Взаимодействие изоформ α-актинина с транскрипционным фактором ReiA/NF-kB тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Бабаков, Владимир Николаевич

• Бабаков, Владимир Николаевич
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бабаков, Владимир Николаевич

1. Введение

2. Обзор литературы В

2.1. Актиновый цитоскелет в культивируемых клетках В

2.1.1. Роль актин-связывающих белков в формировании актиновых структур

2.1.2. Регуляция взаимодействия актина и актин-связывающих белков.

2.1.3. Реорганизация актинового цитоскелета под действием внешних фактороЕ

2.2. Комплексы адгезии. Связь актиновых структур и сигнальных молекул

2.3. Участие актина и белков адгезионных контактов в ядерных событиях

2.4. Ядерно-цитоплазматический транспорт

2.5. Альфа-актинин

2.5.1. Фрагменты актинина

2.5.2. Роль а-актинина в формировании адгезионных контактов

2.5.3. Взаимодействие а-актинина с другими белками

2.5.4. Взаимодействие с Р1Р2/Р1Рз и Р13-киназой

2.5.5. Участие а-актинина в сигнальных системах

2.6. Транскрипционный фактор NF-kB. Участие в процессах адгезии

2.6.1. Регуляция активности транскрипционного комплекса NF-kB

2.6.2. Сигнальные каскады, вовлеченные в активацию NF-kB

2.7. Цели и задачи работы

3. Материалы и методы

3.1. Культивирование клеток

3.2. Трансфекция клеток

3.3. Получение субстратов

3.4. Иммунофлуоресценция

3.5. Электронная микроскопия

3.6. Субклеточное фракционирование

3.7. Иммунопреципитация

3.8. Электрофорез и иммуноблотинг

3.9. Получение клеточных экстрактов для аффинной хроматографии

3.10. Аффинная хроматография на колонке с иммобилизованным а-актинином

3.11. Блот-оверлей

3.12. Выделение ядерных экстрактов

1 3.12. Анализ ДНК-связывающей активности NF-кВ в ядерных экстрактах

4. Результаты

4.1. Распределение белков, фосфорилированных по тирозину npi 46 взаимодействии клеток А-431 с иммобилизованными лигандами

4.2. а-Актинин способен фосфорилироваться по тирозину и взаимодействует < 50 FAK

4.3. Распределение изоформ а-актинина и р65 субъединицы NF-кВ в клетка? 55 А-431 и НЕК

4.3.1. Действие цитохалазина D и вортманнина на клетки сопровождается 61 перераспределением p65/RelA и а-актинина

4.3.2. Распределение а-актинина-1 и а-актинина-4, слитых с GFP

4.4. Электронная микроскопия клеток А431, распластанных на фибронектине i 64 обработанных ЭФР

4.5. Субклеточное распределение р65 и р50 в клетках А

4.6. Взаимодействие p65/RelA с актинином in vitro

4.6.1. а-Актинин формирует комплексы с NF-кВ при иммунопреципитации

4.6.2. Аффинная хроматография на колонке с иммобилизованным а-актинином

4.6.3. Определение фрагмента а-актинина, ответственного за связывание с NF 72 кВ

4.7. Взаимодействие а-актинина-4 и NF-кВ в ядре

4.7.1. Иммунопреципитация из ядерных экстрактов

4.7.2. Исследование ДНК-связывающей активности NF-kB

5. Обсуждение

6. Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Взаимодействие изоформ α-актинина с транскрипционным фактором ReiA/NF-kB»

Одной из важных и активно развивающихся областей клеточной биологии является изучение актинового цитоскелета и его участия в регуляторных процессах. Цитоскелет играет значительную роль в поддержании формы клетки и в осуществлении многих её двигательных реакций, обеспечивающих такие клеточные функции, как деление, эндо- и экзоцитоз, перемещение клеток в пространстве, контакт их с субстратом и с другими клетками (Bershadsky, Vasiliev, 1988). В последнее время появилось много работ свидетельствующих об участии цитоскелета в регуляции экспрессии генов и проведении сигнала с поверхности клетки на ядро (Schmidt and Hall, 1998). Малые ГТФ-азы активируемые при взаимодействии лиганда с рецептором могут изменять пространственную организацию актинового цитоскелета (Ridley et al., 1992) через актин-связывающие белки, что может являться способом передачи сигнала в ядро, так как способность цитоскелета принимать различные формы пространственной организации может обеспечивать специфичность передаваемой информации (Puck et al., 1992). Однако, несмотря на большое число работ, посвященных роли цитоскелета в процессе передачи сигнала, роль самого цитоскелета до сих пор неясна. Большинство работ опираются на эксперименты, полученные при разрушении цитоскелета цитохалазином или нокодазолом (Арнаутов и Никольский, 1998), что по нашему мнению дает не всегда дает адекватные результаты. В литературе имеется мало работ, доказывающих непосредственное участие актинового цитоскелета и актин-связывающих белков в этих процессах.

Ряд сигнальных молекул непосредственно связывается с цитоскелетом (Yamada, Geiger, 1997). Белки цитоскелета и сигнальные молекулы имеют общие домены, предназначенные для белок-белковых взаимодействий (Mayer, Baltimore, 1993). Эти взаимодействия могут изменять конформацию белков цитоскелета и приводить к его пространственной реорганизации. Можно предполагать, что реорганизация является специфической реакцией цитоскелета на сигналы, поступающие в клетку от разных лиганд/рецепторных комплексов. К настоящему времени в литературе накоплено много данных, свидетельствующих о том, что действие разных лигандов на клетку вызывает перестройку актинового цитоскелета.

