Значение быстрого определения множественной лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis методом биочипов в клинике туберкулеза легких тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.26, кандидат медицинских наук Кузьмин, Алексей Владимирович

• Кузьмин, Алексей Владимирович
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Кузьмин, Алексей Владимирович

Список сокращений Ви«,1(ннс

ГЛАВА L Обзор литературы

1. Лекарствен паи устойчивость Mycobacterium tuberculosa

II История формирования и классификация лекарственной 10 уел ойчнвоети . Wi г п h ij l и Tt и т tuberculosis

1-2 Молекулирио- генетические механизмы развития множественной 15 лекарственной устойчивости Xfycobacterium tuberculosis 1.3 Методы определения чувствительности Mycttbacterium 18 tuberculosis к противотуберкулезным препаратам

2, Химиотерапия туберкулеза

2.1 Ос ионные принципы химиотерапии туберкулам

22 Лечение туберкул сю с ыиожйстменной ЛЯЯфОПемшИ 33 устойчивостью

ГЛАВА И. Методика работы и характеристика клинзгческих 37 наблюдений

ГЛАВА III Сравнительная опенка определения лекорстпетюй 56 чувствительности Mycobacterium tuberculosis к нзонназнду И рифами ицину методом абсолютных концентраций и на биочипах «ТБ-Бночип»

ГЛАВА IV. Особенности клинических проявлений туберкулезного 66 процесса и спектр мутаций и генах устойчивости Муса barter г ит tubcrcuktobK рифами канну и НЭОНИНКДУ у разных категорий больных туберкулеюм легких

ГЛАВА V Эффективность химиотерапии больных деетруктияным 83 туберкулезом легких, назначенной по результатам определений чувствительности Mycobacterium tuberculosis к HSOHMMUy и рнфампицину на биочзшах «ТБ Биочил»

Id ключ сине

Выводы

Нряктическне рекомендации

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Значение быстрого определения множественной лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis методом биочипов в клинике туберкулеза легких»

При подтверждении диагноза туберкулеза легких "золотым стандартом" считается выделение культуры MET щ мокроты Однако бактериологические методы выявления МЕТ требуют длительного периода иременн {до 3-х месят») к хлиинщнт-фпанкр получает сведения о лекарственной чувствительности возбудителя туберкулеза практически к моменту завершения интенсивной фазы лечения. Таким образом. больным туберкулезом лёгких с самого начата Кит начнется эмпирическое лечение бе» достоверной информации о наличии лекарственной устойчивости МБТ. В «или с этим кирастает актуальность проблемы внедрения и практику ноны* ускоренных методов лабораторной диагностики МЛУ МБТ

В Институте модекуляриой биологии им, В А. Энгельгардта РАН (ИМБ) был разработан биологический мнкрочкп (биочип), позволяющий определять деэокскрнбонуклеииовую кислоту (ДНК) МБТ и идентифицировать мутации, ответственные за чувствительность возбудителя туберкулеза к Н и R та максимально короткое время (24 часа) [Грялунов Д.А., Михайлович В.М., Лш СЛ., 2003], Тест-система «ТБ-Биочип* прошш регкетршию в Министерстве ^драиоокранения и Социального развития (Регистрационное удостоверение № ФС 0326200^/0&&9-04) однако ло настоящего времени клиническая значимость диагностики МЛУ МБТ на биотипах «ТБ-Бночип» не установлена

Цель исследования.

Оценки. эффективность химиотерапии больных туберкуледа* легких, основанной на раннем определен ни чувствительности Mycobacterium ivbercuhsis к рнфшкинюш)' и юоишяиу «столом биочнпо»

9 Изучить частоту совпадений результате» бактериологического (абсолютных концентраций) к молекулярно-генетнческого (на биочипах "ТБ-Биочнн" J методой определения чувствительности Mycobacterium tuberculosis к июииазилу н рифампнинну

2- Определить спектр мутаций н kaiG mhA, ahpC.rpvB reitax Mycobacterium tuberculosis, ответственных за устойчивость к иэонивзиду и рнфампиинну. у больных туберкулезом легких.

3. Изучить особенности клинических проявлений и частоту выявления мутаинй в генах Mycobacterium tuberculosis у впервые выявленных н ранее леченных больны* туберкулезом лёгких.

4. Оценить эффективность лечения больных туберкулезом легких в ависимости от сроню коррекции химиотерапии по результата* определения лекарственной чувствительности Mycobacterium tubcrculoiu с помощью «ет<истемы *ТБ-Бноцнпн.

5. Оценить эффективность химиотерапии комбинацией из 5-тн протиьотуберкулг-шых препаратов реэераного ряда »№ начальном этапе лечения у больных туберкулезом легких, выделяющих мультнрсзнетентные \hvobaetcrium tuberculosis поданным тест-системы «ТЬ-биочин»,

Новиша исследования.

Впервые щучена эффективность химиотерапии деструктивного туберкулёза лёгких, основанной на определении чувствительности МВТ к итониазиду и рнфамлниину бночиповьш методом «ТБ-Бночил»

Установлено, что эффективность лечения больных, выделяющих резистентные к нзониазнду и/илн рнфампнцнну мнкобактернн туберкулеза, зависит от методики химиотерапии и течение начальной фазы согласно данным лекарственной чувствительности МБ Г по методу бночнпов.

Оперные проведено сравнение спектра мутаций в генах каЮ. тЬЛ. ahpC, rpoB Mycobacterium tuberculosis, выделенных от больных туберкулезом легких разни* категорий: впервые выманенных, не получавших противотуберкулйтные препараты и ранее леченых.

Показано, что наиболее часто мутации в katG, tniiA. afspC, rpoB генах Mycobacterium tubercuhsis определяются у больных туберкулезом яйгкнх, 1юлучавших ранее противотуберкулезную терапию.

