Влияние раздельного и сочетанного воздействия ионизирующей радиации и ионов свинца на уровень ДНК-белковых сшивок в клетках различных органов животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.01, кандидат биологических наук Григорьев, Михаил Валерьевич

• Григорьев, Михаил Валерьевич
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Григорьев, Михаил Валерьевич

1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

2.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Общая характеристика ДНК-белковых сшивок.

2.2. ДНК-белковые сшивки при действии химических агентов.

2.3. Биологическое значение ДНК-белковых сшивок.

2.4. Свинец. Токсическая и генотоксическая характеристика.

2.5. Комбинированное действие радиации и тяжелых металлов.

3. Собственные исследования.

3.1. Материалы и методы исследования.

3.1.1. Материалы исследования.

3.1.2. Методы исследования.

3.1.2.1. Количественное определение ДНК-белковых сшивок.

3.1.2.2. Определение однонитевых разрывов ДНК ROPS-методом.

3.1.2.3. Определение содержания свободных сулъфгидрильных групп крови амперометрическим титрованием.

3.1.2.4. Гематологические методы.

3.1.2.5. Определение клеточности тимуса и селезенки.

3.2. Результаты собственных исследований.

3.2.1. Сравнительный анализ ДНК-белковых сшивок и однонитевых разрывов ДНК после острого облучения крыс в разных дозах.

3.2.2. Влияние фракционированного облучения крыс с разной интенсивностью на уровень ДНК-белковых сшивок в клетках печени, тимуса, селезенки и лейкоцитах крови.

3.2.3. Влияние длительного воздействия ионов свинца в разных концентрациях на уровень ДНК-белковых сшивок в лейкоцитах крови и клетках лимфоидных органов крыс. Эффект острого облучения на фоне свинцовой интоксикации.

3.2.4. Влияние раздельного и сочетанного воздействия хронического внешнего облучения мышей в малых дозах и хронического воздействия ацетата свинца.

3.3. Обсуждение результатов исследований.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние раздельного и сочетанного воздействия ионизирующей радиации и ионов свинца на уровень ДНК-белковых сшивок в клетках различных органов животных»

Актуальность темы

Стремительные темпы научно-технического прогресса сопряжены с активным загрязнением среды обитания, как человека, так и животных, в частности, радионуклидами и тяжелыми металлами. Это определяет необходимость всестороннего мониторинга и оценки воздействия техногенных факторов радиационной и химической природы.

При анализе экологической обстановки в районах аварийного радиационного загрязнения зачастую одновременно регистрировали высокий уровень загрязнения тяжелыми металлами, в частности свинцом (Фомичева Н.А., 1997; Белов А.Д., Журавлев А.И. и др., 1998). При одновременном воздействии ионизирующего излучения и химических агентов наблюдается модификация летального, мутагенного и/или канцерогенного действия излучения (Жербин Е.А. и др., 1982; Streffer С., Muller W.U., 1984). Это положение отражено также в докладе научного комитета ООН Генеральной Ассамблее 1982 г. "Ионизирующее излучение: Источники и биологические эффекты". Авторами доклада отдельно акцентируется внимание на необходимости изучения закономерностей сочетанного действия ионизирующих излучений и тяжелых металлов.

Важнейшим объектом при лучевых воздействиях на живую клетку является молекула ДНК и геном в целом. Именно изменения в геноме ответственны за отдаленные последствия воздействия как для непосредственно облученного организма, так и для потомства. Поэтому эффективная регистрация изменений на уровне ДНК могла бы дать своевременную информацию о возможных последствиях и принятии необходимых профилактических мер.

Геном эукариотических клеток организован как система тонких структурно и функционально обусловленных взаимодействий носителя генетической информации - молекулы ДНК с гистонами и негистоновыми белками хроматина - сложной надмолекулярной структуры, способной к кооперативным перестройкам. Поддержание многоуровневого порядка организации молекулы ДНК в клетке, эффективная реализация генетических программ напрямую связаны с динамикой ДНК-белковых взаимодействий. При воздействии на клетку ряда внешних физических и химических агентов может происходить преобразование лабильных связей ДНК-белок нормально функционирующего хроматина в крайне прочные связи, получившие название "ДНК-белковых сшивок" (ДБС) (Fornance A.J. et al., 1977, Oleinick N.L. et al., 1987). Формирование ДБС характеризуется "пришиванием" белка к ДНК, по-видимому, посредством ковалентной связи. Строгие доказательства ковалентной природы ДБС малочисленны, проведены лишь для некоторых модельных систем (Shetlar M.D. 1980). Зачастую наличие ковалентной связи констатируют на основании устойчивости комплекса к воздействию диссоциирующих и денатурирующих химических агентов, неэффективности разделения белка и ДНК известными физико-химическими методами (Murthy К.К. et al., 1993). Одним из наиболее значимых свойств ДНК-белковых сшивок для оценки их биологического значения является низкая скорость репарации этого типа повреждений. Наиболее медленно репарация ДБС происходит в неактивных областях хроматина; в метафазных клетках ДБС практически не репарируются (Chiu S.M. et al., 1984, 1986). Эти сведения дают основания предполагать накопление таких повреждений ДНК в клетках. Считается, что способность ДБС препятствовать нормальной транскрипции, репликации ДНК может определять участие ДБС в дестабилизации генома и являться причиной отдаленных последствий лучевого (или химического) воздействия (мутагенез, канцерогенез, гибель клеток по некротическому или апоптическому механизмам) (К.П. Хансон, В.Е.Комар, 1985, АуербахШ., 1978; HartR.W. et al., 1978).

