Восстановление функций мутантного онкосупрессора р53(Y220C) с помощью низкомолекулярных реактиваторов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Хадиуллина Рания Рамилевна

• Хадиуллина Рания Рамилевна
• кандидат наук
• 2023

Оглавление диссертации кандидат наук Хадиуллина Рания Рамилевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 История открытия и исследования белка р53

1.2. Опухолевый супрессор р53

1.3 Структура белка р53

1.4 Регуляция p53 посредством посттрансляционных модификаций

1.5 Множественность функций белка p53

1.5.1 Роль белка р53 в остановке клеточного цикла

1.5.2 Роль белка р53 в контроле апоптоза

1.5.3 Роль белка р53 в репарации ДНК

1.5.4 Роль белка р53 в защите клетки от окислительного стресса

1.6 Роль убиквитин лигаз E3 в регуляции и инактивации p53

1.6.1 Предотвращение деградации p53 дикого типа путем блокирования

его взаимодействий с MDM2/MDM4

1.7 Мутантный р53

1.7.1 Миссенс мутация Y220C

1.7.2 Малые молекулы - реактиваторы мутантного р53

1.8 Альтернативные стратегии нацеливания на мутантный р53

1.9 Заключение по обзору литературы

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и реактивы

2.1.1 Химические соединения

2.2 Методы

2.2.1 Экспрессия, очистка и анализ рекомбинантных белков р53(wt) и

p53(Y220C)

2.2.1.1 Получение компетентных клеток E. coli

2

2.2.1.2 Трансформация E. coli методом теплового шока

2.2.1.3 Амплификация плазмидной ДНК

2.2.1.4 Экспрессия рекомбинантных белков в клетках E. coli

2.2.1.5 Очистка рекомбинантных белков с использованием Ni-сефарозы

2.2.1.6 Очистка рекомбинантных белков с использованием гепарин-сефарозы

2.2.1.7 Очистка рекомбинантных белков с помощью эксклюзионной хроматографии

2.2.1.8 Получение TEV-протеазы

2.2.1.9 Концентрирование и обессоливание рекомбинантных белков

2.2.1.10 Количественный анализ белков

2.2.1.11 Электрофоретическое разделение белков в полиакриламидном

геле

2.2.1.12 Окрашивание белков в полиакриламидном геле кумасси синим

2.2.1.13 Окрашивание белков в полиакриламидном геле нитратом

серебра

2.2.2 Био физические исследования

2.2.2.1 Определение аффинности соединений к рекомбинантным белкам методом поверхностного плазмонного резонанса

2.2.2.2 Определение аффинности соединений к рекомбинантным белкам методом изотермической титрационной калориметрии

2.2.2.3 Определение температуры плавления рекомбинантных белков в присутствии соединений методом дифференциальной сканирующей флуориметрии

2.2.3 Оптимизация условий кристаллизации белка р53^220С)

2.2.4 Работа с клеточными культурами

2.2.4.1 Условия культивирования клеточных культур

2.2.4.2 Обработка клеток низкомолекулярными соединениями

2.2.4.3 Оценка цитотоксичности соединений в отношении опухолевых клеток с различным статусом р53 с помощью колориметрического MTS-теста

3

2.2.4.4 Анализ пролиферативной активности клеток в режиме реального времени при воздействии соединений

2.2.4.5 Вестерн блот анализ экспрессии белков под действием соединений

2.2.4.6 Цитофлуориметрический анализ программируемой клеточной гибели

2.2.4.7 Иммуноцитохимический анализ

2.2.4.8 Выделение РНК и количественная полимеразная цепная реакция в режиме реального времени

2.2.5 Программное обеспечение и статистический анализ результатов исследования

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Экспрессия, очистка, качественная и количественная оценка рекомбинантных белков р53^) и р53^220С)

3.2 Биофизические исследования

3.2.1 Определение аффинности (равновесной константы диссоциации) соединений к рекомбинантным белкам p53(wt) и р53^220С) методом поверхностного плазмонного резонанса

3.2.2 Определение параметров аффинности (равновесной константы диссоциации) соединений к p53(wt) методом изотермического калориметрического титрования

3.3 Оценка влияния низкомолекулярных соединений на термостабильность белков р53^) и р53^220С)

3.4 Скрининг и оптимизация условий кристаллизации рекомбинантного белка р53^220С)

3.5 Влияние производных (Ш-пиррол-1-ил) индазола и (Ш-пиррол-1-ил) бензойной кислоты на жизнеспособность / пролиферативную активность клеточных линий с различным статусом белка р53

3.5.1 Оценка жизнеспособности клеточных линий с различным статусом белка р53 под действием соединений

3.5.2 Оценка пролиферативной активности клеточных линий с различным статусом белка р53 под действием соединений в режиме реального времени

3.5.3 Оценка влияния соединений на программируемую клеточную

гибель

3.6 Оценка влияния низкомолекулярных активаторов мутантного р53^220С) на его транскрипционные функции

3.6.1 Анализ изменения относительного уровня мРНК генов-мишеней

р53 ВВС3, СБКЫ1А, МБМ2 под действием исследуемых соединений

3.6.2 Анализ изменения уровня внутриклеточной экспрессии белков р53,

р21 и МОМ2 под действием исследуемых соединений

3.6.3 Иммуноцитохимический анализ воздействия исследуемых соединений на рефолдинг мутантного белка р53^220С) и его внутриклеточную локализацию

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

а.о. аминокислотный остаток

АФК активные формы кислорода

БСА бычий сывороточный альбумин

БЦК бицинхониновая кислота

БТШ белки теплового шока

ВОЗ всемирная организация здравоохранения

ГКГ главный комплекс гистосовместимости

ГТФ гуанозинтрифосфат

ДМСО диметилсульфоксид

ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота

ДСН додецилсульфат натрия

ДСФ дифференциальная сканирующая флуориметрия

ДТТ дитиотреитол

ИТК изотермическая титрационная калориметрия

ИЦХ иммуноцитохимический анализ

кДа килодальтон (единица измерения молекулярной массы)

кДНК комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота

мкмоль микромоль

ПААГ полиакриламидный гель

ППР поверхностный плазмонный резонанс

ПТМ посттрансляционные модификации

ПЦР-РВ полимеразная цепная реакция в режиме реального времени

ПЭГ полиэтиленгликоль

РНК рибонуклеиновая кислота

мРНК матричная РНК

СЛФ синдром Ли-Фраумени

ТЕМЕД N, N, N', N'-тетраметилэтилендиамин

ФБС фосфатно-солевой буфер

ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота

АТСС американская коллекция типовых культур

C, Cys цистеин

CDK циклин-зависимая киназа

c-Myc клеточный гомолог онкогена миелоцитоматоза

Chkl киназа 1 контрольной точки клеточного цикла

B-RAF murine sarcoma viral (V-Raf) oncogene homolog B1

DAPI 4',6-диамидино-2-фенилиндол дигидрохлорид

DBD ДНК-связывающий домен

DPBS фосфатно-солевой буфер Дульбекко

DREAM dimerization partner, RB-like, E2F, multi-vulval class B complex

EDTA этилендиаминтетрауксусная кислота

EGFR рецептор эпидермального фактора роста

FBS эмбриональная телячья сыворотка

FDA управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов Министерства здравоохранения и социальных служб США

GOF gain of function (усиление функции)

Jab 1 c-Jun activation domain-binding protein-1

His гистидин

HSF культура фибробластов кожи человека

HER2 рецептор человеческого эпидермального фактора роста 2 типа

HEPES 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота

HRP пероксидаза хрена

LOF loss of function (потеря функции)

MCF7 клеточная линия рака молочной железы человека

MTS 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)-2Н-тетразолий

MYBL2 связывающий Myb белок В

MQ метиленхинуклидинон

NIH Национальные институты здоровья (США)

NTA нитрилотриуксусная кислота

NEDD8 neuronal-precursor cell-expressed developmentally down-regulated protein

LB питательная среда

mTOR мишень рапамицина у млекопитающих

OD600 оптическая плотность при 600 нм

PARP поли (АДФ-рибоза)-полимеразы

PCNA ядерный антиген пролиферирующих клеток

PI йодистый пропидий

PLK1 серин/треонин-протеинкиназа

PMS феназинметасульфат

PMSF фенилметилсульфонил фторид

PUMA p53-регулируемый модулятор апоптоза

PVDF поливинилидендифторид

SNP однонуклеотидные полиморфизмы

Y, Tyr тирозин

TNF фактор некроза опухоли

VRK1 vaccinia-related kinase

WT дикий тип

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования и степень ее разработанности

Белок p53 представляет собой фактор транскрипции, который способствует сохранению целостности генома, активируя нижестоящие гены, белковые продукты которых участвуют в остановке клеточного цикла, апоптозе и репарации ДНК. Ген TP53 является одним из наиболее часто мутированных генов при онкологических заболеваниях человека (Lozano, 2019). Большинство онкогенных мутаций p53 представляют собой миссенс-мутации в ДНК-связывающем домене (DNA-binding domain, DBD) белка (Hainaut et al., 2016). Наличие мутации приводит к дестабилизации третичной структуры белка р53 и, как следствие, нарушению его транскрипционной активности. Большинство мутантных белков р53 в дополнение к потере своей транскрипционной активности (loss of function, LOF) могут также приобретать новые онкогенные свойства (gain of function, GOF) (Kim et al., 2018). Онкогенный мутантный р53 способен оказывать доминантно-негативный эффект по отношению к остальным молекулам белкам р53 дикого типа. Данный эффект опосредован гетеромеризацией мутантной и дикой форм белка, что приводит к появлению функционально неактивных тетрамерных комплексов (Goh et al., 2011). Также мутантный белок стимулирует неконтролируемую пролиферацию клеток, ингибирует апоптоз, придает устойчивость к специфическим противоопухолевым соединениям, способствует инвазии и метастазированию (Levine, 2019).

Ни одна миссенс мутация р53 не обнаруживается с частотой более 6%, а 10 наиболее частых и наиболее изученных мутаций «горячих точек», вместе составляют примерно 25% всех мутаций p53 в соответствии с базой данных The TP53 Database (https://tp53.isb-cgc.org). Структурная мутация Y220C входит в число наиболее распространенных миссенс-мутаций белка р53 и ежегодно обнаруживается в более чем 100 тысячах новых диагностированных случаев опухолевых заболеваний в мире и наблюдается, по крайней мере, в 30 различных типах опухолей (Basse et al., 2010).

Появление рентгеноструктурных данных высокого разрешения и анализ

9

третичной структуры p53 мутантов позволили выдвинуть предположение о возможности использования низкомолекулярных соединений с целью термической и конформационной стабилизации частично денатурированных белков р53 и активации их нарушенных транскрипционных функций (Wang et al., 2022). За последние два десятилетия использование современных методов исследований привели к появлению целого ряда различных реактиваторов мутантного р53. При этом некоторые из этих соединений вызывают повышение термостабильности мутантного p53 с переходом в структурную конформацию, подобную белку дикого типа (Gomes et al., 2021). Стоит отметить, что девятый по распространенности мутант р53^220С) является одним из наиболее подходящих мишеней для нацеливания низкомолекулярных соединений. Во-первых, данный белок имеет на своей поверхности уникальную гидрофобную полость за счет замены тирозина на цистеин в 220-м положении, во-вторых, данная полость значительно удалена от функциональных областей белка р53, тем самым, небольшие встроенные молекулы потенциально не будут препятствовать связыванию его естественных субстратов (Joerger et al., 2006; Chen et al., 2013).

Однако, несмотря на высокий научный и практический интерес, в настоящий момент в мире не существует ни одного одобренного регуляторными органами лекарственного препарата, воздействующего на опухолевые клетки посредством реактивации дестабилизированного p53. В базе данных клинических испытаний США ClinicalTrials.gov зарегистрированы лишь 3 соединения (COTI-2, APR-246 и PC14586), исследуемые в качестве реактиваторов мутантного белка р53. При этом, детальный механизм их действия достоверно неизвестен.

Таким образом, учитывая высокую перспективность стратегии, основанной на восстановлении фолдинга дикого типа у мутантных белков р53, в частности p53(Y220C), необходимы исследования для выявления новых низкомолекулярных модуляторов мутантного р53 и определения их основных механизмов действия. В соответствии с паспортом специальности "1.5.4 Биохимия" в рамках данной диссертационной работы были исследованы проблемы межмолекулярного

распознавания и взаимодействия мутантного белка р53^220С) с низкомолекулярными соединениями, а также оценки функциональной активности образованного комплекса и его участия в процессах жизнедеятельности опухолевых клеточных линий.

Целью работы является оценка ряда производных (1Н-пиррол-1-ил) бензойной кислоты и (1Н-пиррол-1-ил) индазола в качестве низкомолекулярных реактиваторов мутантного онкосупрессора р53^220С).

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи исследования:

1) Определить аффинность (равновесную константу диссоциации) исследуемых соединений к ДНК-связывающему домену рекомбинантных белков р53 дикого типа и мутантного p53(Y220C).

2) Оценить влияние исследуемых соединений на термостабильность рекомбинантных белков p53 дикого типа и мутантного p53(Y220C).

