Влияние условий культивирования на поддержание сперматогоний хряка in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Полякова, Мария Вячеславовна

• Полякова, Мария Вячеславовна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Полякова, Мария Вячеславовна

3.1.3.1. Ростовые среды

3.1.3.2. Специальные среды и растворы

3.1.4. Культуральная посуда

3.1.5. Приготовление фидерных слоев для культивирования СпК

3.1.5.1. Культивирование клеток STO

3.1.5.2. Культивирование клеток Сертоли свиней

3.1.5.3. Культивирование ММСК

3.1.5.4. Приготовление митотически инактивированных

фидерных слоев, используя митомицин С

3.1.6. Выделение культур клеток из семенника хряка

3.1.6.1. Механический метод выделения

3.1.6.2. Ферментативный метод выделения

3.1.7. Идентификация сперматогоний типа А хряка in vitro

3.1.7.1. Идентификация СпК в культуре

3.1.7.2. Окраска на щелочную фосфатазу

3.1.7.3. Окраска клеток Сертоли

3.1.8. Сравнительный анализ экспрессии генов - маркеров

3.1.8.1. Иммуноцитохимический метод

3.1.8.2. Полимеразная цепная реакция с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени

3.1.9. Криоконсервирование и хранение клеток

3.1.10. Определение доли жизнеспособных клеток

3.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.2.1. Выделение сперматогоний из семенников хряков

3.2.2. Влияние очистки на эффективность получения культур клеток, обогащенных сперматогониями типа А хряка

3.2.3. Влияние микроокружения и факторов роста на поддержание сперматогоний типа А хряка в культуре

3.2.3.1. Характеристика КС хряка

3.2.3.2. Культивирование сперматогоний хряка на фидерном слое, представленном КС - влияние GDNF

3.2.3.3. Культивирование сперматогоний хряка на фидерных слоях, представленных монослоем клеток STO и ММСК КРС

3.2.3.4. Влияние фактора, ингибирующего активность дифференцировки (DIA) на СпК хряка в культуре

3.2.4. Криоконсервация сперматогоний хряка

4. ОБСУЖДЕНИЕ

5. ВЫВОДЫ

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:

СпК - сперматогониальные клетки

СпСК - сперматогониальные стволовые клетки

GS — линии половых стволовых клеток

КС - клетки Сертоли

ЭГЖ - эмбриональные половые клетки

ЭСК - эмбриональные стволовые клетки

STO - перевиваемая линия клеток эмбриональных фибробластов мыши ММСК - мультипотентные мезенхимные стволовые клетки ЩФ - щелочная фосфатаза LIF - фактор, ингибирующий лейкемию DIA - фактор, ингибирующий активность дифференцировки GDNF - глиальный нейротрофический фактор БСА - бычий сывороточный альбумин ФСБ-1 - полный фосфатно-солевой буфер Дюльбекко ФСБ-2 - неполный фосфатно-солевой буфер Дюльбекко без ионов Са и Mg2+

СПК - сыворотка плода крупного рогатого скота дпс - день после спаривания дпр - день после рождения

ППК - первичные [примордиальные] половые клетки ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени РНК - рибонуклеиновая кислота мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ВКМ - внутренняя клеточная масса

Работа выполнена при поддержке гранта Российского фонда фундаментальных исследований (РФФИ) 10-04-01471-а

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние условий культивирования на поддержание сперматогоний хряка in vitro»

1. Введение

Создание новых клеточных моделей для использования в медицине, в том числе в ветеринарии, является одним из перспективных направлений развития современной науки. В настоящее время лаборатории многих стран занимаются изучением вопросов, связанных с использованием клеток гонад животных в качестве новых клеточных систем для применения их в биотехнологической и фармацевтической промышленности при разработке, тестировании и производстве новых медицинских препаратов.

На сегодняшний день при изучении сперматогониальных клеток (СпК) млекопитающих, в основном, используются лабораторные животные: мыши (Hamra et al., 2004; Kanatsu-Shinohara et al., 2005b), крысы (Hamra et al., 2005; Ryu et al., 2005), хомяки (Kanatsu-Shinohara et al., 2008), а также собаки (Yeunhee Kim et al., 2008). В последнее время появились публикации, в которых объектами исследований являются СпК сельскохозяйственных животных, таких как: крупный рогатый скот (Izadyar F. et al., 2003; Aponte et al., 2008), мелкий рогатый скот (Honaramooz et al., 2003; Rodriguez-Sosa et al., 2006), свиньи (Dirami et al., 1999; Коржикова, 2002; Савченкова и др., 2006; Goel et al., 2007; Han Su Young et al., 2009). Проводятся работы по выделению и изучению клеток этого типа у человека (Sadri-Ardekani et al., 2009; Lim et al., 2010).

Культуры клеток, полученные в результате длительного культивирования сперматогоний грызунов, были названы линиями половых стволовых (GS) клеток. Получение линий GS-клеток актуально для ветеринарной биотехнологии при изучении инфекционных болезней. Известно, что многие вирусы обладают тропизмом к половым клеткам. В связи с этим сперматогонии хряка представляют собой новую клеточную систему для вирусологических исследований. Однако, несмотря на заметные успехи в данной области, культура СпК хряка еще не создана. Одной из причин этого является недостаточное знание условий культивирования

сперматогоний типа А хряка, и влияния различных факторов роста на половые клетки in vitro.

В настоящее время установлено, что факторы роста и цитокины играют важную роль как в поддержании СпК in vitro, так и в индукции их полипотентного статуса (de Rooij and Mizrak, 2008). Среди них выделяют глиальный нейротрофический фактор (GDNF), фактор, ингибирующий лейкемию (LIF), идентичный фактору, ингибирующему активность дифференцировки (DIA) (Smith et al., 1988; Williams et al., 1988). Некоторые из этих факторов продуцируют клетки, которые присутствуют в семеннике: клетки Сертоли (КС), Лейдига, миоидные, стромальные и гематопоэтические клетки, а также некоторые стабильные клеточные линии, используемые для культивирования ЭСК. Влияние экстраклеточных факторов на СпК является результатом их динамичного взаимодействия с внутриклеточными транскрипционными регуляторами. Такими внутриклеточными маркерами недифференцированного состояния являются три гена транскрипционных факторов, необходимые для поддержания полипотентного статуса стволовых клеток: POU5F1 (Oct3/4), Nanog, Sox-2.

В связи с тем, что сведений по влиянию различных факторов роста на половые клетки in vitro недостаточно, а в отношении СпК хряка они только начинают формироваться, данное направление исследований является перспективным для развития как биомедицинских технологий, так и сельскохозяйственной биотехнологии.

Цель н задачи исследований. Цель данного исследования: изучение влияния условий культивирования на поддержание сперматогоний хряка in vitro.

В связи с этим были поставлены следующие задачи: щ выделить из тестикул и подобрать условия поддержания в культуре сперматогоний типа А хряка;

■ изучить влияние клеток Сертоли на сперматогониальные клетки хряка in vitro;

■ определить роль микроокружения (фидерных слоев) в культивировании сперматогониальных клеток хряка;

■ оценить роль фактора, ингибирующего активность дифференцировки DIA/LIF, в поддержании сперматогониальных клеток хряка in vitro;

■ провести сравнительный анализ экспрессии генов-маркеров в полученных клетках in vitro;

■ оптимизировать условия криоконсервации сперматогоний хряка.

Научная новизна. В ходе выполнения диссертационной работы впервые была исследована возможность длительного (до 100 сут включительно) культивирования сперматогоний типа А хряка.

Впервые изучены факторы, влияющие на эффективность выделения сперматогоний типа А хряка. Исследовано влияние очистки, основанной на адгезивных свойствах клеток, на эффективность получения чистой культуры сперматогоний хряка.

Впервые установлено, что КС, продуценты GDNF, при совместном культивировании способствуют как процессу одновременного размножения и получения клонов сперматогониев хряка, так и их дифференцировке в направлении сперматогенеза, о чем свидетельствует обнаружение в них продуктов экспрессии генов PLZF, Nanog и VASA.

Впервые определено, что использование фидерного слоя, представленного клетками STO, и добавление в культуру кондиционированной среды из клеток BRL (клетки печени крысы Buffalo), которая содержит фактор, ингибирующий активность дифференцировки, позволяет поддерживать сперматогонии хряка в культуре длительное время.

Работа имеет как фундаментальную (новые возможности для моделирования развития половых клеток in vitro с целью изучения молекулярных механизмов и биологической основы этого процесса), так и практическую направленность.

Практическая ценность работы. Разработаны условия для длительного поддержания сперматогоний типа А хряка в культуре.

Исследованы факторы, влияющие на эффективность выделения сперматогоний.

