Выделение и структурно-функциональная характеристика металлопротеиназы и сериновой коллагенолитической протеиназы-2 камчатского краба (Paralithodes camtschatica) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Семенова, Светлана Александровна

• Семенова, Светлана Александровна
• кандидат химических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат химических наук Семенова, Светлана Александровна

Список сокращений.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Металлопротеиназы семейства астацина.

1.2. Структура, биосинтез и локализация астациновых протеиназ.

1.2.1. Структура генов.

1.2.2. Особенности биосинтеза.

1.2.3. Активация проферментов.

1.2.4. Гликозилирование.

1.2.5. Пространственная структура и доменный состав.

1.2.6. Значение доменной структуры для транспорта и процессинга.

1.2.7. Локализация.

1.3. Физико-химические и энзиматические свойства астациновых протеиназ.

1.3.1. Физико-химические свойства.

1.3.2. Особенности гидролиза пептидной связи.

1.3.3. Роль ионов металлов.

1.3.4. Определение активности.

1.3.5. Субстратная специфичность.

1.3.6. Белковые субстраты.

1.3.7. Амидазная активность.

1.3.8. Значение доменной структуры для энзиматических свойств

1.3.9. Ингибирование.

1.4. Получение астациновых протеиназ.

1.4.1. Общая характеристика методик выделения.

1.4.2. Получение рекомбинантных астациновых металлопротеиназ

1.5. Физиологическая роль астациновых металлопротеиназ.

1.5.1. Участие в пищеварении.

1.5.2. Участие в формировании и распаде межклеточного матрикса.

1.5.3. Функции в процессах морфогенеза и развития организма.

1.6. Брахиурины — сериновые протеиназы ракообразных.

1.6.1. Общая характеристика.

1.6.2. Структура.

1.6.3. Субстратная специфичность.

1.6.4. Гидролиз коллагена брахиуринами.

1.6.5. Ингибирование брахиуринов.

1.6.6. Физико-химические и энзиматические свойства брахиуринов.

1.6.7. Получение брахиуринов.

1.6.8. Биологические особенности брахиуринов.

1.7. Использование протеиназ ракообразных в медицине.

1.8. Исследования протеиназ из гепатопанкреаса камчатского краба.

2. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

2.1. Очистка протеиназ.

2.2. Определение частичной аминокислотной последовательности сери-новой коллагенолитической протеиназы-2.

2.3. Физико-химические и энзиматические свойства сериновой коллагенолитической протеиназы-2.

2.4. Ингибирование сериновой коллагенолитической протеиназы-2.

2.5. Субстратная специфичность сериновой коллагенолитической протеиназы-2.

2.6. Исследование первичной структуры металлопротеиназы.

2.7. Физико-химические и энзиматические свойства металлопротеиназы.

2.8. Ингибирование металлопротеиназы.

2.9. Субстратная специфичность металлопротеиназы.

2.10. Сравнение аминокислотной последовательности металлопротеиназы краба и других астациновых протеиназ.

2.11. Моделирование пространственной структуры металлопротеиназы.

2.12. Построение филогенетического древа астациновых протеиназ.

2.13. Влияние температуры на кинетические параметры гидролиза субстратов протеиназами краба.

2.14. Действие протеиназ краба на коллаген.

2.15. Действие протеиназ краба на фибриноген.:.

2.16. Действие протеиназ краба на фибрин, плазминоген и плазму крови. 99 3. ЭКСГШРИМЕНТАЛЪНАЯ ЧАСТЬ.

3.1. Материалы.

3.1.1. Синтетические хромогениые субстраты.

3.1.2. Ферменты, белки, пептиды.

3.1.3. Прочие реактивы и сорбенты.

3.2. Методы.

3.2.1. Аффинная хроматография на полимиксин-силохроме.

3.2.2. Аффинная хроматография HaNHOH-Bz-ONH-Ala-Ala-силохроме.

3.2.3. Гидрофобная хроматография.

3.2.4. Аффинная хроматография на лейцин-силохроме.

3.2.5. Аффинная хроматография на аргинин-силохроме.

3.2.6. Гель-хроматография на Сефадексе G-50.

3.2.7. Ионообменная хроматография на DEAE-Toyopearl.

3.2.8. Концентрирование и обессоливание растворов белков.

3.2.9. Определение концентрации белка по методу Бредфорд.

3.2.10. Определение активности по динитрофенилпептидам.

3.2.11. Определение активности по и-нитроанилидам пептидов.

3.2.12. Электрофорез в ПААГ в денатурирующих условиях.

3.2.13. Масс-спектрометрический анализ.

3.2.14,Определение субстратной специфичности металлопротеиназы.

3.2.15. Определение рН-оптимума активности ферментов.

3.2.16. Определение активности протеиназ по азоказеину и азоальбумину.

3.2.17. Определение зависимости активности протеиназ от температуры.

3.2.18. Определение кинетических параметров протеолиза.

3.2.19. Ингибиторный анализ.

3.2.20. Исследование действия протеиназ на коллаген.

3.2.21. Действие протеиназ краба на фибриноген и другие белки.

3.2.22. Действие протеиназ краба на фибриновые пластины.

3.2.23. Действие протеиназ краба на фибриновые сгустки.

3.2.24. Действие протеиназ краба на плазму крови.

3.2.25. Определение содержания цинка в молекуле металло-протеиназы.

3.2.26. Клонирование и секвенирование кДНК металлопротеиназы.

3.2.27. Компьютерный анализ данных и моделирование структуры белков.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Выделение и структурно-функциональная характеристика металлопротеиназы и сериновой коллагенолитической протеиназы-2 камчатского краба (Paralithodes camtschatica)»

Протеолитические ферменты ракообразных обладают рядом необычных свойств и находят широкое применение в медицине и биотехнологии.

Ферменты ракообразных, обитающих в холодных морях, приспособлены к функционированию при низких температурах и поэтому являются перспективными биокатализаторами. Изучение влияния температуры на каталитические свойства таких протеиназ позволяет получить информацию о механизмах холодовой адаптации ферментов. Большинство исследований кинетических характеристик и структурных особенностей психрофильных протеиназ посвящены трипсинам, а протеиназы других семейств изучены менее подробно.

Коллагенолитическая активность, обнаруженная у некоторых сериновых протеиназ ракообразных, открывает широкие возможности использования этих ферментов в медицине, биотехнологии и пищевой промышленности. На основе пищеварительных ферментов крабов и креветок созданы медицинские препараты для лечения ран, ожогов и других повреждений кожи. Ферментные препараты из ракообразных способны гидролизовать фибриноген и фибрин, но действие индивидуальных протеиназ на эти белки практически не изучено, несмотря на важную роль фибрина в заживлении ран. Изучение фибринолитического действия протеиназ краба имеет большое значение для разработки новых тромболитических средств.