3) Оценить влияние соединений на жизнеспособность и пролиферативную активность опухолевых клеток с различным статусом белка р53 (дикий тип, мутант Y220C, нокаут) и фибробластов кожи человека in vitro.

4) Оценить апоптогенную активность соединений на клеточных линиях с р53 дикого типа и с миссенс мутацией Y220C in vitro.

5) Определить влияние соединений на индуцирование правильного рефолдинга мутантного белка р53^220С) и его внутриклеточную локализацию in vitro.

6) Определить влияние соединений на экспрессию генов-мишеней p53 BBC3(PUMA), CDKN1A(p21), MDM2 на уровне мРНК и на уровне белков р21 и MDM2 в опухолевых клеточных линиях с различным статусом белка р53.

Научная новизна работы

В работе впервые охарактеризованы синтетические низкомолекулярные соединения на основе производных (1Н-пиррол-1-ил) бензойной кислоты и (1H-пиррол-1-ил) индазола в качестве реактиваторов мутантного белка р53^220С).

Впервые показано, что данные соединения обладают высокой аффинностью к мутантному белку р53^220С), выраженной в (суб)микромолярных значениях равновесной константы диссоциации (kd). Безусловной новизной обладают результаты, полученные методом дифференциальной сканирующей флуориметрии, свидетельствующие о стабилизирующем эффекте соединений по отношению мутантному белку р53^220С).

В работе впервые оценен цитотоксический эффект соединений в культуре фибробластов человека и опухолевых клетках с различным статусом белка р53 (дикий тип, мутант р53^220С), нокаут). Также в работе показано, что соединения стимулируют корректный рефолдинг мутантного белка р53^220С), усиливают его ядерную локализацию и, таким образом, повышают транскрипционную активность.

Теоретическая и практическая значимость работы

Несмотря на наличие экспериментально подтвержденных онкогенных свойств мутантных форм р53, подавляющее большинство которых находятся в частично денатурированном состоянии, детальное изучение фундаментальных механизмов стабилизации мутантов является затрудненным. В первую очередь, это связано с недостатком молекулярных инструментов для таргетного воздействия на р53 мутанты. Описанные в литературе данные рентгеноструктурного анализа позволяют выдвинуть предположение о возможности структурной стабилизации частично денатурированных р53 мутантов при помощи низкомолекулярных соединений. Одним из успешных примеров использования реактиваторов мутантного p53 является соединение PRIMA-1, которое было обнаружено в 2002 году в результате скрининга библиотеки соединений Национального Института Рака США российско-шведским коллективом ученых при участии Владимира Быкова, Петра Чумакова и Галины Селивановой. Последующее усовершенствование PRIMA-1 привело к созданию APR-246, которое на сегодняшний день является ведущим соединением компании Aprea Therapeutic

(США) и проходит клинические испытания против солидных опухолей и неходжкинской лимфомы (NCT04383938, NCT04419389). Компания Critical Outcome Technologies (Канада) разработала соединение COTI-2, эффективность и безопасность которого в настоящее время оценивается в I фазе клинический исследований против ряда солидных опухолей (NCT02433626). Однако, стоит отметить, что для данных соединений до сих пор достоверно неизвестен детальный механизм действия и не показана селективность по отношению к конкретным мутантным белкам р53. Поскольку у пациентов с опухолевыми заболеваниями идентифицировано более 300 различных мутантных белков р53, универсальная стратегия их реактивации может оказаться невыполнимой задачей (Cheok et al., 2017; Freed-Pastor et al., 2012). Тем самым, разработка таргетных модуляторов, специфично воздействующих на отдельные мутантные белки, в нашем случае р53^220С), является перспективной задачей для создания новых терапевтических подходов персонализированной медицины.

Основные положения, выносимые на защиту:

1) Представленные в работе производные (1Н-пиррол-1-ил) бензойной кислоты и (1Н-пиррол-1-ил) индазола обладают высокой аффинностью к мутантному белку p53(Y220C), выраженной в (суб)микромолярных значениях равновесной константы диссоциации, а также способствуют его термической стабилизации на 0.5-2 °С.

2) Представленные в работе производные (1Н-пиррол-1-ил) индазола обладают более выраженным селективным цитотоксическим действием в отношении опухолевых клеточных линий с мутантным белком р53^220С) (MCF7 p53(Y220C), HUH7 p53(Y220C)) в сравнении с клеточной линией с p53 дикого типа (MCF7 p53(wt), A549 р53^)) и нокаутной по р53 MCF7 p53(-/-), а также фибробластов кожи человека.

3) Представленные в работе производные (1Н-пиррол-1-ил) индазола (JC16 и JC36) индуцируют корректный рефолдинг мутантного белка р53^220С),

увеличивают его ядерную локализацию и модулируют транскрипционную активность, что проявляется в повышении уровня экспрессии его генов-мишеней BBC3(PUMA), CDKN1A(p21) и MDM2.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Восстановление функций мутантного онкосупрессора р53(Y220C) с помощью низкомолекулярных реактиваторов»

Апробация работы

Материалы диссертации представлены на следующих Всероссийских и Международных симпозиумах, конгрессах и конференциях: Международная научная конференция «The regulation of proteostasis in cancer» (Санкт-Петербург, Россия, 2019), VII Международная научно- практическая конференция «Новые концепции механизмов воспаления, аутоиммунного ответа и развития опухоли» (Казань, Россия, 2019), VI Съезд биохимиков России (Сочи, Россия, 2019), Cell Bio 2020 Virtual - an Online ASCB|EMBO Meeting (Роквилл, США, 2020), 54-я ежегодная научная конференция Европейского общества клинических исследований (Бари, Италия, 2020), VII Съезд биохимиков «Белки и пептиды» (Сочи, Россия, 2021), IV Международная научная конференция «Наука будущего» и VI Всероссийский молодежный научный форум «Наука будущего- наука молодых» (Москва, Россия, 2021), 55-я ежегодная научная конференция Европейского общества клинических исследований (Бари, Италия, 2021), 75-я всероссийская с международным участием школа-конференция молодых ученых «Биосистемы: организация, поведение, управление» (Нижний Новгород, 2022). 56-я ежегодная научная конференция Европейского общества клинических исследований (Бари, Италия, 2022).

Связь работы с базовыми научными программами

Работа выполнена за счет средств субсидии, выделенной в рамках государственной поддержки Казанскому (Приволжскому) федеральному университету в целях повышения его конкурентоспособности среди ведущих мировых научно-образовательных центров (5-Т0П-100), грантов Российского фонда фундаментальных исследований (РФФИ) №18-34-00702 и № 19-54-10005,

грантов Российского научного фонда (РНФ) №19-74-10022 и №22-24-20034, а также гранта Президента Российской Федерации МК-4253.2018.4.

Публикация результатов исследования

По материалам диссертации опубликовано 22 печатных работ, в том числе 6 статей в научных журналах, индексируемых в базе данных Scopus и Web of Science, и 16 тезисов докладов на международных и всероссийских конференциях и конгрессах.

Место выполнения работы и личный вклад диссертанта

Диссертационная работа выполнена в научно-исследовательской лаборатории «OpenLab Генные и клеточные технологии» научно-клинического центра прецизионной и регенеративной медицины ФГАОУ ВО «Казанский (Приволжский) федеральный университет». Автором проведен сбор и анализ отечественной и зарубежной научный литературы по теме диссертаций. Экспериментальные данные получены лично автором, либо при его непосредственном участии. Планирование экспериментов, описание, анализ и обсуждение полученных результатов выполнены лично автором под руководством научного руководителя.

На основе лично полученных автором данных установлен молекулярный механизм гибели опухолевых клеток с мутантным р53^220С) под действием производных (1Н-пиррол-1-ил) индазола, рассматриваемых в качестве селективных низкомолекулярных стабилизаторов p53(Y220C) мутанта.

Структура и объем диссертационной работы

Материалы диссертационной работы изложены на 156 страницах машинописного текста. Работа содержит 40 рисунков и 16 таблиц. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования, обсуждения результатов исследования, заключения, выводов и списка литературы. Библиография включает 218 источников литературы.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 История открытия и исследования белка р53

В 1979 году несколько групп исследователей из Лондона, Парижа, Нью-Йорка и Принстона независимо друг от друга открыли клеточный белок с молекулярной массой около 53 кДа, который образовывал прочный комплекс с большим Т-антигеном вируса SV40 (Linzer et al., 1979; Lane et al., 1979; Kress et al., 1979). В дальнейшем было показано, что данный белок присутствует в большом количестве не только в клетках, трансформированных SV40, но и в других типах опухолевых клеток (DeLeo et al., 1979). В 1983 году во время конференции в Окстеде белку было дано название «р53» несмотря на то, что молекулярная масса человеческого белка р53 составляет 43,7 кДа. Предположительно, более высокое значение молекулярной массы изначально было получено по причине замедленной миграции белка в полиакриламидных гелях из-за наличия богатой пролином области.

С момента открытия белка р53 прошло более 40 лет и в настоящее время он является одним из наиболее изученных онкосупрессоров (Levine, 2022). В 1982 году советский ученый Чумаков П.М. с соавторами впервые в мире клонировали ген TP53 (Chumakov et al., 1982). Далее было выявлено, что p53 является не онкогеном, а опухолевым супрессором и довольно часто мутирует при онкологических заболеваниях человека (Чумаков, 2007). Во втором десятилетии исследований была раскрыта функция р53 в качестве фактора транскрипции, который при наличии клеточного стресса, запускал процессы, нацеленные на сохранение целостности генома (Levine et al., 2009). В третьем десятилетии были обнаружены новые функции р53, включая участие в метаболизме и в защите клетки от окислительного стресса (Sablina et al., 2005). Многообразие полученных результатов привело к пониманию того, что белок р53 является крайне перспективной мишенью при терапии онкологических заболеваний. В течение последних двадцати лет ведутся активные работы в этом направлений.

1.2. Опухолевый супрессор р53

Белок р53 подавляет образование и прогрессирование рака, индуцируя экспрессию генов, белковые продукты которых участвуют в остановке клеточного цикла, апоптозе, старении и репарации ДНК. Он также ограничивает формирование опухолевых новообразований посредством регулирования клеточного метаболизма, модуляции уровней активных форм кислорода (АФК), изменения уровня экспрессии некодирующих РНК, усиления аутофагии (Bieging et al., 2014). p53 выполняет описанные выше процессы, действуя в основном как гомотетрамерный фактор транскрипции, связываясь со специфическими последовательностями ДНК (Selivanova, 2010).

При нормальных физиологических условиях уровень белка р53 строго контролируется убиквитинлигазами Е3, которые посредством убиквитинирования приводят к деградации белка 26S протеасомой. Однако, в ответ на различные типы клеточного стресса, такие как повреждения ДНК, гипоксия, недостаток питательных веществ, происходит повышение уровня р53 и активация его онкосупрессорных свойств (Чумаков, 2007).

Опухолевый супрессор p53 инактивирован в большинстве злокачественных новообразований человека. Причиной этого могут быть мутации гена ТР53, повышение экспрессии негативных регуляторов р53 (например, убиквитин-лигазы MDM2 и MDM4), секвестрация белка р53 специфическими вирусными белками (Hainaut et al., 1999; Leroy et al., 2014). Инактивация р53 в результате миссенс-мутаций занимает особое место в онкогенезе, так как ТР53 является наиболее часто мутируемым геном в злокачественных опухолях человека и обнаруживается практически во всех видах опухолей. Однако частота распространенности мутаций сильно варьируется в зависимости от типа опухоли (Bouaoun et al., 2016). Например, при солидных злокачественных новообразованиях мутированный TP53 встречается гораздо чаще, чем при гематологических. При трижды негативном раке молочной железы, высокозлокачественном серозном раке яичников, раке пищевода, мелкоклеточном и плоскоклеточном раке легких р53 мутирован как

минимум в 80% случаев (Duffy et al., 2017) (Рисунок 1).

Рисунок 1 - Частота распространенности р53 с соматическими (А) и терминальными (Б) мутациями в различных типах опухолей в соответствии с базой данных The TP53 Database (https://tp53.isb-cgc.org)

Большинство мутаций гена ТР53 представляют собой соматические мутации, образующиеся в процессе жизнедеятельности человека, но встречаются и терминальные, которые, в частности, являются первопричиной синдрома Ли-Фраумени (СЛФ). СЛФ представляет собой редкий клинически и генетически гетерогенный наследственный синдром с аутосомно-доминантным типом наследования, приводящий к разным формам рака. СЛФ был впервые описан в 1969 году Фредериком Ли и Джозефом Фраумени et а1., 1969). Данный синдром характеризуется ранним началом множественных опухолей, особенно сарком мягких тканей, остеосарком, рака молочной железы, опухолей головного мозга, карциномы коры надпочечников и лейкемии et al., 2020; Meneghetti et al., 2022). Примерно у половины пациентов с синдромом Ли-Фраумени в возрасте до 30 лет выявляется, по крайней мере, один вид злокачественной опухоли, тогда как у 70-летних пациентов с СЛФ риск развития онкологии достигает 90 % ^оггеИ et а1., 2013).

1.3 Структура белка р53

Транскрипционный фактор р53 представляет собой ядерный фосфопротеин с молекулярной массой 43,7 кДа. Ген ТР53, кодирующий белок р53, расположен на 17-й хромосоме и состоит из 10 интронов и 11 экзонов. В активной форме белок р53 образует тетрамер для сайт-специфического связывания ДНК и осуществления межбелковых взаимодействий (Kamada et al., 2016).

