Влияние условий адсорбции моноклональных антител на их антигенсвязывающую активность в твёрдофазном иммуноферментном анализе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат наук Тараканова Юлия Николаевна

• Тараканова Юлия Николаевна
• кандидат наук
• 2019

Оглавление диссертации кандидат наук Тараканова Юлия Николаевна

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Краткая история иммуноферментного анализа (ИФА)

1.1.1. Изобретение радиоиммунологического анализа (РИА)

1.1.2. Возможность использования ферментной метки в

иммунохимическом анализе

1.1.3. Открытие способа получения моноклональных антител методом

слияния клеток

1.1.4. Краткий обзор последних достижений и дальнейшего

развития иммуноферментного анализа

1.2. Особенности иммунохимических процессов в «классических» твердофазных ИФА

1.2.1. Скорость реакций

1.2.2. Формирование монослоя иммобилизованных молекул на твердой фазе

1.2.3. Вопрос о прочности прикрепления молекул к твердой фазе и друг к

другу в твердофазных ИФА

1.2.4. Образование прочных циклических иммунных комплексов в сэндвич-методе

1.2.5. Иммунохимические факторы, определяющие

аналитическую чувствительность твердофазных ИФА

1.2.6. Проблема инактивации антител при пассивной адсорбции на

твердой фазе

Глава 2. Методы исследований и использованные материалы

2.1. Использованные материалы

2.2. Методы исследований

2.2.1. Получение гибридом - продуцентов моноклональных антител

2.2.2. Определение антигенсвязывающей активности моноклональных антител с антигеном, адсорбированным на поверхность

планшетов из полистирола

2.2.3. Очистка моноклональных антител с помощью

ионообменной хроматографии

2.2.4. Определение белка

2.2.5. Приготовление конъюгата р24ВИЧ с LC-LC-биотином

2.2.6. Адсорбция антител на поверхность планшетов для

определения антигенсвязывающей активности антител

2.2.7. Определение оптимального рН адсорбции тестируемых антител

2.2.8. Определение оптимальной концентрации антител в адсорбционных растворах при иммобилизации моноклональных

антител на поверхность планшетов

2.2.9. Определение антигенсвязывающей активности

иммобилизованных моноклональных антител

2.2.10. Количественное определение относительной

антигенсвязывающей активности антител

2.2.11. Приготовление антител и HBsAg, меченных

2.2.12. Определение концентрации 1251-НВвА§

2.2.13. Определение количества антител, адсорбированных на

поверхности планшетов из полистирола

2.2.14. Радиоиммунологическое определение количества антител, сохранивших антигенсвязывающую активность после адсорбции

2.2.15. Конъюгация антител с флуоресцентным красителем Су5

2.2.16. Определение количества меченых Су5 моноклональных антител, иммобилизованных на поверхность планшетов при

использовании адсорбционных буферов с различными значениями рН

2.2.17. Определение поверхностной концентрации иммунных

комплексов, образованных при различных условиях адсорбции антител

2.2.18. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-ПААГ)

2.2.19. Статистическая обработка данных

Глава 3. Результаты исследований

3.1. Получение гибридом - продуцентов моноклональных антител к

белку р24 вируса иммунодефицита человека (ВИЧ)

3.2. Очистка моноклональных антител и их характеристика

3.3. Оценка чистоты моноклональных антител

3.4. Отбор моноклональных антител, пригодных для анализа в

качестве адсорбируемых

3.5. Определение оптимального рН адсорбции иммобилизуемых антител

в условиях избыточной насыщающей концентрации

3.6. Подбор оптимальных насыщающих концентраций тестируемых

антител при оптимальном рН адсорбции

3.7. Определение относительной антигенсвязывающей активности антител после адсорбции на поверхность планшетов (при оптимальной насыщающей концентрации антител в адсорбционном

буфере)

3.8. Определение доли активных антител в общем количестве моноклональных антител, адсорбированных на поверхность планшетов

3.9. Определение количества антител, адсорбированных на поверхности полистироловых планшетов при различных рН с

125

использованием меченых I антител

3.10. Определение количества антител, сохраняющих активность после адсорбции на поверхность полистироловых планшетов при разных

значениях рН

Обсуждение

Выводы

Список сокращений

Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние условий адсорбции моноклональных антител на их антигенсвязывающую активность в твёрдофазном иммуноферментном анализе»

ВВЕДЕНИЕ

При создании новых тест-систем количественного твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) важнейшей задачей является достижение высокой аналитической чувствительности метода. Одним из этапов создания количественных методов ИФА с высокой аналитической чувствительностью является подбор условий адсорбции антител, которые позволяют в максимальной степени сохранить их антигенсвязывающую (биологическую) активность. Высокая антигенсвязывающая активность адсорбированных антител создает предпосылки для эффективного образования иммунных комплексов как с меченым антигеном (в случае конкурентного ИФА), так и с детектирующими антителами в присутствие тестируемого антигена (в сэндвич-методе) [23]. Теория и практика количественных твердофазных методов ИФА свидетельствуют, что важнейшими факторами, которые определяют способность антител связывать антиген, являются высокая аффинность иммобилизованных антител и высокая поверхностная концентрация биологически активных молекул антител на твердой фазе [23, 81, 103].

Наиболее распространенным способом иммобилизации антител при конструировании количественных методов ИФА является их прямая адсорбция на поверхность твердой фазы. Преимуществом этого способа является его простота и дешевизна [23]. Однако, как показано в ряде исследований, этот метод может приводить к утрате активности более 90% адсорбируемых моноклональных антител (МКА), используемых в современных вариантах ИФА [23, 82]. Поэтому весьма актуальным является изучение условий, позволяющих повысить биологическую активность МКА при их пассивной адсорбции на твердую фазу.

К числу наиболее существенных факторов, влияющих на антигенсвязывающую активность иммобилизованных антител, можно отнести состав и физико-химические свойства адсорбционных буферов. Отметим, что в исследованиях по ИФА оказалось практически не освещенным влияние такого важного фактора, как рН адсорбционных буферов. В руководствах по ИФА

традиционно рекомендуется использовать для адсорбции антител буферные растворы с рН в интервале 7,5 - 9,5 [57, 60].

Вместе с тем, в некоторых работах для лучшего сохранения активности антител при иммобилизации требовалось использование адсорбционных буферов с более низким или более высоким значением рН [11, 33, 88]. Ранее в наших исследованиях был описан гибридомный клон-продуцент «необычных» МКА, демонстрирующих более высокую антигенсвязывающую активность после адсорбции в буфере с рН 2,8 (клон 18С8) [11]. Антитела этого клона были использованы как адсорбируемые для конструирования сэндвич-метода определения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg). Однако оставался невыясненным вопрос, насколько распространены МКА, демонстрирующие увеличение антигенсвязывающей способности при адсорбции в "жестких" условиях (экстремально низких и экстремально высоких значениях рН), которые могут приводить к инактивации МКА. Это имеет значение с точки зрения использования данного феномена при конструировании твердофазных количественных систем ИФА. В дополнение к этому в упомянутых работах не проанализирован механизм, приводящий к усилению антигенсвязывающей способности МКА. В частности, неясно, связано ли это усиление с увеличением общего количества адсорбированных антител на поверхности (при пропорциональном возрастании абсолютного числа активных антител). Или же этот эффект обусловлен лучшим сохранением антигенсвязывающей активности антител при «жестких» условиях адсорбции, то есть возрастанием доли активных антител в общем пуле иммобилизованных молекул иммуноглобулина (возможно и без увеличения размеров самого этого пула).

