Защитное действие карнозина, включенного в состав нанолипосом, в условиях окислительного стресса in vitro и in vivo тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Коновалова, Евгения Викторовна

• Коновалова, Евгения Викторовна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Коновалова, Евгения Викторовна

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Окислительный стресс и антиоксиданты

1.1.1. Роль активных форм кислорода в нормальных и патологических условиях

1.1.1.1. Кислородные радикалы и их повреждающее действие на клетку

1.1.1.2. Окисление и продукция свободных радикалов

1.1.2. Антиоксидантная система клеток

1.1.3. Карнозин и родственные ему соединения

1.1.4. Нанопрепараты и их применение

1.1.5. Окислительный стресс и мозг

1.1.6. Апоптоз и некроз как возможные пути гибели нервных клеток

1.1.7. Свободнорадикальное окисление липидов и антиоксидантная терапия при заболеваниях ЦНС

1.2. Возможности изучения механизмов развития окислительного стресса на разных биологических объектах, включая клеточные культуры

1.2.1. Экспериментальные модели окислительного стресса

1.2.2. Клеточные культуры для изучения ОС

1.2.2.1. Гранулярные клетки мозжечка

1.2.2.2. Клеточная культура РС-12

1.3.МУГОА рецепторы и клеточный сигналинг

1.4.Индукторы окислительного стресса

1.4.1. NMDA

1.4.2. Гомоцистеиновая кислота

1.4.3. Полиамины

1.4.4. Акролеин

1.4.5. Пероксид водорода 49 1.5.Проточная цитометрия

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Моделирование окислительного стресса на культуре клеток PC-12 in vitro

2.1.1. Характеристика клеточной культуры

2.1.1.1. Культивирование клеток

2.1.1.2. Подготовка клеток для анализа

2.1.1.3. Дифференцировка клеточной культуры с помощью дексаметазона и NGF-(3

2.1.2. Определение уровня активных форм кислорода и клеточной гибели методом проточной цитометрии

2.1.2.1. Проточная цитометрия. 5

2.1.2.2. Определение уровня активных форм кислорода (АФК)

2.1.2.3. Определение доли мертвых клеток

2.1.3. Определение экспрессии NMDA-рецепторов методом непрямого иммунофлуоресцентного окрашивания антителами

2.2.Способы индукции окислительного стресса 65 2.2.1. Пероксид водорода

2.2.2. N-метил-О-аспартат

2.2.3. Гомоцистеиновая кислота

2.2.4. Полиамины

2.2.5. Акролеин

2.3. Введение карнозина и нанолипосомальных конструкций на его основе в клеточную культуру PC-12 при моделировании ОС

2.3.1. Схема экспериментов

2.3.2. Приготовление нанолипосом, содержащих карнозин

2.3.2.1. Измерение размеров

2.3.2.2. Выбор оптимальной липидной композиции

2.3.3. Карнозинсодержащие нанолипосомы

2.3.4. Определение содержания карнозина в составе нанолипосом по диазореакции

2.4. Приготовление растворов

2.5. Экспериментальные исследования in vitro и in vivo на быстро стареющих мышах линии SAM

2.5.1. Окислительный стресс in vitro

2.5.2. Выделение гранулярных клеток мозжечка

2.5.3. Окислительный стресс in vivo

2.5.4. Устойчивость мышей к гипоксии

2.5.5. Определение общей антиоксидантной активности

2.6. Статистическая обработка результатов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Оценка защитного действия карнозина в составе нанолипосом в условиях окислительного стресса in vitro и in vivo

3.1. Морфологическая характеристика клеточной культуры РС-12, дифференцированной дексаметазоном и фактором роста нервов rHuNGF(3

3.2. Анализ экспрессии NMDA рецепторов в клетках культуры РС-12, активированных дексаметазоном или фактором роста нервов NGF

3.3. Индукция окислительного стресса различными химическими агентами в недифференцированных и дифференцированных клетках РС-12

3.3.1. Индукция окислительного стресса при действии NMDA и Н2О2

3.3.1.1. Интактные клетки РС-12

3.3.1.2. Интактные клетки РС-12 в условиях окислительного стресса

3.3.1.3. Влияние Н202 и NMDA на рост АФК в клетках РС-12, дифференцированных по нейроналыюму типу

3.3.2. Влияние гомоцистеиновой кислоты на клетки РС-12

3.3.2.1. Влияние гомоцистеиновой кислоты на развитие окислительного стресса в недифференцированных клетках РС-12

3.3.2.2. Влияние гомоцистеиновой кислоты на рост АФК в клетках РС-12, дифференцированных по нейрональному типу

3.3.3. Влияние полиаминов на клетки РС-12

3.3.3.1. Влияние спермина, спермидина и путресцина на недифференцированную клеточную культуру РС-12

3.3.3.2. Влияние полиаминов на рост АФК и гибель клеток РС12, дифференцированных по нейрональному типу

З.ЗАТоксическое действие акролеина на клетки PC-12 в зависимости от его дозы и времени инкубации

3.3.4.1. Влияние акролеина на рост АФК

3.3.4.2. Влияние акролеина на гибель клеток PC-12

3.3.4.3. Влияние акролеина на морфологические изменения клеток РС-12

3.4. Защитное действие карнозина на клетки РС-12, в условиях окислительного стресса, индуцированного акролеином

3.4.1. Защитное влияние карнозина на рост АФК

3.4.2. Защитное влияние карнозина на гибель клеток

3.5. Защитное действие карнозина на клетки РС-12, дифференцированные по нейрональному типу

3.5.1. Исследование влияния карнозина на клетки РС-12, инкубированные с перекисью водорода

3.5.2. Влияние карнозина на дифференцированные клетки РС-12 в условиях окислительного стресса, индуцированного гомоцистеиновой кислотой

3.5.3. Оценка антиоксидангной активности карнозина в составе нанолипосом

3.6. Защитное действие карнозина в составе нанолипосом на дифференцированные клетки РС-12 в условиях ОС, индуцированного полиаминами

3.6.1. Влияние карнозина и нанокарнозина, включенного в состав нанолипосом на уровень АФК клеток РС-12, при инкубации их с полиаминами

3.6.2. Влияние карнозина и нанокарнозина, включенного в состав нанолипосом на гибель клеток РС-12, индуцированную полиаминами.

3.7. Защитное действие нанолипосомальных структур, содержащих карнозин на нейроны головного мозга мышей линии 8АМР1/8АМЯ1 в условиях

окислительного стресса

3.7.1. Окислительный стресс in vitro

3.7.2. Окислительный стресс in vivo

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

5. ВЫВОДЫ 142 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АФК- активные формы кислорода

ВЖ- время жизни

ВПП- время до потери позы

BP- время реституции

ГЦ- гомоцистеин

ГЦК-гомоцистеиновая кислота

ДФПГ- 2,2'-дифенил-1-пикрилгидразил

KCJ1 - карнозинсодержащие липосомы

ОГГ-острая гипобарическая гипоксия

ОС- окислительный стресс

ЦНС - ценральная нервная система

DCF-dichlorfluoresceine

NGF -nerve growth factor

NMDA -N-methyl-D-aspartate

PC-12-клетки феохромоцитомы

PI- propidium iodide

SAMP- senescence accelerated mice (prone) SAMR- senescence accelerated mice (resistant)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Защитное действие карнозина, включенного в состав нанолипосом, в условиях окислительного стресса in vitro и in vivo»

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время развитие окислительных реакций в различных биологических структурах рассматривается как один из основных повреждающих механизмов. Особенно значимыми эти процессы являются для нервной системы, что связано с избирательной чувствительностью клеток возбудимых тканей к окислительной деструкции. (Karnaukhov V., et al., 2008). Показано, что развитие окислительного стресса (ОС) активирует каскадный механизм саморазрушения нейронов по пути апоптоза или некроза (Luk'ianova L., et al., 1989; Majno G., and Joris I., 1995; Nicotera P. and Lipton S., 1999) Окислительные повреждения мозга рассматриваются современной наукой как значимый фактор патогенеза заболеваний ЦНС. В связи с этим, разработка новых антиоксидантных препаратов сохраняет высокую актуальность и имеет хорошие фармакологические перспективы. В последние годы как в России, так и за рубежом проводятся исследования по возможности применения панокомплексов на основе фуллеренов, ферригидрита, синтетических полимеров и липосом и других нанокострукций. Принципиально значимыми являются данные о способности различных наноструктур преодолевать гематоэнцефалический барьер, проявлять антиоксидантные и пейропротекторные свойства, а также возможность их адресной доставки в мозг. Физико-химические особенности наноразмерньтх структур делают их перспективными для создания новых лекарственных препаратов (Сейфулла Р.Д., 2012; Amstad, Е. et al. 2011; Heng H.et al.2010)

Природным протектором клеток и тканей от окислительного стресса является дипептид карнозин - антиоксидант прямого и непрямого действия. Его существенной особенностью является легкое включение в метаболические процессы с образованием используемых в обмене веществ метаболитов, гистидина и ß-аланина. ( Болдырев A.A. и соавт. 2002; Boldyrev А., 2012; Boldyrev А et al. 2013).

Повысить эффективность действия карнозина можно путем его модификации, обеспечивающей устойчивость дипептида к действию карнозиназ, или связав его в структуру, недоступную для активного центра фермента. В данной работе на биологических моделях in vitro и in vivo впервые предпринята попытка использовать карнозип, включенный в состав фосфолипидных наноструктур, для защиты от окислительного повреждения.

В настоящее время для решения целого ряда научных задач в условиях in vitro используется клеточная культура линии PC-12. Опухолевая клеточная линия PC-12 была впервые получена в 1976 г. из хромаффшшых клеток мозгового вещества надпочечников (Greene L.,Tischier А., 1976). Особенностью этих клеток является их способность к образованию нейритов в ответ на действие фактора роста нервов NGF (Greene L., Tischier А., 1976). Дифференцировка клеток сопровождается такими характерными признаками, как формирование нейроналы-юго фенотипа, экспрессия нейрональных маркеров и секреция нейротрансмиттеров, а также определённая последовательность событий в клетке во время пролиферации, (Vandry et.al., 2002; Wesering, Ewing, 2008).

В условиях in vivo для оценки нейропротекторного действия изучаемых соединений разрабатываются различные экспериментальные модели заболеваний ЦНС на здоровых животных, что ограничивает обьективность получаемых результатов. С этой точки зрения одним из наиболее перспективных обьектов являются мыши линии SAMP1, характеризующиеся ускоренным темпом старения и сниженным уровнем антиоксидантной защиты (Stvolinskii S, et al., 2003; Федорова Т.Н. и соавт, 2005). Оценка протекторного действия наноразмерных биологически активных композиций в условиях моделирования патологических процессов в мозге, развивающихся под действием ОС, является актуальной задачей.