Белок р53 дикого типа состоит из 393 аминокислотных остатков и содержит следующие функциональные участки: N-концевой домен трансактивации (TAD), пролин-богатый домен (PRD), центральный ДНК-связывающий домен (DBD), сигнал ядерной локализации (NLS), домен олигомеризации (OD) и C-концевой основной домен (CTD) (Рисунок 2).

Рисунок 2 - Схематические изображение доменной структуры белка р53. Положение наиболее распространенных структурных мутаций и частота их клинических проявлений показаны на ДНК-связывающем домене белка

N-концевой трансактивационный домен (transactivation domain, TAD, а.о. 142) р53 необходим для осуществления транскрипционной активности и взаимодействия с другими белками, включая факторы транскрипции TFIID и TFIIH, а также с факторами, связывающими TATA-бокс (TAF). TAD также

опосредует взаимодействие с ацетилтрансферазой PCAF и E3 убиквитин-лигазой MDM2 (Kamada et al., 2016).

Богатый пролином домен (proline-rich domain, PRD, а.о. 61-92) необходим для поддержания стабильности белка р53, взаимодействия с корепрессором транскрипции Sin3, а также играет важную роль в проапоптотической активности р53 (Yoon et al., 2015).

Центральный ДНК-связывающий домен (DNA-binding domain, DBD, а.о. 101-300) р53 участвует в связываниях со специфической последовательностью ДНК, представляющей собой два нуклеотидных сегмента, тандемно-расположенных друг за другом (Zhao et al., 2001; Xue et al., 2013).

Олигомеризационный домен (oligomerisation domain, OD, а.о. 326-356) отвечает за взаимодействие полноразмерных белков р53 и формирование тетрамерного комплекса.

С-концевой домен (C-terminal domain, CTD, а.о. 364-393) функционирует в качестве регуляторного участка и взаимодействует с неспецифическими последовательностями ДНК для регуляции специфического связывания центрального ДНК-связывающего домена (Kamada et al., 2016).

Помимо представленных выше функциональных доменов, р53 также содержит ядерные транспортные сигнальные участки, которые способствуют его транспорту между ядром и цитоплазмой. С-конец р53 содержит сигнальные последовательности ядерной локализации (NLS, nuclear localization signal, а.о.305-322, 369-375 и 379-384) и сигнальные последовательности ядерного экспорта (NES, nuclear export signal, а.о. 339-352). Рецепторы NLS представляют собой гетеродимерные комплексы, состоящие из импортинов а и ß, и способствуют ядерному импорту p53, опосредованному циклическим гидролизом ГТФ с участием небольшой ГТФазы (Fabbro et al., 2003).

Наиболее распространенный тип сигнала ядерного экспорта (NES) содержится в короткой пептидной последовательности с близко расположенными крупными гидрофобными аминокислотами, в частности лейцином/изолейцином,

которые распознаются и связываются со специфическим ядерным рецептором CRM1 (Fabbro et al., 2003).

1.4 Регуляция p53 посредством посттрансляционных модификаций

Посттрансляционные модификации (ПТМ) имеют решающее значение при регуляции активности p53. Они влияют на стабильность, конформацию и локализацию белка. Мультидоменная структура p53 делает его подходящей мишенью для ковалентных модификаций, основными из которых являются фосфорилирование, ацетилирование, убиквитинирование и метилирование. Между тем, другие ПТМ, такие как неддилирование (Nedd8), сумоилирование (SUMO), аденозиндифосфат (АДФ)-рибозилирование, гидроксилирование и ß-гидроксибутирилирование, также играют существенную роль в регуляции p53 (Bode et al., 2004).

Фосфорилирование

В структуре белка p53, особенно на N-конце, присутствует значительное число остатков серина (Ser) и треонина (Thr), которые являются сайтами для фосфорилирования. Большинство таких сайтов модифицируются при клеточном стрессе. В ответ на повреждение ДНК, серин/треонин-протеинкиназа VRK1 фосфорилирует p53 по Thr18 (Teufel et al., 2009). При этом протеинкиназами АТМ и Chk1/2 фосфорилируются Sеr15 и Ser20, соответственно (Shieh et al., 1997). Данные посттрансляционные модификации защищают p53 от убиквитинирования его основным негативным регулятором Mdm2, тем самым повышая его стабильность. Если повреждения ДНК достаточно сильны, то p53 дополнительно фосфорилируется по Ser46, что проводит к p53-опосредованному апоптозу (Taira et al., 2007).

Помимо N-концевого трансактивационного домена, серин и треонин подвергаются фосфорилированию и на других сайтах р53 - например, по Ser106, который был идентифицирован как новый сайт, фосфорилируемый киназой

Aurora-A. Показано, что фосфорилирование Ser106 ингибирует взаимодействие между p53 и MDM2, что продлевает период полужизни p53 (Hsueh et al., 2013).

Сообщается, что Jabí-опосредованное фосфорилирование p53 по Thr155 стимулирует ядерный экспорт p53 (Lee et al., 2017). В недавнем исследовании было обнаружено, что при гепатоцеллюлярной карциноме p53 является прямым субстратом PAK4, а фосфорилирование p53 с помощью PAK4 не только ингибирует активность p53, но также усиливает миграцию опухолевых клеток и метастазирование (Xu et al., 2016). Путем вычислительного анализа и экспериментальной проверки Choi с соавторами идентифицировали NEK2 как новую киназу, которая фосфорилирует p53 по Ser315, приводя к подавлению функций p53 и, таким образом, способствуя делению опухолевых клеток (Choi et al., 2018).

После того, как повреждение ДНК устранено, клетке необходимо инактивировать p53, поскольку устойчивая повышенная активность p53 вызывает повреждение клетки. Процесс дефосфорилирования играет в данном процессе существенную роль. Серин/треонинфосфатаза 1 (PP1) способствует повышению выживаемости клеток путем удаления фосфатных групп с Ser15 и Ser37, что вызывает снижение активности р53 и подавление экспрессии генов, ассоциированных с апоптозом. Обнаружено, что комплекс GAS41-PP2CP важен для дефосфорилирования Ser366, что способствует повышению выживаемости клеток при генотоксическом повреждении ДНК (Park et al., 2011). PPM1D (также известный как Wip1) является транскрипционной мишенью p53 и может инактивировать p53, дефосфорилируя его по Ser15, Ser33 и Ser46 (Lu et al., 2005).

Таким образом, фосфорилирование и дефосфорилирование имеют крайне важное значение для активации и подавлении функций p53.

Ацетилирование

Ацетилирование также играет важную роль в регуляции активности белка р53. В 1997 году было установлено, что CREB-связывающий белок (CBP) и E1A-

связывающий белок (p300) ацетилируют p53 по нескольким C-концевым лизинам (Lys370, Lys372, Lys373, Lys381, Lys382 и Lys386) (Gu et al., 1997), что предотвращает убиквитинирование р53 по этим сайтам, тем самым повышая его стабильность. С-концевое ацетилирование усиливает связывание р53 с локусом целевого гена, что, в свою очередь, активирует нисходящие сигнальные пути, такие как остановка клеточного цикла, старение и апоптоз.

Другой широко изученный сайт ацетилирования p53 - это Lys120 в ДНК-связывающем домене белка, который подвергается данной посттрансляционной модификации при каталитическом содействии трех членов семейства гистоновых ацетилтрансфераз (Tip60, MOF и MOZ). Tip60 и MOF ацетилирует p53 по Lys120, что приводит к селективной индукции экспрессии проапоптотических генов (PUMA и Bax) (Tang et al., 2006; Li et al., 2009). MOZ-опосредованное ацетилирование р53 по Lys120 специфически усиливает его антипролиферативную активность (Rokudai et al., 2013). Таким образом, ацетилирование белка по Lys120 с помощью различных ацетилтрансфераз может вызывать конформационные изменения p53, стимулируя его связывание с промоторным участком конкретного гена-мишени.

В ответ на повреждение ДНК p300-CBP связанный фактор (PCAF) может ацетилировать p53 по Lys320. Это предотвращает фосфорилирование сериновых остатков на N-конце p53, при этом останавливая апоптотические процессы и позволяя активировать специфические гены-мишени, отвечающие за выживание клеток (Knights et al., 2006).

Обратный процесс, связанный с удалением ацильных остатков с р53, происходит при содействии различных ферментов семейства гистоновых деацетилаз. Наиболее распространенными являются гистондеацетилаза-1 (HDAC1), гистондеацетилаза-6 (HDAC6) и гистондеацетилаза-8 (HDAC8), а также сиртуины Sirtl и Sirt3 (Liu et al., 2019).

Убиквитинирование

Протеолиз большинства внутриклеточных белков у эукариот осуществляется с помощью убиквитин-протеасомной системы (Leestemaker et al., 2017). Убиквитин представляет собой регуляторный белок, участвующий во многих клеточных процессах. Он может быть присоединен к другим белкам либо по остатку лизина, либо по N-концу за счет последовательного действия ферментов Е1, Е2 и Е3 (Glickman et al., 2002). Убиквитинирование воздействует на белки-субстраты по-разному, но чаще приводит к их деградации протеасомой 26S (Davis et al., 2015).

Убиквитин-лигаза MDM2 является основным негативным регулятором р53 и модифицирует его по шести остаткам лизина Lys370, Lys372, Lys373, Lys381, Lys382 и Lys386 (Rodriguez et al., 2000). Высокие уровни MDM2 способствуют полиубиквитинированию по множеству лизиновых остатков и последующей деградации p53 в ядре, тогда как низкие уровни MDM2 приводят к моноубиквитинированию и ядерному экспорту белка p53 в цитоплазму (Li et al., 2003).

Помимо MDM2, существуют также другие E3 убиквитин-лигазы, для которых p53 является мишенью посттрансляционной модификации и последующей протеасомной деградации, например, TRIM69, SMYD3, Arf-BP1, COP1, CHIP и Pirh2 (Parfenyev, 2019). В отличие них, убиквитин-лигазы WWP1 и MSL2 убиквитинируют p53, приводя к его ядерному экспорту, но не деградации (Liu et al., 2019).

Удаление молекул убиквитина с поверхности белка р53 возможно с помощью деубиквитиназ - ферментов, способных расщеплять пептидную или изопептидную связь между молекулами убиквитина и белка. Примеры деубиквитиназ включают HAUSP, OTUD1, OTUD5, атаксин-3 и ферменты семейства USP, играющие важную роль в регуляции и стабилизации р53 (Liu et al., 2019).

Существуют также другие схожие с убиквитином сигнальные белки, например малый убиквитин-подобный модификатор SUMO (Small Ubiquitin-like

Modifier) и NEDD8 (Neuronal-precursor cell-expressed developmentally down-regulated protein 8), которые конъюгируются с лизинами p53 посредством механизма, аналогичного убиквитинированию. Эти два процесса называются сумоилированием и неддилированием, соответственно (Rodri et al., 1999; Xirod et al., 2004). Протеин-лигазы PIAS и Topors могут сумоилировать p53 по Lys386, таким образом предотвращая доступ p300 к его C-концевым лизинам, что приводит к ингибированию функций р53 в качестве фактора транскрипции. Неддилирование p53 с помощью убиквитин-лигазы MDM2 (по Lys370, Lys372 и Lys373) или FBXO11 (по Lys320 и Lys321) также ингибирует транскрипционную активность р53 (Watson et al., 2006).

Таким образом, убиквитинирование играет важнейшую роль в регуляции внутриклеточного уровня и функций белка р53.

Метилирование р53

Метилирование р53 по Lys372 с помощью метилтрансферазы Set7/9 стабилизирует p53, что способствует его локализации в ядре и повышает транскрипцию ряда генов-мишеней, таких как p21 (Morgunkova et al., 2006; Daks et al., 2022). Однако, метилирование p53 по Lys370 с помощью N-лизин метилтрансферазы SMYD2 ослабляет связывание p53 с промотором его генов-мишеней, подавляя таким образом p53-опосредованную регуляцию транскрипции (Huang et al., 2006).

Помимо лизина, аргининовые остатки р53 также могут быть метилированы. Показано, что протеин-аргининметилтрансфераза 5 (PRMT5) отвечает за метилирование p53 по Arg333, Arg335 и Arg337, что влияет на специфичность p53 к промоторным участкам генов-мишеней (Jansson et al., 2008).

На сегодняшний день обнаружена только одна деметилаза LSD1, которая деметилирует p53 по Lys370, и блокирует его взаимодействие с коактиватором 53BP1 (p53-связывающий белок 1), подавляя таким образом функции p53.

В целом, посредством различных посттрансляционных модификаций р53 находится под строгим контролем многоуровневого и тонко настроенного молекулярного механизма, позволяющего регулировать активность и функции данного транскрипционного фактора.

1.5 Множественность функций белка р53

Транскрипционный фактор р53 является одним из ключевых онкосупрессоров благодаря регуляции огромного числа генов-мишеней, белковые продукты которых участвуют в остановке клеточного цикла, репарации ДНК, апоптозе, старении, аутофагии, антиангиогенезе и многих других процессах. В Таблице 1 приведены основные гены-мишени транскрипционного фактора р53.