Таким образом, анализ воздействия рН (в том числе, экстремальных значений рН) на процессы адсорбции антител и на их антигенсвязывающую активность, является весьма актуальным как в теоретическом, так и в практическом плане, с точки зрения оптимизации количественных методов твердофазного ИФА.

Цели и задачи исследования

Цель исследования: Анализ влияния рН буферных растворов на изменения антигенсвязывающей активности МКА при их пассивной адсорбции на поверхность твердой фазы.

Задачи исследования:

1. Получить репрезентативную панель МКА к двум вирусным антигенам: белку р24 вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и поверхностному антигену вируса гепатита В (HBsAg), с чистотой не менее 90%.

2. Провести сравнительный анализ антигенсвязывающей активности всех МКА панели при различных значениях рН адсорбции.

3. Установить коррелятивные связи между количеством молекул МКА, адсорбируемых на поверхности твёрдой фазы, и значениями рН адсорбционных буферных растворов.

4. Выявить соответствие между количеством адсорбированных молекул МКА и их относительной антигенсвязывающей активностью.

5. Определить концентрацию активных антигенсвязывающих сайтов МКА, демонстрирующих высокую антигенсвязывающую активность при различных значениях рН адсорбции.

Научная новизна

Впервые, используя панель, включающую 28 МКА, был проведен систематический анализ влияния рН адсорбционных буферов на антигенсвязывающую активность антител. Показано, что оптимальный режим адсорбции, обеспечивающий максимальную антигенсвязывающую активность антител, зависит от индивидуальных свойств МКА, и, в ряде случаев, рН-оптимум иммобилизации значительно отличается от традиционно рекомендуемых в руководствах нейтральных и слабощелочных значений (рН 7,5 и 9,5). Некоторые МКА проявляли узкую специфичность в отношении оптимального рН адсорбции, в то время как другие МКА позволяли использовать с одинаковым успехом адсорбционные буферы с разными значениями рН (в диапазоне 2,8 - 11,9). Для существенной части МКА панели (21,5%) адсорбция при кислых и щелочных значениях рН (2,8 и 11,9) позволила увеличить антигенсвязывающую способность

иммобилизованных антител в 1,25-3,6 раза (по сравнению как с рН 7,5, так и с рН 9,5). Установлено, что эффект усиления антигенсвязывающей активности некоторых МКА при адсорбции в кислых и щелочных буферах связан с лучшим сохранением их антигенсвязывающей активности без увеличения общей поверхностной концентрации антител на твердой фазе. Для МКА нескольких клонов показано хорошее соответствие между антигенсвязывающей активностью (определяемой по связыванию с меченым антигеном) и тестируемым в тех же условиях количеством активных антигенсвязывающих сайтов.

Научно-практическая значимость работы

В практическом отношении важно, что в некоторых случаях использование жестких условий адсорбции (рН 2,8 и рН 11,9) позволяет существенно увеличить антигенсвязывающую активность антител и, тем самым, существенно расширить спектр антител, пригодных для конструирования твердофазных ИФА. Данные результаты могут представлять интерес для широкого круга специалистов в области иммунохимии, а также при конструировании и оптимизации различных методов иммунохимического анализа [65, 66, 77, 97, 101, 102].

Публикация результатов исследования

По теме диссертации опубликовано четыре печатных работы в рецензируемых журналах. Результаты исследований доложены на Международной научно-практической конференции: «Теоретические и практические аспекты развития научной мысли: Медицинские науки, Фармацевтические науки, Ветеринарные науки, Биологические науки, Химические науки» (Москва, 2014); на IV Международной научно-практической конференции «Современные концепции научных исследований» (Москва, 2014); на конференции молодых ученых, посвященной 170-летию И.И. Мечникова (Москва 2015).

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований, обсуждение, выводы и список

цитированной литературы. Список литературы включает 107 источников. Работа изложена на 115 страницах и иллюстрирована 7 таблицами и 13 рисунками.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Краткая история ИФА

Иммуноферментный анализ (ИФА) играет важнейшую роль для развития

различных разделов биологической и медицинской науки, лабораторной диагностики инфекционных, онкологических, эндокринологических и иммунологических заболеваний, контроля за качеством и безопасностью пищевых продуктов, в мониторинге вредных факторов окружающей среды и многих других областях [4, 6, 7, 65]. В научных обзорах значение разработки этого метода для развития указанных областей даже сравнивают с открытием пенициллина и других антибиотиков, расшифровкой структуры ДНК и генома человека и т.п. [4, 20, 48, 49, 69, 87, 98].

Этот метод возник в конце 60-х - начале 70-х годов ХХ века как результат ряда важнейших теоретических и практических достижений в области иммунохимии. Ниже дан краткий исторический обзор наиболее важных методических усовершенствований и открытий в области биохимии и иммунохимии, непосредственно связанных с внедрением ИФА.

1.1.1. Изобретение радиоиммунологического анализа (РИА)

Говоря о предшествующих открытиях, создавших условия для развития ИФА, необходимо, прежде всего, указать на такую веху, как изобретение радиоиммунологического анализа (РИА). В первом РИА, описанном в 1959 г. Соломоном Берсоном (Solomon Berson) и Розалин Ялоу (Rosalyn Yalow) предлагалось определять концентрацию инсулина на основании конкуренции

131

гормона, меченого радиоактивным йодом ( I), и нативного гормона в анализируемом образце за связывание с антителами к инсулину [16, 17]. Иммунные комплексы отделялись от "свободных" реагентов с помощью хроматографии; радиоактивность определяли с помощью счетчика у-частиц. Изобретение РИА позволило поднять уровень иммунохимического анализа, основанного на взаимодействии антител с антигенами на качественно иную ступень, по сравнению с ранее используемыми методами (преципитацией и др.).

Упомянутые методы, будучи весьма затратными по времени, характеризовались низкой чувствительностью и специфичностью и не позволяли измерять вещества с низкой молекулярной массой. РИА открыл зеленый свет тест-системам для количественного анализа множества гормонов и других биологически активных веществ, маркеров различных болезней, включая опасные вирусные инфекции и др. В 1977 г. группа ученых (Розалин Ялоу и др.), разработавших РИА, была награждена за это открытие Нобелевской премией.

Вместе с тем у РИА были серьезные ограничения, заставлявшие исследователей искать способы их преодоления. К недостаткам РИА прежде всего относится необходимость работы с реактивными изотопами, представляющими

131

опасность для здоровья человека, тем более, что вначале использовали изотоп I, дающий у- и a-излучение, который позднее удалось заменить на более

125

безопасный I. (слабый у-излучатель). Вторым «узким местом» метода РИА являлась необходимость разделения связавшихся с антителами и «свободных» реагентов.