Однако, все эти данные были получены на разных клеточных линиях и в разных условиях, что не позволяет выявить какие-либо закономерности в реакции актинового цитоскелета. До настоящего времени остается неясным, какую роль цитоскелет играет в сложной системе биохимических каскадов сигнальных молекул и в активации генома. Является ли цитоскелет непосредственным передатчиком сигнала или матрицей, на которой формируются сложные сигнальные комплексы или, наконец, направляющими, по которым происходит перемещение белковых комплексов в ядро. На этот очень важный вопрос еще только предстоит ответить.

Трудности изучения данной проблемы обусловлены высокой естественной динамичностью актинового цитоскелета, присущей ему способностью перестраиваться в ответ на разнообразные воздействия. В частности, неопластическая трансформация приводит к значительным изменениям в состоянии актиновых филаментов (Bershadsky, Vasiliev, 1988). В последние годы важную роль в регуляции структуры актинового цитоскелета отводят членам Rho-семейства малых ГТФаз (Hall, 1994; Machesky and Hall, 1996), которые сами являются онкогенами или критическими участниками Ras-зависимых сигнальных путей, ведущих к трансформации (Zohn, 1998). Кроме того, поскольку на клетки, как в составе ткани, так и в условиях культуры, одновременно действует множество разнообразных лигандов, трудно вычленить результат действия только одного из них. В связи с этим возникает необходимость использования упрощенной и, в то же время, приближенной к естественным условиям животного организма модели, позволяющей вести наблюдение за результатом конкретного лиганд/рецепторного взаимодействия. В качестве такой модели может быть предложен естественный процесс адгезии клетки на субстрате, но в условиях, когда клетка прикрепляется и распластывается только на определенном иммобилизованном лиганде (Арэ, 2000). Этот подход дает возможность изучать реакцию системы микрофиламентов на активацию конкретных поверхностных рецепторов клетки, в том числе рецепторов, в норме не участвующих в адгезии. К таковым следует отнести рецепторы инсулина, тромбина, эпидермального, тромбоцитарного, фибробластного и других факторов роста, для которых показано взаимодействие с системой микрофиламентов (Carlsson et al., 1979, Mellstrom et al., 1983, Bochus and Stiles, 1984, Paves et al., 1990, Vouret-Craviari et al., 1998). С помощью такого подхода представлялось возможным установить степень зависимости организации актинового цитоскелета от действия на клетку различных иммобилизованных и свободных лигандов и выяснить, в какой степени распределение в клетке некоторых сигнальных молекул может быть связано с преобразованием актиновых структур.

В связи с этим в данной работе было предпринято исследование влияния элементов внеклеточного матрикса (ВКМ) фибронектина, ламинина 2/4 и антител к рецептору ЭФР при адгезии к ним клеток А431 на процессы фосфорилирования по тирозину ряда актин-связывающих белков, участвующих в формировании фокальных контактов. Особый интерес представляло выяснение роли взаимодействия транскрипционного фактора NF-кВ с актиновым цитоскелетом (Are et al., 2000). В данной работе было предпринято исследование механизмов взаимодействия транскрипционного фактора NF-кВ с актиновым цитоскелетом. В нашей лаборатории было показано, что транскрипционный фактор NF-кВ может ассоциироваться с актином in vitro и in vivo (Are et al., 2000). Кроме того, было установлено, что важный элемент деградации ингибиторной субъединицы 1кВ-а и активации NF-кВ - протеасомы - способен прямо взаимодействовать с F-актином (Галкин и др., 1998а, 19986, 1999, 2000). В связи с тем, что р65-субъединица NF-кВ обнаружена в числе других белков, взаимодействующих с актином, оставался неясным следующий вопрос: взаимодействует ли NF-кВ с актиновым цитоскелетом прямо или его взаимодействие опосредуется какими-либо актин-связывающими белками? Несмотря на большое число работ, посвященных транскрипционному фактору NF-кВ, мало известно о его цитоплазматической локализации и путях транспорта его в ядро. Кроме того, специфические компоненты сигнальных каскадов, ответственные за регуляцию NF-кВ, в большой степени неизвестны. Мы предположили, что взаимодействие NF-кВ с актиновым цитоскелетом может осуществляться через а-актинин - актин-связывающий белок, найденный в фокальных и межклеточных контактах и вдоль актиновых филаментов. Кроме того, протеинкиназа МЕКК1, которая является одним из активаторов NF-кВ, прямо взаимодействует с а-актинином (Christerson et al., 1999). В немышечных клетках присутствуют две изоформы а-актинина (Otey, Carpen, 2004): а-актинин-1 и недавно открытая изоформа а-актинин-4 (Honda et al., 1998), и вполне вероятно, что NF-кВ может взаимодействовать только с одной из этих изоформ. Поэтому в данной работе предпринята попытка определить роль фосфорилирования по тирозину ряда актин-связывающих белков в процессе формирования фокальных контактов и в процессах активации транскрипционного фактора NF-kB.

2. Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Бабаков, Владимир Николаевич

6. Выводы:

1. Немышечный а-актинин способен фосфорилироваться по тирозину киназой фокальных контактов при адгезии клеток А431 на фибронектине, ламинине 2/4 и антителах к рецептору ЭФР. Фосфорилирование а-актинина не влияет на связывание с NF-kB.

