Взаимодействие протеасом и альфа-РНП частиц с фибрилярным актином тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Галкин, Витольд Эдуардович

• Галкин, Витольд Эдуардович
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Галкин, Витольд Эдуардович

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Строение и свойства малых рибонуклеопротеиновых омплексов.

2.1.1. Протеасомы.

2.1.1.1. Структура и свойства протеасом.

2.1.1.2. Регуляция биологической активности протеасом.

2.1.1.3. Участие протеасом в процессах клеточной регуляции.

2.1.1.4. Взаимодействие протеасом с элементами цитоскелета в клетках млекопитающих.

2.1.2. а-Рибонуклеопротеиновый комплекс (а-РНП).

2.1.2.1. Структура и свойства а-РНП.

2.1.2.2. Участие а-РНП в процессах контроля экспресси генов.

2.2. Актин и актин связывающие белки.

2.2.1. Структура и свойства молекулы актина.

2.2.2. Структура и свойства фибриллярного актина.

2.2.3. Структура и свойства актинсвязывающих белков.

2.2.3.1. Белки взаимодействующие с в-актином.

2.2.3.2. Копирующие белки.

2.2.3.3. Белки связывающиеся вдоль нитей актина.

2.2.4. Регуляция взаимодействия актина и актинсвязывающих белков.

2.2.5. Участие актинового цитоскелета в регуляции экспрессии генов.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Культивирование клеток эпидермоидной карциномы человека А431 и эмбриональных фибробластов человека.

3.2. Антитела используемые в работе.

3.3. Иммунофлюоресцентная микроскопия.

3.4. Приготовление цитозоля клеток линии А431.

3.5. Получение цитозоля клеток печени крыс.

3.6. Выделение 268 комплекса.

3.7. Выделение 208-протеасом.

3.8. Выделение а-РНП-частиц из гепатоцитов крысы.

3.9. Аффинная хроматография на колонках с иммобилизованным Б-актином.

3.10. Взаимодействие 268-комплекса с Б-актином.

3.11. Взаимодействия 208-протеасом с Б-актином.

3.12. Взаимодействие а-РНП-частиц с Б-актином.

3.13. Электрофорез и идентификация белков протеасом и а-РНП-частиц.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ.

4.1. Изучение взаимодействия протеасом с Б-актином.

4.1.1. Распределение протеасом и актиновых структур в нормальных эмбриональных фибробластах человека.

4.1.2. Выявление взаимодействия протеасом гепатоцитов крысы и клеток эпидермоидной карциномы человека А431 с Б-актином методом аффинной хроматографии.

4.1.3. 268-комплекс непосредственно взаимодействует с Е-актином.

4.1.4. Исследование непосредственного взаимодействия 208-протеасом с Б-актином.

4.1.5. Исследование влияния эпидермального фактора роста (ЭФР) на способность протеасом клеток линии А431 взаимодействовать с Б-актином.

4.2. Взаимодействие а-РНП-частиц с Е-актином.

4.2.1. Распределение а-РНП-частиц и актиновых структур в нормальных эмбриональных фибробластах человека.

4.2.2. Сравнительный анализ белкового состава а-РНП-частицы и 268-протеасомы, выделенных из гепатоцитов крысы.

4.2.3. Непосредственное взаимодействие а-РНП-частиц с Б-актином.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Взаимодействие протеасом и альфа-РНП частиц с фибрилярным актином»

Одной из важных и активно развивающихся областей клеточной биологии является изучение молекулярных механизмов функционирования цитоскелета и его участие в регуляторных процессах. Цитоскелет играет важную роль в поддержании формы клетки и в осуществлении многих её двигательных реакций, обеспечивающих такие важные клеточные функции, как деление, эндо- и экзоцитоз, перемещение клеток в пространстве, контакт их с субстратом и с другими клетками (Bershadsky, Vasiliev, 1988). В последнее время появилось много работ свидетельствующих об участии цитоскелета в регуляции экспрессии генов и проведении сигнала с поверхности клетки на ядро (Bissel, Barcellos-Hoff, 1987). Было показано, что механические усилия, вызываемые взаимодействием лиганда с рецептором вызывают локальное перераспределение связанных с актиновыми филаментами рибосом м-РНК и изменение уровня трансляции, что вероятно необходимо для быстрой регуляции синтеза белка (Chicurel et al., 1998). Более того, предполагается, что взаимодействие м-РНК с актиновыми филаментами необходимо для стабилизации м-РНК и осуществления трансляции (Bassell, Singel, 1997). Малые ГТФ-азы активируемые при взаимодействии лиганда с рецептором могут изменять пространственную организацию актинового цитоскелета (Ridley et al., 1992; Chardin et al., 1989; Paterson et al., 1990) через актинсвязывающие белки (Lassing, Linberg, 1985; Yin, 1987), что может являться способом передачи сигнала в ядро, так как способность цитоскелета принимать различные формы пространственной организации может обеспечивать специфичность передаваемой информации (Puck et al., 1990). В некоторых клетках актиновый цитоскелет также принимает участие в транспорте определённых м-РНК из ядра в необходимые компартменты клетки (Sundell, Singer, 1991) и участвует в распределении м-РНК в кортикальной области цитоплазмы (Bassell, Singel, 1997).