1.1.2. Возможность использования ферментной метки

в иммунохимическом анализе

В начале 70-х годов в научных кругах активно обсуждалась возможность использования ферментов в качестве метки для антител или антигенов в иммунохимических реакциях (вместо опасных радиоактивных меток). Однако эта идея была встречена с большим скептицизмом, например, на встречах Европейского РИА клуба (European Radioimmunoasaay Club, ERIAC) в Базеле, происходивших в эти годы [69]. Полагали, что присоединение таких больших белковых молекул, как ферменты, будет нарушать взаимодействие антигенов и антител. Однако дальнейшие исследования опровергли этот скептицизм. Большую роль в этом сыграли усилия по созданию конъюгатов антител с ферментами для иммуногистохимического анализа. Двумя группами исследователей в США было показано, что такие ферменты, как щелочная фосфатаза, глюкозоксидаза и пероксидаза хрена, могут быть успешно ковалентно связаны с антителами с помощью, например, реакции с глютаровым

диальдегидом или другими методами. Полученные конъюгаты были успешно использованы в световой, флюоресцентной и электронной микроскопии для иммуногистохимического окрашивания структур, содержащих анализируемые антигены [42, 69].

Эти достижения были замечены и успешно применены для замены радиоактивной метки в иммунохимическом анализе двумя группами исследователей в Швеции и Нидерландах [68]. Заслугой Евы Энгвал, которая начала заниматься этой темой в рамках своей дипломной университетской работы в Стокгольмском университете (под руководством проф. Пелмана), было также внедрение пластиковой твердой фазы для пассивной адсорбции антител или антигенов. Еще в 50-х годах проводились исследования по адсорбции различных белков на пластиковые поверхности. Было замечено, что некоторые пробирки, используемые для РИА, хорошо адсорбируют и удерживают на поверхности белки. Это явление использовали в РИА для разделения связанных и "свободных" реактантов. Ева Энгвал предложила применять это свойство пластика в ИФА для иммобилизации антител или антигенов на твердой фазе. В своей первой работе, посвященной ИФА (опубликованной в соавторстве с проф. Пелман), Ева Энгвал описывает (в качестве модели) определение кроличьего иммуноглобулина с помощью конкурентного метода и с использованием антигена, меченого ферментом (щелочной фосфатазой), дающим цветное окрашивание после реакции с субстратом [42]. В этом методе меченые и немеченые молекулы антигена в определяемом образце конкурировали за связывание со специфическими антителами, прикрепленными к целлюлозному носителю. Разделение иммунных комплексов и не связавшихся реагентов осуществлялось с помощью центрифугирования. Однако уже в следующей работе Ева Энгвал показала, что можно использовать пластиковые пробирки для адсорбции одного из реагентов (антител или антигенов) и проводить дальнейшую иммунохимическую реакцию антител с антигенами на твердой фазе. Наконец, в своей третьей работе Энгвал предложила использовать вместо пробирок уже вошедшие к этому времени в обиход пластиковые планшеты с 96 лунками. Так был внедрен наиболее

распространенный до сих пор дизайн ИФА. Именно Энгвал предложила известное название ELISA - enzyme-linked immunosorbent assay (в русскоязычной литературе используют обычно термин «твердофазный ИФА») [42]. Это усовершенствование позволило успешно преодолеть сразу два затруднения РИА, связанных с использованием радиоактивной метки и необходимостью разделения реагентов (следует отметить, что примерно в то же время был предложен твердофазный РИА). Разделение и отмывка иммунных комплексов от несвязанных реагентов чрезвычайно упростились [42, 69].

Одновременно другие исследователи, В. Ван Вееман и Р. Шурс, работавшие в Нидерландах, независимо от шведских иммунохимиков предложили иммуноферментный метод (с использованием в качестве ферментной метки пероксидазы хрена) для измерения человеческого хорионического гонадотропина [96, 97]. По способу разделения реагентов методы, использованные авторами, были аналогичны таким типам РИА, как «сэндвич-метод» и «радиоиммунометрический метод». При этом в качестве твердой фазы применяли суспензию BrCN-активированной сефарозы, к которой прикрепляли улавливающие антиген антитела. Этот принцип также нашел впоследствии широкое применение, его можно рассматривать в качестве прототипа многих современных вариантов ИФА, основанных на использования в качестве твердой фазы микрочастиц (включая наночастицы и др.) (см. ниже).

1.1.3. Открытие способа получения моноклональных антител методом слияния клеток

Важнейшее значение для развития ИФА сыграло открытие и описание в 1975 году Келлером и Мильштейном методов получения моноклональных антител (МКА) с помощью гибридомной технологии [64]. Это открытие, за которое авторов наградили Нобелевской премией, во-первых, позволило решить задачу получения практически неограниченных количеств однородных антител. Кроме того, этот метод позволил получать МКА к отдельным (разным) эпитопам на молекуле белкового антигена. Последнее создало условия для конструирования

сэндвич-методов определения антигенов - наиболее широко применяемого метода ИФА белковых молекул.

Принцип работы сэндвич метода в простейшем варианте изображен на рисунке 1. На поверхность твердой фазы (например, пластикового 96-лучного планшета) прикрепляют (путем адсорбции или другим способом) МКА, распознающие один из эпитопов анализируемого антигена (белка). В англоязычной литературе иммобилизованные антитела обычно называют «ловящими или улавливающими» («capture») антителами. После добавления образца, содержащего антиген, на поверхности твердой фазы образуются иммунные комплексы (ловящее антитело—антиген). После отмывок добавляют детектирующие МКА, направленные к другому эпитопу антигена. Эти антитела связаны с ферментом (чаще всего используют пероксидазу хрена). В результате образуются тройные комплексы («сэндвичи»), в которых молекула антигена оказывается "зажатой" между двумя молекулами МКА к разным эпитопам, при этом комплексы могут иметь различную конфигурацию, как линейную (рис. 1, а), так и циклическую (рис. 1, б, в). Для визуализации комплексов добавляют субстрат фермента, который дает цветную реакцию; интенсивность окрашивания регистрируется на спектрофотометре. Интенсивность реакции пропорциональна концентрации определяемого антигена в инкубационной смеси. Путем сравнения калибровочной кривой и сигнала в анализируемом образце определяют концентрацию тестируемого антигена. Системы ИФА, построенные по принципу сэндвич-методов, позволяют достигать более высокой чувствительности и специфичности (близкие к таковым для РИА), так как распознавание идет по двум различным эпитопам белковой молекулы, и, кроме того, при определенных условиях возможно образование циклических комплексов с более высокой авидностью (об этом подробнее сказано ниже, в разделе 2.2.4).

На основе гибридомной технологии развивается такое направление, как получение рекомбинантных антител [3]. Часто для этого в качестве основы используют ранее полученные моноклональные антитела, которым придают новые свойства. Например, часть молекулы мышиных МКА заменяют на

последовательности человеческих антител («гуманизируют»), что делает МКА менее иммуногенными. Это важно с точки зрения применения подобных гибридных молекул в клинике.

