Закономерности взаимодействия тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Ибрагимов, Александр Рафаилович

• Ибрагимов, Александр Рафаилович
• кандидат биологических наук
• 1985

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ибрагимов, Александр Рафаилович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. СТРУКТУРА И ЗАКОНОМЕРНОСТИ

ЭКСПРЕССИИ ИММУНОГЛОЕУЛИНОВЫХ ГЕНОВ

1.1. Строение молекулы иммуноглобулина

1.2. Источники разнообразия иммуноглобулинов

1.2.1. Генетические элементы, контролирующие образование иммуноглобулинов

1.2.1.1. V -сегменты.

Г. 2.1.2. -сегменты.

1.2.1.3. о-сегменты.

1.2.1.4. С-гены

1.2.2. Разнообразие, возникающее в результате объединения генетических элементов в единый V рен 1д.

1.2.2.1. Правило 12/

1.2.2.2. Сочетания генных сегментов

1.2.2.3. Вариации последовательности на участке объединения генных сегментов

1.2.2.4. Неканонические варианты рекомбинации генных сегментов

1.2.2.5. Соматические мутации V-генов . . 39 1.2.3. Комбинаторика Н- и ь-цепей как возможный источник разнообразия иммуноглобулинов . 44 1.2.3.1. Избирательность объединения Н- и ь -цепей

1.2.3.2. Избирательность формирования антигенной структуры иммуноглобулинов

1.2.3.3. Избирательность формирования АСЦ

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Животные.

2.2. Иммунизация животных.

2.3. Получение иммуносорбентов

2.4. Получение антител к у- и С-районам иммуноглобулинов мыши.

2.5. Иодирование белков.

2.6. Радиоиммунологические методы

2.7. Выделение иммуноглобулинов

2.8. Полипептидные цепи иммуноглобулинов

2.9. Получение рекомбинантных иммуноглобулинов в растворе.

2.10. Фракционирование нормальных ь-цепей 1д мыши

2.11. Условия культивирования клеток.

2.12. Слияние лимфоидных клеток

2.13. Отбор и клонирование антитело-продуцирующих клеточных популяций

ГЛАВА Ш. АССОЦИАЦИЙ ь -ЦЕПЕЙ ИЖЮГЛОШШНОВ В РАСТВОРЕ С ИММ0ЕИЛИ30ВАБПЫМИ Н-ЦЕПЯМИ.

3.1. Прямая сорбция ь -цепей иммуноглобулинов на сорбенте с фиксированной Н-цепыо.

3.2. Конкурентное взаимодействие ь-цепей с фиксированной Н-цепью.

3.3. Выводы.

ГЛАВА 17. ВОССТАНОВЛЕНИЕ АНТИГЕННОЙ СТРУКТУРЫ • v-ДОМЕНОВ МИЕЛОМНОГО БЕЖА МОРС-21 РЖОМЕИ-НАНТНЫШ Ж13УНОГЛОБУЛИНАМИ.

4.1. Антигенная структура V-доменов 1д

4.2. Нативность рекомбинантных иммуноглобулинов

4.3. Антигенная структура V-доменов рекомбинантных иммуноглобулинов

4.4. Выводы.

ГЛАВА У. ВОССТАНОВЛЕНИЕ ЩЩОТИПИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЫ И

АНТИТЕЛЬЮЙ АКТИВНОСТИ ГИБРИДОМНОГО ЕЕЛКА 1д В2°5 РЖОМШНАНТНЫМИ ИШУНОГЛОЕУЛИНАШ

5.1. Антигенная структура нативного и рекомбинантного 1д-В2.

5.2. Антигенная структура v -доменов рекомбинантных 1д.

5.3. Антиген-связывашцая активность рекомбинантных

5.4. Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Закономерности взаимодействия тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов»

Выяснение источников разнообразия иммуноглобулинов ( 1д ) является одной из центральных проблем иммунологии. Многочисленные исследования организации и функционирования генетического материала, кодирующего тяжелые (Н) и легкие ( ь) цепи 1д высших животных позволяют назвать ряд важнейших источников этого разнообразия, достигающего величины 7 8

10—10 различных молекул 1д для индивидуального организма. Такими хорошо изученными, но не охарактеризованными количественно (то есть по относительному вкладу в наблюдаемое разнообразие 1д ) являются следующие факторы: множественность наследуемых генетических сегментов, ненаследуемые варианты, возникающие при объединении этих сегментов в генные блоки, соматические мутации в указанных генных блоках. В то же время мало неисследованным остается потенциально наиболее мощ- V ный источник разнообразия 1д- свободная комбинаторика Ни г,-цепей. Хорошо известно, что антиген-связывающий центр (АСЦ) молекулы 1д создается, в результате взаимодействия Ни ь -цепей. Если бы все сочетания Н- и ь-цепей давали функциональные АСЦ, то разнообразие 1д определялось бы как произведение вида Н х ь , где И и ь-разнообразие одноименных полипептидов данного организма.

Если в действительности не все сочетания Н- и ь-цепей реализуются в виде функционально активных молекул 1д , то такая избирательность может быть связана со следующими обстоятельствами: I) не все полипептиды способны объединяться в молекулу т9 ; 2) не все полипептиды формируют при объеди

С' 4 нении пространственную структуру, характерную для ig ; 3) не во всех сочетаниях полипептидов при объединении образуется функциональный АСЦ ig . Работы, непосредственно посвященные исследованию первого из перечисленных критериев избирательности, практически отсутствуют. Исследования вто-^ poro и третьего критериев дают противоречивые результаты, так как в совокупности изучено всего несколько десятков сочетаний полипептидов, а эта выборка явно недостаточна для о оценки одного из основных источников генерации 10 молекул

Ig .

В данной работе применен принципиально иной подход: вместо увеличения выборки за счет привлечения большого числа индивидуальных ig мы получали рекомбинантные ig с использованием пула Н- и l -цепей нормальных ig сыворотки, представляющих все разнообразие соответствующих полипептидов организма.

Для выявления избирательности объединения Н- и ь-цепей ig (первый критерий) мы исследовали взаимодействие индивидуальной Н-цепи миеломного ig мыши с пулом нормальных L-цепей ig сыворотки. Результаты этого исследования изложены в Ш главе настоящей работы. Анализ избирательности ассоциации полипептидов ig включает решение двух задач: I) выбор условий и снятие характеристик реакции объединения Н- и цепей; 2) количественная оценка доли нормальных ь-цепей, способных взаимодействовать с индивидуальной Н-цепыо.

Второй критерий избирательности был использован при исv t> о следовании формирования уникальнои пространственной структуры рекомбинантными 1д , содержащими миеломную цепь и пул нормальных цепей 1д. Результаты этого исследования изложены в 1У главе данной работы и включают решение трех экспериментальных задач: I) получение и характеристика антител к уникальным антигенным детерминантам V-домена миеломного 1д ; 2) получение гетерологичных рекомбинантных молекул состава 3) определение доли нормальных полипептидов, способных сформировать тестируемую структуру V -доменов.

I глава данной работы посвящена исследованию рекомбинантных 1д, содержащих Н- и ь -цепи моноклонального антитела к фибронектину человека. Использование полученного нами гиб-ридомного 1д известной специфичности позволило в этой части работы применить сразу 2 критерия оценки рекомбинантных 1д -пространственную структуру V -доменов и активность АСЦ.