Впервые показана высокая частота совладений результатов биочилоаого метода н истода Абсолютных концентраций по установленюо устойчивости Mycobacterium tuberculosis к нзонивзнду и рифампилину

ОЕатандуаач.лечиццц.'дь!

Применение тест-системы «ТБ-Бночил» позволяет сократит!, до 24 часов определение чувствительности Mycobacterium tuberculosa к основным протяюуФеркулвзныы препаратам первого ряда - нэонкюиду н рнфамлннииу,

Ройная коррекция схем химиотерапии НО результатам определенна чувствительности Mycobacterium tuberculous на биочипах да£т возможность в более короткие сроки добиться абациллнровання мокроты, ускорить репаративнме процессы в легочной ткани.

Надавать амазаиа^ м ашш

1. Тест-система «ТБ-Биочип* позволяет на этапе обследования в мокроте детектировать генетический маркёр ISSIIO и мутации к генах rpoB. katG. tnhA, ahpC Mycobacterium tubtrctrlosis, определяющих устойчивость к нзониазиду н рифампицину.

2. Результаты определения устойчивости Mycobacterium tuberculosis к изоиначнду и рифампицину на биочнпак «ТБ-Биочип» а высокой степени совпадают с резу льтатами метола абсолютных концентраций

3. Ранняя коррекция химиотерапии при быстром установлении чувствитслыюсти Mycobacterium tuberculosis к иэонивзилу и рифампицину на бмочнпах «ТБ-Биочнп» повышает эффективность лечения туберкулёза лёгких

-4. Ииволюиня специфических изменений в легких н конверсия мокроты у больных с МЛУ туберкулёзом шушет быстрее при назначении комбинации из 5-ти препаратов резервного ряда в начальной фазе химиотерапии. основанной на результатах установления устойчивости к нзонназиду и рифампицину на биочнпах «ТБ-Бночип», по сравнению с поздней коррекцией по результатам бактериологического метода абсолютных концентраций.

Внедрение результатов исследования в практик!.

Результаты исследования внедрены в лечебно - диагностический процесс ГУ ЦНИИТ РАМН, 1"У ПТД №2 г. Москвы. Материалы диссертации используются в лекциях и на практических шатиях с аспирантами и ординаторами, проходящими обучение в ГУ 1 [НИИТ РАМН, при проведении сертификационных курсов и курсов повышения квалификации и Учебном центре ГУ ЦНИИТ РАМН, а также внедрены п учебный провесе кафедры фтизиатрии Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования.

Апробация работы.

Материмы диссертации доложены иа XIV u XV Национальных конгрессах по болезням органов дыхания в 2004г., 2005г„ на 14 конгрессе Европейского респираторного общества (2004). Научно-практической конференции молодых ученых, посвященной Всемирному дню борьбы с туберкулезом (2005), Научно-практической конференции молодых учёных «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (2006).

Работа апробирована на соамсстном заседании отделов фтизиатрии, микробиологии и детско-подроеткояото отдела ГУ ЦНИИ туберкулой PAMFI4 мы 2006 годи,

ШЙдмдяшь

Материалы диссертации изложены в 12 публикациях

Об^сч и структура диссердации

Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, состоит из введения* 5 глав с изложением материалов и результатов проведенных исследований. включения, выходов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы. В диссертации представлено 32 таблицы it 24 рисунка. Список литературы вюиочает 162 источника отечественных и зарубежных автороя

Заключение диссертации по теме «Фтизиатрия», Кузьмин, Алексей Владимирович

123 ВЫВОДЫ

1 Совпадение результатов молекулярио-генетнчесхого (на бночилах ТБ-БночяГ) и бактериологического (абсолютных концентраций) методов составило 93,1% при выявлении М tvbcvubtft , устойчивых одновременно к изонназнду н рнфампицину, н 8В.9% - при выявлении № tuberculosis , устойчивых только к изонназнду.

2 Анализ мокроты больных деструктивным туберкулёзом лёгких на бночнпах выявил широкий спектр мутаций в генах М. tuberculosis . связанных с устойчивостью к изонназнду н рнфампицину, и продемонстрировал преобладание мутаций л 315 колош гена katG (Ser—Thr(l), AGC->ACC) в 65.3% и 531 кодонс гена г/дай (Ser-«Leu, TCG->TTG)- в 79,1% случаев,

3 Клиническая картина туберкулёза лёгких у ранее леченых больных по сравнению с впервые выявленными характеризовалась преобладанием двусторонних процессов (60,4%), наличием сформированных фиброзных каверн (31,3%). обильным бяктериовылелением (83,3%),

4 Молекулярно-генетнчсскнй анализ М, tuberculosis, выделенных от больных разных категорий, выявил мутации в генах katG, intiA, ahpC, гроИ в 49,1% -в группе впервые выявленных пациентов и в 89,6% случаев в группе ранее леченых, В группе впервые выявленных больных преобладали М tuberculous с мутациями в генах katG u inhA с доминированием мутации AGC->ACC в 315 кодонс гена kii/G, у ранее леченых пациентов А/ tuberculosis несли сочстанныс мутации одновременно в нескольких генах гроВ. katG, inhA, ahpC с преобладанием мутации TCG->TTG в 531 кодонс гена гроВ

5 Ранняя коррекция химиотерапии по результатам установления лекарственной чувствительности к изониазиду и рифампишму на бночнпах способствовала абацнлнроваиию мокроты у 64,1% больных после 2-х месяцев, у 72,0% - после 4-х н у 90,1% - после 6 месяцев лечения. При более поздней коррекции ил основании результатов метода абсолютных концентраций бактериоцыделеиие прекращалось значительно медленнее: у 41,6% больных после 2-х , у 524% - после 4-х и у 59,4% - после 6 месяцев терапии,

6 При режимах химиотерапии, назначенных по результатам выявления ЛУ М. Иtbercitlotis с использованием бночнпов, отмечается более быстрая регрессия специфических изменений о легких рассасывание инфильтрации н уменьшение деструкиий у 48,6% ■ через 2 чесани, у 673% - через 4 месяца и у 92.5% - через 6 месяцев При стандартной терапии инволюция специфических изменений в легких отмечена у 31,7%, 40,6% и 64,4% а соответствующие сроки.