2. В клетках эпидермоидной карциномы человека линии А431 и в эмбриональных клетках почки человека линии НЕК293 p65/RelA субъединица транскрипционного фактора NF-кВ локализуется совместно с а-актинином-4. При действии на клетки цитохалазина D или вортманнина часть клеточного пула этих белков накапливается в ядре. При действии на клетки активаторов NF-кВ, а-актинин-4 и p65/RelA совместно мигрируют в ядро. а-Актинин-4, но не а-актинин-1, способен накапливаться в ядре при действии на клетки активаторов NF-kB.

3. а-Актинин-4, но не а-актинин-1, способен формировать иммунные комплексы с субъединицами p65/RelA и р50 NF-кВ и не формирует с их ингибиторной субъединицей 1кВ-а.

4. р65 и р50 субъединицы NF-кВ, но не ингибиторная субъединица 1кВ-а способны связываться с иммобилизованным на колонке гладкомышечным а-актинином. Все субъединицы комплекса NF-кВ могут взаимодействовать с полноразмерным а-актинином, но только р65 субъединица взаимодействует с 53 кДа фрагментом а-актинина.

5. Комплекс NF-кВ и а-актинина-4, выявляемый реакцией иммунопреципитации, сохраняется в ядерных экстрактах. Антитела к а-актинину-4 препятствуют формированию ряда ДНК-белковых комплексов при взаимодействии белков ядерных экстрактов с олигонуклеотидом, специфичным для NF-kB.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бабаков, Владимир Николаевич, 2004 год

1. Арнаутов A.M., Никольский Н.Н. 1998. Транспорт в ядро изоформ р42 и р44 MAP киназы, вызванный фактором роста, требует наличия интактного актинового цитоскелета. Цитология. 40 (7): 639-647.

2. Арэ А.Ф. 2000. Взаимодействие поверхностных рецепторов клетки с различными иммобилизованными и свободными лигандами определяет структуру актинового цитоскелета. Диссертация на соискание ученой степени канд. биол. наук. С.-Петербург.

3. Галкин В. Э. 1999. Взаимодействие протеасом и а-РНП частиц с фибриллярным актином. Диссертация на соискание ученой степени канд. биол. наук. С.-Петербург.

4. Галкин В.Э., Туроверова Л.В., Константинова И.М., Пинаев Г.П. 1998а. Взаимодействие просом с фибриллярныи актином. Цитология. 40: 161-166.

5. Галкин В.Э., Туроверова Л.В., Константинова И.М., Пинаев Г.П. 19986. 26S-рибонуклеопротеиновый комплекс (268-протеасома) непосредственно взаимодействует с фибриллярным актином. Цитология. 40: 618-626.

6. Железнова Н.Н., Меликова М.С., Харченко М.В., Никольский Н.Н., Корнилова Е.С. 2003. Роль фосфатидилинозитол-3-киназ p85/pl 10 и hVPS34 в эндоцитозе ЭФР-рецепторных комплексов. Цитология 45: 574-581.

7. Марзлаф У., Хуан Р. 1987. Транскрипция РНК в изолированных ядрах. В кн.: Транскрипция и трансляция. «Мир». 111-159.

8. Сорокин А.Б., Нестеров A.M., Соркин А.Д., Игнатова Т.Н., Галактионов К.И., Кудрявцева Н.В. 1989. Получение и характеристика моноклональных антител к наружному домену рецептора ЭФР эпидермоидной карциномы человека А431. Цитология. 31: 549-555.

9. Are A.F., Galkin V.E., Pospelova T.V., Pinaev G.P. 2000. The RelA/p65 subunit of NF-кВ interacts with actin-containing structures. Exp. Cell Res. 256: 533-544.

10. Are A., Pinaev G., Burova E., Lindberg U. 2001. Attachment of A431 cells on immobilized antibodies to the EGF receptor promotes cell spreading and reorganization of the microfilament system. Cell Motil. Cytoskelet. 48: 24-36.

11. A.Asada M, Irie K, Morimoto K, Yamada A, Ikeda W, Takeuchi M, Takai Y. 2003. ADIP, a novel Afadin- and alpha-actinin-binding protein localized at cell-cell adherens junctions. 3 Biol Chem 278:4103- 4111.

12. Ash, J.F., Louvard, D., Singer, S.J. 1977. Antibody-induced linkages of plasma membrane proteins to intracellular actomyosin-containing filaments in cultured fibroblasts. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 74: 5584-5588.

13. Batchelor C.L., Woodward A.M., Crouch D.H. 2004. Nuclear ERM (ezrin, radixin, moesin) proteins: regulation by cell density and nuclear import. Exp Cell Res. 296:208-222.

14. Benoliel, A.-M., Kahn-Perles, В., Imbert, J., Verrando, P. 1997. Insulin stimulates haptotactic migration of human epidermal keratinocytes through activation of NF-kappaB transcription factor. J. Cell Sci. 110: 2089-2097.

15. Ben-Ze'ev A. 1997. Cytoskeletal and adhesion proteins as tumor suppressors. Curr Opin Cell Biol. 9:99-108.

16. Beraud C, Henzel WJ, Baeuerle PA. 1999. Involvement of regulatory and catalytic subunits of phosphoinositide 3-kinase in NF-kappaB activation. Proc Natl Acad Sci USA. 96:429-434.