Полученные результаты свидетельствуют об избирательности взаимодействия полипептидных цепей по всем трем использованным критериям и позволяют отвергнуть предположение о свободной комбинаторике Н- и ь-цепей 1д .

Гибридома, использованная нами как объект для изучения моноклонального 1д с определенной структурой и активностью, имеет также практическую ценность как источник моноклональ-ных антител заданной специфичности. Получение гибридом к фибронектину человека является осдовой для разработки методов количественной оценки содержания в плазме крови и тканях этого бежа, играющего ключевую роль в заживлении ран, опухолевом росте, эмбриогенезе и, возможно, при ожоговой болезни и атеросклерозе.

Научная новизна данной работы заключается в количественной характеристике одного из источников разнообразия 1д . Практическая же ценность работы состоит в освоении перспективного метода биотехнологии - гибридомной техники, и получении с помощью этого метода моноклональных антител к фибронектину человека.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Ибрагимов, Александр Рафаилович

ВЫВОДЫ

1. Исследована избирательность взаимодействия тяжелых (Н) и легких (ь ) полипептидных цепей иммуноглобулинов 1д по трем параметрам: способности к объединению Н- и -цепей при физиологических значениях рН и ионной силы, формированию идиотипических детерминант вариабельных доменов и формированию антиген-связывающего центра (АСЦ) рекомбинантными молекулами •

2. Избирательная способность к ассоциации Н- и ь -цепей при физиологических значениях рН исследовалась в реакции ь -цепей в растворе с миеломной Н-цепью, фиксированной на диа-зоцеллюлозе. Установлено, что специфичность взаимодействия определяется вариабельными доменами полипептидных цепей. Показано, что максимальная доля способных к ассоциации с данной Н-цепью нормальных ь -цепей, представляющих все разнообразие ь -цепей 1д мыши, составляет 35$ по данным прямой сорбции. По данным конкурентной сорбции эта доля еще ниже и составляет 29$. В пределах этой популяции ь -цепей также выявлена неоднородность по сродству к индивидуальной Н-цепи. Следует особо отметить, что среди нормальных ь -цепей отсутствует фракция, сравнимая по сродству к Н-цепи с аутологичной индивидуальной ь -цепью.

3. Получены антитела, специфичные к идиотипическим детерминантам - маркерам вариабельных доменов миеломного бежа мыши 1дв М0РС-21 (1д-21). Установлено, что идиотип экспресси-руется молекулой бежа только при сохранении четвертичной структуры. Исследовано фюрмирование идиотипа 1д-21у рекомбинантных молекул 1д , полученных в результате гетерологичной реассоциации в растворе индивидуальной Н-21 цепи с пулом нормальных ь -цепей, а также при реассоциации ь-21 цепи с пулом нормальных Н-цепей. Установлена асимметричность вклада Н- и ь-цепей в формирование идиотипа 1д-21 . Идиотип формируется уникальной Н-цепью, не выявляемой среди нормальных Н-цепей, тогда как среди нормальных ь-цепей 6% способны к формированию тестируемого идиотипа с индивидуальной Н-21 цепью.

4. На модели моноклональных антител мыши к фибронектину человека, обозначенных 1д-21 , исследовано не только формирование идиотипа, но и воссоздание рекомбинантными молекулами АСЦ. Как и в случае 1д-21, установлена асимметричность вклада Н- и ь-цепей в формирование как идиотипа, так и АСЦ 1д-в2. Идиотипическая структура и структура АСЦ 1д-в2 определяются уникальной ь-цепью; среди нормальных Н-цепей выявлено молекул, способных в комплексе с гибридомной ь-в2 построить АСЦ, характерный для исходной молекулы.

5. Избирательность взаимодействия полипептидных цепей т.е. предпочтительность одних сочетании полипептидов перед другими, выявлена как по способности к ассоциации, так и по формированию идиотипической структуры и АСЦ. На всех трех уровнях исследования оценена доля компетентных полипептидов среди нормальных Н- и ь -цепей. Соотношение доли таких полипептидов и доли интактных 1(э данного семейства среди нормальных 1д свидетельствует, что сочетания полипептидных цепей подвергаются отбору. Совокупность полученных данных позволяет утверждать, что избирательность взаимодействия Н- и ь-цепей и отбор возникающих сочетаний накладывает ограничения на комбинаторику полипептидных цепей как источник разнообразия 1д.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Современные представления о генерации разнообразия ig на примере мыши можно суммировать следующим образом. Сочетания vh d - и jh -сегментов способны создать 100 х 14 х 4~ -0,6 х 10^ вариантов vH -генов ( 159 ). Сдвиг рамки ( 160 ) в обеих точках рекомбинации, возможно, увеличивает разнообразие еще на порядок (0,6 х 10^ х 3 х 3 ^ 0,5 х 10^). Встраивание не-кодируемых нуклеотидов дезоксинуклеотидилтрансферазой в обоих местах объединения ( 161,162 ), рекомбинационные процессы в уже перестроенных генных сегментах и соматические мутации могут довести разнообразие соматических вариантов vR -последова тельностей до величины ~10 . Аналогичные процессы способны р превратить 200 х 4 = 8 х 10 "исходных" вариантов vx -генов в —10^. Так, в огромной постоянно обменивающейся популяции у лимфоидных клеток организма возникают —10 различных Н-цепей и —10^ различных l -цепей. Видимо, исходно в В-клетках создаются случайные сочетания полипептидов, так как никаких данных о координированной активации v - и v -генов нет, тогда как

H L в ряде случаев показаны перестройки различных, в том числе неродственных vx -генов в клоне цре-В-клеток с единственной Н-цепью ( III ). Случайные первичные сочетания полипептидов в дальнейшем могут подвергаться отбору по многим параметрам. Это способность к ассоциации, нормальная секреция, полноценная идиотипическая структура (необходимая для регуляции с помощью Т-клеток и анти-идиотипических ауто-АТ) и функциональный АСЦ.

Экспериментальные данные указывают на то, что разнообразие ig не образует непрерывный спектр, но распадается на множество дискретных семейств, выделяемых экспериментаторами по сходству идиотипов и/или АСЦ ( 61-63,65,66,68-70,72-74,76,79, 89,90,131-137,162-167 ). Уникальные структурные свойства V -районов 1д каждого семейства определяются, как правило, единственной Н-цепью или группой сходных Н-цепей, тогда как набор ь-цепей одного семейства хд может быть цредставлен 2, 3 или большим количеством неродственных групп ( 68,90,131,134,164 ). В редких случаях ситуация обратная, т.е. оцределяющей для некоторых семейств хд является ь -цепь ( 166 ).