В последнее время в многочисленных работах было показано, что, наряду с белок синтезирующей системой, в клетке функционирует система деградации белка в основе которой лежит убиквитин-зависимый протеолиз белков протеасомами (Ciechanover, 1994). Эта система, вероятно, необходима для уничтожения неправильно синтезированных и денатурировавших белков, так как блокирование протеасом вызывает многократное увеличение синтеза белка теплового шока 70 (hsp70) (Goldberg, 1997). Другой предполагаемой функцией протеасом является участие в проведении сигнала путём изменения концентрации регуляторных клеточных молекул, (Tokumoto et al., 1997; Jariel-Encontre et al., 1997), или их активации (Coux, Goldberg, 1998; Palombella et al, 1994). Предполагается также участие протеасом в рефляции экспресии генов на уровне трансляции, так как протеасомы были впервые выделены в комплексе с нетранслируемой м-РНК (Scherrer et al., 1988), и была показана способность протеасом блокировать трансляцию м-РНК in vitro (Akhayat et al., 1987). Широкий спектр функций протеасом подразумевает наличие эффективной системы распределения этих частиц в клетке. Одной из наиболее вероятных систем распределения может являться актиновый цитоскелет, так как протеасомы, учитывая их функции, должны располагаться в непосредственной близости от областей проведения сигнала и белкового синтеза. Действительно, методом непрямой иммунофлюоресценции была показана солокализация распределения протеасом как с промежуточными филаментами цитоскелета в клетках линии PtKl и HeLa (Grossi de Sa et al., 1997; Scherrer et al., 1988), так и с актиновыми структурами в фибробластах и миобластах человека (De Konto et al., 1997; Arcangeletti et al., 1997). Однако, в литературе отсутствуют данные о способности протеасом к непосредственному взаимодействию с фибриллярным актином. Изучение взаимодействия протеасом с актиновым цитоскелетом является необходимым для выявления роли актиновых структур в регуляторных процессах. Поскольку, а-РНП-частицы обладают сходными с протеасомами биохимическими свойствами (Константинова и др., 1987; Konstantinova et al., 1988), и также предполагается их участие в регуляции экспрессии генов (Константинова, Петухова и др., 1996; Константинова и др., 1995; Константинова, Ветцкер и др., 1994), то вполне возможно участие актинового цитоскелета в распределении и функционировании этих частиц. Поэтому, целью настоящей работы являлось изучение взаимодействия протеасом и а-РНП-частиц с F-актином.

Проведённое исследование позволило получить ряд новых и принципиально важных результатов. Было показано, что в нормальных эмбриональных фибробластах человека распределение протеасом и а-РНП-частиц солокализуется с распределением актина в кортикальной области, в случае протеасом, и в местах расположения стресс-фибрилл, в случае а-РНП. Методом аффинной хроматографии на колонках с иммобилизованным актином была продемонстрирована способность протеасом клеток печени крысы и клеток эпидермоидной карциномы человека (линии А431) специфически связываться с Б-актином. Поскольку, с Б-актином в этих опытах связывался ряд других актинсвязывающих белков, была исследована способность очищенных 268-комплекса (268-протеасом) и 208-протеасом (просом) непосредственно взаимодействовать с Б-актином. Было установлено, что 268-комплекс, состоящий из 208-протеасомы и 198-регуляторного комплекса, взаимодействует с фибриллярным актином АТФ-зависимо, а субъединицы 208-протеасомы способны к сборке на актиновых нитях. Также было продемонстрировано, что при действии на клетки линии А431 эпидермального фактора роста, способность протеасом этих клеток взаимодействовать с Б-актином не изменяется. В настоящей работе было показано, что в состав а-РНП-частиц и 268-комплекса входят идентичные по молекулярным массам и иммунологическим свойствам белки. Эти данные коррелируют со способностью а-РНП-комплекса, подобно 268-протеасомам, образовывать с Б-актином высокомолекулярный комплекс.

Совокупность данных, полученных в работе, указывает на наличие непосредственного взаимодействия протеасом и а-РНП-частиц с актиновыми структурами в клетке, что позволяет предполагать участие актинового цитоскелета в регуляции активности и/или распределении этих РНП-комплексов.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Галкин, Витольд Эдуардович

6. выводы.

1. Методом непрямой иммунофлюоресценции показано, что в нормальных эмбриональных фибробластах человека распределение протеасом солокализуется с распределением актиновых структур в кортикальной области клетки, а а-РНП-частиц в местах образования стресс-фибрилл.

2. Установлено, что белки протеасом клеток печени крысы и протеасом клеток эпидермоидной карциномы человека связываются с иммобилизованным на носителе фибриллярным актином. Это позволяет предполагать наличие взаимодействия этих частиц с актиновыми структурами.

3. Показано, что при соосаждении в изокинетическом градиенте плотности сахарозы, 268-комплекс, состоящий из 198-регуляторного комплекса и 208-протеасомы, способен непосредственно взаимодействовать с фибриллярным актином, с образованием высокомолекулярного комплекса. АТФ ингибирует связывание 268-комплекса с актиновыми нитями.

4. Обнаружено, что 208-протеасомы не взаимодействуют с Б-актином. Однако, при диссоциации комплекса, все субъединицы протеасомы, кроме белка с мол. массой 27 кДа, при соосаждении в изокинетическом градиенте плотности сахарозы, способны образовывать макромолекулярный комплекс с фибриллярным актином, что позволяет предполагать способность актиновых нитей инициировать сборку протеасом.

5. Методом соосаждения в изокинетическом градиенте плотности сахарозы показано, что протеасомы, диссоциированные в присутствии ионов Ъ^ и реассоциированные в присутствии ионов Mg2+, способны непосредственно связываться с фибриллярным актином.

6. а-РНП-частицы также способны непосредственно взаимодействовать с фибриллярным актином.