17. Bershadsky, A.D., Vasiliev, J.M. 1988. Cytoskeleton. New York: Plenum Press, pp. 298.

18. Bockus, B.J., Stiles, C.D. 1984. Regulation of cytoskeletal architecture by platelet-derived growth factor, insulin and epidermal growth factor. Exp. Cell Res. 153: 186-197.

19. Bourguignon, L.Y.W., Bourguignon, G.J. 1984. Capping and the cytoskeleton. Int. Rev. Cyt. 87: 195-224.

20. Bradford M.M. 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72: 248-254.

21. Cao Y., Kang Q., Zolkiewska A. 2001. Metalloprotease-disintegrin ADAM 12 interacts with alpha-actinin-1. Biochem J. 357 : 353-361.

22. Carlsson L, Nystrom LE, Lindberg U, Kannan KK, Cid-Dresdner H, Lovgren S. 1976. Crystallization of a non-muscle actin. J Mol Biol. 105:353-66.

23. Chan, А.Г., Raft, S., Bailly, M., Wyckoff, J.B., Segall, J.E., Condeelis, J.S. 1998. EGF stimulates an increase in actin nucleation and filament number at the leading edge of the lamellipod in mammary adenocarcinoma cells. J. Cell Sci. Ill: 199211.

24. Chen N.X., Geist D.J., Genetos D.C., Pavalko F.M., Duncan R.L. 2003. Fluid shear-induced NFkappaB translocation in osteoblasts is mediated by intracellular calcium release. Bone. 33:399-410.

25. Christerson L.B., Vanderbilt C.A., Cobb M.H. 1999. MEKK1 interacts with alpha-actinin and localizes to stress fibers and focal adhesions. Cell Motil Cytoskeleton. 43:186-198.

26. Clark T.G., Merriam R.W. 1977. Diffusible and bound actin nuclei of Xenopus laevis oocytes. Cell. 12:883-991.

27. Corgan A.M., Singleton C„ Santoso C.B., Greenwood J. A. 2004. Phosphoinositides differentially regulate alpha-actinin flexibility and function. Biochem J. 378 -.1067-1072.

28. Crawford A.W., Michelsen J.W., Beckerle M.C. 1992. An interaction between zyxin and alpha-actinin. J Cell Biol 116:1381-1393.

29. AA.Danilinc S., Bitterman H., Rahat M.A., Kinarty A., Rosenzweig D., Nitza L. 2003. Hypoxia inactivates inducible nitric oxide synthase in mouse macrophages by disrupting its interaction with alpha-actinin 4. J Immunol 171:3225-3232.

30. M.Deng J., Miller S.A., WangH.Y., Xia W., Wen Y., ZhouB.P., Li Y., Lin S.Y., Hung M. C. 2002. beta-catenin interacts with and inhibits NF-kappa В in human colon and breast cancer. Cancer Cell. 2:323-334.

31. DiDonato, J.A., Hayakawa M., Rothwarf D.M., Zandi E., and Karin M. 1997. A cytokine-responsive IkappaB kinase that activates the transcription factor NF-kappaB. Nature.388:548-554.

32. Eck, S.L., Perkins, N.D., Carr, D.P., Nabel, G.J. 1993. Inhibition ofphorbol ester-induced cellular adhesion by competitive binding of NF-kappa В in vivo. Mol. Cell Biol. 13:6530-6536.

33. El-Husseini A.E., Kwasnicka D., Yamada Т., Hirohashi S., Vincent S.R. 2000. BERP, a novel ring finger protein, binds to alpha-actinin-4. Biochem Biophys Res Commun. 267:906-911.

34. Feng S., Resendiz J.C., Christodoulides N., Lu X., Arboleda D., Berndt M.C., Kroll M.H. 2002. Pathological shear stress stimulates the tyrosine phosphorylation of alpha-actinin associated with the glycoprotein Ib-IX complex. Biochemistry 41:1100-1108.

35. Feramisco J.R., Burridge K. 1980. A rapid purification of alpha-actinin, filamin, and a 130,000-dalton protein from smooth muscle. J Biol Chem. 255 :1194-1199.

36. Garcia-Garcia E., Sanchez-Mejorada G., Rosales C. 2001. Phosphatidylinositol 3-kinase and ERK are required for NF-kappaB activation but not for phagocytosis. J Leukoc Biol. 70:649-658.

37. Gautreau A, Louvard D, Arpin M. 2002 ERM proteins and NF2 tumor suppressor: the Yin and Yang of cortical actin organization and cell growth signaling. Curr Opin Cell Biol. 14:104-9.

38. Geiger, В., Yehuda-Levenberg, S., Bershadsky, A.D. 1995 Molecular interactions in the submembrane plaque of cell-cell and cell-matrix adhesions. Acta Anat. 154: 46-62.

39. Gonzalez A.M., Otey C„ Edlund M., Jones J.C. 2001. Interactions of a hemidesmosome component and actinin family members. J Cell Sci. 114: 4197-4206.

40. Gorlich D, Kutay U. 1999. Transport between the cell nucleus and the cytoplasm. Annu Rev Cell Dev Biol 15:607-660.

41. Gounon P., Karsenti E. 1981. Involvement of contractile proteins in the changes in consistency of oocyte nucleoplasm of the newt Pleurodeles waltlii. J Cell Biol. 88:410-421.

42. Greene D.K., Tumova S., Couchman J.R., Woods A. 2003. Syndecan-4 associates with alpha-actinin. J Biol Chem 278:7617-7623.