Применение КС на начальных этапах культивирования сперматогоний типа А хряка позволяет получать половые клеточные культуры свиньи, а добавление DIA в культуру способствует длительному культивированию сперматогониальных клеток хряка и созданию полипотентных клеточных линий.

Разработан эффективный метод сохранения половых клеток из семенников хряков. Учитывая доступность материала и эффективность данного метода, разработанные условия сохранения сперматогоний хряка будут полезны для других видов животных.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

■ IV-ой Всероссийской научной школе-конференции «Стволовые клетки и регенеративная медицина», Москва, МГУ им. М.В. Ломоносова, факультет фундаментальной медицины, 2011г.;

■ на школе-конференции для молодых ученых «Клеточные технологии для регенеративной медицины», Санкт-Петербург, Институт цитологии РАН, 2011г.;

■ на Международной виртуальной Интернет - конференции "Биотехнология. Взгляд в будущее", Казань, ФГАОУ ВПО "Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казанская академия ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана, 2012г., а также неоднократно обсуждались и получили одобрение на Методической комиссии и Ученом совете ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии.

Личный вклад соискателя. Автор принимал непосредственное участие во всех этапах работы. Участие соавторов отражено в совместных публикациях. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 4 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК. Структура и объем работы. Диссертация изложена на 123 стр., содержит 3 табл., 36 рис. (в т.ч. 26 фотографий, 5 диаграмм), состоит из следующих

разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение, выводы, список литературы. Список литературы включает 210 источников, в т.ч. 194 на иностранном языке. Основные положения, выносимые на защиту:

■ влияние ростовых факторов и микроокружения на поддержание сперматогоний хряка в культуре;

■ изучение изменений экспрессии генов Nanog) РОи5П, УАЗА, РЬ2Р и 5Ж4-7 в зависимости от условий культивирования сперматогоний типа А хряка.

2. Обзор литературы 2.1. Строение семенника и сперматогенез

В качестве репродуктивных органов у самцов, зрелые семенники производят спермии и андрогены. Находящиеся в мошонке семенники покрыты несколькими слоями ткани, включая висцеральную вагинальную и белочную оболочки. Соединительная ткань отходит от белочной оболочки в паренхиму семенника, разделяя ее на несколько долек. Каждая долька состоит из семявыносящих канальцев и интерстициальной ткани. Клетки Лейдига в интерстициальной ткани продуцируют андрогены, в то время как спермии развиваются в семявыносящих канальцах. Семявыносящие канальцы открыты с обоих концов в сеть семенника, через которую спермии транспортируются из семенника в эпидидимис, где они созревают и хранятся до эякуляции [Hafez and Hafez, 2000; Almeida et al., 2006].

На эффективность сперматогенеза влияют КС, единственные соматические клетки, непосредственно связанные с половыми, и клетки Лейдига [Захидов С.Т. и др., 2010], а также число погибших на разных стадиях генераций зародышевых клеток. Также эффективность сперматогенеза зависит от начального количества зародышевых клеток, от половой зрелости, от времени года, процесса развития [старения] организма и др. За эффективность сперматогенеза принимается количество спермиев, образующихся за 1 сут в 1 г тестикулярной ткани [т. е. не зависит от размера тестикул у различных видов животных]. На рисунке 1 показана схема сперматогенеза млекопитающих in vivo, на которой представлены отношения между КС и развивающимися половыми клетками, которые по мере созревания смещаются к просвету семенного канальца.

Каждый второй хряк может генерировать примерно 100 000 спермий в результате сперматогенеза в семявыносящих канальцах в зрелом семеннике [Kemp et al. 1988; Almeida et al. 2006]. Высокоэффективное и непрерывное производство спермиев поддерживается сперматогониальными стволовыми клетками (СпСК).

LUMEN

ELONGATE SPERMATID

ft Г .RÓUÑD -V i I . *SPEgMAT4D J 1

S¥RTOL[ CELL

i SffiRhffiTOCrTI

BASAL LAMINA

MYOID CELL

Рис. 1. Сперматогенез млекопитающих in vivo [Desjardins and Ewing, 1993], где SERTOLI CELL- КС, GONIA-спематогоний, SPERMATOCYTE-сперматоцит, ROUND SPERMATID-круглая сперматида, ELONGATE SPERMATID-продолговатая сперматида, LUMEN-просвет семенного канальца, MYOID CELL-миоидная клетка, BASAL LAMINA-базальная мембрана

КС, путем формирования тесных контактов, находятся на базальном и адлюминальном компартментах, главным образом для защиты половых клеток от иммунной системы, выполнения опорных и трофических функций [Hafez and Hafez 2000; Almeida et al., 2006]. В современной номеклатуре сперматогонии млекопитающих подразделены на недифференцированные сперматогонии типа А одиночные (As) или СпСК, А спаренные (Apr), А групповые (Aal), и дифференцированные сперматогонии типов Al, А2, A3,

А4, промежуточные (I) и Б (В). Более детально динамика развития мужских половых клеток на примере грызунов описана Захидовым С.Т. и соавторами [2010]. Сперматогенез млекопитающих подразделяется на три этапа: сперматоцитогенез, когда происходит размножение сперматогоний и каждая следующая генерация клеток оказывается более дифференцированной, чем предыдущая; мейоз, составляющий центральное событие в сперматогенезе, и спермиогенез, во время которого происходит образование спермий [Райцина, 1985]. Диаграмма сперматогенеза млекопитающих показана на рисунке 2. Все три этапа происходят в определенной последовательности. На протяжении сперматогенеза КС остаются в тесном контакте с различными видами половых клеток.

0 Primordial Germ Cell

1

i "«a> . Spermatogonia (As) M«

(4»y Spermatogonia (Apr)

M.j

( ie.. Spermatogonia (Aal)

Mrt

Qm>, Spermatogonia (Al)

¿Mib

"¿j. Spermatogonia (A2)

XL M.. JX

< o> i«»; Spermatoeoma (A3)

/Т мл

<»><«►•• Spermatogonia (A4)

Spermatogonia (I)

s e»' ^as ~ia> Spermatogonia (B)

Mn

„

_ Mfc _

®X®' ^""»У spermatocytes

\®><фХ®К©" <•>(•> (®; ■«.; Secondary' spermatocytes

Мсо^Ц?^ \

ф .« s ® ® « ® ® ® ® л ® -® ®

1ЛлЛллЛлЛЛЛлЛЛЛ1

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Полякова, Мария Вячеславовна

5. ВЫВОДЫ

1. Установлено, что последовательная краткосрочная двукратная очистка, основанная на разных адгезивных свойствах половых и соматических клеток, способствует получению культуры, на 99 % представленной сперматогониями хряка.

2. Использование КС, продуцентов GDNF, для совместного культивирования, способствует как процессу одновременного размножения и получения клонов сперматогониев хряка, так и их дифференцировке в направлении сперматогенеза, о чем свидетельствует обнаружение в них продуктов экспрессии генов PLZF, Nanog и VASA.

3. Экспрессия гена Nanog в экспериментальных клеточных клонах, полученных при краткосрочном (до 14 сут включительно) культивировании сперматогоний в присутствии КС и далее культивированных на STO в присутствии DIA, превышала экспрессию этого гена в свежеизолированных половых клетках в 200 раз, а гена VASA в 350 раз.

4. Использование фидерного слоя, представленного клетками STO и добавление в культуру кондиционированной среды из клеток BRL, которая содержит фактор, ингибирующий активность дифференцировки, позволяет поддерживать сперматогонии хряка в культуре длительное время (до 100 сут включительно).

5. Установлено, что фактор DIA является ключевым в изменении потенций СпК хряка и способствует получению клонов, у которых происходит частичная активация гена POU5F1, наблюдается экспрессия SSEA-1 и ЩФ.

6. Применение КС на начальных этапах культивирования сперматогоний типа А позволяет получать половые клеточные культуры хряка. Добавление DIA в культуру способствует длительному культивированию сперматогониевых клеток хряка и созданию полипотентных клеточных линий.

7. Криоконсервация сперматогоний типа А хряка в криосреде, которая содержит 50% ДМЕМ, 40% СПК и 10% ДМСО, способствует сохранению жизнеспособности у 68 % половых клеток после размораживания.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского фонда фундаментальных исследований (РФФИ) 10-04-01471-а

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материалы диссертации расширяют знания о молекулярных механизмах перехода половых клеток хряка к полипотентному состоянию. Разработаны условия для длительного культивирования сперматогоний типа А хряка.

Полученные нами в ходе анализа данные по экспрессии мРНК генов, свидетельствующие о том, что изменение условий культивирования влияет на пролиферацию сперматогоний хряка in vitro и их дальнейшую дифференцировку, предлагаем использовать при изучении половых клеток других видов животных.