7. Эпидермальный фактор роста, вызывающий дифференцировку клеток линии А431, не влияет на способность белков протеасом этих клеток связываться с иммобилизованным на носителе фибриллярным актином.

В заключение я бы хотел выразить благодарность тем людям, которые принимали участие в этой работе. В первую очередь моим руководителям -профессору Георгию Петровичу Пинаеву, за мудрое руководство и терпение в воспитании молодого учёного, и Ирине Михайловне Константиновой за постоянное внимание и неоценимую помощь в работе. Я также хочу поблагодарить активных участников этой работы - Лидию Викторовну Туроверову и Лену Полевую за помощь в моих первых шагах в биохимии и клеточной биологии. Я благодарен Софье Юрьевне Хайтлиной, Вере Павловне Першиной и Алевтине Морозовой за постоянную помощь и поддержку на протяжении всей работы. Кроме того я благодарен Ирине Викторовне Кропачёвой и Наталье Сергеевне Николаенко за помощь в культуральной работе, а также всем сотрудникам Отдела клеточных культур ИНЦ РАН, где была выполнена работа, за внимание и доброе отношение.

Отдельно хочется сказать спасибо всем сотрудникам Лаборатории регуляции экспрессии генов ИНЦ РАН за тёплое отношение и помощь в работе.

Также я признателен Галкиной Елене Владимировне за помощь в оформлении диссертации и моральную поддержку на тернистом пути молодого биолога.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Галкин, Витольд Эдуардович, 1999 год

1. Седова В.М., Туроверова JI.B., Константинова И.М. Малая Alu-подобная РНК из клеток линии А-431 специфически регулирует активность РНК-полимеразы III из ядер плаценты человека // Цитология. 1995. Т. 37. С. 820823.

2. Константинова И.М., Ветцкер Р., Томиш С., Туроверова JI.B., Тесленко JI.A., Лубченков М.А., Никольский Н.Н. Ассоциация специфических РНП с рецептором ЭФР в клетках А-431 // Цитология 1996. Т. 38. С. 1103-1105.

3. И. Adams A.M., Cooper J.A., Drubin D.G. Unexpected combinations of null mutations in genes encoding actin cytoskeleton are lethal in yeast // Mol. Biol. Cell 1993. Vol. 4. P. 459-468.

4. Adams D. The problem of cytoplasmatic DNA: its extrusion uptake by cultured cells and its possible role in cell-cell information transfer // Int. J. Biochem. 1985. Vol. 17. P. 1133-1141.

5. Akiyama K, Kagawa S., Tamura Т., Shimbara N., Takashina M., Kristensen P., Hendil K., Tanaka K., Ichihara A. Replacement of proteasome subunits X and Y by

6. P7 and LMP2 induced by interferon-gamma for acquirement of the functional diversity responsible for antigen processing // FEBS Lett. 1994. Vol. 343. P. 85-88.

7. Amy Lam Y., Wei X., DeMartino G., Cohen R. Editing of ubiquitin conjugates by an isopeptidase in the 26S proteasome //Nature 1997. Vol. 385. P. 737-740.

8. Are A., Pinaev G., Lindberg U. The rapid actin cytoskeleton reorganization induced by EGF is different for A-431 cells spread on various substrates // Abstr. 10th European cytoskeletal forum. 1995. P. 15.

9. Arrigo A.-P., Simon M., Darlix L.-J., Spahr P.-F. A 20S particle ubiquitous from yeast to human // J. Mol. Evol. 1987. Vol. 25. P. 141-150.

10. Balasubramanian M.K., Hirani B.R., Burke J.D., Gould K.L. The Schizosaccharomyces pombe cdc3+ gene encodes a profilin essensial for cytokinesis //J. Cell Biol. 1994. Vol. 125. P. 1289-1301.

11. Balch W.E. Small GTP-binding proteins in vesicular transport // Trends Biochem. Sci. 1990. Vol. 15. P. 473-477.

12. Bar-Sagi D., Feramisco J.R. Induction of membrane ruffling and fluid-phase pinocytosis in quiescent fibroblast by ras proteins // Science 1986. Vol. 233. P. 1061-1068.

13. Bar-Sagi D.,McCormick F., Milley R.J., Feramisco J.R. Inhibition of cell surface ruffling and fluid-phase pinocytosis by microinjection of anti-ras antibodies into living cells // J. Cell Physiol. 1987. Vol. 5. P. 69-73.

14. Bassel G.J., Singer R.H., Kosik K.S. Association of poly(A)mRNA with microtubules in cultured neurons //Neuron 1994. Vol. 12. P. 571-582.

15. Bassell G., Singel R.H. mRNA and cytoskeletal filaments // Curr. Opin. Cell Biol. 1997. Vol. 9. P. 109-115.

16. Baumeister W., Lupas A. The proteasome // Curr. Biol. 1997. Vol. 7. P. 273-287.

17. Beal R., Deveraux Q., Xia G., Rechsteiner M., Pickart C. Surface hydrophobic residues of multiubiquitin chains essential for proteolytic targeting // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996. Vol. 93. P. 8236-8240.

18. Bennet V. Spectrin: a structural mediator between diverse plasma membrane proteins and the cytoplasm // Curr. Opin. Cell Biol. 1990. Vol. 2. P. 51-56.

19. Bershadsky A.D., Vasiliev J.M. Cytoskeleton. New York: Plenum Press. 1988.

20. Bissel M.J., Barcellos-Hoff M.H. The influence of extracellular matrix on gene expression: is structure the message? // J. Cell Sci. 1987. Suppl. 8. P. 327-344.