Таким образом, изучение влияния ионизирующей радиации и тяжелых металлов на образование медленно репарируемых повреждений ДНК - ДНК-белковых сшивок - в клетках животных позволит найти новые подходы к оценке тяжести радиационно-химического поражения, а также прогнозу отдаленных последствий таких воздействий (снижение иммунного статуса, канцерогенеза, преждевременной смертности и др.)

Целью данной работы являлось изучение закономерностей образования ДНК-белковых сшивок в клетках различных органов животных при раздельном и сочетанном воздействии на организм ионизирующего излучения и ионов свинца.

Исходя из этого, были определены конкретные задачи:

1. Провести сравнительное изучение ДНК-белковых сшивок и однонитевых разрывов ДНК в клетках различных органов после острого общего облучения животных в разных дозах.

2. Изучить уровень ДНК-белковых сшивок в клетках различных органов и лейкоцитах крови после фракционированного облучения животных с разной интенсивностью.

3. Изучить влияние хронического воздействия ионов свинца в разных концентрациях на образование ДНК-белковых сшивок в клетках лимфоидных органов и лейкоцитах крови животных.

4. Изучить влияние комбинированного воздействия ионов свинца и хронического гамма-облучения в малых дозах на уровень ДНК-белковых сшивок в клетках лимфоидных органов животных.

Научная новизна:

Впервые проведены сравнительные исследования уровней ДНК-белковых сшивок и однонитевых разрывов ДНК в клетках различных органов крыс при однократном у-облучении в разных дозах, установлены закономерности их образования в зависимости от вида клеток.

Изучен характер и количественные изменения ДНК-белковых сшивок в клетках лимфоидных органов животных при раздельном и сочетанном воздействии у-облучения в малых дозах и ионов свинца. Установлено, что комбинированное воздействие у-облучения в малых дозах и ионов свинца снижает уровень ДНК-белковых сшивок, по сравнению с раздельным воздействием любого из двух факторов.

Впервые получены данные о динамике изменения клеточности тимуса и селезенки при хроническом облучении животных в малых дозах, хроническом воздействии ионов свинца и их комбинированном воздействии.

Научно-практическое значение работы;

1. В широком диапазоне доз (от малых до абсолютно летальных) показано, что повышение уровня ДНК-белковых сшивок является универсальной реакцией клеток различного типа на воздействие ионизирующего излучения и ионов свинца.

2. Полученные данные свидетельствуют, что на фоне отсутствия ярких изменений со стороны картины крови при лучевых воздействиях малых и средних интенсивностей в клетках разных органов (тканей) происходит запуск процессов, приводящих к изменениям на молекулярном уровне (образование ДНК-белковых сшивок), способных, по-видимому, приводить к реализации отдаленных последствий радиационного (химического) воздействия.

3. Результаты сочетанного воздействия ионизирующего излучения и свинца позволяют предположить реализацию запуска дополнительных защитных механизмов в клетках животных, приводящих к снижению регистрируемого уровня ДНК-белковых сшивок, по сравнению с результатами отдельного воздействия радиации или свинца.

4. Результаты определения уровня ДНК-белковых сшивок тимуса и селезенки при хроническом облучении животных малыми дозами позволяют заключить, что ответ клеток на лучевое воздействие в малых дозах не является специфической для лучевого поражения и происходит по типу общего адаптационного синдрома.

5. Определение уровня ДНК-белковых сшивок в лейкоцитах крови животных методом детергентного осаждения может быть рекомендовано для определения степени тяжести поражения генетического аппарата животных и вероятностного прогноза отдаленных последствий при радиационном воздействии и действии ионов свинца.

Реализация результатов работы:

Результаты работы используются в учебном процессе на кафедре радиобиологии, рентгенологии и ГО МГАВМиБ им. К.И.Скрябина при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий. Они используются при выполнении научно-исследовательской работы в лаборатории радиобиологии, при выполнении дипломных и курсовых работ. Методические подходы и выводы диссертационной работы используются для проведения радиоэкологического мониторинга в работе лаборатории биоиндикации экологических техногенных аномалий МосНПО «Радон». По результатам диссертациионной работы выпущен информационный листок «Использование сшивок ДНК-белок в качестве критерия радиационного поражения генетического аппарата клеток крови при многократном облучении с низкой интенсивностью» (Информационный листок № 128-99. - М.: МособлЦНТИ, 1999. - 3 с.)

Апробация работы:

Материалы диссертации доложены и обсуждены на Третьем съезде по радиационным исследованиям "Радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность" (Москва, 14-17 октября 1997г.) и на Втором съезде биофизиков России (Москва, 23-27 августа 1999 г.)

Публикации по теме работы:

По данным диссертации опубликовано 14 печатных работ.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 116 страницах текста и состоит из введения, обзора литературы, глав: материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводов, списка использованной литературы и приложения. В работе имеются 12 таблиц, 1 фотография, 10 рисунков. Список литературы включает 165 источников, в том числе 66 отечественных и 99 иностранных.

Заключение диссертации по теме «Радиобиология», Григорьев, Михаил Валерьевич

ВЫВОДЫ

1. Острое облучение крыс дозами 2,6,12 и 18 Гр через 3 часа после воздействия приводит к дозозависимому увеличению количества сшивок ДНК-белок в клетках тимуса, селезенки, печени и головного мозга. Наибольший количественный выход сшивок отмечен для лимфоидных органов - тимуса и селезенки. Это указывает на зависимость повреждения генетического аппарата от специфики метаболизма данного типа клеток и уровня их пролиферативной активности.

2. Фракционированное облучение крыс в течение 30 дней дозами 0,3 или 0,5 Гр в сутки (суммарные дозы 6,6 и 11 Гр соответственно) вызывает дозозависимое увеличение уровня ДНК-белковых сшивок в клетках селезенки, тимуса и лейкоцитах крови. Одновременно отмечается зависимое от дозы, достоверное снижение уровня сульфгидрильных групп крови.

