Влияние разных изоформ ламинина на адгезию и миграцию нормальных и трансформированных кератиноцитов человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Калмыкова, Наталья Владимировна

• Калмыкова, Наталья Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Калмыкова, Наталья Владимировна

Введение

Цели и задачи исследования

Положения, выносимые на защиту

Обзор литературы

I Кожа

1. Гистологическое строение кожи

2. Диференцировка кератиноцитов

3. Базальная мембрана кожи человека И

4. Рецепторы кератиноцитов к элементам БМ кожи

5. Ламинин

5.1. Строение и изоформы ламинина

5.2. Организация ламининов в БМ кожи человека

5.3. Появление ламинина в эмбриогенезе

5.4. Ламинин-2/

5.5. Рецепторы ламинина

6. Раневое заживление кожи

II Миграция клеток

1. Молекулярные механизмы миграции

2. Факторы, влияющие на миграцию кератиноцитов

2.1. Внеклеточный матрикс

2.2. Матриксные металлопротеиназы

2.3. Ростовые факторы 42 Материалы и методы 47 Результаты

1. Изучение адгезии нормальных и трансформированных кератиноцитов к иммобилизованным на субстрате ламинину-1и ламинину-2/

2. Адгезия с предварительной обработкой клеток ламининами

3. Определение миграционной активности клеток, связанных друг с другом межклеточными контактами

4. Определение миграционной активности одиночных клеток на различных субстратах

5. Изучение вклада интегринов, содержащих 04- и pi - субъединицы, и неинтегринового рецептора 67кДа во взаимодействие клеток с ламинином-2/4 в процессе адгезии

6. Изучение вклада интегриновых рецепторов, содержащих р4 и pi-субъединицы во взаимодействие клеток с ламинином-2/4 79 7.0пределение участия ММП в процессе миграции клеток линии А431 на ламинине-2/4 под действием ЭФР

Обсуждение

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние разных изоформ ламинина на адгезию и миграцию нормальных и трансформированных кератиноцитов человека»

Формирование тканей и органов в процессе эмбриогенеза и регенерации происходит в результате пролиферации, дифференцировки и миграции клеток.

В эмбриогенезе взаимодействие клеток с элементами внеклеточного матрикса (ВКМ) является критическим фактором. ВКМ появляется в эмбриогенезе очень рано, уже на стадии двухклеточного зародыша появляются первые молекулы ВКМ, представленные al цепью ламинина, что служит свидетельством важности компонентов ВКМ в процессе развития. По мере развития организма состав матрикса меняется в зависимости, как от стадий развития, так и от мест локализации в зародыше. Эти изменения являются результатом деятельности эмбриональных клеток. В свою очередь, определенный набор компонентов ВКМ стимулирует миграцию клеток в эту область и влияет на формирование и характер организации специализированных структур тканей.

Регенерация утраченных или поврежденных органов и тканей также идет с участием ВКМ. Процесс заживления кожных ран неразрывно связан с миграцией в поврежденный участок клеток кожи (фибробластов и кератиноцитов), образованием базальной мембраны (БМ) и последующим восстановлением нормальной структуры ткани. Миграция клеток определяется субстратом и сигнальными молекулами. Сигнальные молекулы приводят клетки в состояние готовности к передвижению, а субстрат позволяет осуществить сложный двигательный процесс.

Процесс взаимодействия клетки с субстратом является определяющим фактором также при культивировании клеток. Для успешного размножения клетки должны сначала прикрепиться и распластаться на подложке. Поэтому для нормального роста и дифференцировки большинства первичных культур клеток необходим определенный субстрат, который складывается из элементов, предварительно нанесенных на подложку, элементов, адсорбируемых из культуральной среды и тех, которые секретируются самими клетками. Подбирая состав культуральной среды и элементов подложки, можно воссоздавать микроокружение клеток и моделировать некоторые аспекты поведения клеток in vivo. Применение подобных подходов дало толчок развитию клеточной заместительной терапии.

Клеточная заместительная терапия - это одно из направлений современной медицины, цель которой состоит в восстановлении структуры и функций поврежденной ткани путем трансплантации клеток, выращенных in vitro. Наибольшее развитие это направление получило в терапии кожных повреждений. В качестве кожных заместителей используют как сами клетки кожи (кератиноциты и фибробласты), так и комплексы клеток с элементами ВКМ. Использование белков ВКМ важно с двух точек зрения, во-первых, это позволяет создать при культивировании клеток микроокружение, характерное для определенного типа клеток, во-вторых, при трансплантации на рану элементы ВКМ могут стимулировать миграцию и пролиферацию собственных клеток пациента и, тем самым, способствовать быстрейшему закрытию раны. В этой связи изучение взаимодействий клеток кожи с элементами ВКМ является одним из важных вопросов регенеративной медицины.

В настоящее время в литературе имеется много данных о взаимодействии кератиноцитов с белками ВКМ. Тем не менее, практически полностью отсутствуют данные о влиянии на процессы адгезии и миграции ламинина-2/4, входящего в состав ВКМ кожи. Поэтому целью данной работы было выяснить, как влияет ламинин-2/4 на процессы адгезии и миграции нормальных и трансформированных кератиноцитов. А также установить, какие рецепторы принимают участие в осуществлении этих процессов.

Цели и задачи исследования.

Целью данной работы являлось:

1. Исследование влияния ламинина-2\4 на процессы адгезии и миграции нормальных кератиноцитов человека и клеток эпидермоидной карциномы человека линии А431.

2. Определение рецепторов, которые принимают участие в этих взаимодействиях.

Для этого необходимо было решить следующие задачи:

1. Сравнить эффективность прикрепления нормальных и трансформированных кератиноцитов человека к ламинину-1 и ламинину-2/4 .

2. Исследовать влияние ламинина-2/4 на процесс миграции клеток.