Однако развивается и такое направление рекомбинантных технологий получения МКА, когда гибридомная стадия элиминируется. Например, недавно предложен следующий интересный метод «не гибридомной» технологии, позволяющий в течение 10 дней получать рекомбинантные МКА, причем без необходимости культивирования клеток в стерильных условиях [61]. Это метод включает следующие этапы [61]:

1) иммунизация животных (мышей, кроликов или кур) антигеном;

2) получение суспензии клеток иммунной селезенки;

3) обогащение суспензии иммунными лимфоцитами путем инкубации клеток с антигеном, которым насыщена поверхность 96-луночных планшетов: клетки прикрепляются к планшетам за счет реакции антител на их поверхности с антигеном;

4) отделение обогащенных иммунными лимфоцитами клеток от плашек, выделение из них нуклеиновых кислот, получение плазмид, содержащих различные сочетания легких и тяжелых цепей вариабельных и константных частей молекулы IgG;

5) кратковременная трансфекция полученными плазмидами культуры клеток китайского хомячка, растущей в 96-луночных планшетах, причем трансфекция производится таким образом, чтобы в каждую лунку попала примерно одна плазмида, что имитирует клонирование гибридом;

6) анализ культуральных супернатантов с помощью твердофазного ИФА с целью выявить лунку, в которой происходит экспрессия МКА к антигену;

7) использование обнаруженных трансфицированных клеток, экспрессирующих МКА нужной специфичности, для дальнейшего получения клона рекомбинантных антител.

Меченое АТ

Антиген ^ Адсорбированное АТ

/У // //У/ /7///7У

Твердая фаза

а

б

в

Рисунок 1. Комплексы, которые образуются в сэндвич-методе тестирования антигена при использовании детектирующих антител, конъюгированных с ферментом (конъюгатов) и бифункциональных антител, несущих сайты связывания с антигеном и ферментом (а, б, в).

а. Комплекс между одним антигенсвязывающим сайтом адсорбированных антител, антигеном и антигенсвязывающим сайтом детектирующих антител (ансамбль);

б. Циклический комплекс между двумя молекулами антигена, двумя антигенсвязывающими сайтами адсорбированного антитела и двумя антигенсвязывающими сайтами детектирующего антитела;

в. Циклический комплекс между двумя молекулами антигена, двумя антигенсвязывающими сайтами разных молекул адсорбированных антител и двумя антигенсвязывающими сайтами молекулы детектирующих антител.

Примечание

Антиген условно разделен на два эпитопа.

Предполагаемая ценность описанного метода заключается в принципиальной возможности получения МКА различной специфичности и структуры (включая полноразмерные молекулы) достаточно быстро (в течение 10 дней) без использования «классической» гибридомной технологии, занимающей значительно больше времени [61].

1.1.4. Краткий обзор последних достижений

и дальнейшего развития ИФА

После открытия ИФА, разработка методов тестирования антигенов происходила на уровне отдельных научных групп и лабораторий. Вскоре к этому подключились биотехнологические компании, которые поставили производство тест-систем на индустриальную основу. В настоящее время производится огромное количество тест-систем для иммуноферментного определения различных антигенов, и их число постоянно растет. По своей чувствительности и специфичности многие современные методы ИФА не уступают, а в некоторых случаях, превосходят РИА. Наиболее распространенным методом анализа белковых антигенов является формат сэндвич-метода, описанный выше (рис. 1), выполняемый на 96-луночных платах. В частности, на нем основан скрининг донорской крови на наличие вирусных антигенов (маркеров таких инфекций, как вирусные гепатиты и ВИЧ) и множество других важных массовых исследований [2, 4, 6, 7, 20, 42, 48, 49, 69, 87, 98]. Для тестирования низкомолекулярных веществ (например, стероидных гормонов и других низкомолекулярных лигандов) применяют конкурентные методы ИФА [4].

Усовершенствование ИФА в «традиционном» 96-луночном формате направлено на повышение чувствительности и специфичности метода и автоматизацию процесса. Первое достигается следующими приемами. Во-первых, это получение более аффинных и специфичных антител и использование методов их иммобилизации на твердой фазе, способствующих лучшему сохранению их антигенсвязывающей активности (о последнем подробнее будет сказано ниже). Второе направление связано с усилением регистрируемого сигнала. Наиболее часто используемой ферментной меткой является пероксидаза хрена, затем идет

щелочная фосфатаза, реже используют Р-галактозидазу. Но в ряде современных и более дорогостоящих тест-систем существует тенденция заменять субстраты, дающие цветное окрашивание на вещества, генерирующие более сильный флуоресцентный и хемилюминесцентный сигнал [20]. Наряду с этим для усиления сигнала широко используют биотин-стрептавидиновые комплексы. В простейшем варианте используют меченые биотином детектирующие МКА, которые взаимодействуют со стептавидином, связанным ковалентно с пероксидазой хрена. Такие антитела в существенно меньшей степени утрачивают биологическую (антигенсвязывающую) активность, чем после конъюгации с ферментом [2, 4].

В силу коммерческих причин фирмы часто не раскрывают детали усовершенствованных методов ИФА. Но о приоритетных направлениях разработок можно узнавать по большому потоку научных работ на эту тему. В частности, анализ литературы свидетельствует, что в качестве одного из перспективных подходов для усиления сигнала в ИФА в настоящее время рассматривают использование конъюгатов детектирующих антител (МКА) с продуктами нанотехнологии (различными наночастицами) [79].

Наночастицы (например, золота) позволяют увеличивать количество метки, связанной с детектирующим антителом и увеличивать авидность связывания детектирующего антитела с антигеном в сэндвич методе (рис. 2). Это можно выразить в терминах увеличения отношения площади реакции к объему. Например, на одну наночастицу можно прикрепить сразу несколько молекул детектирующих антител и молекул фермента, или биотина. Таким образом при взаимодействии с антигеном образуются комплексы, которые будут давать значительно более сильный сигнал, чем при использовании конъюгатов антител с пероксидазой хрена, в которых на одно МКА обычно приходится только одна молекула фермента [29, 59, 79, 101]. Вместе с тем, следует обратить внимание на то, что использование подобных систем может приводить к существенному увеличению сигнала, который дает нулевой стандарт.

V Аи

Рисунок 2. Конъюгат антител (МКА) с наночастицами золота.

Таким образом, увеличение числа молекул фермента на молекулу антител имеет ограничения, которые всякий раз следует определять экспериментально. В некоторых тестах используют наночастицы, на которых вместо молекул ферментов прикрепляют фрагменты нуклеиновых кислот. Образующиеся иммунные комплексы выявляют с помощью молекулярно-генетических методов (например, используя ПЦР) [72, 98].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Тараканова Юлия Николаевна, 2019 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Берлина А.Н., Венгеров Ю.Ю., Голубев С.С., Дзантиев Б.Б., Жердев А.В., Киселева Ю.В., Короленко Ю.А., Кудеяров Ю.А., Малюченко В.М., Таранова Н.А. Метод калибровочных кривых для иммунохроматографических экспресс-тестов. Часть 2. Иммунохроматографические экспресс тесты с квантовыми точками // Метрология. - 2012. - № 10.- С. 31-41.

2. Вербов В.Н. Принципы твердофазного иммуноферментного анализа // Твердофазный иммунный анализ. Сборник научных трудов. - Л.: Изд. института им. Л. Пастера, том 64. 1998. - С. 3-27.