Для пищеварительных сериновых протеиназ ракообразных характерно наличие изоформ. Сходство первичной структуры изоформ при заметных различиях в некоторых свойствах делает эти белки привлекательными объектами для изучения структурно-функциональных взаимосвязей.

Для полной характеристики протеиназ камчатского краба, обладающих широкой первичной специфичностью, требуется исследование их взаимодействия с высокомолекулярными субстратами. Данные о влиянии пространственной структуры белковых субстратов на эффективность протеолиза представляют несомненный теоретический интерес и могут быть использованы для разработки методик изучения пространственной структуры белков с помощью ограниченного протеолиза. Расширение набора ферментов, используемых для ограниченного протеолиза, в том числе внедрение высокоактивных и доступных в больших количествах протеиназ ракообразных, безусловно, откроет новые возможности для исследователей.

Настоящая работа посвящена исследованию металлопротеиназы камчатского краба Paralithodes camtschatica, принадлежащей к семейству астацина, и минорной изоформы сериновой коллагенолитической протеиназы камчатского краба (далее СКП-2), принадлежащей к подсемейству брахиурина семейства химотрипсина. Целью работы являлось получение гомогенных препаратов протеиназ, изучение их физико-химических и энзиматических свойств, в том числе действия на фибриноген и фибрин. В работе были поставлены следующие задачи:

1. Получение металлопротеиназы и СКП-2 в электрофоретически гомогенном состоянии.

2. Анализ первичной структуры металлопротеиназы и доказательство её соответствия структуре, определённой по кДНК. Исследование структуры СКП-2 с помощью масс-спектрометрии.

3. Определение энзиматических свойств выделенных протеиназ.

4. Изучение температурной зависимости кинетических констант гидролиза различных субстратов металлопротеиназой и СКП-2.

5. Исследование действия металлопротеиназы и СКП-2 на фибриноген, фибрин, плазминоген и плазму крови, а также на коллаген. Идентификация высокомолекулярных продуктов гидролиза фибриногеиа с помощью масс-спектрометрии.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Металлопротеиназы семейства астацина

Большинство известных металлопротеаз содержит в активном центре один ион цинка, координированный остатками глутаминовой кислоты и (или) гистидина (рис. 1). Функция этого иона в катализе - поляризация молекулы воды, атакующей расщепляемую пептидную связь [1].

Термолиз iih Астащшы

Аминопептадазы Серрагашгны

Адаматшшы/ ADAM Матрикашы (ММР)

Рис. 1. Структура цинк-связывающих мотивов металлопротеаз (по [2]).

Объединение протеиназ в семейства, основанное на сравнении первичной структуры белков, является принципом построения современной классификации MEROPS [3]. Несколько семейств протеаз, характеризующихся сходной вторичной и третичной структурой, образуют клан.

Клан метцинкинов включает астациновые металлопротеиназы, серрали-зииы (ферменты бактерий из родов Serratia, Erwinia и Pseudomonas), тканевые металлопротеиназы (matrix metalloproteinases, ММР), и семейство адама-лизинов/ADAM. В ферментах этого клана цинк координирован тремя остатками гистидина, два из которых входят в состав мотива НЕХХН, и остатком глутаминовой кислоты (через молекулу воды). Общий структурный элемент всех метцинкинов — метиониновый поворот (1,4-р-поворот, включающий консервативный остаток метионина). Семейства астацинов, ММР и серрали-зинов достаточно близки друг к другу по первичной структуре, а семейство адамализинов занимает обособленное положение [4].

Астацин - пищеварительный фермент речного рака Astacus astacus — был впервые описан в 1967 году. Термин «астацины» также обозначает пигменты (производные (З-каротина), обнаруженные у речного рака [5, р. 1219].

Астациновые металлопротеиназы были выделены в самостоятельное семейство в 90-х гг. XX в. С тех пор были получены и исследованы более двадцати представителей этого семейства - ферменты бактерий, беспозвоночных и позвоночных животных. При анализе базы данных NCBI с помощью программы BLAST в 2006 году было обнаружено более 900 последовательностей белков, сходных с онхоастацином - протеиназой паразитического червя Onchocerca volvulus [6, S.50]. Следует отметить, что у растений и вирусов не обнаружено ни ферментов, относящихся к семейству астацина, ни генов, кодирующих такие белки [3].

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Семенова, Светлана Александровна

ВЫВОДЫ:

1. Выделены электрофоретически гомогенные металлопротеиназа и изо-форма СКП-2 сериновой коллагенолитической протеиназы камчатского краба P.camtschatica.

2. Подтверждено соответствие 87% первичной структуры металлопротеиназы структуре, определённой по кДНК. Обнаружено сходство между металлопротеиназой краба и другими астациновыми протеиназами по таким признакам, как характер ингибирования, рН-оптимум активности, содержание цинка в активном центре.

3. Частично определена аминокислотная последовательность СКП-2 (с помощью тандемной масс-спектрометрии). Обнаружено сходство между СКП-2 и другими протеиназами ракообразных по молекулярной массе, температурному и рН-оптимуму активности, интервалу рН-стабильности, характеру ингибирования. Обнаружены различия в субстратной специфичности и характере ингибирования изоформ СКП краба.

4. Установлено, что природа используемого субстрата влияет на характер зависимости кинетических параметров реакций, катализируемых СКП-2, от температуры, а значение КШ;Эфф реакции гидролиза азоказеина металлопротеиназой практически не зависит от температуры.

5. Показано, что обе протеиназы краба расщепляют неспирализованные участки молекул коллагена, а СКП-2 также способна расщеплять трёх-спиральные участки этого белка. Установлено, что обе изученные протеиназы способны расщеплять фибриноген (в том числе в плазме крови) и фибрин, а также активировать плазмииоген. Охарактеризованы высокомолекулярные продукты гидролиза фибриногена быка металлопротеиназой и СКП-2.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Семенова, Светлана Александровна, 2008 год

1. Rawlings N.D., Barrett A.J. // Evolutionary families of metallopeptidases. Meth. Enzymol. 1995. V. 248. P. 183-228.

2. Hooper N.M. // Families of zinc metalloproteases. FEBS Lett. 1994. V.354(l). pp. 1-17.

3. Rawlings N.D., Tolle D.P., Barrett A.J. // MEROPS: the peptidase database. Nucleic Acids Res. 32 Database issue. 2004. D160-D164.

4. Barrett A.J., Rawlings N.D., Woessner J.F. / Handbook of Proteolytic Enzymes. L., Academic Press, 1998.

5. Mohrlen F., Hutter H., Zwilling R. // The astacin protein family in Caenorhabdi-tis elegans. Eur. J. Biochem. 2003. V. 270(24). P. 4909-4920.