Разработан эффективный метод сохранения половых клеток из семенников хряков. Криоконсервация сперматогоний хряка в криосреде, содержащей 50% ДМЕМ, 40% СПК и 10% ДМСО, способствует сохранению жизнеспособности у 68 % половых клеток после размораживания. Учитывая доступность материала и эффективность данного метода, разработанные условия сохранения сперматогоний хряка будут полезны для других видов животных

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Полякова, Мария Вячеславовна, 2013 год

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Захидов С.Т, Кулибин АЛО, Маршак Т.Д. Биология стволовых клеток зародышевого пути. -М. -2010. - С. 138.

2. Коржикова C.B. Выделение, характеристика и трансплантация сперматогоний типа А хряка. Дис. канд. биол. наук. - М. -2002. - С. 120.

3. Плахотин М.В. Справочник по ветеринарной хирургии. - М: Колос. - 1977. -С. 255.

4. Полякова М.В, Савченкова И.П. Криоконсервация сперматогоний типа А хряка // Цитология. - 2011. - Том 53, № 9. - С.742-743.

5. Полякова М.В. Криоконсервация половых клеток хряка // Биотехнология. Взгляд в будущее. Сборник трудов международной Интернет - конференции. -Казань: Изд-во "Казанский университет". - 2012. - С.204-205.

6. Приданцева Т.А. Выделение и характеристика примордиальных зародышевых клеток свиньи. - Дис. канд. биол. наук. - Дубровицы. - 2001.-С. 110.

7. Райцина С.С. Сперматогенез и структурные основы его регуляции. -М.:Наука. - 1985. - С. 207.

8. Савченкова И.П. Репрограммирование генома клеток млекопитающих // Сельскохозяйственная биология. - 2008. - № 6. - С. 3-15.

9. Савченкова И.П. Эмбриональные стволовые клетки в биологии и биотехнологии // В кн.: Животная клетка в культуре. Под общей ред. Л.П. Дьяконова. - М: Компания Спутник+ - 2009. - С. 244—273.

10. Савченкова И.П. Эмбриональные стволовые клетки как потенциальный источник гамет in vitro // Проблемы репродукции. - 2009. - № 3. - С. 54-59.

11. Савченкова И.П, Полякова М.В, Викторова Е.В, Кулешов К.В. Влияние условий культивирования сперматогоний хряка на экспрессию генов маркеров полипотентности // Стволовые клетки и регенеративная медицина: Сборник тезисов. -М.: МАКС Пресс. - 2011. - С.67-68.

12. Савченкова И.П, Полякова М.В, Викторова Е.В, Кулешов К.В. Влияние условий культивирования сперматогоний хряка на экспрессию генов

маркеров полипотентности // Стволовые клетки и регенеративная медицина: Сборник статей / Под ред. Ткачука В.А. -М.: МАКС Пресс. - 2012а. - С. 237250.

13. Савченкова И.П., Полякова М.В., Викторова Е.В., Кулешов К.В. Длительное культивирование сперматогоний типа А хряка // Доклады РАСХН. - 20126. - №5. - С. 46 - 49.

14. Савченкова И.П., Приданцева Т.А., Сергеев Н.И., Эрнст JI.K. Выделение и очистка примордиальных половых клеток зародышей мышей // Сельскохозяйственная биология. - 2000. - № 2. - С. 119-121.

15. Савченкова И.П., Эрнст JI.K., Гулюкин М.П., Викторова Е.В. Методические наставления по выделению мультипотентных мезенхимных стволовых клеток из тканей взрослых особей млекопитающих, изучению их свойств и признаков // М.: Спутник +. - 2010. - С. 23.

16. Савчекова И.П. Сперматогонии хряка в культуре. - М.:- 2012. - С. 124.

17. Abrishami, М., Anzar, М., Yang, Y., Honaramooz, A. Cryopreservation of immature porcine testis tissue to maintain its developmental potential after xenografting into recipient mice // Theriogenology. - 2010. - Vol. 73, № 1. - P. 86-96.

18. Adams I.R., McLaren A. Sexually dimorphic development of mouse primordial germ cells: switching from oogenesis to spermatogenesis // Development - 2002. - Vol. 129, №5.-P. 1155-1164.

19. Almeida F.F.L., Leal M.C., Fran9a L.R. Testis morphometry, duration of spermatogenesis, and spermatogenic efficiency in the wild boar (Sus scrofa scrofa) // Biol. Reprod.- 2006. - Vol. 75, № 5. - P. 792-799.

20. Anderson R., Copeland Т.К., Scholer H., Heasman J., Wylie C. The onset of germ cell migration in the mouse embryo // Mech. Dev. - 2000. - Vol. 91, № 1-2. -P. 61-68.

21. Aponte P.M., Soda Т., Teerds K.J., Mizrak S.C., van de Kant H.J.G., de Rooij D.G. Propagation of bovine spermatogonial stem cells in vitro // Reproduction. -2008. -Vol. 136, №5. _p. 543-557.

22. Aponte P.M., Soda T., van de Kant H.J.G., de Rooij D.G. Basic features of bovine spermatogonial culture and effects of glial cell line-derived neurotrophic factor // Theriogenology. - 2006. -Vol. 65, № 9. - P. 1828-1847.

23. Avarbock M.R., Brinster C.J., Brinster R.L. Reconstitution of spermatogenesis from frozen spermatogonial stem cells // Nat. Med. -1996. -Vol. 2, № 6. -P. 693696.

24. Bagchi A., Woods E.J., Critser J.K. Cryopreservation and vitrification: recent advances in fertility preservation technologies // Expert Rev Med Devices. - 2008. -Vol. 5.-P. 359-370.

25. Bale J.S. Insects and low temperatures: from molecular biology to distributions and abundance// Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. - 2002. -Vol. 357. -P. 849862.

26. Barbas J.P, Mascarenhas R.D. Cryopreservation of domestic animal sperm cells // Cell Tissue Bank. -2009. - Vol. 10, № 1. - P. 49-62.

27. Bellve A., Cavicchia J., Millette C., O'Brien D., Bhatnagar Y., Dym M. Spermatogenic cells of the prepuberal mouse: isolation and morphological characterization // J. Cell Biol. -1977. -Vol. 74, №1. - P. 68-85.

28. Black J.L., Erickson B.H. Oogenesis and ovarian development in the prenatal pig//Anat.Rec.-1968.-Vol. 161, № 1. -P. 45-55.

29. Black V.H. Gonocytes in fetal guinea pig testes: phagocytosis of degenerating gonocytes by Sertoli cells // Am. J. Anat. - 1971. -Vol. 131, № 4. - P. 415-426.

30. Bonet S. The cycle of the seminiferous epithelium in Landrace boars // Anim. Reprod. Sci. - 2002.-Vol. 73, № 3-4.-P. 211-225.

31. Boulogne B., Olaso R., Levacher C., Durand P., Habert R. Apoptosis and mitosis in gonocytes of the rat testis during foetal and neonatal development // Int. J. Androl. - 1999. -Vol. 22, № 6. - P. 356-365.

32. Bowles J., Knight D., Smith C., Wilhelm, D., Richman J., Mamiya S., Yashiro K., Chawengsaksophak K., Wilson M.J., Rossant J., Hamada H., Koopman P. Retinoid signaling determines germ cell fate in mice // Science. - 2006. -Vol. 312, №5773.-P. 596-600.

33. Braydich-Stolle L., Nolan C., Dym M., Hofmann Marie-Claude. Role of Glial Cell Line-Derived Neurotrophic Factor in Germ-Line Stem Cell Fate // Ann N - Y Acad Sci. - 2005, December. - Vol. 1061. - P. 94-99.

34. Brehm A., Ovitt C.E., Scholer H.R. Oct-4: more than just a POUerfiil marker of the mammalian germline? //Acta Pathologica, Microbiologica et Immunologica Scandinavica. - 1998. -Vol. 106.-P. 114-124.

35. Brinster R.L., Avarbock M.R. Germline transmission of donor haplotype following spermatogonial transplantation // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 1994. -Vol. 91, №24.-P. 11303-11307.

36. Brinster R.L., Zimmermann J.W. Spermatogenesis following male germ-cell transplantation // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 1994. -Vol. 91, № 24. - P. 11298-11302.

37. Buaas F.W., Kirsh A.L., Sharma M. Plzf is required in adult male germ cells for stem cell self-renewal // Nat Genet. - 2004. -Vol. 36, №6. - P. 647-652.