3. Хроническое поступление ацетата свинца в организм крыс с питьевой водой в течение 30 суток в концентрациях, соответствующих 10 и 20 ПДК приводит к достоверному увеличению сшивок ДНК-белок в клетках тимуса, селезенки и лейкоцитах крови. Концентрация ацетата свинца, соответствующая 5 ПДК, не оказывает влияния на уровень ДНК-белковых сшивок в изученных тканях.

4. Хроническое облучение мышей с мощностью дозы 30 мкГр/ч вызывает увеличение количества ДНК-белковых сшивок в тимоцитах и спленоцитах мышей через 40 суток от начала облучения (суммарная доза 2,88 сГр). Дальнейшее облучение мышей до 80 суток (суммарная доза 5,76 сГр) приводит к снижению количества сшивок ДНК-белок до контрольных значений.

5. Хроническое поступление ацетата свинца с питьевой водой в концентрации 10 ПДК приводит к увеличению количества ДНК-белковых сшивок в тимоцитах и спленоцитах мышей на 40-е сутки с последующим снижением до значений контроля на 80 сутки.

6. При сочетанном воздействии гамма-облучения и ионов свинца регистрируемый уровень ДНК-белковых сшивок в клетках различных органов значительно меньше, чем при раздельном воздействии каждого из изученных факторов, что может свидетельствовать об активации синтеза в клетках соединений (металлотионеинов, белков теплового шока, других стрессорных белков), обладающих радиопротекторными свойствами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты исследований могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций, проведении лабораторно-практических занятий по радиобиологии, а также при выполнении научно-исследовательских и дипломных работ, написании учебников и учебных пособий.

2. Данные, полученные при изучении влияния многократного облучения животных с низкой интенсивностью на образование сшивок ДНК-белок в лейкоцитах крови, дают основания рекомендовать ДНК-белковые сшивки в качестве критерия радиационного поражения генетических структур животных.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Григорьев, Михаил Валерьевич, 2004 год

1. Авцын А.П. Жаворонков А.А., Риш М.А., Строчкова Л.С. Микроэлементозы человека. М.: Медицина, 1991. - 312 с.

2. Ауэрбах Ш. Проблемы мутагенеза. М.: Мир, 1978. - 463 с.

3. Баскаева И.О. Образование ДНК-белковых сшивок под действием у-радиации, УФ-облучения и некоторых химических агентов // Радиобиология. 1992. - Т.32. - Вып. 5. - С. 673-683.

4. Белов А.Д., Киршин В.А., Лысенко Н.П., Пак В.В., Рогожина Л.В. Радиобиология. М.: Колос, 1999. - 384 с.

5. Бергхоф П.К. Мелкие домашние животные. Болезни и лечение. / Пер. с нем. И. Кравец. М.: Аквариум, 1999. - 224 с.

6. Блэкет Н.М. Гематологические эффекты при длительном лучевом воздействии. В кн.: Руководство по радиационной гематологии (под ред. Ярмоненко С. П.) М.: Медицина, 1974. С. 106-111.

7. Бурлакова Е.Б. Современные достижения и нерешенные проблемы в радиобиологии//Третий съезд по радиационным исследованиям: Тез. докл. Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 1997. - Т. 1. - С. 9-10.

8. Виленчик М.М. Исследование возрастных изменений ДНК новый подход для выяснения, ответственных за спонтанную нестабильность ДНК // Надежность и элементарные события процессов старения биологических объектов. - Киев: Наук, думка. - 1986. - С. 133-140.

9. Виленчик М.М. Спонтанная нестабильность и пластичность ДНК in vivo: Рекомбинация между ядерной и митохондриальной ДНК и ее биологическое значение // Успехи современной биологии. Т. 99. -вып. 2.-С. 194-211.

10. Витвицкий В.Н., Соболева JI.C., Шевченко В. А. Модификации мутагенных эффектов гамма-излучений солями хрома (VI) и свинца (II). // Третий съезд по радиационным исследованиям: Тез. докл. -Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 1997. -Т. 2. С. 222-223.

11. Георгиев Г.П. Гены высших организмов и их экспрессия. М.: Наука, 1989.-255 с.

12. Гераськин С.А. Закономерности формирования цитогенетических эффектов малых доз ионизирующего излучения. // Третий съезд по радиационным исследованиям: Тез. докл. Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 1997.-С. 20-21.

13. Ершов Ю.А., Плетенева Т.В. Механизмы токсического действия неорганических соединений. М.: Медицина, 1989. 153 с.

14. Жербин Е.А., Новоселова Г.С., Комар В.Е. Комбинированное действие излучения и химических факторов. М., 1982.-21 с.

15. Жижина Г.П. Связь структурных характеристик ДНК эукариот и ее чувствительность к действию малых доз ионизирующей радиации // Радиационная биология. Радиоэкология. 1999. - Т. 39. - Вып. 1. - С. 41-48.

16. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А.,Западнюк Б.В. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. Киев: Вища школа, 1983. 264 с.

17. Иванник Б.П., Проскуряков С.Я.,Рябченко Н.И. Исследование репарации и регенерации ДНК в радиочувствительных тканях облученных крыс//Радиобиология. 1976. - Т. 16. - Вып.6. - С.803-810

18. Иванник Б.П., Рябченко Н.И. О некоторых физико-химических изменениях в ДНК, выделенной из органов облученных крыс.//Радиобиология. 1969. - Т.9. - Вып.1. - С. 7-11.