6. Angerer L., Hussain S., Wei Z., Livingston B.T. // Sea urchin metalloproteases: a genomic survey of the BMP-l/tolloid-like, MMP and ADAM families. Dev. Biol. 2006. V.300. P. 267-281.

7. Kawaguchi M., Yasumasu S., Hiroi J., Naruse K., Masayuki I., Iuchi I. // Evolution of teleostean hatching enzyme genes and their paralogous genes. Dev. Genes Evol. 2006. V. 216. P. 769-784.

8. Geier G., Jacob E., Stocker W., Zwilling R. // Genomic organization of the zinc-endopeptidase astacin. Arch. Biochem. Biophys. 1997. V.337(2). P. 300-307.

9. Jiang W., Flannery A.V. // Correlation of the exon/intron organization to the secondary structures of the protease domain of mouse meprin alpha subunit. Gene. 1997. V. 189(1). P. 65-71.

10. Lhomond G., Ghiglione C., Lepage Т., Gache C. // Structure of the gene encoding the sea urchin blastula protease 10 (BP 10), a member of the astacin family of Zn2+-metalloproteases. Eur. J. Biochem. 1996. V.238(3). P. 744-751.

11. Janitz M., Heiser V., Bottcher U., Landt O., Lauster R. // Three alternatively spliced variants of the gene coding for the human bone morphogenetic protein-1. J. Mol. Med. 1998. V.76 (2). P. 141-146.

12. Bond J.S., Beynon R.J. // The astacin family of metalloendopeptidases. Protein Sci. 1995. No. 4(7), P. 1247-1261.

13. Hung C.H., Huang H.R., Huang C.J., Huang F.L., Chang G.D. // Purification and cloning of carp nephrosin, a secreted zinc endopeptidase of the astacin family. J. Biol. Chem. 1997. V.272(21). P. 13772-13778.

14. Yan L., Leontovich A., Fei K., Sarras M.P., Jr. // Hydra metalloproteinase 1 (HMP-1): a secreted astacin metalloproteinase whose apical axis expression is differentially regulated during head regeneration. Dev Biol. 2000. V.219(l). P.l 15-128.

15. Pan Т., Groger H., Schmid V., Spring J. // A toxin homology domain in an astacin-like metalloproteinase of the jellyfish Podocoryne carnea with a dual role in digestion and development. Dev. Genes Evol. 1998. V.208 (5). P.259-266.

16. Geier G., Zwilling R. // Cloning and characterization of a cDNA coding for Astacus embryonic astacin, a member of the astacin family of metalloproteases from the crayfish Astacus astacus. Eur. J. Biochem. 1998. V. 253 (3). P.796-803.

17. Ravi Ram K., Sirot L.K., Wolfner M.F. // Predicted seminal astacin-like protease is required for processing of reproductive proteins in Drosophila melanogaster. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. V. 103(49). P. 18674-18679.

18. Leighton M., Kadler K.E.// Paired basic/Furin-like proprotein convertase cleavage of Pro-BMP-1 in the trans-Golgi network. J. Biol. Chem. 2003. V.278(20). P.l8478-18484.

19. Becker C., Kruse M.N., Slotty K.A., Kohler D., Harris J.R., Rosmann S., Ster-chi E.E., Stocker W. // Differences in the activation mechanism between the alpha and beta subunits of human meprin. Biol. Chem. 2003. V.384. P.825-831.

20. Lippincott-Schwarz J., Yuan L.C., Bonifacino J.S., Klausner R.D. // Rapid redistribution of Golgi proteins into the ER in cells treated with brefeldin A: evidence for membrane cycling from Golgi to ER. Cell. 1989. V. 56(5). P.801-813.

21. Yan J., Cheng Q., Li C.-B., Aksoy S. // Molecular characterization of three gut genes from Glossina morsitans morsitans: cathepsin B, zinc-metalloprotease and zinc-carboxypeptidase. Insect Mol. Biol. 2002. No.ll(l). P.57-65.

22. De Maere V., Vercauteren I., Geldhof P., Gevaert K., Vercruysse J., Claerebout E. // Molecular analysis of astacin-like metalloproteases of Ostertagia ostertagi. Parasitology. 2005. V.130. Pt.l. P. 89-98.

23. Yan L., Fei K., Zhang J., Dexter S., Sarras M.P. // Identification and characterization of hydra metalloproteinase2 (HMP 2): a meprin-like astacin metallo-proteinase that functions in foot morphogenesis. Development. 2000. V.127 (1). P. 129-141.

24. Tarentino A.L., Quinones G., Grimwood B.G., Hauer C.R., Plummer T.H.Jr. // Molecular cloning and sequence analysis of flavastacin: An O-glycosylated pro-caiyotic zinc metalloendopeptidase. Arch. Biochem. Biophys. 1995. V.319 (1). P. 281-285.

25. Yasumasu S., Katow S., Hamazaki T.S., Iuchi I., Yamagami K. // Two constituent proteases of a teleostean hatching enzyme: concurrent syntheses and packaging in the same secretory granules in discrete arrangement. Dev. Biol. 1992. V.149. P. 349-356.

26. Stroupe S.T., Craig S.S., Gorbea C.M., Bond J.S. // Sex-related differences in meprin-A, a membrane-bound mouse kidney proteinase. Am J. Physiol. 1991. V.261(l). P. E354-E361.

27. Kadowaki Т., Tsukuba Т., Bertenshaw G.P., Bond J.S. // N-Linked oligosaccharides on the meprin A metalloprotease are important for secretion and enzymatic activity, but not for apical targeting. J. Biol. Chem. 2000. V.275 (33). P. 25577-25584.

28. Garrigue-Antar L., Hartigan N., Kadler K.E. // Post-translational modification of bone morphogenetic protein-1 is required for secretion and stability of the protein. J. Biol. Chem. 2002. V.277 (45). P. 43327-^3334.

29. Bode W., Gomis-Ruth F.X., Huber R., Zwilling R., Stocker W. // Structure of astacin and implications for activation of astacins and zinc-ligation of colla-genases. Nature. 1992. V.358. P. 164-167.

30. Stocker W., Gomis-Ruth F.X., Bode W., Zwilling R. // Implications of the three-dimensional structure of astacin for the structure and function of the astacin family of zinc-endopeptidases. Eur. J. Biochem. 1993. V.214 (1). P. 215-231.

31. Gerhartz В., Mac Sweeney A., Bodendorf U., Hommel U. // Crystal structure of the catalytic domain of tolloid-like protease 1 and uses thereof. European Patent №1932907. 2008.

