Взаимодействие микроорганизмов-деструкторов в ризосфере и ризоплане растений в присутствии углеводородов нефти тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Овчинникова, Анастасия Алексеевна

• Овчинникова, Анастасия Алексеевна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Овчинникова, Анастасия Алексеевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 .Углеводороды нефти как распространенные поллютанты ^ *

1.1.1. Нефть - И

1.1.2. Полициклические ароматические углеводороды: общая характеристика 13 загрязнителей

1.2. Биохимические пути деградации ПАУ, как устойчивой фракции нефти 1 6 1.2.1 .Биохимические пути деградации наф галина микроорганизмами

1.2.2.Биохимические пути деградации фенантрена микроорганизмами

1.3.Методы восстановления почвенных и водных экосистем, загрязненных 20 углеводородами нефти

1.4.Деградация углеводородов нефти 21 1.4.1 .Абиотическая деградация ПАУ 21 1.4.2. Микробная деградация углеводородов нефти

1.4.2.1. Микробная деградация ПАУ

1.4.2.2. Микроорганизмы и биодеградация нефти

1.5. Фиторемедиационные технологии

1.5.1. Фитоэкстракция

1.5.2. Ризофильтрация

1.5.3. Ризодеградация

1.5.4. Фитодеградация

1.5.5. Фитоволотализация

1.5.6. Фитогидравлика

1.6. Защитные механизмы растений: экскреция, трансформация и деградация 3 \ органических токсикантов в растительной клетке

1.7. Роль микроорганизмов в процессе фиторемедиации загрязненной окружающей 34 среды

1.8. Влияние микроорганизмов на чувствительность растений к загрязнителям

1.9. Популяционные взаимодействия микроорганизмов

1.10. Растительно-микробные взаимодействия

1.11. Хемотаксически активные микроорганизмы-деструкторы 49 II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Бактериальные штаммы и плазмиды

2.2. Питательные среды, источники углерода и энергии, антибиотики

3.1.4. Изучение конкурентоспособности В81393(рМ) и КТ2442(рМ)

3.1.5. Оценка активностей ключевых ферментов биодеградации нафталина

2. 3. Кинетика роста микроорганизмов

2. 3. 1. Кинетика роста микроорганизмов на нафталине и салицилате

2. 3. 2. Кинетика роста микроорганизмов на фснантрене

2.4. Определение содержания гентизиновой кислоты и 1-гидрокси-2-нафтойной 59 кислоты

2.5. Изучение токсичности 1-гидрокси-2-нафтойной кислоты на растения

2.6. Определение активностей ферментов

2.7. Определение уровня продукции индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) в культуре gQ бактерий

2.8. Определение содержания нафталина в образцах

2.9. Определение содержания фенантрена в образцах

2.10. Определение содержания нефти в образцах

2.11. Гнотобиотическая система для выращивания растений

2.12. Схемы модельных экспериментов

2.12. 1. Схема эксперимента с нафталином

2.12.2. Схема эксперимента с фенантреном

2.12.3. Схемы модельных экспериментов с нефтью

2.13. Изучение хемотаксичсской реакции микроорганизмов к углеводородам нефти (нафталин, фенантрен, дизельное топливо)

2.14. Проведение полевого эксперимента

2.15. Отбор проб в полевом эксперименте

2.16. Выделение тотальной ДНК бактерий

2.17. Полимеразная цепная реакция

2.18. Электрофорез в агарозном геле

2.19.Статистическая обработка результатов

III. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Взаимодействие бактерий, стимулирующих рост растений (PGPR) и штаммов- 69 деструкторов в модельных системах, загрязненных нафталином

3.1.1. Изучение защитного эффекта на растения PGPR и штаммов-деструкторов 69 ПАУ в модельных системах, загрязненных нафталином

3.1.2. Деградация нафталина при интродукции PGPR- и штаммов-деструкторов 70 ПАУ в модельные системы

3.1.3. Динамика численности микроорганизмов в модельных системах, 71 загрязненных нафталином

