vol. 17, № 1. - P. 134.

167. Perivascular adipose tissue and coronary atherosclerosis / J. Mancio, E. K. Oikonomou, C. Antoniades // Heart. - 2018. - Vol. 104, № 20. - P. 1654-1662.

168. Perivascular adipose tissue-derived complement 3 is required for adventitial fibroblast functions and adventitial remodeling in deoxycorticosterone acetate-salt hypertensive rats / C. C. Ruan, D. L. Zhu, Q. Z. Chen, et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2010. - Vol. 30, № 12. - P. 2568-2574.

169. Phosphate feeding induces arterial medial calcification in uremic mice: role of serum phosphorus, fibroblast growth factor-23, and osteopontin / M. M. El-Abbadi, A. S. Pai, E. M. Leaf, et al. // Kidney Int. - 2009. - Vol. 75, № 12. - P. 1297-1307.

170. Physicochemical and biological properties of biomimetic mineralo-protein nanoparticles formed spontaneously in biological fluids / H. H. Peng, C. Y. Wu, D. Young, et al. // Small. - 2013. - Vol. 9, № 13. - P. 2297-2307.

171. Plasma Albumin and Incident Cardiovascular Disease: Results From the CGPS and an Updated Meta-Analysis / A. Ronit, D. M. Kirkegaard-Klitbo, T. L. Dohlmann, et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2020. - Vol. 40, № 2. - P. 473482.

172. Plasma magnesium and risk of ischemic stroke among women / S. N. Adebamowo, M. C. Jimenez, S. E. Chiuve, et al. // Stroke. - 2014. - Vol. 45, № 10. - P. 2881-2886.

173. Pravastatin and olmesartan synergistically ameliorate renal failure-induced vascular calcification / K. Iijima, Y. Ito, B. K. Son, et al. // J. Atheroscler. Thromb. -2014. - Vol. 21, № 9. - P. 917-929.

174. Prediction of all-cause mortality with hypoalbuminemia in patients with heart failure: a meta-analysis / W. Peng, C. Zhang, Z. Wang, et al. // Biomarkers. - 2019. - Vol. 24, № 7. - P. 631-637.

175. Price, P. A. Biochemical characterization of the serum fetuin-mineral complex / P. A. Price, T. M. Nguyen, M. K. Williamson // J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278, № 24. - P. 22153-22160.

176. Price, P. A. Bone origin of the serum complex of calcium, phosphate, fetuin, and matrix Gla protein: biochemical evidence for the cancellous bone-remodeling compartment / P. A. Price, J. M. Caputo, M. K. Williamson // J. Bone Miner. Res. 2002.

- Vol. 7, № 7. - P. 1171-1179.

177. Price, P. A. The inhibition of calcium phosphate precipitation by fetuin is accompanied by the formation of a fetuin-mineral complex / P. A. Price, J. E. Lim // J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278, № 24. - P. 22144-22152.

178. Production of chemokines by perivascular adipose tissue: a role in the pathogenesis of atherosclerosis? / E. Henrichot, C. E. Juge-Aubry, A. Pernin et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2005. - Vol. 25, № 12. - P. 2594-2599.

179. Progression of vascular calcification is increased with statin use in the Veterans Affairs Diabetes Trial (VADT) / A. Saremi, G. Bahn, P. D. Reaven, et al. // Diabetes Care. - 2012. - Vol. 35, № 11. - P. 2390-2392.

180. Proinflammatory activation of macrophages by basic calcium phosphate crystals via protein kinase C and MAP kinase pathways: a vicious cycle of inflammation and arterial calcification? / I. Nadra, J. C. Mason, P. Philippidis, et al. // Circ. Res. - 2005.

- Vol. 96, № 12. - P. 1248-1256.

181. Propensity for Calcification in Serum Associates With 2-Year Cardiovascular Mortality in Ischemic Heart Failure With Reduced Ejection Fraction / M. Bojic, L. Koller, D. Cejka, et al. // Front. Med (Lausanne). - 2021. - № 8. - P. 672348.

182. Protective role of Smad6 in inflammation-induced valvular cell calcification / X. Li, J. Lim, J. Lu, et al. // J. Cell. Biochem. - 2015. - Vol. 116, № 10. - P. 2354-2364.

183. Rahimi, K. Cardiovascular disease and multimorbidity: A call for interdisciplinary research and personalized cardiovascular care / K. Rahimi, CSP Lam, S. Steinhubl // PLoS Med. - 2018. - Vol. 15, № 3. - P. e1002545.