Цель работы: оценка защитного действия карнозина и его наноструктурного аналога в условиях индуцированного ОС in vitro (нейроны и клетки PC-12) и in vivo (мыши с ускоренным темпом старения)

Задачи работы:

1. Охарактеризовать морфологические и функциональные свойства клеток РС-12, полученных в результате дифференцировки под действием фактора роста нервов NGF.

2. Выявить экспрессию мембранных белков: NMDA-рецепторов в клетках РС-12, дифференцированных под действием фактора роста нервов NGF.

3. Оценить действие индукторов окислительного стресса (Н2О2, гомоцистеиповая кислота, NMDA-специфический агонист NMDA-рецепторов, полиамины и акролеин) на продукцию активных форм кислорода и гибель клеток РС-12.

4. Оценить действие наностуктурного аналога карнозина на нейроны, выделенные из мозжечка 10-12 дневных мышей с ускоренным темпом старения в условиях ОС, индуцированного Н2О2

5. Оценить действие карнозина на рост АФК и гибель клеток РС-12 в условиях токсического влияния акролеина в зависимости от концентрации и времени инкубации.

6. Оценить действие карнозина, включённого в состав нанолипосом, на рост АФК и гибель клеток РС-12 (дифференцированных по нейрональному типу) в условиях токсического влияния полиаминов (спермина, спермидина и путресцина).

7. На модели острой гипобарической гипоксии у взрослых мышей с ускоренным темпом старения (SAMP1/SAMR1) выявить эффекты наностуктурного аналога карнозина на физиологические (время потери позы, время «жизни на высоте», время до остановки дыхания, время реституции,

способность к обучению) и нейрохимические (общая антиоксидаптная активность) параметры.

Научная новизна:

Впервые на суспензии нейронов, выделенных из мозжечка 10-12 дневных мышей с ускоренным темпом старения (SAMP1) в условиях ОС, индуцированного Н2О2, показано протекторное действие наностуктурного аналога карнозина в сопоставлении с карнозином.

Впервые выявлено защитное действие карнозина и его наностуктурного аналога в условиях токсического действия полиаминов (спермина, спермидина и путресцина), а также продукта их распада акролеина на рост АФК и гибель клеток РС-12.

Впервые в условиях in vivo на модели острой гипобарической гипоксии у взрослых мышей с ускоренным темпом старения (SAMP1/SAMR1) выявлены позитивные эффекты наностуктурного аналога карнозина in vivo, проявляющиеся в улучшении физиологических параметров и повышении антиоксидантного статуса животных.

Теоретическая и практическая значимость: полученные результаты послужат обоснованием для разработки и применения высокоэффективных и специфичных препаратов, обладающих способностью к контролируемому транспорту в зону повреждения мозга.

Положения выносимые на защиту:

1. Полученные в результате дифференцировки под действием фактора роста нервов NGF клетки РС-12 по морфологии имеют сходство с нейронами, по функциональным свойствам характеризуются наличием NMDA рецепторов и могут быть использованы в качестве модели для изучения патологических процессов, происходящих в ЦНС.

2. Карнозин в составе нанолипосом оказывает более выраженное протекторное действие на уровень АФК и гибель нейрон-подобных клеток PC-12 относительно карнозина в условиях токсического влияния полиаминов (спермина, спермидина и путресцина).

3. Защитное действие карнозина в составе нанолипосом на нейроны, выделенные из мозжечка 10-12 дневных мышей с ускоренным темпом старения, проявляется в условиях ОС, индуцированного Н2О2.

4. Защитное действие карнозина в составе нанолипосом па модели острой гипобарической гипоксии у взрослых мышей с ускоренным темпом старения (SAMP1) характеризуется улучшением как физиологических (время потери позы, время «жизни на высоте», время до остановки дыхания, время реституции, способность к обучению), так и нейрохимических (общая антиоксидантная активность) параметров.

Апробация работы:

Результаты исследований были доложены на 7 международных конференциях.

1. «Expression of Na/K-pump and N-methil-D-aspartat receptors in pheochromocytoma cells, activated by dexamethasone and nerve growth factor» Konovalova E., Dizhevskaya A., Boldyrev A. // Membrane Proteins: Abstracts.-Italy.-Florence.- 2009.- P.69.

2. «Dexamethasone and rhu-NGF as differentiation factors of PC-12 cells» Konovalova E., Dizhevskaya A., Boldyrev A. // Neurological congress: Abstracts.-Slovakia.- Martin.- 2009.- P.63.

3. «Carnosine containing nanoliposomes protect PC-12 cells and neurons from oxidative stress in vitro» Konovalova E., Karpova L., Stvolinsky S., Boldyrev A. // Carnosine in exercise and disease. Abstracts.- Belgium.- Ghent.- 2011. -P45.

4. «Нейропротекторные эффекты нанолипосом, содержащих карнозин» Е.В. Коновалова, О.А. Шадрина, О.А. Трунова, C.JT. Стволинский //

International Congress «neuroscience for Medicine and Psychology» Тезисы-Украина.- Крым.- Судак.- 2012.- С.210-211.

5. «Моделирование биохимических процессов нейродегенерации и способы её коррекции» М.Г. Маклецова, Е.В. Коновалова, C.JI. Стволинский, Т.Н. Федорова // Материлы XVI Международной конференции по нейрокибернетике - Россия.- Ростов-на Дону.- 2012. -С.28-31.

6. «New mechanisms of neuroprotective carnosine action: role of polyamine system». Konovalova E., Kulikova O., Stvolisky S., Makletsova M., Rikhereva G., Fedorova T. // 5th Conference on Advances in Molecular Mechanisms Underlying Neurological Disorders. Abstract book- Bath. - UK. - 2013. -P31.

7. «Polyamines neurotoxicity at the brain and ways of its correction». Konovalova E., Kulikova O., Stvolisky S., Makletsova M., Rikhereva G., Fedorova T. // The 38th FEBS Congress.FEBS Journal. Abstracts-Saint Petersbourg.- Russia.- 2013.-P576.

Публикации

Материалы диссертации изложены в 2 публикациях

1. Коновалова Е.В., Федорова Т.Н., Маклецова М.Г., Березов Т.Т. Влияние карнозина на гибель клеток PC-12, индуцированную токсическим действием акролеина. // Вопросы биологической, медицинской и фармакологической химии.- 2013.- №6.-С.43-48 .

2. Березов Т.Т., Маклецова М.Г., Сяткин С.П., Рихирева Г.Т., Куликова О.И., Коновалова Е.В., Федорова Т.Н. Роль обмена полиаминов в функциональной активности мозга в норме и при патологии. // Журнал неврология и психиатрия им. С.С.Корсакова.- 2013.-№7.-С. 65-70.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Окислительный стресс и антиоксиданты

1.1.1. Роль активных форм кислорода в нормальных и патологических условиях.

1.1.1.1 Кислородные радикалы и их повреждающее действие на клетку

Молекулярный кислород является широко распространенным окислителем в живых системах. Особенностью строения его молекулы является наличие двух неспаренных электронов с параллельным состоянием их спинов, в то время как электроны в молекулах стабильных органических соединений организованы в пары с антипараллельными спинами. По этой причине в ходе взаимодействия кислорода с окисляемыми им соединениями возможно образование короткоживущих комплексов.

Для полного исчерпания окислительной способности молекулярного кислорода и образования двух молекул воды необходимо присоединить к нему 4 электрона.

е е", 2Н+ е е\ 2 Н+

02 -> 0"2 -> Н202 ОН" + ОН" 2 Н20

При постадийном присоединении электронов к молекулярному кислороду образуются супероксид-анион радикал, гидропероксид и гидроксид-радикал. Изменение спинового состояния электронов в молекуле кислорода может происходить и без присоединения электронов, например, при поглощении кванта света. При этом образуется синглетный кислород, также обладающий свойствами окислителя (Болдырев А.А., 2001, табл. 1).

Гидропероксид ШзОА образующийся при восстановлении супероксид-

аниона кислорода, является практически инертной молекулой, достоинством

которой является ее гидрофобность. По этой причине гидропероксид

относительно легко покидает клетки. Однако он может являться

предшественником гидроксид-радикала, сильнейшего окислителя,

разрушающего разнообразные структуры живой клетки, включая ДНК и

14

белки. Гидроксид-радикал способен также атаковать ненасыщенные мембранные липиды, что приводит к развитию свободнорадикального перекисного окисления липидов (ПОЛ). Финалом этой цепи превращений может стать клеточная смерть.

Гидроксид-радикал генерируется в реакции Хабера-Вайса (НаЬег-Ге2+

Н2О2 + 02~ ОН' + ОН" + ¥с3+ Ре3+ + 0~2 ¥е2+ + 02

и в реакции Фентона (РепШп):

Н2О2 + ¥е2+ -> ОН* + ОН" + Ге3+

Эта реакция катализируется ионами металлов с переменной валентностью, преимущественно Ре2+ и Си24, которые высвобождаются из белковых структур и становятся доступными только в условиях ацидоза.

Таблица 1. Активные формы кислорода и родственных соединений

Соединения Название Формул Относительная

а активность

Радикальные Супероксид анион 02" 0

Гидроперокси- НОО" 1

радикал он 107

Гидроксид-радикал LO' ю4

Алкоксил-радикал LOO- 1

Липоперокси-радикал NO' Не измерена

NO-радикал н2о2 0

Нерадикальные Пероксид водорода 'о2 1

Синглетный осг 103

кислород ONOO" 102

Гипохлорит-анион

Пероксинитрит

В табл. 1 и 2 приведены данные о наиболее важных видах активных форм кислорода (Болдырев A.A., 2001). Они имеют разную реакционную способность, и, соответственно, характеризуются различным временем жизни.