3.1.6. Хемотаксическая реакция штаммов-деструкторов в отношении нафталина 3.2. Взаимодействие штаммов-деструкторов в модельных системах, загрязненных 77 фенантреном

3.2.1. Изучение защитного эффекта на растения при интродукции штаммовдеструкторов Pseudomonas putida BS3701 (pBSl 141, pBSl 142) и Burkholderia sp. BS3702 (pBSl 143)

3.2.2. Биодеградация фенантрена

3.2.3. Оценка накопления фенантрена в тканях растений

3.2.4. Динамика численности микроорганизмов-деструкторов и колонизация 79 корней

3.2.5. Кинетика роста штаммов Pseudomonas putida BS3701(pBSl 141, pBSl 142) и 80 Burkholderia sp. BS3702(pBSl 143) в жидкой минеральной среде с фенантреном

3.2.6. Накопление метаболитов при деградации фенантрена в жидкой минеральной 81 среде штаммами Pseudomonas putida 3701 (pBSl 141, pBSl 142) и Burkholderia sp. BS3702(pBSl 143)

3.2.7. Токсичность 1-гидрокси-2-нафтойной кислоты для растений

3.2.8. Хемотаксическая реакция микроорганизмов-деструкроторов в отношении 83 фенантрена

3.3. Оценка эффективности деградации нефти в стерильных модельных почвенных 83 системах

3.3.1. Скрининг растений для составления эффективной растительно-микробной 84 ассоциации

3.3.2. Влияние микроорганизмов на рост растений в условиях загрязнения почвы 85 нефтью

3.3.3. Динамика численности интродуцированных штаммов-деструкторов 86 углеводородов нефти

3.3.4. Снижение концентрации нефти микробно-растительными ассоциациями ^

3.4.Оценка эффективности деградации нефти в нестерильных модельных почвенных системах

3.4.1. Влияние микробной ассоциации «ВиО» на рост ячменя в условиях 89 загрязнения почвы нефтью

3.4.2. Динамика численности микроорганизмов в составе растительно-микробных 90 ассоциаций в ризосфере и ризоплане растений

3.4.3. Убыль нефти при использовании растительно-микробной ассоциации в 91 нестерильных модельных системах

3.5. Изучение эффективности отобранной растительно-микробной ассоциации 92 («ВиО» - газонная трава) в модельных почвенных системах, загрязненных нефтью при температуре 20°С и 4°С

3.5.1. Влияние ассоциации микроорганизмов на рост растений в условиях 92 загрязнения почвы нефтью при температуре 20°С и 4°С

3.5.2. Динамика численности микроорганизмов в ризосфере и ризоплане газонной 94 травы в модельных почвенных системах, загрязненных нефтью при 20°С и 4°С

3.5.3. Деградация нефти растительно-микробной ассоциацией в модельных 95 почвенных системах при температуре 20°С и 4°С

3.5.4. Хемотаксическая реакция микроорганизмов-деструкторов, входящих в состав 95 ассоциации «ВиО» в отношении углеводородов нефти

3.6. Оценка эффективности биоремедиации почвы растительно-микробной 96 ассоциацией «ВиО»-ячмень в условиях реального разлива нефти

3.6.1. Влияние микробной ассоциации «ВиО» и биопрепаратов «Биоойл-СН» и 97 «Биоойл-Югра» на рост ячменя в условиях реального разлива нефти

3.6.2. Численность микроорганизмов-деструкторов в почве и на корнях ячменя в 97 условиях реального разлива нефти

3.6.3. Степень деструкции нефти микробным консорциумом «ВиО» и 99 биопрепаратами «Биоойл-СН» и «Биоойл-Югра», ассоциированными с ячменем в условиях реального разлива нефти

3.7. Депонирование штаммов, изучение их патогенности, подготовка патентной заявки

3.7.1. Депонирование штаммов

3.7.2. Изучение патогенности микроорганизмов

3.7.3. Патентование ассоциации для очистки почв от загрязнений нефтью и нефтепродуктами

