Взаимодействие амфифильных модельных соединений и нативных структур с бислойными липидными мембранами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат физико-математических наук Симоненко, Екатерина Юрьевна

• Симоненко, Екатерина Юрьевна
• кандидат физико-математических наук
• 0

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Симоненко, Екатерина Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Фотодинамическая терапия (ФДТ).

1.1.1. Основные принципы и типы ФДТ.

1.1.2. Электронная структура и физикохимические свойства синглетного молекулярного кислорода.

1.1.3. Люминесценция в фотосенсибилизированных порфиринами растворах и суспензиях биологических жидкостей и клеток.

1.2. Структурная организация вириона гриппа типа А.

1.2.1. Структурная организация и функции мембранных белков.

1.2.2. Схема проникновения вируса гриппа в «клетку-хозяина».

1.2.3. Роль канального белка М2 в цикле инфицирования вирусом клетки.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы.-.

2.1.1. Синтез порфиринов и модификация их различными заместителями.

2.1.2. Искусственные мембраны.

2.1.3. Вирус гриппа, используемый в работе.

2.2. Методы работы с клеточными культурами.

2.3. Методы спектрофотометрии.

2.3.1. Метод измерения поглощения.

2.3.2. Метод измерения флуоресценции.

2.3.3. Метод коррелированного во времени счета одиночных фотонов.

2.3.4. Метод стационарного измерения фосфоресценции 102.

2.3.5. Метод разрешенной во времени регистрации фосфоресценции синглетного кислорода.

2.4. Метод формирования липосом.

2.5. Методы формирования БЛМ и исследования взаимодействия вирусных частиц с мембраной.

2.5.1. Получение и очистка вируса.

2.5.2. Формирование БЛМ.

2.5.3. Метод гармоник.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Фотофизические свойства исследуемой группы порфиринов в растворе этанола.

3.2. Взаимодействие порфиринов с липосомами.

3.3. Взаимодействие порфиринов с клеточными культурами.

3.4. Свойства БЛМ, модифицированных ганглиозидами и вирионами гриппа А.

3.5. Проводимость БЛМ, модифицированной целыми вирионами.'.

3.2.3. Проводимость БЛМ, модифицированной целыми вирионами в присутствии амантадина.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Взаимодействие амфифильных модельных соединений и нативных структур с бислойными липидными мембранами»

Актуальность проблемы

Одним из важнейших направлений биофизики стало изучение биологических мембран - многокомпонентных гетерогенных надмолекулярных структур, обеспечивающих структурную обособленность и целостность клеток и органелл, процессы взаимодействия с внешней средой, транспорт, возбудимость, рецепцию и т.д. Липиды определяют бислойную структуру мембран, белки формируют свое специфическое липидное окружение. Белково-липидные структуры определяют межмембранные взаимодействия и взаимодействия с макромолекулами и надмолекулярными образованиями цитоплазмы и внеклеточной среды. Одной из важнейших проблем современной биофизики является выяснение молекулярных механизмов адсорбции и слияния частиц с мембранами, роли белковых и липидных компонентов частиц и мембраны в процессах взаимодействия, влияния этих процессов на свойства мембран. За последние десятилетия физико-химические, биохимические и физиологические основы функционирования клеточных мембран достаточно хорошо изучены. Однако в аспекте сугубо практических задач осталось много невыясненных вопросов и проблем. Для разработки методов медицинской биохимии, биотехнологии и т.д. бислойные липидные мембраны (БЛМ) являются удобной модельной системой для тестирования различных лекарственных препаратов, для изучения процессов взаимодействия и транспорта лекарственных препаратов в клетку, а также определения оптимальных химических и физических свойств препаратов для их лучшего проникновения в клетку. Также в последнее время активно ведутся разработки по применению липосом для направленной доставки лекарств в организм человека. В связи с этим остается также актуальным изучение процессов адсорбции различных структур на мембране и их проникновение в липидный бислой, рецепторные взаимодействия.

Отдельной проблемой является исследование взаимодействия лекарственных и биологически активных веществ с мембранами и макромолекулярными структурами организма. Большинство таких веществ является сложными молекулами с ярко выраженными гидрофильными, гидрофобными или амфифильными свойствами. Выяснение механизмов взаимодействия различных органических соединений с модельными и клеточными мембранами, влияния заместителей на их проникновение в клетки необходимо для повышения проникающей способности лекарственных препаратов в клетки, например основанных на порфиринах. На протяжении 30 лет пытаются использовать красители на основе тетрапирролов в качестве фотосенсибилизаторов для фотодинамической терапии (ФДТ). Для этих целей актуально высокое избирательное накопление порфиринов, хлоринов, фталоцианинов в патологических клетках. Модифицируя порфирины различными заместителями (гидроксилирование, присоединение гидрофобных фрагментов), можно получить красители с более высокой тропностью к клеточной мембране.