Таблица 2. Некоторые характеристики активных форм кислорода

Форма Хим. символ Полупериод существовани я при 37°С, с Свойства

Супероксид анион кислорода 02" ю-6 Хороший восстановитель, плохой окислитель

Гидроксид-радикал он- ю-9 Чрезвычайно реактивен в реакциях акцепции, донирования и переноса электронов; диффундирует на очень малое расстояние

Гидропероксиль -ный радикал НОз- ю-8 Более сильный окислитель и сильнее растворяется в липидах, чем супероксид; может инициировать ПОЛ

Пероксильный радикал ROO- ю-2 Низкая окислительная активность по сравнению с ОН-, но более высокая диффузия

Алкоксилъный радикал RO- 10"6 Эффективность взаимодействия с липидами промежуточная между ROO- и ОН-

Пероксид водорода Н202 10-100 Оксидант, но с малыми скоростями взаимодействия с органическим субстратом. Обладает высокой диффузионной способностью

Синглетный кислород 'о2 10'6 Мощный окислитель

Молекулярный кислород 02 >102 Умеренный окислитель

1.1.1.2. Окисление и продукция свободных радикалов является неотъемлемой частью метаболизма живых организмов (Papas А., 1996). Активные формы кислорода (АФК) генерируются в различных биологических системах в ходе нормального аэробного дыхания митохондрий (Boveris А., 1977), в процессе дыхательного взрыва фагоцитирующих клеток (реализации функций макрофагов), липидного

переокисления, в процессе метаболизма арахидоновой кислоты (по цикло - и липооксигеназному пути), во время аутоокислеиия катехоламинов, а также реакций, катализируемых железом. (Sies H., 1991; Halliwell В. et al., 1995; Thomas M., 1995, Henry et al., 2001; Пономарев T.M., 2005).

Эндогенными источниками АФК в организме являются митохондрии. Большая часть внутриклеточных активных форм кислорода образуется в митохондриях в электрон-транспортной дыхательной цепи. Компоненты дыхательной цепи встроены в митохондриальную мембрану в виде 4 белково-липидных комплексов: НАДН-КоС^ЬЬ-редуктаза (комплекс I), сукцинат-КоС>-редуктаза (комплекс II), КоСЯЬ-Цитохром с - редуктаза (комплекс III) и цитохром а - цитохромоксидаза (комплекс IV). В нормальных условиях комплекс III является главным источником образования АФК (Chen J. et al., 2003). АФК появляются в клетке в качестве побочного продукта, если кислород в дыхательной цепи митохондрий восстанавливается не полностью.

АФК образуются также за счет работы некоторых водорастворимых мембранносвязанных ферментов клеточных органелл, например, в случае ксантиноксидазы, в качестве побочного продукта. Кроме того, существуют ферменты, единственное назначение которых - генерация активных форм кислорода (NOX - восстанавливает молекулярный кислород во внеклеточном пространстве до супероксида) (Bedard К., Krause К., 2007).

Экзогенными источниками АФК являются УФ-радиация, хемотерапевтические агенты, окислительный стресс, провоспалительные цитокины, факторы роста, а также инфекционные агенты (вирусы, бактерии и паразиты). (Lo, Y. and Cruz T., 1995)

В норме свободные радикалы участвуют в выполнении важнейших физиологических процессов в организме (Болдырев A.A., Куклей М.Л., 1996; Болдырев A.A., 2001). Супероксид-анион, гидроксид-радикал и перекись

водорода могут участвовать в поддержании вазоконстрикторного-вазодилятаторного баланса, обусловливающего органного кровотока.

Чрезвычайно велика роль активных форм кислорода в воспалительных реакциях, которые имеют место практически при всех типах повреждений тканей, в том числе и при ишемии. Продуцируемые свободные радикалы и АФК выполняют важные биологические функции в процессе фагоцитоза, когда активированные фагоциты продуцируют АФК и используют их затем для уничтожения таких патогенных факторов, как бактерии и вирусы (Во§с1ап С. е1 а1., 2000).

Свободнорадикальное окисление является одним из естественных механизмов модификации липидного состава клеточных мембран, обусловливающим изменения их функциональных характеристик .

Вместе с тем, в настоящее время особую значимость приобрела роль АФК в нормальных физиологических процессах. Одним из весомых доказательств того, что АФК вовлекаются в нормальный метаболизм нейронов, является внутриклеточная генерация свободных радикалов (главным образом, супероксид-аниона, гидроксид- и ИО-радикалов) в ответ на активацию глутаматных рецепторов, осуществляющуюся в нормальных условиях (Оуата Н. е1 а1., 1996; ВоШугеу А. е1 а1., 1999). Таким образом, АФК регулируют клеточный рост и участвуют во внеклеточной сигнальной системе, где они являются внутриклеточными сигнальными молекулами (Ртке1 Т., 1998).

Низкий уровень АФК необходим для поддержания клеточной пролиферации. Высокое значение отводится АФК в нормальном функционировании иммунной системы. Продукция простациклина эндотелиальными клетками в метаболических реакциях арахидоновой кислоты обусловливает важную сосудистую функцию, включающую агрегацию тромбоцитов, регуляцию сосудистого тонуса и регуляцию слипания нейтрофилов.

1.1.2. Антиоксидантиая система клеток

В живых организмах имеется антиоксидантиая система, необходимая для контроля за продукцией активных форм кислорода и предотвращения некомпенсированного развития свободнорадикальных реакций. В ее состав входят как ферменты, так и многочисленные низкомолекулярные антиоксиданты или соединения, препятствующие образованию свободных радикалов (Табл. 3). Их согласованная работа держит под постоянным контролем как образование, так и превращение АФК в клетках.

Антиоксиданты делятся на две подгруппы: жирорастворимые и водорастворимые. Первые играют важную роль в защите основных структурных компонентов биологических мембран - фосфолипидов и белков, вторые - действуют в цитоплазме клетки и плазме крови.

Среди жирорастворимых антиоксидан гов, наиболее известным является а - токоферол/витамин Е, расположенный в клеточной мембране, а -токоферол содержит фенольное кольцо с системой сопряженных двойных связей, поэтому он легко отдает электрон, восстанавливая свободные радикалы до стабильных продуктов. Известно, что витамин Е участвует в биосинтезе гема и белков, пролиферации клеток, защищает клетки от повреждения, замедляя окисление липидов и формирование свободных радикалов, улучшает циркуляцию крови, необходим для регенерации тканей (Singh et al., 2006). Кроме того, этот витамин защищает другие растворимые жирами витамины от разрушения кислородом (витамин А). Витамин Е участвует в формировании коллагеиовых и эластиновых волокон межклеточного матрикса, может замедлять старение (Li-Weber, 2002)

Кроме витамина Е, к жирорастворимым антиоксидантам относятся каротипоиды. Представитель этой группы веществ - ß-каротин, который является предшественником витамина А. Известно, что каротипоиды являются «ловушками» синглетного кислорода.

К водорастворимым аитиоксидаитам относятся различные тиоловые соединения, биофлавоноиды и аскорбиновая кислота (витамин С). Известно, что аскорбиновая кислота является мощным восстановителем и играет важную роль в регуляции окислительно-восстановительных процессов, участвует в синтезе коллагена, обмене фолиевой кислоты и железа, а также синтезе стероидных гормонов и катехоламинов (Bobko et al., 2007). Ключевым ферментом антирадикальной защиты является супероксиддисмутаза (СОД), которая, по-видимому, представляет наиболее важный уровень клеточной защиты. У эукариот известно несколько изоформ фермента, в числе которых митохондриальная Mn-СОД, цигозольная Cu/Zn-СОД и отличная от нее Cu/Zn-СОД, определяемая во внеклеточной среде. Растительные объекты содержат в дополнение к ним еще и Fe-зависимую форму СОД. Прокариоты (Streptomices) содержат разнообразные сочетания указанных форм, а также недавно описанную Ni-СОД.

Многие патологии человека, сопровождающиеся и, возможно, вызываемые ростом АФК, протекают на фоне генетически обусловленного дефицита СОД. Таковы боковой амиотрофический склероз, болезнь Альцгеймера и другие нейродегенеративные заболевания (Olanov С., 1993). Восстановление активности мозга после перенесенного инсульта, вероятно, также протекает на фоне пониженного уровня СОД, хотя попытки лечения пациентов введением этого фермента не привели к положительному результату.

СОД локализована преимущественно в нейронах (Delacourte A et al., 1988), а глутатионпероксидаза и глутатион - в астроцитах (Benzi G. and Moretti А., 1995).

Глутатион-зависимые антиоксидантные ферменты

глутатионпероксидазы и глутатионтрансферазы принимают участие в нейтрализации перекисей, субстратом для которых являются как гидроперекиси липидов, так и Н2О2.

Таблица 3. Антиоксиданты в живых системах

Антиоксиданты Локализация Функция

Ферменты и белки

Cn/Zn-СОД Эритроциты, цитоплазма Тушение СЬ'"

Мп-СОД Митохондрии Тушение СЬ'"

Внеклеточная СОД Плазма крови, стенки сосудов Тушение СЬ""

Каталаза Пероксисомы Тушение Н2О2

Глутатион-пероксидаза Цитоплазма, митохондрии Деградация Н2О2 и перекисей липидов

Глутатион-трансфераза Клеточные мембраны, митохондрии, эндоплазматичес -кий ретикулум Деградация Н2О2 и перекисей липидов

Ферритин Цитоплазма Хелатор Fe2+

Трансферрин Внеклеточная среда Хелатор Fe2+

Лактофрерин Внеклеточная среда Хелатор Fe2+

Церулоплазл шн Внеклеточная среда Хелатор Си2+, окисление Fe2+, тушение СЬ"

Альбумин Внеклеточная среда Хелатор Си2+, тушитель OIT, LOO-, НОС1

Низкомолекулярные соединения

Витамин Е Биомембраны Тушение ОН", LOO', НОС1 и т. п.

Убихинол Биомембраны Тушение ОН', LOO', НОС1 и т.п.

Каротиноиды Биомембраны Тушение ОН', LOO', НОС1, '02

Витамин С Цитоплазма Тушение ОН', 02"

Карнозин Цитоплазма Тушение ОН', Ог--, нейтрализация гипохлорита

N-ацетил-цистеин Цитоплазма Неизбирательное тушение АФК

Таурин Цитоплазма Нейтрализация гипохлорита

Глутатион Цитоплазма, митохондрии Тушение OIT, О2"

Мочевая кислота Кровь Предотвращение перекисного окисления липидов

Билирубин Кровь Предотвращение перекисного окисления липидов

В мозге антиоксидантная ферментная система представлена в основном

21

суперокисддисмутазой и глутатион-зависимыми ферментами (Болдырев и соавт., 2001).

Для мозга характерно низкое содержание основных компонентов антиоксидантной защиты (НаШшеП В.е1 а1., 1999; Зенков Н.К и соавт., 2001) (Табл. 4). В целом, дефицит антиоксидантной системы в мозговой ткани объясняет ее особую чувствительность к продукции свободнорадикальных соединений.