43. Greenwood J.A., Theibert А.В., Prestwich G.D., Murphy-Ullrich J.E. 2000. Restructuring of focal adhesion plaques by PI 3-kinase. Regulation by Ptdlns (3,4,5)-p(3) binding to alpha-actinin. J Cell Biol 150:627- 642.

44. Greenwood J.A. 2003. Phosphoinositide binding inhibits alpha-actinin bundling activity. J Biol Chem 278:24039 -24045.

45. Hall, A. 1994. Small GTP-binding proteins and the regulation of the actin cytoskeleton. Annu. Rev. Cell Biol. 10: 31-54.

46. Hartwig J.H., Kwiatkowski D.J. 1991 Actin-binding proteins. Curr Opin Cell Biol. 3:87-97.bA.Hayden M.S., Ghosh S. 2004. Signaling to NF-kappaB. Genes Dev. 18:2195-2224.

47. Hedberg, K.M., Bengtsson, Т., Safiejko-Mroczka, В., Bell, P.B., Lindroth, M. 1993. PDGF and neomycin induce similar changes in the actin cytoskeleton in human fibroblasts. Cell Motil. Cytoskelet. 24: 139-149.

48. Heiska L., Kantor C., Parr Т., Critchley D.R., Vilja P., Gahmberg C.G., Carpen O. 1996. Binding of the cytoplasmic domain of intercellular adhesion molecule-2 (ICAM-2) to alpha-actinin. J Biol Chem 271:26214 -26219.

49. Herrenknecht К., Ozawa M, Eckerskorn С., Lottspeich F., Lenter M., Kemler R. 1991. The uvomorulin-anchorage protein alpha catenin is a vinculin homologue. Proc Natl Acad Sci USA. 88:9156-9160.

50. Honda K., Yamada Т., Endo R., Ino Y., Gotoh M., Tsuda H., Yamada Y., Chiba H., Hirohashi S. 1998. Actinin-4, a novel actin-bundling protein associated with cell motility and cancer invasion. J Cell Biol. 140: 1383-1393.

51. Is las S., Vega J., Ponce L., Gonzalez-Mariscal L. 2002. Nuclear localization of the tight junction protein ZO-2 in epithelial cells. Exp Cell Res. 274 :138-148.

52. Kim J.H., Lee-Kwon W., Park J.B., Ryu S.H., Yun C.H., Donowitz M. 2002. Ca(2)-dependent inhibition of Na/H exchanger 3 (NHE3) requires an NHE3-E3KARP-alpha-actinin-4 complex for oligomerization and endocytosis. J Biol Chem 277:23714-23724.

53. Kimura Т., Hashimoto /., Yamamoto A., Nishikawa M., Fujisawa J.I. 2000. Rev-dependent association of the intron-containing HIV-1 gag mRNA with the nuclear actin bundles and the inhibition of its nucleocytoplasmic transport by latrunculin

54. B. Genes Cells. 5:289-307.

55. Knudsen K.A., Soler A.P. Johnson K.R., Wheelock M.J. 1995. Interaction of alpha-actinin with the cadherin/catenin cell-cell adhesion complex via alpha-catenin. J Cell Biol 130:67-77.

56. Krappmann, D., F. Emmerich, U. Kordes, E. Scharschmidt, B. Dorken, and

57. C.Scheidereit. 1999. Molecular mechanisms of constitutive NF-kappaB/Rel activation in Hodgkin/Reed-Sternberg cells.Oncogene. 18:943-953.

58. Ze.Krauss S. W., Chasis J.A, Rogers C, Mohandas N, Krockmalnic G, Penman S.1997. Structural protein 4.1 is located in mammalian centrosomes. Proc Natl Acad Sci USA. 94:7297-7302.

59. Kremerskothen J., Teber I., Wendholt D., Liedtke Т., Bockers T.M., Barnekow A. < 2002. Brain-specific splicing of alpha-actinin 1 (ACTN1) mRNA. Biochem

60. Biophys Res Commun. 295:678-681.

61. Kwiatkovska, K., Khrebtukova, I.A., Gudkova, D.A., Pinaev, G.P., Sobota, A. 1991. Actin-binding proteins involved in the capping of epidermal growth factor receptors in A-431 cells. Exp. Cell Res. 196: 255-263.

62. Laemmli U.K. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227: 680-685.

63. Lallena M.J., Martinez C., Valcarcel J., Correas I. 1998. Functional association of nuclear protein 4.1 with pre-mRNA splicing factors. J Cell Sci. 111:1963-1971.

64. Las sing I., Lindberg U. 1985. Specific interaction between phosphatidylinositol 4,5 bisphosphate and profilactin. Nature. 314 : 604-606.

65. Lazarides E., Lindberg U. 1974. Actin is the naturally occurring inhibitor of deoxyribonuclease I. Proc Natl Acad Sci USA. 71:4742-6.

66. Ling, L., Z. Cao, D.V. Goeddel. 1998. NF-kB-inducing kinase activates IKKa by phosphorylation of Ser 176. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 3792-3797.

67. Luikart S., Masri M., Wahl D., Hinkel Т., Beck J.M., Gyetko M.R., Gupta P., Oegema T. 2002. Urokinase is required for the formation of mactinin, an alpha-actinin fragment that promotes monocyte/macrophage maturation. Biochim Biophys Acta. 1591: 99-107.