Большая часть Н-цепей, видимо, унипотентна, а ь -цепи полипотентны, т.е. одна ь -цепь может принимать участие в формировании АТ, относящихся к совершенно различным семействам, как это показано для А-цепи ( 58,63,70,136,165 ) и X-цепей ( 68,73,166 ). Таким образом, пул 1д состоит из множества семейств, структура каждого из которых задается и отличается от другого уникальной Н-цепью; разнообразие внутри семейства может создаваться за счет сочетания данной Н-цепи с некоторым разнообразием ь-цепей. Исходя из этого, полное разнообразие 1д можно представить в виде произведения: разнообразие семейств хд х среднее разнообразие хд внутри семейства = разнообразие Н-цепей х среднее разнообразие ь -цепей одного семейства. Очевидно, что полученное выражение для подсчета разнообразия 1д отличается от общецринятого (разнообразие Н-цепей х разнообразие ь -цепей) только тем, что в перемножении участвует не весь набор ь -цепей, а какая-то его часть. Эту долю можно установить экспериментально для каждого семейства 1д: достаточно исследовать избирательность взаимодействия Н-цепи данного семейства с разнообразными ь-цепями. При этом возникают 2 проблемы: размер выборки ь-цепей и критерии для оценки избирательности. Очевидно, что количественная оценка избирательности (т.е. определение доли подходящих l-цепей среди всех исследованных) будет тем корректнее, чем больше выборка. Исходя из этого, мы исследовали не индивидуальные сочетания моноклональных Н- и l -цепей, но сочетание Н-цепи с пулом l -цепей нормальных ig сыворотки: этот препарат содержит все разнообразие ь-цепей.

В качестве критериев избирательности мы использовали все 3, доступные для исследования in vitro : способность к ассоциации, формирование идиотипа и АСЦ. Исследование всех трех факторов, способных ограничивать реальное разнообразие ig, было предпринято потому, что нельзя было предсказать, какой из факторов окажется важнее для данного семейства ig. Для разных семейств ig показано, что объединение полипептидов может происходить, но АСЦ не формируется ( 95,126 ). Кроме того, в одних случаях АСЦ , определенной специфичности охватывает более широкую популяцию ig , чем связанный с этим АСЦ идиотии ( 73,61,62 ), в других случаях тестируемый идиотип могут нести не только ig с данным АСЦ ( 59,163 ), иногда оба множества совпадают ( 79,167 ).

В нашей работе были реализованы все 3 подхода в исследовании избирательности взаимодействия полипептидных цепей ig. Для выявления избирательности их объединения мы изучали взаимодействие моноклональной Н-цепи с пулом нормальных l-цепей. Результаты этих экспериментов изложены в Ш главе. В соответствии с исходным предположением о неодинаковой способности различных l-цепей формировать комплекс с Н-цепью, в прямой сорбции было выявлено 3-кратное цреобладание ь-21 над ь в реакции с Н-21 как по скорости реакции, так и по количеству образующихся комплексов н-ь . В условиях конкуренции ь -ЕМ с ь-21 активность ь -ЕМ в реакции с Н-21 составляла 29% от активности ь-21. Этот результат может быть истолкован следующим образом. Либо среди ь-ЕМ присутствует Фракция полипептидов, по сродству к Н-21 напоминающих ь-21 (т.е. имеющая 100% активности), и эта фракция составляет 29% ь -ЕМ. Либо 100% ь-БМ гомогенны по сродству к Н-21, т.е. все имеют 29% активности, и среди ь-ЕМ вообще нет полипептидов, сравнимых с ь-21. Возможен промежуточный вариант, когда фракция или фракции. ь-БМ, составляющие менее 100%, имеют активность более 29%. Этот вариант не отличается принципиально от предыдущего, так как тоже означает, что среди ь -ЕМ нет полипептидов с активностью ь-21 . Фракционирование ь -ЕМ на КМ-целлюлозе действительно выявило гетерогенность пула ь -цепей (от 16% до 60% активности в разных фракциях). Хотя нам не удалось выявить фракцию, полностью соответствующую ь-21 по активности связывания с Н-21, можно утверждать, что доля таких полипептидов среди ь-БМ не должна превышать 29%.

Второй критерий - избирательность формирования уникальной идиотипической структуры - был использован ггри исследовании рекомбинантных 1д , содержащих моноклональную Н- или ь -цепь и пул ь- или Н-БМ. Моноклональные цепи были получены от миеломного 1д-21 и гибридомного Хд-в2 . Аналогичные исследования, описанные в литературе, либо вообще не дали положительных результатов ( 123 ), либо показали, что комплекс аутоло-гичных ь-цепей с Н-цепями нормальных 1д неактивен, тогда как рецицрокный комплекс частично восстанавливает идиотпи ( 124 ). В последнем случае количественная оценка восстановления идиотина отсутствует и идиотипическая структура рекомбинантных молекул несовершенна, так как они не могут конкурировать с аутентичным комплексом за взаимодействие с анти-идиотипичес-кими АТ ( 124 ). Характерно, что в обоих случаях ( 123,124 ) Н- и ь -цепи нормальных хд использовались не для выявления среди них компетентных полипептидов, а в качестве "инертных" партнеров для рекомбинации с аутентичными полипептидами. Единственной работой, содержащей количественную оценку эксцрессии идиотипа рекомбинантными 1д (по количеству препарата, необходимому для 50% ингибирования реакции с анти-идиотипическими АТ), является исследование рекомбинантных хд с полипептидными цепями гибридом к азофениларсонату ( 122 ). В этом случае показано, что комплекс гибридомной ь -цепи с нормальными Н-цепями совершенно неактивен, тогда как реципрокный комплекс имеет >—6,7$ активности, если за 100$ принять активность ауто-логичного комплекса. Тем не менее, вывода о доле нормальных ь -цепей, компетентных в создании тестируемого идиотипа, делать нельзя, так как не учтен фон "неспецифического" восстановления идиотипа (в наших опытах он составлял до 1/3 от наблюдаемой идиотипической активности гетерологичного комплекса). Кроме того, никак не показано, что выявленная активность связана с определенной популяцией полипептидов. В наших экспериментах фоновое восстановление идиотипа хд-21 , не зависящее от природы полипептида, определялось с использованием монокло-нальных Н- и ь-цепей, совершенно отличных от Н- и ь-21 . В результате было показано, что, как и в обсуждавшихся выше работах ( 122,124 ), комплекс ь-21 с нормальными Н-цепями неактивен. Специфическая активность реципрокного комплекса составляет 6$ от активности 1д-21 . Зтот результат согласуется с изложенной концепцией асимметричной роли Н- и ь-цепей: индивидуальные особенности структуры хд данного семейства задаются уникальной Н-цепью и довольно большой популяцией компетентных ь -цепей. В нашей работе показано, что идиотипическая активность комплекса Н-21 с ь -ВМ действительно связана с существованием определенной популяции компетентных ь-цепей. Полученные данные позволяют сделать вывод, что вероятность образования полноценного идиотипа данного семейства при случайном переборе сочетаний данной Н-цепи с ь -цепями составляет 0,06.

Аналогичное исследование идиотипической структуры реком-бинантных 1д , содержащих полипептидные цепи гибридомного АТ 1д-в2 , показало, что для данного семейства хд полипептидом, определяющим идиотип и АСЦ, является ь -цепь. Доминирующая роль ь-цепи выявлена и для других 1д ( 116, 136 ). Судя по идиотипической активности комплекса ь-в2 с Н-БМ, составляющей всего 0,8$ от активности 1д-в2 , вероятность возникновения идиотипа 1д-в2 в комплексах с ь-вг и различными Н-цепями - 0,008. Как обсуждалось в начале данного раздела, семейства 1д , выявляемые по общности идиотипа и АСД, могут не совпадать. В таком случае коэффициент избирательности формирования идиотипа и АСЦ (т.е. вероятность их появления в случайных сочетаниях полипептидов) также могут различаться. Действительно, если идиотип 1д-в2 в комплексе с ь-в2 формировали 0,8$

Н-БМ, то АСЦ 1д-в2 в комплексе с ь-в2 образуют 4$ Н-БМ: только 20$ антиген-связывающих рекомбинантных 1д несут тестируемый идиотип. Очевидно, что для учета всех функциональных молекул 1д , содержащих ь-в2 , оценка должна быть основана на данных по экспрессии АСЦ, а не идиотипа, и коэффициент избирательности для данного семейства приобретает величину 0,04.