Таблица 1 - Гены-мишени транскрипционного фактора р53

Клеточный процесс Гены

Апоптоз Puma, Noxa, Bax, Pig3

Репарация ДНК Gadd45a, P53r2, Ddb2, Mgmt

Остановка клеточного цикла p21, 14-3-3a, Btg2, Reprmo

Метаболизм, защита от окислительного стресса Tigar, Gls2, Gpx1, Sesn1/2

Старение Pai1, Pml, Cdkn1a

Аутофагия Atg10, Tsc2, Tpp1, Foxo3,

Антиангиогенез Tsp1, Bal1, Epha2, Col4a1

При наличии сигналов клеточного стресса р53 активируется посредством посттрансляционных модификаций. В зависимости от типа клеточного стресса эта активация может приводить к усилению или к подавлению экспрессии генов-мишеней р53 (Вескегтап et в1., 2010). Помимо своей роли в качестве онкосупрессора, р53 также участвует в защите клетки от окислительного стресса, способствует регуляции метаболизма и гомеостаза ^ое^ег et а1., 2016). p53

осуществляет вышеописанные функции, действуя как гомотетрамерный фактор транскрипции, связываясь со специфическими консенсусными последовательностями ДНК, условно описываемыми как RRRCWWGYYY, где R=A/G, W=A/T, Y=C/T (Veprintsev et al., 2006).

1.5.1 Роль белка р53 в остановке клеточного цикла

В условиях низких уровней клеточного стресса, когда возможно восстановление, p53 задействует временную программу остановки клеточного цикла и репарации ДНК, чтобы позволить клеткам исправить повреждения, тем самым ограничивая онкогенные процессы. Эта роль p53 в качестве так называемого «хранителя генома» распространяется далее на поддержание стабильности работы генетического аппарата клетки на хромосомном уровне, ограничивая накопление анеуплоидных клеток.

При этом p53 способен косвенно подавлять экспрессию множества генов, белковые продукты которых необходимы для прохождения клеточного цикла. Ключевыми примерами генов, репрессированных после активации p53, являются циклин A, циклин B1, циклин B2, поло-подобная киназа 1 (PLK1), циклин-зависимая киназа 1 (CDK1), CDC20, MCM5, CKS1, BIRC5.

Косвенное подавление транскрипции генов-мишеней осуществляется через сигнальный путь p53-p21-DREAM-E2F/CHR (или p53-DREAM). Данный каскад участвует в регуляции всех контрольных точек, от синтеза ДНК до цитокинеза, включая фазы клеточного цикла G1/S, G2/M и контрольную точку сборки веретена деления (M) (Engeland, 2018).

CDKN1A(p21) является одним из первых идентифицированных генов-мишеней р53, участвующих в остановке клеточного цикла в фазе G1/S (Abbas et al., 2009). Его белковый продукт р21 связывает и ингибирует циклин-зависимые киназы CDK2 и CDK4, а также останавливает клеточный цикл, блокируя ядерный антиген пролиферирующих клеток (PCNA), который необходим для репликации ДНК. Важно отметить, что ингибирование CDK2 и CDK4 ведет к стабилизации и

активации белка ретинобластомы (pRB) и связанного с ним комплекса DREAM, что, в свою очередь, способствует подавлению транскрипции генов-мишеней E2F1, критичных для репликации ДНК и регуляции клеточного цикла (Fischer et al., 2017).

Задержка клеточного цикла в фазе G2/M важна для предотвращения расхождения недореплицированных и поврежденных хромосом. Арест клеточного цикла в этой точке возможен за счет подавления активности комплекса CDK2-циклин В, чему способствуют сразу несколько р53-индуцируемых генов -GADD45, BTG2, B99 (GTSE-1), REPRIMO, HZF и MCG10 (Чумаков, 2007).

1.5.2 Роль белка р53 в контроле апоптоза

Апоптоз, как внутренний, так и внешний, индуцируется с помощью белковых продуктов таргетных генов р53 (Elmore, 2007). Сигнальный путь внешнего апоптоза в значительной степени контролируется семейством рецепторов фактора некроза опухоли (TNF). Рецепторы TNF включают р53-индуцированные мишени FAS и TNF RSF10A. Они могут быть активированы внешними стимулами, такими как связывание с FASL или TNF-а, что приводит к каспаза-зависимому апоптозу (Schilling et al., 2009).

Ген, кодирующий связанный с рецептором TNF белок 4 (TRAF4), также является транскрипционной мишенью p53. Дополнительные индуцирующие апоптоз трансмембранные белки кодируются такими таргетными генами p53, как PERP и SUSD6 (TMPS и KIAA0247) (Cui et al., 2010).

Внутренний путь апоптоза регулируется семейством белков Bcl-2, которые контролируют высвобождение цитохрома C из митохондрий. Гены нескольких проапоптотических членов данного семейства, включая BAX, PUMA (BBC3) и NOXA (PMAIP1), также активируются белком p53 (Hudson et al., 2004). При высвобождении из митохондрий цитохром С связывается с APAF1 и прокаспазой 9, образуя апоптосому. При этом транскрипция гена APAF1 также активируется белком р53.

Ген AEN кодирует апоптоз-усиливающую нуклеазу, которая дополнительно стимулирует апоптоз путем расщепления двухцепочечной ДНК (Kawase et al., 2008). Апоптоз также может активироваться церамидом, а р53, по-видимому, непосредственно активирует гены CERS5 и CERS6, кодирующие церамид-синтазу.

Хотя многие гены-мишени p53 кодируют апоптоз-стимулирующие белки, TRIAP1 является таргетным геном p53, который кодирует р53-регулируемый апоптоз-ингибирующий белок 1 (Park et al., 2005).

1.5.3 Роль белка р53 в репарации ДНК

Клетки непрерывно подвергаются воздействию эндогенных и экзогенных факторов, которые угрожают целостности их ДНК. Поддержание стабильности генома имеет первостепенное значение для предотвращения образования опухолей. Белок р53 играет здесь важную роль, стимулируя экспрессию основных факторов, участвующих в процессе репарации ДНК, или непосредственно взаимодействуя с ними (Janic et al., 2018). Целевые гены p53, такие как DDB2 (Tan et al., 2002) и XPC (Gatz et al., 2006), кодируют белки, связанные с эксцизионной репарацией нуклеотидов. Среди транскрипционных мишеней белка р53 также присутствует ген RRM2B, кодирующий рибонуклеотидредуктазу, участвующую в процессе восстановления ДНК (Tanaka et al., 2000). Белковый продукт гена PCNA является ключевым компонентом вилки репликации во время клеточного цикла, и способствует репарации ДНК (Moldovan et al., 2007). Для исправления дефектов вблизи репликационной вилки транскрипционный фактор р53 также индуцирует экспрессию ДНК полимеразы n (Liu, Chen, 2006).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Хадиуллина Рания Рамилевна, 2023 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Чумаков, П. М. Белок р53 и его универсальные функции в многоклеточном организме / П. М. Чумаков // Успехи биологической химии. - 2007. - Т. 47. -№. 1. - С. 3-52.

2. Abbas, T. p21 in cancer: intricate networks and multiple activities / T. Abbas, A. Dutta // Nature Reviews Cancer. - 2009. - Т. 9. - №. 6. - С. 400-414.

3. Alexandrova, E. M. Improving survival by exploiting tumour dependence on stabilized mutant p53 for treatment / E. M. Alexandrova, A. R. Yallowitz, D. Li, S. Xu, R. Schulz, D. A. Proia, G. Lozano, M. Dobbelstein, U. M. Moll // Nature. -2015. - T. 523, № 7560. - C. 352-356.

4. Ang, H. C. Effects of common cancer mutations on stability and DNA binding of full-length p53 compared with isolated core domains / H. C. Ang, A. C. Joerger, S. Mayer, A. R. Fersht // Journal of Biological Chemistry. - 2006. T.281. - №.31. -С. 21934-21941.

5. Aubrey, B. J. How does p53 induce apoptosis and how does this relate to p53-mediated tumour suppression? / G. L. Kelly, A. Janic, M. J. Herold, A. Strasser // Cell Death & Differentiation. - 2018. - Т. 25. - №. 1. - С. 104-113.

6. Basse, N. Toward the rational design of p53-stabilizing drugs: probing the surface of the oncogenic Y220C mutant / N. Basse, J. L. Kaar, G. Settanni, A. C. Joerger, T. J. Rutherford, A. R. Fersht // Chemistry & biology. - 2010. - Т. 17. - №. 1. -С. 46-56.

7. Batir, M. B. Evaluation of the CRISPR/Cas9 directed mutant TP53 gene repairing effect in human prostate cancer cell line PC-3 / M. B. Batir, E. Sahin, F. S. Cam // Molecular Biology Reports. - 2019. - T. 46, № 6. - C. 6471-6484.

8. Baud, M. G. Aminobenzothiazole derivatives stabilize the thermolabile p53 cancer mutant Y220C and show anticancer activity in p53-Y220C cell lines / M. G. Baud, M. R. Bauer, L. Verduci, F. A. Dingler, K. J. Patel, D. H. Roy, A. R. Fersht // European journal of medicinal chemistry. - 2018. - Т. 152. - С. 101-114.

9. Bauer, M. R. 2-Sulfonylpyrimidines: Mild alkylating agents with anticancer activity toward p53-compromised cells / M. R. Bauer, A. C. Joerger, A. R. Fersht // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2016. - T. 113. - №. 36. -C. E5271-E5280.

10. Bauer, M. R. A structure-guided molecular chaperone approach for restoring the transcriptional activity of the p53 cancer mutant Y220C / M. R. Bauer, R. N. Jones, R. K. Tareque, B. Springett, F. A. Dingler, L. Verduci, J. Spencer // Future Medicinal Chemistry. - 2019. - T. 11. - №. 19. - C. 2491-2504.

11. Bauer, M. R. Harnessing fluorine-sulfur contacts and multipolar interactions for the design of p53 mutant Y220C rescue drugs / M. R. Bauer, R. N. Jones, M. G. Baud, R. Wilcken, F. M. Boeckler, A. R. Fersht, J. Spencer // ACS chemical biology. - 2016. - T. 11. - №. 8. - C. 2265-2274.

12. Bauer, M. R. Targeting cavity-creating p53 cancer mutations with small-molecule stabilizers: The Y220X paradigm / M. R. Bauer, A. Krämer, G. Settanni, R. N. Jones, X. Ni, R. Khan Tareque, A. C. Joerger // ACS chemical biology. - 2020. -T. 15. - №. 3. - C. 657-668.

13. Beckerman, R. Transcriptional regulation by p53 / R. Beckerman, C. Prives // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2010. - T. 2. - №. 8. - C. a000935.

14. Bensaad, K. p53: new roles in metabolism / K. Bensaad, K. H. Vousden // Trends in cell biology. - 2007. - T. 17. - №. 6. - C. 286-291.

15. Bieging, K. T. Unravelling mechanisms of p53-mediated tumour suppression / K. T. Bieging, S. S. Mello, L. D. Attardi // Nature Reviews Cancer. - 2014. - T. 14. -№. 5. - C. 359-370.

16. Blattner, C. DNA damage induced p53 stabilization: no indication for an involvement of p53 phosphorylation / C. Blattner, E. Tobiasch, M. Litfen, H. J. Rahmsdorf, P. Herrlich // Oncogene. - 1999. - T. 18. - №. 9. - C. 1723-1732.

17. Bode, A. M. Post-translational modification of p53 in tumorigenesis / A. M. Bode, Z. Dong // Nature Reviews Cancer. - 2004. - T. 4. - №. 10. - C. 793-805.

18. Boeckler, F. M. Targeted rescue of a destabilized mutant of p53 by an in silico screened drug / F. M. Boeckler, A. C. Joerger, G. Jaggi, T. J. Rutherford, D. B. Veprintsev, A. R. Fersht // Proceedings of the National Academy of Sciences. -2008. - T. 105. - №. 30. - C. 10360-10365.

19. Bouaoun, L. TP53 variations in human cancers: new lessons from the IARC TP53 database and genomics data / L. Bouaoun, D. Sonkin, M. Ardin, M. Hollstein, G. Byrnes, J. Zavadil, M. Olivier // Human mutation. - 2016. - T. 37. - №. 9. - C. 865-876.

20. Bromley, D. An in-silico algorithm for identifying stabilizing pockets in proteins: test case, the Y220C mutant of the p53 tumor suppressor protein / D. Bromley, M. R. Bauer, A. R. Fersht, V. Daggett // Protein Engineering, Design and Selection. -2016. - T. 29. - №. 9. - C. 377-390.

21. Brooks, C. L. p53 ubiquitination: Mdm2 and beyond / C. L. Brooks, W. Gu // Molecular cell. - 2006. - T. 21. - №. 3. - C. 307-315.

22. Budanov, A. V. Regeneration of peroxiredoxins by p53-regulated sestrins, homologs of bacterial AhpD / A. V. Budanov, A. A. Sablina, E. Feinstein, E. V. Koonin, P. M. Chumakov // Science. - 2004. - T. 304. - №.5670. - C. 596-600.