7 Использование комбинации из 5-тн противотуберкулезных препаратов резервного ряда в начальной фазе химиотерапии повышает е£ зффектилиосп, у больных с МЛУ штаммами М («(етк/ий . выявленными по методу бночнпов. При пом исчезновение \t tuberculosis из мокроты определялось у 61,1% -через 2 и у 83,3% через 6 месяцев, частичное рассасывание воспалительных изменений наблюдалось у 463% и 85,2% больных в зги же сроки При стандартной химиотерапии на начальной фазе с последующей коррекцией по методу абсолютных концешрацнй абаинллнрованне мокроты у больных с МЛУ туберкулезом отмечено у 133% и 30,8%, а инволюция специфических изменений в лёгких -у 133% и 63,5% в соответствующие сроки.

UP А КТНЧ ЕСКИ F. PF.KOM КНДЛЦИИ

1 Определение мнкобоктерий туберкулfrjного комплекса н выявление мутаций в гага.х rpofi, katG, inhA. ahpC на биочипах «ТБ-Биочип» может быть рекомендовано в качестве информативного теста для детекции устойчивости А/. tuberculosis к рифампицину ы надииазиду как у впервые выявленных больных, нс получавших противотуберкулезные препараты, тох и у ранее леченых пацнигтол, при отсутствии лонных о лекарственной устойчивости возбудителя туберкул Си

2 При получении дойных биочннового анализа о мутациях в генах, ответственных та устойчивость А/ tuberculosis к изониаэнду, необходимо исключить препарат из схемы и заменить его двумя другими противотуберкулезными препаратами

3.Выявление мутаций в генах, ответственных за устойчивость .V/ tuberculosis к изоииазнду и рнфампипииу, является основанием для назначения химиотерапии комбинацией резервных противотуберкулёзных препаратов

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема лекарственной устойчивости возбудителя туберкулёза человека приобрела в последнее «ремл глобальное значение. Запоздалая диагностика ЛУ МБТ к нэо ни азиду может привести к ускоренному развитию устойчивости к другим ранее действенным лекарственным препаратам, прежде всего к микобактернцндноыу рифампицину. В последнее время большое значение придается выявлению штаммов МБТ с МЛУ Заражение человека такими штаммами приводит к быстрому прегрессированию специфического процесса н, нередко, к детальному исходу Бактериологические методы выявления Л У МБТ требуют длительного периода времени (до трёх месяцев) и клиницист • фтизиатр получает сведении о ЛУ МБТ практически к моменту завершения интенсивной фазы лечения. Технология биочнпов ддя выявления устойчивости MET к рнфамлниину и изонназнду 1го1воляет определять ДНК МБТ и идентифицировать мутации в генах, ответственные та устойчивость возбудителя туберкулёза к Н и R , за 24 часа. Для того, чтобы оисинтъ эффективность химиотерапии больных туберкулезом лёгких, основанной на раннем определении чувствительности А/ tuberculosis к рифампиннну и изонназнду методом биочнпов бито обследовано -ОН ВИЧ- отрицательных пациентов с деструктивным туберкулезом органов дыхания, находившихся на лечении в ГУ ЦНИИТ РАМН с 2003 «о 2005 гг. Среди обследованных больных мужчин было 55,8%, женщин - 44,2%. Наибольшей по численности оказалась возрастная группа от 21 до 40 лет - 523%. У 47,6% пациентов диагноз туберкулеза лег*нх был установлен впервые в жизни в период до 1 месяца до поступления в клинику ГУ ЦНИИТ РАМН- 21,2% были с рецидивом туберкулезного процесса. 25,4% - с прогрессировал нем туберкулёзного процесса на фо«№ предшествующего лечения препаратами первого ряда в течение 3-6 месяцев. НнфнльтратнаныЙ туберкуле1! легких при поступлении в стационар был выявлен у 71,2% больных. лисееминированиый - 2,9 %. кавернозный - 3,9%. фнброэио-кввериозиый - 14.3%, казеошая пневмония - 7,7% обследованных пациентов. У 60,5% больных процесс заболевания ограничивался поражением 1 -2 долей лёгких, у 33,7% протяженность процесса соответствовала 3-5 долям легких. Двусторонний процесс отмечался у 40,4%, односторонний - у 59,6% больных- Микобактерин туберкулеза были обнаружены методом посева при поступлении в клинику у всех 208 naiuteirroB. Исследование культур М. tuberculosis нз чувствительность к противотуберкулезным препаратам первого ряда проводили метолом абсолютных концентраций по методике, описанной в Приказе МЗ РФ № 109 от 21 марта 2003 года. В 107 случаях определение устойчивости к рифампицкну и «гэонназиду А/ tuheixuUxiis проводили на бночипох «ТБ-Биочнп».