19. Иванов С.Д., Кованько Е.Г., Попович И.Г., Забежинский М.А. Оценка генотоксичности и отдаленных эффектов радиационно-химических воздействий // Радиационная биология. Радиоэкология. 1999. - Т. 39.-Вып. 4.-С. 418-424.

20. Илюхин А. В., Шашков B.C. Бурковская Т.Е., Зубенкова Э.С. Цитокинетика и морфология кроветворения при хроническом облучении. М.: Энергоатомиздат, 1982. 136 с.

21. Ионизирующее излучение: источники и биологические эффекты. НКДАР ООН: Пер. с англ. Нью-Йорк: Организация Объединенных Наций, 1982.-780 с.

22. Комар В.Е., Хансон К.П. Информационные макромолекулы при лучевом поражении клеток. М.: Атомиздат, 1980, 176 с.

23. Комар В.Е., Хансон К.П. Информационные макромолекулы при лучевом поражении клеток. М.: Атомиздат, 1972, 160 с.

24. Котеров А.Н., Филиппович И.В. Радиобиология металлотионеинов // Радиационная биология. Радиоэкология. 1995. -Т. 35. - Вып. 2. - С. 162-180.

25. Михельсон В.М. Роль нарушений репарации ДНК в канцерогенезе и старении в связи с проблемой надежности клетки // Надежность и элементарные процессов старения биологических объектов. Киев, 1986.-С. 127-131

26. Михельсон В.М. Старение клеток в культурах. Связь с естественным старением и репарацией ДНК // Надежность и элементарные события процессов старения биологических объектов, Киев, 1986а,- С. 116-123

27. Москалева Е.Ю., Илюшина Н.А. Повреждения ДНК при действии ионизирующих излучений и их репарация // Итоги науки и техники. Серия «Радиационная биология». Т. 9. - ВИНИТИ - 1990, С. 3-113.

28. Осипов А. Н., Сыпин В.Д. Влияние ионов тяжелых металлов на ДНК-белковые сшивки в клетках головного мозга облученных мышей //II Съезд биофизиков России: Тез. докл. Москва, 1999.- Т. 3. - С. 827

29. Осипов А.Н., Коломийцева Т.Я. Пострадиационные изменения ДНК-белковых сшивок и однонитевых разрывов ДНК в клетках различныхорганов у-облученных крыс. // Биохимия. 1996. - Т. 61. - Вып. 5. - С. 927-931.

30. Осняч B.C., Сергеев П.В., Ярмоненко С.П. Молекулярная радиобиология. М.: 2й МГМИ, 1978. 138 с.

31. Петров И.Р., Коропов В.М. Практикум по патологической физиологии./ М.: Колос, 1964. 204 с.

32. Радиобиологические подходы к диагностике лучевых поражений / Сб. науч. трудов ин-та усовер. врачей. Л., 1987. - 111 с.

33. Рождественский Л.М., Кондрадов А.А. Концепция действия пролонгированной ионизирующей радиации как раздражающего, а не повреждающего фактора. // Третий съезд по радиационным исследованиям: Тез. докл. Пущино, 1997. - Т. 1. - С. 39-40.

34. Рябченко Н.И. Радиация и организм. Обнинск, 1967. - С. 94

35. Рябченко Н.И. Основные закономерности повреждения макромолекулярной структуры ДНК при облучении in vivo и in vitro // Механизмы радиационного поражения и восстановления ДНП. -Пущино, 1972.-С. 15-32.

36. Семов А.Б., Птицына С.М., Семова Н.Ю. Особенности репарации ДНК при хроническом воздействии мутагенных факторов//Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. - Т.37. -Вып.4. - С.565-568.

37. Склобовская М.В., Рябченко Н.И. Снижение выхода ДНК при депротеинизации УФ- или у-облученных растворов дезоксирибонуклеопротеида // Радиобиология. 1970. - Т. 10. -Вып. 1. - С. 14-18.

38. Сложеникина Л.В., Фиалковская JI.A., Коломийцева И.К. Орнитиндекарбокси-лаза в органах крыс в условиях хронического воздействия у-излучения малой мощности доз // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37. - Вып. 2. - С. 137-142.

39. Соколовский В.В. Определение содержания сульфгидрильных групп в крови амперометрическим титрованием// Лаб. дело. 1962. - № 8. -С. 3-7.

40. Стражевская Н.Б., Трояновская М.Л. Метод исследования радиационного эффекта на дезоксирибонуклеопротеид хроматина // Радиобиология. 1970. - Т. 10. - Вып.6. - С. 808-814.

41. Стражевская Н.Б., Трояновская М.Л., Кривцов Г.Г. Механизм радиационного повреждения дезоксирибонуклеопротеида хроматина в животной клетке // Радиобиология. 1971. - Т.П. - Вып. 3. - С. 329-334.

42. Стражевская Н.Б., Трояновская М.Л., Стручков В.А., Красичкова З.И. Нарушение состояния комплекса ДНК-белок хроматина ядра клетки под влиянием ионизирующей радиации // Радиобиология. 1969. -Т.9. - Вып.5. - С. 903-905.

43. Сьяксте Т.Г., Сьяксте Н.И. Химические соединения, повреждающие ДНК. Рига: Зинатне, 1991. - С. 22-24.

44. Токин И.Б. Проблемы медицинской цитологии. Л.: Медицина, 1974. - 122 с.

45. Уманский С.Р. Радиационное нарушение структуры и функции хроматина./ Автореф. дис. докт. биол. наук. Л., 1975. - 52 с.

46. Филиппович И.В. Репарация и репликация ДНК в облученных клетках/ Итоги науки и техники: Серия «Радиационная биология». -М.: ВИНИТИ, 1990. Т. 9, 94 с.