184. Reduction of Calciprotein Particles in Adults Receiving Infliximab for Chronic Inflammatory Disease / M. K. Tiong, E. R. Smith, N. D. Toussaint, et al. // JBMR Plus. - 2021. - Vol. 5, № 6. - e10497.

185. Reid, I. R. Circulating calcium concentrations, vascular disease and mortality: a systematic review / I. R. Reid, G. D. Gamble, M. J. Bolland // J. Intern. Med. - 2016. - Vol. 279, № 6. - P. 524-540.

186. Relation between serum phosphate level and cardiovascular event rate in people with coronary disease / M. Tonelli, F. Sacks, M. Pfeffer, et al. // Circulation. -2005. - Vol. 112, № 17. - P. 2627-2633.

187. Role of calcifying nanoparticle in the development of hyperplasia and vascular calcification in an animal model / N. Cenizo Revuelta, J. A. Gonzalez-Fajardo, M. A. Bratos, et al. // Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. - 2014. - Vol. 47, № 6. - P. 640-646.

188. Role of emerging vitamin K-dependent proteins: Growth arrest-specific protein 6, Gla-rich protein and periostin (Review) / H. Xiao, J. Chen, L. Duan, et al. // Int. J. Mol. Med. - 2021. - Vol. 47, № 3. - P. 2.

189. Role of smooth muscle cells in vascular calcification: implications in atherosclerosis and arterial stiffness / A. L. Durham, M. Y. Speer, M. Scatena, et al. // Cardiovasc Res. - 2018. - Vol. 114, № 4. - P. 590-600.

190. Schreckenberg, R. Calcium sensing receptor expression and signalling in cardiovascular physiology and disease / R. Schreckenberg, K. D. Schlüter // Vascul. Pharmacol. - 2018. - S1537-1891(17)30323-3.

191. Schurgers, L. J. Vitamin K-dependent carboxylation of matrix Gla-protein: a crucial switch to control ectopic mineralization / L. J. Schurgers, J. Uitto, C. P. Reutelingsperger // Trends Mol. Med. - 2013. - Vol. 19, № 4. - P. 217-226.

192. Seidu, S. Serum albumin, cardiometabolic and other adverse outcomes: systematic review and meta-analyses of 48 published observational cohort studies involving 1,492,237 participants / S. Seidu, S. K. Kunutsor, K. Khunti // Scand. Cardiovasc. J. - 2020. - Vol. 54, № 5. - P. 280-293.

193. Selenium suppresses oxidative-stress-enhanced vascular smooth muscle cell calcification by inhibiting the activation of the PI3K/AKT and ERK signaling pathways

and endoplasmic reticulum stress / H. Liu, X. Li, F. Qin, et al. // J. Biol. Inorg. Chem. -2014. - Vol. 19, № 3. - P. 375-388.

194. Sequential patterns of chemokine- and chemokine receptor-synthesis following vessel wall injury in porcine coronary arteries / A. Jabs, E. Okamoto, J. Vinten-Johansen, et al. // Atherosclerosis. - 2007. - Vol. 192, № 1. - P. 75-84.

195. Serum albumin and risk of cardiovascular events in primary and secondary prevention: a systematic review of observational studies and Bayesian meta-regression analysis / P. Pignatelli, A. Farcomeni, D. Menichelli, et al. // Intern. Emerg. Med. - 2020.

- Vol. 15, № 1. - P. 135-143.

196. Serum Calcification Propensity and Clinical Events in CKD / J. D. Bundy, X. Cai, R. C. Mehta, et al. // Clin. J. Am. Soc. Nephrol. - 2019. - Vol. 14, № 11. - P. 1562-1571.

197. Serum Calcification Propensity and Coronary Artery Calcification Among Patients With CKD: The CRIC (Chronic Renal Insufficiency Cohort) Study / J. D. Bundy, X. Cai, J. J. Scialla, et al. // Am. J. Kidney Dis. - 2019. - Vol. 73, № 6. - P. 806-814.

198. Serum Calcification Propensity and Fetuin-A: Biomarkers of Cardiovascular Disease in Kidney Transplant Recipients / A. Bostom, A Pasch, T. Madsen, et al. // Am. J. Nephrol. - 2018. - Vol. 48, № 1. - P. 21-31.

199. Serum Calcification Propensity and the Risk of Cardiovascular and All-Cause Mortality in the General Population: The PREVEND Study / C. Eelderink, C. A. Te Velde-Keyzer, A. S. Frenay, et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2020. - Vol. 40, № 8. - P. 1942-1951.