Для оценки эффективности лечения больных туберкулезом легких в зависимости от сроков коррекции химиотерапии по данным бактериологического и молскулярио-гснегичеекого методов определения лекарственной чувствительности М. tvbercutosto 208 пациентов были разделены на две группы: 107 пациентов составили 1-ую н 101- It-ую. Группы были сопоставимы по полу, дорасту, формам туберкулезного процесса. Веем пациентам прн поступлении в стационар и далее ежемесячно проводили исследование мазка мокроты методом люминесцентной микроскопии и посев мокроты на плотную питательную среду Левснигтсйна-Йенссна. Выделенные на средах М tuberculosis исследовались на чувствительность к стрептомицину, изонилзилу, рнфампнцнну, згамбутолу, пнразднамнлу методом абсолютных концентраций. 107 пациентам 1-ой группы прн поступлении в стационар исследовали мокроту и выделенную из нее культу ру М tuberculosis на бночилш «ТБ-Бночнп» По результатам определения мутаций в генах, ответственных за чувствительность возбудителя туберкулёза к рифам Пнин ну н изонназнду, назначались схемы химиотерапии, При отсутствии мутаций в ieHax гроВ, katG, inhA, ahftC MET пациентам назначали 4 препарат [криш ч ряда -изониоэид, рифампицнн, пирознномнд, этамбутол (стрептомицин). Прк выявлении мутаций в генах МБТ, ответственных за устойчивость к изониазиду (katG. inhA, ahpC). и отсутствии мутаций в геле гроВ. ответственные за устойчивость к рифампицину, больным назначалась следующая комбинация препаратов, рнфампнцнн. этамбутол. пират ним лл. фторхннолон, амнкации (каиамицин). При выявлении мутаций одновременно в гроВ и и одном или нескольких rwiax katG. inhA. aftpC, лечение назначалось по IV режиму: протнонамнд, пиразниамил. омикацин или капреомицин, ПАСК, циклосерин, офлоксашн или левофлоксацнн Коррекция лечения проводилась после получения результатов чувствительности МБТ но методу абсолютных концентраций Пациентам II-И группы лечение назначалось по стандартным схемам 4-5 препаратами первого ряда с последующей коррекцией через три меся цл по результатам метода абсолютных концентраций

Сравнение результатов установления устойчивости к рифампицину и нзоннлэнду по методу абсолютных концентраций и на биочипах показало, что процент совпадения составил; для МЛУ МБТ 93,1%, для устойчивых к Н - 88.9%, для чувствительных к Н и R- 94,3%. Полное совпадение результатов наблюдалось при определении моноустойчнвости к рифампицину ни одним методом не было получено данных об устойчивости к этому препарату при отсутствии устойчивости к другим ПТП. Подобные результаты были получены ранее Скотникмюй О Н- с соавт, которая показало, что результаты определения устойчивости М. tuberculosa к рифампицину и Изоииазнду но бночипах из диагностического материала совпадали с результатами традиционного бактериологического метода абсолютных концентраций на среде Лсвснштсйна -Йексена в 88,8% случаев, а при выявлении чувстшгтельных к изоииазнду и рифампицину М. ruhercnioxi*-№ 100%, Результаты исследовании клинических изолятов

At. tuberculosis ид устойчивость к рнфампнцнну н иэониаянду обоими методами соаплпали на 97,3%, а при выявлении чувствительных ■ на 97,6%. (Скотннкова О.И., Галкина КЮ, Носова ЕЮ-. 2005).

Дня определения показаний к использованию бночнпов сравнивались клинические проявления туберкулеза и спектр мутаций в «на* МОТ у двух категорий больных: 59 впервые выявленных больных, не получавших противотуберкулезные препараты до поступления в стационар, и 4В ранее леченных нацистов препаратами первого ряда в течение тр5х месяцев и более, Мутации в генах rpoB. katG, inhA. ahpC МБТ выявляли на б но чип ах и при отсутствии мутаций относили к чувствительным к R и Н, при наличии мутаций - к устойчивым к R или Н. Молскудярно-гснстичсскнй анализ М tuberculosa показал, что чувствительных к И и R в группе впервые выявленных больных было 50,9%, в группе ранее леченых - 10,4%, то есть по числу М4делителей МБТ, чувствительных к итониазиду и рнфачпнинну, категория впервые выявленных больных достоверно отличалась от категории ранее леченных (р<0.01), По выделению МБТ с МЛУ достоверно большее число пациентов было in категории ранее леченных ■ 83,3%, Среди пациентов из категории впервые выявленных выделяющие МБТ с МЛУ составили 23,7% (р<0,01). При определении устойчивости МБТ к нзоннатиду разница между категориями оставалась, однако пациентов, выделяющих МБТ, устойчивые к изониазнду. было л группе впервые выявленных больных больше, чем в груп не ранее леченных (25,4% н 6,3% , соответственно, р-0,018). Такая разница может быть объяснена тем. в группе ранее леченных значительно преобладали выделители МЛУ штаммов МБТ

Акал № спектра мутаций в генах rpott. katG. I'thA. ahpC на биочипах МБТ, выделенных от больных разных категорий, выявил 21 вариант мутаций МБТ в зтнх генах (табл. 32)- Наиболее распространённым был вариант мутаций №1 (rpoB 53ITCG-TTG;jfcaxG 3I5AOC-ACC), который встречался у впервые выявленных в 20,3%, а у ранее леченных в 47,6%.

Необходимо отметать, что этот вариант мутаций встречался у ранее леченных больных в достоверно большем числе случаев, чем у впервые выявленных, Били выявлены и другие варианты мутаций {№ 2-5), которые встречались с одинаковой частотой у МБ'Г от больных обеих групп Кроме того, были детектированы варианты мутаций, которые обнаруживались только у больных ранее леченных (№ 6-17) и только у впервые выявленных больных (№ 18-21). Сопоставление вариантов мупший показало, что у ранее леченных больных были более сложные мутации, затрагивающие одновременно несколько генов, ответственных за устойчивость х изоиназиду в сочетания с мутациями в репных колонах гена гроВ, Мутации, выявленные в МБТ от кнервые выявленных больных. затрагивали только по одному гену, ответственному за устойчивость к изоиназиду.