38. Bwanga C.O. Cryopreservation of boar semen. I: a literature review // Acta Vet. Scand. - 1991. - Vol. 32. - P.431-453. [PubMed: 1818503]

39. Chiquoine A.D. The identification, origin, and migration of the primordial germ cells in the mouse embryo // Anat. Rec. - 1954. -Vol. 118, № 2. - P. 135146.

40. Clermont Y., Leblond C.P. Renewal of spermatogonia in the rat // Am. J. Anat. - 1953. -Vol. 93, № 3. - P. 475-501.

41. Conrad S., Renninger M., Hennenlotter J., Wiesner T., Just L., Bonin M., Aicher W., Buhring H.-J., Mattheus U., Mack A., Wagner H.-J., Minger S., Matzkies M., Reppel M., Hescheler J., Sievert K.-D., Stenzl A., Skutella T. Generation of pluripotent stem cells from adult human testis // Nature. - 2008. -Vol. 456, № 7220. - P. 344-349.

42. Costoya J.A., Hobbs R.M., Barna M. Essential role of Plzf in maintenance of spermatogonial stem cells // Nature Genetics.- 2004. - Vol. 36, № 6. - P. 653-659.

43. Coucouvanis E.C., Sherwood S.W., Carswell-Crumpton C., Spack E.G., Jones P.P. Evidence that the mechanism of prenatal germ cell death in the mouse is apoptosis // Exp. Cell Res. - 1993. -Vol. 209, № 2. - P. 238-247.

44. De Miguel M.P., De Boer-Brouwer M., Paniagua R., van den Hurk R., de Rooij D.G., Van Dissel-Emiliani F.M. Leukemia inhibitory factor and ciliary neurotropic factor promote the survival of Sertoli cells and gonocytes in coculture system//Endocrinology.-1996.-Vol. 137.-P. 1885-1893.

45. de Rooij D.G. Further evidence for the proposed way of spermatogonial stem cell renewal in the rat and the mouse // Z Zellforsch Mikrosk Anat. - 1969. - Vol. 99, № i._p. 134-142.

46. de Rooij D.G. Stem cells in the testis // Int. J. Exp. Pathol. - 1998. -Vol. 79, № 2. - P. 67-80.

47. de Rooij D.G., Kramer M.F. Spermatogonial stem cell renewal in the rat, mouse and golden hamster. A study with the alkylating agent myleran // Z Zellforsch Mikrosk Anat. - 1968. - Vol. 92, № 3. - P. 400-405.

48. de Rooij D.G., Mizrak S.C. Deriving multipotent stem cells from mouse spermatogonial stem cells: a new tool for developmental and clinical research // Development. -2008. - Vol. 135. - P. 2207—2213.

49. de Rooij D.G., Russell L.D. All you wanted to know about spermatogonia but were afraid to ask // J. Androl. - 2000. -Vol. 21, № 6. - P. 776-798.

50. de Rooij, D.G., Mizrak, S.C. Deriving multipotent stem cells from mouse spermatogonial stem cells: a new tool for developmental and clinical research // Development. - 2008. - Vol. 135, №13. - P. 2207-2213.

51. Desjardins C., Ewing L. Cell and molecular biology of the testis // Oxford University Press, New York. - 1993. - P. 15-54.

52. Dirami G., Ravindranath N., Pursel, V., Dym M. Effects of stem cell factor and granulocyte macrophage-colony stimulating factor on survival of porcine type a spermatogonia cultured in KSOM // Biol. Reprod. - 1999. -Vol. 61, №1. - P. 225230.

53. Dobrinski I. Transplantation of germ cells and testis tissue to study mammalian spermatogenesis//Anim. Reprod. - 2006. - Vol..3, № .2.-P. 135-145.

54. Dobrinski I., Travis A.J. Germ cell transplantation for the propagation of companion animals, nondomestic and endangered species // Reprod Fertil Dev. -2007. -Vol. 19. - P. 732-739. [PubMed: 17714627]

55. Dolci S., De Felici M. A study of meiosis in chimeric mouse fetal gonads // Development. - 1990. -Vol. 109, № 1. - P. 37-40.

56. Durcova-Hills G., Tang F., Doode F. Reprogramming primordial germ cells into pluripotent stem cells // PLoS ONE. www. plosone. Org. - 2008. - Vol. 3. - P. 1-8.

57. Elson G.C., Lelievre E., Guillet C., Chevalier S., Plun-Favreau H., Froger J., Suard I., de Coignac A.B., Delneste Y., Bonnefoy J.Y., Gauchat J.F., Gascan H. CLF associates with CLC to form a functional heteromeric ligand for the CNTF receptor complex // Nat. Neurosci. - 2000. - Vol. 3. - P. 867-872.

58. Fujihara M., Goel S., Minami N., Yamada M., Imai H. Cryopreservation in liquid nitrogen of gonocytes from neonatal porcine testes stored at 4°C // Reprod. Med. Biol. - 2008. -Vol. 7, № 4. - P. 153-160.

59. Fujiwara Y., Komiya T., Kawabata H., Sato M, Fujimoto H., Furusawa M., Noce T. Isolation of a DEAD-family protein gene that encodes a murine homolog of Drosophila vasa and its specific expression in germ cell lineage // PNAS USA. -1994. - Vol. 91, №25. - P. 12258-12262.

60. Garcia-Gil N., Pinart E., Sancho S., Badia E., Bassols J., Kâdâr E., Briz M., Gassei K., Ehmcke J., Schlatt S. Efficient enrichment of undifferentiated GFR alpha 1+ spermatogonia from immature rat testis by magnetic activated cell sorting // Cell Tissue Res. - 2009. -Vol. 337, № 1. - P. 177-183.

61. Gearing D. P., Gough N. M., King J. A., Hilton D. J., Nicola N. A., Simpson R. J., Nice E. C., Kelso A. Metealf D. Molecular cloning and expression of cDNA encoding a murine myeloid leukaemia inhibitory factor (LIF) // EMBO J. - 1987. -Vol. 6.-P. 3995-4002.

62. Ginsburg M., Snow M.H., McLaren, A. Primordial germ cells in the mouse embryo during gastrulation // Development. - 1990. -Vol. 10, № 2. - P. 521-528.

63. Giuili G., Tomljenovic A., Labrecque N., Oulad-Abdelghani M., Rassoulzadegan M., Cuzin F. Murine spermatogonial stem cells: targeted transgene expression and purification in an active state // EMBO Rep. - 2002. -Vol. 3,№8.-P. 753-759.

64. Godin I., Deed R., Cooke J., Zsebo K., Dexter M., Wylie C.C. Effects of the steel gene product on mouse primordial germ cells in culture // Nature. - 1991. -Vol. 352.-P. 807-809.

65. Goel S., Fujihara M., Minami N., Yamada, M., Imai H. Expression of NANOG, but not POU5F1, points to the stem cell potential of primitive germ cells in neonatal pig testis // Reproduction. - 2008. -Vol. 135, № 6. - P. 785-795.

66. Goel S., Sugimoto M., Minami N., Yamada M., Kume S., Imai H. Identification, isolation, and in vitro culture of porcine gonocytes // Biol. Reprod. -2007. -Vol. 77, № 1. - P. 127-137.

67. Golestaneh N., Kokkinaki M., Pant D., Jiang J., Destefano D., Fernandez-Bueno C., Rone J.D., Haddad B.R., Gallicano G.I., Dym M. Pluripotent stem cells derived from adult human testes // Stem Cells Dev. - 2009. -Vol. 18, № 8. - P. 1115-1125.

68. Goossens E., Frederickx V., Block G.D., Steirteghem A.C.V., Tournaye H. Reproductive capacity of sperm obtained after germ cell transplantation in a mouse model//Hum. Reprod.-2003.-Vol. 18, №9.-P. 1874-1880.

69. Gough N. M., Gearing D. P., King J. A., Willson T. A., Hilton D. J., Nicola N. A., Metcalf D. Molecular cloning and expression of the human homologue of the murine gene encoding myeloid leukemiainhibitory factor // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1988. - Vol. 85. - P. 2623-2627.

70. Guan K., Nayernia K., Maier L.S., Wagner S., Dressel R., Jae H.L., Nolte J., Wolf F., Li M., Engel,W., Hasenfuss G. Pluripotency of spermatogonial stem cells from adult mouse testis // Nature. - 2006. -Vol. 440, № 7088. - P. 1199-1203.

71. Hafez B, Hafez E. «Reproduction in farm animals», 7th edn. - 2000. (Wiley-Blackwell: Philadelphia). - P. 509.

72. Hall V.J, Christensen J, Gao Yu. Porcine pluripotency cell signaling develops from the inner cell mass to the epiblast during early development // Developmental Dynamics. - 2001. - Vol. 238, № 8. - P. 2014-2024.