32. Hege Т., Baumann U. // Structure-function relationships in serralysins, probed by site-directed mutagenesis and X-ray crystallography. Acta Cryst. 2000. A56 (supplement s.253).

33. Yokozawa Y., Tamai H., Tatewaki S., Tajima Т., Tsuchiya Т., Kanzawa N. // Cloning and biochemical characterization of astacin-like squid metalloprotease. J. Biochem. 2002. V.132(5). P.751-758.

34. Johnson G.D., Bond J.S. // Activation mechanism of meprins, members of the astacin metalloendopeptidase family. J. Biol. Chem. 1997. V.272(44). P. 28126-28132.

35. Hengst J.A., Bond J.S. // Transport of meprin subunits through the secretory pathway: role of the transmembrane and cytoplasmic domains and oligomeriza-tion. J. Biol. Chem. 2004. V. 279 (33). P. 34856-34864.

36. Porter S., Clark I.M., Kevorkian L., Edwards D.R. // The ADAMTS metallo-proteinases. Biochem. J. 2005. V. 386(Pt 1). P. 15-27.

37. Mohrlen F., Maniura M., Plickert G., Frohme M., Frank U. // Evolution of astacin-like metalloproteases in animals and their function in development. Evol. Dev. 2006. V. 8(2). P. 223-231.

38. Xiong X., Chen L., Li Y., Xie L., Zhang R. // Pf-ALMP, a novel astacin-like metalloproteinase with cysteine arrays, is abundant in hemocytes of pearl oyster Pinctadafucata. Biochim. Biophys. Acta. 2006. V. 1759(11-12). P. 526-534.

39. Tsukuba Т., Bond J.S. // Role of the COOH-terminal domains of meprin A in folding, secretion, and activity of the metalloendopeptidase. J. Biol. Chem. 1998. V. 273(52). P. 35260-35267.

40. Ge G., Greenspan D.S. // Developmental roles of the BMP1/TLD metallopro-teinases. Birth Defects Res. С Embryo Today. 2006. V. 78(1). P.47-68.

41. Litovchik L., Chestukhin A., Shaltiel S. // The C-terminal tail of KSMP/meprin P is involved in its intracellular trafficking. J. Biol. Chem. 1998. V.273. P.29043-29051.

42. Tang J., Bond J.S. // Maturation of secreted meprin alpha during biosynthesis: role of the furin site and identification of the COOH-terminal amino acids of themouse kidney metalloprotease subunit. Arch. Biochem. Biophys. 1998. V. 349(1). P. 192-200.

43. Villa J.P., Bertenshaw G.P., Bylander J.E., Bond J.S. // Meprin proteolytic complexes at the cell surface and in extracellular spaces. Biochem. Soc. Symp. 2003. V. 70. P.53-63.

44. Ishmael F.T., Norcum M.T., Benkovic S.J., Bond J.S. // Multimeric structure of the secreted meprin A metalloproteinase and characterization of the functional protomer. J. Biol. Chem. 2001. V.276(25). P. 23207-23211.

45. Bertenshaw G.P., Norcum M.T., Bond J.S. // Structure of homo-and hetero-oligomeric meprin metalloproteases. J. Biol. Chem. 2003. V. 278(4). P. 25222532.

46. Stocker W., Zwilling R. // Astacin. Meth. Enzymol. 1995. V.248. P.305-325.

47. Butler P.E., Mc Kay M.J., Bond J.S. // Characterization of meprin, a membrane-bound metalloendopeptidase from mouse kidney. Biochem. J. 1987. V. 241(1). P. 229-235.

48. Yiallouros I., Grosse Berkhoff E., Stocker W. // The roles of Glu 93 and Tyr 149 in astacin-like zinc peptidases. FEBS Lett. 2000. V. 484(3). P. 224-228.

49. Garrigue-Antar L., Barker C., Kadler K.E. // Identification of amino acid residues in bone moiphogenetic protein-1 important for procollagen C-proteinase activity. J. Biol. Chem. 2001. V. 276(28). P. 26237-26242.

50. Doll B.A., Villa J.P., Ishmael F.T., Bond J.S. // Zinc ligands in an astacin family metalloprotease meprin A. Biol. Chem. 2002. V. 383 (7-8). P. 1167-1173.

51. Park H.I., Ming L.J. // The mechanistic role of the coordinated tyrosine in astacin. J. Inorg. Biochem. 1998. V. 72. P.57-62.

52. Yiallouros I., Vassiliou S., Yiotakis A., Zwilling R., Stocker W., Dive V. // Phosphinic peptides, the first potent inhibitors of astacin, behave as extremely slowly-binding inhibitors. Biochem. J. 1998. V. 331(Pt2). P. 375-379.

53. Williams R.J.P., Frausto da Silva J.J.R. // The distribution of elements in cells. Coord. Chem. Rev. 2000. V. 200-202. P. 237-348.

54. Vallee B.L., Auld D.S. // Zinc coordination, function and structure of zinc enzymes and other proteins. Biochemistiy. 1990. V. 29(24). P. 5647-5659.

55. Soler D., Nomizu Т., Brown W.E., Shibata I., Auld D.S.// Matrilysin: expression, purification, and characterization. J. Protein Chem. 1995. V.14 (7). P. 511-520.

56. Garrigue-Antar L., Francis V., Kadler K.E. // Deletion of epidermal growth factor-like domains converts mammalian tolloid into a chordinase and effective procollagen C-proteinase. J. Biol. Chem. 2004. V. 279(48). P.49835-49841.

57. Hojima Y., Behta В., Romanic A.M., Prockop D.J. // Cadmium ions inhibit procollagen C-proteinase and cupric ions inhibit procollagen N-proteinase. Matrix Biol. 1994. V. 14(2). P. 113-120.

58. Shibata I., Iwamatsu Т., Oba Y., Kobayashi D., Tanaka M., Nagahama Y., Suzuki N., Yoshikuni M. // Identification and cDNA cloning of alveolin, an extracellular metalloproteinase, which induces chorion hardening of medaka

59. Oryzias latipes) eggs upon fertilization. J. Biol. Chem. 2000. V.275(12). P. 8349-8354.

60. Fan T.J., Katagiri C. // Properties of the hatching enzyme from Xenopus laevis. Eur. J. Biochem. 2001. V.268(18). P. 4892-4898.

61. Bertenshaw G.P., Villa J.P., Hengst J.A., Bond J.S. // Probing the active sites and mechanisms of rat metalloproteases meprin A and B. Biol. Chem. 2002. V. 383 (7-8). P. 1175-1183.

62. Wolz R.L., Bond J.S. // Phe5(4-nitro) bradykinin: a chromogenic substrate for assay and kinetics of the metalloendopeptidase meprin. Anal. Biochem. 1990. V. 191(2). P. 8488-8493.