21. Blanchard A., Ohanian V., Critchley D. The structure and function of alpha-actinin // J. Muscle Res. Cell Motil. 1989. Vol. 10. P. 280-289.

22. Boguski M.S., McCormick F. Proteins regulating Ras and its relatives // Nature 1993. Vol. 366. P. 643-653.

23. Borejdo J., Muhlrad A., Leibovich S., Oplatka A. Polymerization of G-actin by hydrodinamic shear stresses //Biochem. Biophis. Act. 1981. Vol. 667. P. 118-131.

24. Branningan J., Dodson G., Duggleby H., Moody P., Smith J., Tomchirk D., Murzin A. A protein catalytic framework with an N-terminal nucleophile is capable of self-activation//Nature 1995. Vol. 378. P. 416-419.

25. Bremer A., Aebi U. The structure of the F-actin filament and the actin molecule // Curr. Opin. Cell. Biol. 1992. Vol. 4. P. 20-26.

26. Brown M., Driscoll L., Monaco J. MHC-linked low molecular mass polypeptide subunits define distinct subsets of proteasomes. Implications for divergent function among distinct proteasome subsets // J. Immunol. 1993. Vol. 151. P. 1193-1204.

27. Bryan J., Kane R. E. Actin gelation in sea urchin egg extracts // Meth. Cell Biol. 1982. Vol. 25. P. 175-199.

28. Bureau J., Henry L., Baz A., Scherrer K., Chateau M.-T. Prosomes (proteasomes) changes during differentiation are related to the type of inducer // Mol. Biol. Rep. 1997. Vol. 24. P. 57-62.

29. Cao L.-G., Babcock G.G., Rubenstein P.A., Wang Y.-L. Effects of profilin and profilactin on actin structure and function in living cells // J. Cell Biol. 1992. Vol. 117. P. 1023-1029.

30. Carlier M.F. Actin: protein structure and filament dynamics // J. Biol. Chem. 1991. Vol. 266. P. 1-4. (a)

31. Carlier M.F. Nucleotide hydrolysis in cytoskeletal assembly // Curr. Opin. Cell Biol. 1991. Vol. 3. P. 12-17. (b)

32. Carlier M.-F., Jean C., Riegger K.J., Lenfant M. Modulation of the interaction between G-actin and thymosin (34 by the ATP/ADP ratio: possible implication in the regulationof actin dynamics // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993. Vol. 90. P. 5034-5038.

33. Carlier M.-F., Pantaloni D. Actin Assembly in response to extracellular signals: role of capping proteins, thymosin p4 and profilin // Semin. Cell Biol. !994. Vol. 5. P. 183-191.

34. Carlsson L., Nystrom L.E., Linberg U., Kannan K.K., Cid-Dresdner H., Lovgren S., Jornvall H. Crystallization of non-muscle // J. Mol. Biol. 1976. Vol. 105. P. 353366.

35. Casella J.F., Craig S.W., Maack D.J., Brown A.E. Cap Z (36/32), a barbed end actin -capping protein, is a component of the Z-line of skeletal muscle // J. Cell Biol. Vol. 1992. 105. P. 371-379.

36. Chardin P., Boquet P., Maduale P., Popoff M.R., Rubin E.J., Gill D.M. The mamalian G protein rho C is ADP-ribosylated by Clostridium botulinum exoenzyme C3 and affects actin microfilaments in Vero cells // EMBO J. 1989. Vol. 8. P. 1087-1092.

37. Chen P., Hocstrasser M. Autocatalytic subunit processing couples active-site formation in the 20S proteasome to completion of assembly // Cell 1996. Vol. 86. P. 961-972.

38. Chicurel M.E., Singer R.H., Meyer C.J., Ingberg D.E. Integrin binding and mechanical tension induce movment of mRNA and ribosomes to focal adhesions // Nature 1998. Vol. 392. P. 730-733.

39. Chuang T.H., Xu X., Knaus U.G., Hart M.J., Bokoch G.M. GDP dissociating inhibitor prevents intristic and GTPase activating protein-stimulated GTP hydrolysis by the Rac GTP-binding protein // J. Biol. Chem. 1993. Vol. 268. P. 775-778.

40. Ciechanover A The ubiquitin-proteasome proteolytic pathway // Cell 1994. Vol. 79. P. 13-21.

41. Coleman T.R., Fishkind D.J., Moosker M.S., Morrow J.S. Functional diversity among spectrin isoforms // Cell Motil. Cytoskeleton 1989. Vol. 12. P. 225-247.

42. Coux O., Goldberg A.L. Enzymes catalyzing ubiquitinilation and proteolytic processing of the pl05 precusor of nuclear factor kappa B1 // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273. P. 8820-8828.

43. Coux O., Nothwang H., Pereira I., Targa F., Bey F., Scherrer K. Phylogenic relationships of the amino acid sequences of prosome (proteasome, MCP) subunits // Mol. Gen. Genet. 1994. Vol. 245. P. 769-780.

44. Coux O., Tanaka K., Goldberg A. Structure and functions of the 20S and 26S proteasomes //Annu. Rev. Biochem. 1996. Vol. 65. P. 801-847.

45. Cramer L.P., Mitchison T.J. Myosin is involved in postmitotic cell spreading // J. Cell Biol. 1995. Vol. 131. P. 179-189.