IV. ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Взаимодействие бактерий, стимулирующих рост растений (РОРЯ) и штаммов- 102 деструкторов в модельных системах, загрязненных нафталином

4.2. Взаимодействие штаммов-деструкторов в модельных системах, загрязненных 105 фенантреном

4.3. Создание растительно-микробных ассоциаций для биорсмедиации 109 нефтезагрязненных почв

4.4. Оценка эффективности деградации нефти в стерильных модельных почвенных 110 системах

4.5. Эффективность деградации нефти растительно-микробной ассоциациацисй 112 «ВиО» - ячмень в нестерильных почвенных модельных системах

4.6. Изучение эффективности отобранной растительно-микробной ассоциации 113 («ВиО» - газонная трава) в модельных почвенных системах, загрязненных нефтью при температуре 20°С и 4°С

4.7. Оценка эффективности биоремедиации почвы растительно-микробной 115 ассоциацией «ВиО»-ячмень в условиях реального разлива нефти

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Взаимодействие микроорганизмов-деструкторов в ризосфере и ризоплане растений в присутствии углеводородов нефти»

Добыча нефти является одной из важнейших отраслей промышленности в Российской Федерации. Причем, при ежегодной добыче нефти 400 млн. тонн, объем утечек достигает 15 млн. т/год. Сырая нефть содержит сотни разных химических компонентов, процентное содержание которых колеблется в широких пределах и зависит от особенностей нефтяных месторождений. Более 75% состава нефти приходится на углеводороды, остальную часть составляют производные углеводородов, в которых содержится сера, азот и кислород. Углеводороды нефти делятся на парафины, циклонарафины (нафтены), ароматические (в том числе и полициклические ароматические углеводороды (ПАУ), которые являются одними из наиболее токсичных компонентов нефти) и нафтеноароматические углеводороды. ПАУ являются классом повсеместно распространенных устойчивых поллютантов, содержащихся в сточных водах и газовых выбросах коксо-, газо- и нефтехимических производств. ПАУ обладают мутагенными, тератогенными и канцерогенными свойствами. При попадании в организм под действием ферментов из ПАУ образуются эпоскисоедииения, реагирующие с гуанином. Это препятствует синтезу ДНК, вызывает нарушение транскрипционных процессов, часто приводит к возникновению мутаций, способствует развитию раковых заболеваний. Единственный представитель ПАУ, который используется в промышленности и производится в огромных масштабах (сотни тон в год) - это нафталин.

Загрязнение почв углеводородами нефти (в том числе и ПАУ) приводит к снижению их плодородия и, соответственно, качества сельскохозяйственной продукции. Одним из перспективных способов решения проблемы загрязнения почв ПАУ и нефтью -разработка методов и подходов их очистки и детоксикации, и, прежде всего, биодетоксикации и биоремедиации.

Нефтяные углеводороды подвержены деградации в результате химического и фотоокисления, но основную роль в их разложении играют микроорганизмы. Однако не существует ни одного вида микроорганизмов, способного деградировать все компоненты сырой нефти, и полная деструкция требует участия консорциума микроорганизмов-деструкторов различных таксономических групп. Имеющиеся литературные данные указывают на способность лишь небольшого числа микроорганизмов и растений обезвреживать углеводороды нефти путем их деградации до обычных клеточных метаболитов.

Помимо микроорганизмов значительную роль в процессе деградации различных поллютантов, в том числе ПАУ и сырой нефти, играют растения. На сегодняшний день существуют многочисленные экспериментальные данные, наглядно демонстрирующие, что растения наряду с другими защитными механизмами обладают определенным набором биохимических и физиологических процессов, с помощью которых они противостоят токсичному действию чужеродных веществ. Такими процессами являются экскреция; конъюгация токсичных соединений с внутриклеточными соединениями с дальнейшей компартментализацией конъюгатов; деградация токсикантов до стандартных клеточных метаболитов и углекислого газа. Основные достоинства фито- и биоремедиации состоят в возможности рекультивации больших территорий, относительно низкой стоимости по сравнению с другими технологиями, высокой эффективности и отсутствии негативного воздействия на окружающую среду. Таким образом, в процессе очистки почвы от нефти и нефтепродуктов, по-видимому, следует сочетать свойства микроорганизмов-деструкторов и растений, ассоциированных с ними.