Таблица 4. Активность ферментов антиоксидантной защиты в мозге

Мозг (серое вещество) Печень

Cu/Zn-СОД рг/мг белка 3.7 4.7

Катализа Ед/мг белка 7 1400

Глутатион-пероксидаза Ед/мг белка 68 155

Глутатион-редуктаза (наличие) умеренное Высокое

Глутатион (восст) мМ 2 7-8

Для ткани мозга млекопитающих характерен высокий уровень аскорбата (витамина С) и глутатиона (трипептид глутамил-цистеинил-глицин) -низкомолекулярных водоростворимых антиоксидантов (Lyrer Р et al., 1991; Rice М.Е. 1995, 2000). Наиболее важной функцией этих соединений является нейтрализация реактивных свободных радикалов и поддержание нормального red/ox статуса нервной клетки (Cohen G., 1994).

Важной функцией аскорбата является защита клеток мозга от кислородных радикалов, генерируемых активацией глутаматных рецепторов,

поскольку как каинат, так и NMDA могут быть причиной деполяризации митохондрий и увеличения ими продукции супероксид-аниона (Prehn J., 1998; Lafon-Cazal М. et al., 1993). Аскорбат, как и антагонисты глутаматпых рецепторов, способен предотвратить формирование отека мозга.

Антиоксидантные свойства способны проявлять стероидные гормоны, они входят в состав естественных антиоксидаптных систем организма. Так, эстрогены относятся к группе истинных антиоксидантов, которые участвуют в защите клеточных мембран от ПОЛ. Антиоксидантное действие эстрогенов считают одним из компонентов их вазопротекторного (противоатеросклеротического и противоишемического) эффекта. Экспериментально выявлено ингибировапие эстрадиолом процессов ПОЛ в сердце, крови и аорте (Караченцев А.Н, Мельниченко И.А., 1997).

В настоящее время список низкомолекулярных антиоксидантов дополнен рядом других соединений, в числе которых N-ацетилцистеин, таурин, дигидролипоевая кислота, карнитип, мочевая кислота, дипептид карнозин (Packer L.et al., 1997; Naleez К.A. et al., 1997: Luo X. et al, 1999; Болдырев A.A., 1999).

1.1.3. Карнозин и родственные ему соединения.

Карнозин был впервые выделен B.C. Гулевичем, который изучал состав мясного фарша. Он и назвал это соединение карнозином (от лат. саго, carnis - мясо). Пептид не выводится из организма перасщеплённым, а, значит, претерпевает ряд превращений. Он не расщепляется протеолитическими ферментами такими как пепсин и трипсин, не гидролизуется кишечной флорой. Работами лаборатории С.Е. Северина (1938, 1940) было показано, что в почках, селезёнке эритроцитах и печени содержится фермент карнозиназа, расщепляющий карнозин. Этот фермент был впервые выделен из почек свиньи (Hanson, Smith, 1949). В отсутствие ионов металла в окружающей среде карнозиназа расщепляет карнозин и анзерин, а в

присутствие ионов кобальта может гидролизовать и другие дипептиды.

23

Процесс синтеза карнозина был изучен в 1975 г. Разиной, которая проводила исследование с помощью метки НС и показала, что карпозин синтезируется в реакции конденсации фермента [3-аланина и гистидина, причём оба вещества встраиваются целиком, а не отдельным фрагментом. Реакция является обратимой, из чего следует, что карнозин служит источником гистидина в организме.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Коновалова, Евгения Викторовна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Айдарханов Б.Б., Локшина Э.А., Ленская Е.Г. Молекулярные аспекты механизма антиокислительной активности витамина Е: особенности действия токоферолов // Вопр. мед. химии. - 1989. - № 3. - С. 2 - 9.

2. Багыева Г.Х. Клинико-генетический и биохимический анализ болезни Паркинсона: механизмы предрасположенности, экспериментальные модели. Подходы к терапии // Автореф. дисс д. м. н. -2009. - С.48.

3. Бадалян Л.О. и соавт. // Детская неврология. -1984.

4. Бархатова В.П., Суслина З.А. Основные направления нейропротекции при ишемии мозга. //Неврологический журнал. - 2002. - №4. - С. 42 - 50.

5. Бобырева Л.Н. Перспективы применения препаратов биоанти- оксидантов для лечения и профилактики ишемической болезни мозга атеросклеротического генеза. //В кн: Сосудистые заболевания головного мозга. - 1984. - С. 14- 15.

6. Болдырев А. А. Молекулярные механизмы токсичности гомоцистеина // Биохимия. -2009. - Т. 74. - № 6. - С. 725 - 736.

7. Болдырев A.A. 2012. Карнозин: новые концепции для функций давно известной молекулы // Биохимия. - Т. 77, - №4, - С.403-418.

8. Болдырев A.A. Дискриминация между апоптозом и некрозом нейронов под влиянием окислительного стресса. // Биохимия. - 2000. - Т. 65. г С. 981 - 990.

9. Болдырев A.A. Карнозин и защита тканей от окислительного стресса // Изд. Московского Университета "Диалог". - 1999.- С.364.

10. Болдырев A.A. Окислительный стресс и мозг. // Соросовский образовательный журнал. - 2001. - Т. 7. - № 4. - С. 21 - 28.

11. Болдырев A.A., М.Л.Куклей Свободные радикалы в нормальном и ишемическом мозге. //Нейрохимия. - 1996. - Т. 13. -№.4. - С.271 -278.

12. Болдырев A.A., Булыгина, Е.Р., Волынская, Е.А. // Биохимия. -1995, - т.60. -№10. - С.1688-1695.

13. Болдырев A.A., Брюшкова Е.А., Владыченская, Е.А. NMDA-рецепторы в клетках иммунной системы II Биохимия. -2012. -77. -С. 128-134.

14. Булыгина Е.Р., Ляпина Л.Ю., Болдырев A.A. Активация глутаматных рецепторов ингибирует Na/K-АТРазу гранулярных клеток мозжечка. // Биохимия. -2002. -Т.67. - С. 1209 - 1214.

15. Верещагин Н.В., Танашян М.М., Федорова Т.Н., Смирнова И.Н. Антиоксиданты в ангионеврологии. // Атмосфера. Нервные болезни. -2004. -№ 3. -С. 8-12.

16. Весельских И.Ш., Сонник A.B. Применение корректоров процессов перекисного окисления липидов и гемостаза в комплексном лечении больных с цереброваскулярными расстройствами. // Журн. неврол. и психиатр. - 1997. -Т. 97,-№2, С. 51-54.

17. Владимиров Ю.А., Арчаков A.M. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. // Автореферат докт. дисс. -2000. - С.256.

18. Гамалей И.А., Клюбин И.В. 1996. Перекись водорода как сигнальная молекула // Цитология. - Т. 38. - С. 1233-1247.

19. Захарова М.Н. Боковой амиотрофический склероз и оксидантный стресс. // Автореф. докт. дисс. - 2001.

20. Зацепина С.Н., Мытников A.M., Зверева Б.И. Изменение состава высших жирных кислот фосфолипидов плазмы крови и мембран эритроцитов у детей с тяжелой травматической болезнью мозга. // Ж. невропат.и псих.- 1983.-№ 10.-С. 1461 - 1463.

21. Зенков Н. К., Ланкин В. 3., Меныцикова Е. Б. Окислительный стресс. // МАИК.- 2001.-С.343.

22. Капелько В.И. Нарушение энергообразования в клеткахсердечной мышцы: п ричины и следствия. // Соросовский образовательный журнал. - 2000. - №5. С.14-20.

23. Караченцев А.Н, Мельниченко И.А. Перекисное окисление липидов в аорте крысы при действии половых гормонов. // Экперим. и клин, фарм.- 1997. -Т.60, № 6. - С. 13-16.

24. Крыжановский Г.Н., Никушкин Е.В., Воронко В.И. и др. Содержание продуктов перекисного окисления липидов и свободных жирных кислот в плазме крови и спинномозговой жидкости у больных эпилепсией. // Ж. невропат, и псих. -1984.- № 6.- С. 806 - 809.

25. Ланкин В.З., Тихазе А.К, Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы. // Кардиология. - 2000. - Т. 40, №. 1-С. 58-71.

26. Максимова М.Ю.Перекисное окисление липидов и гемостатическая активация при ишемическом инсульте. // Автореф. дисс к. м. н. - 1996. - С. 29.

27. Максимова М.Ю., Федорова Т.Н. Применение милдроната при транзиторных ишемических атаках. // Ж-л неврол. и псих. -2013. -Т. 113. -№6. С. 41-44.

28. Махро A.B., Машкина А.П., Соленая O.A., Трунова O.A., Козина Л.С., Арутюнян A.B., Булыгина Е.Р. Пренатальная гипергомоцистеинемия как модель окислительного стресса мозга. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2008. - № 146. - С.37- 39.

29. Никушкин Е.В. Перекисное окисление липидов при эпилепсии. Антиоксиданты в противосудорожной терапии. // Автореф. дис. д. м. п. -1991.-С. 42.

30. Одгаева A.B., Туровецкий В.Б., Каменский A.A. Повреждение плазматических мембран перитонеальных макрофагов мышей при действии Н202. // Вестник МГУ серия 16. биология. - 2007. -№4. -С. 20-21.

31. Переседова А.В Свободнорадикальные реакции и аутоантитела к фактору роста нервов при рассеянном склерозе. // Автореф. дис. - 1999. - С. 148.

32. Пономарев Т.М. // Книга «Нанотехнология: физико-химия нанокластеров, наноструктур и наноматериалов». - 2009

33. Разина Л.Г. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -1957. -№ 43. -С. 87-91.

34. Савищева О.С., Полещук В.В., Иванова-Смоленская И.А., Федорова Т.Н., Окисляемость апо-В-липопротеинов плазмы крови при паркинсонизме. // Нейрохимия.-2000. -Т. 17. - № 3. - С. 237 - 239.

35. Сейфулла Р.Д. Нанотехнологии в нейрофармакологии. // Onebook. -2012. -С.352.

36. Сейфулла Р.Д. Фармакодинамика и фармакокинетика нанонейрофармакологических препаратов. // Фармакодинамика и фармакокинетика. -2012 г. -1(4). - С.ЗЗ- 38.

37. Скулачев В. П. В своем межмембранном пространстве митохондрия таит «белок самоубийства», который выйдя в цитозоль, вызывает апоптоз //Биохимия.-1996.-Т. 61, вып. 11.- С.2060-2063.