68. LuikartS., WahlD., MasriM., Oegema T. 1999. A fragment of a-actinin promotes• monocyte/macrophage in vitro. Exp. Hematol. 27 : 337-344.

69. Lundblad, JR., R.P. Kwok, M. E. Laurance, M.L. Harter, and R. H. Goodman.1995. Adenoviral ElA-assoeiated protein p300 as a functional homologue of thetranscriptional co-activator СВР. Nature (London) 374: 85-88.

70. Machesky, L.M., Hall, A. 1996. Rho: a connection between membrane receptor signalling and the cytoskeleton. Trends Cell. Biol. 6: 304-310.

71. Matsudaira P, Janmey P. 1988. Pieces in the actin-severing protein puzzle. Cell. 54:139-40.

72. Matsudaira P. 1994 The fimbrin and alpha-actinin footprint on actin. J Cell Biol. 126:285-7.

73. Mattaj IW, Englmeier L. 1998. Nucleocytoplasmic transport: the soluble phase. Annu Rev Biochem. 67:265-306.

74. Mayer, B.J., Baltimore, D. 1993. Signalling through SH2 and SH3 domains. Trends Cell Biol. 3: 8-13.

75. G. Pascual, A. Motiwala, H. Zhu, M. Mann and A.M. Manning. 1999. IkappaB * kinase (IKK)-associated protein 1, a common component of the heterogeneous

76. K complex. Mol. Cell. Biol. 19:1526-1538.

77. Mercurio, F., H. Zhu, B.W. Murray, A. Shevchenko, B. L. Bennet, J. Li, D.B. Young, M. Barbosa, M. Mann, A. Manning and A. Rao. 1997. IKK-1 and IKK-2: cytokine-activated IkappaB kinases essential for NF-kappaB activation. Science 278:860-866.

78. Miller B.S., Zandi E. 2001. Complete reconstitution of human IkappaB kinase (IKK) complex in yeast. Assessment of its stoichiometry and the role of IKKgamma on the complex activity in the absence of stimulation. J Biol Chem. 276:36320-36326.

79. Miyamoto, S., Teramoto, H., Coso, O.A., Gutkind, J.S., Burbelo, P.D., Akiyama, S.K., Yamada, K.M. 1995. Inegrin function: molecular hierarchies of cytoskeletal and signaling molecules. J. Cell Biol. 131: 791-805.

80. Mukai H, Toshimori M, Shibata H, Takanaga H, Kitagawa Mr Miyahara M, Shimakawa M, Ono Y. 1997. Interaction of PKN with alpha-actinin. J Biol Chem 272:4740—4746.

81. Mykkanen O.M., Gronholm M., Ronty M, Lalowski M., Salmikangas P., Suila H., Carpen O. 2001. Characterization of human palladin, a microfilament-associated protein. Mol Biol Cell 12:3060-3073.

82. Nakano, #., M. Shindo, S. Sakon, S. Nishinaka, M. Mishara, H.Yagita, K. Okumura. Differential regulation of IkB kinase a and b by two upstream kinases and mitogen-activated protein kinase/ERK kinase-kinase 1. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:3537-3542.

83. Narayanan R., Higgins K.A., Perez J.R., Coleman T.A., Rosen C.A. 1993. Evidence for differential functions of the p50 and p65 subunits of NF-kappa В

84. Niggli V., Djafarzadeh S., Keller H. 1999. Stimulus-induced selective association of actin-associated proteins (alpha-actinin) and protein kinase С isoforms with the cytoskeleton of human neutrophils. Exp Cell Res. 250:558-568.

85. Nikolopoulos S.N., Spengler B.A., Kisselbach K., Evans A.E., Biedler J.L., Ross R.A. 2000. The human non-muscle alpha-actinin protein encoded by the ACTN4 gene suppresses tumorigenicity of human neuroblastoma cells. Oncogene. 19 : 380-386.

86. Nix D.A., Beckerle M.C. 1997. Nuclear-cytoplasmic shuttling of the focal contact protein, zyxin: a potential mechanism for communication between sites of cell adhesion and the nucleus. J Cell Biol. 138:1139-1147.

87. Nix D.A., Fradelizi J., Bockholt S., Menichi В., Louvard D., Friederich E., Beckerle M. C. 2001. Targeting of zyxin to sites of actin membrane interaction and to the nucleus. J Biol Chem. 276:34759-34767.

88. Ohtsubo M., Takayanagi A., Gamou S., Shimizu N. 2000. Interruption of NFkappaB-STATl signaling mediates EGF-induced cell-cycle arrest. J Cell Physiol. 184:131-137.

89. Olave I.A., Reek-Peterson S.L., Crabtree G.R 2002. Nuclear actin and actin-related proteins in chromatin remodeling. Annu Rev Biochem.71:755-781

90. Olsnes S, Klingenberg O, Wiedlocha A. 2003. Transport of exogenous growth factors and cytokines to the cytosol and to the nucleus. Physiol Rev 83:163-182.

91. Otey C.A., Carpen O. 2004. Alpha-actinin revisited: A fresh look at an old player. Cell Motil Cytoskeleton. 58: 104-111.

92. Otey C.A., Pavalko F.M., Burridge K. 1990. An interaction between alpha-actinin and the beta 1 integrin subunit in vitro. J Cell Biol 111 :721-729.

93. Ozes, O.N., L.D. Mayo, J. A. Gustin, S.R. Pfeffer, L.M. Pfeffer, and D.B. Donner. 1999. NF-kappaB activation by tumour necrosis factor requires the Akt serine-threonine kinase. Nature. 401:82-85.