Эти данные являются фундаментальной основой, объясняющей трудность лечения у больных, ранее подвергавшихся терапии и больных с рецидивами. Так как МБТ. имеющие сложные мутации а нескольких генах являются более защищенными от воздействие противотуберкулёзных препаратов

В работах некоторых отечественных исследователей, изучавших мутации в генах устойчивых к ПТП микобактернй. также было показано большое разнообразие вариантов мутаций. Всеми группами было показано преобладание МБТ с мутациями а 3(5 кодоне гена katG (Геиерозов Э В . Акопян Т А-, Говорун В М„ 2000. Шемякин И,Г., СтепаншнНа В.Н., Иванов НЮ.,2003, Скотникова ОЛ., Галкина К.Ю., Носова EJO,, 2005), Однако распространение штаммов с мутациями а гене гроВ зависело от региона обследования. Так Шемякин ИХ. с соавт. при анализе устойчивых к рнфампнцииу штаммов М tuberculosis, выделенных от больных в Приволжском и Центральном округах показал, что устойчивость к рнфзмпнцнну в 87.4% случаев детерминирована мутациями в 516, 526. 531 колонах гена, причем наиболее часто встречалась мутация в 516 кодоне гроВ (74,5%), Скотникова О.И, с соавт. продемонстрировали преобладание МБТ с мутациями в 531 кодоне гена гроВ (от 47,8% в Саратове до 933% в Алматы). В отличие от ранее проведенных исследований и нашей работе проанализированы особенности спектра мутаций у впервые выявленных н

Варианты мутаций в генах katG. inhA. ahpC rpoB M fuberculoru, определенные на биочинах «ТБ-Бкочига у впервые выявленных и ранее леченных больных туберкулезом

Мутаини в генах katG. inhA. ahpC. гроВ Ранее леченные n-48 Впервые выявленные n-59 P абс % абс % мутации lie выявлены 5 10.414,4 30 SO,9±6.5 0,0

1 гроВ 531 TCG-TTG kxaC 31SAGC-ACC 23 47,617,2 12 20,315,2 0.005

2 rpoB 516 GAC-GTC luuG 315 AGC-ACC; m/iA I5C-T 2 4,212,9 i 1,711,7 0,849

3 t-poB 531TCG-TTG katG 315 AGC-ACC inhA I5C-T 2 4,2±2,9 i 1,711,7 0,849

4 katG 315AGC-ACC inhA 15C-T 1 2,112,1 2 3.412,4 0.855

5 katG 315AGC-ACC I 2.1 ±2.1 8 13,514.4 0,078

6 rpoB 511CTG-CCG. rpoBS 16GAC-GGC katG 3£5AGC-ACC 2 4,2*2,9

7 rpoB 526TCG-TTG katG 315AGC-ACC 2 4,212,9

8 rpoB 531TCG-TGG katG 315AGC-CGC inhA 15C-T I

9 rpoB 531TCG-TTG mhA iSC-T I 2,l±2.l *

10 гровшгсо-тга katG 315AGC-ACC inhA 15C-T 1 2,1 ±2.1

11 rpoB 531 TCG-TTG katG 315AGC-ACC ahpC 9G-A 1 2,l±2,l

12 rpoB 53tTCG TTG katG 315AGC-ACA 1 2. [±2,1

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Кузьмин, Алексей Владимирович, 2006 год

1. Валнев РЛ1., Филатова М,С Лекарственная устойчивость мнкобактерий туберкулеза при «первые выявленном туберкулезе легких //Сб. тезисов 14-ого Национального конгресса по болезням органов дыхания. М., 2004.-С.386.

2. Васильева И.А. Эффективность химиотерапии больных лекарственно-устойчивым туберкулезом легких: Дне. докт. мед. наук. Москва 2002, - 263с,

3. Визсль А. А. Клиннко-фуикционадьиые особенности ннфнльтратнвного туберкулеза легких //Врачебное дело,- 1986.- N8.-С. 57-59.

4. Дорожхово ИР., Медведева ИМ. Проблема лекарственной устойчивости возбудителя туберкулеза ив современном этапе !( Туберкулез и экология.- 1997.- N2. С. 25-28.

5. Иртуганова О.А-, Смирнова Н.С., Мороз А.М., Литвинов В-И. Ускоренная культуральная диагностика туберкулеза с использованием систем ВАСТЕС MG1T и MR'"Bad //Методрекомендации МНПЦБТ. М-, 2001. - СЛ6

6. Карачунскнй М.А. Туберкулез в наши дни, //Русский мед. журнал,-2001.- T.9.-M2I.-C.9S 1-933,

7. Мамолат А.С., Клебанова М.А. Лечение туберкулеза легких Н «Вкш школа». Киев.- 1973,- С.32-72.

8. Мишин В.Ю-. Борисов С-Е-, Соколова Г Б и др. Разработка современных протоколов диагностики и лечения туберкулеза органов дыхания '/Consilium mediewn- 2001.- Т-3. - С-148 -154.

9. Мишин В.Ю., Чуканов В.И., Васильева И А Эффективность лечения туберкулеза легких вызванного мнкобактериями с множественной лекарственной устойчивостью // Пробл. туб. 2002. - № 12. - С. 18-23.

10. Наумов В.Н. Шайхаев А Я „ Токае» К В. Хирургическая тактика » условиях современного течения туберкулеза легких И Русский мед. журнал.-l 998.-Т.6.-№ 17.-C.2S-2S

11. Олинен B.C., Василенко Т.Н., Левченко В.И., Артюкова Т,Г,П Шалайко Т.А. Эффективность лечения больных туберкулезом на стационарном этапе Н Туберкулез сегодня: материалы VII российского съезда фтизиатров Москва, 2003.-С.246,

12. Партнеры во имя здоровья. Руководство по лечению туберкулеза с множественной лека решенной устойчивостью // «Партнеры во имя здоровья».-2003.- 173с.

13. Патрушев JUL Экспрессия генов // М.- Наука. 2000. - 527с.

14. Полукгом ФГ Особенности течения и эффективность лечения лекарственно-устойчивого туберкулеза легких у подростков: Дне— канд. мед наук. Москва, 2004. — С,98

15. Приказ МЗ РФ Jfe 109 от 21 марта 2003 года. «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации:» // Проба, туб. 2004.- ж.- С-40-65.