46. Dahlmann B., Kopp F., Kuehl L., Niedel B., Pfeifer G., Hegerl R., Baumeister W. The multicatalic proteinase (prosome) is ubiquitous from eukaryotes to archaebacteria // FEBS Lett. 1989. Vol. 251. P. 125-131.

47. Davis T., Firulli A., Kinniburgh A. Ribonucleoprotein and protein factors bind to an H-DNA forming c-myc DNA element // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. Vol. 2. P. 458-459.

48. Deveraux Q., Jensen C., Rechsteiner M. Molecular cloning and expression of a 26S protease subunit enriched in dileucine repeats // J. Biol. Chem. 1995. Vol. 270. P. 23726-23729.

49. Deveraux Q., Van Nocker S., Mahaffey D., Viestra R., Rechsteiner M. Inhibition of ubiquitin-mediated proteolysis by the Arabidobsis 26S protease subunit S5a // FEBS Lett. 1996. Vol.381. P. 143-148.

50. Domae N., Harmon F., Busch R., Spohn W., Sabrahmanyam C., Busch H. Donut-shaped "miniparticles" in nuclei of human and rat cells // Life Sci. 1982. Vol. 30. p. 469-477.

51. Downward J. The Ras superfamily of small GTP-binding proteins // Trends Biochem. Sci. 1990. Vol. 15. P. 469-472.

52. Dreyfuss G. Structure and function of nuclear and cytoplasmic ribonucleoprotein particles // Ann. Rev. Cell Biol. 1986. Vol. 2. P. 458-469.

53. Fentzel S., Pesold H., Seeling A., Kloetzel P. 20S proteasomes are assembled via distinct precursor complexes. Processing of LMP2 and LMP7 proproteins takes place in 13-16S preproteasome complexses. // J. Mol. Biol. 1994. Vol. 236. P. 975981.

54. Finkel T., Theriot J.A., Dise K.R., Tomaselli G.F., Goldshmidt-Clermont P.J. Dynamic actin structures stabilized by profilin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994. Vol. 91. P. 1510-1514.

55. Friederich E., Kries T.E., Louvard D. Villin induced growth of microvilli is reversibly inhibited by cytochalasin D// J. Cell Sci. 1993. Vol. 105. P. 765-775.

56. Friederich E., Pringault E., Arpin M., Louvard D. From the structure to the function of villin, an actin-binding protein of the brush border // Bioessays 1990. Vol. 12. P. 403-408.

57. Friederich E., Pringault E., Arpin M., Louvard D. From the structure to the function of villin, an actin-binding protein of the brush border // BioEssays 1990. Vol. 12. 403-408.

58. Fujita E., Mukasa T., Tsukahara T., Arahata K., Omura S., Momoi T. Enhancement of CPP32-like activity in the TNF treated U937 cells by the proteasome inhibitors // Biochem. Biophis. Res. Commun. 1996. Vol. 224. P. 74-79.

59. Gips S.J., Kandzari D.E., Goldschmidt-Clermont P.J. Growth factor receptors, phospholipases, phospholipid kinases and actin organization // Semin. Cell Biol. 1994. Vol. 5. P. 201-208.

60. Goldberg A.L., Akopian T.N., Kisselev A.F., Lee D.H., Rohwild M. New insights into the mechanisms and importance of the proteasome in intracellular protein degradation // Biol. Chem. 1997. Vol. 378. P. 131-140.

61. Goldshmidt-Clermont P.J., Kim J. W., Machesky L.M. Rhee S.G., Pollard t.d. Regulation of phospholipase C-l by profilin and tyrosine phosphorilation // Scince 1991. Vol. 251. P. 1231-1233.

62. Gorlin J.B., Yamin R., Egan S., Stewart M., Stossel T.P., Kwiatkowski D.J., Hartwig J.H. Human endothelial actin-binding protein (ABP-280, nonmuscle filamin): a molecular leaf spring // J. Cell Biol. 1990. Vol. 111. 1089-1105.

63. Groettrup M., Soza A., Eggers M., Kuehl L., Dick T., Schild H., Rammensee H.-G., Koszinowski U., Kloetzel P. //Aroll for the proteasome regulator PA28alpha in antigen presentation //Nature 1996. Vol. 381. P. 166-168.

64. Grossi de Sa M.-F., Martines de Sa C., Harper F., Olink-Coux M., Huesca M., Scherre K. The association of prosomes with some of the intermidiate filament networks of the animal cell // J. Cell Biol. 1997. Vol. 107. P. 1517-1530.

65. Grossi M.-F., Martines de Sa C., Harper F., Coux O., Akhayat O., Pal J., Florentin Y., Scherrer K. Cytolocalization of prosomes as a function of differentiation // J. Of Cell. Sci. 1988. Vol. 89. P. 151-165.

66. Hall A. Ras-related proteins // Curr. Opin. Cell Biol. 1993. Vol. 5. P. 265-268.

67. Hall A. Signal transduction through small GTP-ases a tale of two GAPs // Cell 1992. Vol. 69. P. 389-391.

68. Hanson J., Lowy J. The structure of F-actin filaments isolated from muscle // J. Mol. Biol. 1963. Vol. 6. P. 46-60.

69. Hartwig J. H., Kwiatkowski D. J. Actin-binding proteins // Curr. Opin. Cell Biol. 1991. Vol. 3.P. 87-97.

70. Hermida-Matsumoto M.-L., Chock P., Curran T. Yang D. Ubiquitinilation of transcription factors c-Jun and c-Fos using reconstituted ubiquitinilating enzzymes // J. Biol. Chem. 1996. Vol. 271. P. 4930-4936.