23. Bullock, A. N. Thermodynamic stability of wild-type and mutant p53 core domain / J. Henckel, B. S. DeDecker, C. M. Johnson, P. V. Nikolova, M. R. Proctor, A. R. Fersht // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1997. - T. 94. - №. 26. - C. 14338-14342.

24. Burgess, A. Clinical overview of MDM2/X-targeted therapies / A. Burgess, K. M. Chia, S. Haupt, D. Thomas, Y. Haupt, E. Lim // Frontiers in oncology. - 2016. -T. 6. - C. 7.

25. Bykov, V. J. N. Mutant p53 reactivation by small molecules makes its way to the clinic / V. J. N. Bykov, K. G.Wiman // FEBS letters. - 2014. - T. 588. - №. 16. -C. 2622-2627.

26. Bykov, V. J. PRIMA-1 MET synergizes with cisplatin to induce tumor cell apoptosis / V. J. Bykov, N. Zache, H. Stridh, J. Westman, J. Bergman, G. Selivanova, K. G. Wiman // Oncogene. - 2005. - T. 24. - №. 21. - C. 3484-3491.

27. Bykov, V. J. Restoration of the tumor suppressor function to mutant p53 by a low-molecular-weight compound / V. J. Bykov, N. Issaeva, A. Shilov, M. Hultcrantz, E. Pugacheva, P. Chumakov, G. Selivanova // Nature medicine. - 2002. - T. 8. -№. 3. - C. 282-288.

28. Chasov, V. Key Players in the Mutant p53 Team: Small Molecules, Gene Editing, Immunotherapy / V. Chasov, R. Mirgayazova, E. Zmievskaya, R. Khadiullina, A. Valiullina, J. Stephenson Clarke, A. Rizvanov, M. G. J. Baud, E. Bulatov // Frontiers in Oncology. - 2020. - T. 10. - C. 1460.

29. Chen, M. J. Caffeic acid phenethyl ester inhibits epithelial-mesenchymal transition of human pancreatic cancer cells / M. J. Chen, S. C. Shih, H. Y. Wang,

C. C. Lin, C. Y. Liu, T. E. Wang, Y. J. Chen // Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. - 2013. - T. 2013.

30. Cheok, C. F. Exploiting the p53 pathway for therapy / C. F. Cheok, D. P. Lane // Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. - 2017. - T. 7. - №2. 3. - C. a026310.

31. Cho, Y. Crystal structure of a p53 tumor suppressor-DNA complex: understanding tumorigenic mutations / Y. Cho, S. Gorina, P.D. Jeffrey, N. P. Pavletich // Science. - 1994. - T. 265. - №. 5170. - C. 346-355.

32. Choi, B. K. Literature-based automated discovery of tumor suppressor p53 phosphorylation and inhibition by NEK2 / B. K. Choi, T. Dayaram, N. Parikh, A.

D. Wilkins, M. Nagarajan, I. B. Novikov, O. Lichtarge // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2018. - T. 115. - №. 42. - C. 10666-10671.

33. Chumakov, P. M. Isolation of a plasmid clone containing the mRNA sequence for mouse nonviral T-antigen / P. M. Chumakov, V. S. Iotsova, G. P. Georgiev // Doklady Akademii nauk SSSR. - 1982. - T. 267. - №. 5. - C. 1272-1275.

34. Clegg, H.V. Unlocking the Mdm2-p53 loop: ubiquitin is the key / H. V. Clegg, K. Itahana, Y. Zhang // Cell Cycle. - 2008. - V. 7. - I. 3. - P. 287-292.

35. Cui, H. Regulation of apoptosis by p53-inducible transmembrane protein containing sushi domain / H. Cui, H. Kamino, Y. Nakamura, N. Kitamura, T. Miyamoto, D. Shinogi // Oncol Rep. - 2010. - V.24. - P. 1193-1200.

36. Daks, A. The Role of Lysine Methyltransferase SET7/9 in Proliferation and Cell Stress Response / A. Daks, E. Vasileva, O. Fedorova, O. Shuvalov, N. A. Barlev // Life. - 2022. - T. 12. - №. 3. - C. 362.

37. Davis, M. I. Ubiquitin-specific proteases as druggable targets / M. I. Davis, A. Simeonov // Drug target review. - 2015. - T. 2. - №. 3. - C. 60.

38. DeLeo, A. B. Detection of a transformation-related antigen in chemically induced sarcomas and other transformed cells of the mouse / A. B. DeLeo, G. Jay, E. Appella, G. C. Dubois, L. W. Law, L. J. Old // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1979. - T. 76. - №. 5. - C. 2420-2424.

39. Demir, O. Full-length p53 tetramer bound to DNA and its quaternary dynamics / O Demir, P.U. Ieong, R.E. Amaro // Oncogene. - 2017. - T. 36. - №. 10. - C. 1451-60.

40.Drane, P. Reciprocal down-regulation of p53 and SOD2 gene expression-implication in p53 mediated apoptosis / P. Drane, A. Bravard, V. Bouvard, E. May // Oncogene. - 2001. - T. 20. - №. 4. - C. 430-439.

41. Duffy, M. J. Mutant p53 as a target for cancer treatment / M. J. Duffy, N. C. Synnott, J. Crown // European Journal of Cancer. - 2017. - T. 83. - C. 258-265.

42.Dumble, M. The first orally bioavailable small molecule reactivator of Y220C mutant p53 in clinical development / M. Dumble, L. Xu, R. Dominique, B. Liu, H. Yang, M. K. McBrayer, B. Vu // Cancer Research. - 2021. - T. 81. - №. 13 - C. LB006-LB006.

43. Dumbrava, E. E. First-in-human study of PC14586, a small molecule structural corrector of Y220C mutant p53, in patients with advanced solid tumors harboring a TP53 Y220C mutation / E. E. Dumbrava, M. L. Johnson, A. W. Tolcher, G. Shapiro, J. A. Thompson, A. B. El-Khoueiry, A. M. Schram // Meeting Abstract | 2022 ASCO Annual Meeting I - 2022. - C. 3003

44. El-Deiry, W. S. WAF1, a potential mediator of p53 tumor suppression / T. Tokino, V. E. Velculescu, D. B. Levy, R. Parsons, J. M. Trent, B. Vogelstein // Cell. - 1993.

- T. 75. - №. 4. - C. 817-825.

45. Elmore, S. Apoptosis: a review of programmed celldeath / S. Elmore // Toxicol Pathol. - 2007. - V. 35. - P. 495-516.

46. ElSawy, K. On the interaction mechanisms of a p53 peptide and nutlin with the MDM2 and MDMX proteins: a Brownian dynamic study / K. ElSawy, C. S. Verma, T. L. Joseph, D. P. Lane, R. Twarock, L. Caves // Cell Cycle. - 2013. - T. 12. - №. 3. - C. 394-404.

47. Engeland, K. Cell cycle arrest through indirect transcriptional repression by p53: I have a DREAM / K. Engeland // Cell Death & Differentiation. - 2018. - T. 25. -№. 1. - C. 114-132.

48. Erster, S. In vivo mitochondrial p53 translocation triggers a rapid first wave of cell death in response to DNA damage that can precede p53 target gene activation / S. Erster, M. Mihara, R. H. Kim, O. Petrenko, U. M. Moll // Molecular and cellular biology. - 2004. - T. 24. - №. 15. - C. 6728-6741.

49. Fabbro, M. Regulation of tumor suppressors by nuclear-cytoplasmic shuttling / M. Fabbro, B. R. Henderson // Exp. Cell Res. - 2003. - V. 282. - P.59-69

50. Fernandes-Alnemri, T. CPP32, a novel human apoptotic protein with homology to Caenorhabditis elegans cell death protein Ced-3 and mammalian interleukin-1 beta-converting enzyme / T. Fernandes-Alnemri, G. Litwack, E. S. Alnemri // Journal of Biological Chemistry. - 1994. - T. 269. - №. 49. - C. 30761-30764.

51. Ferrandiz, N. p21 as a transcriptional co-repressor of S-phase and mitotic control genes / N. Ferrandiz, J. M. Caraballo, L. Garcia-Gutierrez, V. Devgan, M. Rodriguez-Paredes, M. C. Lafita, J. León // PLoS One. - 2012. - T. 7. - №. 5. - C. e37759.

52. Fischer, M. Census and evaluation of p53 target genes / M. Fischer // Oncogene.

- 2017. - T. 36. - №. 28. - C. 3943-3956.

53. Freed-Pastor, W. A. Mutant p53: one name, many proteins / W. A. Freed-Pastor,

C. Prives // Genes & development. - 2012. - T. 26. - №. 12. - C. 1268-1286.

54. Friedler, A. Kinetic instability of p53 core domain mutants: implications for rescue by small molecules / A. Friedler, D. B. Veprintsev, L. O. Hansson, A. R. Fersht // Journal of Biological Chemistry. - 2003. - T. 278. - №. 26. - C. 2410824112.

55. Gartel, A. L. Transcriptional regulation of the p21 (WAF1/CIP1) gene / A. L. Gartel, A. L. Tyner // Experimental cell research. - 1999. - T. 246. - №. 2. - C. 280-289.

56. Gatz, S. A. p53 in recombination and repair / S. A. Gatz, L. Wiesmuller // Cell Death Differ. - 2006. - V.13. - P.1003-1016.

57. Ghavami, S. Apoptosis and cancer: mutations within caspase genes / S. Ghavami, M. Hashemi, S. R. Ande, B.Yeganeh, W. Xiao, M. Eshraghi, M. Los // Journal of medical genetics. - 2009. - T. 46. - №. 8. - C. 497-510.

58. Glickman, M. H. The ubiquitin-proteasome proteolytic pathway: destruction for the sake of construction / M. H. Glickman, A. Ciechanover // Physiological reviews. - 2002.

59. Goh, A. M. The role of mutant p53 in human cancer / A. M. Goh, C. R. Coffill,

D. P. Lane // The Journal of pathology. - 2011. - T. 223. - №. 2. - C. 116-126.

60. Gomes, A. S. Structural and Drug Targeting Insights on Mutant p53 / A. S. Gomes, H. Ramos, A. Inga, E. Sousa, L. Saraiva // Cancers. - 2021. - T. 13. - №. 13. - C. 3344.

61. Green, D. R. Cytoplasmic functions of the tumour suppressor p53 / D. R. Green, G. Kroemer // Nature. - 2009. - T. 458. - №. 7242. - C. 1127-1130.

62. Gu, W. Activation of p53 sequence-specific DNA binding by acetylation of the p53 C-terminal domain / W. Gu, R. G. Roeder // Cell. - 1997. - T. 90. - №. 4. -C. 595-606.

63. Guo, Y. The combination of Nutlin-3 and Tanshinone IIA promotes synergistic cytotoxicity in acute leukemic cells expressing wild-type p53 by co-regulating

MDM2-P53 and the AKT/mTOR pathway / Y. Guo, Y. Li, F. F. Wang, B. Xiang, X. O. Huang, H. B. Ma, Y. P. Gong // The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. - 2019. - T. 106. - C. 8-20.

64. Gupta, A. K. Spiro-oxindoles as a promising class of small molecule inhibitors of p53-MDM2 interaction useful in targeted cancer therapy / A. K. Gupta, M. Bharadwaj, A. Kumar, R. Mehrotra // Topics in Current Chemistry. - 2017. - T. 375. - №. 1. - C. 1-25.

65. Hafner, A. The multiple mechanisms that regulate p53 activity and cell fate / A. Hafner, M. L. Bulyk, A. Jambhekar, G. Lahav // Nature reviews Molecular cell biology. - 2019. - T. 20. - №. 4. - C. 199-210.

66. Hainaut, P. p53 and human cancer: the first ten thousand mutations / P. Hainaut, M. Hollstein // Advances in cancer research. - 1999. - T. 77. - C. 81-137.

67. Hainaut, P. Somatic TP53 mutations in the era of genome sequencing / P. Hainaut, G. P. Pfeifer // Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. - 2016. -T. 6. - №. 11. - C. a026179.

68. Han, J. Expression of bbc3, a pro-apoptotic BH3-only gene, is regulated by diverse cell death and survival signals / J. W. Han, C. Flemington, A. B. Houghton, Z. Gu, G. P. Zambetti, R. J. Lutz, T.Chittenden // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2001. - T. 98. - №. 20. - C. 11318-11323.

69. Hansen, M. J. Photoactivation of MDM2 inhibitors: controlling protein-protein interaction with light / M. J. Hansen, F. M. Feringa, P. Kobauri, W. Szymanski, R. H. Medema, B. L. Feringa // Journal of the American Chemical Society. - 2018. -T. 140. - №. 41. - C. 13136-13141.

70. Harper, J. W. The p21 Cdk-interacting protein Cip1 is a potent inhibitor of G1 cyclin-dependent kinases / J. W. Harper, G. R. Adami, N. Wei, K. Keyomarsi, S. J. Elledge // Cell. - 1993. - T. 75. - №. 4. - C. 805-816.

71. Hikisz, P. PUMA, a critical mediator of cell death—one decade on from its discovery / P. Hikisz, Z. Kilianska // Cellular and Molecular Biology Letters. -2012. - T. 17. - №. 4. - C. 646-669.

72. Ho, T. How the other half lives: what p53 does when it is not being a transcription factor / T. Ho, B. X. Tan, D. Lane // International Journal of Molecular Sciences.