73. Hammer R.E, Pursel V.G, Rexroad C.E. Production of transgenic rabbits, sheep and pigs by miroinjection // Nature. - 1985. -Vol. 315, № 6021. - P. 680683.

74. Hamra F.K, Chapman K.M, Nguyen D.M, Williams-Stephens A.A, Hammer R.E, Garbers D.L. Self renewal, expansion, and transfection of rat spermatogonial stem cells in culture // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2005. -Vol. 102, № 48. -P. 17430-17435.

75. Hamra F.K, Schultz N, Chapman K.M, Grellhesl D.M, Cronkhite J.T, Hammer R.E, Garbers D.L. Defining the spermatogonial stem cell // Dev. Biol. — 2004. -Vol. 269, №. 2. - P. 393-410.

76. Han Su Young, Gupta Mukesh Kumar, Uhm Sang Jun, Lee Hoon Taek. Isolation and in vitro culture of pig spermatogonial stem cell // Asian -Australasian Journal of Animal Sciences. - 2009. - Vol. 22, № 2. - P. 187 - 193.

77. Hatano S.Y, Tada M, Kimura H. Yamaguchi S. Kono T, Nakano T. Suemori H. Nakatsuji N. Tada T. Pluripotential competence of cells associated with Nanog activity // Mech Dev. - 2005. - Vol. 122, № 1. - P. 67-79.

78. Heinrich P.C, Behrmann I, Muller-Newen G, Schaper F, Graeve L. Interleukin-6-type cytokine signalling through the gpl30/Jak/STAT Pathway // Biochem. J. - 1998. - Vol. 334, № 2. - P. 297-314.

79. Herrid M, Davey R.J, Hutton K, Colditz I.G, Hill J.R. A comparison of methods for preparing enriched populations of bovine spermatogonia // Reprod. Fertil. Dev. - 2009. - Vol. 21, № 3. - P. 393-399.

80. Hill J.R, Dobrinski I. Male germ cell transplantation in livestock // Reprod. Fertil. Dev.-2006.-Vol. 18, № 1-2.-P. 13-18.

81. Hilscher B., Hilscher W., Bulthoff-Ohnolz B., Kramer U., Birke A., Pelze, H., Gauss G. Kinetics of gametogenesis. I. comparative histological and autoradiographic studies of oocytes and transitional prospermatogonia during oogenesis and prespermatogenesis // Cell Tissue Res. - 1974. -Vol. 154, № 4. - P. 443-470.

82. Hilton D. J., Nicola N. A., Metcalf D. Purification of a murine leukemia inhibitory factor from Krebs ascites cells // Anal. Biochem. -1988a. - Vol. 173. -P. 359- 367.

83. Hilton D. J., Nicola N. A., Metcalf D. Specific binding of murine leukemia inhibitory factor to normal and leukemic monocytic cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1988b. - Vol. 85. - P. 5971-5975.

84. Hofmann M.C., Braydich-Stolle L., Dym M. Isolation of mouse germ line stem cells; influence of GDNF // Dev. Biol. - 2005. - Vol. 279. - P. 114-124.

85. Hofmann M.C. Gdnf signaling pathways within the mammalian spermatogonial stem cell niche // Mol Cell Endocrinol. - 2008. - Vol. 288, № 1-2. -P. 95-103.

86. Honaramooz A., Behboodi E., Blash S., Megee S.O., Dobrinski I. Germ cell transplantation in goats // Mol. Reprod. Dev. - 2003a. -Vol. 64, № 4. - P. 422428.

87. Honaramooz A., Behboodi E., Hausler C.L., Blash S., Ayres S., Azuma C., Echelard Y., Dobrinski I. Depletion of endogenous germ cells in male pigs and goats in preparation for germ cell transplantation // J. Androl. - 2005. -Vol. 26, № 6.-P. 698-705.

88. Honaramooz A., Behboodi E., Megee S.O., Overton S.A., Galantino-Homer H., Echelard Y., Dobrinski I. Fertility and germline transmission of donor haplotype following germ cell transplantation in immunocompetent goats // Biol. Reprod. - 20036. -Vol. 69, № 4. - P. 1260-1264.

89. Honaramooz A., Li M.W., Penedo M.C., Meyers S., Dobrinski I. Accelerated maturation of primate testis by xenografting into mice // Biol. Reprod. - 2004. -Vol. 70, №5.-P. 1500-1503.

90. Honaramooz A., Megee S., Zeng W., Destrempes M.M., Overton S.A., Luo J., Galantino-Homer H., Modelski M., Chen F., Blash S., Melican D.T., Gavin W.G., Ayres S., Yang F., Wang P.J., Echelard Y., Dobrinski I. Adeno-associated virus (AAV)-mediated transduction of male germ line stem cells results in transgene transmission after germ cell transplantation // FASEB J. - 2008. -Vol. 22, № 2. -P. 374-382.

91. Honaramooz A., Megee S.O., Dobrinski I. Germ cell transplantation in pigs // Biol. Reprod. - 2002a. -Vol. 66, № 1. - P. 21-28.

92. Honaramooz A., Megee S.O., Rathi R., Dobrinski I. Building a testis: formation of functional testis tissue after transplantation of isolated porcine (Sus scrofa) testis cells // Biol. Reprod. - 2007. Vol. 76, № 1. P. 43-47.

93. Honaramooz A., Snedaker A., Boiani M., Scholer H., Dobrinski I., Schlatt S. Sperm from neonatal mammalian testes grafted in mice // Nature -2002b. - Vol. 418, №6899.-P. 778-781.

94. Hovatta O. Cryobiology of ovarian and testicular tissue // Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol.-2003.-Vol. 17.-P. 331-342.

95. Howell, S., Shalet, S. Gonadal damage from chemotherapy and radiotherapy // Endocrinol. Metab. Clin. North Am. - 1998. - Vol. 27, №4. - P. 927-943.

96. Hu J., Shima H., Nakagawa H. Glial cell line-derived neurotropic factor stimulates Sertoli cell proliferation in the early postnatal period of rat testis development//Endocrinology - 1999. - Vol. 140, № 8. - P. 3416-3421.

97. Huang Y.H., Chin C.C., Ho N.N., Chou C.K., Shen C.N., Kuo H.C., Wu T.J., Wu Y.C., Hung Y.C., Chang C.C., Ling T.Y. Pluripotency of mouse spermatogonial stem cells maintained by IGF-1- dependent pathway // FASEB J. -2009. - Vol. 23, № 7. - P. 2076-2087.

98. Huckins C. The spermatogonial stem cell population in adult rats. I. their morphology, proliferation and maturation // Anat. Rec. - 1971. - Vol. 169, № 3. -P. 533-557.

99. Hughes P.E., Varley M.A. Reproduction in the pig // United Kingdom: Butterworth Co: London, 1980. - P. 69.

100. Inglis S.R., Turner J.J., Harding M.M. Applications of type I antifreeze proteins: studies with model membranes & cryoprotectant properties // Curr Protein Pept Sci. - 2006. -Vol. 7. - P. 509-522.

101. Izadyar F., Den Ouden K., Creemers L.B., Posthuma G., Parvinen M., de Rooij D.G. Proliferation and differentiation of bovine type A spermatogonia during long-term culture // Biol. Reprod. - 2003a. - Vol. 68, № 1. - P. 272-281.

102. Izadyar F., Matthijs-Rijsenbilt J.J., Ouden K.D., Creemers L.B., Woelders H., de Rooij, D.G. Development of a cryopreservation protocol for type A spermatogonia // J. Androl. - 2002a. - Vol. 23, № 4. - P. 537-545.

103. Izadyar F., Spierenberg G., Creemers L., den Ouden K., de Rooij D. G. Isolation and purification of type A spermatogonia from the bovine testis // Reproduction. - 2002b. - Vol. 124, № 1. - P. 85-94.

104. Jeong D., Mclean D.J., Griswold M.D. Long-term culture and transplantation of murine testicular germ cells. //. J. Androl. - 2003. - Vol. 24, № 5. - P. 661-669.

105. Jiang F.X. Male germ cell transplantation: promise and problems // Reprod. Fertil. Dev. - 2001. - Vol. 13, № 7-8. - P. 609-614.

106. Jiang F.X., Short R.V. Male germ cell transplantation: present achievements and future prospects // Int. J. Dev. Biol. - 1998. - Vol. 42, № 7. - P. 1067-1073.

107. Johnson L., Varner D.D., Roberts M.E., Smith I.E., Keillor G.E., Scrutchfield W.L. Efficiency of spermatogenesis: a comparative approach //Anim. Reprod. Sei. - 2000. - Vol. 60-61. - P.471-480.