71. Hoffman L., Rechsteiner M. Effects of nucleotides on assembly of the 26S proteasome and degradation of ubiquitin conjugates // Mol. Biol. Rep. 1997. Vol. 24. P. 13-16.

72. Holmes K.C., Kabsch W. Muscle proteins: actin // Curr. Opin. Struct. Biol. 1991. Vol. l.P. 270-280.

73. Hougu R., Pratt G., Rechsteiner M. Purification of two high molecular weight proteases from rabbit reticulosyte lysate // J. Biol. Chem. 1987. Vol. 262. P. 83038313.

74. Hugle B., Kleinschmidt J., Franke W. The 22S cylinder particles of Xenopus leavis. Immunological characterization and localization of their proteins in tissues and cultured cells // J. Cell Biol. 1983. Vol. 32. P. 157-163.

75. Ichihara A., Tanaka K. Roles of proteasomes in cell growth // Mol. Biol. Rep. 1996. Vol. 21. P. 49-52.

76. Ikebe M., Reardon S. Binding of caldesmon to smooth muscle myosin // J. Biol. Chem. 1988. Vol. 263. P. 3055-3058.

77. Jariel-Encontre I., Pariat M., Martin F., Carillo S., Salvat C., Piechaczyk M. Ubiquitinilation is not an absolute requiment for degradation of c-Jun protein by the 26S proteasome // J. Biol. Chem. 1995. Vol. 270. P. 11623-11627.

78. Jariel-Encontre I., Salvat C., Steff A.-M., Pariat M., Acquaviva C., Furstoss O., Piechaczyc M. Complex mechanisms for c-fos and c-jun degradation // Mol. Biol. Rep. 1997. Vol. 24. P. 51-56.

79. Jean C., Rieger K., Blanchoin L., Carlier M.-F., Lenfant M., Pantaloni D. Interaction of G-actin with thimosin (34 and its variants thymosin p9 and thymosin p9met // J. Mus. Res. Cell Motil. 1994. Vol. 15. P 278-286.

80. Kabsch W., Mannherz H.G., Suck D., Pai E.F., Holmes K.C. Atomic structure of the actin: Dnase I complex //Nature 1990. Vol. 347. P. 37-44.

81. Kabsch W., Vandekerckhove J. Structure and function of actin // Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 1992. Vol. 21. P. 49-76.

82. Kislauskis E.N., Ross A., Lathman V.L., Zhu X.-C., Bassel G., Taneja K.L., Singer R.H. The mechanism of mRNA localization: its effect on cell polarity // Localized RNA. Springer, RG Landes Co. 1995. P. 165-172.

83. Kleinsschidt J., Hugle B., Ground C., Franke W. The 22S cylinder particles of Xenopus leavis // Eur. J. Cell Biol. 1983. Vol. 32. P. 143-156.

84. Kloetzel P.-M. 19S cylinder particles ubiquitous from plants to man: their morphology, molecular composition and potential functions // Mol. Biol. Rep. 1987. Vol.12. P. 223-227.

85. Konstantiniva I., Turoverova L., Petukhova O., Vorob'ov V. Cortisone-induced small RNP tightly bound to chromatin // FEBS Lett. 1984. Vol. 177. P. 241-245.

86. Konstantinova I., Kozlov Yu., Kulichkova V., Petukhova O. Small cytoplasmatic RNA associated with polyadenilated RNA is involved in the hormonal regulation of gene expression // FEBS Lett. 1988. Vol. 238. P. 320-324.

87. Korn E.D. Actin polymerization and it's regulation by protein from non-muscle cells // Physiol. Rev. 1982. Vol. 62. 672-737.

88. Kremp A., Schliephacke M., Kull U., Schmid H.-P. Prpsomes exist in plant cells too //Exp. Cell Res. 1986. Vol. 166. P. 553-557.

89. Laemmli U.K., Cleavage of structural proteins during the assebbly of the head of bacteriophage T4 //Nature. 1970. Vol. 227. P. 680-685.

90. Lassing I., Linberg U. Specific interaction between phosphatidylinositol 4,5 bisphosphate and profilactin // Nature 1985. Vol. 314. P. 604-606.

91. Lazarides E., Lindberg U. Actin is the naturally occurring inhibitor of desoxyribonuclease I // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1974. Vol. 71. P. 4742-4746.

92. Lees A., Haddad J.G., Lin S. Brevin and vitamin D binding protein: comparison of the effects of two serum proteins on actin assembly and disassembly // Biochemistry 1984. Vol. 23. P. 3038-3047.

93. Lees-Miller J.P., Helfman D.M. The molecular basis for tropomyosin isoform diversity//Bioessays 1991. Vol. 13. P. 429-437.

94. Lothar K., Dahlmann B. Structural and functional properties of proteasome activator PA28 // Mol. Biol. Rep. 1997. Vol. 24. P. 89-93.

95. Lui G., Tang J., Edmonds B., Murrey J., Levin S., Condeelis J. F-actin sequesters elongation factor la fron interaction with aminoacyl-tRNA in a pH dependent reaction // J. Cell Biol. 1996. Vol. 135. P. 953-963.

96. Marston S., Pinter K., Bennett P. Caldesmon binds to smooth muscle myosin rod and crosslinks thick filaments to actin filaments // J. Muscle Res. Cell Motil. 1992. Vol. 13. P. 206-218.