3. Оценить вклад различных рецепторов в процессы адгезии и миграции клеток на ламинине-2/4.

4. Определить участие матриксных металлопротеиназ в процессе миграции клеток на ламинине-2/4.

Положения, выносимые на защиту

1. Различия в адгезии к ламинину-1 и ламинину-2/4 не зависят от типа клеток: как нормальные, так и трансформированные кератиноциты человека быстрее и эффективнее прикрепляются к ламинину-2/4, чем к ламинину-1.

2. Ламинин-2/4 , в отличие от ламинина-1, поддерживает миграцию клеток, вызванную действием эпидермального фактора роста.

3. Степень участия определенных рецепторов в процессах адгезии и миграции клеток на ламинине-2/4 может быть различной и зависит от типа клеток.

Обзор литературы

I Кожа

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Калмыкова, Наталья Владимировна

Выводы:

1 В результате сравнительного анализа процессов адгезии и миграции кератиноцитов на иммобилизованных на субстрате изоформах ламинина установлено, что нормальные и трансформированные клетки значительно быстрее и эффективнее взаимодействуют с ламинином-2/4 , чем с ламинином-1. Выявленные различия в адгезии у исследованных клеток не связаны с синтезом дополнительных адгезивных белков.

2. В отличие от ламинина-1, ламинин-2/4 поддерживает миграцию нормальных . и трансформированных кератиноцитов линии А431, вызванную действием эпидермального фактора роста.

3. Последовательное исключение определенных рецепторов клеток из взаимодействия с ламинином-2/4 позволило установить, что адгезия нормальных кератиноцитов осуществляется при участии интегринов a2pl и а301, в то время как клетки линии А431 используют, помимо указанных рецепторов, еще неинтегриновый рецептор 67 кДА.

4. Установлено, что миграция нормальных кератиноцитов осуществляется при участии трех интегринов a3pi, а2р1и абр4. При этом интегрины аЗр1 и абр4 принимают участие в образовании стабильных контактов с подложкой, а интегрин a2pi принимает участие в миграции, вызванной действием ЭФР. В отличие от нормальных кератиноцитов, у клеток линии А431 в миграции принимают участие только два интегрина a2pl и а6р4, при этом функции интегрина абр4 - антимиграционные, а процесс клеточной миграции осуществляется также при участии интегрина a2pi.

5. Совокупность полученных данных свидетельствует о том, что способность к адгезии и миграции у нормальных и трансформированных кератиноцитов линии А431 зависит от состава поверхностных рецепторов, причем вклад одних и тех же рецепторов в осуществлении этих процессов у разных клеток может быть различным. Показано, что способность к миграция клеток линии А431 зависит от модуляции ламинина матриксными металлопротеиназами.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Калмыкова, Наталья Владимировна, 2004 год

1. Васильев А.В., Волошин А.В., Терских В.В.1991. Роль фидерных клеток в прикреплении и росте кератиноцитов человека и крысы. Цитология. 33 (12): 84-89.

2. Васильев А.В., Волошин А.В., Воротеляк Е.А., Терских В.В. 1993. Миграция колоний эпидермальных кератиноцитов человека в культуре. Докл. РАН. 329 2): 232-235.

3. Воротеляк Е.А., Самарова А.В., Васильев А.В., Терских В.В. 1997. Действие эпидермального фактора на миграцию клеток А431. Известия РАН. 6: 734-740.

4. Горелик Ю.В., Дьяконов И.А., Кухарева JI.B., Блинова М.И., Пинаев Г.П. 1998. Влияние элементов внеклеточного матрикса на псевдоподиальную активность кератиноцитов крыс. Цитология. 40(12): 1037-1044.

5. Adams J.C., Watt F.M. 1989. Fibronectin inhibits the terminal differentiation of human keratinocytes. Nature. 340:307-309.

6. Adams J.C., Watt F.M. 1991. Expression of pi, рЗ, p4 and p5 integrins by human epidermal keratinocytes and non-differentiating keratinocytes. J Cell Biol. 115:829-841.

7. Adams J.C., Watt F.M. 1993. Regulation of development and differentiation by the extracellular matrix. Development 117: 1183-1198.

8. Albrecht-Buehler G. 1977. The phagokinettiks tracks of 3T3 cells. Cell. 11: 395-404.

9. Alitalo K., Kuismanen E., Myllyla RA982. Extracellular matrix proteins of human epidermal keratinocytes and feeder 3T3 cells. J.Cell Biol. 94:497-505.

10. Anton E.S., Sandrock A.W., Matthew WD. 1994. Merosin promotes neurite growth and Schwann cell migration in vitro and nerve regeneration in vivo: evidence using an antibody to merosin, ARM-1. Dev. Boil. 164 (1), 133-146.

11. Aplin A.E., Howe A., Alahari S.K. and Juliano R.L. 1998. Signal transduction and signal modulation by cell adhesion receptors : the role of integrins, cadherins, immunoglobulin-cell adhesion molecules and selectins.

12. Amer.Soc.Pharm.Exp.Ther.50:197-205.

13. Are A., Pinaev., Burova E., Lindberg U. 2001. Attachment of A-431 cells on immobilized antibodies to the EGF receptor promotes cell spreading and reorganization of the microfilament system. Cell Motility and Cytoskeleton 48 (1): 24-36.

14. Ardini E., Tagliabue E., Magnifico A., Buto S., Castronovo V., Colnaghi M.I., Menard S. 1997. Co-regulation and physical association of the 67-kDa monomeric laminin receptor and the a6p4 integrin. J. Biol. Chem. 272 (4): 2342-2345.

15. Aumailley M., Nurcombe V., Edgar D., Paulsson M., Timpl.R. 1987. The cellular interaction of laminin fragments. Cell adhesion correlates with two fragment-specific high affinity binding sites. J. Biol. Chem. 262:11532-11538.