38. Сорокина Е.В. Влияние нейротоксина МРТР на биохимические и физиологические параметры мышей линии SAM. // Автореф. дисс к. б. н. -2003. -С.24.

39. Сорокина Е.В., Бастрикова H.A., Стволинский C.JL, Федорова Т.Н. Эффекты карнозина и селегилина при паркинсонизме, вызванном введением МРТР мышам линии SAM (Senescence Accelerated Mice). // Нейрохимия 2003. T.20. С. 133-138.

40. Стволинский, C.JL , Федорова, Т.Н. // Вестник РУДН. Сер. Экология и безопасность жизнедеятельности. -2006 № 1 (13). -С.56-63.

41. Суслина З.А., Максимова М.Ю. Оксидантный стресс и основные направления нейропротекции при нарушениях мозгового кровообращения. // Неврологический журнал. 2007. № 4, С. 4 - 8.

42. Суслина З.А., Федорова Т.Н., Максимова М.Ю., Рясина Т.В., Стволинский C.JL, Храпова Е.В., Болдырев A.A. Аптиоксидантпая терапия при ишемическом инсульте. Ж. неврол. и психиатр. -2000-Т. 100. - № 10.-С. 34 -38.

43. Суслина З.А., Федорова Т.Н., Максимова М.Ю., Ким Е.К. Антиоксидантпое действие милдроната и L-карнитина при лечении больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга. Ж. экспер. И клип, фармакол., -2003 -№ 3-С. 32-35.

44. Фёдорова Т.Н. Применение хемилюминесцентного анализа для

сравнительной оценки антиоксидантной активности некоторых

146

фармакологических препаратов. // Эксп. и клин, фармакология. -2003. -№5. -С. 56-58.

45. Федорова Т.Н. Окислительный стресс и защита головного мозга от ишемического повреждения. // Автореф. дисс д. б. н. -2004. -С.41.

46. Федорова Т.Н., Стволинский C.J1., Багыева Г.Х., Иванова-Смоленская И.А., Иллариошкин С.Н. Нейродегенеративные изменения, вызванные введением нейротоксина МРТР быстростареющим мышам. // Успехи физиологических наук, 2005, Т. 36., № 2, С. 84-91.

47. Федорова Т.Н., Стволинский C.JL, Доброта Д., Болдырев А.А. Терапевтическое действие карнозина при экспериментальной ишемии мозга. // Вопросы биол., мед., и фарм. Химии. -2002. - №1. - с. 41 - 44

48. Федорова Т.Н., Беляев М.С., Трунова О.А., Гнездицкий В.В., Максимова М.Ю., Болдырев А.А. Нейропептид карнозин увеличивает устойчивость липопротеинов и эритроцитов крови и эффективность иммунокомпетентной системы у пациентов с хронической дисциркуляторпой энцефалопатией //Биол. Мембраны.- 2008.-№25. -С. 479-483.

49. Ansell J.В. Phospholipids. // Form and function of phospholipids. - 1973. - P. 347 -422.

50. Arseima Y Del Valle-Pinero, Shelby K. Suckow, Qiqi Zhou, Federico M. Perez, G. Nicholas Verne and Robert M. Caudle. Expression of the N-methyl-D-aspartate Receptor NR1 Splice Variants and NR2 Subunit Subtypes in the Rat Colon // Neuroscience. Author manuscript. -2007. -№147(1). -P. 164-173.

51. Aruoma O. and Halliwell B. Molecular biology of free radicals in human diseases // OICA Int.-1999.

52. Asztely F. & Gustafsson B. Ionotropic glutamate receptors.Their possible role in the expression of hippocampal synaptic plasticity. // Molecular Neurobiology 1996. -№12. -P.l—11.

53. Babior BM. NADPH oxidase: an update. // Blood .-1993. -P.1464-1476.

54. Bedard K, Krause KH, The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology// Physiological reviews. -2007. vol. 87(1). -P.245-313

55. BelliaF, Vecchio G, Cuzzocrea S, Calabrese V, Rizzarelli E. Neuroprotective features of carnosine in oxidative driven diseases //Mol Aspects Med.-2011 .-№32(4-6). -P.258-66.

56. Benzi, G. and Moretti, A. Are reactive oxygen species involved in Alzheimer's disease? //Neurobiol. Aging. -1995. -№16. -P661-674

57. Bobko A, Ivanov A, Khramtsov V. Discriminative EPR detection of NO and HNO by encapsulated nitronyl nitroxides // Free Radic Res. -2013. -№47(2). -P.74-81.

58. Boldyrev A., Song R., Djatlov V., Lawrence D., and Carpenter D. Neuronal cell death and reactive oxigen species //Cell Mol. Neurobiol. - 2000. - V. 20. - P. 433 -450.

59. Boldyrev A.A., Stvolinsky S.L., Tyulina O.V. et al. // Cell.Mol. Neurobiol. -1997. -Vol. 17, -N 2. -P. 259-271.

60. Boldyrev AA, Aldini G, Derave W . Physiology and pathophysiology of carnosine. // Physiol Rev. -2013. -№93(4). -P. 1803-45.

61. Boldyrev AA.Carnosine: new concept for the function of an old molecule // Biochemistry. -2012. -№77(4). P.-313-26

62. Boldyrev A. Carnosine and protection of cells and tissues against oxidative stress // NovaPubl. -2006. -P.298.

63. Boldyrev, A., Fedorova, T., Stepanova, et al. Carnosine increases efficiency of DOPA therapy of Parkinson's disease: a pilot study// Rejuv. Res. 2008, v. 11, № 8, p.988-994.

64. Boldyrev A., Fedorova T., Stepanova M., Dobrotvorskaya I., Kozlova E., Boldanova N., Bagyeva G., Ivanova-Smolenskaya I., and Illarioshkin S. Carnisone

increases efficiency of DOPA therapy of Parkinson's disease: a pilot study // Rejuv. Res. -2008. -№11(8). P.988-994.

65. Boldyrev A.A., Dupin A.M., Bunin A.Ya., Babizhaev M.A. and Severin S.E. The antioxidative properties of carnosine, a natural histidine-containing dipeptide. //Biochem. Int. - 1987.-15.-P. 1105-1113.

66. Boldyrev A.A., Kukley M.L., Stvolinsky S.L. and Gannushkina I.V., Carnosine and free radical defense mechanisms in brain. // In Natural Antioxidants: Molecular Mechanisms and Health Effects.-1996. -P. 600-613.

67. Boldyrev, A.A., Song, R., Lawrence, D. and Carpenter, D.O. Carnosine protects against excitotoxic cell death independently of effects on reactive oxygen species //Neuroscience. - 1999. -94. - P. 571 - 577.

68. Bonfoco E., Kraing D., Ankacrona M., Nicotera P. and Lipton S.A. Apoptosis and necrosis: two distinct events induced respectively by mild and intense insults with N-methyl-D-aspartate or nitric oxide/superoxide in cortical cell cultures //Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1995.- V. 92.-P. 7162-7166.

69. Boveris A. Mitochondrial production of superoxide radical and hydrogen peroxide //Adv.Exp.Biol.Med. - 1977. - V. 78. - P. 67 - 82

70. Bradley MA, Markesbery WR, Lovell MA. Increased levels of 4-hydroxynonenal and acrolein in the brain in preclinical Alzheimer disease.vFree Radic Biol Med. -2010. -V.15.-№48(12). P. 1570-6.

71. Bradley.M.A.,Markesbery W.R., Lovell M.A. Increased levels of 4-hydroxynonenal and acrolein in the brain in preclinical Alzheimer disease // Free radical biology & medicine. -2010. -P. 1570-1576

72. Brailovskaia VG, Khaspekov LG, Zinchenko VP, Luk'ianova LD Oxidation-reduction states of rat nerve tissue in situ. // Biull Eksp Biol Med. -1989. -№107(4).).-P 431-3.

73. Bräuner-Osborne H, Egebjerg J, Nielsen EO, Madsen U, Krogsgaard-Larsen P.Brorson J.R. et al., Ligands for glutamate receptors: design and therapeutic prospects. //J Med Chem. -2000. -v. 13.- №43(14). P.2609-45

74. Brose N. Membrane fusion takes excitatory turn: syntaxin, vesicle docking protein, or glutamate receptor? // Cell. -1993.-№17;75(6). P. 1043-4.

75. Bulygina E., Gallant Boldyrev A., Bulygina E., Gallant S., Kramarenko G., Stvolinsky S., Yuneva M. Free radical generation in the brain of senescence accelerated mice. //Pathophysiology. -1998. -№5. -P.87.

76. Butterfield DA, Reed T, Perluigi M, De Marco C, Coccia R, Cini C, Sultana R.2006.Elevated protein-bound levels of the lipid peroxidation product, 4-hydroxy-2-nonenal, in brain from persons with mild cognitive impairment. //NeurosciLett. -2006.-№397(3). P. 170-3.

77. Behl C., Hovey L., et al., Bcl-2 prevents killing of neuronal cells glutamate but not by amyloid beta protein, // Biochem. Biophys. Res. Com. -1993. P.949-956.

78. Cadet J.L. and Brannock C. Free radicals and the pathobiology of brain dopamine systems. // Neurochem Int. -1998. -32(2). -P. 117-31

79. Calabrese JR, Ketter TA, Youakim JM, Tiller JM, Yang R, Frye MA. Adjunctive armodafinil for major depressive episodes associated with bipolar I disorder: a randomized, multicenter, double-blind, placebo-controlled, proof-of-concept study. //J Clin Psychiatry. -2010. -№71(10). -P. 1363-70.

80. Carney J.M., Hall N.C., Cheng M., Wu J., Butterfield D.A. Protein and lipid oxidation followingischemia/reperfusion injury, the role of polyamines: an electron paramagnetic resonance analysis.//Adv.Neurol. - 1996. - 71. - P. 259 - 268.

81. Carpenter D. Oxidative stress at molecular, cellular and organ levels // Res. Signpost. -2002., -P. 77-88.

82. Chan P.H. Role of oxidants in ischemic brain damage //Stroke. - 1996. - V. 27. -P. 1124- 1129.

83. Chan P.H.,Kawase M., and Murakami K. Overexpression of SOD1 in transgenic rats protects vulnerable neurons against ischemic damage after global cerebral ischemia and reperfusion //J. Neurosci. - 1998. - V. 18. - P. 8292 - 8299.

84. Chan S.L., Mattson M.P. Caspase and calpain substrates: roles in synaptic plasticity and cell death //J.Neurosci.Res. - 1999. - 58. - P. 167 -190.