16. Приказ МЗ РФ № 109 от 21 марта 2003 года. «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации» // Пробл. туб. 2004.- №4.- С.31 -61.

17. Пун га ВВ., Капков Л.П, Туберкулез в России ЧЖури Проблемы туберкулеза. 19W.-J6 1.-С, 14-16.

18. Рабухин А Е, Химиотерапия больных туберкулезом. М,: Медицина,-I970.-C.9-18

19. Рудой Н. М. Лекарственная устойчивость мнкобактернй туберкулеза (значение в клинике н эпидемнолмчи туберкулеза}. -М,- 1969.-С. 255

20. Фармер П.Е., Канонси А.С и др Палирсзнстнггный туберкулез: угроза человечеству. Гарвардская медицинская школа /Институт «Открытое общество». М . 1999,- С-52

21. Фнрсова В.А., Полузктова Ф.Г., Кузьмин А.В. Черноусова Л.Н., Значение мнкрочнповой технологии в выявлении лекарственной устойчивости М.tuberculosis у больных туберкул в» м подростков // Материалы VII Российского съезда фтизиатров,- Москва, 2003, -С. Мб

22. Хейфец Л-Б. Микробиологические аспекты выявления больных туберкулезом с лекарственной устойчивостью ЛПробл. туб. 2004. -Nf5. - С.3-5

23. Хоменко А.Г. Туберкулез органов дыхания.- М.: Медицина. 1988.-С-355

24. Хоменко А.Г. Современные проблемы туберкулеза легких /.'Вестник РАМП 1995. -С.З-6.

25. Хоменко AT,. Мишин В.Ю. Диагностика и лечение остропрогресснруюпшх форм туберкулеза //Пробл. туб. 1996,- №5.1. G21-23.

26. Хоменко А.Г Современная химиотерапия туберкулеза U Клин, фармакол и терапия -1998, -№.7. С. 16-20.

27. Хоменко А, Г. Мишин В, Ю-. Чуканов В. И, Выявление, диагностика н химиотерапия туберкулеза органов дыхания в современных эпидемиологических условиях //Методическое пособие для врачей.1. М.,2000

28. Чуканов ВН. Проблема излечения больных туберкулезом органов дыхания, И Русский реферативный журнал,- 2001- Т, 9., №21. С. 9S4-959.

29. Чуканов В.И., Каминская Г.О., Лнвчане Э. Частота и характер побочных реакций при лечении больных туберкулевдм легких противотуберкулезными препаратами резервного рало. // Пробл. туб. и бол. легк -2004 ,- №10. С,6-10.

30. Шилова M B. Туберкулез в России в 2004 голу. М.; Фолиум, 2005.» С.69

31. Шмалнй К, В,. Нахнмсон Г. Л. // Врач. дело. 1962. - № I .-С. 98.

32. Albert Н-, Hoydenrych А., Mole ft., ТтЫПр A., Blumberg L, Evaluation of FASTPIaifueTQ-RIF14, a rapid, manual test foe the delermination of rifampicin resistance from Afivobacierium tuberculosis cultures. II J. Tuberc, bmj, ffis,-200l.-v.5 ,-p,906-911

33. Avendano M., Golduein R Mutadrug-rc^iflant mberculosis long term follow-up of 40 non-HIV-infecled patients // Canadian respiratory journal.2000.-V3.-P. 383-389

34. Bastian I. Cotebundcrs R. Treatment and prevention of multidrug-resistanttubciculosis //Drugs 1999. V.58.-P. 633-661

35. Blower SM, Gerdberding J.L Understanding. predicting and controlling the emergence of drug-resistant tuberculosis a theoretical framework // J. Mol. Mcd-I998.-№76.-P.624-636

36. Bomeman J, Chrobnk M. Delia Vedova G. Figueroa Л. Jiang T, Probe selection algorithms with applications in the analysis of microbial communities //Biobforaioiics.- 200l.-v.L-p. 39-48.

37. Broob G.F., Buiel J.S., Morse 5A- Jawctr, Melnick. and Adclbertfs medical microbiology// Applelon and Lange -Stamford.-22nd e<L-200I.

38. Brunei lo F . Fontana R. Reliability of the MBTOacT system for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis complex isolates to antituberculosis drags tt}. Clin. Microbiol. 2000. - v.38. - p.872-S73.

39. Canetti G. ct el. Advances in techniques of testing mycobacterial drug sensitivity, and the use of sensitivity test in tuberculosis control programmes, // Bull. Wld HlthOrg.-l969.-v, 41.-p. 21-43

40. Cavusoylu C-, Bjlgic A. Determination of rifampin resistance in Mycoboctenvm tuberculosis isolates by the RNA/RNA mismatch method //Bull Mikrobiyol.- 2003,- v.-J7.p, 13,Turkish,

41. CDC Epidemiologic notes and reports nosocomial transmission of muttidrug-resistajit tuberculosis to health-care workers and HIV-infected patients in an urhan hospital Florida Z/MMWR. Morb. Mortal- WkJy. Rep. -1990. - № 39. -P.718-722.

42. Cole S.T, Mycobacterium tuberculosis drag-resistance mechanisms //Trends- Microbiol, -1994- № 2. ■ P. 41 Mt4.

43. Crofton J. Chemotherapy of pulmonary tuberculosis // Brit- Med- J -1959,-P.16KM6I4

44. Crofton J. etal. Clinical tuberculosis //Hacniillan.-1992-- P.199-208,

45. Dittfr Infantes M , Ruiz-Serrano M . Martinez-Sanchez L, et al, Evaluation of the MB'Вас Г Mycobacteium detection system for susceptibility testing of M.tuberculosis //J. Clin. Microbiol. 2000. - v.38. - P. 1988-1989.

46. Microbiol1998.-№47 -P 189-196.

47. Drobnicwski F, Balabanova Y . Ruddy M. ei al. Rifampin- and multidrug-resistant tuberculosis in Russian civilians and prison inmates: dominance of the Beijing strain family //Emerg. Infeci- Dis. ■ 2002. №8. -P.1320-1326.