16. Aumailley M., Gimond C. and Rousselle P. 1996. Integrin-mediated cellular interactions with laminins. In The Laminins, P. Ekblom and R. Timpl, Eds.: 127158. Harwood Academic Press. Amsterdam.

17. Aumailley M. and Rousselle P. 1999. Laminins of the dermo-epidermal junction. Matrix Biology. 18: 19-28.

18. Barrandon Y and Green H. 1987. Cell migration is essential for sustained growth of keratinocytes colonies: the role of transforming growth factors-a and epidermal growth factor. Cell. 50:1131-1137

19. Barnes D.W. 1982. Epidermal growth factor inhibits growth of A431 human epidermoid carcinoma in serum free cell culture. J. Cell Biol. 93: 1-4.

20. Beck K., Hunter I., En gel J. 1990. Structure and function of laminin: anatomy of multidomain glycoprotein. FASEB J. 4: 148-160.

21. Blanton R.A., Kupper T.S., McDougall J.K., Dower S. 1989. Regulation of interleukin 1 and its receptor in human keratinocytes. Proc.Nat. Acad. Sci. USA. 86: 1273-77.

22. Boonstra J., Rijken P., Humbel В., Cremers F., Verkleij A. and van Bergen en Henegouwen. 1995. The epidermal growth factor. Cell Biol. Inter. 19: 413-430.

23. Borradori L., and Sonnenberg A. 1999. Structure and function of hemidesmosomes: more than simple adhesion complexes. J. Invest. Dermatol. 112:411-418.

24. Breuss J.M. 1995 . Expression of the integrin in development, neoplasia and tissue repair suggests a role in epithelial remodeling. J.Cell Sci. 108:2241-2251.

25. Brown G.L., Naney L.B., Griffin J., Cramer A.B., Yancey J.M., et al., 1989. Enhancement of wound healing by topical treatment with epidermal growth factors. N.Engl.J.Med. 321: 76-79.

26. Brown G., Stenn K,S., Falk R.J., Woodley D.T., O'Keefe E.J. 1991. Vitronectin : effects on keratinocyte motility and inhibition of collagen-indused motility. J. Invest. Dermat. 96: 724-728.

27. Burgeson R.E., Chiquet M., Deutzmann R., Ekblom P., Engel J., Kleinmcm #., Martin G.R., Meneguzzsi G., Paulsson M., Sanes J., Timpl R., Tryggvason K., Yamada Y., Yurchenco P.D. 1994. A new nomenclature for laminins. Matrix Biol. 14:209-211

28. Burgeson R.E.and Christiano A.M. 1994. The dermal-epidermal junction. Curr. Opin. Cell Biol. 9: 651-658.

29. Burridge K, Fath K, Kelly Т., Nuckols G., Turner C. 1988. Focal adhesion: transmembrane junctions between the extracellular matrix and cytoskeleton. Annu. Rev. Cell Biol. 4: 487-525

30. Buss J.E., Kudlow J.E., Lazar C.S., Gill G.N. 1982. Altered epidermal growth factor (EGF) stimulated protein kinase activity in variant A431 cells with altered growth responses to EGF. Proc Natl Sci USA 79: 2574-2578.

31. Campbell K. 1995. Three muscular dystrophies: loss of cytoskeleton-extracellular matrix linkage. Cell 80: 675-679.

32. Carter W.R. Ryan M.C., Gahr P.J. 1991. Epilligrin, a new cell adhesion ligand for integrin a3pi in epithelial basement membranes. Cell. 65:599-610.

33. Chan A.Y., RalfS., Bailly M., Wyckoff J.В., Segall J.E. and Condeelis J.S. 1998. EGF stimulates an increase in actin nucleation and and filament number at the leading of the lamellipod in mammary adenocarcinoma cells. J Cell Sci., Ill: 199-211

34. Chen J.D., Helmod M., Kim J.P. 1994a. Human keratinocytes make uniquely liner phagokinetic tracks. Dermatology. 188:6-12.

35. Chen P., Gupla K. and Wells A. 1994b. Cell movement elicited by epidermal growth factor receptor requires kinase and autophosphorylation but is separable from mitogenesis. J.Cell Biol. 124:547-555.

36. Chen P., Murphy-Ullrich J. and Wells A. 1996. A role for gelsolin in actuating EGF receptor-mediated cell motility. J. Cell Biol. 134:689-698.

37. Chen M., О'Toole E.A., Muellnhojf M. 2000. Development and characterization of a recombinant truncated type VII collagen "minigen". Implication for gene therapy of dystrophic epidermolysis bullosa. J. Biol. Chem. 275:24429-53.

38. Cheng V.S., Champliaud M.E., Burgeson R.E., Marinkovich M.R. Yurchenco P.D. 1997. Self-assembly of laminin isoforms J.Biol.Chem. 272:21525-21532.

39. Church H.J. and Aplin J.D. 1998. Be Wo choriocarcinoma cells produce laminin 10. J. Biochem.332; 491-498.

40. Clark R.A.F., Lanigan J.M., Delia Pelle P., Manseau е., Dvorak h.F., Colvin R.B. 1982. Fibronectin and fibrin provide a provisional matrix for epidermal cell migration during wound reepithelialization. J. Derm. Dermat. 79:264-9.

41. Clark R.A.F. 1990. Fibronectin matrix deposition and fibronectin receptor expression in healing and normal skin. J.I nvest. Derm. 94:128-134.

42. Clark R.A.F., ed., The Molecular and Cellular Biology of Wound Repair .Plenum, New York. 1996.p. 95-141.

43. Colognato H., MacCarrick M., O'Rear J.J., Yurchenco P.D. 1997. The laminin a2-chain short arm mediates cell adhesion through both the aipi and a2pl integrins. J.Biol.Chem. 272 (46): 29330-29336.