В отличие от модельных мембранных систем биологические мембраны состоят также из сложных углеводсодержащих соединений, связанных с мембранными белками. Цитоплазматические мембраны содержат гликопротеины, состоящие из олигосахаридных цепей (например, сиаловые кислоты), присоединенных к белку и играющие значительную роль во взаимодействиях типа «лиганд - рецептор». Связывание различных лигандов (токсины, гормоны, переносчики, лектины, антитела) с клеточными поверхностями является рецепторным взаимодействием. Так, исследование механизмов внедрения вирусов гриппа в клетки и самосборки вирионов в инфицированных клетках, требуют знания особенностей взаимодействия вирусных белков с мембранами клеток. При изучении молекулярных механизмов самосборки вирусов гриппа возникает ряд проблем, связанных с процессами адсорбции белков на мембране и их проникновения в липидный бислой, влиянием белковых молекул на структуру бислоя, взаимодействием между матриксным белком и поверхностными гликопротеидами и между самими гликопротеидами в мембране, влияние противовирусных препаратов на указанные процессы. Несмотря на то, что отдельные мембранные гликопротеины вируса гриппа изучаются на протяжении многих лет, смоделировать в целом весь процесс проникновения вириона в клетку-хозяина и раскрытия вирусного нуклеокапсида в лабораторных условиях не удавалось. Для более полного понимания такого рода взаимодействий важно изучать взаимодействие нативных структур (на примере вируса гриппа) с модифицированными мембранами, приближая модельные условия к таковым in vivo.

Несмотря на различную биологическую сущность этих систем, все они могут быть рассмотрены с единой точки зрения, поскольку процессы взаимодействия порфиринов, вирусов с мембранами определяются одними и теми же физическими факторами: поверхностными потенциалами мембраны и частиц, структурой их поверхности, гидрофобными взаимодействиями и т.д. Удобной моделью для изучения этих взаимодействий являются бислойные липидные мембраны (БЛМ), с помощью которых можно исследовать механизмы отдельных стадий взаимодействия.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы явилось изучение взаимодействия ряда порфиринов с различными липофильными и гидроксильными заместителями и цельных вирионов гриппа типа A/Aichi с БЛМ в условиях, приближенных к таковым in vivo. Экспериментальное исследование этой проблемы проводилось по следующим направлениям:

• исследование влияния различных модификаций порфиринов на их фотофизические свойства;

• исследование взаимодействия порфиринов с различными заместителями с липосомами;

• изучение структурной роли заместителей на проникновение порфиринов в культуры Т-лимфоцитов линии Jurkat и определение концентрации этих в клетках;

• разработка методики, позволяющей исследовать взаимодействие целых вирионов гриппа с мембраной.

Научная новизна работы

В диссертационной работе получен ряд новых результатов, имеющих принципиальное значение для биофизики мембран.

Для изучения взаимодействия модельных соединений с клеточной мембраной и исследования влияния различных заместителей на это взаимодействие предложены и исследованы новые модификации (гидроксилирование, аминирование и присоединение гидрофобных фрагментов) порфиринов в целях применения их в качестве фотосенсибилизаторов для ФДТ.

Показано, что порфирины с гидроксильными заместителями имеют высокий квантовый выход синглетного кислорода 0,6) и интенсивный максимум в спектре поглощения в инфракрасной области.

Установлены области локализации исследуемых порфиринов в липосомах на основе анализа спектров затухания флуоресценции и квантового выхода 'Ог. Показано, что порфирины, модифицированные ОН-группой и гидрофобными остатками локализуются непосредственно в бислое липосом, тогда как остальные модификаты неспецифически сорбируются на поверхности или остаются в водной фазе.

На культурах переживающих Т-лимфоцитов линии 1игка1 выявлен тип порфиринов — тетрагидроксифенил-порфирин (т-ТНРР), обладающий высоким квантовым выходом синглетного кислорода, наибольшей проникающей способностью, и может быть рекомендован для использования в фотодинамической терапии.

Предложена принципиально новая методика, которая позволяет исследовать взаимодействие целых вирионов гриппа типа А/АюЫ с БЛМ, модифицированной ганглиозидами в условиях, приближенных к таковым in vivo. Показано, что внрионы адсорбируются на БЛМ, изменяют ее поверхностный потенциал и индуцируют в БЛМ ионную проводимость.

