Влияние растений семейства грушанковых на процессы свободно-радикального окисления: Экспериментальное исследование тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат биологических наук Арбузова, Яна Сергеевна

• Арбузова, Яна Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Арбузова, Яна Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Фармакологическая и фитохимическая характеристика растений семейства Грушанковых

1.1.1. Фармакологическая характеристика растений семейства Грушанковых

1.1.2. Ботанико-экологическая характеристика растений семейства Грушанковых

1.1.3. Фитохимическая характеристика растений семейства Грушанковых

1.2. Роль реакций свободно-радикального окисления в патогенезе воспалительной реакции

1.2.1. Общая характеристика некоторых свободно-радикальных продуктов и факторов антиоксидантной системы организма

1.2.2. Патогенетическая роль свободных радикалов и СРО в развитии воспалительной реакции

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Приготовление извлечений из растений

2.2. Определение прооксидантной и антиоксидантной активности препаратов из листьев Грушанковых в эксперименте in vitro

2.3. Определение показателей оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс в эксперименте in vivo

2.3.1. Определение показателей оксидантного статуса плазмы крови крыс

2.3.2. Определение показателей антиоксидантного статуса крови крыс

2.4. Моделирование реакций активации свободно-радикального окисления у экспериментальных животных

2.5. Изучение влияния длительного введения препаратов из растений семейства Грушанковых на показатели оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс с экспериментальным воспалением

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Влияние препаратов из растений семейства Грушанковых на процесс свободно-радикального окисления in vitro

3.2. Изменения показателей оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс в условиях оксидативного стресса, индуцированного экспериментальным воспалением

3.3. Влияние длительного применения препаратов из растений семейства Грушанковых на показатели оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс с экспериментальным воспалением

3.3.1. Эффекты водных и спиртовых извлечений зимолюбки зонтичной

3.3.2. Эффекты водных и спиртовых извлечений ортилии однобокой.

3.3.3. Эффекты водных и спиртовых извлечений грушанки круглолистной.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние растений семейства грушанковых на процессы свободно-радикального окисления: Экспериментальное исследование»

Актуальность. Несмотря на успехи химии, давшей медицине множество новых эффективных лекарственных препаратов, использование лекарственных растений приобретает все большие масштабы. Опыт практической медицины показывает, что разумное сочетание сильнодействующих синтетических средств с фитопрепаратами часто приводит к успешному лечению заболеваний. Все возрастающему вниманию к фитотерапии способствует большое число случаев непереносимости ряда синтетических препаратов и антибиотиков, лежащих в основе ятрогенных (лекарственных) болезней, в то время как препараты растительного происхождения отличаются малой токсичностью, возможностью длительного применения без существенных побочных явлений. Это позволяет использовать лекарственные растения с целью профилактики и лечения хронических заболеваний человека [38, 48].

Действующие вещества в составе препаратов растительного происхождения бывают представлены, как правило, компонентами различных классов растительных соединений. Однако, пристальное внимание сегодня уделяется изучению растительных фенолов, к числу которых относятся биофлавоноиды. Интерес к флавонои-дам очень велик ввиду присущей им антиоксидантной активности и широкого спектра биологических эффектов [41]. Существует много доказательств противомикробного и противовирусного действия флавоноидов, а также антиканцерогенной, антиагрегантной, противовоспалительной, антиаллергической, гепатопротекторной и антиоксидантной активности [38, 72, 73, 75, 81, 83, 87, 88, 93, 102, 104, 110, 111, 112, 113, 120, 127, 128, 130, 132, 133, 134, 135, 136, 138, 139, 149, 154, 155, 157, 158, 161, 172, 177, 181, 183, 185]. При многообразии тематики публикаций, посвященных изучению биологических свойств флавоноидов и растений, их содержащих, прослеживается основная идея, заключающаяся в непосредственном участии флавоноидов в процессах активации свободно-радикального окисления.

Многообразие флоры Алтая создает хорошие предпосылки для постоянного пополнения арсенала лекарственных растений, применяемых в различных областях медицины, в том числе флавоно-идсодержащих растений [11]. На протяжении последних лет нами ведется активная исследовательская работа по изучению фармакологических эффектов различных представителей местной флоры, в частности растений семейства Грушанковых, достаточно распространенных в смешанных лесах Алтая [12,, 13].