47. Фомина Л.И. Картина белой крови при свинцовой интоксикации//Социальная гигиена и организация здравоохранения, гигиена труда, профессиональная патология. Алма-Ата, 1970. - Т. 1. -С. 178-181.

48. Фомичева Н.А. Интенсивность свободнорадикального окисления и возможность ее коррекции биоантиоксидантами у крупного рогатого скота, находящегося на загрязненной радионуклидами территории. Автореф. канд. биол. Наук. М., 1997. -21 с.

49. Хансон К.П., Комар В.Е. Молекулярные механизмы гибели клеток. -М.: Энергоатомиздат, 1985. 152 с.

50. Хант С. В кн. Лимфоциты. Методы (под ред. Клауса Дж.). М.: Мир. 1990. С. 52-53.

51. Химия окружающей среды /под ред. О.М. Бокриса. М., Химия. -1982.- 180 с.

52. Цейтлин П.И., Рябченко Н.И., Горин А.И., Тронов В.А., Склобовская М.В., Иванник Б.П. // Радиобиология. 1967. - Т.7. - Вып. 5. - С. 658-664.

53. Цыб А.Ф. Медицинские последствия на Чернобыльской АЭС. // Третий съезд по радиационным исследованиям: Тез. докл. Пущин о, 1997.-Т. 1.-С. 15-16.

54. Шахова И.К., Ломова Т.Ю. Кинетика поведения сшивок ДНК-белок, индуцированных бифукциональными алкилирующими агентами, обладающими противоопухолевым действием // Экспериментальная онкология. 1983. - Т. 5., № 1. - С.67-71.

55. Эйдус JI.X. О едином механизме инициации различных эффектов малых доз ионизирующих излучений // Третий съезд по радиационным исследованиям: Тез. докл. Пущино, 1997. - Т. 1. - С. 52.

56. Ярилин А.А. Последствия Чернобыльской катастрофы: Здоровье человека/Под ред. Е.Б. Бурлаковой. М., 1996а. - С.68-95

57. Ярилин А.А. Радиация и иммунитет. Современный взгляд на старые проблемы.// Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37. -Вып. 4. - С. 597-603.

58. Alexander P., Moroson Н. Cross-linking of deoxyrobonucleic acid following ultra-violet irradiation of different cells // Nature.-1962.-V.194.- №4831.-P.882-883.

59. Ariza M.E., Marshall V. Williams. Mutagenesis of AS52 cells by low concentrations of lead (II) and mercury (II) // Environmental and Molecular Mutagenesis. 1996. - V. 27. - P.30-39

60. Banjar Z. M., Hnilica L., Briggs R., Stein J., Stein G. Cis- and trans-diaminedichloro-platinum(II)-mediated crosslinking of chromosomal nonhistone proteins to DNA in Hella cells. // Biohemistry. -1984. V. 23. - P. 1921-1926.

61. Basnakian A. G., James S. J. A rapid and sensitive assay for the detection of DNA fragmentation during early phases of apoptosis // Nucleic. Acids Res.-1994.- V.22.-№13. P.2714-2715

62. Biaglow J.E., Varnes M.E., Tuttle S.W. et al. The effect of L-buthionine sulfoximine on the aerobic radiation respose of A549 human lung carcinoma cells. // Int. J. Radiat. One. Biol. Phys. 1986. - V. 12. - P. 1139-1143.

63. Bide R.W. Effect of X-irradiation on sulfhydryl levels in rat cells // Radiat.Res. 1965. - V.25. - P.221-226

64. Black M.C., Ferrel J.R., Horning R.C., Martin L. K. Jr. DNA strand breakage in fresh water mussels (Anodonta grandis) exposed to lead in the laboratory and field // Environ. Toxicol. Chem. 1996. - V. 15. - №5. - P. 802-808

65. Bohue L., Coquereller Т., Hagen H. Radiation sensitivity of bacteriophage DNA. II. Breaks and cross-links after irradiation in vivo II Int. J. Radiat. Biol. 1970. - V. 17. - № 3. - P. 205-215.

66. Cesarone C.F., Bolognesi C., Santi L. Improved microfluorometric DNA determination in biological material using 33258 Hoechst. // Anal. Biochem.-1979. -V. 100.-P. 188-197

67. Chen Y., Cohen M.D., Snow E.T., Costa M. Alteration in restriction enzyme digestion patterns detects DNA-protein complexes induced by chromate. // Carcinogenesis. -1991. V. 12. - P. 1575-1580

68. Chiu S.-M., Socany N.M., Friedman L. R., Oleinick N.L. Differential processing of ultraviolet or ionizing radiation-induced DNA-proteincrosslinks in Chinese hamster cells. // Int. J. Radiat. Biol. 1984. - V. 46. -P. 681-690.

69. Chiu S.M., Friedman L.R., Sokany N.M., Xue L.Y. Nuclear matrix proteins are crosslinked to transcriptionally active gene sequences by ionizing radiation. // Radiat. Res. 1986a. - V.107. - P. 24-28.

70. Chiu S.M., Friedman L.R., Xue L.Y., Oleinick N.L. Modification of DNA damage in transcriptionally active vs. bulk chromatin. // Int. Radiat. Oncol. Biol. Phys. -1986b. V.12. - №8. - P. 1529-1532

71. Cicarelli R.B., Wetterhahn K.E. Nickel distribution and DNA lesions induced in rat tissues by the carcinogen nickel carbonate. // Cancer Res. -1982.-V. 42.-P. 3544-3549.

72. Costa M. Analysis of DNA-protein complexes induced by chemical carcinogenes. // J. Cell. Biohem. 1990. - V. 44. - P. 127-135.

73. Costa M. Molecular mechanisms of nickel carcinogenesis. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1991. -V. 31. - P. 321-337.