Практическое значение работы

Диссертационная работа расширяет представление о механизмах взаимодействия модельных соединений (порфиринов) и нативных структур (вируса гриппа) с мембранами. Показано, что, изменяя амфифильность порфириновых заместителей, можно создать более эффективный, дешевый и легко синтезируемый препарат, чем активно используемые в настоящее время хлорины и фталоцианины.

Полученные результаты для одного из представителей исследуемой группы — m-ТНРР — позволяют рекомендовать его для дальнейшего изучения в аспекте использования его для ФДТ.

Обнаружено отсутствие четкой корреляции между накоплением модифицированных порфиринов в культуре клеток и связыванием их с липосомами. Таким образом, липосомы не являются адекватной моделью для исследования взаимодействия порфиринов с клетками.

Разработана методика, позволяющая изучать взаимодействие не только отдельно выделенных и очищенных белков с БЛМ, но и целых вирионов в условиях, приближенных к таковым in vivo.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Симоненко, Екатерина Юрьевна

выводы

1. Предложены и исследованы новые модификации (гидроксилирование и присоединение гидрофобных фрагментов) порфиринов, обладающие высоким квантовым выходом 1С>2 Фа > 0,6 в этаноле. Вещества разработаны для применения их в качестве фотосенсибилизаторов для фотодинамической терапии (ФДТ).

2. Экспериментально установлено, что из всей группы исследованных соединений наибольшей тропностью к бислойным липидным мембранам липосом обладают амфифильные порфирины, модифицированные гидрофобным фрагментом и гидроксильными группами. Их концентрация в мембране липосом более чем в 4 раза превышает концентрацию других модификатов.

3. Экспериментально показано на культурах клеток линии 1игка1, что из группы исследованных порфиринов наибольшей проникающей способностью обладает тетрагидроксифенил-порфирин (т-ТНРР), который поэтому может быть рекомендован для дальнейшего изучения в аспекте использования его для ФДТ.

4. На основе регистрации флуктуаций ионной электропроводности бислойной липидной мембраны разработана методика, позволяющая изучать специфическое связывание гликопротеина вируса гриппа с БЛМ, модифицированной ганглиозидами.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Симоненко, Екатерина Юрьевна, 0 год

1. «Вирусология» в 3-х томах / Пер. с англ., под ред. Б. Филдса, Д.

2. Найпа. Москва «Мир» (1989).

3. Бутылин А. А.: Взаимодействие ионных каналов в БЛМ.

4. Диссертация на соискание ученой степени к.ф.-м.н., МГУ.

5. Герцберг Г. Спектры двухатомных молекул. М.: Наука, 1963.

6. Жирнов О. П.: Аномальные изоэлектрические свойства матриксногобелка М1 вирусов гриппа. Вопросы вирусологии, N 3 (1990).

7. Красновский A.A., Егоров С.Ю., Назарова О.В., Ярцев Е.И.,

8. Пономарев Г.В.: Фотогенерация синглетного молекулярного кислорода водорастворимыми порфиринами. Биофизика. Том XXXII, вып. 6 (1987) 982-992.

9. Красновский A.A. (мл): Синглетный молекулярный кислород ипервичные механизмы фотодинамического действия оптического излучения. Итоги науки и техники, современные проблемы лазерной физики. Том 3 (1990) 63-135.

10. Красновский A.A. (мл.): Фосфоресцентный анализ синглетногомолекулярного кислорода в фотобиологических системах. Биологические мембраны. Том 15,5 (1998) 530-548.

11. Миронов А.Ф.: Фотосенсибилизаторы на основе порфиринов иродственных соединений для фотодинамической терапии рака. Итоги науки и техники, современные проблемы лазерной физики. Том 3 (1990) 5-60.

12. Медиков К.Ч., Самсонов А.В., Пирутин С.К., Фролов В.А.

13. Биологические мембраны. Т. 16 (1999) 95-102.

14. Паркер С.А.: Фотолюминесценция растворов. М.: Мир (1972).

15. Слепушкин В. А., Букринская А. Г., Марченко С. М., Волкова Т. М.:

16. Индуцированные вирусами изменения проводимости клеточных мембран. Биологические мембраны. Том 4, N 5 (1987) 486-493.

17. Слепушкин В. А., Медикян Г. Б. и др.: Взаимодействие пептидов,соответствующих N-концевым участкам легкой цепи гемагглютинина вируса гриппа (НА2) с искусственными и естественными липидными мембранами. Биологические мембраны. Т4ом 7, N 3 (1990) 261-273.