108. Jost A., Vigier B., Prepin J., Perchellet J.P. Studies on sex differentiation in mammals // Recent Prog. Horm. Res. - 1973. -Vol. 29. - P. 1-41.

109. Kanatsu-Shinohara M., Inoue K., Ogonuki N., Miki H., Yoshida S., Toyokuni S., Lee J., Ogura A., Shinohara T. Leukemia inhibitory factor enhances formation of germ cell colonies in neonatal mouse testis culture // Biol. Reprod. - 2007. -Vol. 76, № 1.-P. 55-62.

110. Kanatsu-Shinohara M., Inoue, K., Lee, J., Yoshimoto, M., Ogonuki, N., Miki, H., Baba, S., Kato, T., Kazuki, Y., Toyokuni, S., Toyoshima, M., Niwa, O., Oshimura, M., Heike, T., Nakahata, T., Ishino, F., Ogura, A., and Shinohara, T.

Generation of pluripotent stem cells from neonatal mouse testis // Cell. - 2004. -Vol. 119, №7.-P. 1001-1012.

111. Kanatsu-Shinohara M., Miki, H., Inoue, K., Ogonuki, N., Toyokuni, S., Ogura, A., Shinohara, T. Germline niche transplantation restores fertility in infertile mice // Hum. Reprod. - 2005a. - Vol. 20, № 9. -P. 2376 - 2382.

112. Kanatsu-Shinohara M., Miki, H., Inoue, K., Ogonuki, N., Toyokuni, S., Ogura, A., Shinohara, T. Long-term culture of mouse male germline stem cells under serum- or feeder-free conditions // Biol. Reprod. - 2005b. - Vol. 72, № 4. -P. 985-991.

113. Kanatsu-Shinohara M., Muneto, T., Lee, J., Takenaka, M., Chuma, S., Nakatsuji, N., Horiuchi, T., and Shinohara, T. Long-term culture of male germline stem cells from hamster testes // Biol. Reprod. -2008. - Vol. 78, № 4. -P. 611-617.

114. Kanatsu-Shinohara M., Ogonuki, N., Inoue, K., Miki, H., Ogura, A., Toyokuni, S., and Shinohara, T. Long-term proliferation in culture and germline transmission of mouse male germline stem cells // Biol. Reprod. - 2003a. - Vol. 69, №2-P. 612-616.

115. Kanatsu-Shinohara M., Ogonuki, N., Inoue, K., Ogura, A., Toyokuni, S., and Shinohara, T. Restoration of fertility in infertile mice by transplantation of cryopreserved male germline stem cells // Hum. Reprod. -2003b. - Vol. 18, № 12. -P. 2660-2667.

116. Kanatsu-Shinohara M., Ogonuki, N., Iwano, T., Lee, J., Kazuki, Y., Inoue, K., Miki, H., Takehashi, M., Toyokuni, S., Shinkai, Y., Oshimura, M., Ishino, F., Ogura, A., Shinohara, T. Genetic and epigenetic properties of mouse male germline stem cells during long-term culture // Development. - 2005c. -Vol. 132, №18.-P. 4155-4163.

117. Kemp B., Grooten, H.J.G., Hartog, L.A.D., Luiting, P., Verstegen, M.W.A. The effect of a high protein intake on sperm production in boars at two semen collection frequencies//Anim. Reprod. Sci. - 1988. -Vol. 17, № l.-P. 103-113.

118. Kierszenbaum A. Mammalian spermatogenesis in vivo and in vitro: a partnership of spermatogenic and somatic cell lineages // Endocr. Rev. - 1994. -Vol. 15, № l.-p. 116-134.

119. Kirchhof N., Carnwath J.W., Lemme E., Anastassiadis K, Scholer H., Niemann H. Expression pattern of Oct-4 in preimplantation embryos of different species// Biol Reprod. - 2000. -Vol. 63, №6.-P. 1698-16705.

120. Klymiuk N., Aigner, B., Brem, G., Wolf, E. Genetic modification of pigs as organ donors for xenotransplantation // Mol. Reprod. Dev. -2010. - Vol. 77, № 3. -P. 209-221.

121. Ko K., Tapia, N., Wu, G., Kim, J.B., Bravo, M.J.A., Sasse, P., Glaser, T., Ruau, D., Han, D.W., Greber, B., Hausdorfer, K., Sebastiano, V., Stehling, M., Fleischmann, B.K., Brustle, O., Zenke, M., Scholer, H.R. Induction of pluripotency in adult unipotent germline stem cells // Cell Stem Cell. - 2009. — Vol. 5, № l.-P. 87-96.

122. Kossack N., Meneses, J., Shefi, S., Ha, N.N., Chavez, S., Nicholas, C., Gromoll, J., Turek, P.J., Reijo-Pera, R.A. Isolation and characterization of pluripotent human spermatogonial stem cell-derived cells // Stem Cells. -2009. -Vol. 27, № l.-P. 138-149.

123. Kubota H., Avarbock, M.R., Brinster, R.L. Culture conditions and single growth factors affect fate determination of mouse spermatogonial stem cells // Biol. Reprod. -2004a. - Vol. 71, № 3. - P. 722-731.

124. Kubota H., Avarbock, M.R., Brinster, R.L. Growth factors essential for self-renewal and expansion of mouse spermatogonial stem cells // Proc. Natl. Acad. Sci.U. S. A. - 2004b. - Vol. 101, №47.-P. 16489-16494.

125. Kuijk E.W., Colenbrander, B., Roelen, B.A.J. The effects of growth factors on in vitro-cultured porcine testicular cells // Reproduction. - 2009. - Vol. 138, № 4.-P. 721-731.

126. Lee G.S., Kim H.S., Lee S.H. Characterization of pig vasa homolog gene and specific expression in germcell lineage // Molecular Reproduction and Development. - 2005. - Vol. 72, № 3. - P. 320-328.

127. Lim J.J., Sung S.Y., Kim H.J., Song S.H., Hong J.Y., Yoon T.K., Kim J.K., Kim K.S., Lee, D.R. Long-term proliferation and characterization of human spermatogonial stem cells obtained from obstructive and non-obstructive azoospermia under exogenous feeder-free culture conditions // Cell Prolif. - 2010. -Vol. 43, №4.-P. 405-417.

128. Lindeil S., Nobel M., Rankin M., D'Alessandro A., Southard J.H. Optimal pH for simple cold storage or machine perfusion of dog kidneys with UW solution // Transpl. Int. - 1998.-Vol. 11,№3.-P. 208-211.

129. Lo K.C., Brugh Iii, V.M., Parker, M., Lamb, D.J. Isolation and enrichment of murine spermatogonial stem cells using rhodamine 123 mitochondrial dye // Biol. Reprod. - 2005. - Vol. 72, № 3. - P. 767-771.

130. Luo J., Megee, S., Rathi, R., Dobrinski, I. Protein gene product 9.5 is a spermatogonia-specific marker in the pig testis: application to enrichment and culture of porcine spermatogonia // Mol. Reprod. Dev. - 2006. - Vol. 73, № 12. -P. 1531-1540.

131. Marret C., Durand P. Culture of porcine spermatogonia: effects of purification of the germ cells, extracellular matrix and fetal calf serum on their survival and multiplication // Reprod. Nutr. Dev. - 2000. - Vol. 40, № 3. - P. 305-319.

132. Matsui Y., Toksoz D., Nishikawa S., Williams D., Zsebo K., Hogan B.L. Effect of Steel factor and leukaemia inhibitory factor on murine primordial germ cells in culture //Nature. - 1991. - Vol. 353. - P. 750-752.

133. Matsui Y., Zsebo K., Hogan B.J. Derivation of pluripotential embryonic stem cells from murine primordial germ cells in culture // Cell. - 1992. - Vol. 70. - P. 841—847.

134. McGuinness M.P., Orth J.M. Reinitiation of gonocyte mitosis and movement of gonocytes to the basement membrane in testes of newborn rats in vivo and in vitro // Anat. Ree. - 1992. - Vol. 233, № 4. - P. 527-537.

135. McLaren A., Mittwoch U., Josso N. Germ cells and germ cell sex // Philos. Trans. R. Soc. Lond., B, Biol. Sei. - 1995. - Vol. 350, № 1333. - P. 229-233.

136. Meng X. Glial cell line-derived neurotrophic factor and Neurturin in the regulation of spermatogenesis // Academic dissertation to be publicly discussed, with the permission of the Medical Faculty of the University of Helsinki, in the Lecture hall 1 at Viikki Biocenter Infohouse Korona, Viikinkaari 11. - Helsinki. -2001.-P. 75.

137. Metcalf D, Hilton D. J, Nicola N. A. Clonal analysis of the actions of the murine leukemia inhibitory factor on leukemic and normal murine hemopoietic cells // Leukemia. - 1988. - Vol. 2. - P. 216-221.