- 2019. - T. 21. - №. 1. - C. 13.

73. Hoydahl, L. S. Targeting the MHC Ligandome by Use of TCR-Like Antibodies / L. S. Hoydahl, R. Frick, I. Sandlie, G. A. Loset // Antibodies. - 2019. - T. 8, № 2.

- C. 32.

74. Hsiue, E. H. C. Targeting a neoantigen derived from a common TP53 mutation / E. H.C. Hsiue, K. M. Wright, J. Douglass, M. S. Hwang, B. J. Mog, A. H. Pearlman, S. Paul, S. R. DiNapoli, M. F. Konig, Q. Wang, A. Schaefer, M. S. Miller, A. D. Skora, P. A. Azurmendi, M. B. Murphy, Q. Liu, E. Watson, Y. Li, D. M. Pardoll, C. Bettegowda, N. Papadopoulos, K. W. Kinzler, B. Vogelstein, S. B. Gabelli, S. Zhou // Science. - 2021. - T. 371, № 6533. - C. 1009.

75. Hsueh, K. W. A novel Aurora-A-mediated phosphorylation of p53 inhibits its interaction with MDM2 / K. W. Hsueh, S. L. Fu, C. B. Chang, Y. L. Chang, C. H. Lin // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics. - 2013. -T. 1834. - №. 2. - C. 508-515.

76. Huang, J. Repression of p53 activity by Smyd2-mediated methylation / J. Huang, L. Perez-Burgos, B. J. Placek, R. Sengupta, M. Richter, J. A. Dorsey, S. L. Berger // Nature. - 2006. - T. 444. - №. 7119. - C. 629-632.

77. Janic, A. DNA repair processes are critical mediators of p53-dependent tumor suppression / A. Janic, L. J. Valente, M. J. Wakefield, L. Di Stefano, L. Milla, S. Wilcox, M. J. Herold // Nature medicine. - 2018. - T. 24. - №. 7. - C. 947-953.

78. Jänicke R. U. MCF-7 breast carcinoma cells do not express caspase-3 / R. U. Jänicke // Breast cancer research and treatment. - 2009. - T. 117. - №. 1. - C. 219221.

79. Jansson, M. Arginine methylation regulates the p53 response / M. Jansson, S. T. Durant, E. C. Cho, S. Sheahan, M. Edelmann, B. Kessler, N. B. La Thangue // Nature cell biology. - 2008. - T. 10. - №. 12. - C. 1431-1439.

80. Joerger, A. C. Exploiting transient protein states for the design of small-molecule stabilizers of mutant p53 / A. C. Joerger, M. R. Bauer, R. Wilcken, M. G. Baud, H. Harbrecht, T. E. Exner, A. R. Fersht // Structure. - 2015. - T. 23. - №. 12. - C. 2246-2255.

81. Joerger, A. C. Structural basis for understanding oncogenic p53 mutations and designing rescue drugs / A. C. Joerger, H. C. Ang, A. R. Fersht // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2006. - T. 103. - №. 41. - C. 15056-15061.

82. Joerger, A. C. Structural biology of the tumor suppressor p53 / A. C. Joerger, A. R. Fersht // Annu. Rev. Biochem. - 2008. - T. 77. - C. 557-582.

83. Joerger, A. C. Structure-function-rescue: the diverse nature of common p53 cancer mutants / A. C. Joerger, A. R. Fersht // Oncogene. - 2007. - T. 26. - №2. 15.

- C. 2226-2242.

84. Joerger, A. C. The p53 pathway: origins, inactivation in cancer, and emerging therapeutic approaches / A. C. Joerger, A. R. Fersht // Annual review of biochemistry. - 2016. - T. 85. - C. 375-404.

85. Kamada, R. Tetramer formation of tumor suppressor protein p53: structure, function, and applications / R. Kamada, Y. Toguchi, T. Nomura, T. Imagawa, K. Sakaguchi // Biopolymers. - 2016. - V.106. - P.598-612.

86. Kamal, A. p53-MDM2 inhibitors: patent review (2009-2010) / A. Kamal, A. A. Mohammed, T. B. Shaik // Expert opinion on therapeutic patents. - 2012. - T. 22.

- №. 2. - C. 95-105.

87. Kandoth, C. Mutational landscape and significance across 12 major cancer types / C. Kandoth, M. D. McLellan, F. Vandin, Y. Ke, B. Niu, C. Lu, L. Ding // Nature.

- 2013. - T. 502. - №. 7471. - C. 333-339.

88. Kawase, T. p53 target gene AEN is a nuclear exonuclease required for p53-dependent apoptosis / T. Kawase, H. Ichikawa, T. Ohta, N. Nozaki, F. Tashiro, R. Ohki // Oncogene. - 2008. - V. 27. - P. 3797-3810.

89. Kim, M. P. Mutant p53 partners in crime / M. P. Kim, G. Lozano // Cell Death & Differentiation. - 2018. - T. 25. - №. 1. - C. 161-168.

90. Kitaura, H. Reciprocal regulation via protein-protein interaction between c-Myc and p21 cip1/waf1/sdi1 in DNA replication and transcription / H. Kitaura, M. Shinshi, Y. Uchikoshi, T. Ono, T. Tsurimoto, H. Yoshikawa, H. Ariga // Journal of Biological Chemistry. - 2000. - T. 275. - №. 14. - C. 10477-10483.

91. Klimovich, B. Partial p53 reactivation is sufficient to induce cancer regression / B. Klimovich, L. Meyer, N. Merle, M. Neumann, A. M. König, N. Ananikidis, T. Stiewe // Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. - 2022. - T. 41. -№. 1. - C. 1-18.

92. Kennedy, M. C. Mutant p53: it's not all one and the same / M. C. Kennedy, S. W. Lowe // Cell Death & Differentiation. - 2022. - T. 29. - №. 5. - C. 983-987.

93. Kelley, J. B. Fluorescence-based quantification of nucleocytoplasmic transport / J. B. Kelley, B. M. Paschal // Methods. - 2019. - T. 157. - C. 106-114.

94. Knights, C. D. Distinct p53 acetylation cassettes differentially influence geneexpression patterns and cell fate / C. D. Knights, J. Catania, S. D. Giovanni, S. Muratoglu, R. Perez, A. Swartzbeck, M. L. Avantaggiati // The Journal of cell biology. - 2006. - T. 173. - №. 4. - C. 533-544.

95. Komor, A. C. Programmable editing of a target base in genomic DNA without double-stranded DNA cleavage / A. C. Komor, Y. B. Kim, M. S. Packer, J. A. Zuris, D. R. Liu // Nature. - 2016. - T. 533, №7603. - C. 420-424.

96. Kozyrska, K. p53 directs leader cell behavior, migration, and clearance during epithelial repair / K. Kozyrska, G. Pilia, M. Vishwakarma, L. Wagstaff, M. Goschorska, S. Cirillo, E. Piddini // Science. - 2022. - T. 375. - №. 6581. - C. eabl8876.

97. Kreis, N. N. Less understood issues: p21Cip1 in mitosis and its therapeutic potential / N. N. Kreis, F. Louwen, J. Yuan // Oncogene. - 2015. - T. 34. - №. 14.

- C. 1758-1767.

98. Kreis, N. N. The multifaceted p21 (Cip 1 /Waf1 /CDKN1 A) in cell differentiation, migration and cancer therapy / N. N. Kreis, F. Louwen, J. Yuan // Cancers. - 2019.

- T. 11. - №. 9. - C. 1220.

99. Krenning, L. Transient activation of p53 in G2 phase is sufficient to induce senescence / L. Krenning, F. M. Feringa, I. A. Shaltiel, J. van den Berg, R. H. Medema // Molecular cell. - 2014. - T. 55. - №. 1. - C. 59-72.

100. Kress, M. Simian virus 40-transformed cells express new species of proteins precipitable by anti-simian virus 40 tumor serum / M. Kress, E. May, R. Cassingena, P. May // Journal of virology. - 1979. - T. 31. - №. 2. - C. 472-483.

101. Kruse, J. P. Modes of p53 regulation / J. P. Kruse, W. Gu // Cell. - 2009.

- T. 137. - №. 4. - C. 609-622.

102. Laemmli, U. K. Letter to The Scientist / U. K. Laemmli // Nature. - 1970.

- T. 227. - C. 680-685.

103. Lambert, J.M.R. PRIMA-1 reactivates mutant p53 by covalent binding to the core domain / J. M. R. Lambert, P. Gorzov, D. B. Veprintsev, M. Soderqvist, D. Segerback, J. Bergman, V. J. Bykov // Cancer cell. - 2009. - T. 15. - №. 5. -C. 376-388.

104. Lane, D. P. T antigen is bound to a host protein in SY40-transformed cells / D. P. Lane, L. V. Crawford // Nature. - 1979. - T. 278. - №. 5701. - C. 261-263.

105. Lauria, A. Molecular modeling approaches in the discovery of new drugs for anti-cancer therapy: the investigation of p53-MDM2 interaction and its inhibition by small molecules / A. Lauria, M. Tutone, M. Ippolito, L. Pantano, A. M. Almerico // Current medicinal chemistry. - 2010. - T. 17. - №. 28. - C. 31423154.

106. Lee, E. W. Phosphorylation of p53 at threonine 155 is required for Jab1-mediated nuclear export of p53 / E. W. Lee, W. Oh, H. P. Song, W. K. Kim, // BMB reports. - 2017. - T. 50. - №. 7. - C. 373.

107. Leestemaker, Y. Tools to investigate the ubiquitin proteasome system / Y. Leestemaker, H. Ovaa // Drug Discovery Today: Technologies. - 2017. - T. 26. -C. 25-31.

108. Leroy, B. The TP53 website: an integrative resource centre for the TP53 mutation database and TP53 mutant analysis / B. Leroy, J.L. Fournier, C. Ishioka,

P. Monti, A. Inga, G. Fronza, T. Soussi // Nucleic acids research. - 2013. - T.41. - №. D1. - C. D962-D969

109. Leroy, B. TP53 mutations in human cancer: database reassessment and prospects for the next decade / B. Leroy, M. Anderson, T. Soussi // Hum. Mutat. -2014. - V. 35. - P. 672-688.

110. Levine, A. J. Exploring the future of research in the Tp53 field / A. J. Levine // Cell Death & Differentiation. - 2022. - C. 1-2.

111. Levine, A. J. Targeting the P53 protein for cancer therapies: the translational impact of P53 research / A. J. Levine //Cancer research. - 2022. - T. 82. - №. 3. -C. 362-364.

112. Levine, A. J. The first 30 years of p53: growing ever more complex / A. J. Levine, M. Oren // Nature reviews cancer. - 2009. - T. 9. - №. 10. - C. 749-758.

113. Levine, A. J. The many faces of p53: something for everyone / A. J. Levine // Journal of Molecular Cell Biology. - 2019. - T. 11, № 7. - C. 524-530.

114. Li, D. Development of a T-cell Receptor Mimic Antibody against WildType p53 for Cancer Immunotherapy / D. Li, C. Bentley, A. Anderson, S. Wiblin, K. L. S. Cleary, S. Koustoulidou, T. Hassanali, J. Yates, J. Greig, M. O. Nordkamp, I. Trenevska, N. Ternette, B. M. Kessler, B. Cornelissen, M. S. Cragg, A. H. Banham // Cancer Research. - 2017. - T. 77, № 10. - C. 2699-2711.

115. Li, D. Functional Inactivation of Endogenous MDM2 and CHIP by HSP90 Causes Aberrant Stabilization of Mutant p53 in Human Cancer Cells / D. Li, N. D. Marchenko, R. Schulz, V. Fischer, T. Velasco-Hernandez, F. Talos, U. M. Moll // Molecular Cancer Research. - 2011. - T. 9, № 5. - C. 577-588.

116. Li, F. P. Rhabdomyosarcoma in children: epidemiologic study and identification of a familial caneer syndrome / F. P. Li, Jr J. F. Fraumeni // Journal of the National Cancer Institute. - 1969. - T. 43. - №. 6. - C. 1365-1373.

117. Li, M. Mono-versus polyubiquitination: differential control of p53 fate by Mdm2 / M. Li, C. L. Brooks, F. Wu-Baer, D. Chen, R. Baer, W. Gu // Science. -2003. - T. 302. - №. 5652. - C. 1972-1975.

118. Li, M. The role of P53 up-regulated modulator of apoptosis (PUMA) in ovarian development, cardiovascular and neurodegenerative diseases / M. Li // Apoptosis. - 2021. - T. 26. - №. 5. - C. 235-247.

119. Li, X. Two mammalian MOF complexes regulate transcription activation by distinct mechanisms / X. Li, L. Wu, C. A. S. Corsa, S. Kunkel, Y. Dou // Molecular cell. - 2009. - T. 36. - №. 2. - C. 290-301.

120. Li, Y. Salvation of the fallen angel: Reactivating mutant p53 / Y. Li, Z. Wang, Y. Chen, R. B. Petersen, L. Zheng, K. Huang // British journal of pharmacology. - 2019. - T. 176. - №. 7. - C. 817-831.

121. Li, Y. The function of a heterozygous p53 mutation in a Li-Fraumeni syndrome patient / Y. Li, T. Li, Y. Tang, Z. Zhan, L. Ding, L. Song, Y. Li // PloS one. - 2020. - T. 15. - №. 6. - C. e0234262.