200. Serum Calcification Propensity Is a Strong and Independent Determinant of Cardiac and All-Cause Mortality in Kidney Transplant Recipients / D. O. Dahle, A. Asberg, A Hartmann, et al. // Am. J. Transplant. - 2016. - Vol. 16, № 1. - P. 204-212.

201. Serum calcification propensity is associated with HbA1c in type 2 diabetes mellitus / R. Mencke, A. van der Vaart, A. Pasch, et al. // BMJ Open Diabetes Res. Care.

- 2021. - Vol. 9, № 1. - e002016.

202. Serum calcification propensity is associated with renal tissue oxygenation and resistive index in patients with arterial hypertension or chronic kidney disease / M.

Pruijm, Y. Lu, F. Megdiche, et al. // J. Hypertens. - 2017. - Vol. 35, № 10. - P. 20442052.

203. Serum calcification propensity is independently associated with disease activity in systemic lupus erythematosus / S. Dahdal, V. Devetzis, G. Chalikias, et al. / PLoS One. - 2018. - Vol. 13, № 1. - e0188695.

204. Serum calcification propensity predicts all-cause mortality in predialysis CKD / E. R. Smith, M. L. Ford, L. A. Tomlinson, et al. // J. Am. Soc. Nephrol. - 2014. -Vol. 25, № 2. - P. 339-348.

205. Serum calcium: a new, independent, prospective risk factor for myocardial infarction in middle-aged men followed for 18 years / L. Lind, E. Skarfors, L. Berglund, et al. // J. Clin. Epidemiol. - 1997. - Vol. 50, № 8. - P. 967-973.

206. Serum levels of the fetuin-mineral complex correlate with artery calcification in the rat / P. A. Price, M. K. Williamson, T. M. Nguyen, et al. // J. Biol. Chem. - 2004. - Vol. 279, № 3. - P. 1594-1600.

207. Serum magnesium and risk of incident heart failure in older men: The British Regional Heart Study / S. G. Wannamethee, O. Papacosta, L. Lennon, et al. // Eur. J. Epidemiol. - 2018. - Vol. 33, № 9. - P. 873-882.

208. Serum magnesium and the incidence of coronary artery disease over a median 27 years of follow-up in the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study and a meta-analysis / M. R. Rooney, A. Alonso, A. R. Folsom, et al. // Am. J. Clin. Nutr. - 2020. - Vol. 111, № 1. - P. 52-60.

209. Serum Magnesium and the Risk of Death From Coronary Heart Disease and Sudden Cardiac Death / B. C. Kieboom, M. N. Niemeijer, M. J. Leening, et al. // J. Am. Heart Assoc. - 2016. - Vol. 5, № 1. - e002707.

210. Serum Magnesium is associated with Carotid Atherosclerosis in patients with high cardiovascular risk (CORDIOPREV Study) / M. E. Rodriguez-Ortiz, F. Gomez-Delgado, A. P. Arenas de Larriva, et al. // Sci. Rep. - 2019. - Vol. 9, № 1. - P. 8013.

211. Serum magnesium, phosphorus, and calcium are associated with risk of incident heart failure: the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study / P. L.

Lutsey, A. Alonso, E. D. Michos, et al. // Am. J. Clin. Nutr. - 2014. - Vol. 100, № 3. -P. 756-764.

212. Serum Phosphate and Microvascular Function in a Population-Based Cohort / C. Ginsberg, A. J. H. M. Houben, R. Malhotra, et al. // Clin. J. Am. Soc. Nephrol. -2019. - Vol. 14, № 11. - P. 1626-1633.

213. Serum phosphate as a risk factor for cardiovascular events in people with and without chronic kidney disease: a large community based cohort study / A. P. McGovern, S. de Lusignan, J. van Vlymen, et al. // PLoS One. - 2013. - Vol. 8, № 9. -P. e74996.

214. Serum phosphate levels are related to all-cause, cardiovascular and COPD mortality in men / N. Campos-Obando, L. Lahousse, G. Brusselle, et al. // Eur. J. Epidemiol. - 2018. - Vol. 33, № 9. - P. 859-871.

215. SGK1 induces vascular smooth muscle cell calcification through NF-kB signaling / J. Voelkl, T. T. Luong, R. Tuffaha, et al. // J. Clin. Invest. - 2018. - Vol. 128, № 7. - P. 3024-3040.

216. Simvastatin attenuates oxidative stress, NF-kB activation, and artery calcification in LDLR-/- Mice Fed with high fat diet via down-regulation of tumor necrosis factor-a and TNF receptor / C. P. Lin, P. H. Huang, C. F. Lai, et al. // PLoS One.