18. Твердислов В. А.: Параметрические и структурные механизмырегуляции переноса ионов, молекул и молекулярных комплексов в мембранах. Диссертация на соискание ученой степени доктора ф,-м.н., МГУ. (1983).

19. Харитоненков И.Г.: Структура липидной оболочки миксовирусов.

20. Вопросы вирусологии. Т. 6 (1980) 654-662.

21. Твердислов В. А., Тихонов А. Н., Яковенко Л. В.: Физическиемеханизмы функционирования биологических мембран. МГУ. (1987).

22. Balentine J.D.: Pathology of Oxygen Toxicity. Academic Press. New1. York 1982.

23. Balchum O.J., Doiron D.J.: Photoradiation Therapy of Endobronchial1.ng Cancer. Clinics in Chest. Med. 6 (1985) 255-275.

24. Bayly J.G., Kartha V.B., Stevens B.H.: The absorption spectra of liquidphase H20 HDO and D20 from 0,7¡am to 10 jam. Infrared Physics. 3 (1963) 211-223.

25. Bellnier D.A., Henderson B.W., Pandey R.K. et al: Murinepharmacokinetics and anti-tumor efficacy of the photodynamic sensitizer 2-l-hexyloxyethyl.-2-devinyl pyropheophorbide-a. J. Photochem. Photobiol. B. 20 (1999) 55-61.

26. Ben-Hur E., Rosenthal I.: The Phtalocianines: a new class off mammaliancells photosensitizers with a potential for cancer phototherapy Int. J. Rad. Biol 47(1985) 145-147.

27. Bensasson R.V., Land E.J., Truscott: Excited states and free radicals inbiology and medicine: contribution from flah photolysis and pulse radiolysis. Oxford Univ. Px. (1993).

28. Blum F.H.: Photodynamic Action and Diseases Caused by Light. Hafner1. Puhl. New York 1964.

29. Bonnett R., Charlesworth P., Djelal B.D., Foley S., McGarvey D.J.,

30. Böhm F., Marston G., Truscott T.G., Wayne R.P.: Fourier-Transformdetection of singlet oxygen and fluorescence from cell membrane bound porphyrins. J. Chem. Soc. Faraday Trans. 90 (1994) 1453-1454.

31. Bosman A.W., Janssen H.M., Meijer E.W.: About Dendrimers: Structure,

32. Physical Properties and Applikations. Am. Chem. Soc. published on Web (1998).

33. Braslavsky S.E., Müller M., Martire D.O., Porting S., Bertolotti S.G.,

34. Chakravorti S., Koc-Weier G., Knipp B., Schaffner K.: Photophysical properties of Porphycenederivatives (18 -porphyrinoids^. J Photochem. Photobiol. B 40 (1997) 191-198.

35. Butko A.I., Voropaj E.S., Gaisenok V.A., Saechnikov V.A., Sarzhevskii

36. A.M.; Opt. Spectrosc. 52 (1982) 153-160.

37. Crossley M.J., J.N.H. Reek, A.W. Bosman, A.P.H.J. Schenning, E.W.

38. Meijer: Towards Mimics of the Light-Harvesting Complexes: Synthesis and Photophysical Characterization of Multi-Porphyrin Dendrimers. in: The Fourth International Symposium on Functional Dyes Programs and abstracts Osaka, Japan (1999).

39. Cuomo V., Jori G., Richter B., Kenney M.E., Rodgers M.A.J.: Liposomedelivered Si(IV)-naphtalocyanine as a photodynamic sensitizer for experimental tumors: pharmakokinetic and phototherapeutic studies. Br. J. Cancer. 62 (1990) 966-970.

40. Colman P. M., Vargbese J. N.: Structure of the catalitic and antigenic sitesin influenza virus neuraminidase. Nature. 303 (1983) 41-44.

41. Dolphin D. Ed.: The Porphyrins. Academic Press New York (1978).

42. Dolphin D.:1993 Syntex Award Lecture : Photomedicine andphotodynamic therapy. Can. J. Cem. 72 (1994) 1005-1013.

43. Dressler C., Möller U., Lewald T., Berlien H.-P., Röder B., Risse H.-J.:1.troduction of a simple model for testing immunoconjugates with photosensitizers. Lasers in Med. Science. 7 (1992) 174.

44. Duff K. C., Ashley R. H.: The transmembrane domain of Influenza A M2protein forms Amantadine-sensitive proton channels in Planar Lipid Bilayers. Virology. 190 (1992) 485-489.