3. Деев С.М., Лебеденко Е.Н. Современные технологии создания неприродных антител для клинического применения // Akta Naturae. - 2009. - Т. 1, №1. - С. 32-50.

4. Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. - М.: Высшая школа, 1991. - 287 с.

5. Курек Д. Атомно-силовая микроскопия: увидеть, прикоснувшись [Электронный ресурс] // Биомолекула. - 2011 - 28 окт. - Режим доступа: http://biomolecula.ru/content/956.

6. Лобзин Ю.В., Жданов К.В., Волжанин В.М., Гусев Д.А. Вирусные гепатиты: клиника, диагностика, лечение. - СПб: ООО «Издательство Фолиант», 2006. - 183 с.

7. Новик А.А., Цыган В.Н., Никитин В.Ю., Соколова Е.Д., Жданов К.В., Огарков П.И., Лобзин Ю.В., Жоголев К.Д., Малышев В.В., Токмаков В.С., Сухина И.А. Дифференциальная лабораторная иммунодиагностика вирусных гепатитов, методические указания. - М.: ГВМУ МО РФ, 2002. - 78 с.

8. Орлов А.В., Буренин А.Г., Шипунова В.О., Лизунова А.А., Горшков Б.Г., Никитин П.И. Разработка иммуноанализа с помощью интерферометрической регистрации его кинетики в реальном времени // Acta naturae. - 2014. - Т. 6, № 1. -С. 91 - 102.

9. Тараканова Ю.Н., Дмитриев Д.А., Массино Ю.С., Смирнова М.Б., Сегал О.Л., Фартушная О.В., Яковлева Д.А., Коляскина Г.И., Лавров В.Ф., Дмитриев А.Д. Влияние условий адсорбции моноклональных антител на антигенсвязывающую активность // Прикл. биохимия и микробиология. - 2012. -Т. 48, № 5. - С. 557-563.

10. Таранова Н.А., Берлина А.Н., Жердев А.В., Дзантиев Б.Б. Квантовые точки как маркер в иммунохроматографических диагностических тест // Нанотехнологии и охрана здоровья. - 2012. - Т. 4, № 4. - С. 44-47.

11. Яковлева Д.А., Дмитриев А.Д., Дмитриев Д.А., Массино Ю.С., Павлова Е.В., Пыренкова И.Ю., Смирнова М.Б., Сегал О.Л., Тараканова Ю.Н., Уланова Т.И., Фартушная О.Н., Шарипова И.Н., Коляскина Г.И., Лавров В.Ф. Использование рН-чувствительных иммобилизованных моноклональных антител для оптимизации иммуноферментного сэндвич-метода определения HBsAg вируса гепатита В // Журнал микробиол. - 2010. - № 2. - C. 85-89.

12. Alpha technology brochure [Электронный ресурс] - US: PerkinElmer, Inc. 2013. - Режим доступа: https://www.perkinelmer.com/lab-solutions/resources/docs/BRO_AlphaTechnology.pdf .

13. Alves N.J., Kiziltepe T., Bilgicer B. Oriented surface immobilization of antibodies at the conserved nucleotide binding site for enhanced antigen detection // Langmuir. - 2012. - Vol. 28, N 25. - Р. 9640-9648.

14. Bantroch, S.; Buhler, T.; Lam, J.S. (1994) Appropriate coating methods and other conditions for enzyme-linked immunosorbent assay of smooth rough and neutral lypopolysaccharides of Pseudomonas aeruginosa // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 1994. - Vol.1, N 1. - Р. 55 - 62.

15. Berlina A.N., Taranova N.A., Zherdev A.V., Vengerov Yu.Yu., Dzantiev B.B. Quantum dot-based lateral flow immunoassay for detection of chloramphenicol in milk // Analytical and Bioanalytical Chemistry. - 2013. - Vol. 405, N 14. - P. 4997-5000.

16. Berson S.A., Yalow R.S. Assay of plasma insulin in human subjects by immunological methods // Nature. - 1959. - Vol. 184. Suppl. 21. - P. 1648-1649.

17. Berson S.A, Yalow R.S. General principles of radioimmunoassay // Clin Chim Acta. - 1968. - Vol. 22, N 1. - P. 51-69.

18. Berzofsky, J. A.; Berkower, I. J. Antigen-antibody interactions and monoclonal antibodies // In: Fundamental Immunology, 7th ed. Ed.: Paul W. E. - Philadelphia, PA: Wolters, Kluwer/Lippincott, Williams and Wilkins. 2013. - P. 183-189.

19. Bielefeld-Sevigny M. AlphaLISA Immunoassay Platform-The "No-Wash" High-Throughput Alternative to ELISA // Assay Drug Dev. Technol. - 2009. - Vol.7, N 1. - P. 90-92.

20. Bonwick G.A., Smith C.J. Immunoassays: their history, development and current place in food science and technology // Int J Food Sci Tech. - 2004. - Vol. 39, N 8. - P. 817-827.

21. J.E. Butler. The amplified ELISA. (a-ELISA): Immunochemistry and applications // In: ELISA and other solid phase immunoassays : theoretical and practical aspects. Editors: M Kemeny M. , Challacombe S.J. Chichester ; New York : Wiley, 1988. - 378.

22. Butler, J. E Enzyme-linked immunosorbent assays // In: Methods in Nonradioactive Detection, Section 9. Ed.: Howard G. C. - Norwalk, Connecticut: Appleton and Lange. 1993. - P. 90-109.

23. Butler J.E. Solid supports in enzyme-linked immunosorbent assay and other solid-phase immunoassays // In: Methods in molecular medicine, vol. 94: Molecular Diagnosis of Infectious Diseases. Eds.: Decker J., Reischl U. - Totowa, NJ: Humana Press Inc. 2004. - P. 333 - 372.

24. Butler J.E., Ni L., Brown W.R., Joshi K.S., Chang J., Rosenberg B., Voss E.W. Jr. The immunochemistry of sandwich ELISAs--VI. Greater than 90% of monoclonal and 75% of polyclonal anti-fluorescyl capture antibodies (CAbs) are denatured by passive adsorption // Mol Immunol. - 1993. - Vol. 30, N 13. - P. 1165-1175.

25. Butler J.E., Ni L., Nessler R., Joshi K.S., Suter M., Rosenberg B., Chang J., Brown W.R., Cantarero L A. The physical and functional behavior of capture antibodies adsorbed on polystyrene // J Immunol Methods. - 1992. - Vol. 150, N 1-2. - P. 77-90.

26. Cantarero L.A., Butler J.E., Osborne J.W. The adsorptive characteristics of proteins for polystyrene and their significance in solid-phase imunoassays // Anal Biochem. - 1980. - Vol. 105, N 2. - P. 375-382.

27. Chang L., Rissin D.M., Fournier D.R., Piech T., Patel P.P., Wilson D.H., Duffy D.C.. Single molecule enzyme-linked immunosorbent assays: theoretical considerations // J Immunol Methods. - 2012. - Vol. 378, N 1-2. - P. 102-115.