Работы в направлении фито- и биоремедиации проводятся во многих странах мира, однако взаимодействие составляющих биоремедиационного процесса (микроорганизмы, растения, загрязнитель) к настоящему времени изучены слабо.

Цель и задачи исследования

Целью работы являлось изучение взаимодействия микроорганизмов-деструкторов и его влияния на растения в процессе деградации углеводородов нефти. Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) изучить характер взаимодействия интродуцированных микроорганизмов в процессе биоремедиации модельных систем, загрязненных нафталином и фенантреном;

2) изучить влияние микробных взаимодействий на растения в присутствии нафталина и фенантрена;

3) оценить хемотаксическую активность штаммов-деструкторов углеводородов нефти.

4) провести скрининг растений наиболее устойчивых к нефтезагрязнению;

5) составить растительно-микробную ассоциацию для эффективной биоремедиации почвы, загрязненной нефтью;

6) провести полевые испытания для оценки эффективности деградации нефти созданной микробно-растительной ассоциацией.

Научная новизна

Впервые описан характер взаимодействия штаммов-деструкторов друг с другом в процессе деградации нафталина, фенантрена и нефти в ризосфере и ризоплане растений. Взаимодействие исследованных микроорганизмов-деструкторов рода Pseudomonas при совместном культивировании в процессе деградации нафталина проявлялось в конкуренции штаммов Р. putida KT2442(pNF142::TnyV/ot/-OTc) и P.ciareofaciens ВS13 93 (pNF142::'I'nMod-OTc) за интермедиат пути деградации - кагехол. Взаимодействие исследованных штаммов-деструкторов родов Pseudomonas и Burkholderia в процессе деградации фенантрена выражалось в кооперации, что проявлялось в потреблении образовавшегося токсичного интермедиата штамма Burkholderia sp. BS3702, а именно 1-гидрокси-2-нафтойной кислоты, штаммом Р. putida BS3701. Описано влияние загрязнителя и микробного взаимодействия на биометрические характеристики растений. В процессе деградации фенантрена защитный эффект в отношении растений увеличивался при взаимодействии исследованных штаммов-деструкторов родов Pseudomonas и Burkholderia по сравнению с результатами, полученными при интродукции только одного штамма Burkholderia sp. BS3702. В результате конкурентного взаимодействия плазмидосодержащих микроорганизмов-деструкторов рода Pseudomonas при совместном культивировании в процессе деградации нафталина наблюдалось снижение защитного эффекта в отношении растений. Научно-практическая значимость

Созданы растительно-микробные ассоциации («ВиО»- ячмень, «ВиО»-газонная трава) и показана их высокая эффективность в процессе очистки почвы от углеводородов нефти. Разработаны практические рекомендации по применению микробно-растительных ассоциаций «ВиО» - ячмень и «ВиО»- газонная трава in situ для фиторемедиации почв. В полевых испытаниях на территории нефтяных месторождений Ямало-Ненецкого автономного округа продемонстрирована эффективность предложенной технологии на основе микробно-растительной ассоциации «ВиО»-ячмень в отношении углеводородов нефти о чем имеются положительные заключения от ЗАО «Биоойл» и ООО «Газпромнефть-Ноябрьскнефтегаз» . Эффективность очистки составила 89% по сравнению с биопрепаратами ЗАО «Биоойл» (70-75%).

Кроме того, эффективность деградации нефти и нефтепродуктов микробным консорциумом «ВиО» была продемонстрирована в лабораторных испытаниях ООО «Газпромнефть-Восток» и ООО «Сибнефть Восток».