45. Duff K. C., Kelly S. M., Price N. C.: The secondary structure of influenza

46. A M2 transmembrane domani. FEBSLett. 311 (1992) 256-258.

47. Elstner E.F.: Der Sauerstoff. BI-Wiss.-Ver\. Mannheim BRD (1990).

48. Firey P.A., Ford W.E., Sonik J.R, Kenney M.E., Rodgers M.A.J.: Silicon

49. Naphthalocyanine Triplet States and Oxygen A Reversible Energy Tranfer Reaction. J. Am. Chem. Soc. 110 (1988) 7626 - 7630.

50. Foote C.S.: Mechanisms of photosensitized oxidation. Science. 1621968) 963- 970.

51. Frizsche M. Compt. Rend. 64 (1867) 1035-1037.

52. Garbo G.M.: The use of liposomes, emulsions or inclusion complexesmay potentiate in vivo effects of SnET2 SPIE Proc. 1203 (1990) 118125.

53. Georgakoudi I., Forster T.H.: Singlet oxygen- versus nonsinglet oxygenmediated mechanism of sensitizer photobleaching and their effects on photodynamic dosimetry. J. Photochem Photobiol. 61 (1998) 612-625.

54. Gollnick K., Schenck G.O. Pure. Appl. Chem. 9 N4 (1964) 507-525.

55. Hackbarth St., Roder B.: Anisotropy shape control via ground statedepeation and light quenching. Opt. Comm. (1999).

56. Hackbarth St., Horneffer V., Wiehe A., Hillenkamp F., Roder B.:

57. Photophysical properties of Pheophorbide-a-substituted diaminobutane poly-propylene- imine dendrimer. submitted to Photochem. Photobiol. (2000).

58. Haseloff R., Ebert B., Roder B.: Generation of free radicals byphotoactivation of pheophorbide a, hematoporphyrin and protoporphyrin. J. Photochem. Photobiol. B: Biology 3 (1989) 593-603.

59. He J. Larkin, Rither B.D., Zaidi S.I.A., Rodgers M.A.J., Mukhtar M.E.,

60. Kenney M.E., Oleinick N.L.: The synthesis, photophysical and photobiological properties and in vitro structure-activity relationships of a set of silicon phtalocyanine PDT photosensitizers. Photochem. Photobiol. 65 (1997) 581-586.

61. Helenius A.: Unpacking the incoming Influenza virus. Cell. 69 (1992)577.578.

62. Herzberg G.: Molecular spectra and molecular structure. I. Spectra ofdiatomic molecules" D. van Nostrand Company Princeton (1950).

63. Holsinger L. J., Lamb R. A.: Influenza virus M2 integral membraneproyein is a homotetramer stabilized by formation of disulphide bonds. Virology. 183 (1991) 32-43.

64. Holsinger L. J., D. Nichani, Pinto L. H., Lamb R. A.: Influenza A virus

65. M2 ion channel protein: a structure-function analysis. J. of Virology. 68 (1994) 1551-1563.

66. Huan R. T., Rott R.: The function of the neuraminidase in membranefusion induced by myxoviruses. Virology. 107 (1980) 313-319.

67. Janssen J.: Poly(ethylene glycol)-methyl ether modified poly (propyleneimine) dendrimers Undergraduate report, Department of Organic Chemistry, TUEindhoven NL. (1995).

68. Jori G., Reddi E.: The role of Lipoproteins in the delivery of tumortargeting photosensitizers. Int. J. Biochem 25 (1993) 339-343.

69. Karadaghi S. E., Zakomirdin J. A., Shimane C., Bucher D. J., Tverdislov

70. V. A.: Interaction of Influenza virus proteins with Planar Bilayer Lipid membranes: characterization of their adsorption and incorporation into Lipid Bilayers. Biochimica et Biophysica Acta. 778 (1984) 269-275.

71. Karu T.: Photobiology of Low Power Lasereffects. Health Phys. 561989) 698.

72. Kasha M., Brabham D.E.: Singlet oxygen electronics structure andphotossensitization.//Singlet oxygen. Ed. By H.H. Wasserman, R.W. Murray. Academic Press, New York (1979) 1-38.

73. Kato H., Konakoa C., Kawate N., Shinohara H., Kinoshita K., Noguchi

74. M., Ootomo S., Hayata Y.: Five-year disease-free survival of a lung cancer patient treated only by photodynamic therapy. Chest. 90 (1986) 768-770.