94. Palm S.L., Furcht L.T. 1983 Production of laminin and fibronectin by Schwannoma cells: cell protein interactions in vitro and protein localization in peripheral nerve in vivo. J. Cell Biol. 96: 1218-1226.

95. Palombella V.J., Rando O.J., Goldberg A.L., Maniatis T. 1994. The ubiquitin-proteasome pathway is required for processing the NF-kappa B1 precursor protein and the activation of NF-kappa B. Cell. 78: 773-785.

96. Parast M.M., Otey C.A. 2000. Characterization of palladin, a novel protein localized to stress fibers and cell adhesions. J Cell Biol 150:643- 656.

97. Patrie K.M., Drescher A.J., Welihinda A., Mundel P., Margolis B. 2002. Interaction of two actin-binding proteins, synaptopodin and alpha-actinin-4, with the tight junction protein MAGI-1. J Biol Chem277:30183-30190.

98. Pavalko F.M., LaRoche S.M. 1993. Activation of human neutrophils induces an interaction between the integrin beta 2-subunit (CD 18) and the actin binding protein alpha-actinin. J Immunol 151:3795-3807.

99. Paves, H„ Neuman, Т., Metsis, M., Saarma, M. 1990. Nerve growth factor-induced rapid reorganization of microfilaments in PC 12 cells: Possible roles of different second messenger systems. Exp. Cell Res. 186. 218-226.

100. Pawson, T. 1995. Protein modules and signalling networks. Nature. 373: 573-580.

101. Pederson T, Aebi U. 2003. Actin in the nucleus, what form and what for? J Struct Biol; 140:3-9.

102. Percipalle P, Zhao J, Pope B, Weeds A, Lindberg U, Daneholt B. 2001 Actin bound to the heterogeneous nuclear ribonucleoprotein hrp36 is associated with Balbiani ring mRNA from the gene to polysomes. J Cell Biol. 153:229-36.

103. Perona, R., Montaner, S., Saniger, L., Sanchez-Perez, /., Bravo, R., Lacal, J.C. 1997. Activation of the nuclear factor-kappa В by Rho, Cdc42, and Rac-1 proteins. Genes Dev. 11: 463-475.

104. Pestic-Dragovich L., Stojiljkovic L., Philimonenko A.A., Nowak G., Ke Y., Settlage R.E., Shabanowitz J., Hunt D.F., Hozak P., de Lanerolle P. 2000. A myosin I isoform in the nucleus. Science. 290 :337-341.

105. Petit V., Thiery J.P. 2000. Focal adhesions: structure and dynamics. Biol Cell. 92:477-494.

106. Pollard T.D., Cooper J.A. 1986. Actin and actin-binding proteins. A critical evaluation of mechanisms and functions. Annu Rev Biochem.55:987-1035.

107. Pomies P, Louis HA, Beckerle MC. 1997. CRP1, a LIM domain protein implicated in muscle differentiation, interacts with alpha-actinin. J Cell Biol 139:157-168.

108. Риск, T.T., Krystosek, A. 1992. Role of the cytoskeleton in genome regulation and cancer. Int. Rev. Cyt. 132: 75-108.

109. Qwarnstrom, E.E., Ostberg, C.O., Turk, G.L., Richardson, C.A., Bomsztyk, K. 1994. Fibronectin attachment activates the NF-kappa В p50/p65 heterodimer in fibroblasts and smooth muscle cells. J. Biol. Chem. 269: 30765-30768.

110. Rando О J, Zhao K, JanmeyP, Crabtree GR. 2002. Phosphatidylinositol-dependent actin filament binding by the SWI/SNF-like BAF chromatin remodeling complex. Proc Natl Acad Sci USA. 99:2824-2829.

111. Regnier, C.H., H.Y. Song, X. Gao, D. V. Goeddel, Z. Cao, and M. Rothe. 1997. Identification and characterization of an IkappaB kinase. Cell. 90:373-383.

112. Resendiz J.C., Feng S., Ji G., Kroll M.H. 2004. von Willebrand factor binding to platelet glycoprotein Ib-IX-V stimulates the assembly of an alpha-actinin-based signaling complex. J Thromb Haemost 2:161-169.

113. Ridley, A.J., Hall, A. 1992. The small GTP-binding protein rho regulates the assembly of focal adhesions and actin stress fibers in responce to growth factors. Cell. 70: 389-399.

114. Romashkova, J.A. and S. S. Makarov. 1999. NF-kappaB is a target of АКТ in anti-apoptotic PDGF signalling. Nature. 401:86-90.

115. Ruoslahti E, Vuento M, Engvall E. 1978. Interaction of fibronectin with antibodies and collagen in radioimmunoassay. Biochim Biophys Acta 534: 210218.

116. Rustom A., Sqffrich R., Markovic I., Walther P., Gerdes H.H. 2004. Nanotubular highways for intercellular organelle transport. Science. 303:10071010.

117. Schmidt A., Hall M. H. 1998. Signalling to the actin cytoskeleton. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 14: 305-338

118. Sen R., Baltimore D. 1986. Inducibility of к immunoglobulin enhancer-binding protein NF-kB by a post-translational mechanism. Cell. 47:921-928.

119. Shibasaki F., Fukami K., Fukui Y., Takenawa T. 1994. Phosphatidylinositol 3-kinase binds to alpha-actinin through the p85 subunit. Biochem J 302:551-557.