Близкие значения коэффициентов избирательности, полученные для неродственных семейств 1д с привлечением различных критериев, а также использование пула Н- и ь -цепей 1д сыворотки позволяют считать, что усредненный коэффициент избирательности для всего набора *д имеет сходную величину. Исходя из этой величины, можно объяснить, почему —10^ вариантов ь -цепей и —10^-10^ вариантов Н-цепей дают не 10^-10"^, как

7 8 можно ожидать цри свободной комбинаторике, а 10-10 различных 1д .

Таким образом, анализ антигенной структуры и антительной активности рекомбинантных молекул 1д позволил выявить и количественно оценить ограничения, накладываемые на комбинаторику Н- и ь -цепей, как возможный источник разнообразия 1д.

Гибридомные АТ к фибронектину человека, использованные нами как модель, имеют практическую ценность для разработки методов количественного определения этого белка в крови и тканях при различных патологиях.

В заключение следует отметить, что результаты и методические приемы, разработанные при выполнении данной работы или сходные с ними, могут быть использованы в дальнейших исследованиях структуры и разнообразия иммуноглобулинов ( 140, 160,165 ).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ибрагимов, Александр Рафаилович, 1985 год

1. Бровдз Б.Д., Рохлин О.В. Молекулярные и клеточные основы иммунологического распознавания. М., Наука, 1978, 334 с.

2. P. D'Eustachio, A. Bathwell, Т. Takaro, D. Baltimore,

3. F. Ruddle (19 81) Chromosomal location of structural genes encoding murine immunoglobulin Я light chains. J. Exp. Med., 153, 4, 793-800.

4. D. Swan, P. D'Eustachio, L. Leinwand, J. Seidman, D. Keithley, F. Ruddle (1979) Chromosomal assignment of the mouse X light chain genes. PNAS, 76, 6, 2735-2739.

5. Ф. Бернет. Целостность организма и иммунитет. М., Мир, 1964, 184 с.

6. Y. Nishioka, P. Leder (1980) Organization and complete sequence of identical embrionic and plasmacytoma X V-region genes. J. Biol. Chem., 255, 3691-3694.

7. J. Seidman, E. Max, P. Leder (1979) A X-iircmmoglobulin gene is formed by site-specific recombination without further somatic mutation. Nature, 280, 370-375.

8. O. Bernard, N. Hozumi, S. Tonegawa (1978) Sequences of mouse immunoglobulin light chain genes bofore and after somatic changes. Cell, 15, 1133-1144.

9. S. Tonegawa, A. Maxam, R. Tizard, O. Bernard, W. Gilbert (1978) Sequence of a mouse rerm-line gene for a variable region of an immunoglobulin light chain. PNAS, 15, 1485-1489.

10. P. Earley, H. Huang, M. Davis, K. Calame, L. Hood (1980) An immunoglobulin heavy chain variable region gene is generated from three separate segments of DNA: VH, D and J„. Cell, 19, 981-992.

11. Sakano, A. Maki, Y. Kurosawa, W. Roeder, S. Tonegawa (1980) The two types of somatic recombination necessary for generation of complete immunoglobulin heavy chain genes. Nature, 286, 676-678.

12. M. Potter (1977) Antigen binding myeloma proteins in mice. In: Adv. Immunol., N.Y., Acad. Press, 2J5, 141-212.

13. E. Seising, U. Storb (1981) Somatic mutation of immunoglobulin light-chain variable-region genes. Cell, 25, 14, 47-58.

14. Rabbitts T. (1977) A molecular hybridization approach for the determination of the immunoglobulin V-gene pool size. Immunol. Rev., 36, 29-50.

15. Sakano H., Httppl K., Heinrich G., Tonegawa S. (1979) Sequences at the somatic recombination sites of immunoglobulin light chain genes. Nature, 280, 288-294.

16. Seidman J., Leder A., Edgell M., Polsky F., Tilghman S., Tiemlier D., Leder P. (1978) Multiple related immunoglobulin variable-region genes identified by cloning and sequence analysis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75, 8, 3881-3885.

17. O.Valbuena, R. Marcu, M. Weigert, R. Perry (1978) Multiplicity of germ-line genes specifying a group of related mouse )C chains with implications for the generation of immunoglobulin diversity. Nature, 276, 780-784.

18. G. Heinrich, A. Traunecker, S. Tonegawa (1984) Somatic mutation creates diversity in the major group of mouse immunoglobulin )< light chains. J. Exp. Med., 159, 2, 417-435.

19. S. Cory, B. Tyler, J. Adams (1981) Sets of immunoglobulin V genes homologous to ten cloned Vj^ sequences: implications for the number of germline V^ genes.

20. J. Mol. appl. genet., 1, 103-116.

21. Rokhlin O.V., Petrosyan M.N., Ibraghimov A.R., Vengerova T.I., Bogachova G.T. (1983) Antigenic markers of V domain of mouse MOPC-21 IgGl L chain. The conformational basis of V domain markers and content ofli

22. MOPC-21 VL~like immunoglobulins in sera of inbred mouse strains. Eur. J. Immunol., 13, 397-403.

23. Т.Н. Rabbitts, G. Matthyssens, P.H. Hamlyn (1980) Contribution of immunoglobulin heavy-chain variableregion genes to antibody diversity. Nature, 284, 238-243.

24. D. Kemp, B. Tyler, 0. Bernard, N. Gough, S. Gerondakis, J. Adams, S. Cory (1981) Organization of genes and spacers within the mouse immunoglobulin VH locus.

25. J. Mol. Appl. genet., 1, 245-261.

26. H.-G. Klobeck, A. Solomon, H.G. Zachau (1984) Contribution of human V^II germ-line genes to light-chain diversity. Nature, 309, 5963, 73-76.

27. D.L. Bentley (1984) Most X immunoglobulin mRNA in human lymphocytes is homologous to a small family of germ-line V genes. Nature, 307, 77-80.

28. D. Govol, R. Zakut, K. Effrom, G. Rehavi, D. Ram,

29. Y.B. Cohen (1981) Diversity of germ-line immunoglobulin Vfi genes. Nature, 292, 5822, 426-430.

30. Ben-Neriah Y., Cohen J., Rechasi G., Zakut R., Givol D. (1981) Polymorphism of germ-line immunoglobulin V^ genes correlates with allotype and idiotype markers. Eur. J. Immunol., U., 1017-1022.

31. D.J. Kemp, S. Cori, J.M. Adams (1979) Cloned pairs of variable region genes for immunoglobulin heavy chains isolated from a clone library of the entire mouse genome. PNAS, 76, 9, 4627-4631.

32. G.Rechavi, D. Ram, L. Glazer, R. Zakut, D. Givol (1983) Evolutionary aspects of immunoglobulin heavy chain variable region gene subgroups. PNAS, 80, 855-859.