- 2015. - Vol. 10, № 12. - e0143686.

217. Simvastatin enhances bone morphogenetic protein receptor type II expression / H. Hu, A. Sung, G. Zhao, et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2006.

- Vol. 339, № 1. - P. 59-64.

218. Smith, E. R. Calciprotein particles: mineral behaving badly? / E. R. Smith, T. D. Hewitson, W. Jahnen-Dechent // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. - 2020. - Vol. 29, № 4. - P. 378-386.

219. Smooth muscle cells give rise to osteochondrogenic precursors and chondrocytes in calcifying arteries / M. Y. Speer, H. Y. Yang, T. Brabb, et al. // Circ. Res.

- 2009. - Vol. 104, № 6. - P. 733-741.

220. Sobenin, I. A. Current Trends in Vascular Biology and Atherothrombosis / I. A. Sobenin, V. N. Sukhorukov // Curr. Pharm. Des. - 2020. - Vol. 26, № 1. - P. 6-10.

221. Soltis, E. E. Influence of perivascular adipose tissue on rat aortic smooth muscle responsiveness / E. E. Soltis, L. A. Cassis // Clin. Exp. Hypertens. A. - 1991. -Vol. 13, № 2. - P. 277-296.

222. Sonic hedgehog-dependent activation of adventitial fibroblasts promotes neointima formation / J. Dutzmann, A. Koch, S. Weisheit, et al. // Cardiovasc Res. - 2017. - Vol. 113, № 13. - P. 1653-1663.

223. Spontaneous calcification of arteries and cartilage in mice lacking matrix GLA protein / G. Luo, P. Ducy, M. D. McKee, et al. // Nature. - 1997. - Vol. 386, № 6620. - P. 78-81.

224. Statin effects on vascular calcification: microarchitectural changes in aortic calcium deposits in aged hyperlipidemic mice / J. Z. Xian, M. Lu, F. Fong, et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2021. - Vol. 41, № 4. - P. e185-e192.

225. Statins protect human aortic smooth muscle cells from inorganic phosphate-induced calcification by restoring Gas6-Axl survival pathway / B. K. Son, K. Kozaki, K. Iijima, et al. // Circ. Res. - 2006. - Vol. 98, № 8. - P. 1024-1031.

226. Structural basis of calcification inhibition by alpha 2-HS glycoprotein/fetuin-A. Formation of colloidal calciprotein particles / A. Heiss, A. DuChesne, B. Denecke, et al. // J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278, № 15. - P. 1333313341.

227. Taqueti, V. R. Lipid-lowering and anti-inflammatory benefits of statin therapy: more than meets the plaque / V. R. Taqueti, P. M. Ridker // Circ. Cardiovasc. Imaging. - 2017. - Vol. 10, № 7. - e006676.

228. Tesfamariam, B. Involvement of Vitamin K-Dependent Proteins in Vascular Calcification / B. Tesfamariam // J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther. - 2019. - Vol. 24, № 4. - P. 323-333.

229. The annual rate of coronary artery calcification with combination therapy with a PCSK9 inhibitor and a statin is lower than that with statin monotherapy / Y. Ikegami, I. Inoue, K. Inoue, et al. // NPJ Aging Mech. Dis. - 2018. - № 4. - P. 7.

230. The effect of an EDTA-based chelation regimen on patients with diabetes mellitus and prior myocardial infarction in the Trial to Assess Chelation Therapy

(TACT). / E. Escolar, G. A. Lamas, D. B. Mark, et al. // Circ. Cardiovasc. Qual. Outcomes. - 2014. - Vol. 7, № 1. - P. 15-24.

231. The effect of EDTA-based chelation on patients with diabetes and peripheral artery disease in the Trial to Assess Chelation Therapy (TACT) / F. Ujueta, I. A. Arenas, E. Escolar, et al. // J. Diabetes Complications. - 2019. - Vol. 33, № 7. - P. 490-494.

232. The effect of increasing dialysate magnesium on calciprotein particles, inflammation and bone markers: post hoc analysis from a randomized controlled clinical trial / I. Bressendorff, D. Hansen, A. Pasch, et al. // Nephrol. Dial. Transplant. - 2021. -Vol. 36, № 4. - P. 713-721.

233. The effect of increasing dialysate magnesium on calciprotein particles, inflammation and bone markers: post hoc analysis from a randomized controlled clinical trial / I. Bressendorff, D. Hansen, A. Pasch, et al. // Nephrol. Dial. Transplant. - 2019. -gfz234.