85. Chen J.J., and Yu B.P. Alterations in mitochondrial mrmbrane fluidity by lipid peroxidation products //Free Radical Biol. Med. - 1994. - V. 17. - P 411 - 418.

86. Chen J, Ni H, Sun J, Weng G. G protein beta(l)gamma (2) subunits purification and their interaction with adenylyl cyclase. // Sci China C Life Sci. -2003. -№46(2). -P.212-23

87. Chen Y. Cai R.Study and analytical application of inhibitory effect of captopril on multienzyme redox system. // Talanta. -2003. -№61(6). -P.855-61.

88. Clark W.M., and Zivin J.A. Antileukocyte therapy: preclinical trials and combination therapy //Neurology. - 1997. - V. 49. - Suppl, 4. - P. S32 - S36.

89. Cohen G. Enzymatic/nonenzymatic sources of oxy-radicals and regulation of antioxidant defenses //Ann.New York Acad.Sci. - 1994. - 738. - P. 8 - 14.

90. Contestabile A. Cerebellar granule cells as a model to study mechanisms of neuronal apoptosis or survival in vivo and in vitro. // Cerebellum. -2002. -№1(1). -P.41-55.

91. Coyle JT, Puttfarcken P. Oxidative stress, glutamate, and neurodegenerative disorders. // Science. -1993. -Vol 262(5134).-P. 689-95.

92. Curr Opin Immunol. The function of type I interferons in antimicrobial immunity. // Review.Clin Infect Dis.- 2001.-№32(2). -P.302-6

93. Dalle-Donne, R. Rossi, R. Colombo, D. Giustarini and A. Milzani Biomarkers of oxidative damage in human disease. // Clinical Chemistry. -2006, vol. 52 (4).- P. 601-623.

94. Damon D.H.jD'Amore PA et al, Nerve growth factor and fibroblast growth factor regulate neurite outgrowth and gene expression in PC 12 cells via both protein kinase C- and cAMP-independent mechanisms. // J,Cell.Biol. -1990. -№110. -P.1333-1339

95. DingledineR, Borges K, Bowie D, Traynelis SF. The glutamate receptor ion channels //Pharmacol Rev. 1999.-№51(1). -P.7-61.

96. Dobrota D., Fedorova T., Stvolinsky S.L., Babusikova E., Licavcanova K., Drgova A., Strapkova A., Boldyrev A.A. Carnosine protects the brain of rats and Mongolian gerbils against ischemic injury: After-Stroke-Effect. // Neurochem. Res. -2005, -V. 30 (10).-P. 1283 - 1288.

97. Dreher D, Vargas JR, Hochstrasser DF, Junod AF. Effects of oxidative stress and Ca2+ agonists on molecular chaperones in human umbilical vein endothelial cells. //Electrophoresis. -1995.-№16(7)! -P.1205-14.

98. Edwards MA., Loxley RA, Williams AJ, Connor M, Phillips. Lack of functional expression ofNMDA receptors in PC-12 cells. //Neurotoxicology. -2007

99. Elliot MA, Edwards HM Jr.Studies to determine whether an interaction exists among boron, calcium, and cholecalciferol on the skeletal development of broiler chickens. //Poult Sei.-1992. -№71(4).-P.677-90.

100. Esterbauer H, Schaur RJ, Zollner H. Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal, malonaldehyde and related aldehydes. // Free RadicBiol Med. -1991,-Vol.l 1(1). -P. 81-128

101. Fedorova TN, Yuneva MO, Boldyrev AA. Protective effect of carnosine on Cu,Zn-superoxide dismutase during impaired oxidative metabolism in the brain in vivo // Bull Exp Biol Med. -2003. -135(2). -P. 130-2.

102. Fedorova, TN, et al. // Biochemistry. -2009. -№3. P.62-5

103. Finkel T. Oxigen radicals and signaling//Curr. Opin. Cell. Biol. - 1998. - 10. - P. 248-253.

104. Fonteh AN, Harrington RJ, Huhmer AF, Biringer RG, Riggins JN, Quantification of free amino acids and dipeptides using isotope dilution liquid chromatography and electrospray ionization tandem mass spectrometry. // Amino Acids. -2007 .-№32(2). P.203-12.

105. Gaboury CL, Simonson DC, Seely EW, Hollenberg NK, Williams GH. Relation of pressor responsiveness to angiotensin II and insulin resistance in hypertension. // J Clin Invest. -1994. -№94(6). P.2295-300.

106. Gamaley IA, Kirpichnikova KM, Klyubin IV. Activation of murine macrophages by hydrogen peroxide. // Cell Signal. -1994.- №6(8). -P.949-57.

107. Ge QF, Wei EQ, Zhang WP, Hu X, Huang XJ, Zhang L, Song Y, Ma ZQ, Chen Z, Luo JPI. Activation of 5-lipoxygenase after oxygen-glucose deprivation is partly mediated via NMDA receptor in rat cortical neurons. // J Neurochem. -2006 .-№97(4). -P.992-1004.

108. Geering K.Lipase and unspecific esterase activity in the fat body of Aedes aegypti L. // Acta Trop. -1975. -№32(3). -P.273-6.

109. Greene L.A., TischierA.S. Nerve growth factor-induced process formation by cultured rat pheochromocytoma cells. // Nature.-1976. -Vol 258(5533). -P. 341342

110. Greene L.A., TischierA.S. Establishment of a noradrenergic clonal line of rat adrenal pheochromocytoma cells which respond to nerve growth factor.// ProcNatlAcadSci U S A.-1976. -Vol73(7). -P.2424-2428.

111. Greenlund L.J.S., Deckworth T.L., and Johnson E.M. Jr. Superoxide dismutase delays neuronal apoptosis: a role for reactive oxygen species in programmed neuronal death //Neuron - 1995. -V. 14. - P. 303 - 315.

112. Janet C., R. Wayne Barbee,Joseph T. Bielitzki, Leigh Ann Clayton, John C. Donovan, Coenraad F. M. Llendriksen,

Dennis F. Kohn, Neil S. Lipman, Paul A. Locke, John Melcher, Fred W. Quimby, Patricia V. Turner, University of Guelph, Canada

Geoffrey A. Wood, Hanno Wtrbel. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals- Russian Version // National Academy Press, Washington. DC. 1996.

113. Halliwell B., Vitamin C: antioxidant or pro-oxidant in vivo. //Free Radic.Res.-1996.-25.-P. 439-454.

114. Halloran MC, Kalil K.Dynamic behaviors of growth cones extending in the corpus callosum of living cortical brain slices observed with video microscopy. // J Neurosci. -1994.-№ 14(4).-P.2161 -77.

115. Harwat, M., Bohm, V., and Bitsch Assessment of antioxidant activity by using different in vitro methods.//Free Rad. Res. -2002. -v.36.-№ 2. P.177-187.

116. Hayashi T., Sakurai M., Itoyama Y., Abe K. Oxidative damage and breakage of DNA in rat brain after transient MCA occlusion//Brain Res. - 1999. - 832. - P. 159 - 163.

117. Henry GH. Mirror, mirror on the wall, can the brain tell right from left at all? // Clin Exp Optom. -2001. -№84(4). -P. 195-199.

118. Hipkiss AR. Carnosine and its possible roles in nutrition and health. // Adv Food Nutr Res. -2009. -№57. -P.87-154

119. Hipkiss AR. On the enigma of carnosine's anti-ageing actions. // Exp Gerontol. -2009.-№44(4).-P.237-42

120. Hipkiss AR.Carnosine, diabetes and Alzheimer's disease. // Expert Rev Neurother. -2009.-№9(5). -P.583-5

121. Hosokawa M. A higher oxidative status accelerates senescence and aggravates age-dependent disorders in SAMP strains of mice. // Mech. Ageing dev. -2002. -№ 123.-P. 1553 - 1561.

122. Hosokawa M. A higher oxidative status accelerates senescence and aggravates age-dependent disorders in SAMP strains of mice. // Mech Ageing Dev. -2002 .-№123(12). -P.l553-61.

123.1garashi K, Kashiwagi K.Characterization of genes for polyamine modulon. // Methods Mol Biol. -2011. -№720. -P.51-65.

124. Igarashi K., Kashiwagi K. Modulation of cellular function by polyamines. // J. Biochem. Cell Biol. -2010. -№42. -P.39-51.

125. Igarashi K., Kashiwagi K. Use of polyamine metabolites as markers for stroke and renal failure. // Methods Mol Biol. -2011. -№720. -P.395-408.

126. Ivanova S., Botchkina G.I., Al-Abed Y. et al. Cerebral ischemia enhances polyamine oxidation: identification of enzymatically formed 3-aminopropanal as an endogenous mediator of neuronal and glial cell death. // J. Exp. Med.-1998.-№20. -P.327-340.

127. Jacobson M.D. Reactive oxygen species and programmed cell death //Trends Biochem.Sci. - 1996. - V. 21. - 83 - 86.

128. Jacobson N.D., Burne J.F., and Raff M.C. Programmed cell death and Bcl-2 protection in the absence of a nucleus //EMBO J. - 1994. - V. 13. - P. 1899 -1910.

129. Johnson, P., Wei, Y., Huentelman, M.J., et al.. // Free Rad. Res. 1998, v.28, №4, p.393-402.

130. Kahler W., Kuklinski B., Ruhlmann C., Plötz C. Diabetes mellitus—a free radical-associated disease. Results of adjuvant antioxidant supplementation //Z Gesamte Inn Med.-1993. -№48(5). -P.223-32.

131. Gries F.A.; Wessel K. eds. The role of anti-oxidants in diabetes mellitus // Oxygen radicals and anti-oxidants in diabetes. - 1993.-P. 33 - 53;

132. Karnaukhova NA, Sergievich LA, Karnaukhov VN. Analysis of the temporal organization of the synthesis of RNA and protein in blood lymphocytes during the immune response of the body. // Biofizika. -2008-№53(4). -P.632-7.

133. Kashiwagi K, Igarashi K.Identification and assays of polyamine transport systems in Escherichia coli and Saccharomyces cerevisiae. // Methods Mol Biol. -2011. -№720. -P.295-308.

134. Katoh H, Yasui II, Yamaguchi Y, Aoki J, Fujita H, Mori K, Negishi M.Small GTPase RhoG is a key regulator for neurite outgrowth in PC 12 cells. // Mol Cell Biol.-2000.-№20(19). -P.7378-87.