33. Max E., Maizel Jr.J., Leder P. (1981) The nucleotide sequence of a 5,5-kilobase DNA segment containing the mouse k immunoglobulin J and C region genes. J. Biol. Chem., 256, 10, 5116-5120.

34. Perry R.P., Colecbough C., and Weigert M. (1981) Reorganization and expression of immunoglobulin genes: status of allelic elements. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 45, 2, 925-933, N.-Y., 1981.

35. Max E., Siedman J., Leder P. (1979) Sequences of 5 potential recombination sites encoded close to an immunoglobulin x constant region gene. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76, 3450-3454.

36. Blomberg B., Tonegawa S. (1982) DNA sequences of the joining regions of mouse A light chain immunoglobulin genes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 530-533.

37. Brack C., Hirana M., Lenhard-Schuller R., Tonegawa S. (1978) A complete immunoglobulin gene is created by somatic recombination. Cell, 15, 1-14.

38. Choi E., Kuchl M., and Wall R. (1980) RNA splicing generates a variant light chain from an aberrantly rearranged x gene. Nature, 286, 5775, 776-779.

39. Hieter P., Maizel Jr.J., Leder P. (1982) Evolution of human immunoglobulin x J region genes. J. Biol. Chem., 257, 3, 1516-1522.

40. Sheppard H., Gutman G. (1982) Rat kappa-chain J-segment genes: two recent gene duplications separate rat and mouse. Cell, 29, 121-127.

41. Hieter P., Max E., Seidman J., Maizel J., Leder P. (1980) Cloned human and mouse kappa immunoglobulin constant and J region, genes conserve homology in functional segment. Cell, 22, 197-207.

42. Sakano H., Maki A., Kurosawa Y., Roeder W., and Tonegawa S. (1980) The two types of somatic recombination necessary for generation of complete immunoglobulin heavy chain genes. Nature, 286, 676-678.

43. J.V. Ravetch, U. Siebenlist, S. Korsmeyer, T. Waldmann, P. Leder (1981) Structure of the human immunoglobulinja locus: characterization of embrionic and rearranged J and D genes. Cell, 27, 583-591.

44. Kurosawa Y., V. Boehmer H., Haas W., Sakano H., Traunker A., Tonegawa S. (1981) Identification of D segments of immunoglobulin heavy-chain genes and their rearrangement in T lymphocytes. Nature, 290, 565-570.

45. Sakano H., Rurosawa Y., Weigert M., Tonegawa S. (1981) Identification and nucleotide sequence of a diversity DNA segment (D) of immunoglobulin heavy-chain genes. Nature, 290, 5807, 562-565.

46. C. wood, S. Tonegawa (1983) Diversity and joining segments of mouse immunoglobulin heavy chain genes are closely linked and in the same orientation: implications for the joining mechanism. PNAS, 80, 3030-3034.

47. Gough N.M., Cory S., and Adams J.M. (1979) Identical 3'non-coding sequences in five mouse IgX chain mRNAs favour a unique C^ gene. Nature, 281, 394-396.

48. McBride O.W., Hie£er P.A., Hollis G.F., Suan D.,

49. Otey M.C., and Leder P. (1982) Chromosomal location of human kappa and lambda immunoglobulin light chain constant region genes. J. Exp. Med., 155, 5, 1480-1490.

50. Blomberg B., Traunecker A., Eisan H., and Tonegawa S. (19 81) Organization of four mouse A light chain immunoglobulin genes. Proc. Natl. Acad. Sci USA, 6, 3765-3769.

51. Erikson J., Martinis J., and Crose C.M. (1981) Assignment of the genes for human A. immunoglobulin chains to chromosome 22. Nature, 294, 173-175.

52. Hieter P.A., and Leder P. (1981) The clustered arrangement of immunoglobulin lambda constant region genesin man. Nature, 294, 536-540.

53. Alt F.W., Rosenberg N., Casanova R.J., Thomas E., and Baltimore D. (1982) Immunoglobulin heavy-chain expression and class switching in a murine leukaemia cell line. Nature, 296, 325-331.

54. Kataoka T., Miyata T., and Honjo T. (1981) Repetitive sequences in class-switch recombination regions of immunoglobulin heavy chain genes. Cell, 23, 357-365.

55. Raabruch A., Liesegang B., and Rajewsky K. (1980) Isolation of variants of mouse myeloma X6 3 that express changed immunoglobulin class. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 2909-2913.

56. Liu C.-P., Tucker P.W., Mushinski F.J., and Blattner F.R. Mapping of heavy chain genes for mouse immunoglobulins

57. M and D. Science, 209, 1348-1353, 1980.

58. P.A. Singer, H.H. Singer, A.R. Williamson (1980) Different species of messenger RNA encode receptor and secretory IgM u chains differing at their carboxy termini. Nature, 285, 5763, 294-300.

59. B.M. Tyler, A.F. Cowman, S.D. Gerondakis, Adams J.M., 0. Bernard (19 82) mRNA for surface immunoglobulin if chains encodes a highly conserved transmembrane sequence and a 28-residuce intracellular domain. PNAS, 79,2008-2012.

60. Honjo T., Kataoka T., Yaoita Y., Shimizu A., Takahashi N., Yamawaki-Kataoka Y., Nikaido T., Nikai S., Obata M., Kawakami T., and Nishida Y. (1981) Organization and reorganization of immunoglobulin heavy-chain genes.

61. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Bio. £5, 2, N.Y., 1981, 913-923.

62. Shimizu A., Takahashi N., Yamawaki-Kataoka Y., Nishida Y., Kataoka T., and Honjo T. (1981) Ordering of mouse immunoglobulin heavy chain genes by molecular cloning. Nature, 289, 149-153.

63. P. Gottlieb (1980) Immunoglobulin genes. Mol. Immunol., 17, 1423-1435.

64. B.W. Elliot Jr., H.N. Eisen, L.A. Steiner (1982) »Unusual association of Vf J and C regions in a mouse immunoglobulin X chain. Nature, 294, 559-561.

65. C.A. Bona, B. Goldberg, L.J. Rubinstein (1984) Regulatory iaiotopes, parallel sets and internal image of the antigen within the polyfructosan-A48 idiotypic network. Ann. Immunol. (Inst. Pasteur), 135C, 107-115.

66. M. Siekevitz, S.Y. Huang, M.L. Gefter (1983) The genetic basis of antibody production: a single heavy chain variable region gene encodes all molecules bearing the dominant anti-arsonate idiotype in the strain A mice. Eur. J. Immunol., 13, 2, 123-132.

67. R.M. Perlmutter, J.L. Klotz, M.W. Bond, M. Nahm, J.M. Davil, L. Hood (1984) Multiple V„ gene segments encode murine antistreptococcal antibodies. J. Exp. Med., 159, 179-192.

68. J. Rocca-Serra, C. Tonnelle, M. Fougereau (1983) Two monoclonal antibodies against different antigens using the same VH germ-line gene. Nature, 304, 5924,353-355.

69. C. Schitt, M. Milili, M. Fougereau (1983) Immunoglobulin diversity: analysis of the germ-line V^ gene repertoire of the murine anti-GAT response. NAR, 11, 12, 4007-4017.

70. B.A. Pollok, J.F. Kearney (1984) Identification and characterization of an apparent germline set of auto-anti-idiotypic regulatory B lymphocytes. J. Immunol., 132, 1, 114-121.