63. Grams F., Zimmerman G. // Pyrimidin-2,4,6-trion derivatives, method for producing the same and medicinal products containing these compounds. USA Patent № 6242455. 2001.

64. Wagner W., Mohrlen F., Schnetter W. // Characterization of the proteolytic enzymes in the midgut of the European Cockchafer, Melolontha melolontha (Col-eoptera: Scarabaeidae). Insect Biochem. Mol. Biol. 2002. V. 32(7). P. 803-814.

65. Harlin-Cognato A., Hoffman E.A., Jones A.G. // Gene cooption without duplication during the evolution of a male-pregnancy gene in pipefish. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. V. 103(51). P. 19407-19412.

66. Chestukhin A., Litovchik L., Muradov K., Batkin M., Shaltiel S. // Unveiling the substrate specificity of meprin on the basis of the site in PKA cleaved by the kinase-splitting membranal proteinase. J. Biol. Chem. 1997. V.272(6). P. 3153-3160.

67. Medeck R.J., Sosa S., Morris N., Oxford J.T. // BMP-1-mediated proteolytic processing of alternatively spliced isoforms of collagen type XI. Biochem. J. 2003. V. 376(Pt2). P. 361-368.

68. Zhang Y., Ge G., Greenspan D.S. // Inhibition of bone morphogenetic protein 1 by native and altered forms of alpha2-macroglobulin J. Biol. Chem. 2006. V. 281(51). P. 39096-39104.

69. Villa J.P., Bertenshaw G.P., Bond J.S. // Critical amino acids in the active site of meprin metalloproteinases for substrate and peptide bond specificity. J. Biol. Chem. 2003. V. 278(43). P. 42545-42550.

70. Walker P.D., Kaushal G.P., Shah S.V. // Meprin A, the major matrix degrading enzyme in renal tubules, produces a novel nidogen fragment in vitro and in vivo. Kidney Int. 1998. V. 53(6). P.1673-1680.

71. Yasumasu S., Iuchi I., Yamagami K. // Isolation and some properties of low choriolytic enzyme (LCE), a component of the hatching enzyme of the teleost, Oryzias latipes. J. Biochem (Tokyo). V.105, P. 212-218.

72. Kanzawa N., Yabuta H., Fujimi T.J., Tsuchiya T. // Solubility properties of a 65-kDa peptide prepared by restricted digestion of myosin with astacin-like squid metalloprotease. Zoolog. Sci. 2004. V.21(2). P. 159-162.

73. Reynolds S.D., Zhang D., Puzas J.E., O'Keefe R.J., Rosier R.N., Reynolds P.R. // Cloning of the chick BMPl/Tolloid cDNA and expression in skeletal tissues. Gene. 2000. V. 248 (1-2). P. 233-243.

74. Serpe M., Ralston A., Blair S.S., O'Connor M.B. // Matching catalytic activity to developmental function: tolloid-related processes Sog in order to help specify the posterior crossvein in the Drosophila wing. Development. 2005. V.132. P. 2645-2656.

75. Stocker W., Sauer В., Zwilling R. // Kinetics of nitroanilide cleavage by astacin. Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1991. V. 372 (6). P. 385-392.

76. Hartigan N., Garrigue-Antar L., Kadler K.E. // Bone morphogenetic protein-1 (BMP-1). Identification of the minimal domain structure for procollagen C-proteinase activity. J. Biol. Chem. 2003. V. 278(20). P. 18045-18049.

77. Zwilling R., Dorsam H., Torff H.J., Rodl J. // Low molecular mass protease: evidence for a new family of proteolytic enzymes. FEBS Lett. 1981. V. 127(1). P. 75-78.

78. Wolz R.L. // A kinetic comparison of the homologous proteases astacin and meprin A. Arch. Biochem. Biophys. 1994. V. 310(1). P. 144-151. v

79. Wolz R.L., Harris R.B., Bond J.S. // Mapping the active site of meprin-A with peptide substrates and inhibitors. Biochemistry. 1991. V. 30(34). P. 8488-8493.

80. Hojima Y., van der Rest M., Prockop D.J. // Type I procollagen carboxyl-terminal proteinase from chick embryo tendons. Purification and characterization. J. Biol. Chem. 1985. V.260(29). P.15996-16003.

81. Lee H. X., Ambrosio A. L., Reversade В., De Robertis E. M. // Embryonic dorsal-ventral signaling: secreted frizzled-related proteins as inhibitors of tolloid proteinases. Cell. 2006. V. 124(1). P. 147-159

82. Tsai P.L., Chen C.H., Huang C.J., Chou C.M., Chang G.D. // Purification and cloning of an endogenous protein inhibitor of carp nephrosin, an astacin metalloproteinase. J. Biol. Chem. 2004. V. 279(12). P. 11146-11155.

83. Hirano M., Ma B. Y., Kawasaki N., Okimura K., Baba M., Nakagawa Т., Miwa K., Kawasaki N., Oka S., Kawasaki T. //Mannan-binding protein blocksthe activation of metalloproteases meprin alpha and beta. J. Immunol. 2005. V.175. P. 3177-3185.

84. Tripp C.A., Frank G.R., Grieve R.B. // Anti-parasite astacin metalloendopep-tidase antibodies. USA Patent №6673345. 2004.

85. Yasumasu S., Iuchi I., Yamagami K. // Purification and partial characterization of high choriolytic enzyme (HCE), a component of the hatching enzyme of the teleost, Oryzias latipes. J Biochem. (Tokyo). 1989. V. 105(2). P. 204-211.

86. Kohler D., Kruse M.N., Sterchi E.E., Stocker W. // Heterologously overex-pressed, affinity-purified human meprin alpha is functionally active and cleaves components of the basement membrane in vitro. FEBS Lett. 2000. V. 465(1). P. 2-7.

87. Reyda S., Jacob E., Zwilling R., Stocker W. // cDNA cloning, bacterial expression, in vitro renaturation and affinity purification of the zinc endopepti-dase astacin. Biochem. J. 1999. V.344 (Pt.3). P.851-857.

88. Titani K., Torff H.J., Hormel S., Kumar S., Walsh K.A., Rodl J., Neurath H., Zwilling R. // Amino acid sequence of a unique protease from the crayfish Astacus fluviatilis. Biochemistry. 1987. V.26. P. 222-226.

89. Prockop D.J., Hojima Y., Li S.-W., Sieron A. // Recombinant C-proteinase and processes, methods and uses thereof. USA Patent №6258584. 2001.