44. Colucci C., Gianelli G., Grano M., Faccio R., Quaranta V., Zalone A.Z. 1996. Human osteoclast- like cells selectively recognize laminin isoforms, an event that induces migration and activates Ca mediated signals. J. Cell Sci. 109: 1527-1535.

45. Decline F. and Rousselle P. 2000. Keratinocyte migration requires a2pi integrin-mediated interaction with laminin 5 y2 chain. J. Cell Sci. 114: 811-823.

46. Diaz-Gonzalez F„ Forsyth J., Steiner B. and Ginsberg M.H. 1996. Trans-dominant inhibition of integrin function. Mol.Biol.Cell. &:1939-1951.

47. Dowling J., Yu Q.C., Fichs E. 1996. Beta-4 integrin is required for hemidesmosome formation, cell adhesion and cell survival. J.Cell Biol. 134: 559572.

48. Durbeej M., Larsson E., Ibraghimov-Beskrovnaya O., Roberds S.L., Cambell K.P. and Ekblom P. 1995. Non-muscle a-dystroglycan is involved in epithelial development. J.Cell Biol. 130: 79-91.

49. Durbeej M., Henry M., Ferletta M., Cambell K.P. and Ekblom P. 1998, Distribution of dystroglycan in normal adult mouse tissues. J. Histochem. Cytochem. 46:449-457.

50. Durkin M.E., Nielsen F.C., Loechel F., Albrechtsen R., Wewer U. 2001. Regulation of laminin al chain gene expression in human cancer cell lines. Eur.J.Biochem. 268: 3797-3806.

51. Dziadek M., Timpl R. 1985. Ezpression of nidogen and laminin in basement membranes during mouse embryogenesis and in teratocarcinoma cells. Dev.Biol. 11:372-382.

52. Edwards D.R., Murfhy G., Reynolds J.J., Whitham S.E., Docherty A.J.P., and Heath J.K. 1987. Transforming growth factor beta modulates the expression of collagenase and metalloproteinase inhibitor. EMBO. 6: 1899-1904.

53. Ekblom P. 1996. Receptors for laminins during epithelial morphogenesis. Cur.Opin.Cell Biol. 8: 700-706.

54. Ekblom M., Falk M., Salmivirta K., Durbeej M. and Ekblom P. 1998. Laminin isoform and epithelial development. Ann. NY. Acad.Sci. 857: 194-211.

55. Eichner R., T.T. Sun .and U. Aebi. 1986. The role of keratin subfamilies and keratin pairs in the formation of human epidermal intermediate filaments. J. Cell Biol. 102: 1767-1777.

56. Ehrig K„ Leivo I., Argraves W.S., Ruoslanti E., and Engvall E. 1990. Merosin, a tissue- specific basement membrane protein, is a laminin-like protein. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87: 3264-3268.

57. Eliceiri B. 2001. Integrin and growth factor receptor crosstalk. Circ Res. 89:1104-1110.

58. Elices M.J., Urry L.A., Hemler M.E., 1991. Receptor functions for integrin VLA-3 : fibronectin, collagen, and laminin binding are differentially influenced by Arg-Gly-Asp peptide and by divalent cations. J.Cell Biol.l 12:169-181.

59. EngelJ. 1989. EGF-like domains in extracellular matrix proteins: localized signals for growth and differentiation? FEBS Lett. 251: 1-7.

60. EngelJ. 1992. Laminins and other strange proteins. Biochem. 30 (44): 1064310651.

61. Engvall E., Earwicker D., Haaparanta Т., Ruoslahti E., Sanes J.R. 1990. Distribution and isolation of four laminin variants: tissue restricted distribution of heterotrimers assembled from five different subunits. Cell Regul. 1: 731-740.

62. Folkman J. 1997. Angiogenesis and angiogenesis ingibition; an overview. EXS. 79:1-8.

63. Fuchs E. 1990. Epidermal differentiation: the bare essentials. J Cell Biol. 111:2807-2814.

64. Fuchs E.J., Dowling J., Segre S.H.Lo, and Q-C.Yu.\991. Integrators of epidermal growth and differentiation: distinct functions of pi and P4 integrins. Curr. Opin. Gen. Dev.7:672-682.

65. Gabbiani G., Chaponnier C, Huttner I. 1978. Cytoplasmic filaments and gap junction in epithelial cells and myofibroblasts during wound healing. J. Cell Biol. 76:561-8.

66. Gailit J„ Clark R. 1994. Wound repair in the context of extracellular matrix. Curr. Opin. Cell Biol.6: 717-725.

67. Gailit J., Welch M. and Clark R.A. 1994. TGF-beta 1 stimulates expression of keratinocyte integrins during re-epithelailization of cutaneous wounds. J. In vest.Dermatol. 103: 221-227.

68. Giannelli G., Falkmarzillier J., Schiraldi O., Stetlerstevenson W.G., Quaranta V.1997. Induction of cell migration by matrix metalloprotease-2 cleavage of laminin-5. Science. 277: 225-228.

69. Gilchrest B. 1983. In vitro assessment of keratinocyte aging. J. Invest. Dermatolog. 81: 184-188.

70. Gloe Т., Riedmayr S, Sohn H.-Y., Pohl U. 1999. The 67-kDa Iaminin-binding protein is involved in shear stress-dependent endothelial nitric-oxide synthase expression. J.Biol.Chem. 274 (23): 15996-16002.

71. Goldfinger L.E., Stack M.S. and Jones J.C.R 1998. Processing of laminin-5 and its functional consequences : role of plasmin and tissue-type plasmincgen activator. J. Cell Biol. 141: 255-265.