122. Liang, Y. PRIMA-1 inhibits growth of breast cancer cells by re-activating mutant p53 protein / Y. Liang, C. Besch-Williford, S. M. Hyder // International journal of oncology. - 2009. - T. 35. - №. 5. - C. 1015-1023.

123. Lin, K. Isothermal Titration Calorimetry Assays to Measure Binding Affinities In Vitro / K. Lin, G. Wu // Methods Mol Biol. - 2019. - T. 1893. - C. 257-272.

124. Lindemann, A. COTI-2, a novel thiosemicarbazone derivative, exhibits antitumor activity in HNSCC through p53-dependent and-independent mechanisms / A. Lindemann, A. A. Patel, N. L. Silver, L. Tang, Z. Liu, L. Wang, A. A. Osman // Clinical Cancer Research. - 2019. - T. 25. - №. 18. - C. 56505662.

125. Linzer, D. I. H. Characterization of a 54K dalton cellular SV40 tumor antigen present in SV40-transformed cells and uninfected embryonal carcinoma cells / D. I. H. Linzer, A. J. Levine / Linzer D. I. H., Levine A. J. // Cell. - 1979. -T. 17. - №. 1. - C. 43-52.

126. Liu, D. p53, oxidative stress, and aging / D. Liu, Y. Xu // Antioxidants & redox signaling. - 2011. - T. 15. - №. 6. - C. 1669-1678.

127. Liu, D. S. Inhibiting the system x C-/glutathione axis selectively targets cancers with mutant-p53 accumulation / D. S. Liu, C. P. Duong, S. Haupt, K. G. Montgomery, C. M. House, W. J. Azar, N. J. Clemons // Nature communications.

- 2017. - T. 8. - №. 1. - C. 1-14.

128. Liu, G. DNA polymerase eta, the product of the xeroderma pigmentosum variant gene and a target of p53, modulates the DNA damage checkpoint and p53 activation / G. Liu, X. Chen // Mol Cell Biol. - 2006. - V.26. - P.1398-1413.

129. Liu, X. Functional role of p53 in the regulation of chemical-induced oxidative stress / X. Liu, L. Fan, C.Lu, S.Yin, H. Hu // Oxidative medicine and cellular longevity. - 2020. - T. 2020.

130. Liu, X. Small molecule induced reactivation of mutant p53 in cancer cells / X. Liu, R. Wilcken, A. C. Joerger, I. S. Chuckowree, J. Amin, J. Spencer, A. R. Fersht // Nucleic Acids Research. - 2013. - T. 41, № 12. - C. 6034-6044.

131. Liu, Y. p53 modifications: exquisite decorations of the powerful guardian / Y. Liu, O. Tavana, W. Gu // Journal of molecular cell biology. - 2019. - T. 11. -№. 7. - C. 564-577.

132. Livak, K.J. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-AACT method / K.J. Livak, T.D. Schmittgen // Methods. - 2001. - T. 25. - №. 4. - P.402-408.

133. Loh, S. N. Follow the mutations: toward class-specific, small-molecule reactivation of p53 / S. N. Loh // Biomolecules. - 2020. - T. 10. - №. 2. - C. 303.

134. Lopes, C. A. M. Centrosome amplification arises before neoplasia and increases upon p53 loss in tumorigenesis / M. Mesquita, A. I. Cunha, J. Cardoso, S. Carapeta, C. Laranjeira, P. Chaves // Journal of Cell Biology. - 2018. - T. 217.

- №. 7. - C. 2353-2363.

135. Low, L. Targeting mutant p53-expressing tumours with a T cell receptorlike antibody specific for a wild-type antigen / L. Low, A. Goh, J. Koh, S. Lim, C. I. Wang // Nature Communications. - 2019. - T. 10.- C. 5382.

136. Lozano, G. Restoring p53 in cancer: the promises and the challenges / G. Lozano // Journal of molecular cell biology. - 2019. - T. 11. - №. 7. - C. 615-619.

137. Lu, X. PPM1D dephosphorylates Chk1 and p53 and abrogates cell cycle checkpoints / X. Lu, B. Nannenga, L. A. Donehower // Genes & development. -2005. - T. 19. - №. 10. - C. 1162-1174.

138. Luo, X. Transcriptional upregulation of PUMA modulates endoplasmic reticulum calcium pool depletion-induced apoptosis via Bax activation / X. Luo, Q. He, Y. Huang, M.S. Sheikh // Cell Death & Differentiation. - 2005. - T. 12. -C. 8-20.

139. Madden, S. K. Taking the Myc out of cancer: toward therapeutic strategies to directly inhibit c-Myc / S. K. Madden, A. D. de Araujo, M. Gerhardt, Fairlie, D. P., Mason, J. M. // Molecular Cancer. - 2021. - T. 20. - №. 1. - C. 1-18.

140. Malekzadeh, P. Neoantigen screening identifies broad TP53 mutant immunogenicity in patients with epithelial cancers / P. Malekzadeh, A. Pasetto , P. F. Robbins, M. R. Parkhurst, R. P. T. Somerville, S. A. Rosenberg, D. C. Deniger // Journal of Clinical Investigation. - 2019. - T. 129, № 3. - C. 1109-1114.

141. Mantovani, F. Mutant p53 as a guardian of the cancer cell / F. Mantovani, L. Collavin, G. Del Sal // Cell Death & Differentiation. - 2019. - T. 26. - №. 2. -C. 199-212.

142. Meneghetti, B. V. p53 mutants G245S and R337H associated with the Li-Fraumeni syndrome regulate distinct metabolic pathways / B. V. Meneghetti, R. Wilson, C. K. Dias, N. A. Cadore, F. Klamt, A. Zaha, K. M. Monteiro // Biochimie.

- 2022. - T. 198. - C. 141-154.

143. Merkel, O. When the guardian sleeps: Reactivation of the p53 pathway in cancer / O. Merkel, N. Taylor, N. Prutsch, P. B. Staber, R. Moriggl, S. D. Turner, L. Kenner // Mutation Research/Reviews in Mutation Research. - 2017. - T. 773.

- C. 1-13.

144. Miller, J. J. A balancing act: using small molecules for therapeutic intervention of the p53 pathway in cancer / J. J. Miller, C. Gaiddon, T.Storr // Chemical Society Reviews. - 2020. - T. 49. - №. 19. - C. 6995-7014.

145. Mirgayazova, R. Therapeutic Editing of the TP53 Gene: Is CRISPR/Cas9 an Option? / R. Mirgayazova, R. Khadiullina, V. Chasov, R. Mingaleeva, R. Miftakhova, A. Rizvanov, E. Bulatov // Genes. - 2020. - T. 11, № 6.- C. 704.

146. Miura, K. An Overview of Current Methods to Confirm Protein-Protein Interactions / K. Miura // Protein Pept Lett. - 2018. - T. 25, № 8. - C. 728-733

147. Moldovan, G. L. PCNA, the maestro of the replication fork / G. L. Moldovan, B. Pfander, S. Jentsch // Cell. - 2007. - V. 129. - P. 665-679.

148. Monti, P. Heterogeneity of TP53 Mutations and P53 Protein Residual Function in Cancer: Does It Matter? / P. Monti, P. Menichini, A. Speciale, G. Cutrona, F. Fais, E.Taiana, G. Fronza // Frontiers in Oncology. - 2020. - C. 2313.

149. Morgunkova, A. Lysine methylation goes global / A. Morgunkova, N. A. Barlev // Cell cycle. - 2006. - T. 5. - №. 12. - C. 1308-1312.

150. Nag, S. The MDM2-p53 pathway revisited / S. Nag, J. Qin, K. S. Srivenugopal, M.Wang, R. Zhang // Journal of biomedical research. - 2013. - T.

27. - №. 4. - C. 254.

151. Nakano, K. PUMA, a novel proapoptotic gene, is induced by p53 / K. Nakano, K. H. Vousden // Molecular cell. - 2001. - T. 7. - №. 3. - C. 683-694.

152. Niesen, F. H. The use of differential scanning fluorimetry to detect ligand interactions that promote protein stability / F. H. Niesen, H. Berglund, M. Vedadi // Nature protocols. - 2007. - T. 2. - №. 9. - C. 2212-2221.

153. Nesterenko, M.V. A simple modification of Blum's silver stain method allows for 30-minute detection of proteins in polyacrylamide gels / M. V. Nesterenko, M. Tilley, S. J. Upton // J. Biochem. Biophys. Methods. - 1994. - T.

28. - C. 239-242.

154. Olivier, M. The IARC TP53 database: new online mutation analysis and recommendations to users / M. Olivier, R. Eeles, M. Hollstein, M. A. Khan, C. C. Harris, P. Hainaut // Human mutation. - 2002. - T. 19. - №. 6. - C. 607-614.

155. Oren, M. Mutant p53 gain-of-function in cancer / M. Oren, V. Rotter // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2010. - T. 2. - №. 2. - C. a001107.

156. Pantoliano M. W. High-density miniaturized thermal shift assays as a general strategy for drug discovery / M. W. Pantoliano, E. C. Petrella, J. D. Kwasnoski, V. S. Lobanov, J. Myslik, E. Graf, F. R. Salemme // Journal of biomolecular screening. - 2001. - T. 6. - №. 6. - C. 429-440.

157. Parfenyev, S. E. Regulation of p53 Protein Function in Response to Heat Shock / S. E. Parfenyev, A. N. Smotrova, M. A. Shkliaeva, N. A. Barlev // Cell and Tissue Biology. - 2019. - T. 13. - №. 4. - C. 259-267.

158. Park, J. H. The GAS41-PP2CP complex dephosphorylates p53 at serine 366 and regulates its stability / J. H. Park, R. J. Smith, S. Y. Shieh, R. G. Roeder // Journal of Biological Chemistry. - 2011. - T. 286. - №. 13. - C. 10911-10917.

159. Park, W. R. p53CSV, a novel p53-inducible gene involved in the p53-dependent cell-survival pathway / W. R. Park, Y. Nakamura // Cancer Res. - 2005. - V. 65. - P.1197-1206.

160. Parveen, A. Dual role of p21 in the progression of cancer and its treatment / A. Parveen, M. S. HAkash, K. Rehman, W. W. Kyunn, // Critical Reviews™ in Eukaryotic Gene Expression. - 2016. - T. 26. - №. 1.

161. Peng, X. APR-246/PRIMA- 1MET inhibits thioredoxin reductase 1 and converts the enzyme to a dedicated NADPH oxidase / M. Q. Zhang, F.Conserva, G. Hosny, G.Selivanova, V. J. N. Bykov, K. G. Wiman // Cell death & disease. -2013. - T. 4. - №. 10. - C. e881-e881.

162. Petitjean, A. Impact of mutant p53 functional properties on TP53 mutation patterns and tumor phenotype: lessons from recent developments in the IARC TP53 database / A. Petitjean, E. Mathe, S. Kato, C. Ishioka, S. V. Tavtigian, P. Hainaut, M. Olivier // Human mutation. - 2007. - T. 28. - №. 6. - C. 622-629.

163. Proia, D. A. Ganetespib and HSP90: Translating Preclinical Hypotheses into Clinical Promise / D. A. Proia, R. C. Bates // Cancer Research. - 2014. - T. 74, № 5. - C. 1294-1300.

164. Rauf, S. M. Effect of Y220C mutation on p53 and its rescue mechanism: a computer chemistry approach / S. M. Rauf, A. Endou, H. Takaba, A. Miyamoto // The protein journal. - 2013. - T. 32. - №. 1. - C. 68-74.

165. Rew, Y. Structure-based design of novel inhibitors of the MDM2-p53 interaction / Y. Rew, D. Sun, F. Gonzalez-Lopez De Turiso, M. D. Bartberger, H. P. Beck, J. Canon, S. H. Olson // Journal of medicinal chemistry. - 2012. - T. 55. - №. 11. - C. 4936-4954.

166. Rodriguez, M. S. Multiple C-terminal lysine residues target p53 for ubiquitin-proteasome-mediated degradation // M. S. Rodriguez, J. M. Desterro, S. Lain, D. P. Lane, R. T. Hay / Molecular and cellular biology. - 2000. - T. 20. - №. 22. - C. 8458-8467.

167. Rodriguez, M. S. SUMO-1 modification activates the transcriptional response of p53 / M. S. Rodriguez, J. M. Desterro, S. Lain, C. A. Midgley, D. P. Lane, R. T. Hay // The EMBO journal. - 1999. - T. 18. - №. 22. - C. 6455-6461.

168. Roh, J. L. p53-Reactivating small molecules induce apoptosis and enhance chemotherapeutic cytotoxicity in head and neck squamous cell carcinoma / J. L. Roh, S. K. Kang, I. L. Minn, J. A. Califano, D. Sidransky, W. M. Koch // Oral oncology. - 2011. - T. 47. - №. 1. - C. 8-15.

169. Rokudai, S. MOZ increases p53 acetylation and premature senescence through its complex formation with PML / S. Rokudai, O. Laptenko, S. M. Arnal, Y. Taya, I. Kitabayashi, C. Prives // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2013. - T. 110. - №. 10. - C. 3895-3900.