Апробация работы

Материалы диссертации докладывались на 16 конференциях: Биология-наука 21 века, 10-я Пущинская школа-конференция молодых учёных, 17-21 апреля 2006, Пущино; Школа-конференция «Современная биотехнология - защите окружающей среды», 12 сентября, 2006, Пущино; Forth International Conference on Science and Business, 15-18 October, 2007, Pushchino; Школа-семинар «Современные наукоемкие технологии: от идеи к внедрению» 29 октября - 4 ноября, 2007, Белгород; Международная научная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов», 7-11 апреля 2008, Москва; ISTC Workshop at the International Conference on Contamination Soil, ConSoil, Milan, Italy, 3-6 June, 2008; XII Internetional Congress of Bacteriology and Applied Microbiology, 5-9 August 2008, Istanbul; III International Conference on Microbial Diversity, 28 September - 05 October 2008, Perm; Fifth international conference «Science and Training for Biosafety», 6-9 October, 2008, Pushchino; Международная школа-конференция, посвященная 40-летию создания ГосНИИгенетика, 21-24 октября, 2008, Москва -Пущино; Биология-наука 21 века, 12-я Пущинская школа-конференция молодых учёных, 10-14 ноября, 2008, Пущино; Российский молодежный инновационный конвент. 9-10 декабря 2008, Москва; Системная биология Г1НЦ РАИ апрель 2009, Пущино; 3rd Congress of European Microbiologists «Microbes and Man - Interdependence and Future Challenges», June 28 - July 2, 2009, Gothenburg, Sweden; Современные биоаналитические системы, методы и технологии. 26-30 октября 2009, Пущино-Тула; ISTC Workshop at the International Conference on Contamination Soil, ConSoil, Austria, 21 - 25 September, 2010; II Тульский молодежный инновационный конвент, 28 октября, 2010, Тула.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 26 работ, в том числе 7 статей, заявка на получение патента РФ на изобретение и 18 тезисов.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из разделов «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты», «Обсуждение», «Выводы», «Список литературы» и «Приложение». Работа изложена на 135 страницах машинописного текста, включает 9 таблиц и 42 рисунка. Библиография насчитывает 136 наименований, из них 36 отечественных и 100 зарубежных работ.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Овчинникова, Анастасия Алексеевна

117 ВЫВОДЫ

1. При совместном культивировании Р. putidci KT2442(pNF142::TnM?c/-OTc) и Р. aureofaciens BS1393(pNF142::TnMoflf-OTc) в модельных системах, загрязненных нафталином, наблюдалась конкуренция между этими штаммами за интермедиат пути деградации - катехол, а взаимодействие штаммов-деструкторов Р. pulida BS3701 и Burkholderia sp.BS3702 в процессе деградации фенантрена выражалось в их кооперации.

2. Кооперация штаммов-деструкторов углеводородов нефти Р. putida BS3701 и Burkholderia sp.BS3702 в процессе деградации фенантрена приводила к повышению защитного эффекта в отношении растений, что выражалось в увеличении длины их побега, а при конкуренции микроорганизмов Р. putida KT2442(pNF142::TnA/orf-OTc) и Р. aureofaciens BS1393(pNF142::ToA/od-OTc) за катехол наблюдалось снижение защитного эффекта в отношении растений.

3. Установлено, что хемотаксис микроорганизмов в отношении углеводородов нефти может быть одним из факторов, влияющих на численность штаммов-деструкторов в ризосфере растений. В геноме исследованных штаммов Р.putida BS3701, F701, KT2442(pNF142::TnMoJ-OTc) и Р. aureofaciens В S13 93 (pN F142:: TmV/w/-OTc) были выявлены гены хемотаксиса, гомологичные ранее описанному гену nahY.

4. Среди 20 исследованных видов растений были выявлены наиболее устойчивые к нефтезагрязнению (газонная трава (Овсяница красная) и ячмень), которые были использованы для создания растительно-микробных ассоциаций.