74. Costa M., Zhitcovich A., Toniolo P. DNA-Protein Cross-Links in Welders: Molecular Implications // Cancer Res. 1993. -V. 53. - №1. - P.460-463.

75. Costa, M., Lukanova, A., Popov, T. Taioli E., Toniolo P., Zhitcovitch A. Monitoring human lymphocytic DNA-protein cross-links as biomarker of biologically active doses of chromate // Environmental Health Perspectives. 1996.-V. 104, №5, P. 917-919.

76. Cress A. Nuclear matrix proteins are covalently linked to DNA after ionizing radiation. // Radiat. Res. -1985. Abstracts. - P. 94.

77. Cress A.E., Bowden G.T. Covalent DNA-protein cross-linking occurs after hyperthermia and radiation. // Radiat. Res. -1983. -V. 95. №3. - P.610-619.

78. Datta A.K., Mistra M., North S.I., Kasprzak K. Enhancement by nicel (II) and 1-histidine of 2'-deoxiguanosine oxidation with hydrogen peroxide. // Carcinogenesis. -1992. V. 13. - P. 283- 287.

79. Davis L.G., Dibner M.D., Battey J.F. Basic Methods in Molecular Biology. Elsevier Science Publishing Co., Inc., NewYork. 1986. - 388 p.

80. Farahani M.//18th Annual Sesion of the American Association for Dental Research. San-Francisco, California, USA, March 15-19,1989. I. Dent. Res. 68 (Spec.issue). -1989. P. 291.

81. Fennell, T.R. Development of methods for measuring biological markers of formaldehyde exposure // Res. Rep. Health Eff. Inst. -1994. V.67. - P. 1-26

82. Flora S., Wetterhahn K.E. Mechanisms of chromium, methabolism and genotoxicity. // Life Chem. Rep. -1989. -V. 7. P. 169 -244.

83. Fornace A.J., Kohn K.W. DNA-protein cross-linking by ultraviolet-radiation in normal human and xeroderma pigmentosum fibroblasts//Biochem. Biophys. Acta.-1976.- V.435.- №1. P.95-103.

84. Fornace A.J., Litlle J.B. DNA-crosslinking induced by X-ray and chemical agents. // Biochim. Biophys. Acta. 1977. - V. 477. - № 4. -P.343-355.

85. Fornace A.J., Litlle J.B. DNA-protein cross-linking by chemical carcinogens in mammalian cells. // Cancer Rec. 1979. - V. 39. - № 3.-P.704-710.

86. Fornace A.J.Jr., Seres D.S., Lechner J.F., Harris C.C. DNA-protein crosslinking by chromium salts. // Chem. Biol. Interact. 1981. -V. 36. -№ 3. -P.345-354.

87. Fornance A.J. Detection of DNA single-strand breaks produced during the repair of damage by DNA-protein crosslinking agents. // Cancer Res. -1982.-V.42.-P. 145-151.

88. Giocanti N., Ekert B. Radiochemical cross-linking between proteins and RNA within 70S ribosomal particles from E. coli. // Int. J. Radiat. Biol. -1981. V. 40. - № 5. - P.507-524.

89. Grafstrom R.C., Fornance A.J., Harris C.C. Repair of DNA damage caused by formaldehyde in human cells. // Cancer Res. -1984. -V. 44. -№ 10. P. 4323-4327.

90. Greer W.L., Kaplan J.G. DNA strand breaks in murine lymphocytes induction by purine and pyrimidine analogues//Biochem. Biophys. Res. Com. 1983.-V. 115. -№3.-P. 834-840

91. Hart R.W, Hall K.Y., Daniel F.B. DNA repair and mutagenesis in mammalian cells // Photochemistry and Photobiology -1978.- Vol. 28,- P. 131-155

92. Hawkins R.B. Quantitative determination of cross-linkage of bacteriophage DNA and protein by ionizing radiation // Int. J. Radiat. Biol. 1978. - V.33. - № 5. - P. 425-441.

93. He F., Xia S.X. DNA cross-links and their biological significance in SI 80-V mouse tumour cells treated with cis- platinum.// Acta Farmacol Siu. -1987. V. 8. - № 5. - P. 468-470.

94. Jiaan D.B., Monnier V.M., Zuik M., Pomerantz J., Cruz W., Hampel N., Fogarty J., Seftel A.D. Age-related increase in an advanced glycation end product in penile tissue // Word Jornal of Urology. -1995. V.13. - №6. -P.365-375

95. Johnson K., Chan A., Hanlon S. Mixed conformations of deoxyribonucleic acid in intact chromatin isolated by various preparative methods. // Biochemistry. 1972. - V. 11. - P. 4347-4349.

96. Juhaasz P.P., Sirota N.P., Gaziev A.I. Radiation-induced dissociation of stable DNA-protein complexes in Ehrlich ascites carcinoma cells. // Int. J. Radiat. Biol. 1982. - V. 42. - № 1. - P. 13-21.

97. Kagi J.H., Schaffer A. Biochemistry of metallothionein. // Biochemistry. -1988. -V. 27.-№23.-P. 8509-8515.

98. Katsifis S.P., Kinney P.L., Hosselet S., Burns F.G., Christie N.T. Interaction of nickel with mutagens in the induction of sister chromatid in human lymphocytes // Mutat. Res. 1996. - Vol. 359. - № 1. - P. 7-15.

99. Klein C.B., Frencel K., Costa M. The role of oxidative processes in metal carcinogenesis. // Chem. Res. Toxicol. -1991. V.4. - P. 592-604.

100. Kohn K.W., Friedman C.A., Ewing R.A., Igbal I.M. DNA-chain growth during replication of asynchronous L1210 cells. Alkaline elution of large DNA segments from cells lysed on filters. // Biochemistry. 1974. - V. 13. - №22. - P.4629-4637.