170. Sablina, A. A. The antioxidant function of the p53 tumor suppressor / A. A. Sablina, A. V. Budanov, G. V. Ilyinskaya, L. S. Agapova, J. E. Kravchenko, P. M. Chumakov // Nature medicine. - 2005. - T. 11. - №. 12. - C. 1306-1313.

171. Salim, K. Y. COTI-2, a new anticancer drug currently under clinical investigation, targets mutant p53 and negatively modulates the PI3K/AKT/mTOR pathway / K. Y. Salim, S. M. Vareki, W. R. Danter, J. Koropatnick // European Journal of Cancer. - 2016. - T. 69. - C. S19-S19.

172. Schilling, T. Active transcription of the human FAS/CD95/TNFRSF6 gene involves the p53 family / T. Schilling, E. S. Schleithoff, A. Kairat, G. Melino, W. Stremmel, M. Oren // Biochem Biophys Res Commun. - 2009. - V. 387. - P. 399404.

173. Schneider, C. A. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis / C. A. Schneider, W. S. Rasband, K. W. Eliceiri // Nature methods. - 2012. - T. 9. - №. 7. - C. 671-675.

174. Schulz-Heddergott, R. Gain-of-function (GOF) mutant p53 as actionable therapeutic target / R. Schulz-Heddergott, U. M. Moll // Cancers. - 2018. - T. 10.

- №. 6. - C. 188.

175. Selivanova, G. Reactivation of mutant p53: molecular mechanisms and therapeutic potential / G. Selivanova, K. G. Wiman // Oncogene. - 2007. - T. 26.

- №. 15. - C. 2243-2254.

176. Selivanova, G. Therapeutic targeting of p53 by small molecules / G. Selivanova // Seminars in cancer biology. - Academic Press, 2010. - T. 20. - №. 1. - C. 46-56.

177. Shamloo, B. p21 in cancer research / B. Shamloo, S. Usluer // Cancers. -2019. - T. 11. - №. 8. - C. 1178.

178. Shieh, S. Y. DNA damage-induced phosphorylation of p53 alleviates inhibition by MDM2 / S. Y. Shieh, M. Ikeda, Y. Taya, C. Prives // Cell. - 1997. -T. 91. - №. 3. - C. 325-334.

179. Sorrell, A. D. Tumor protein p53 (TP53) testing and Li-Fraumeni syndrome / A. D. Sorrell, C. R. Espenschied, J. O. Culver, J. N. Weitzel // Molecular diagnosis & therapy. - 2013. - T. 17. - №. 1. - C. 31-47.

180. Stiewe, T. How mutations shape p53 interactions with the genome to promote tumorigenesis and drug resistance / T. Stiewe, T. E. Haran // Drug Resistance Updates. - 2018. - T. 38. - C. 27-43.

181. Sundar, D. Wild type p53 function in p53 Y220C mutant harboring cells by treatment with Ashwagandha derived anticancer withanolides: bioinformatics and experimental evidence / D. Sundar, Y. Yu, S. P. Katiyar, J. F. Putri, J. K. Dhanjal, J. Wang, R. Wadhwa // Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. -2019. - T. 38. - №. 1. - C. 1-14.

182. Synnott, N. C. COTI-2 reactivates mutant p53 and inhibits growth of triple-negative breast cancer cells / D. O'Connell, J. Crown, M. J. Duffy // Breast Cancer Research and Treatment. - 2020. - T. 179. - №. 1. - C. 47-56.

183. Synnott, N. C. Mutant p53 as a therapeutic target for the treatment of triple-negative breast cancer: preclinical investigation with the anti-p53 drug, PK11007 / M. R. Bauer, S. Madden, A. Murray, R. Klinger, N.O'Donovan, M. J. Duffy // Cancer letters. - 2018. - T. 414. - C. 99-106.

184. Synnott, N. C. Mutant p53: a novel target for the treatment of patients with triple-negative breast cancer? / N. C. Synnott, A. Murray, P. M. McGowan, M. Kiely, P. A. Kiely, N. O'Donovan, M. J. Duffy // International journal of cancer. -2017. - T. 140. - №. 1. - C. 234-246.

185. Taira, N. DYRK2 is targeted to the nucleus and controls p53 via Ser46 phosphorylation in the apoptotic response to DNA damage / N. Taira, K. Nihira, T. Yamaguchi, Y. Miki, K. Yoshida // Molecular cell. - 2007. - T. 25. - №. 5. -C. 725-738.

186. Tal, P. Cancer therapeutic approach based on conformational stabilization of mutant p53 protein by small peptides / P. Tal, S. Eizenberger, E. Cohen, N. Goldfinger, S. Pietrokovski, M. Oren, V. Rotter // Oncotarget. - 2016. - T. 7. - №. 11. - C. 11817.

187. Tan, T. p53 binds and activates the xeroderma pigmentosum DDB2 gene in humans but not mice / T. Tan, G. Chu // Mol Cell Biol. - 2002. - V.22. - P. 32473254.

188. Tanaka, H. A ribonucleotide reductase gene involved in a p53-dependent cell-cycle checkpoint for DNA damage / H. Tanaka, H. Arakawa, T. Yamaguchi, K. Shiraishi, S. Fukuda,K. Matsui // Nature. - 2000. - V. 404. - P.42-49.

189. Tang, Y. Tip60-dependent acetylation of p53 modulates the decision between cell-cycle arrest and apoptosis / Y. Tang, J. Luo, W. Zhang, W. Gu // Molecular cell. - 2006. - T. 24. - №. 6. - C. 827-839.

190. Tang, Y. Unraveling the Allosteric Mechanism of Four Cancer-related Mutations in the Disruption of p53-DNA Interaction / Y. Tang, Y. Yao, G. Wei // The Journal of Physical Chemistry B. - 2021. - T. 125. - №. 36. - C. 10138-10148.

191. Teufel, D. P. Regulation by phosphorylation of the relative affinities of the N-terminal transactivation domains of p53 for p300 domains and Mdm2 / D. P. Teufel, M. Bycroft, A. R. Fersht // Oncogene. - 2009. - T. 28. - №. 20. - C. 21122118.

192. Timofeev, O. Rely on Each Other: Dna binding cooperativity shapes p53 functions in tumor suppression and cancer therapy / O. Timofeev, T. Stiewe // Cancers. - 2021. - T. 13. - №. 10. - C. 2422.

193. Vaseva, A. V. The mitochondrial p53 pathway / A. V. Vaseva, U. M. Moll // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics. - 2009. - T. 1787. - №. 5. - c. 414-420.

194. Veprintsev, D. B. Core domain interactions in full-length p53 in solution / D. B. Veprintsev, S. M. Freund, A. Andreeva, S. E. Rutledge, H. Tidow, J. M. P. Canadillas, A. R. Fersht // Proceedings of the National Academy of Sciences. -2006. - T. 103. - №. 7. - C. 2115-2119.

195. Vivoli, M. Determination of protein-ligand interactions using differential scanning fluorimetry / M. Vivoli, H. R. Novak, J. A. Littlechild, N. J. Harmer // JoVE (Journal of Visualized Experiments). - 2014. - №. 91. - C. e51809.

196. Vousden, K. H. Blinded by the light: the growing complexity of p53 / K. H. Vousden, C. Prives // Cell. - 2009. - T. 137. - №. 3. - C. 413-431.

197. Wade, M. MDM2, MDMX and p53 in oncogenesis and cancer therapy / M. Wade, Y. C. Li, G. M. Wahl // Nature Reviews Cancer. - 2013. - T. 13, № 2. - C. 83-96

198. Waga, S. The p21 inhibitor of cyclin-dependent kinases controls DNA replication by interaction with PCNA / S. Waga, G. J. Hannon, D. Beach, B. Stillman // Nature. - 1994. - T. 369. - №. 6481. - C. 574-578.

199. Wang P. L. The 'wildtype' conformation of p53: epitope mapping using hybrid proteins / P. L.Wang, F. Sait, G. Winter // Oncogene. - 2001. - T. 20. - №. 18. - C. 2318-2324.

200. Wang, D. B. p53 and mitochondrial function in neurons / D. B. Wang, C. Kinoshita, Y. Kinoshita, R. S. Morrison // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease. - 2014. - T. 1842. - №. 8. - C. 1186-1197.

201. Wang, S. M. Targeting the MDM2-p53 Protein-Protein Interaction for New Cancer Therapy: Progress and Challenges / S. M. Wang, Y. J. Zhao, A. Aguilar, D. Bernard, C. Y. Yang // Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. - 2017. -T. 7, № 5. - C. 10.

202. Wang, Y. Advances in small molecular drugs targeted mutant p53 / Y. Wang, Y. Su, Y. Bao, Z. Yang, H. Mou, J. Zhang // Chinese Pharmacological Bulletin. - 2018. - V. 34. - P. 321-324.

203. Wang, Z. Should mutant TP53 be targeted for cancer therapy? / Z. Wang, A. Strasser, G. L. Kelly // Cell Death & Differentiation. - 2022. - T. 29. - №. 5. -C. 911-920.

204. Watson, I. R. Ubiquitin and ubiquitin-like modifications of the p53 family / I. R. Watson, M. S. Irwin // Neoplasia. - 2006. - T. 8. - №. 8. - C. 655-666.

205. Wilcken, R. Halogen-enriched fragment libraries as leads for drug rescue of mutant p53 / R. Wilcken, X. Liu, M. O. Zimmermann, T. J. Rutherford, A. R.

Fersht, A. C. Joerger, F. M. Boeckler // Journal of the American Chemical Society.

- 2012. - V. 134(15). - P. 6810-6818.

206. Wu, J. Three optimized assays for the evaluation of compounds that can rescue p53 mutants / J. Wu, H. Song, Z. Wang, M. Lu // STAR protocols. - 2021.

- T. 2. - №. 3. - C. 100688.

207. Xiong, S. B. The p53 inhibitor Mdm4 cooperates with multiple genetic lesions in tumourigenesis / S. B. Xiong, V. Pant, Y. Zhang, N. K. Aryal, M. J. You, D. Kusewitt, G. Lozano // Journal of Pathology. - 2017. - T. 241, № 4. - C. 501510.

208. Xiong, Y. p21 is a universal inhibitor of cyclin kinases / Y. Xiong, G. J. Hannon, H. Zhang, D. Casso, R. Kobayashi, D. Beach // Nature. - 1993. - T. 366.

- №. 6456. - C. 701-704.

209. Xirodimas, D. P. Mdm2-mediated NEDD8 conjugation of p53 inhibits its transcriptional activity / D. P. Xirodimas, M. K. Saville, J. C. Bourdon, R. T. Hay, D. P. Lane // Cell. - 2004. - T. 118. - №. 1. - C. 83-97.

210. Xu, H. T. PAK4 phosphorylates p53 at serine 215 to promote liver cancer metastasis / H. T. Xu, W. L. Lai, H. F. Liu, L. L. Y. Wong, I. O. L. Ng, Y. P. Ching // Cancer research. - 2016. - T. 76. - №. 19. - C. 5732-5742.

211. Xue, B. Intrinsically disordered regions of p53 family are highly diversified in evolution / B. Xue, C. J. Brown, A. K. Dunker, V. N. Uversky // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics. - 2013. - T. 1834. - №. 4. - C. 725-738.

212. Yoon, K. W. Control of signaling-mediated clearance of apoptotic cells by the tumor suppressor p53 / K. W. Yoon, S. Byun, E. Kwon, S.Y. Hwang, K. Chu, M. Hiraki // Science. - 2015. - V.349. - P. 150-157.

213. Yoshikawa, N. PRIMA-1MET induces apoptosis through accumulation of intracellular reactive oxygen species irrespective of p53 status and chemo-sensitivity in epithelial ovarian cancer cells / N. Yoshikawa, H. Kajiyama, K.

Nakamura, F. Utsumi, K. Niimi, H. Mitsui, F. Kikkawa // Oncology reports. -2016. - T. 35. - №. 5. - C. 2543-2552.

214. Yu, J. PUMA, a potent killer with or without p53 / J. Yu, L. Zhang // Oncogene. - 2008. - T. 27. - №. 1. - C. S71-S83.

215. Yu, X. Allele-specific p53 mutant reactivation / X. Yu, A. Vazquez, A. J. Levine, D. R. Carpizo // Cancer cell. - 2012. - T. 21. - №. 5. - C. 614-625.

216. Zandi, R. PRIMA-1Met/APR-246 induces apoptosis and tumor growth delay in small cell lung cancer expressing mutant p53 / R. Zandi, G. Selivanova, C. L. Christensen, T. A. Gerds, B. M. Willumsen, H. S. Poulsen // Clinical Cancer Research. - 2011. - T. 17. - №. 9. - C. 2830-2841.

217. Zhao, K. Crystal structure of the mouse p53 core DNA-binding domain at 2.7 A resolution / K. Zhao, X. Chai, K. Johnston, A. Clements, R. Marmorstein // J. Biol. Chem. - 2001. - V. 276. - P.12120-12127.

218. Zhu, G. Mutant p53 in Cancer Progression and Targeted Therapies / G. Zhu, C. Pan, J.-X. Bei, B. Li, C. Liang, Y. Xu, X. Fu // Frontiers in Oncology. - 2020. - C. 10.