138. Mitsui K, Tokuzawa Y, Itoh H. The homeoprotein Nanog is required for maintenance of pluripotency in mouse epiblast and ES cells // Cell.- 2003. - Vol. 113, №5. -P. 631-642.

139. Mizrak S.C, Chikhovskaya, J.V, Sadri-Ardekani H, Van Daalen S, Korver

C.M, Hovingh S.E, Roepers-Gajadien H.L, Raya A, Fluite, K, De Reijke T.M, De La Rosette J.J.M.C.H., Knegt A.C, Belmonte J.C, Van Der Veen F, de Rooij

D.G, Repping S, Van Pelt A.M.M. Embryonic stem cell-like cells derived from adult human testis //Hum. Reprod.-2010. - Vol. 25, № l.-P. 158-167.

140. Moore H, Aflatoonian B. From stem cells to spermatozoa and back // Soc. Reprod. Fertil. - 2007. - Suppl:65. - P. 19—32.

141. Moudgal N.R, Sairam M.R, Krishnamurthy H.N, Sridhar S, Krishnamurthy H, Khan H. Immunization of male bonnet monkeys (M. radiata) with a recombinant FSH receptor preparation affects testicular function and fertility // Endocrinology. - 1997. - Vol. 138, № 7. - P. 3065-3068.

142. Murakami M, Kamimura D, Hirano T. New IL-6 (gpl30) family cytokine members, CLC/NNT1/BSF3 and IL-27 // Growth Factors. - 2004. - Vol. 22. - P. 75-77.

143. Nagano M, Avarbock M.R, Leonida E.B, Brinster C.J, Brinster, R.L. Culture of mouse spermatogonial stem cells // Tissue Cell. - 1998. - Vol. 30, № 4. -P. 389-397.

144. Nagano M., Brinster C.J., Orwig K.E., Ryu B.Y., Avarbock M.R., Brinster R.L. Transgenic mice produced by retroviral transduction of male germ-line stem cells // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2001. - Vol. 98, № 23. - P. 13090-13095.

145. Nagano M., Ryu B.Y., Brinster C.J., Avarbock M.R., Brinster R.L. Maintenance of mouse male germ line stem cells in vitro // Biol. Reprod. - 2003. -Vol. 68, № 6. - P. 2207-2214.

146. Nagano M., Shinohara T., Avarbock M.R., Brinster R.L. Retrovirus-mediated gene delivery into male germ line stem cells // FEBS Lett. - 2000a. - Vol. 475, № l.-P. 7-10.

147. Nagano M., Watson D.J., Ryu B.-Y., Wolfe J.H., Brinster R.L. Lentiviral vector transduction of male germ line stem cells in mice // FEBS Lett. - 2002. -Vol. 524, № 1-3.-P. 111-115.

148. Nagano R., Tabata S., Nakanishi Y., Ohsako S., Kurohmaru M., Hayashi Y. Reproliferation and relocation of mouse male germ cells (gonocytes) during prespermatogenesis // Anat. Rec. -2000b. - Vol. 258, № 2. - P. 210-220.

149. Nayernia K., Lee J.H., Drusenheimer N.. Derivation of male germ cells from bone marrow stem cells // Lab Invest. - 2006. - Vol. 86. - P. 654—663.

150. Niemann H., Kues W.A. Transgenic farm animals: an update // Reprod. Fertil. Dev. - 2007. - Vol. 19, № 6. - P. 762-770.

151. Ning L., Goossens E., Geens M., Van Saen D., Van Riet I., He, D., Tournaye H. Mouse spermatogonial stem cells obtain morphologic and functional characteristics of hematopoietic cells in vivo // Hum. Reprod. - 2010. - Vol. 25, № 12.-P. 3101-3109.

152. Oatley J.M., Brinster R.L. Regulation of spermatogonial stem cell self-renewal in mammals // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. - 2008. - Vol. 24, № l.-P. 263-286.

153. Ogawa T., Ohmura M., Tamura Y., Kita K., Ohbo K., Suda T., Kubota Y. Derivation and morphological characterization of mouse spermatogonial stem cell lines // Arch. Histol. Cytol. - 2004. - Vol. 67, № 4. - P. 297-306.

154. Olaso R., Habert R. Genetic and cellular analysis of male germ cell development // J. Androl. - 2000. - Vol. 21, №4. - P. 497-511.

155. Orwig K.E., Ryu B.-Y., Avarbock M.R., Brinster, R.L. Male germ-line stem cell potential is predicted by morphology of cells in neonatal rat testes // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2002. - Vol. 99, № 18.-P. 11706-11711.

156. Orwig K.E, Schlatt S. Cryopreservation and transplantation of spermatogonia and testicular tissue for preservation of male fertility // J Natl Cancer Inst Monogr. -2005.-P. 51-56.

157. Pelliniemi L.J. Ultrastructure of gonadal ridge in male and female pig embryos // Anat. Embryol. - 1974. - Vol. 147, № 1. - P. 19-34.

158. Pelliniemi L.J. Ultrastructure of the early ovary and testis in pig embryos // Am. J. Anat. - 1975.-Vol. 144, № 1.-P. 89-112.

159. Pelliniemi L.J. Ultrastructure of the indifferent gonad in male and female pig embryos//Tissue Cell.- 1976.-Vol. 8, № l.-P. 163-174.

160. Pesce M., Farrace M.G., Piacentini M., Dolci S., De Felici M. Stem cell factor and leukemia inhibitory factor promote primordial germ cell survival by suppressing programmed cell death (apoptosis) // Development. - 1993. - Vol. 118. -P.1089-1094.

161. Pesce M., Wang X., Wolgemuth D.J., Scholer H. Differential expression of the Oct-4 transcription factor during mouse germ cell differentiation // Mechanism of Development. - 1998b. - Vol. 71. - P. 89-98.

162. Pesce Mio, Scholer H.R. Oct-4: gatekeeper in the beginnings of mammalian development // Stem Cells. - 2001. - Vol. 19. - P. 271 -278.

163. Polge C., Smith A.U., Parkes A.S. Revival of spermatozoa after vitrification and dehydration at low temperatures // Nature. - 1949. - Vol. 164. - P. 666.

164. Pridantseva T., Savchenkova I., Abdrakhmanov I. Isolation of primordial germ cells from pig fetuses // International Congress of Andrology, 7-th: Proceedings. Montreal (Canada). - 2001. - P. 143—148.

165. Rodriguez-Sosa J.R., Dobson H., Hahnel A. Isolation and transplantation of spennatogonia in sheep // Theriogenology. - 2006. - Vol. 66, № 9. - P. 20912103.

166. Russell L.D., Ettlin R.A., Sinha Hikim A.P., Clegg E.D. Histological and histopathological evaluation of the testis // United States:Cache River Press: Vienna. - 1990.-P. 1-40

167. Ryu B.-Y., Kubota H., Avarbock M.R., Brinster R.L. Conservation of spermatogonial stem cell self-renewal signaling between mouse and rat // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2005. - Vol. 102, № 40. - P. 14302-14307.

168. Sadri-Ardekani H., Mizrak S.C., Van Daalen S.K.M., Korver C.M., Roepers-Gajadien H.L., Koruji M., Hovingh S., De Reijke T.M., De La Rosette J.J.M.C.H., Van Der Veen F., de Rooij D.G., Repping S., Van Pelt A.M.M. Propagation of human spermatogonial stem cells in vitro // JAMA. - 2009. - Vol. 302, № 19. - P. 2127-2134.

169. Savchenkova I. P., Polyakova M. V., Viktorova E. V., Kuleshov K. V. Long-term culturing of boar type A spermatogonia // Russian Agricultural Sciences.

- 2012. - Vol. 38, № 5. - P. 396 - 399.

170. Schonfeldt V.V., Krishnamurthy H., Foppiani L., Schlatt S. Magnetic cell sorting is a fast and effective method of enriching viable spermatogonia from djungarian hamster, mouse, and marmoset monkey testes // Biol. Reprod. - 1999. -Vol. 61, №3.- P. 582-589.

171. Seandel M., James D., Shmelkov S.V., Falciatori I., Kim J., Chavala S., Scherr D.S., Zhang F., Torres R., Gale N.W., Yancopoulos G.D., Murphy A., Valenzuela D.M., Hobbs R.M., Pandolfi P.P., Rafii S. Generation of functional multipotent adult stem cells from GPR125+ germline progenitors // Nature. -2007. - Vol. 449, № 7160. - P. 346-350.