101. Kohn K.W., Grimek G., Ewing R.A. Alkaline elution analysis, a new apporach to the study of DNA single-strand interuptions in cells. // Cancer. Res. 1973. - V. 33. - № 8. - P. 1849-1853.

102. Kropacova K., Misurova E., Hakova H. Protective and therapeutic effect of silymarin on the development of latent liver damage. //Радиобиология. Радиоэкология. -1998. V.38. - № 3. - P. 44-48.

103. Labarca C., Paigen K. A simple, rapid, and sensitive DNA assay procedure. //Anal. Biochem. 1980. -V. 102. - P. 344-352.

104. Lai L.W., Rosenstein B.S. Induction of DNA strand breaks and DNA-protein cross-links in normal human skin fibroblasts following exposure to254 nm UV radiation.// J. Photochem. Photobiol. B. 1990. - V. 6. - № 4. -P. 395-404.

105. Lippard S.I. New chemistry of an old molecule: cis-Pt(NH3)2Cl2. // Science. 1982. - V. 218. - № 4577. -P. 1075-1082.

106. Lippard S.I., Hoeschele I.D. Binding of cis- and trans-dichlorodiamineplatinum (II) to the nucleosome core. // Proc. Nat. Acad.Sci. (USA). 1979. -V. 76. - P. 6091-6095.

107. Liu, L.F., Rowe, T.C., Yang, L., Tewey, K.M. and Chen, G.L. Cleavage of DNA by mammalian DNA topoisomerase II. // J. Biol. Chem. -1983. -V. 258.-P. 15365-15370.

108. McClellan R.O. Risk assessment and biological mechanisms: lessons learned, future opportunities // Toxicology.-1995.- V.102. №1-2. - P. 239-258

109. Mee L.K., Adelstein S.L. Radiolysis of chromatin extracted from cultured mammalian cells: Formation of DNA-protein crosslinks. // Int. J. Radiat. Biol. 1979.-V. 36. -P. 359-363.

110. Mee L.K., Adelstein S.L. DNA-protein crosslinks in gamma-irradiated chromatin. Proc. of Int. Conference on Mechanisms of DNA Damage and Repair, Gaithersberg, MD. 1985. - P. 242-244

111. Meyn R.E., Van Ankeren S.C., Jenkins W.T. The indication of DNA-protein crosslinks in hypoxic cells and their possible contribution to cell lethality // Radiation Research. 1987. - V.109. - №3. - P.419-429

112. Michel C. and Balla I. Interaction between radiation and cadmium or mercury in mouse embryos during organogenesis // Int. J. Radiat. Biol., 1987, Vol. 51, № 6, P. 1007-1019.

113. Moule I., Murean S., Autard R. Induction of cross-links between DNA and protein by PR toxin, a mycotoxin from Penicillium roquerfarti. // Mutat. Res. 1980. -V. 77. - №1. - P.79-90.

114. Moule I., Renauled N., Darraeq C., Doyce C. DNA-protein cross-linking by the mycotoxin, botryodiplodin, in mammalian cells.// Cancinogenesis.1982. V. 3.-№2. - P. 211-214.

115. Mullenders L.H.F., van Zeeland A.A., Natarajan A.T. Comparison of DNA loop size and super-coiled domain size in human cells. // Mutat. Res.1983. -V. 112. -P. 245-251.

116. Muller, M.T. Nucleosomes contain DNA binding proteins that resist dissociation by sodium dodecyl sulphate. // Biochim. Biophys. Res. Commun. 1983. - V. 114. - P. 99-106.

117. Murthy K.K., Friedman L.R., Oleinick N.L., Salomon R.G. Formation of DNA-protein cross-links in mammalian cells by levuglandin E 2. // Biochemistry. -1993. -V. 32. P. 4090-4097.

118. Murray D., Meyn R. Enhancement DNA cross-linking of melpalan by misonidozole in vivo. // Brit. J. Cane. -1983. V.47. - №2. - P. 195-203

119. Niggly H.J., Cerrutti P.A. Nucleosomal distribution of thymine photodimers following far- and near- ultraviolet irradiation. // Biohem. Biophys. Res. Commun. -1982. V. 105. - P. 1215-1218.

120. Oleinick N.L., Xue L.Y., Friedman L.R., Donahue L.L., Biaglow J.E. Inhibition of radiation-induced DNA-protein cross-links repair by glutatione depletion with L-buthionine sulfoximine. // NCI Natl. Cancer Inst. Monogr. -1988. №6. - P.225-230.

121. Oleinick N.L., Chiu S.M., Friedman L.R., Ramakrishnan N., Xue L.Y. Mechanism of DNA Damage and Repair Implications for Carcinogenesis Risk Assessment (Simic M., Grossman L., Upton. A., ed.) Plenum, New York. -1986. -P. 181-192.

122. Oleinick N.L., Chiu S.M., Friedman L.R. Gamma radiation as a probe of chromatin structure: Damage to and repair of active chroromatin in the metaphase chromosome. // Radiat. Res. 1984. - V. 98. - P. 629-634.

123. Oleinick N.L., Chiu S.-M., Ramakrishnan N., Xue L.-Y. The formation, identification, and significance of DNA-protein crosslinks in mammalian cells. // Br. J. Cancer. -1987. V. 55. - P. 135-140

124. Olinski R., Briggs R.C., Stein J., Stein G. Cross-linking of chromosomal proteins to DNA in HeLa cells by UV, gamma radiation and some antitumor drugs. // Radiat. Res. -1983. -V. 86. P. 102-109.