90. Foradori M.J., Tillinghast E.K., Smith J.S., Townley M.A., Mooney R.E. // Astacin family metallopeptidases and serine peptidase inhibitors in spider digestive fluid. Сотр. Biochem. Physiol. В Biochem. Mol. Biol. 2006. V. 143(3). P. 257-268.

91. Wayne Davis M., Birnie A.J., Chan A.C., Page A.P., Jorgensen E.M. // A conserved metalloprotease mediates ecdysis in Caenorhabditis elegans. Development. 2004. V. 131. P. 6001-6008.

92. Lopez В., Gonzalez A., Beaumont J. // Identification of a potential cardiac an-tifibrotic mechanism of torasemide in patients with chronic heart failure. J. Am. Coll. Cardiol. 2007. V. 50. P. 859-867.

93. Huguenin M., Miiller E.J., Trachsel-Rosmann S., Oneda В., Ambort D., Sterchi E.E., Lottaz D. // The metalloprotease meprin beta processes E-cadherin and weakens intercellular adhesion. PLoS ONE. 2008. V.3(5). P. e2153.

94. Bond J.S., Matters G.L., Banerjee S., Dusheck R.E. // Meprin metalloprotease expression and regulation in kidney, intestine, urinary tract infections and cancer. FEBS Lett. 2005. V. 579 (15). P. 3317-3322.

95. Padanilam B.J. // Cell death induced by acute renal injury: a perspective on the contributions of apoptosis and necrosis. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 2003. V.284. P.F608-F627.

96. Sarras M.P. Jr, Yan L., Leontovich A., Zhang J.S. // Structure, expression, and developmental function of early divergent forms of metalloproteinases in hydra. Cell Res. 2002. V. 12(3-4). P. 163-176.

97. Davis S.W., Smith W.C. // Expression cloning in ascidians: isolation of a novel member of the astacin protease family. Dev Genes Evol. 2002. V. 212(2). P. 81-86.

98. Schmitz C., Kinge P., Hutter H. // Axon guidance genes identified in a large-scale RNAi screen using the RNAi-hypersensitive Caenorhabditis elegansstrain nre-l(hd20) lin-15b(hdl26). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2007. V. 104(3). P.834-839.

99. Ge G., Fernandez C.A., Moses M.A., Greenspan D.S. // Bone morphogenetic protein 1 processes prolactin to a 17-kDa antiangiogenic factor Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2007. V. 104(24). P.l0010-10015.

100. Hasilik A. Biosynthese, Modification und Abbau von Proteinen. / Biochemie und Pathobiochemie. Eds. G. Loffler, P. E. Petrides, P. C. Heinrich. Springer-Verlag. Berlin-Heidelberg-New York. 2003. Teil 8. P.318.

101. Chau P., Fielding P.E., Fielding C.J. // Bone morphogenetic protein-1 (BMP-1) cleaves human proapolipoprotein A1 and regulates its activation for lipid binding. Biochemistry. 2007. V. 46(28). P. 8445-8450.

102. Chestukhin A., Muradov K., Litovchik L., Shaltiel S. // The cleavage of protein kinase A by the kinase-splitting membranal proteinase is reproduced by meprin. J. Biol. Chem. 1996. V. 271. P. 30272-30280.

103. Beynon R.J., Oliver S., Robertson D.H. // Characterization of the soluble, secreted form of urinary meprin. Biochem. J. 1996. V. 315 (Pt 2). P. 461-465.

104. Tamura G., Olson D., Miron J., Clark T.G. // Tolloid-like 1 is negatively regulated by stress and glucocorticoids. Brain Res. Mol. Brain Res. 2005. V. 142(2). P.81-90.

105. Takahara K., Brevard R., Hoffman G.G., Suzuki N., Greenspan D.S.// Characterization of a novel gene product (mammalian Tolloid-like) with high sequence similarity to mammalian Tolloid/bone morphogenetic protein-1. Genomics. 1996. V. 34(2). P. 157-165.

106. Kristjansdottir S., Gudmundsdottir A. // Propeptide dependent activation of the Antarctic krill euphauserase precursor produced in yeast. Eur. J. Biochem. 2000. V. 267(9). P. 2632-2639.

107. Titani К., Sasagawa Т., Woodbury R.G., Ericsson L.H., Dorsam H., Kraemer M., Neurath H., Zwilling R. // Amino acid sequence of crayfish (Astacus Jluvi-atilis) trypsin If. Biochemistry. 1983. V.22(6). P. 1459-1465.

108. Gudmundsdottir A. // Cold-adapted and mesophilic brachyurins. Biol Chem. 2002. V. 383(7-8). P. 1125-1131.

109. Oh E.-S., Kim D.-S., Kim J.-H., Kim H.-R. // Enzymatic properties of a protease from the hepatopancreas of shrimp, Penaeus orientalis. J. Food Biochem. 2000. V.24.P. 251-264.

110. Bornstein P., Traub W. The chemistry and biology of collagen. / The proteins. (Neurath H. and Hill R L, eds.) New York. Academic Press. 1979. Pt. 4. P. 411-632.

111. Grant G.A., Sacchettini J.C., Welgus H.G. // A collagenolytic serine protease with trypsin-like specificity from the fiddler crab Uca pugilator. Biochemistry. 1983. V. 22(2). P. 354-358.

112. Sainz J.C., Garcia-Carreno F.L., Hemandez-Cortes P. // Penaeus vannamei isotrypsins: purification and characterization. Сотр. Biochem. Physiol. B. 2004. V. 138. P. 155-162.

113. Johnston D., Hermans J.M., Yellowlees D. // Isolation and characterization of a trypsin from the slipper lobster, Thenus orientalis (Lund). Arch. Biochem. Biophys. 1995. V. 324(1). P.35-40.

114. Климова О.А., Чеботарев В.Ю. // Коллагенолитический комплекс проте-аз из гепатопанкреаса камчатского краба: разделение на индивидуальные компоненты. Бюлл. эксп. биол. мед. 1999. Т. 128. № 9. С. 308-313.

115. Лебедев A.T. / Масс-спектрометрия в органической химии. М.:2003.

116. Qin J., Chait В.Т. // Collision-induced dissociation of singly charged peptide ions in a matrix-assisted laser desorption ionization ion trap mass spectrometer. Int. J. Mass Spectrom. 1999. V.191. P.313-320.

117. Perona J. J., Craik C.S. // Structural basis of substrate specificity in the serine proteinases. Protein Sci. 19. V.4(3). P.337-360.

118. Rezaie A.R. // Role of residue 99 at the S2 subsite of factor Xa and activated Protein С in enzyme specificity. J. Biol. Chem. 1996. V. 271. P. 23807-23814.

119. Leiros H.-K. S., McSweeney S. M., Smalas A. O. // Atomic resolution structures of trypsin provide insight into structural radiation damage. Acta Cryst. (2001). V.D57. P.488-497.