72. Goldfinger L.E., Hopkinson S.B., deHart G.W., Collawn S., Couchman J.R. and Jones J.C.R. 1999. The a3 laminin subunit, a6b4 and a3bl integrin coordinately regulate wound healing in cultured epithelial cell and in the skin. J. Cell Sci. 112:2615-2629.

73. Goliger J.A., Paul D.L. 1995. Wounding alters epidermal connexin ezpression and gap junction-mediated intercellular communication. Mol Cell Biol. 6:1491-501

74. GorelikJ. V., Cherepanova O.A., Voronkina I.V., Diakonov I.A., Blinova M.I. and Pinaev G.P. 2001. Laminin-2/4 from human placenta is a better adhesion agent for primary keratinocytes than laminin-1 from EHS sarcoma. Cell Biol. Int. 25 (5):395-402.

75. Graf J., Ogle R.C., Robey F. A., Sasaki M., Martin G.R., Yamada Y„ Kleinman H.K 1987. A pentapeptide from the laminin B1 chain mediates cell adhesion and binds the 67 000 laminin receptor. Biochem. 26: 6896-6900.

76. Grinnel F„ Но C.H., Wysocki A. 1992. Degradation of fibronectin and vitronectin in chronic wound fluid: analysis by cell blotting, immunoblotting and cell adhesion assays. J.Inves. Dermatol. 98: 410-416.

77. Grinnell F. 1992. Wound repair, keratinocyte activation and integrin modulation. J. Cell Sci. 101:1-5.

78. Grondahl-Hansen J., Lund L.R., Ralfkiaer е., Ottevander V. and Dano.K. 1988. Urokinase and tissue-type plasminogen activators in keratinocytes during wound reepithelialization in vivo. J. Invest. Dermatol. 90:790-95.

79. Guo M., Toda K-l. and Grinnell F. 1990. Activation of human keratinocyte migration on type I collagen and fibronectin . J. Cell Sci. 96: 197-205.

80. Guo M., Kim L.T., Akiyama S.K., Gralnick H.R., Yamada K.and Grinnell F. 1991. Altered processing of integrin receptors during keratinocyte activation . Exp.Cell. Res. 195:315-322.

81. HanJ., Jenq W., Kefalides N. A. 1999. Integrin a2{31 recognizes laminin-2 and induces C-erb B2 tyrosine phosphorylation in metastatic human melanoma cells. Connect Tissue Res. 40 (4): 283-293.

82. Hakkinen L., Hildebrand H.C., Berndt A., Kosmehl H and Larjava H. 2000. Immunolocalization of tenascin-C , a9 integrin subunit and av06 during wound healing in human oral mucosa. J. Histochem. Cytochem. 48:985-998.

83. Hay E.D. 1993. Extracellular matrix alters epithelial differentiation. Curr. Opin. Cell Biol. 5:1029-1035.

84. Hintermann E., Bilban M., Sharabi A., and Quaranta V. 2001. Inhibitory role of a6p4-associated erB-2 and Phosphoinositide 3-Kinase in keratinocyte haptotactic migration dependent on a3piintegrin. J.Cell Biol. 153:465-478.

85. Hynes R.O. 1992. Integrins: versatility, modulation, and signaling in cell adhesion. Cell. 69: 11-25

86. Huttenlocher A., Sandborg R.R., and Horwitz A.FA99S. Adhesion in cell migration. Curr. Opin. Cell Biol.7: 697-706.

87. Jenq W., Wu S.J., Kefalides N.A. 1994. Expression of a2-subunit of laminin correlates with increased cell adhesion and metastatic propensity. Differentiation 58 (1): 29-36.

88. Jensen P., Bolund L. 1988. Low Ca 2+ stripping of differentiating cell layers in human epidermal cultures: an in vitro model of epidermal regeneration . Exp. Cell. Res. 175:63-73.

89. Jones J., Watt F.M. and Speigt P.M. 1997. Changes in the expression of a5 integrins in oral squamous cell carcinomas. J. Oral Pathol. Med. 26: 63-68.

90. Karecla P. L., Timpl R., Watt F.1994. Adhesion of human epidermal keratinocytes to laminin . Cell adhesion and Communication .2: 309-318.

91. Kaverina I., Krylyshkina O., Small J. V. 2002. Regulation of substrate adhesion dynamics during cell motility. Int.J.Biochem. Cell. Bio. 34: 746-761.

92. Kikkawa Y., Sanzen N. Sekiguchi K. 1998. Isolation and characterization of laminin-10/11 secreted by human lung carcinoma cells. Laminin-10/11 mediates cell adhesion through integrin a3pl. J. Bio. Chem. 273: 15854-15859.

93. Kim J.P. Zhang K., Chen J.D.I992a Mechanism of human keratinocyte migration on fibronectin: unique role of RGD sites and integrins. J. Cell Physiol. 151:443-50.

94. Kim J.P. Zhang K„ Kramer R.H. 1992b. Integrin receptors and RGD sequences in human keratinocyte migration : unique anti-migratory function of alpha3 betal epiligrin receptor. J. Invest. Dermatol. 98:764-70.

95. Kim J.P., ChenJ.D., Wilke M.S. 1994. Human keratinocyte migration on type IV collagen . Role of heparin-binding site and alpha2 beta 1 integrin. Lab Invest. 74:401-8.

96. Kleinman H.K., McGarvey M.L., Hassell J.R., Cannon V.L., Laurie G.M. and Martin G.R. 1986. Basement membrane complexes with biological activity. Biochemistry. 25:312-318.

97. Machesky L.M. and Hall A. 1996. Rho: a connection between membrane receptor signalling and cytoskeleton. Trends Cell Biol. 6: 304-310.

98. Mainiero F„ Pepe A., Yeon M., Ren Y„ Gianccotti F. 1996. The intracellular functions of a604 integrin are regulated by EGF. J.Cell. Biol. 134: 241-253.