135. Kitado H, Higuchi K, Takeda T. Molecular genetic characterization of the senescence-accelerated mouse (SAM) strains. // J Gerontol. -1994 -№49(6).~P.247-54.

136. Klyubin IV, Kirpichnikova KM, Gamaley IA. Llydrogen peroxide-induced Chemotaxis of mouse peritoneal neutrophils. // Eur J Cell Biol. -1996. -№70(4). -P.347-51.

137. Kohno K., Pliguchi T., Ohta S., Kumon Y., and Sakaki S. Neuroprotective nitric oxide synthase inhibitor reduces intracellular calcium accumulation following transient global ischemia in the gerbil //Neurosci Lett. - 1997. - V. 224. - P. 17 -20.

138. Krippeit-Drews P, Diifer M, Drews G. Parallel oscillations of intracellular calcium activity and mitochondrial membrane potential in mouse pancreatic B-cells. // Biochem Biophys Res Commun. -2000.- №267. -P. 179-83.

139. Krogsgaard-Larsen P, Hansen JJ. Naturally-occurring excitatory amino acids as neurotoxins and leads in drug design. // Toxicol Lett. -1992.-P.409-16.

140. Krohn AJ, Preis E, Prehn JH.Staurosporine-induced apoptosis of cultured rat hippocampal neurons involves caspase-l-like proteases as upstream initiators and increased production of superoxide as a main downstream effector. // J Neurosci. -1998.-№18(20). -P.8186-97.

141.Kuida,K, Zhen T., Na.S. et al. Decreased apoptosis in the brain and premature lethality in CPP32-deficient mice. // Nature. -1996.-№384. -P.368-372.

142. Kummer JL, Rao PK, Heidenreich KA. Apoptosis induced by withdrawal of trophic factors is mediated by p38 mitogen-activated protein kinase. // J Biol Chem. -1997.-№272(33). -P.20490-4.

143. Kuo DW, Chan IiK, Wilson CJ, Griffin PR, Williams H, Knight WB. Escherichia coli leader peptidase: production of an active form lacking a requirement for detergent and development of peptide substrates. // Arch Biochem Biophys. -1993 .-№303(2).-P.274-80.

144. Kuo SC, Lauffenburger DA.Relationship between receptor/ligand binding affinity and adhesion strength. // Biophys J. -1993.-№65(5). -P.2191-200.

145. Lafon-Cazail M., Pietri S., Culcasi M. and Bockaert J. NMDA-dependent superoxide production and neurotoxicity //Nature. - 1993. - V. 364. - P. 5353 -5357.

146. Lamoureux P, Altun-Gultekin ZF, Lin C, Wagner JA, Heidemann SR. Rac is required for growth cone function but not neurite assembly. // J Cell Sci. -1997.-№110. -P.635-41.

147. Leclerc CL, Chi CL, Awobuluyi M, Sucher NJ.Expression of N-methyl-D-aspartate receptor subunit mRNAs in the rat pheochromocytoma cell line PC 12. // Neurosci Lett. -1995. -№201(2). -P. 103-6.

148. Lenney, J. F. Hoppe Seyler. Separation and characterization of two carnosine-splitting cytosolic dipeptidases from hog kidney (carnosinase and non-specific dipeptidase). // Biol. Chem. -1990, v.371, №5, p.433-440.

149. Linnik M.D., Zobrist R.H., Hatfield M.D. Evidence supporting a role for programmed cell death in focal cerebral ischemia in rats//Stroke. - 1993. - 24. - p. 2002-2008.

150. Li-Weber M, Giaisi M, Treiber MK, Krammer PH.The anti-inflammatory sesquiterpene lactone parthenolide suppresses IL-4 gene expression in peripheral blood T. // Eur J Immunol. -2002.-№32(12). -P.3587-97.

151. Lo, Y.Y. and Cruz T.F. Involvement of reactive oxygen species in cytokine and growth faktor induction of c-fos expression in chondrocytes// J. Biol. Chem. -1995.- 270.-P. 11727- 11730.

152. Lou J., Robinson P., Shi R. Acrolein-induced cell death in PC 12 cells: role of mitochondria-mediated oxidative stress. // Neurochemistry international. -2005.-Vol. 47. -P.449-457.

153. Luk'ianova LD, Chernobaeva GN, Romanova VE.An external oxidation pathway in nerve tissue. // Biull Eksp Biol Med. -1989.-№107(4). P.431-3

154. Luk'ianova LD, Vlasova IG.The energy mechanism of phasic changes in the spontaneous electrical activity of the neurons during hypoxia. // Biull Eksp Biol Med. -1989.-108(9). -P.266-9.

155. Luo J, Shi R. Acrolein induces oxidative stress in brain mitochondria. // Neurochem Int.-2005. Vol46(3). -P.243-52.

156. Luo J., Shi R. Acrolein induces axolemmal disruption, oxidative stress, and mitochondrial impairment in spinal cord tissue. // Neurochem Int. -2004. -Vol44(7). -P. 475-86.

157. Luo X., Reichetzer B., Trines J. L-carnitine attenuates doxorubicin-induced lipid peroxidation in rats //Free Radic. Biol. Med.-1999. - V. 26, № 9- 10. -P. 11581165.

158. Lyrer P. et al., Levels of low molecular weight scavengers in the rat brain during focal ischemia // Brain Res. - 1991. - 567. - P.317 - 320.

159. Majno G., and Joris I. Apoptos, oncosis and necrosis. An overview of cell death // Am.J.Pathol. - 1995. - V.146. - P. 3 - 15.

160. Margolis FL, Grillo M, Grannot-Reisfeld N, Farbman Al.Purification, characterization and immunocytochemical localization of mouse kidney carnosinase. // Biochim Biophys Acta.-1983.-№744(3). -P.237-48.

161. Margolis RL, Robinson RG.Right and left cortical lesions asymmetrically alter cerebrovascular permeability in the rat. //Brain Res.-1985.-№359(l-2).-P.81-7.

162. Mattson M.P. and Mark R.J. Excitotoxicity and excitoprotection in vitro. //Adv.Neurol. - 1996. -71. - P. 1 -37.

163. Mattson M.P. Chan S.L., LaFerla F.M., Leissring M, Shepel P.N.,Geiger J.D. Endoplasmatic reticulum signaling in neuronal plasticity and neurodegenerative disorders. //Trends Neurosci. - 2000.-P. 23

164. McBain CJ, Mayer ML.N-methyl-D-aspartic acid receptor structure and function. // Physiol Rev. -1994.-№74(3). -P.723-60.

165. Mignotte B. and Vayssiere J.L. Mitochondria and apoptosis //Eur.J.Biochem. -1998.-252.-P. 1- 15.

166. Mori H, Mishina M.Structure and function of the NMDA receptor channel. // Neuropharmacology. -1995.-№34(10). -P.1219-37.

167. Motoyama N, Wang F, Roth KA, Sawa II, Nakayama K, Nakayama K, Negishi I, Senju S, Zhang Q, Fujii S, et al.Massive cell death of immature hematopoietic cells and neurons in Bcl-x-deficient mice. // Science. -1995.-№267(5203).-P. 150610.

168. Nedergaard M. and Hansen A.J. Characterization of cortical depolarization evoked in focal cerebral ischemia // J. Cereb. Blood Flow Metab. - 1993. - V. 13. - P. 568 -574.

169. Nicotera P and Lipton S.A. Excitotoxins in neuronal apoptosis and necrosis. //J.Cereb.Blood Flow Metab. - 1999. - 19. - P. 583 - 591.

170. Nicotera P. Apoptosois and neurodegeneration: role of caspases. In Krieglstein J. and Klumpp S. Pharmacology of cerebral ischemia. // Med. Pharm Sci. Publ., Stuttgart, 2000. - P. 3 - 9.

171.Nicotera P., Bonfoco E., and Brune Mechanisms for nitric oxide-induced cell death: involvement of apaptosis //Adv. Immunol. - 1995. - V.5 - P. 411 - 420.

172. O'Brien J.S., Sampson E.L. Fatty acid and fatty aldegyde composition of the major brain lipids in normal human gray matter, whyte matter and myelin. //J.Lipid Res. -1965. -6. - P. 545-551.

173. Ohta A, Akiguchi I, Seriu N, Ohnishi K, Yagi II, Higuchi K, Hosokawa M. Deterioration in learning and memory of inferential tasks for evaluation of transitivity and symmetiy in aged SAMP8 mice. // Hippocampus. -2002-№12(6). -P.803-10.

174. Okabe H, Beppu T, Ishiko T, Horino K, Masuda T, Hayashi H, Komori FI, Tanaka H, Takamori H, Masahiko H, Baba H.Multimodal treatment for adrenal metastases from hepatocellular carcinoma (HCC). // Gan To Kagaku Ryoho. -2007 .-№34(12). -P.l 973-5.

175. Olanov C.W. A radical hypothesis of neurodegeneration //Trends Neurosci. - 1993. - 16.-P. 439-444.

176. Oppenheim R., Cell death during development of the nervous system. 1991. // Ann. Rev. Neurol. 14,453-501

177. Oyama H, Iwakoshi T, Niwa M, Kida Y, Tanaka T, Kitamura R, Maezawa S, Kobayashi T.Coagulation and fibrinolysis study after local thrombolysis of a cerebral artery with urokinase. //Neurol Med Chir .-1996. -№36(5). -P.300-4.

178. Packer L., Trischler H.J.and Wessel K. Neuroprotection by the metabolic antioxidant a-lipolic acid. // Free Radical Biol. Med.- 1997. - Vol. 22, N. 1-2 -P.-359-378.

179. Patel D.J. and Shen C. Sugar pucker geometries at the intercalation site of propidium diiodide into miniature RNA and GNA duplexes in solution. // Proc Natl Acad Sci USA. -1978. -№75 (6). -P.2553 - 7.

180. Patel T, Gores GJ, Kaufmann SH.The role of proteases during apoptosis. // FASEB J. -1996.-№10(5).-P.587-97.

181. Pettmann B, Henderson CE.Neuronal cell death. // Neuron. -1998.-№20(4).-P.633-47.

182. Prehn J.H.M., Karkoutly C., Nuglisch J., Peruche B., Krieglstein J. Dihydrolipoate reduces neuronal injury after cerebral ischemia //J. Cereb. Blood Flow Metab. -

1992.-V. 12.-P. 78-87.

183. Raff M., Barres.J.,Burne j?f? Coles. H.Ishizaki Y. and Jacobson MD // Science.-

1993. -№262. -P.695-700

184. Rao VK, Carlson EA, Yan SS.Mitochondrial permeability transition pore is a potential drug target for neurodegeneration. // Biochim Biophys Acta.-2013. -№18.