120. Климова O.A., Чеботарев В.Ю. // Коллагенолитический комплекс проте-аз из гепатопанкреаса камчатского краба: энзимологические свойства индивидуальных компонентов. Бюлл. эксп. биол. мед. 1999. Т.128(10). С.391-396.

121. Wu Z., Jiang G., Xiang P., Yang D., Wang N. // Purification and characterization of trypsin-like enzymes from North Pacific krill (.Euphausia pacifica). Biotechnol. Lett. 2008. V. 30, P.67-72.

122. Yamada К., Murakami Н., Tachibana Н., Watanabe Y., Miyake Y., Omura H. // Stimulation by 2-mercaptoethanol and alcohols of protease in antarctic krill, Euphausia superba, at low temperature. Agric. Biol. Chem. 1987. V.51. P. 3363-3368.

123. Kimoto K., Yokoi Т., Murakami K. // Purification and characterization of chymotrypsin-like proteinase from Euphausia superba. Agric. Biol. Chem. 1985. V.49. P. 1599-1603.

124. Wu Z., Jiang G. // Purification and characterization of trypsin-like enzymes from Neomysis japonica using BApNA as substrate. Int. J. Pept. Res. Ther. 2008. V.2. P.75-80.

125. Jeong Y., Wei C.I., Preston J.F., Marshall M.R. // Purification and characterization of proteases from hepatopancreas of crayfish (Procambarus clarkii). J. Food Biochem. 2000. V. 24. P.311-332.

126. Hernandez-Cortes P., Whitaker J., Garcia-Carreno F.L. // Purification and characterization of chymotrypsin from Penaeus vannamei (Crustacea: Deca-poda). J. FoodBiochem. 1997. V. 21. P.497-514.

127. Roy P., Colas В., Durand P. // Purification, kinetical and molecular characterizations of a serine collagenolytic protease from greenshore crab (Carcinus maenas) digestive gland. Сотр. Biochem. Physiol. В Biochem. Mol. Biol. 1996. V. 115. P. 87-95.

128. Eisen A.Z., Henderson K.O., Jeffrey J.J., Bradshaw R.A. // A collagenolytic protease from the hepatopancreas of the fiddler crab, Uca pugilator. Purification and properties. Biochemistry. 1973. V. 12. P. 1814-1822.

129. Tsu C.A., Perona J.J., Schellenberger V., Turck C.W., Craik C.S. H The substrate specificity of Uca pugilator collagenolytic serine protease I correlates with the bovine type I collagen cleavage site. J. Biol. Chem. 1994. V. 269(52). P. 19565-19572.

130. Wohl R.C., Summaria L., Robbins K.C. // Kinetics of activation of human plasminogen by different activator species at pH 7.4 and 37 degrees C. J. Biol. Chem. 1980. V. 255. P. 2005-2013.

131. Pozsgay M., Szabo G., Bajusz S., Simonsson R., Gaspar R., Elodi P. // Investigation of the substrate-binding site of trypsin by the aid of tripeptidyl-p-nitroanilide substrates. Eur. J. Biochem. 1981. V.l 15(3). P.497-502.

132. Blaber M., Isackson P.J., Marsters J.C., Burnier J.P., Bradshaw R.A. // Substrate specificities of growth factor associated kallikreins of the mouse submandibular gland. Biochemistry. 1989. V. 28. P. 7813-7819.

133. Le Bonniec B.F., Esmon C.T. // Glu-192—Gin substitution in thrombin mimics the catalytic switch induced by thrombomodulin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V.88. P. 7371-7375.

134. Powers J.C., McRae В. J., Tanaka Т., Cho K., Cook R.R. I I Peptide thioesters and 4-nitroanilides as substrates for porcine pancreatic kallikrein. Biochem. J. 1984. V. 220. P. 569-573.

135. Гаспарян M. Э., Остапченко В. Г., Долгих Д. А., Кирпичников М. П. // Биохимическая характеристика рекомбинантной лёгкой цепи энтеропеп-тидазы человека. Биохимия. 2006. Т. 71 (2). С. 149-156.

136. Jia Y.H., Jin Y., Lu Q.M., Li D.S., Wang W.Y., Xiong Y.L. // Jerdonase, a novel serine protease with kinin-releasing and fibrinogenolytic activity from Trimeresurus jerdonii venom. Acta Biochim. Biophys. Sin. 2003. V. 35. P. 689-694.

137. Chagas J. R., Portaro F. С. V, Hirata I. Y., Almeida P. C., Juliano M. A., Juli-ano L., Prado E. S. // Determinants of the unusual cleavage specificity of lysyl-bradykinin-releasing kallikreins. Biochem. J. 1995. V. 306. P. 63-69.

138. Паписова А.И., Семенова С.А., Кислицын Ю.А., Руденская Г.Н. // Особенности гидролиза субстратов эндопептидазами из гепатопанкреаса камчатского краба. Биоорг. химия. 2008. Т. 34 (3). С.479-486.

139. Rudenskaya G.N., Bogdanova E.A., Revina L.P., Golovkin B.N., Stepanov V.M. // Macluralisin a serine proteinase from fruits of Maclura pomifera (Raf.) Schneid. Planta. 1995. V.196(l). P. 174-179.

140. Богачева A.M., Руденская Г.Н., Пройссер А., Чикилева И.О., Дунаевский Я.Е., Головкин Б.Н., Степанов В.М. // Протеиназа из корней одуванчика Taraxacum officinale. Биохимия. 1999. Т.64(9). С. 1224-1232.

141. Spungin-Bialik A., Ben-Meira D., Fudima E., Carmeli S., Blumberg S. // Sensitive substrates for neprilysin (neutral endopeptidase) and thermolysin that are highly resistant to serine proteases. FEBS Lett. 1996. V.380(l-2). P. 79-82.

142. Asgeirsson В., Bjarnason J.B. // Structural and kinetic properties of chy-motrypsin from atlantic cod (Gadus morhua). Comparison with bovine chy-motrypsin. Сотр. Biochem. Physiol. B. 1991. V. 99B. P.327-335.

143. Keil B. / Specificity of proteolysis. Springer-Verlag. Berlin-Heidelberg-NewYork. 1992.

144. Monigatti F., Berndt P. // Algorithm for accurate similarity measurements of peptide mass fingerprints and its application. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2005. V.16. P. 13-21.

145. Степанов В.М./ Молекулярная биология: структура и функции белков. М.: 1997.

146. Keil-Dlouha V., Zylber N., Imhoff J.-M., Tong N.-T., Keil B. // Proteolytic activity of pseudotrypsin. FEBS Lett. 1971. V. 16(4). P.291-295.