120. Singer /./., Kawka, D.W., Scott, S., Mumford, R.A., Lark, M.W. 1987. The fibronectin cell attachment sequence Arg-Gly-Asp-Ser promotes focal contact formation during early fibroblast attachment and spreading. J. Cell Biol. 104: 573-584.

121. Sobue K., Fugio, Y., Kanda, K. 1988. Tumor promoter induces reorganization of actin filaments and calspectin (fodrin or nonerythroid spectrin) in 3T3 cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 85: 482-486.

122. Tarn W.F., Sen J., Sen R. 2001. NF-kappa В in cell life and death. In books: Transcription factors: normal and malignant development in blood cells. 551-570. Wiley-Liss, Inc.

123. Tanaka M., Fuentes M.E., Yamaguchi K, Durnin M.H., Dalrymple S.A., Hardy K.L., Goeddel D.V. 1999. Embryonic lethality, liver degeneration, and impaired NF-kappa В activation in IKK-beta-deficient mice. Immunity. 10 : 421429.

124. Towbin H., Staehelin Т., Gordon J. 1979. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 76: 4350-4354.

125. Vallenius Т., Luukko K, Makela T.P. 2000. CLP-36 PDZ-LIM protein associates with nonmuscle alpha-actinin-1 and alpha-actinin-4. J Biol Chem 275:11100-11105.

126. VanhaesebroeckB, Leevers S.J, Panayotou G., Waterfield M.D. 1997. Phosphoinositide 3-kinases: a conserved family of signal transducers. Trends Biochem Sci. 22:267-272.

127. Vouret-Craviari, V., Boquet, P., Pouyssegur, J., Van Obberghen-Schilling, E. 1998. Regulation of the actin cytoskeleton by thrombin in human endothelial cells: role of Rho proteins in endothelial barrier function. Mol. Biol. Cell. 9: 2639-2653.

128. Wachsstock D.H., Wilkins J.A., Lin S. 1987. Specific interaction of vinculin with alpha-actinin. Biochem Biophys Res Commun 146:554 -560.

129. Wada A., Fukuda M, Mishima M., Nishida E. 1998. Nuclear export of actin: a novel mechanism regulating the subcellular localization of a major cytoskeletal protein. EMBO J 17:1635-1641.

130. Walikonis R.S., Oguni A., Khorosheva E.M., Jeng C.J., Asuncion F.J., Kennedy M.B. 2001. Densin-180 forms a ternary complex with the (alpha)-subunit of Ca2/calmodulin-dependent protein kinase II and (alpha)-actinin. J Neurosci 21:423-433.

131. Wang, D„ A.S. Baldwin. 1998. Activation of NF-kB ^dependent transcription factor by tumor-necrosis factor-alpha is mediated through phosphorylation of RelA/p65 on serine 529. J. Biol. Chem. 273: 29411-29416.

132. Weed S.A., Parsons J.Т. 2001 Cortactin: coupling membrane dynamics to cortical actin assembly. Oncogene. 20:6418-34.

133. Wei Y, Renard C.A., Labalette C„ Wu Y, Levy L„ Neuveut C., Prieur X, Flajolet M., Prigent S., Buendia M.A. 2003. Identification of the LIM protein FHL2 as a coactivator of beta-catenin. J Biol Chem. 278:5188-5194.

134. Westermark, В., Magnusson, A., Heldin, C.-H. 1982. Effect of epidermal growth factor on membrane motility and cell locomotion in cultures of human clonal glioma cells. J. Neurosci. Res. 8: 491-507.

135. Woronicz, J.D., X. Gao, Z. Cao, M. Rothe, and D.V.Goeddel. 1997. IkappaB kinase-beta: NF-kappaB activation and complex formation with IkappaB kinase-alpha and NIK. Science. 278:866-869.

136. Wyszynski M, Lin J, Rao A, Nigh E, Beggs AH, Craig AM, Sheng M. 1997. Competitive binding of alpha-actinin and calmodulin to the NMDA receptor. Nature 385:439^142.

137. Xu, J., Zutter, M.M., Santoro, S.A., Clark, R.A.F. 1998. A three-dimensional collagen lattice activates NF-kappa В in human fibroblasts: role in integrin alpha2 gene expression and tissue remodeling. J. Cell Biol. 140: 709-719

138. Yamada, K.M., Geiger, B. 1997. Molecular interactions in cell adhesion complexes. Curr. Opin. Cell Biol. 9: 76-85.

139. Yang F, Tang E, Guan K, Wang CY. 2003. IKK beta plays an essential role in the phosphorylation of RelA/p65 on serine 536 induced by lipopolysaccharide. J Immunol. 170:5630-5635.

140. Ye bra, M., Filardo, E.J., Ваупа, E.M., Kawahara, E., Becker, J.C., Cheresh, D.A. 1995. Induction of carcinoma cell migration on vitronectin by NF-kappa B-dependent gene expression. Mol. Biol. Cell. 6: 841-850.

141. Zhang S, Buder K, Burkhardt C, Schlott B, Gorlach M, Grosse F. 2002 Nuclear DNA helicase II/RNA helicase A binds to filamentous actin. J Biol Chem. 277:843-53

142. Zohn, I.M., Campbell, S.I., Khosravi-Far, R., Rossman, K.I., Der, C.J. 1998. Rho family proteins and Ras transformation: the RHOad less traveled gets congested. Oncogene. 17: 1415-1438.