28. Chen J-Q., Wakefield L.M, Goldstein D.J. Capillary nano-immunoassays: advancing quantitative proteomics analysis, biomarker assessment, and molecular diagnostics [Электронный ресурс] // Journal of Translational Medicine. - 2015. - Vol. 13: 182. - Режим доступа: http://doi.org/10.1186/s12967-015-0537-6.

29. Chen L., Zhang Z., Zhang P., Zhang X., Fu A. An ultra-sensitive chemiluminescence immunosensor of carcinoembryonic antigen using HRP-functionalized mesoporous silica nanoparticles as labels // Sensors and Actuators B: Chemical. - 2011. - Vol. 155, N 2. - P. 557-561.

30. Cho I.H., Seo S.M., Jeon J.W., Paek S.H. Characterization for binding complex formation with site-directly immobilized antibodies enhancing detection capability of cardiac troponin I [Электронный ресурс] // J Biomed Biotechnol. - 2009. - Vol. 2009: 104094. - Режим доступа: http://dx.doi.org/10.1155/2009/104094.

31. Comley J. ELISA Assays: recent innovations take analyte detection to new levels. [Электронный ресурс]. - 2012. - Режим доступа: http://www.ddw-online.com/screening/p 191009-elisa-assays: -recent-innovations-take-analyte-detection-to-new-levels-fall-12.html.

32. Craig J.C., Parkinson D., Goatley L., Knowles N. Assay sensitivity and differentiation of monoclonal antibody in ELISA with different coating buffers // J. Biol. Stand. - 1989. - Vol. 17, N 3. - P. 281-289.

33. Cuvelier A., Bourguignon J., Muir J.F., Martin J.P, Sesboue R. Substitution of carbonate by acetate buffer for IgG coating in sandwich ELISA // J Immunoassay. -1996. - Vol. 17, N 4. - P. 371-382.

34. De Thier P., Bacharouche J., Duval J.F., Skali-Lami S., Francius G. Atomic force microscopy analysis of IgG films at hydrophobic surfaces: a promising method to

probe IgG orientations and optimize ELISA tests performance // Biochim Biophys Acta. - 2015. - Vol. 1854, N 2. - P. 138-145.

35. Dmitriev D.A., Massino Y.S., Segal O.L. Kinetic analysis of interactions between bispecific monoclonal antibodies and immobilized antigens using a resonant mirror biosensor // J Immunol Methods. - 2003. - Vol. 280, N 1-2. - P. 183-202.

36. Dmitriev D.A., Massino Y.S., Segal O.L., Smirnova M.B., Kolyaskina G.I., Pavlova E.V., Osipov A.P., Egorov A.M., Dmitriev A.D. The comparison of the ability of monoclonal antibodies directed to different proteins (human IgG, human myoglobin and HRP) and bispecific antibodies derived thereof to bind antigens immobilized on a surface of a solid phase // Clin Chim Acta. - 2001. - Vol. 309, N 1. - P. 57-71.

37. Dmitriev A.D., Tarakanova J.N., Yakovleva D.A., Dmitriev D.A., Phartooshnaya O.V., Kolyaskina G.I., Massino Y.S., Borisova O.V., Segal O.L., Smirnova M.B., Ulanova T.I., Lavrov V.F. Monoclonal antibodies requiring coating buffer with low pH for efficient antigen capture in sandwich ELISA: the rarities or practically important phenomena? // J Immunoassay Immunochem. - 2013. - Vol.34, N 4. - P. 414-37.

38. Ehrlich P.H., Moyle W.R. Cooperative immunoassays: ultrasensitive assays with mixed monoclonal antibodies // Science. - 1983. - Vol. 221, N 4607. - P. 279-81.

39. Ehrlich P.H, Moyle W.R. Specificity considerations in cooperative immunoassays // Clin Chem. - 1984. - Vol. 30, N 9. - P. 1523-1532.

40. Ekins R. and Edwards P. On the Meaning of "Sensitivity" // Clin Chem. -1997. - Vol. 43, N 10. - P. 1824-1831.

41. ELISA Assay Trends 2012. - Cambridge, UK: HTS tec Ltd. 2012. - 56 p.

42. Engvall E. The ELISA, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay // Clinical Chemistry. - 2010. - Vol. 56, N 2. - P. 319-320.

43. Esser P. Principles in adsorption to polystyrene // Thermo Scientific Nunc Bulletin. 1988. - N 6. - P. 1-5.

44. Esser P. The surface-volume ratio in solid phase assays // Thermo Scientific Nunc Bulletin. - 1992. - N 10. - P. 3-6.

45. Fasman, G. D. Sect. A: Proteins // In: Handbook of Biochemistry and Molecular Biology (3rd Ed). Ed.: Fasman G. Cleveland, OH: CRC Press, 1976. - Vol. 2. - P. 383 - 392.

46. Feng B., Wang C., Xie X., Feng X., Li Y., Cao Z. A new method for multilayered, site-directed immobilization of antibody on polystyrene surface // Biochem. Biophys. Res Commun. - 2014. - Vol. 450, N 1. - P. 429-432.

47. Geerligs, H.J.; Weijer, W.J.; Bloemhoff, W.; Welling, G.W.; Welling-Wester S. The influence of pH and ionic strength on the coating of peptides of herpex simplex virus type 1 and enzyme-linked immunosorbent assay // J. Immunol. Methods. - 1988. -Vol. 106, N 2. - P. 239 - 44.

48. Gosling J.P. A decade of development in immunoassay methodology // Clin Chem. - 1990. - Vol. 36, N 8 (pt 1). - P. 1408-1427.

49. Grange R.D., Thompson J.P., Lambert D.G. Radioimmunoassay, enzyme and non-enzyme-based immunoassays // Br J Anaesth. - 2014. - Vol. 112, N 2. - P. 213216.

50. Greenwood F.G., Hunter W.M., Glover J.S. The preparation of 131I-labelled human growth hormone of high specific radioactivity // Biochem. J. - 1963. - Vol. 89, N 1. - P. 114-123.

51. Hlady V., Buijs J., Jennissen H.P. Methods for studying protein adsorption // Methods Enzymol. - 1999. - Vol. 309. - P. 402-429.

52. Immunoassay. Resource Guide. [Электронный ресурс ]. - San Diego, US: Ebioscience. Affimetrix company. 2016. - Режим доступа: http://media.affymetrix.com/support/ebioscience/brochures/Immunoassay_ResourceGui de.pdf.

53. Immunochemistry of Solid-Phase Immunoassay (first edition). Ed.: Butler J.E. - Boca Raton, Fl.: CRC Press. 1991. - 311 p.

54. Ishikawa E., Imagawa M., Hashida S., Yoshitake S., Hamagushi Y., Ueno T. Enzyme-labeling of antibodies and their fragments foe enzyme immunoassay and immunohistochemical staining // J. Immunoassay. - 1983. - Vol. 4, N 3. - P. 209 - 327.

55. Jackson A.P., Siddle K., Thompson R.J. A monoclonal antibody to human brain-type creatine kinase. Increased avidity with mercaptans // Biochem J. - 1983. -Vol. 215, N 3. - P. 505-12.

56. Johnson J.C., Nettikadan S.R., Srikanth G., Vengasandra S.G.,

Henderson E. Analysis of solid-phase immobilized antibodies by atomic force microscopy // J. Biochem. Biophys. Methods. - 2004. - Vol. 59, N 2. - P. 167- 180.