71. A.L.M. Bothwell, M. Paskind, M. Reth, T. Imanishi-Kari, K. Rajewsky, D. Baltimore (1981) Heavy chain variable region contribution to the NP family of antibodies: somatic mutation evident in a j|\2a variable region. Cell, 24, 3, 625-637.

72. S. Clarke, J. Claflin, M. Potker, S. Rudikoff (1983) Polymorphisms in anti-phosphorylcholine antibodies reflecting evolution of immunoglobulin families. J. Exp. Med., 157, 1, 98-113.

73. Crews S., J. Griffin, H. Huang, K. Calame, L. Hood (1981) A single V^ gene segment encodes the immune response to phosphorylcholine: somatic mutation is correlated with the class of the antibody. Cell, 25, 59-66.

74. M. Kaartinen, G.M. Griffiths, C. Milstein (1984) mRNA sequences define an unusually restricted IgG responseto oxazolone. Ann. Immunol. (Inst. Pasteur), 1350,143-148.

75. J. Schilling, B. Clevinger, J.M. Davie, L. Hood (1980) Amino acid sequence of homogenous antibodies to dextran and DNA rearrangements in heavy chain V-region gene segments. Nature, 283, 5742, 35-40.

76. M.V. Seiden, B. Clevinger, T. Srouji, J.M. Davie,

77. S. McMillan, R. Lerner (19 84) A synthetic peptide induces a new anti-dextran idiotype. Ann. Immunol. (Inst. Pasteur) 135C, 77-82.

78. Weigert M., Perry R., Kelley D., Hunkapiller T., Schilling J., Hood L. (1980) The joining of V and J gene segments creates antibody diversity. Nature, 283, 497-499.

79. C. Tounelle, J. Rocca-Serra, A. Moulin, D. Moinier,

80. M. Fougereau (1983) V^ gene family in (Glu60Ala30Tyr10)n (GAT)-specific antibodies that express CGAT (or pGAT) public idiotypic specificities. Protein and mRNA sequec-ing of eight monoclonal V^/ chains. J. Exp. Med., 158, 5, 1415-1427.

81. C.A. Slaughter, J.D. Capra (1983) Amino acid sequence diversity within the family of antibodies bearing the major antiarsonate cross-reactive idiotype of the A strain mouse. J. Exp. Med., 158, 1615-1634.

82. S. Rudikoff, M. Pawlita, J. Puraphrey, E. Mushinski,

83. P. Barstad, J. Hubert, M. Hunkapiller, Goetze A.,

84. J. Shilling, B. Block, B. Eaton, J. Richards, M. Weigert, L. Hood (1978) Immunoglobulins with hapten binding activity: structure-function correlations and genetic implications. Eur. J. Immunol., 8, 497-503.

85. Y. Kurosawa, S. Tonegawa (1982) Organization, structure, and assembly of immunoglobulin heavy chain diversity DNA segments. J. Exp. Med., 155, 201-218.

86. F.W. Alt, D. Baltimore (1982) Joining of immunoglobulin heavy chain gene segments: implications from a chromosome with evidence of three D-J„ fusions. PNAS, 79, 13,ri 4118-4122.

87. S. Rudikoff, M. Potter (1981) Immunoglobulin heavy chains from anti-inulin myeloma proteins: evidence for a new heavy chain joining segment. J. Immunol., 127, 1, 191-194.

88. D. Baltimore (19 81) Gene conversion: some implications for immunoglobulin genes. Cell, 24, 3, 592-594.

89. T.H. Rabbitts, D.L. Bentley, J, Flanagan (1984) Evolutionary diversification of germ-line versions of human immunoglobulin genes. Ann. Immunol., (Inst. Pasteur) 135C, 1, 175-180.

90. T.T. Wu, E.A. Kabat (1982) Fourteen nucleotides in the second complementarity-determining region of a human heavy-chain variable region gene are identical with a sequence in a human D minigene. PNAS, 16, 5031-5032.

91. S.H. Clarke, S. Rudikoff (1984) Evidence for gene conversion among immunoglobulin heavy chain variable region genes. J. Exp. Med., 159, 3, 773-782.

92. U. Krawinkel, G. Zoebelein, M. Brttggemann, A. Radbruch, K. Rajewsky (19 83) Recombination between antibody heavy chain variable-region genes: evidence for gene conversion. PNAS, 80, 4997-5001.

93. Davis M., Calame K., Early P.W., Livant D.L., Joho R., Weissman I.L., and Hood L. (1980) An immunoglobulin heavy-chain gene is formed by at least two recombinational events. Nature, 283, 733-739.

94. S. Kim, M. Davis, E. Sinn, P. Patten, L. Hood (1981) Antibody diversity: somatic hypermutation of rearranged VH genes. Cell, 2J, 3, 573-581.

95. Mosmann T.R., Williamson A.R. (1980) Structural mutations in a mouse immunoglobulin light chain resulting in failure to be secreted. Cell, 20, 283-297.

96. A.I.M. Bothwell, M. Paskind, M. Reth, T. Imanishi-Kari, K. Rajewsky, D. Baltimore (1982) Somatic variants of murine immunoglobulin % light chains. Nature, 198, 5872, 380-382.

97. R. Olio, C. Auffrag, J.-L. Sikorav, F. Rougeon (1981)

98. Mouse heavy chain variable regions: nucleotide sequenceof a germ-line V„ gene segment. NAR, 9, 16, 4099-4119.ri —

99. P.J. Gearhart (1984) The adaptable somatic repertoire. Ann. Immunol. (Inst. Pasteur) 135C, 1, 137-142.

100. G. Valle, J. Besley, A. Colman (1981) Synthesis and secretion of mouse immunoglobulin chains from Xenopus oocytes. Nature, 291y 338-340.

101. G. Valle, J. Besley, A.R. Williamson, T.R. Mosmann, A. Colman (1983) POst-translational fate of variant MOPC-315 X chains in Xenopus oocytes and mouse myeloma cells. Eur. J. Biochem., 132, 131-138.

102. A. Colman, J. Besley, G. Valle (1982) Interactions of mouse immunoglobulin chains within Xenopus oocytes. J. Mol. Biol., 160, 459-474.

103. R.J. Deans, K.A. Denis, A. Taylor, R. Wall (1984) Expresseion of an immunoglobulin heavy chain gene trans-fected into lymphocytes. PNAS, 81, 5, 1292-1296.

104. S.P. Cobbold, H. Waldmann (1984) Therapeutic potential of monovalent monoclonal antibodies. Nature, 308, 5958, 460-462.

105. Bernard 0., N.M. Gough, J.M. Adams (1981) Plasmacytomas with more than one immunoglobulin k mRNA: implications for allelic exclusion. PNAS, 78, 5812-5816.

106. S.-P- Kwan, E.E. Max, J.G. Seidman, P. Leder, M.D.Schartt (1981) Two kappa immunoglobulin genes are expressed in the myeloma S107. Cell, 26, 1, 57-66.

107. M.R. Wall, G.B. Beck-Eugeser, P.D. Burrous (19 84) Allelic inclusion in the pre-B-cell line 18-81. PNAS, 81, 3, 867-870.

108. B. Arp, M.D. McMullen, U. Storb (1982) Sequences of immunoglobulin chains in a Al defective mouse strain. Nature, 298, 184-186.