97. Marston S.B., Redwood C.S. The molecular anatomy of caldesmon // Biochem. J. 1991. Vol. 279. P. 1-16.

98. Matsudaira P. Modular organization of actin crosslinking proteins // Trends Biochem. Sci. 1991. Vol. 16. P. 87-92.

99. Matsudaira P. Modular organization of actin crosslinking proteins // Trends Biochem. Sci. 1991. Vol. 16. P. 87-92.

100. Maupin-Furlov J., Ferry J. A proteasome from the methanogenic archaeon Methanosarcina thermophila // J. Biol. Chem. 1995. Vol. 270. P. 28617-28622.

101. Miller K.G., Alberts B.M. F-actin affinity chromatography: technique for isolating previously unidentified actin-binding proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989. Vol. 86. P. 4808-4812.

102. Monaco J., Nandi D. // Annu. Rev. Genet. 1995. Vol. 29. P. 729-754.

103. Moore P.B., Huxley H.E., DeRosier D.J. Three-dimensional reconstruction of F-actin thin filaments and decorated thin filaments // J. Mol. Biol. 1970. Vol. 50. P. 279-295.

104. Myrdal S.E., Auersperg N. An agent arf agents produced by virus-transformed cells cause unregulated ruffling in untrunsformed cells // J. Cell Biol. 1986. Vol. 102. P. 1224-1229.

105. Nandi D., Jiang H., Monaco J. Identification of MECL-1 (LMP-10) as the 3rd INF-inducible proteasome subunit // J. Immunol. 1996. Vol. 156. P. 2361-2364.

106. Narayan K., Rounds D. Minute ring sharped particles in cultured cells of malignant origin // Nature New Biol. 1973. Vol 243. P. 146-150.

107. Nobles C.D., Hall A. Rho, rac and cdc42 GTP-ases regulate the assembly of multimolecular focal complexes associated with actin stress fibers, lamellipodia, and filopodia // Cell 1995. Vol. 81. P. 53-62.

108. Nobles C.D., Hawkins P., Stephens L., Hall A. Activation of small GTP-binding proteins rho and rac by growth factor receptors // J. Cell Sci. 1995. Vol. 108. P. 225-233.

109. Academic Press. 1975. New York.

110. Otto J J., Schroeder T.E. Assembly-disassembly of actin bundels in starfish oocytes: an analysis of actin-associated proteins in the isolated cortex // Dev. Biol. 1984. V. 101. P. 263-273.

111. Palombella V.J., Rando O.J., Goldberg A.L., Maniatis T. Ubiquitin and the proteasome are required for processing the NF-kBl precursor and the activation of NF-kB // Cell 1994. Vol. 78. P. 773-785.

112. Pantaloni D., Carlier M.-F. How profilin primotes actin filaments assembly in the presence of thymosin p4// Cell 1993. Vol. 75. P. 1007-1014.

113. Paterson H.F., Self A.J., Garret M.D., Just I., Aktories K., Hall A. Microinjection of recombinant p21 rho induces rapid changes in cell morphology // J. Cell Biol. 1990 Vol. 111. P. 1001-1007.

114. Peppelenbosch M.P., Tertoolen L.G., Hage W.J., de Laast S.W. Epidermal growth factor-induced actin remodeling is regulated by 5-lipoxygenase and cyclooxeginase products // Cell 1993. Vol. 74. P. 565-575.

115. Peters J.-M., Franke W., Kleinschmidt J. Distinct 19S and 20S subcomplexes of the 26S proteasome and their distribution in the nucleus and the cytoplasm // J. Biol. Chem. 1994. Vol. 269. P. 7709-7718.

116. Peters J.-M., Harris J., Kleinschmidt J. Ultrastructure of the ~26S complex containing the ~20S cylinder particle (multicatalytic proteinase / prosome) // Eur. J. Cell Biol. 1991. Vol. 56. P. 422-432.

117. Petit F., Jarrousse A.-S., Boissonnet G., Dadet M.-H., Buri J., Briand Y., Schmidt H.-P. Proteasome (prosome) associated endonuclease activity // Mol. Biol. Rep. 1997. Vol. 24. P. 113-117.

118. Pollard T.D., Cooper J.A. Actin and actin-binding proteins. A critical evaluation of mechanisms and functions // Annu. Rev. Biochem. 1986. Vol. 55. P. 987-1035.

119. Pouch M., Petit F., Buri J., Briand Y., Schmidt H. Identification and initial characterization of a specific proteasome (prosome) associated Rnase activity // J. Biol. Chem. 1995. Vol. 270. P. 22023-22028.

120. Puck T.T., Krystosek A., Chan D.C. Genome regulation in mammalian cells // Somatic Cell Molecular Genetics 1990. Vol. 16. P. 257-265.

121. Puhler G., Pitzer F., Zwickl P., Baumeister W. Proteasomes multisubunit proteinases common to Thermoplasma and eukaryotes // System Appl. Microbiol. 1994. Vol. 16. P. 734-741.

122. Richter-Ruoff B., Wolf D. Proteasome and cell cycle. Evidence for a regulatory role of the protease on mitotic cyclins yeast // FEBS Lett. 1993. Vol. 336. P. 34-36.

123. Ridely A.J., Hall A. // Cell 1992. Vol. 70. P. 389-399. !!!

124. Ridley A.J., Paterson H.F., Johnston C.L., Diekmann D., Hall A. The small GTP-binding protein rac regulates epidermal growth factor-induced membrane ruffling // Cell 1992. Vol. 70. P. 401-410.