75. Kawski A.: Fluorescence Anisotropy; Theory and Applications of

76. Rotational Depolarzation CRC 23 (1993) 459-529.

77. Kerr I. D., Smart O. S., Sankararamakrishnan R. Parallel helix bundlesand ion channels: Molekular modelling via simulated annealing and restrained molecular dinamics. J. Biophysics. 67 (1994) 1501-1515.

78. Kessel D.: Chemical and biochemical determinants of porphyrinlocalization. Porphyrin localization and Treatment Tumors. New York (1984)405-418.

79. Kessel D.: Porphyrin-lipoprotein association as a factor in porphyrinlocalisation. Cancer Lett. 33 (1986) 183-188.

80. Kharitonenkov I. G., Karadaghi S. E., Bucher D. J., Zakomirdin J. A.,

81. Tverdislov V. A.: Interaction of Influenza virus proteins with Planar1.pid Bilayers: a model for virion assembly. Biochemical and Biophysical research communications. 102, N 1 (1981) 308-314.

82. Kimura S.: The Mechanism of Photodynamic Action of Pheophorbide andits Application to Cancer-Phototherapy and Diagnosis. Photomed. Photobiol. 15 (1993) 1-12.

83. Korth O., Hanke T., Riikmann I., Roder B. Exp. Techn.Phys. 41 (1995)25.

84. Lakowicz J.R., Gryczynski L, Kusba J., Bogdanov V.: Light Quenchingof Fluorescence: A New Method to Control the Excited State Lifetime and Orientation of Fluorophores Photochem. Photobiol. 60 (1994) 546562.

85. Lamb R. A., Choppin P. W.: Gene structure and replication of influenzavirus. Ann. Rev. Biochem. 52 (1983) 467-506.

86. Lamb R. A., Zebedee S. L., Richardson C. D.: Influenza virus M2 proteinis an integral membrane protein expressed on the infected-cell surface. Cell. 40 (1985) 627-633.

87. Lamb R. A., Holsinger L. J., Pinto L. A.: The Influenza A virus M2 ionchannel protein and its role in the Influenza virus life cycle. (1992)

88. Laustriat G.: Molecular mechanisms of photosensitation. Biochimie 681986) 771 -778.

89. Li W., Qian K., Huang W., Zhang X., Chen W.: Watersoluble C601.posome and the effect of C60 to human cervix cancer cells. Chin. Phys. Lett. 11 (1994)207-210.

90. Macdonald I.J., Dougherty T.J.: Basic principles of photodynamictherapy. J. of Porphyrins and Phthalocyanines. 5 (2000) 105-129.

91. Marlow I., Marlow F., Roeder B.: Zur aggregation von pheophorbide a inwasserigem milieu. Wiss. Zeitschrift der Hu zu Berlin, Math.-Nat. R. vol. 35,5 (1986) 464-469.

92. Marsh M.: Keeping the viral coat on. Curr. Biol. 2 (1992) 379-384.

93. Mazurenko Y.T.: Polarization of luminescence of complex moleculesunder quenching by light. Opt. Spetrosc. 35 (1973) 137-139.

94. Meyer-Betz F.: Untersuchungen über die biologische (photodynamische)

95. Wirkung des Hämatoporphyrins und anderer Derivate des Blut- und Gallenfarbstoffes. Dtsch. Arch. Klein. Med. 112 (1993) 476-503.

96. Mittal J.P.: Photophysics and Electron Transfer Reactions Involving

97. Fullerenes. in: Book of Abstracts IPS 12 Berlin (1998).

98. Mironov A.F. Proc. SPIE, vol. 2625 (1996) 23.

99. Moan Jo. On the diffusion length of singlet oxygen in cells and tissues.

100. Journal of Photochemistry and Photobiology, B: Biology, vol.6 (1990) 343 -347.

101. Moser J.G.: Attempts to treat malignant melanoma by photodynamictherapy using bacteriopheophorbide esters as the sensitizer.SP/ii Proc. 1881 (1993) 116-125.

102. Moser J.G., Heuermann A., Oehr P., Scheer H., Vervoorts A., Andrees S.:

103. Carrier systems in PDT: On the way to novel anti-tumor drugs. SPIE Proc. 2325 (1994) 92-99.

104. Moser J.G., Montfrots F.P., Kusch D., Vervoorts A., Kirsch D., Berghahn

105. M., Akgün N., Rück A., Andrees S., Wagner B.: How many molecules of a photosensitizer are nesessary to photosensitizer a tumor cell. SPIE Proc. 2924 (1996) 22-30.