57. Jordan W. Part 155. Antigen Measurement Using ELISA // In: The Protein Protocols Handbook (Second edition). Ed.: Walker J.M. - Totowa, NJ Humana Press Inc. 2002. - P. 1083 - 1087.

58. Kaufman E.N., Jain R.K. Effect of bivalent interaction upon apparent antibody affinity: experimental confirmation of theory using fluorescence photobleaching and implications for antibody binding assays // Cancer Res. - 1992. - Vol. 52, N 15. - P. 4157-4167.

59. Ke R., Yang W., Xia X., Xu Y., Li Q. Tandem conjugation of enzyme and antibody on silica nanoparticle for enzyme immunoassay // Anal Biochem. - 2010. -Vol. 406, N 1. - P. 8-13.

60. Khan M.N., Dass P.D., John H. Leete J.H., Schuman R.F., Gunsior M., and Sadhu C. Chapter 3. Development of Ligand-Binding Assays for Drug Development Support // In: Ligand-Binding Assays: Development, Validation, and Implementation in the Drug Development Arena. Editors: Khan M.N and Findlay J.W.A. - Hoboken, NJ, US: John Wiley and Sons. 2010. - P. 39 - 79.

61. Kivi G., Teesalu K., Parik J., Kontkar E., Ustav M.J., Noodla L., Ustav M., Mannik A. HybriFree: a robust and rapid method for the development of monoclonal antibodies from different host species [Электронный ресурс] // BMC Biotechnol. -2016. - Vol. 16:2. - Режим доступа: http://doi.org/10.1186/s12896-016-0232-6.

62. Klonisch T., Panayotou G., Edwards P., Jackson A.M., Berger P., Delves P.J., Lund T., Roitt I.M. Enhancement in antigen binding by a combination of synergy and antibody capture // Immunology. - 1996. - Vol. 89, N 2. - P. 165-171.

63. Koedrith P., Thasiphu T., Weon J., Boonprasert R., Tuitemwong K., Tuitemwong P. Recent trends in rapid environmental monitoring of pathogens and

toxicants: potential of nanoparticle-based biosensor and applications [Электронный ресурс] // Scientific World Journal. - 2015. - Vol. 2015: 510982. - Режим доступа: http://doi.org/10.1155/2015/510982.

64. Kohler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefine specificity // Nature. - 1975 - Vol. 256. - P. 495-497.

65. Kong, D., Liu, L., Song, S., Kuang, H. and Xu, C. Development of Sensitive, Rapid, and Effective Immunoassays for the Detection of Vitamin B12 in Fortified Food and Nutritional Supplements // Food Analytical Methods. - 2017 - Vol. 10, N 1. - P. 10-18.

66. Kong, D., Xie, Z., Liu, L., Song, S., Kuang, H., Cui, G. and Xu, C. Development of indirect competitive ELISA and lateral-flow immunochromatographic assay strip for the detection of sterigmatocystin in cereal products // Food and Agricultural Immunology. - 2017. - Vol. 28, N 2. - P. 260 - 273.

67. Kumada Y., Hamasaki K., Shiritani Y., Ohse T., Kishimoto M. Efficient immobilization of a ligand antibody with high antigen-binding activity by use of a polystyrene-binding peptide and an intelligent microtiter plate // J Biotechnol. - 2009. -Vol. 142, N 2. - P. 135-141.

68. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage // Nature. - 1970. - Vol. 227. - P. 680 - 685.

69. Lequin R.M. Enzyme immunoassay (EIA)/enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) // Clin Chem. - 2005. - Vol. 51, N 12. - P. 2415-2418.

70. Littlefield W. Selection of hybrids from matings of fibroblasts in vitro and their presumed recombinations // Science. - 1964. - Vol. 145, N 3633. - P. 709-710.

71. Liu F., Dubey M., Takahashi H., Castner D.G., Grainder D.W. Immobilized Antibody Orientation Analysis using Secondary Ion Mass Spectrometry and Fluorescence Imaging of Affinity-generated Patterns // Analyt. Chem. - 2010. - Vol. 82, N 7. - P. 2047-2058.

72 McDermed J.E., Sanders R., Fait S., Klem R.E., Sarno M.J., Adams T.H., Diamandis E.P. Nucleic acid detection immunoassay for prostate-specific antigen based on immuno-PCR methodology // Clin Chem. - 2012. - Vol. 58, N 4. - P. 732-740.

73. Mujumdar R. B., Ernst L. A., Mujumdar S. R., Lewis C. J., Waggoner A. S. Cyanine dye labeling reagents: Sulfoindocyanine succinimidyl esters // Bioconjug Chem. - 1993. - Vol. 4, N 2. - P. 105-111.

74. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugation // J. Histochem. Cytochem. - 1974. - Vol. 22, N 12. - P. 1084-10 91.

75. Nice E.C., McInerney T.L., Jackson D.C. Analysis of the interaction between a synthetic peptide of influenza virus hemagglutinin and monoclonal antibodies using an optical biosensor // Mol Immunol. - 1996. - Vol. 33, N 7-8. - P. 659-670.

76. Nikulina V.A., Kizim E.A., Massino Y.S., Segal O.L., Smirnova M.B., Avilov V.V., Saprigin D.B., Smotrov S.P., Tichtchenko V.A., Kolyaskina G.I., Dmitriev A.D. Synergistic effects in antigen capture ELISA using three monoclonal antibodies directed at different epitopes of the same antigen // Clin Chim Acta. - 2000. - Vol. 299, N 1-2. -P. 25-44.

77. Pagaduan J.V., Ramsden M., O'Neill K. and Woolley A.T. Microchip immunoaffinity electrophoresis of antibody-thymidine kinase 1 complex // Electrophoresis. - 2015. - Vol. 36, N 5. - P. 813-817.

78. Pardue H. L. Counterpoint The inseparable triad: analytical sensitivity, measurement uncertainty, and quantitative resolution // Clinical Chemistry. -

1997. - Vol. 43, N. 10. - P. 1831-1837.

79. Pei X., Zhang B., Tang J., Liu B., Lai W., Tang D. Sandwich-type immunosensors and immunoassays exploiting nanostructure labels: A review // Anal Chim Acta. - 2013. - Vol. 758, N 3. - P. 1-18.

80. Peluso P., Wilson D.S., Do D., Tran H., Venkatasubbaiah M., Quincy D., Heidecker B., Poindexter K., Tolani N., Phelan M., Witte K., Jung L.S., Wagner P., Nock S. Optimizing antibody immobilization strategies for the construction of protein microarrays // Anal Biochem. - 2003. - Vol. 312, N 2. - P. 113-124.

81. Peterman J.H. Immunochemical considerations in the analysis of data from non-competitive solid-phase immunoassays // In: Immunochemistry of Solid-Phase Immunoassay (first edition). Ed.: Butler J.E. - Boca Raton, Fl.: CRC Press, 1991. - P. 47 - 65.

82. Plant A.L., Locascio-Brown L., Haller W., Durst R.A. Immobilization of binding proteins on nonporous supports. Comparison of protein loading, activity, and stability // Appl Biochem Biotechnol. - 1991. - Vol. 30, N 1. - P. 83-98.