125. Sachs A. Messenger RNA degradation in eukaryotes // Cell 1993. Vol. 74. P. 413421.

126. Scheffher M., Werness B.A., Huibregtse J.M., Levine A.J. Howley P.M. The E6 oncoprotein encoded by human papillomavirus types 16 and 18 promotes the degradation of p53 // Cell 1990. Vol. 63. P. 1129-1136.

127. Schuldt C., Kloetzel P.-M. Analysis of cytoplasmatic 19S ring-type particles in Drosophila which contain hsp 23 at normal growth temperature // Dev. Biol. 1985. Vol. 110. P. 65-74.

128. Seeger M., Ferrel K., Dubiel W. The 26S proteasome: a dynamic structure // Mol. Biol. Rep. 1997. Vol. 24. P. 83-88.

129. Seemuller E., Lupas A., Baumeister W. Autocatalytic processing of the 20S proteasome //Nature 1996. Vol.382. P. 468-470.

130. Seemuller E., Lupas A., Stock D., Lowe J., Huber R., Baumeister W. Proteasome from Thermoplasma acidophilum a threonine protease // Science 1995. Vol. 268. P. 579-58

131. Smulson M. Subribosomal particles of HeLa cells // Exp. Cell Res. 1974. Vol. 87. P. 253-258.

132. Sobue K., Muramoto Y., Fujita M., Kakiuchi S. Purificationof a calmodulin-binding protein fron chiken gizzard that interacts with F-actin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1981. Vol. 78. P. 5652-5655.

133. Sobue K., Sellers J.R. Caldesmon, a novel regulatory protein in smooth muscle and nonmuscle actomyosin systems // J. Biol. Chem. 1991. Vol. 266. P. 12115-12188.

134. Straub F.D. Actin // Stud Szeged 1942. Vol. 2. P. 3-15.

135. Strzelecka-Golaszewska H., Prochniewicz E., Drabikowski W. Interaction of actin with divalent cations // Eur. J. Biochem. 1978. Vol. 88. P. 219-227.

136. Sundell C.L., Singer L.H. Requirement of microfilaments in sorting of actin mRNA // Science 1991. Vol. 253. P. 1275-1277.

137. Tamura T., Nagy I., Lupas A., Lottspeich F., Cejka Z., Schoofs G., Tanaka K., DeMot R., Baumeister W. The first characterization of a eubacterial proteasome -the 20S complex ofRhodococcus // Curr Biol. 1995. Vol. 5. P. 766-774.

138. Tanaka K. Molecular biology of proteasomes // Mol. Biol. Rep. 1995. Vol. 21 P. 21-26.

139. Tanaka K., Tsurumi C. The 26S proteasome: subunits and functions // Mol. Biol. Rep. 1997. Vol. 24. P. 3-11.

140. Tokumoto T., Yamashita M., Tokumoto M., Katsu Y., Horiguchi R., Kajiura H., Nagahama Y. Initiation of cyclin B degradation by the 26S proteasome upon egg activation // J. Cell Biol. 1997. Vol. 138. P. 1313-1322.

141. Vandekerckhove J. Actin-binding proteins // Curr. Opin. Cell Biol. 1990. Vol. 2. P. 41-50.

142. Vandekerckhove J., Weber K. Actin amino acid sequences. Comparison of actins from calf thymus, bovine brain, and SV40-transformed 3T3 cells with rabbit skeletal muscle actin // Eur. J. Biochem. 1978. Vol. 90. P. 451-462. (a)

143. Vandekerckhove J., Weber K. The amino acid sequence of physarum actin // Nature 1978. Vol. 276. P. 720-721. (b)

144. Vojtek A., Haarer B., Field J., Gerst J., Pollard T.D., Brown S., Wigler M. Evidence for a functional link between prifilin and CAP in the yeast S. cerevisiae // Cell 1991. Vol. 66. P. 497-505.

145. Wachsstock D.H., Schwarz W. H. Pollard T. D. Affinity of alpha-actinin for actin determines the structure and mechanical properties of actin filament gels // Biophys. J. 1993. Vol. 65. P. 205-214.

146. Wegner A. Treadmilling of actin at physiological salt concentrations: an analysis of the critical concentrations of actin filaments // J. Mol. Biol. 1982. Vol. 161. P. 607615.

147. Wegner A., Isenberg G. 12-Fold difference between the critical monomer concentrations of the two ends of actin filaments in physiological salt concentrations // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1983. Vol. 80. P. 4922-4925.

148. Witke W Schleicher ML, Noegel A.A. Redundancy in the microfilament system: abnormal development of dictyostelium cells lacking two F-actin cross-linking proteins // Cell 1992. Vol. 68. P. 53-62.

149. Yamashiro-Matsumura S., Matsumura F. Purification and characterization of an F-actin-binding 55-kilodalton protein from HeLa cells // J. Biol. Chem. 1985. Vol. 260. P. 5087-5097.

150. Yen B., Svoboda K.H. Intracellular distribution of P-actin mRNA is polarized in embryonic corneal epithelia // J. Cell Sci. 1994. Vol. 107. P. 105-115.

151. Yin H.L. Gelsolin: calcium- and polyphosphoinositideregulated actin-modulating protein//Bioessays 1987. Vol. 7. P. 176-179.

152. Young L., Dunstam H., Witte P., Smith T., Otonello S., Spraque R. A class III transcription factor composed of RNA // Science. 1991. Vol. 252. P. 542-546.

153. Yu F.-X., Lin S.-C., Morrison-Bogorad M., Atkinson M.A., Yin H.L. Thimosin pi0 and thimosin p4 are both actin monomer sequestering proteins // J. Biol. Chem. 1993. Vol. 268. P. 502-509.