99. Massague J. 1990. The transforming growth factor-beta family. Annu. Rev. Cell Biol. 6:597-641.

100. Matrisian L.M. The matrix-degrading metalloproteinases. BioEssays . 1992. 14 (7). 455-463.

101. Matsumoto K., Hashimoto K„ Yoshikawa K., Nakamura T. 1991. Marked stimulation of growth and motility of human keratinocytes by hepatocyte growth factors. Exp. Cell Res. 196: 114-120.

102. Mecham R. 1991. Receptors for laminin on mammalian cells. FASEB J. 5: 2538-2546.

103. Mercurio A.M. 1995. Laminin receptors: achieving specificity through cooperation. Trends in Cell Biol. 5,419-423.

104. Mercurio A.M., Rabinovitz I. and Shaw L.M. 2001. The абр4 integrin and epithelial cell migration. Curr. Opin. Cell Biol. 13. 541-545.

105. Mitchison T.J. and Cramer L.P. 1996. Actin-based cell motility and cell locomotion. Cell. 84:371-379.

106. Monical P.L., Kefalides N.A. 1994. Coculture modulates laminin synthesis and mRNK levels in epidermal keratinocytes and dermal fibroblasts. Exp.Cell Res. 210 (2): 154-159.

107. Nanney L.B. and King L.E. In R.A.F. Clark, Ed., The Molecular and Cellular Biology of Wound Repair (Plenum, New York) 1996.: 171-194.

108. Nguyen B.P., Gil S.G., Carter W.G. 2000. Deposition of laminin 5 by keratinocytes regulates integrin adhesion and signalling. J. Biol. Chem. 275:3189631907.

109. Niessen C.M., Hogervorst F., Jaspars L.H., De Melker A.A. Delwel G.O., Hulsman E.H.M., Kuikman I., Sonnenberg A. 1994. The a6p4 integrin is a reseptor for both laminin and kalinin. Exp. Cell. Res. 211:360-367.

110. Nelson W. and T.T. Sun. 1983. The 50- and 58-kdalton keratin classes as molecular markers for stratified squamous epithelia : cell culture studies. J. Cell Biol. 97:244-251.

111. Nishimura S.L., Sheppard D.,and Pytela R. 1994. Integrin avp8. Interaction with vitronectin and functional divergence of the cytoplasmic P8. domainJ.Biol. Chem. 269: 28708-28715.

112. O'Connor K.L., Shaw L.M., and Mercurio A.M. 1998. Release of cAMP gating by the абр4 integrin stimulates lamellae formation and the chemotactic migration of invasive carcinoma cells. J. Cell Biol. 143:1749-1760.

113. O'Keefe E.J., Woodley D.T., Castillo G. 1984. Production of soluble and cell-associated fibronectin by cultured keratinocytes. J. Invest. Dermatol. 82: 150-155.

114. О'Toole, E.A., Marinkovich, M.P., HoeJJler W.K., FurthmayrH., Woodley D.T. 1997.Laminin 5 inhibits human keratinocyte migration. Exp. Cell Res. 233:330339.

115. Palm S.L., Furcht L.T. 1983. Production of laminin and fibronectin by Schwannoma cells: cell-protein interactions in vitro and protein localization in peripheral nerve in vivo. J.Cell Biol. 96 :1218-1226.

116. PalecekS. 1997. Nature. 385:537-540.

117. Parks, W. C. 1995. The production, role, and regulation of matrix metalloproteinases in the healing epidermis. Wounds. 7: 23A-37A.

118. Paulsson M., Aumailley M., Deutzmann R., Timpl R., Beck K., Engel J. 1987. Laminin-nidogen complex. Extraction with chelating agents and structural characterization. Eur.J.Biochem. 166: 11-19.

119. PfaffM., Gohring W., Brown J.C., and Timpl R. 1994. Binding of purified collagen receptors (alpha 1 beta 1, alpha 2 beta 2) and RGD- dependens integrins to laminins and laminin fragments. Eur. J. Biochem 225: 975-984.

120. Pilcher B.K., DuminJ.N., SudbeckB.D., Krane S.M., Welgus H.J., Parks W.C. 1997a. The Activity of Collagenase-1 Is Required for Keratinocyte Migration on a Type I Collagen Matrix. J.Cell.Biol. 137 (6): 1445-1457.

121. Pilcher, B.K., Dumin, J., Schwartz, M.J., Mast, B.A., Schultz, G. S., Parks, W.C., Welgus, H.G. 1999. Keratinocyte collagenase -1 expression requires an epidermal growth factor receptor autocrine mechanism. J Biol. Chem. 274(15): 10372-81.

122. Planus E., Galiacy S., Matthay M., Laurent V., Gavrilovic J., Murphy G., Clerici C„ Isabey D., Lafuma C. and d'Ortho M.-P. 1999. Role of collagenase in mediating in vitro alveolar epithelial wound repair. J. Cell Sci. 112: 243-252.

123. Potten C.S. and Morris R.J. 1988. Epithelial stem cells in vivo. J Cell Sci. Suppl 10: 45-62.

124. Rabinovitz I., and Mercurio A.M. 1997. The integrin абр4 function in carcinoma cell migration on laminin-1 by mediating the formation and stabilization of actin-containing motility structures. J.Cell Biol. 139 (7): 1873-1884.

125. Rheinwald J.G. Green H. 1977.Epidermal growth factor and the multiplication of cultured human epidermal keratinocytes. Nature. 265(5593): 421-424.

126. Rheinwald J.G. 1980. Serial cultivation of normal epidermal keratinocytes. Meth.Cell Biol. 21A: 229-254.

127. Rijken P.J., Hage W.J., van Bergen en Henegouwen P.M.P., Verkleij A.J. and Boonstra. 1991. Epidermal growth factor induses rapid reorganization of the actin microfilament system in human A431 cells. J.Cell Sci. 100: 491-499.