106. Moser J.G. Ruebner A., Vervoorts A., Wagner B.: Cyclodextrin dimersused to prevent side effects of photochemotherapy and general tumor chemotherapy. Proc. 8 th Int. Symp. on Cyclodextrons (1996) 71 -76.

107. Moureu C., Dufraisse C., Dean P.M. Comp. Rend. 182 (1926) 1584-1587.

108. Oelckers St.: Singulettsauerstoff im Modellsystem photosensibilisierte

109. Erythrozyten-Ghost-Suspension. Dissertation HU zu Berlin (1999).

110. Oelckers St., Sczepan M., Hanke T., Röder B.: Time-resolved detection ofsinglet oxygen luminescence in red cell ghost suspensions. J. of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 39 (1997) 219-223.

111. Oseroff A.R., Ohuoha D., Hasan T., Bomraer J.C., Yarmush M.L.:

112. Antibody-targeted photolysis: Selective photodestruction of human T-cell leukemia cells using monoclonal antibody-chlorin e6 conjugates. Proc. Nat. Acad. Sei. USA 83 (1986) 8744-8748.

113. Raab 0., Z.Biol. 39 (1900) 524-546.

114. Reddi. E., Cernuschi S., Biolo R., Jori G.: Liposome- or LDLadministered Zn(II)-Phtalocyanine as a Photodynamic Agent for Tumors III. Effect of Cholesterol on Pharmacokinetic and Phototherapeutic Properties. Laser Med. Sei. 5 (1990) 339-343.

115. Reddi E., Valduga J., Rodgers M. A., Jori G., J. Photochem. Photobiol. 351991) 633.

116. Röder B.: Pheophorbide a A new photosensitizer for the photodynamictherapy of tumors. Stud. Biophys. 114 (1986) 183-186.

117. Röder B.: Tetrapyrroles: a chemical class of potent photosensitizers forthe Photodynamic Treatment of Tumors. Lasers in Medical Science. Vol. 5(1990) 99-103.

118. Röder B.: Einführung in die molekulare Photobiophysik. Teubner

119. Studienbücher Leipzig 1999.

120. Röder B.: Photodynamic Therapy (PDT) in: Encyclopedia of Analytical

121. Chemistry: Instrumentation and Applications. John Wiley & Sons accepted (2000).

122. Röder B., Hanke T., Oelckers S., Hackbarth S., Symietz C., J. Porphyrins

123. Phthalocyanines 4 (2000) 37.

124. Rohs R.: Bericht zum VW-Projekt ,Photoinduzierter Elektronentransfer'1999).

125. Rotomskis R., Mickunaitis V., Juodzevicius D., Piskarskas A.: Two stepexcitation in photosensitized tumor therapy. SPIE Proc. 2325 (1995) 347-355.

126. Rückmann I., Zeug A., Zimmermann J., Röder B.: Influence of rotationalrelaxation of pheophorbide-a molecules on the kinetics of the ground state reoccupation in picosecond nonlinear absorption experiments, in Book of Abstracts IPS-12 Berlin (1998).

127. Rückmann I., Zeug A., von Feilitzsch T., Röder B. Opt. Commun. 1701999) 361.

128. Sansom M. S. P., Kerr I. D., Smith G. R., and Son H. S.: The Influenza Avirus M2 channel: a molecular modeling and simulation study. Virology. 233 (1997) 163-173.

129. Schenck G.O. Naturwiss. 35 (1968) 28-29.

130. Spiller W„ Kliesch H., Wöhrle D., Hackbarth S„ Röder B„ Schnurpfeil G.: Singlet oxygen quantum yields of different photosensitizers in polar solvents and micellar solutions. JPP 2 (1998) 145 158.

131. Stegmann T.: Anchors aweigh. J. Current Biology. 4 (1994) 551-554.

132. Stratonnikov A.A., Edinak N.E., Klimov D.V. e.a. SPIE. vol. 2924 (1996) 309.

133. Sugrue R. J., Hay A. J.: Structural characteristics of the M2 protein of Influenza A viruses: evidence that it forms a tetrameric channel. Virology. 180 (1991)617-624.

134. Takeuchi K., Lamb R. A.: Influenza virus M2 protein ion channel activity stabilized the native form of fowl plague virus hemagglutinin during intraccellular transport. J. Virol. 68 (1994) 911-919.

135. Tanielian C., Wolf C., Esch M.: Singlet oxygen production in water: aggregation and charge-transfer effects. Journal of Physical Chemistry. Vol. 100,(1996) 6555-6560.