48. Farmer P.E-, Kim Y, Community based approaches to the control of multidrug resistant tuberculosis: introducing ТХУГЗ-рЬн- //Br Med, J,1998.-Vol.317--P.671 -674

49. Farmer P. E-, Konowis Л. S,. Borisov S. E, Goldfarb A. Healing T. and M McKcc. Rccmdcsccnt tuberculosis in the Russian Federation Program in Infectious Disease and Social Change. Harvard Medical School, Boston-1999.-p. 41-83

50. Fischer 8„ FeHinz R Therapie und prognose dct Tubercutose // Vcrsichcrungsmedian. 1995. - v.47. - N 6. - P.212-216.

51. Fischer E) Epidemiology of mycobacterial resistance (especially Mycobacterium ttibcrculMti/ //Chemother, -1999. № 45 - p. 109-120.

52. Fox W, lillard GA. Mitchison DA. Studies on the treatment of tuberculosis undertaken by the British Medical Research Council Tuberculosis Units, 1946-1986. with relevant subsequent publications // J Tuberc Lung Dis.1999.-v^.-P,231-S279

53. Fricdcn T.K , Sherman L F , Maw K.Lct al. A multi-institutional outbreak of highly drag-resistant tuberculosis Epidemiology and clinical out comes //JAMA. -1996. -Jfc 276, P 1229-35.

54. Eriedman L.N. Tuberculosis Current Concepts and Treatment H CRC Prtss -Kew York.- 2001,- P 475-4%

55. Gali N, Domingue* J-, Me Nerncy R. el al. Rapid detection of drug resistance in M. tuberculosis clinical isolates using; micobaciertophage D29. Preliminary' s«udy // Int. J. Tubercle Lung Dis. 1999. - vJ. - P. 129.

56. Gillespie S.H. F.volution of drug resistance in Mycobacterium tuberculosaclinical and molecular perspective //Antimicrobial. Agents. Chemother -2002,-v. 46. P. 267-274.

57. Grompe M. The rapid detection of unknown mulations in nucleic acids //Nature Genet. 1993. - v,5. -Р.Ш-П6,

58. Hawkins I., Wallace JL, Brown B, Antibacterial susceptibility tests, mycobacteria И In.: Manual of clinical microbiology', (ed. ABaJows et al-> Washington, -1991.-p 1138-1152,

59. Heitcts L., Lindcr Т., Sanchez Т., Spencer D., Brennan J, Two liguid mediu-m systems, Mycobacterium Growth Indicator Tube and MB Redox Tube, for M tuberculosa isolation from чрагшп specimens // J.Clin microbiol. 2000. -v.38.-p.l227-l230,

60. Inderljed CB Antimicrobial susceptibility testing; present practices and future trends //Eur. J. Clin. Microbiol. Infect Dis. 1994 №I3.-P. 9S0-993.

61. International Union Against Tuberculosis. An international investigation of the efficacy of chemotherapy in previously untreated patients with pulmonary tuberculosis, I964;34.t-I9l

62. Iseman M„ Madsen D, Drug-resistant tuberculosis // Clin, Chest Med -1989,-Vo). 10.-P. 341-353.

63. Iseman M D. Evolution of drag-resistant tuberculosis: a mle of two species II Proc.NalJ. Acad- Sci.(USA), 1994,. v. 91. - P. 2428-2429.

64. Iseman M,. Madsen L. Ackcrson L Impact of surgery on the management of MDR-TB// American Journal Respir. CriL Care Med-1996-P.IJ 1

65. Kalantri S,. Pai M„ Pascopella U Ri'cy L. Rcingold A. Bacleriophage-based tests for the detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical specimens: a systematic review and meta-analysis I/ BMC Inf. Dis--2005-v.5.-P. 59

66. Khijirmm M-, Slayden R., У a qi ZhU- Inhibition of a M.tubereuJosis P-ketoacil ACP synthase by isoniazid U Science, 1998. - v.280, - p. 16071610

67. Kochi A. Varcld/is В., Sty bio K. Multidrug-resistant tuberculosis and its control U Res Microbiol.- 1993.-v.-144-р, 104-110.

68. Larsen L, A„ Christiansen M, Vuust J., Andersen P.S- High throughputmutation screening by automated capillary' electrophoresis //Combinatorial Chemistry & High Throughput Screening. 2000, Vol, 3, No. 5.-P.397

69. Madaras Т А Tuberculosis in the Eiuropean Region D Copenhagen.-2000

70. McNcrney R. ТВ: the return of the phage. A review of fifty years of mycobacteriophage research H J- Tuberc. Lung Di».-1999.- v.3.-P, 179-84,

71. Medical Research Council, Streptomycin treatment of pulmonary tuberculosis //BMJ-1948. Jfr 2. - P. 769^782

72. Mirzabekov A. & Kolchinsky A. MAGIChip: Properties and applications in genomic studies //Genomic Technologies Present and Future. Functional Genomics Series,-2002,- V, L-Ch. 6,- P.-163-196,

73. Musser J. Antimicrobial agents resistance in mycobacteria: molecular genetic insights// Clin. Microb. Rev. -1995. v.8. - P, 496-514.

74. Nachega J,В., Chaisson R E, Tuberculosis drag resistance: a global threat // Clin. Infect Dts. -2003. Jfe36. - P S24-S30.

75. Cheng S., Van B. Ma Y. Detection of rpoB gene mutation in Mycobacterium tubercuJwu by PCR "cold" SSCP //ZKonghua Tie He He Hu Xi Za Zhi.-1996.-v, 19,-P.333-337

76. Pagan -Ramos E., Song L, Me Falone M. et ol. Oxidative stress response and characterisation of the o*yR-ahpC and furA-katG loci in M. tuberculosis ttJ. of Bacteriology. 1998. - v,180. - P.4S56-4S64.