172. Senger. P. Pathways to pregnancy and partuition // Current Conceptions, Inc., Moscow, ID. - 1997. - P. 172-186.

173. Sharov A.A., Masui S., Sharova L.V, Piao Y., Aiba K., Matoba R., Xin L., Niwa H., Ko M. Identification of Pou5fl, Sox2, and Nanog downstream target

genes with statistical confidence by applying a novel algorithm to time course microarray and genome-wide chromatin immunoprecipitation data // BMC Genomics. - 2008. - Vol. 3, № 9. - P. 269.

174. Shinohara T., Brinster R.L. Enrichment and transplantation of spermatogonial stem cells // Int. J. Androl. - 2000. - Suppl. 23, № 2. - P. 89-91.

175. Shinohara T., Kato M., Takehashi M., Lee, J., Chuma S., Nakatsuji N., Kanatsu-Shinohara M., Hirabayashi M. Rats produced by interspecies spermatogonial transplantation in mice and in vitro microinsemination // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.-2006.-Vol. 103, №37.-P. 13624-13628.

178. Shinohara T., Orwig K.E., Avarbock M.R., Brinster R.L. Remodeling of the postnatal mouse testis is accompanied by dramatic changes in stem cell number and niche accessibility // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2001. - Vol. 98, № 11. -P. 6186-6191.

179. Shinohara T., Orwig K.E., Avarbock M.R., Brinster R.L. Restoration of spermatogenesis in infertile mice by Sertoli cell transplantation // Biol. Reprod. -2003.-Vol. 68, №3.-P. 1064-1071.

180. Smith A. G., Heath J. K., Donaldson D. D., Wong G. G., Moreau J., Stahl M., Rogers D. Inhibition of pluripotential embryonic stem cell differentiation by purified polypeptides // Nature. - 1988. - Vol. 336. - P. 688-690.

181. Smith A. G., Hooper M. L. Buffalo rat liver cells produce a diffusible activity which inhibits the differentiation of murine embryonic carcinoma and embryonic stem cell // Dev. Biol. - 1987. - Vol. 121. - P. 1 - 9.

182. Snedaker A.K, Honaramooz A., Dobrinski I. A game of cat and mouse: xenografting of testis tissue from domestic kittens results in complete cat spermatogenesis in a mouse host // J. Androl. - 2004. Vol. 25. - P. 926- 930.

183. Stewart C.L. Stem cells from primordial germ cells can reenter the germ line // Dev. Biol. - 1994. - Vol. 161. - P.626-628.

184. Tadokoro Y., Yomogida K., Ohta H., Tohda A., Nishimune Y. Homeostatic regulation of germinal stem cell proliferation by the GDNF/FSH pathway // Mechanism of Development. - 2002. - Vol. 113. - P. 29-39.

185. Takagi Y., Talbot N.C., Rexroad C.E. Jr., Pursel V.G. Identification of pig primordial germ cells by immunocytochemistry and lectin binding //Molecular Reproduction and Development. - 1997. - Vol. 46. - P. 567-580.

186. Takahashi K, Tanabe K, Ohnuki M, Narita M, Ichisaka T, Tomoda K, Takeda J., Seino S., Bell G.I. Human Oct3 gene family: cDNA sequences, alternative splicing, gene organization, chromosomal location, and expression at low levels in adult tissues // Nucleic Acid Research. - 1992. - Vol. 20, № 17. - P. 4613-4620.

187. Tegelenbosch R.A.J., de Rooij D.G. A quantitative study of spermatogonial multiplication and stem cell renewal in the C3H/101 F1 hybrid mouse // Mutat. Res. - 1993. - Vol. 290, № 2. - P. 193-200.

188. Toyooka Y., Tsunekawa N., Akasu R., Noce T. Embryonic stem cells can form germ cells in vitro // PNAS USA. - 2003. - Vol. 100. - P.l 1457—11462. 189 Toyooka, Y., Tsunekawa, N., Takahashi, Y. Expression and intracellular localization of mouse Vasa-homologue protein during germ cell development // Mech Dev. - 2000. - Vol. 93, № 1-2. - P. 139-149.

190. Tumbleson M.E., Schook L.B. Advances in Swine in Biomedical Research // Plenum Press; New York. - 1996. - P. 1-4.

191. Van Der Wee K.S., Johnson E.W., Dirami G., Dym M., Hofmann M.C. Immunomagnetic isolation and long-term culture of mouse type a spermatogonia // J. Androl. -2001. - Vol. 22, № 4. - P. 696-704.

192. Van Vorstenbosch C., Colenbrander B., Wensing C. Leydig cell development in the pig testis during the late fetal and early postnatal period: an electron microscopic study with attention to the influence of fetal decapitation // Am. J. Anat.- 1984.-Vol. 169, №2.-P. 121-136.

193. Van Straaten H., Wensing C.J.G. Histomorphometric aspects of testicular morphogenesis in the pig // Biol. Reprod. -1977. - Vol. 17, № 4. - P. 467-472.

194. Wang J., Levasseur D., Orkin S. Requirement of Nanog dimerization for stem cell self-renewal and pluripotency// Proc Natl Acad Sci USA.- 2008. - Vol. 105, № 17.-P. 6326-6331.

195. Wang R.A., Nakane P.K, Koji T. Autonomous cell death of mouse male germ cells during fetal and postnatal period // Biol. Reprod. - 1998. - Vol. 58, №5. -P. 1250-1256.

196. Wang S.H, Tsai M.S., Chiang M.F, Li H. A novel NK-type homeobox gene, ENK (early embryo specific NK), preferentially expressed in embryonic stem cells // Gene Expression Patterns. - 2003. - Vol. 3. - P. 99-103.

197. Wang Y., Mah N, Prigione A. A transcriptional roadmap to the induction of pluripotency in somatic cells // Stem Cell Rev.- 2010. - Vol. 6, № 2. - P. 282-296.

198. Wheeler M.B. Development and validation of swine embryonic stem cells; a review // Reprod. Fértil. Dev. - 1994. - Vol. 6. - P. 563-568.

199. Wianny F, Perreau C, Hochereau de Reviers M.T. Proliferation and differentiation of porcine inner cell mass and epiblast in vitro // Biol Reprod. -1997. - Vol. 576 №4. - P. 756-764.

200. Williams R. L, Hilton D. J, Pease S, Willson T. A, Stewart C. L, Gearing D. P, Wagner E. F, Metcalf D, Nicola N. A, Gough N. M. Myeloid leukaemia inhibitory factor maintains the developmental potential of embryonic stem cells // Nature. - 1988. - Vol. 336. - P. 684-687.

201. Yamanaka S. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors // Cell. - 2007. - Vol. 131, № 5. - P. 861-72.

202. Yang Y, Honaramooz A. Effects of medium and hypothermic temperatures on preservation of isolated porcine testis cells // Reprod. Fértil. Dev. - 2010. - Vol. 22, №3.-P. 523-532.

203. Yang Y, Steeg J, Honaramooz A. The effects of tissue sample size and media on short-term hypothermic preservation of porcine testis tissue // Cell Tissue Res. - 2010. - Vol. 340, № 2. - P. 397-406.

204. Yao H.H, DiNapoli L, Capel B. Meiotic germ cells antagonize mesonephric cell migration and testis cord formation in mouse gonads // Development. - 2003. - Vol. 130, № 24. - P. 5895-902.

205. Yeunhee K., Turner D., Nelson J., Dobrinski I., McEntee M., Alexander J Travis. Production of donor-derived sperm after spermatogonial stem cell transplantation in the dog // Society for Reproduction and Fertility. - 2008. -Vol. 136.-P. 823-831.

206. Yoshida S., Sukeno M., Nakagawa T., Ohbo K., Nagamatsu G., Suda T., Nabeshima Y.I. The first round of mouse spermatogenesis is a distinctive program that lacks the self-renewing spermatogonia stage // Development. - 2006. - Vol. 133, №8.-P. 1495-1505.

207. Yoshida S., Takakura A., Ohbo K. Neurogenin3 delineates the earliest stages of spermatogenesis in the mouse testis // Dev. Biol. -2004. - Vol. 269. - P. 447458.

208. Zeng W., Snedaker A. K., Megee S., Rathi R., Chen F., Honaramooz A., Dobrinski I. Preservation and transplantation of porcine testis tissue // Reprod Fertil Dev. - 2009. - Vol. 21, № 3. - P. 489^197.

209. Zheng K., Wu X., Kaestner K., Wang P. The pluripotency factor LIN28 marks undifferentiated spermatogonia in mouse // BMC Dev. Biol. - 2009. - Vol. 9, № l.-P. 38.

210. Zwaka T.P., Thomson J.A. A germ cell origin of embryonic stem cells? // Development. - 2005. - Vol. 132. - P. 227—233.