125. Olinski R., Briggs R.S., Hnilica L.S., Stein J., Stein G. Cross-linking of chromosomal non-histone proteins to DNA by UV radiation and some antitumor drugs. // Chem. Biol. Interact. -1981. -V.34. № 2. - P. 113-183.

126. Olive P. L. DNA organization affects cellular radiosensitivity and detection of initial DNA strand breaks //Int. J. Radiat. Biol. 1992. V.62. №4, P. 389-396

127. Peak J.G., Peak M.J., Sikorzki R.S., Jones C.A. Induction of DNA-protein crosslinks in human cells by ultraviolet and visible radiations: Action spectrum. //Photochem. Photobiol. -1985. -V. 41. C. 295-301.

128. Ramakrishnan N., Chiu S.-M., Oleinick N.L. Yield of DNA-protein crosslinks in y-irradiated Chinese hamster cells. // Cancer Res. 1987. - V. 47. -P. 2032-2037.

129. Rayshell M., Ross J., Werbin H. Evidence that N-acetoxy-N-acetyl-2-aminofluorene crosslinks DNA to protein by a free radical mechanism. // Carcinogenesis. 1983. -V. 47. - P. 501-508.

130. Roberts J.J. The repair of DNA modified by cytotoxic, mugenic and carcinogenic chemicals//Advances of Radiation Biology 1978 Vol. 7.- P. 211-434

131. Roberts J.J., Thomson A.J. The mechanism of antitumor platinum compound. // Prog. Nucleic. Acid. Res. Mol. Biol. -1979. V. 22. - P. 71133.

132. Rojas A. and Denekamp J. Modifiers of radiosensitivity // Experimentia. -1989,- Vol. 45.-P. 41-51.

133. Ross W.E., Memillian D.R., Ross C.F. Comparison of DNA damage by mthylmelamines and formaldehyde. // J. Natl. Cane. Inst. 1981. -V. 67. -№ 1. - P. 217-222.

134. Roy M.B., Mandal P.C., Bhattacharayya S.N. Radiosensitisation of thimine by copper (II) and nickel (II) complexes of metronidasole // Int. J. Radiat. Biol. 1996. - V. 69, № 4. - P. 471-480.

135. Salnikow K., Zhitkovich A., Costa M. Analysis of the binding sites of chromium to DNA and protein in vitro and in intact cells. // Carcinogenesis. -1992. -V. 14. -P.1678-1802.

136. Shetlar M.D. Photochemical and free radical initiated reactions of 1,3-dimetylthymine with isopropanol. // Photochem. Photobiol. Rev. 1980. -V. 5. - P. 105-197.

137. Schuessler H. // Proc. 8th Intern. Congress of Radiation Reseach: Edinburg, 1987. V. 2. - P. 152-157.

138. Sharp P., Sugden В., Sambrook J. Detection of two restriction endonuclease activities in Haemophillus parainfluenzae using analytical agarose-ethidium bromide electrophoresis.//Biochemistry. -1973. -V. 12. -P. 3055-3058.

139. Shooter K.V., House R., Merryfield R.K. Dobins A.B. The interaction of platinum II compounds with bacteriophages T7 and R17.// Chem. Biol. Interact. -1972. -V.5. -№ 5. P. 289-307.

140. Smith K.C. A mixed photoproduct of thymine and cysteine: 5-S-cysteine, 6-hydrothymine. // Biochem. Biophis. Res. Commus. -1961. V. 8. -P.157-163

141. Smith K.C. The radiation-induced addition of protein and other molecules to nucleic acids.// Photochemistry and Photobiology of nucleic acids.- NY. 1987. - P. 187-218

142. SmithK.C. A mixed photoproduct of thymine and cysteine: 5-S-cysteine, 6-hydrothymine. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1970. -V. 39. - P. 1011- 1016.

143. Snyder R.D. Effects of metal treatment on DNA repair in polyamine-depleted HeLa cells with special reference to nickel // Environ. Health Perspect. 1994. - V. 102, Suppl. 3. - P. 51-55.

144. Streffer C., Muller W.U. Radiation risk from combined exposures to ionizing radiation and chemicals // Advances in Radiat. Biol. 1984. - V. 11.-P. 173-210.

145. StrnisteG.F., RallS.C. Induction of stable protein-deoxyribonucleic acid adducts in Chinese hamster cell chromatin by ultraviolet light. // Biohemistry. 1976. - V. 15. - P. 1712-1720.

146. Tsapakos M.J., Hampton Т.Н., Wetterhahn K.E. Cromium(VI)-induced DNA lessions and chromium distribution in rat kidney, liver and lung. // Cancer Res. -1983. V. 43. - P. 5662-5667.

147. Wedrichowski A., Smidt W.N., Hnilica L.S. The in vivo cross-linking of protein and DNA by heavy metals // J. Biol. Chem. 1986. - V. 261, №7. -P. 3370-3376.

148. Wilkins B.J., MacLeod H.D. Formaldehyde induced DNA-protein crosslinks in E.coli//Mutat. Res. 1976. - V.36. - №1. - P. 11-16.

149. Williams J.I., Friedberg E.C. DNA excision repair in chromatin after ultraviolet irradiation of human fibroblasts in culture. // Biohemistry. -1979. -V. 18. P. 3965-3971.

150. Zhitkovitch A., Costa M. A simple, sensitive assay to detect DNA-protein cross-links in intact cells and in vivo // Carcinogenesis (1992), V. 13. -№8. P.1485-1489

151. Zwelling L.A., Bradley M.O., Sharkey N.A., Anderson Т., Kohn, K.W. Mutagenicity, cytotoxicity and DNA crosslinking in V-79 Chinese hamster cells treated with cis- and trans-Pt(II) diammine dichloride. // Mutat. Res. -1979. -V. 67. P. 271-280