128. Romer J., Bugger Т.Н., Pike C., Lund L.R., Flick M.J., Degen L.J., Dano AT. 1996. Impaired wound healing in mice with a disrupted plasminogen gene. Nat Med. 2: 287-292.

129. Rosen E.M., Goldberg I.D. 1989. Protein factors which regulate cell motility. In Vitro Cell Dev.Biol. 25: 1079-1087.

130. Ruoslahti E. 1996. RGD and other recognition sequences for integrins. Ann.Rev.Cell.Dev.Biol. 12: 697-715.

131. Saarialho-Kere, U.K., Kovacs, S.O., Pent land, A. P., Olerud, J., Welgus, H.

132. G., Parks, W.C. 1993.Cell-matrix interaction modulate interstitial collagenase expression by human keratinocytes actively involved in wound healing. J. Clin. Invest. 92: 2858-2866.

133. Saarialho-Kere, U.K., Kovacs, S.O., Pentland, A. P., Parks, W.C., Welgus,

134. H.G. 1994. Distinct populations of keratinocytes express stromelysin-1 and -2 in chronic wounds. J. Clin. Invest. 94:79-88.

135. Sal о Т., Makela M., Kylmaniemi M., Autio-Harmainen H. and Larjava H. 1994. Expression of matrix metalloproteinase-2 and -9 during early human wound healing. Lab. Invest. Vol. 70. P. 176-182

136. Sanes J.R., Engvall E., Butkowsky R and Hunter D.D. 1990. Molecular heterogeneity of basement membranes : isoform of laminin and collagen IV at the neuromuscular junction and elsewhere. J.Cell Biol. 111:1685-99.

137. Sato Ch., Tsuboi R., Shi Ch-M., Rubin J.S., Ogawa H. 1995. Comparative study of hepatocyte growth factor/scatter factor and keratinocyte growth factor effects on human keratinocytes. J Invest Dermatol. 104:958-963.

138. Schnapp L.M., Hatch N., Ramos D.M., Klimanskaya I.V., Sheppard D. and Pytela R. 1995. The human integrin a8bl functions as a receptor fooor tenascin, fibronectin and vitronectin. J.Biol. Chem., 270: 23196-23202.

139. Sheetz M.P., dan P. Felsenfeld and Galbraith C.G. 1998. Cell migration: regulation of force on extracellular-matrix-integrin complexes. Trends in Cell Biol. 8:51-54.

140. Shaw L.M., Rabinovitz I., Wang H.H-F., Toker A., and Mercurio A.M. 1997. Activation of phosphoinositide 3-OH kinase by абр4 integrin promotes carcinoma invasion. Cell. 91:949-960.

141. Shuger L., Skubitz A.P., Zhang J., Sorokin L., He L. 1997. Laminin al chain synthesis in the developing lung:Requirement for epithelial-mesenhimal contact and possible role in bronchial smooth muscle development. J.Cell Biol. 139:553562.

142. Sewry C.A., Dalessandro M„ Wilson L.A., Sorokin L.M., Naom /., Bruno S., FerliniA., Dubowitz V., Muntoni F. 1996a. Expression of laminin chains in skin in merosin deficient congenital muscular dystrophy. Neiropediatrics. 28: 217-222.

143. Sewry C.A., Philpot J., Sorokin L.M., Wilson L.A., Naom I., Goodwin F., Dalessandro M., Dubowitz V., Muntoni F. 1996b. Diagnosis of merosin (laminin-2) deficient congenital muscular dystrophy by skin biopsy. Lancet. 347 (9001): 582584.

144. Singer A.D. and Clark R.A.F. 1999. Cutaneous wound healing. The New Engl J. Med. 2:738-46.

145. Spinardi L., Einheber Т., Cullen Т., Milner T.A. and Giancotti F.G. 1995. A recombinant tail-less integrin beta-4 subunit disrupts hemidesmosomes, but does not suppress alfa 6 beta 4-mediated cell adhesion to laminins. J. Cell Biol. 129:473487.

146. Staatz, W.D., S.M. Rajpara, E.A. Wayner, W.G. Carter, and S.A. Santoro. 1989. The membrane glycoprotein Ia-II (VLA-2) complex mediates the Mg 2+ -dependent adhesion of platelets to collagen. J. Cell. Biol. 108.:1917-1924.

147. Stepp M.A., Zhu L., Sheppard D. and Cranfill R.L. 1995. Localised distribution of a9 integrin in the cornea and changes in expression during corneal epithelial cell differentiation J. Histochem. Cytochem. 43. 353-362.

148. Stepp M.A. 1999. a9 and p8 integrin expression correlates with the merger of the developing mouse eyelids. Dev. Dyn. 214. 216-228.

149. Sudbeck, B.D., Pilcher, B.K., Welgus , H.G., Parks, W.CA991. Induction and repression of collagenase-1 by keratinocytes is controlled by distinct components of different exstracellular matrix compartments. J. Biol. Chem. 272: 22103-22110.

150. Sun T.T., Tseng S.C.G. Huang A.J.W., Cooper D., Schermer A., Lynch M.H., Weiss R and Eichner R. 1985. Monoclonal antibody studies of mammalian keratins: a review. Ann. N.Y. Acad. Sci. 455:307-329.

151. Takashima A. and Grinnell F.1985. Fibronectin -mediated keratinocyte migration and initiation of fibronectin receptor function in vitro. J.Invest. Dermatol. 85: 304-308.

152. Takashima A., Billigham R.E. and Grinnell F.1986. Activation of rabbit keratinocyte fibronectin receptor function in vivo during wound healing . J. Invest. Dermatol. 86: 585-590.