109. BigelowC.C., B.R. Smith, K.J. Dorrington (1979) Equilibrium and kinetic aspects of subunit association in immunoglobulin G. Biochemistry, 4602-4610.

110. M. Klein, C. Kortan, D. Kells, K.J. Dorrington (1979) Equilibrium and kinetic aspects of the interaction of isolated variable and constant domains of light chain with the Fd fragment of immunoglobulin G. Biochem., 18, 8, 1473-1481.

111. C. Home, M. Klein, I. Polidoulis, K.J. Dorrington (1982) Noncovalent association of heavy and light chains of human immunoglobulins. III. Specific interactions between V„ and VT. J. Immunol., 129, 2, 660-664.h li

112. I. Alexandru, D.I. Kells, K.J. Dorrington, M. Klein (1980) Non-covalent association of heavy and light chains of human immunoglobulin G: studies using light chain labelled with a fluorescent probe. Mol. Immunol.,1351-1363.

113. C.C. Bigelow (1974) Recombination of immunoglobulin polypeptide chains. PAABS rev., 3, 2, 343-351.

114. J. Kulics, M. Dekegel, J. Naessens, W. Van Der Loo, R. Hamers (1983) The quaternary G53 and G57 allotypes of the rabbit: generation of the determinants by interspecies molecular hybridization. Mol. Immunol., 20, 1, 101-111.

115. J. Olander, J.R. Little (1975) Preferential homologous recombination of H and L chains from mouse myeloma proteins which bind DNP ligands. Immunochemistry, 12, 5, 383-387.

116. D.M. Kranz, E.W. Voss (1981) Restricted reassociation of heavy and light chains from hapten-specific monoclonal antibodies. PNAS, 78, 9, 5807-5811.

117. C. Preval, M. Fougereau (1976) Specific interaction between V„ and V regions of human monoclonal immunori ilglobulins. J. Mol. Biol. 102, 3, 657-678.

118. S.F. Ziegler, L.J. Treiman, O.N. Witte (1984) K gene diversity among the clonal progeny of pre-B lymphocytes. PNAS, 81, 5, 1529-1533.

119. J.C. Jenseninins, A.P. Johnstone, M. Grone, I.Andersen (19 82) Constant heavy-chain (CH1) and L-chain dependance of rabbit VH allotype determinants demonstrated by polyethylene glycol precipitation radioimmunoassays. Mol. Immunol., 19, 571-577.

120. T. Nusair, R. Baumal, R. Rosenstein, T. Jjrfrgensen,

121. A. Marks (1983) Characterization of idiotopes on MOPC 315 IgA using monoclonal antiidiotypic antibodies. Mol. Immunol., 20, 5, 537-547.

122. E.C.B. Milner, J.D. Copra (1983) Structural analysis of monoclonal anti-arsonate antibodies: idiotypic specifi-ties are determined by the heavy chain. Mol. Immunol., 20, 1, 39-46.

123. R.J. Fulton, M.H. Nahm, J.M. Davie (1983) Monoclonalantibodies to streptococcal group A carbohydrate.1. GAC1.. The VKjl light chain is preferatially associated with serum IgG3. J. Immunol., 131, 1326-1331.

124. J.B. Zeldis, W.H. Königsberg, F.F. Richards, R.W. Rosenstein (1979) The location and expression of idiotypic determinants in the immunoglobulin variable region. Mol. Immunol., 16, 6, 371-378.

125. Scher A., Lord E., Cohn M. (1971) Reconstitution from subunits of the hapten binding sites and idiotypic determinants of mouse antiphosphorylcholin myeloma proteins. J. Immunol., 107, 5, 1226-1234.

126. R. Liberman, M. Vrana, W. Humphrey Jr., C.C. Chien, M. Potter (1977) Idiotypes of inulin-binding myeloma heavy chains: genetic significance. J. Exp. Med., 146, 5, 1294-1304.

127. D.M. Kranz, E.W. Voss Jr. (1983) Idiotypic analysis of monoclonal anti-fluorescyl antibodies: localization and characterization of idiotypic determinants. Mol. Immunol., 20, 12, 1303-1312.

128. L.A. Gill-Pazaris, E. Lamoyi, A.R. Brown, A. Nisonoff (1981) Properties of a minor cross-reactive idiotype associated with anti-p-azophenylarsonate antibodies of A/J mice. J. Immunol., 126, 1, 75-79.

129. Bluestone J.A., J.-J. Metzger, M.C. Knobe, K. Ozato, D.H. Sochs (1982) Antiidiotypes to monoclonal anti-H-2 antibodies. I. Contribution of isolated heavy and light chains to idiotype expression. Mol. Immunol., 19, 4, 515-524.

130. M.S. Lee, W.J. Horng, A Gilman-Sachs, S. Dray (1983) The common idiotypic specificity of anti-a2 allotype antibodies: contribution of H and L chains to idiotype expression. Mol. Immunol., 20, 5, 557-561.

131. D. Hoessli, J. Olander, J.R. Little (1974) Heterologous recombination between mouse myeloma 315 heavy chains and rabbit antibody light chains: structural and functional properties of the hybrid molecules. J. Immunol., 113, 3, 1024-1030.

132. S.S. Alkan, R. Knecht, D.G. Braun (1980) The cross-reactive idiotype of anti-4-azobenzenearsonate hybri-doma-derived antibodies in A/J mice constitutes multiple heavy chains. Hoppe-Seyler* s Z. Physiol. Chem., 361, 2, 191-195.

133. H.P. Kocher, C. Berck, J.-C. Jaton (1981) The immune response of BALB/c mice to phosphorylcholine is restricted to a limited number of and VL~isotypes. Mol. Immunol., 18, 12, 1027-1033.

134. Cook W.D., S. Rudikoff, A.M. Guisti, M.D. Scharff1982) Somatic mutation in a cultured mouse myeloma cell affects antigen binding. PNAS, 79, 4, 1240-1244.

135. S. Rudikoff, A.M. Giusti, W.D. Cook, M.D. Scharff (19 82) Single amino acid substitution altering antigen-binding specificity. PNAS, 79, 1979-1983.

136. A. Ochi, R.G. Hawley, M.J. Shulman, N. Hozumi (1983) Transfer of a cloned immunoglobulin light chain gene to mutant hybridoma cells restores specific antibody production. Nature, 302, 5906, 340-342.

137. J. Ruf, C. Tonnelle, J. Rocca-Serra, D. Moinier,

138. M. Pierres, S.-T. Ju, M.E. Dorf, J. Theze, M. Fougereau1983) Structural bases for public idiotypic specificities of monoclonal antibodies directed against poly (Glu60Ala30Tyr10) and poly (Glu60Ala40) random copolymers. PNAS, 80, 3040-3044.

139. J.H. Slack, M. Shapiro, M. Potter (1979) Serum expression of a VK structure, VK~ 11, associated with imulin antibodies controlled by gene(s) linked to the mouse IgGjj complex. J. Immunol., 122, 230-239.

140. C.M. Andres, A. Maddalena, S. Hudak, N.M. Young, J.L. Claflin (1981) Anti-phosphocholine hybridoma antibodies. I. Functional analysis of binding sites within three antibody families. J. Exp. Med., 154, 5, 1584-1598.