136. Tappeiner H. Munch. Med. Wochenschr. 47 (1900) 5-7.

137. Tatulian S.A., Tamm L.K. Biochemestry. vol. 39 (2000) 496-507.

138. Tieffenberg M. Tosteson: Interaction between a Membrane Sialoglycoprotein and Planar Lipid Bilayers. J. Membrane Biology. 38 (1978) 291-309.

139. Tomalia D.A., Baker H., Dewald J., Hall M., Kallos G„ Martin S., Roeck J., Ryder J., Smith P.: Dendritic Macromolecules: Synthesis of Starburst Dendrimers. Macromolecules. 19 (1986) 2466 2468.

140. Tverdislov V. A., Karadaghi S. E., Bucher D. J., Zakomirdin J. A., Kharitonenkov I. G.: Interaction of Influenza virus proteins with planar Bilayer Lipid Membranes. Biochimicha et Biophysica Acta. 778 (1984) 276-280.

141. Wang C., Takeuchi K., Pinto L., Lamb R. A.: Ion channel activity of Influenza A virus M2 protein: characterization of the Amantadine block.

142. J. of Virology. 67 N 9 (1993) 5585-5594.

143. Wessels J.M., Charlesworth P., Rodgers M.A.J:: Singlet oxygen luminescence spectra: A comparison of interferometer- and grating based spectrometers. Photochem. PhotobioX. 61 ( 1995) 350 352.

144. Wharton S. A., Belshe R. B., Skehel J. J. and Hay A. J.: Role of virion M2 protein in influenza virus uncoating: specific reduction in the rate of membrane fusion between virus and liposomes by amantadine. J. General Virology. 75 (1994) 945-948.

145. White J. M.: Viral and cellular membrane fusion proteins. Annu. Rev. Physiol. 52 (1990) 675.

146. Wiley D. C.: The structure and function of the hemagglutinin membrane glicoprotein of influenza virus. J. Gen. Virol. 75 (1987) 945.

147. Wilson B.C., Jeeves W.P., Lowe D.M.: In vivo and post mortem measurements of the attenuation spectra of light in mammalian tissue. Photochem. PhotobioX. 42 (1985) 153 162.

148. Xu D., Neckers D.C.: Aggregation of Rose Bengale molecules in solution. J. Photochem. Photophys. 40 (1987) 361.

149. Young J. D.-E., Young G. P. H., Cohn Z. A., Lenard J. Interaction of en veloped viruses with Planar Bilayer Membranes: observations on Sendai, Influenza, vesicular Stomatitis, and Semliki Forest Viruses. Virology. 128, 186-194.

150. Zebedee S. L., Richardson C. D., Lamb R. A. Characterization of the Influenza virus M2 integral membrane protein and expression at the infected-cell surface from cloned cDNA. J. of Virology. 56, N 2 (1985) 502-511.

151. Zemke K. De Backer S., Helsen N., De schryver F.C.: Photophysical investigation of Rose Bengale and Fluorescein in solution andincorporated in a poly(propylene imine) dendrimer, Forschungsbericht Katholiusche Universität Leuven Belgien. (1995).

152. Zebedee S. L., Lamb R. A. Influenza A virus M2 protein: monoclonal antibody restriction of virus growth and detection of M2 in virions. J. of Virology. 62, N8 (1988) 2762-2772.

153. Zimmermann J., von Gersdorff J., Kurreck H., Röder B. J. Photochem. Photobiol. B. 40 (1997) 209.

154. Zilberstein J., Bromberg A., Frantz A. e.a. Photochem. and Photobiol., v. 65 (1997) 1012-1019.

155. Zuk M.M., Rither B.D., Kenney M.E., Rodgers M.A.J.: Effect of delivery system on the Pharmacokineticsand Tissue Distribution of bis(Di-isobutyl Oktadecylsiloxy) Silicon 2,3-Naphalocyanine Photochem. Photobiol. 63 (1996) 132-140.1. Список литературы

156. Хочу поблагодарить также сотрудников НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского проф. Жирнову О.П. и к.б.н. Тимофеевой Т.А. за любезное предоставление вируса гриппа A/Aichi, помощь в выделении и очистке вирусов.

157. Благодарю фонд DAAD и Университет им. Гумбольдта за предоставление стипендии, которая в немалой степени способствовала успешному выполнению диссертационной работы.

158. А также приношу глубокую благодарность моему мужу и родителям за поддержку, помощь и терпение.

159. Хочу поблагодарить директора издательства «УРСС» Доминго Марин Рикой за оказанную помощь в издании диссертации.