185. Rathmell J.C. and Thompson C.B. The central effectors of cell death in the immune system//Annu. Rev. Immunol. - 1999. - 17. -P. 781 - 828.

186. Reddy MK, Labhasetwar V. Nanoparticle-mediated delivery of superoxide dismutase to the brain: an effective strategy to reduce ischemia-reperfusion injury. // FASEB J.- 2009-№23(5).-P. 1384-95

187. Reich EE, Markesbery WR, Roberts LJ 2nd, Swift LL, Morrow JD, Montine TJ. Brain regional quantification of F-ring and D-/E-ring isoprostanes and neuroprostanes in Alzheimer's disease. // Am J Pathol. -2001. -Voll58(l). -P. 293297.

188. Rice M.E Ascorbate regulation and its neuroprotective role in the brain. //Trends in Neurosciencs. - 2000. - V.23, N 5. - P. 209 - 216.

189. Rice M.E. High levels of ascorbic acid, not glutathione, in the CNS of anoxia -tolerant reptiles contrasted with levels in anoxia-intolerant species //J.Neurochem. -1995.-64.-P. 1790- 1799.

190. Roveri A, Coassin M, Maiorino M, Zamburlini A, van Amsterdam FT, Ratti E, Ursini F.Effect of hydrogen peroxide on calcium homeostasis in smooth muscle cells. // Arch Biochem Biophys. №1992.-№297(2). -P.265-70.

191. Saiki R., Nishimura K., Ishii I. et al. Intense correlation between brain infarction and protein-conjugated acrolein. // Stroke. -2009-№40.-P.3356-3361.

192. Saito Y, Tsuzuki K, Yamada N, Okado H, Miwa A, Goto F, Ozawa S.Transfer of NMDAR2 cDNAs increases endogenous NMDAR1 protein and induces

expression of functional NMDA receptors in PC 12 cells. // Brain Res Mol Brain Res. -2003.-№110(2). -P. 159-68.

193. Saitoh Y, Hosokawa M, Shimada A, Watanabe Y, Yasuda N, Takeda T, Murakami Y.Age-related hearing impairment in senescence-accelerated mouse (SAM). // Hear Res. -1994.-№75(l-2).-P.27-37.

194. Schiller M, Blank N, Pleyder P, Herrmann M, Gaipl US, Kalden JR, Lorenz HM.Induction of apoptosis by spermine-metabolites in primary human blood cells and various tumor cell lines. // Apoptosis. -2005. -№10(5). -P. 1151 -62.

195. Schipper G., Verhofstad A.A.J. Distribution Patterns of Ornithine Decarboxylase in Cells and Tissues: Facts, Problems, and Postulates // J. Histochem. Cytochem.-2002.-№50.-P.l 143-1160.

196. Schlesier K, Harwat M, Böhm V, Bitsch R. Assessment of antioxidant activity by using different in vitro methods. // Free Radic Res. -2002.-№36(2).-P. 177-87.

197. Shen Y, Wang Y, Shi Y, Liu J, Liu Y.Clinicopathologic study of endometrial dedifferentiated endometrioid adenocarcinoma: a case report. // Int J Clin Exp Pathol. -2012.-№5(1).-P.77-82.

198. Shen Y., Hu WW., Fan YY at al., Carnosine protects against NMDA-induced neurotoxicity in differetniated rat PC-12 cells through camosine- histidine-histamine pathway and LI(l)/H(3)receptors. // Biochem Pharmacology - 2007,-№73 (5).-P. 907-17

199. Sies H. Oxidative stress: oxidants and antioxidants // Academic Press.- 1997 .-№82(2).-P.291-5

200. Singh NK, Behera DR, Agrawal A, Singh MN, Kumar V, Godhra M, Gupta A, Yadav DP, Singh U, Pandey LK, Matah M.Hospital based prospective longitudinal clinical and immunologic study of 179 patients of primary anti-phospholipid syndrome.Int J Rheum Dis. 2013 Oct;16(5):547-55. doi: 10.1111/1756-185X.12150.

201. SongH, Xu X, Wang H, Wang H, Tao Y. Exogenous gamma-aminobutyric acid alleviates oxidative damage caused by aluminium and proton stresses on barley seedlings. // J Sei Food Agric. -2010.-№90(9).-P.1410-6

202. Stvolinskii SL, Fedorova TN, Yuneva MO, Boldyrev AA.Protective effect of carnosine on Cu,Zn-superoxide dismutase during impaired oxidative metabolism in the brain in vivo. //Bull Exp Biol Med. -2003.-№135(2). -P. 130-2.

203. Stvolinsky S, Antipin M, Meguro K, Sato T, Abe H, Boldyrev A.Effect of carnosine and its Trolox-modified derivatives on life span of Drosophila melanogaster. // Rejuvenation Res. -2010.-№ 13(4). -P.453-7.

204. Stvolinsky S, Kukley M, Dobrota D, Mezesova V, Boldyrev A.Carnosine protects rats under global ischemia. //Brain Res Bull. -2000.-№53(4).-P.445-8.

205. Stvolinsky SL, Dobrota D.Anti-ischemic activity of carnosine. // Biochemistry.-2000.-№65(7).-P.849-55.

206. Su JH, Anderson AJ, Cummings BJ, Cotman CW.Immunohistochemical evidence for apoptosis in Alzheimer's disease. // Neuroreport. -1994.-№20 -P. 2529-33.

207. Sucher NJ, Akbarian S, Chi CL, Leclerc CL, Awobuluyi M, Deitcher DL, Wu MK, Yuan JP, Jones EG, Lipton SA.Developmental and regional expression pattern of a novel NMDA receptor-like subunit (NMDAR-L) in the rodent brain. // J Neurosci. -1995.-№15(10) -P.6509-20

208. Sundaresan M, Yu ZX, Ferrans VJ, Irani K, Finkel T.Requirement for generation of H202 for platelet-derived growth factor signal transduction. // Science. -1995.-№270(5234). -P.296-9.

209. Sureda FX, Escubedo E, Gabriel C, Camarasa J, Camins A.Effect of glutamate receptor ligands on mitochondrial membrane potential in rat dissociated cerebellar cells. // Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. -1996.-№354(4).-P.420-3.

210. Suzuki J., Fuyimoto S., Mizoi K., Oba M. The protective effect of combined administration of antioxidants and perfluorochemicals on cerebral ischemia. //Stroke. - 1984. - 4. - P. 672 - 678.

211. Suzuki J., Imaizumi S., Kayama T., Yoshimotop T. Chemiluminescence in hypoxic brain - the second report: cerebral protecnive effect of mannitol, vitamin E and glucocorticoid. //Stroke - 1985. - V. 16, №. 4. - P. 695 - 700.

212. Tang XQ, Song JP, Chen L, Song DL, Mao Y, Zhou LF.Surgical treatment for the giant aneurysms of middle cerebral artery. // Zhonghua Wai Ke Za Zhi. -2009.-№47(14).-P. 1075-8.

213. Thomas M.J. The role of free radicals and antioxidants: how we know they are working? //Crit.Rev.Food Sci.Nutr. - 1995. - V. 35. - P. 21 - 39.;

214. Trompier D, Vejux A, Zarrouk A, Gondcaille C, Geillon F, Nury T, Savary S, Lizard G.Brain peroxisomes. // Biochimie. -2013

215. Troy C.M., and Shelanski M.L. Downregulation of copper/zinc superoxide dismutase (SOD1) causes neuronal cell death. //Proc.Natl.Acad.Sci USA. - 1994. -V. 91. - P. 6384-6387.

216. Vladychenskaya, E.A., Tyulina, O., Urano, S., and Boldyrev, A. Effect of homocysteine and homocysteic acid on blood cells.// Cell Biochem. Funct.-2011. -№29, -P.527-533.

217. Varnum-Finney B, Reichardt LF.Vinculin-deficient PC12 cell lines extend unstable lamellipodia and filopodia and have a reduced rate of neurite outgrowth. // J Cell Biol. -1994. -№ 127(4). -P. 1071 -84.

218. Vaudry D, Stork PJ, Lazarovici P, Eiden LE. Signaling pathways for PC 12 cell differentiation: making the right connections. // Science. -2002.-Vol.296(5573). -P. 1648-1649.

219. Wang F, Li ZH.A study on miRNA alternation after H202-induced PC12 cell apoptosis using microarray technique. // Fa Yi Xue Za Zhi. -2007 .-№23(5).-P.328-31.

220. Wesering RPI, Ewing AG. The PC 12 cell as model for neurosecretion. // Acta Physiol. -2008. -Vol. 192(2). -P. 273-285.

221. Whiteley W., Tseng M., Sandercock P. Blood biomarkers in the diagnosis of ischemic stroke a systematic review. // Stroke. -2008.-Vol.39.-P.2902-2909

222. Williams TI, Lynn BC, Markesbery WR, Lovell MA. Increased levels of 4-hydroxynonenal and acrolein, neurotoxic markers of lipid peroxidation, in the brain in Mild Cognitive Impairment and early Alzheimer's disease. // Neurobiol Aging. -2006. -Vol.27(8).-P. 1094-1099.

223. Winn SR, Tresco PA, Zielinski B, Greene LA, Jaeger CB, Aebischer P.Behavioral recovery following intrastriatal implantation of microencapsulated PC 12 cells. // Exp Neurol. -1991. №113(3).-P.322-9.

224. Wolvertang E.J., Jonson K.L., Krauer K., Ralph S.J., and Linnane A.W. Mitochondrial respiratory chain inhibitors induce apoptosis. //FEBS Lett. - 1994. -V.339.-P. 40-44.

225. Yao R, Cooper GMRequirement for phosphatidylinositol-3 kinase in the prevention of apoptosis by nerve growth factor. // Science. -1995.-№267(5206).-P.2003-6.

226. Zaidan E., and Sims N.R. The calcium content of mitochondria from brain subregions following shot-term forebrain ischemia and recirculation. // J.Neurochem.- 1994.-V. 63.-P. 1812 - 1819.

227. Zhong Y, Bellamkonda RV.Biomaterials for the central nervous system. // J R Soc Interface. -2008.-№5(26). -P.957-75.

228. Zolnik B.S.and Sadrieh, N. Regulatory perspective on the importance of ADME assessment of nanoscale material containing drugs. // Adv. Drug Deliv. Rev. -2009. -V.61. -№6. -P.422-427