5. Создана ассоциация микроорганизмов-деструкторов «ВиО», состоящая из Rhodococcus erythropolis S26, Acinetobacter baumannii 1B, Acinetobacter baumannii 7 и Pseudomonas putida F701, которая эффективно деградирует углеводороды нефти. При использовании растительно-микробных ассоциаций («ВиО»-ячмень или «ВиО»-газонная трава) эффективность деградации нефти возрастала по сравнению с применением только с микробной ассоциации.

6. В полевых испытаниях на территории Холмогорского нефтяного месторождения Ямало-Ненецкого автономного округа в период июнь-август 2008г наибольшая эффективность деградации нефти наблюдалась на участке, обработанном ассоциацией «ВиО» (89%) по сравнению с биопрепаратами фирмы ЗАО «Биоойл» (7075%).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Овчинникова, Анастасия Алексеевна, 2011 год

1. Арчегова И.Б. Рекультивация земель на Севере. Рекомендации по рекультивации земель на Крайнем Севере // Вып. 1. Изд. второе (дополненное). -Сыктывкар: УрО РАН. -1997.-34 с.

2. Балашова Н.В. Деградация фенантрена и нафталина бактериями родов Pseudomonas и Burkholderia II Дис. канд. биол. наук. Пущино, 2000.

3. Барышникова Л.М., Грищенков В.Г., Аринбасаров М.У., Шкидченко А.Н., Воронин A.M. биодеградация нефтепродуктов штаммами-деструкторами и их ассоциациями в жидкой среде./ Прикладная биохимия и микробиология. 2001. том 37, № 5, с.542-548

4. Биотехнология / Т. Г. Волова. Новосибирск: Изд-во Сибирского отделения Российской Академии наук, 1999. - 252 с.

5. Брезгунов В.Н., Завольский Л.Ю., Лазарев A.B., Попов В.Г. Хемотаксис бактерий. // Успехи микробиологии, 1989, № 23, с. 3-27.

6. Гарейшина А.З., Ахметшина СМ., Гараев И.Х, Комплексная технология ликвидациинефтяных загрязнений с дальнейшей рекулыивацией почвы.// Нефтяное х-во. — 1998. №2. - С. 69 - 70.

7. Геннадиев А.Н., Козин PLC., Пиковский Ю.М. Педохимия полициклических ароматических углеводородов. // Почвоведение, 1997, № 3, 290-300.

8. Геннадиев А.Н., Пиковский Ю.М., Флоровская В Н., Алексеева Т.А., Козин И.С., Оглоблина А.И., Рамепская М.Е., Теплицкая Т.А., Шурубор Е.И. Геохимия полициклических ароматических углеводородов в горных породах и почвах., М., Изд-во МГУ, 1996, 196 с.

9. Десяткин, A.A. Разработка технологии утилизации нефтяных шламов: Дис. канд. тех. наук. Уфа: Уфимский государственный нефтяной технический университет. - 2007 . -183 с.

10. И. Доналдсон Н. Химия и технология соединений нафталинового ряда., М., Наука. 1963,655 с.

11. Кацы Е.И. Генетико-биохимические и экологические аспекты подвижности и хемотаксиса у фитопатогенных, симбиотических и ассоциированных с растениями бактерий. // Успехи современной биологии, 1996, т. 116, в. 5, 579-593.

12. Кириллова Н.П., Кожевин П.А., Звягинцев Д.Г. Динамика накопления клубеньковых бактерий на корнях проростков гороха. // Микробиология, 1984, т. 53, в. 1, 117-122.

13. Клар Э. Полициклические ароматические углеводороды. М.: Химия, 1971. т. 1, 225 с.

14. Кравченко Л.В., Азарова Т.С., Макарова Н.М., Тихонович И.А. Роль триптофана в корневых экзометаболитах для фитостимулирующей активности ризобактерий // Микробиология. 2004. Т. 73. № 2. С. 195-198.

15. Кулакова И.И. О возможном механизме синтеза полициклических ароматических углеводородов в процессе эндогенного минералообразования. //Докл. АН СССР. 1982. т. 266, №4, 1001-1003

16. Курдиш И.К., Антонюк Т.С., Чуйко Н.В. Влияние некоторых факторов внешней среды на хемотаксис Bradyrhizobium Japonicum, Микробиология, 2001, т. 70, № I, 106-110.