77. Pfaller M A- Application of new technology to the detection, identification,and antimicrobial susceptibility testing of Mycobacteria //Am. J,Chn. Pathol. -1994, ■ №01. P. 329-337,

78. Pyle M. Relative numbers of resistant tubercle bacilli in sputa of patients before and during treatment wilh streptomycin i'/Ptoc. Staff. Meet. Mayo. Clin- -1947 №Z - P 465-473,

79. Ramaswamy S.Musser J. M. Molecular genetic basis of antimicrobial agent resistance in Mycobacterium tuberculosis: 1998 update //J. Tubercl. Lung Dis.-1998.-Vol 79.-P. 3-29

80. Rattan A.Kalia A., Ahmad N J/ Multidrug' resistant Mycobacterium tuberculosis: molecular perspectivcs/Emerg Infect Dis.*l998.-№4,-P.I95

81. Raviglione M.C. The ТВ epidemic from 1992 to 2002 /^Tuberculosis. -2003,-X®S3.-P.4-14.

82. Rinder H., Thomschke A. Rusch-Gerdcs S. tt al. Significance of nhpC promoter imitations for the prediction of isoniazid resistance in M, tuberculosis H Eur. J, din microb. infect, dis. -1998. ~ v. 17. P,508-511

83. Rohner P., Ntnci В., Metal C. ct al. Evaluation of the MB/BacT system and companion to the BACTEC 460 system and solid media for isolation of mycobacteria from clinical specimens //J. Clin. Microb. 1997. - v.35. -P.3127-3131.

84. Rusch-Gerdcs S., Domeht C, Nardi G, ct al. Multicenlcr evaluation of the Mycobacteria Growth Indicator Tube for testing susceptibility of M.tuberculosis to first-line drugs//J. Clin, Microb. 1999. - vJ7. - p.45-48

85. Satyers A A, Bacterial pathogenesis // A molecular approach Washington; ASM Press D.C.-2002.- P. 138

86. S hinder I) , Cauthen G„ Farer L. ct al. Drug-resistant tuberculosis П Amer. Rev. resp. Dis. 1991. - Vol.141 - P 732-732,

87. Resistance in Mycobacterium tuberculosis by Double Gradient-Denaturing Gradient Gel Electrophoresis // Amimicrob Agents Chemother.- I999.-v.43.-P. 2550-2554.

88. Snider D. F The global threat of drug-resistant tuberculosis №. Engl. J. Med. -1998. №338. - P. 1689-1690.

89. Smith I. Mycobacterium tuberculosis Pathogenesis and Molecular Determinants of Virulence // Clin. Microbiol, Rev, 2003. - V, 16. -P. 463-496.

90. Starke J. R. Drag-resistance in tuberculosis: mechanisms and prevention //Pediatric. Pulmondogy. -1997, v.16, - P. 154-156.

91. Sumitomo S, Treatment of multi drug resistant tuberculosis //J. Nippon-Rinsho -1998,-V.56.-P.3171 -3175

92. Sung S„ Kang C.H. Kim Y.T., Han S.K. Shim Y.-S., Kim J.H. Surgery increased Ihc chance of cure in multi-drug resistant pulmonary tuberculosis // Eur. Joum- of Cardjo-ihoracie Surgery,- I999,-V,l6.-Rl87-193

93. Voreldzis BP, Grossct T-, de Kantor I. el al. Drug resistant tuberculosis: laboratory issues, World Health recommendations // Tuberc, Lung. Dis. -1994, -v,75(1).-P. 1-7.

94. Verbist L . Gyselen A. Antituberculosis activity of rifampin in vitro and in vivo and the concentrations attained in human blood // Am. Rev. Respir, Dis-1968 v.9g .p. 923-932.

95. Viljoncn M.K., Vyshnevskiy B.L, Otten T F et al,Survey of drug-resistant tuberculosis in northwestern Russia from 1984 through 1994 //Tar. J. Clin.Microbiol. Infect Dis. -1998. №17, - P, 177-183.

96. WHO/lUATLD. Anti-tuberculosis drug resistance in the world- the WHOIUATLD global project on anti-tuberculosis drug resistance surveillance 1994-1997// WHO.- Geneva,- 1997.

97. WHO. Report on ТВ epidemic. Global ТВ programme // WHO, Geneva.-1997.

98. WHO. Geneva/I U ATLD Paris. Guidelines for survej I lancc of drugresistance fa tuberculosis //Int. J. Tuberc. Lung, Dis 1998.-№22.-P. 7289.

99. WIKMUATLD Anti-tuberculosis drug resistance in the world: the WHO-1UATLD Global Project on Anti-Tuberculosis Drug Resistance Surveillance Report 3. Geneva, World Health Organization, 2005

100. WHO. Global tuberculosis control: surveillance, planning, financing // WHO report 2006,- Gcneva-2006

101. Verokhin V. V., Punga V.V., Rybka L.N. Tuberculosis in Russia and the problem of multiple drug resistance //Annals, New- York Academy, of Scicncc. 2001. - №953. - P. 133-137.

102. Vershov G., Barsky V„ Belgovskiy A , Kirillov E„ Kreindlin E, Ivonov I., Parinov S., Guschtn D., Drobyshcv A., Dubiky S., Mirzabckov A, H Proc. Notl. Acad. Sei. USA. 1996. V. 93. P. 4913-4918

103. Yew W W .Chan C.K., Chan C.H. at al Outcomes of patients with mullidrug-resistant pulmonary tuberculosis treated with ofloxacin/Wortoxacin-cantaining regimens //ChesL-2000.-№l 17.-P.744-751

104. Zhang Y, Heym В., Allen B. ct al. The catalase-peroxidase gene and1. U-1isoniaad resistance of Mycobacterium tuberculosis //Nature. -1992- -v.358. P.-591-593.