141. D.y. Loh, A.L.M. Bothwell, M.E. White-Scharf,

142. T. Imanishi-Kari, D. Baltimore (19 83) Molecular basis of a mouse strain-specific anti-hapten response. Cell, 33, 85-93.

143. M.N. Nahm, B.L. Clevinger, J.M. Davie (1982) Monoclonal antibodies to streptococcal group A carbochydrate.

144. A dominant idiotypic determinant is located on V^. J. Immunol., 129, 4, 1513-1518.

145. D.K. Ledford, F. Goni, M. Pizzolato, E.C. Franklin, A. Solomon, B. Frangione (1983) Preferential association of klllb light chains with monoclonal human IgMJc autoantibodies. J. Immunol., 13, 3, 1322-1325.

146. J.A. Bluestone, H.C. Krutzsch, H. Suchincloss Jr.,

147. P.-A. Cazenave, T.J Kindt, D.H. Sachs (1982) Antiidiotypes against anti-H-2 monoclonal antibodies: structural analysis of the molecules induced by in vivo antiidiotype treatment. PNAS, 79, 7847-7851.

148. A.K. Bhattacharjee, C.P.J. Glaudemans (1978) Dual binding specificities in MOPC 384 and 870 murine myeloma immunoglobulins. J. Immunol., 120, 2, 411-413.

149. J.W. Pierce, S. Hudak, J.L. Claflin (1984) The role ofa novel VH sequence (Vll) in the formation of anti-phos-phocfoline antibodies. Mol. Immunol., 21, 2, 159-166.

150. S.H. Bridges, J.R. Little (1971) Recovery of binding activity in reconstituted mouse myeloma proteins. Biochemistry, 10, 13, 2525-2530.

151. R. Zidovetzki, Y. Blatt, I. Pecht (1981) A heterologous immunoglobulin chain recombinant carries a distinct site for dinitrophanyl and obeys the common hapten binding mechanizm. Biochemistry, 20, 5011-5018.

152. D.G. Streetkerk, M. Vrana, C.P.J. Glaudemans (1978) Binding studies on heavy-light chain recombinant hybrid immunoglobulins A derived from murine myeloma anti-fructofuranans. J. Immunol., 120, 2, 408-410.

153. Manjula B.N., Glaudemans C.P.J., Mushinski E.B, Potter M. (1976) Subunit interactions in mouse myeloma proteins with anti-galactan activity. PNAS, 73, 3, 932-936.

154. Zidovetzki R., Blatt Y., Glaudemans C.P.J., Manjula B., Pecht I. (1980) A common mechanism of hapten binding to immunoglobulins and their heterologous chain recombinants. Biochemistry, 19, 12, 2790-2795.

155. T.E. Michaelsen, 0. F^rre, A. HjzJyby, T. Lea (1980) Streptolysin 0 neutralizing capacity and idiotypic properties of fragments, subunits and reassociated H and L chains from three human IgG monoclonal proteins. Mol. Immunol., 17, 9, 1143-1153.

156. Гурвич А.Е. Получение чистых антител и определение абсолютных количеств антител в сыворотках при помощи антигенов, фиксированных на целлюлозе. В кн.: Современные методы в биохимии. М., Медицина, 1964, с. 73-97.

157. Affinity Chromatography. Principles and Methods. Uppsala, Sweden. Rahms i Lund, 1979, p. 10.

158. Bale W.F., Helkamp R.W., Izzo M.J., Contreras M.A.,

159. Spar I.L. (1966) High specific activity labeling of 131protein with I by the iodine monochloride method. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 122, 407-414.

160. Рохлин O.B., Незлин P.С. (1969) Определение антигенов с помощью фиксированных на целлюлозе чистых антител. Воцр. мед. хим., 15, 439-441.

161. Dissanajke S., Hay F.C. (1975) Isolation of pure normal IgGl from mouse serum. Immunochemistry, 12, 101-103.

162. Svasti J., Milstein C. (1972) The disulphide bridge of a mouse immunoglobulin G1 protein. Biochem. J., 4, 837-850.

163. Williamson A.R. (1973) Isoelectric focusing of immunoglobulins. In: Handbook of Experimental Immunology. Oxford-London, Blackwell Sci. Publ., 1, 81-82.

164. Terry W.D., Hood L.E., Steinberg A.G. (1969) Genetics of immunoglobulin X~chains: chemical analysis of normal human light chains of different INV types. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 63, 71-77.

165. Рохлин 0.В., Незлин Р.С., Венгерова Т.И. (1970) Генетические варианты легких цепей иммуноглобулинов крысы. Обнаружение и количественная характеристика. Мол. биол., 4, 906-917.

166. Davidson R.L., Gerald P.S. (1976) Improved techniques for the induction of mammalian cell hybridization by polyethylene glycol. Somatic Cell Genet., 2^, 165-176.

167. Littlefield S.W. (1964) Selection of hybrids from matings of fibroblasts in vitro and their presumed recombinants. Science, 145, 709-712.

168. Nezlin R.S., Vengerova T.I., Rokhlin O.V., Machulla H.K.G. (19/4) In: Symp. Antibody Structure and Mol. Immunol., pp. 93-107, (th FEBS Meeting Publ. Hungarian Acad. Sci., Budapest, Hungary.

169. Brodeur P.H., Riblet R. (1984) The immunoglobulin heavy chain variable region (Igh-V) locus in the mouse.

170. One hundred Igh-V genes comprise seven families of > homologous genes. Eur. J. Immunol., 14, 922-930.

171. Jeske D.J., Jarvis J., Milstein C., Capra J.D. (1984) Junctional diversity is essential to antibody activity. J. Immunol., 133, 1090-1092.

172. Desiderio S.V., Yancopoulos, Paskind M., Thomas E., Boss M.A., Landau N., Alt F.W., Baltimore D. (1984) Insertion of N regions into heavy-chain genes is correlated with expression of terminal deoxytransferase in B cells. Nature, 311, 752-755.

173. Sablitzky F., Rajewsky K. (1984) Molecular basis of an isogeneic anti-idiotypic response. EMBO J., 3, 3005-3012.

174. Smith J.A., Margolies M.N. (1984). Complete amino acid sequence of the heavy-chain variable region from A/J mice antigen-nonbinding monoclonal antibody bearing the predominant arsonate idiotype. Biochemistry, 23,4726-4732.

175. I. Todd, S.P. Chang, R.M. Perlmutter, R. Aebersold, C.H. Hlusser, L. Hood, M.B. Rittenberg (1984). Immunologic memory to phosphocholine. V. Hybridomas representativeof group II antibodies utilize V^l-3 gene(s). J. Immunol., 132, 1556-1560.

176. T. Azuma, V. Igras, E.B. Reilly, H.N. Eisen (1984) Diversity at the variable-joining region boundary of X light chains has a pronounced effect on immunoglobulin ligand-binding activity. Proc. Natl. Acad. Sci. ISA, 81, 6139-6143.

177. B. Pons-Estel, F. Goni, A. Solomon, B. Frangione (1984) Sequence similarities among XHIb chains of monoclonal human IgMx autoantibodies. J. Exp. Med., 160, 893-9D4.

178. Reinity D.M., Voss Jr.E.W. (1984) Idiotypic cross-reactivity of low-affinity anti-fluorescyl monoclonal antibodies. Mol. Immunol., 21, 775-784.