17. Маниатис Т., Фрич Э., Самбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М., «Мир». 1984. 480с.

18. Метаболизм антропогенных токсикантов в высших растениях / Г.И. Квеситадзе, Г.А.Хатисашвили, Т.А. Садунишвили, З.Г. Евстигнеева; отв. Ред. В.О. Попов.; Инт биохимии им. А.Н. Баха. М.: Наука, 2005. - 199 с.

19. Молекулярные основы взаимоотношений ассоциативных микроорганизмов с растениями / отв. Ред. В. В. Игнатов.; Ин-т биохимии и физиологии растений и микроорганизмов. М.: Наука, 2005. - 262 с.

20. Морисон Р., Бойд Р. Органическая химия / М.: Мир, 1974, 1132 с.

21. Назаров A.B., Иларионов С.А. Потенциал использования микробно-растительного взаимодействия для биоремедиации / Биотехнология, №5. 2005. С. 54-62.

22. Нечаева И.А., Филонов А.Е., Ахметов Л.И., Пунтус И.Ф., Воронин А.М. Стимуляция микробной деструкции нефти путем внесения бактериальной ассоциации и минерального удобрения в модельной почве. 2008. Биотехнология. №6.

23. Определение концентрации нефти в почве методом инфракрасной спектрофотометрии: Методологические указания.- М.: Федеральный центр гигиеныи эпидемологиии Роспотребнадзора, 2006. 16с. под ред. JI.C. Кучурова, Е.И. Максакова.

24. Патыка В.Ф., Калиниченко А.Ф., Колмаз Ю.Т., Кислухина М.В. Роль азотфиксирующих микроорганизмов в повышении продую ивности сельскохозяйственных растений. // Микробиол. журнал, 1997, т. 59, № 4, 3-14.

25. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.: Мир. 1978. С. 14-33

26. Пунтус И.Ф., Филонов А.Е., Кошелева И.А., Гаязов P.P., Карпов A.B., Воронин A.M. Выделение и характеристика микроорганизмов-деструкторов полициклических ароматических углеводородов // Микробиология. 1997. Т. 66. № 2, Р. 269-272. ИЦ-9.

27. Растения и химические канцерогены., под ред. Слепяна Э.И., JI., Наука, 1979, 208 с.

28. Ровинский Ф.Я., Теплицкая Т.А. Алексеева Т.А. Фоновый мониторинг полициклических ароматических углеводородов., Гидрометеоиздат. Л., 1988, 224 с.

29. Скрябин Г.К., Старовойтов И.И. Альтернативный путь катаболизма нафталина Pseudomonas fluorescens И Докл. АН СССР. 1975. Т. 221. С. 493

30. Стокер Х.С., Сигер С.Л. //Химия окружающей среды. М.: Химия, 1982. С. 346-370.

31. Тихонов А.Н. Молекулярные моторы. Часть 1. Вращающиеся моторы живой клетки // СОЖ, 1999, No 6, с. 8-16.

32. Толкачев Н.З. Потенциальные возможности симбиотической азотфиксации при выращивании сои на юге Украины. // Микробиол. журнал, 1997, т. 59, 34-41.

33. Чуйко Н.В., Антонюк Т.С., Курдши И.К. Хемотаксис Bradyzhizobium japonicum к различным органическим соединениям. // Микробиология, 2002, т. 71, № 4, 460466.

34. Шульгин А.И. Эффективная технология рекультивации нарушенных земель //Экология и промышленность России. 2000. - №. 3. - С. 29 - 32.

35. Adler J. Method for measuring Chemotaxis and use of method to determine optimum condition for Chemotaxis by Escherichia coli // J. Gen. Microbiol., 1973, v. 74, N 1, 77-91

36. Al-Bashir D., Cseh T., Leduc R., Samson R. Effect of soil contaminant interactions on the biodégradation of naphthalene in flooded soil under denitrifying conditions. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1990. V. 34.P.414-419.