153. Tiger C-F., Champliaud M-F., Pedrosa-Domellof F., Thornell L-E., Ekblom P., Gullberg D. 1997. Presence of laminin a5 chain and lack of laminin al chain during human muscle development and in muscular dystrophies. J. Biol. Chem. 272: 28590-28595.

154. Tani Т., Lehto V-P., Virtanen 1. 1999. Expression of laminins 1 and 10 in carcinoma cells and comparison of their roles in cell adhesion. Exp.Cell Res. 248: 115-121.

155. Timpl R., Rohde H„ Gehron Robey P., RennardS.I., Foidart J.M., Martin G.R. 1979. Laminin-a glycoprotein from basement membranes. J. Biol. Chem.m 254:9933-37.

156. Timpl R. 1996. Macromolecular organization of basement membranes. Curr. Opin. Cell Biol. 8:618-624.

157. Toda К., Tuan T.L., Brown P.J., Grinnell F. 1987. Fibronectin receptors of human keratinocytes and their expression during cell culture. J.Cell Biol. 105: 3097-3104.

158. Toole B.P. Proteoglycans and hyaluronan in morfogenesis and differentiation. In: Hay E.D., ed. Cell Biology of Exracellular matrix.2nd ed. New York: Plenum Press. 1991.305-41.

159. Vachon P.H., Loechel F, Xu H., Wewer U.M., Engval E. 1996. Merosin and laminin in myogenesis- specific requirement for merosin in myotube stability and survival. J.Cell Biol. 134: 1483-1497.

160. Vanderneut R., Krimpenfort P., Calafat J., Niessen C.M., Sonnenberg A. 1996. Epithelial detachment due to absence of hemidesmosomes in integrin beta-4 null mice. Nat. Genet. 13:366-369.

161. Watt F.M., Green H. 1982. Stratification and terminal differentiation of cultured epidermal cells. Nature. 295:434-436.

162. Watt F.M. 1984. Selective migration of terminally differentiating cells from the basal layer of cultured human epidermis. J. Cell Biol. 98:16-21.

163. Watt F.M. 1987. Influence of cell shape and adhesiveness on stratification and terminal differentiation of human keratinocytes in culture. J. Cell Sci. 8:313-326.

164. Watt F.M. 1989. Terminal differentiation of epidermal keratinocytes. Curr. Opin.Cell Biol. 6:11-07-1115.

165. Watt F.M. 1998. Epidermal stem cell: markers, patterning and the control of stem cell fate. Phil. Trans. R. Soc. Lond .B 353:831-837.

166. Watt F.M. and Hertle D.M. 1994. Keratinocytes integrins. In Leigh ,I.M., Lane , E.B. and Watt F.M. (eds), The Keratinosytes Handbook. Cambridge University Press, UK, p. 153-164.

167. Watt F.M. 2002. Role of integrins in regulating epidermal adhesion, growth and diffferentiation. EMBO J. 21. 3919-3926.

168. Welch M.P., Odladn G.f., Clark R.A.F. 1990. Temporal relationshipa of F-actin bundle formation , collagen and fibronectin matrix assembly , and fibroneciin receptor expression to wound contraction. J. Cell Biol. 110:133-45.

169. Wewer U.M., Engvall E. 1994. Laminins. Meth.Enzymol. 245: 85-104.

170. Wiche G. 1998. Role of plectin in cytoskeleton organization and dynamics. J.Cell Sci. 111:2477-2486.

171. Woodley D. Т., Bachmann P.M. and O'Keffe E.J. 1988. Laminin inhibits human keratinocyte migration . J. Cell. Physiol. 136: 140-146.

172. Woodley D.T., Brigaman R.A., Herzog S. et al. 1990. Characterization of neodermis formation beneath cultured epithelial autograft transplanted on muscle fascia. J.Invest. Dermatol. 95:20-6.

173. Wysocki a.B., Staiano-Coioco L., Grinnell F. 1993. Wound fluid from chronic leg ulcers contains elevated levels of metalloproteinases MMP-2 and MMP-9. J. Invest. Dermatol. 101: 64-68.

174. Xie В., Bucana C.D., and Filder I.J. 1994. Density-dependent induction of 92-kd type IV collagenase activity in cultures of A431 human epidermal carcinoma cells. 144:1058.

175. Yao C.C., Ziober B.L., Squillace R.M., and Kramer R.H. 1996a. al integrin mediates cell adhesion and migration on specific laminin isoforms. J. Biol. Chem. 271:25598-25603.

176. Yao C.C., Ziober B.L. Sutherland А.е., Mendrick d.L., and Kramer R.H. 1996b. Laminins promote locomotion of skeletal myoblasts via alfa 7 integrin receptor. J.Cell Sci. 109: 3139-3150.

177. Yu X., Miyamoto S., and Mekada E. 2000. Integrin a2bl-dependent EGF receptor activation at cell-cell contact sites. J.Cell Sci. 113:2139-2147.

178. Yurchenco P.D., Tsilibary E.C., Charonis A.S., Furthmayr H. 1985. Laminin polymerization in vitro: evidence for a two-step assembly with domain specificity. J.Biol.Chem. 260: 7636-7644.

179. Yurchenco P.D., Cheng Y.S., Colognato H. 1992. Laminin forms an independent network in basement membranes. J.Cell Biol. 117 (5): 1119-1133.

180. Zhang К and Kramer R.H. Laminin 5 deposition promotes keratinocyte motility. 1996. Exp. Cell Res. 227(2): 309-322 .

181. Zillikens D. 1999. Acquired skin disease of hemidesmosomes. J. Dermatol. Sci. 20: 134-154.

182. Особенно автор благодарен научным руководителям заведующему ОКК д.б.н., профессору Г.П. Пинаеву и к.б.н. Блиновой М.И. без ценных рекомендаций которых и содействия в проведении исследований невозможно было бы написание данной работы.