147. Stocker W., Ng M., Auld D.S. // Fluorescent oligopeptide substrates for kinetic characterization of the specificity of Astacus protease. Biochemistry. 1990. V.29(45). P. 10418-10425.

148. Wu Z., Jiang G., Wang N., Wang J., Chen S., Xu Z. // Relating trypsin enzymatic properties with amino acid composition. Int. J. Pept. Res. Ther. 2007. V.14. P.81-87.

149. Schroder Leiros H.K., Willassen N. P., Smalas A. O. // Structural comparison of psychrophilic and mesophilic trypsins. Elucidating the molecular basis of cold-adaptation. Eur. J. Biochem. 2000. V. 267. P. 1039-1049.

150. Adekoya O.A., Helland R., Willassen N.P., Sylte I. // Comparative sequence and structure analysis reveal features of cold adaptation of an enzyme in the thermolysin family. Proteins. 2006. V. 62(2). P. 435-449.

151. Feller G., Gerday C. // Psychrophilic enzymes: hot topics in cold adaptation. Nat. Rev. Microbiol. 2003. V. 1(3). P. 200-208.

152. Schr0der H.K., Willassen N.P., Smalas A.O. // Structure of a non-psychrophilic trypsin from a cold-adapted fish species. Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 1998. V. 54 (Pt 5). P.780-798.

153. Eyre D.R., Matsui Y., Wu J.-J. // Collagen polymorphisms of the intervertebral disc. Biochem. Soc. Trans. 2002. V. 30. P. 844-848.

154. Нурминская M.B. Исследование белков и геномных последовательностей Candida utilis, содержащих элементы гомологии с альфа-цепью коллагена высших эукариот. Дисс. канд. биол. наук. Москва. 1991.

155. Dabbous М.К., Roberts A.N., Brinkley S.B. // Collagenase and neutral protease activities in cultures of rabbit VX-2 carcinoma. Cancer Res. 1977. V.37. P. 3537-3544.

156. Welgus H.G., Grant G.A., Jeffrey J.J., Eisen A.Z. // Substrate specificity of the collagenolytic serine protease from Uca pugilator. studies with collagenous substrates. Biochemistry. 1982. V.21 (21). P.5183-5189.

157. Mainardi C.L., Dixit S.N., Kang A.H. // Degradation of type IV (basement membrane) collagen by a proteinase isolated from human polymorphonuclear leukocyte granules. J Biol. Chem. 1980. V.255(l 1). P.5435-5441.

158. Fortney D.Z., Durham D.R. // Composition containing protease produced by Vibrio and method of use in debridement and wound healing. 1997. European patent 0472 011.

159. Lim В., Lee E. H., Sotomayor M., Schulten K. // Molecular basis of fibrin clot elasticity. Structure. 2008. V. 16. P. 449-459.

160. Wright H, T. // Secondary and conformational specificities of trypsin and chy-motrypsin. Eur. J. Biochem. 1977. V. 73. P. 567-578.

161. Tsurupa G., Tsonev L., Medved L. // Structural organization of the fibrinogen) alpha C-domain. Biochemistry. 2002. V. 41(20). P. 6449-6459.

162. Markland F. S. // Snake venoms and the hemostatic system. Toxicon. 1998. V. 36(12). P. 1749-1800.

163. Kirschbaum N.E., Budzynski A.Z. // A unique proteolytic fragment of human fibrinogen containing the A alpha COOH-terminal domain of the native molecule. J. Biol. Chem. 1990. V. 265(23). P. 13669-13676.

164. Astrup Т., Mullertz S. // The fibrin plate method for estimating fibrinolytic activity. Arch. Biochem. Biophys. 1952. V. 40(2). P. 346-351.

165. Hellgren L., Mohr V., Vincent J., Vincent J., Karlstam B. // Intravasal thrombolysis. European Patent No. W01994SE00550 19940607. 1995.

166. Leshchinskaya I.B., Shakirov E.V., Itskovitch E.L., Balaban N.P., Mardanova

167. A.M., Sharipova M.R., Viryasov M.B., Rudenskaya G.N., Stepanov V.M. // Glutamyl endopeptidase of Bacillus intermedins, strain 3-19. FEBS Lett. 1997. V.404(2-3). P.241—244.

168. Bradford M.M. // A rapid and sensitive method of the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye-binding. Anal. Biochem. 1976. V.72. P.248-251.

169. Filippova I. Yu., Lysogorskaya E.N., Oksenoit E.S., Rudenskaya G.N., Stepanov V.M. // L-pyroglutamyl-L-phenylalanyl-L-leucine-p-nitroanilide a chromogenic substrate for thiol proteinase assay. Anal. Biochem. 1984. V. 143(2). P.293-297.

170. Березин И.В., Клёсов A.A. // Практический курс химической и ферментативной кинетики. М. 1976.

171. Frugoni J.A.C. // Tampone universale di Britton e Robinson a forza ionica constante. Gazz. Chem. Ital. 1957. V.87. P. 403-407.

172. Шагинян K.A., Изотова Л.С., Иомантас Ю.В., Стронгин А.Я., Степанов

173. B.М. // Металлопротеиназа Bacillus snbtilns: «внутриклеточные» и «внеклеточные» ферменты. Биохимия. 1980. Т.45. С. 2083-2095.

174. Андреенко Г.В. (ред.) Методы исследования фибринолитической системы крови. Изд-во МГУ, Москва. 1981.

175. Matz М., Shagin D., Bogdanova Е., Britanova О., Lukyanov S., Diatchenko L. Chenchik A. // Amplification of cDNA ends based on template-switching-effect and step-out PCR. Nucleic Acids Res. 1999. V. 27. P. 1558-1560.

176. Bendtsen J.D., Nielsen H., von Heijne G., Brunak S. // Improved prediction of signal peptides: SignalP 3.0. J. Mol. Biol. 2004. V.340. P.783-795.

177. Schwede Т., Kopp J., Guex N., Peitsch M.C. // SWISS-MODEL: an automated protein homology-modeling server. Nucleic Acids Research. 2003. No.31.P. 3381-3385.

178. Altschul S.F., Gish W., Miller W., Myers E.W., Lipman D.J. // Basic local alignment search tool. J. Mol. Biol. 1990. V.215. P.403-410.

179. Johnson R.S., Taylor J.A. // Searching sequence databases via De novo peptide sequencing by tandem mass spectrometry. Mol. Biotechnol. 2002. V. 22(3). P.301-315.

180. Ma В., Zhang K., Hendrie C., Liang C., Li M., Doherty-Kirby A., Lajoie G. // PEAKS: powerful software for peptide de novo sequencing by tandem mass spectrometry. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2003. V.17. P.2337-2342.