37. Alexander M. Biodegradation and Bioremediation. San Diego: Academic Press. -1994. -302 p.

38. Ames B., Lee F., Durston W. An improved bacterial test system for the detection and classification of mutagens and carcinogens. // Proc. Natiol. Acad. Sei. USA, 1973, v. 70, 782-786.

39. Ames B.N., Mclann J., Yamashaki E. Methods for detecting carcinogens and mutagens with Salmonella/ mammalian-microsome mutagenicity test. // Mutat. Res., 1975, v.31, 347-364

40. Ann C. Grimm and Caroline S. Harwood. Nah, a catabolic plasmid-encoded receptor required for Chemotaxis of Pseudomonas putida to the aromatic hydrocarbon naphthalene // Journal of bacteriology, May 1999, p. 3310-2216

41. Ann C. Grimm and Caroline S. Harwood. Chemotaxis of Pseudomonas spp. To the polyaromatic Hydrocarbon Naphthalene//Apply and environmental microbiology. Oct, 1997, p.4111-4115.

42. Aquilar J.M., Ashby A.M., Richards A.J., Loake G.J., Watson M.D., Shaw C.H. Chemotaxis of Rhizobium leguminosarum biovar phaseoli towards flavonoid inducers of the symbiotic nodulation genes. // J. Gen. Microbiol., 1998, v. 134, part 10, 27412746.

43. Armitage J., Schmitt R. Bacterial Chemotaxis: Rhodobacter sphaeroides and Sinorhizobium melilory variation on a theme? // Microbiology, 1997, v. 143, N 12, 3671-3682.

44. Ausubel F.M., Brent R„ Kingston R.E., Moore D.D., Seidman J.G., Smith J.A., Struhl K. (ed.), 1999. Shot Protocols in Molecular Biology. John Wiley and Sons, Inc. 4th ed., p. 1056.

45. Baird C. Polynuclear Aromatic Hydrocarbons (PAHs). 1995. In: Environmental chemistry. University of western Ontario. W.N. Freeman and Company. New York. P. 272-274.

46. Banks M.K. Rhizosphere Microbial Characterization in Petroleum-Contaminated Soil / M.K Banks, H. Mallede, K. Rathbone // Soil and Sediment Contamination. 2003. - V.3. - P.371-385.

47. Barbour W., Hattermann D. Chemotaxis of Bradyrhizobium japonicum to soybean exudates. // Appl. Environ. Microbiol., 1992, v. 57, 2635-2639.

48. Bioremediation: principles and applications / Ed. Crawford R.L., Crawford D.L.; New York: Cambridge University Press.- 1996. 412 p.

49. Bispo A., Jourdain M.J., Jauzein M. Toxicity and genotoxicity of industrial soils polluted by polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs). // Organic Chemistry, 2000, v. 30, 947-952.

50. Blumer M. Polycyclic aromatic compounds in nature. // J. Sci. American., 1976. v. 234, 35-45.

51. Bouwer E.J., Zehnder A.J.B. Bioremediation of organic compounds-putting microbial metabolism to work. // Tibtech.l993.V. 1 l.P.360-367.

52. Burken J.G. // phytoremediation: Transformation and control of contaminants. Canada: Wiley, 2003. P. 59-84

53. Caetano-Anolles G., Crist-Estes D., Bauer W.D. Chemotaxis of Rhizobium metiloti to the plant flavone luteolin requires functional modulation genes. // J. Bacteriol. 1988, v. 171,3164-3169.

54. Caetano-Anolles G., Wall L.G., Micheli A.T., Macchi E.M., Bauer W.D., Favelukes G. Role of motility and chemotaxis in efficiency of nodulation by Rhizobium meliloti. //Plant Physiology, 2001, v. 86, 1228-1235.

55. Cerniglia C.E. Biodégradation of polycyclic aromatic hydrocarbons // Biodégradation. 1992, N3,351-368.61.