234. The effect of phosphate binder therapy with sucroferric oxyhydroxide on calcification propensity in chronic haemodialysis patients: a randomized, controlled, crossover trial / U. Thiem, I. Soellradl, B. Robl, et al. // Clin. Kidney J. - 2020. - Vol. 14, № 2. - P. 631-638.

235. The Inhibitory Roles of Vitamin K in Progression of Vascular Calcification / A. Shioi, T. Morioka, T. Shoji, et al. // Nutrients. - 2020. - Vol. 12, № 2. - P. 583.

236. The mechanism of vascular calcification - a systematic review / W. Karwowski, B. Naumnik, M. Szczepanski, et al. // Med. Sci. Monit. - 2012. - Vol. 18, № 1. - P. RA1-R11.

237. The Role of Secondary Calciprotein Particles in the Mineralisation Paradox of Chronic Kidney Disease / M. M. X. Cai, E. R. Smith, S. J. Tan, et al. // Calcif. Tissue. Int. - 2017. - Vol. 101, № 6. - P. 570-580.

238. The role of vascular smooth muscle cells in arterial remodeling: focus on calcification-related processes / A. Jaminon, K. Reesink, A. Kroon, et al. // Int. J. Mol. Sci. - 2019. - Vol. 20, № 22. - 5694.

239. Tillie, R. J. H. A. Fibroblasts in atherosclerosis: heterogeneous and plastic participants / R. J. H. A. Tillie, K. van Kuijk, J. C. Sluimer // Curr. Opin. Lipidol. - 2020. - Vol. 31, № 5. - P. 273-278.

240. Trends in comorbidity in patients hospitalised for cardiovascular disease / J. Buddeke, M. L. Bots, I. van Dis, et al. // Int. J. Cardiol. - 2017. - Vol. 248. - P. 382-388.

241. Tumor necrosis factor-alpha increases alkaline phosphatase expression in vascular smooth muscle cells via MSX2 induction / H. L. Lee, K. M. Woo, H. M. Ryoo, et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2010. - Vol. 391, № 1. - P. 1087-1092.

242. Tumour necrosis factor-alpha in uraemic serum promotes osteoblastic transition and calcification of vascular smooth muscle cells via extracellular signalregulated kinases and activator protein 1/c-FOS-mediated induction of interleukin 6 expression / D. Zickler, C. Luecht, K. Willy, et al. // Nephrol. Dial. Transplant. - 2018. -Vol. 33, № 4. - P. 574-585.

243. Urinary and plasma magnesium and risk of ischemic heart disease / M. M. Joosten, R. T. Gansevoort, K. J. Mukamal, et al. // Am. J. Clin. Nutr. - 2013. - Vol. 97, № 6. - P. 1299-1306.

244. Vascular adventitia calcification and its underlying mechanism / N. Li, W. Cheng, T. Huang, et al. // PLoS One. - 2015. - Vol. 10, № 7. - e0132506.

245. Very low protein diet enhances inflammation, malnutrition, and vascular calcification in uremic rats / S. Yamada, M. Tokumoto, N. Tatsumoto, et al. // Life Sci. -2016. - Vol. 146. - P. 117-123.

246. Vitamin D Supplementation and Cardiovascular Disease Risks in More Than 83 000 Individuals in 21 Randomized Clinical Trials: A Meta-analysis / M. Barbarawi, B. Kheiri, Y. Zayed, et al. // JAMA Cardiol. - 2019. - Vol. 4, № 8. - P. 765-776.

247. Vitamin D, Calcium, or Combined Supplementation for the Primary Prevention of Fractures in Community-Dwelling Adults: Evidence Report and Systematic Review for the US Preventive Services Task Force / L. C. Kahwati, R. P. Weber, H. Pan, et al. // JAMA. - 2018. - Vol. 319, № 15. - P. 1600-1612.

248. Worsening calcification propensity precedes all-cause and cardiovascular mortality in haemodialyzed patients / G. Lorenz, D. Steubl, S. Kemmner, et al. // Sci. Rep. - 2017. - Vol. 7, № 1. - P. 13368.

249. Wu, C. Y. Comprehensive organic profiling of biological particles derived from blood / C. Y. Wu, J. Martel, J. D. Young // Sci. Rep. - 2018. - Vol. 8, № 1. - P. 11310.

250. Yasuda, H. Discovery of the RANKL/RANK/OPG system / H. Yasuda // J. Bone Miner. Metab. - 2021. - Vol. 39, № 1. - P. 2-11.