83. Porstmann T., Kiessig S.T. Enzyme immunoassay techniques. An overview // J Immunol Methods. - 1992. - Vol. 150, N 1-2. - P. 5-21.

84. Qian W., Yao D., Yu F., Xu B., Zhou R., Bao X., Lu Z. Immobilization of antibodies on ultraflat polystyrene surfaces // Clin Chem. - 2000. - Vol. 46, N 9. - P. 1456-63.

85. Rissin D.M., Fournier D.R., Piech T., Kan C.W., Campbell T.G., Song L., Chang L., Rivnak A.J., Patel P.P., Provuncher G.K., Ferrell E.P., Howes S.C., Pink B.A., Minnehan K.A., Wilson D.H., Duffy D.C. Simultaneous detection of single molecules and singulated ensembles of molecules enables immunoassays with broad dynamic range // Anal Chem. - 2011. - Vol. 83, N 6. - P. 2279-2285.

86. Shmanai V.V., Nikolayeva T.A., Vinokurova L.G., Litoshka A.A. Oriented antibody immobilization to polystyrene macrocarriers for immunoassay modified with hydrazide derivatives of poly(meth)acrylic acid [Электронный ресурс] // BMC Biotechnol. - 2001. - V. 1:4 - Режим доступа: http://bmcbiotechnol.biomedcentral.com/articles/10.1186/1472-6750-1-4.

87. Shrivastav T.G. History and development of analytical chemistry in life sciences with reference to immunoassay in medicine // Health and Population-Perspectives and Issues. - 2002. - Vol. 25, N 3. - P. 140-147.

88. Sponholtz D.K. Immunoassays in microplate wells: optimization of binding by passive adsorption // Technical Bulletin, IVD Technology. - 1995. - P. 12 - 15.

89. Stevens P.W., Kelso D.M. Estimation of the protein-binding capacity of microplate wells using sequential ELISAs // J Immunol Methods. - 1995. - Vol. 178, N 1. - P. 59-70.

90. Suter M., Butler J.E.. The immunochemistry of sandwich ELISAs. II. A novel system prevents the denaturation of capture antibodies // Immunol Lett. - 1986. - Vol. 3, N 6. - P. 313-316.

91. Suter M., Butler J.E., Peterman J.H. The immunochemistry of sandwich ELISAs--III. The stoichiometry and efficacy of the protein-avidin-biotin capture (PABC) system // Mol Immunol. - 1989. - Vol. 26, N 3. - P. 221-230.

92. Tighe P.J., Ryder R.R., Todd I., Fairclough L.C. ELISA in the multiplex era: potentials and pitfalls // Proteomics Clin Appl. - 2015. - Vol. 9, N 3-4. - P. 406-22.

93. Valimaa L., Laurikainen K. Comparison study of streptavidin-coated microtitration plates // J Immunol Methods. - 2006. - Vol. 308, N 1-2. - P. 203-215.

94. Vermeer A.W.P. and Norde W. The Thermal Stability of Immunoglobulin: Unfolding and Aggregation of a Multi-Domain Protein // Biophysical Journal. - 2000. -Vol. 78, N 1. - P. 394-404.

95. Wang X., McKay P., Yee L.T., Dutina G., Hass P.E., Nijem I., Allison D., Cowan, KJ., Lin K., Quarmby V., Yang J. Impact of SPR biosensor assay configuration on antibody: Neonatal Fc receptor binding data // MAbs. - 2017. - Vol. 9, N 2. - P. 319-332

96. Weemen B.K. Van, Schuurs AHWM. Immunoassay using antibody-enzyme conjugates // FEBS Lett. - 1974. - Vol. 43, N 2. - P. 215-218.

97. Welch, N.G., Easton, C.D., Scoble, J.A., Williams, C.C., Pigram, P.J. and Muir, B.W. A chemiluminescent sandwich ELISA enhancement method using a chromium (III) coordination complex // Journal of Immunological Methods. - 2016 -Vol. 438. - P. 59-66.

98. Wu A.H. A selected history and future of immunoassay development and applications in clinical chemistry // Clin Chim Acta. - 2006. - Vol. 369, N 2. - P. 119124.

99. Yu Z.T. Guan H., Cheung M.K., McHugh W.M., Cornell T.T., Shanley T.P., Kurabayashi K., Fu J. Rapid, automated, parallel quantitative immunoassays using highly integrated microfluidics and AlphaLISA [Электронный ресурс] // Sci Rep. -2015. - V. 5:11339. - Режим доступа: http://doi.org/10.1038/srep11339.

100. Zaitsev B.N., Yudina I.V., Cherepanova N.S., Bakirov T.S., Rukavishnikov M. Yu., Kanev A.N.. An atomic force microscopy study in the detection of hepatitis B

surface antigen by enzyme-linked immunosorbent assay // Journal of Immunoassay and Immunochemistry. - 2011. - Vol. 32, N 3. - P. 191-206.

101. Zapp E., da Silva P.S., Westphal E., Gallardo H., Spinelli A. and Vieira I.C. Troponin T immunosensor based on liquid crystal and silsesquioxane-supported gold nanoparticles // Bioconjugate chemistry. - 2014. - Vol. 25, N 9. - P. 1638-1643.

102. Zha Z., Wu B., Zhao X., Zhang M., Qu F., Chen X., Wu X., Guo H., Liu W., Tang B., Cao L. Preparation and indentification of a monoclonal antibody against cystatin C // Monoclonal Antibodies in Immunodiagnosis and Immunotherapy. - 2015. - Vol. 34, N 5. - P. 334-340.

103. Zhang S., Garcia-D'Angeli A., Brennan J.P., Huo Q. Predicting detection limits of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and bioanalytical techniques in general // The Analyst. - 2013. - Vol. 139, N 2. - P. 439-445.

104. Zhao H., Gorshkova I. I., Fu G. L., Schuck P. A comparison of binding surfaces for SPR biosensing using an antibody-antigen system and affinity distribution analysis // Methods (San Diego, Calif.). - 2013. - Vol. 59, N 3. - Режим доступа: http://doi.org/10.1016/j.ymeth.2012.12.007

105. Zhao X., Pan F., Garcia-Gancedo L., Flewitt A. J., Ashley G. M., Luo J., Lu J. R. (2012). Interfacial recognition of human prostate-specific antigen by immobilized monoclonal antibody: effects of solution conditions and surface chemistry // Journal of the Royal Society Interface. - 2012. - Vol. 9, N 75. - P. 2457-2467.

106. Zhao Y-Y, Wang N, Liu W-H, Tao W-J, Liu L-L, Shen Z-D (2016) Charge variants of an Avastin biosimilar isolation, vharacterization, in vitro properties and pharmacokinetics in rat // PLoS ONE. - 2016. - Vol.11, N 3. - Режим доступа: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0151874.

107. Yang D., Giragossian C., Castellano S., Lasaro M., Xiao H., Saraf H., Singh S. Maximizing in vivo target clearance by design of pH-dependent target binding antibodies with altered affinity to FcRn // MAbs. - 2017. - Vol. 9, N 7. - P. 1105-1117.