Растения сем. Грушанковых (Pyrolaceae) зимолюбка зонтичная (Chimaphyla umbellate (L.) W. Barton), ортилия однобокая (Orthilia secunda (L.) House.) и грушанка круглолистная (Pyrola rotundifolia L.) традиционно применяются в народной медицине при воспалительных заболеваниях почек. Важно отметить, что Грушанковые филогенетически близки растениям сем. Вересковых, среди которых - толокнянка обыкновенная, являющаяся известным уроанти-септиком. Ранее в нашей лаборатории установлено, что содержание фенольных соединений в листьях Грушанковых не уступает содержанию последних в листьях толокнянки, а противовоспалительная и мочегонная активность отваров зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной сопоставима с активностью водных извлечений из листьев толокнянки, что позволяет рекомендовать их для лечения воспалительных заболеваний мочевыделительной системы [11, 12, 13, 40].

В настоящее время известно, что во всех клетках организма происходит непрерывный процесс образования свободных радикалов, являющийся частью нормального функционирования организма [7, 43, 58, 63, 107, 183]. Чрезвычайно высокая окислительная способность свободно-радикальных частиц обусловливает их участие в многочисленных метаболических процессах, включающих перекисное окисление липидов, необходимое для обновления клеточных мембран, активацию мембранных ферментов митохондрий, участвующих в синтезе макроэргов, деструкцию ксенобиотиков в эндоплазматическом ретикулуме (прежде всего в печени), участие в процессах индукции факторов иммунитета [16, 35, 36, 37, 58, 80, 91, 95, 97, 103, 147, 165, 169].

Однако, важное физиологическое значение радикалы имеют лишь при низком стационарном уровне, поддерживаемом системой антиоксидантной защиты, представленной комплексом ферментных и неферментных антиоксидантов. При гиперпродукции свободных радикалов или длительной стимуляции антиоксидантной системы, ведущей к истощению ее ресурсов, возникает оксидатив-ный стресс, при котором свободно-радикальные частицы приобретают патогенетическое значение, ведущее к повреждению клеточных структур, что чревато развитием различных заболеваний [7, 43, 58, 78, 107, 108, 109, 144, 145, 148, 184].

Существует множество научных доказательств вовлечения реакций свободно-радикального окисления (СРО) в процессы клеточного повреждения, играющих значительную роль в развитии многих патологических состояний организма. Клинические наблюдения и эпидемиологические данные подтверждают участие СРО в развитии атеросклероза, сахарного диабета, дегенеративных заболеваний нервной системы, сердечно-сосудистых заболеваний, таких как ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, эссенци-альная гипертония. Многочисленные исследования свидетельствуют, что процессы свободно-радикального окисления лежат в основе хронических заболеваний печени, токсичности ксенобиотиков, инфекционных и аутоиммунных процессов, новообразований, заболеваний мочевыделительной системы [62, 64, 66, 67, 70, 82, 84, 86, 90, 92, 93, 97, 98, 11 1, 115, 116, 119, 122, 125, 144, 160, 166, 174, 178, 186]. Оксидативное повреждение клеточных мембран свободно-радикальными формами кислорода имеет место при воспалительных процессах, шоке, ишемических и реперфузионных поражениях органов [78, 122, 179].

Широкое участие свободно-радикальных процессов в патогенезе различных патологических состояний, затрагивающих все без исключения органы и системы, ставит вопрос о необходимости профилактики и коррекции таких нарушений фармакологическими средствами. В этих условиях для поддержания гомеостаза патогенетически оправданным является применение препаратов-антиоксидантов, способных тем или иным способом предотвращать избыточный синтез свободно-радикальных интермедиатов, снижать чрезмерную интенсивность СРО, а также способствовать повышению активности эндогенной антиоксидантной системы [58, 79, 89, 179, 184, 185].

Учитывая роль свободно-радикального окисления в развитии воспалительных заболеваний и противовоспалительные свойства извлечений из листьев Грушанковых, мы рискнули предположить, что фармакологическая активность последних может быть обусловлена влиянием на процессы свободно-радикального окисления.

Цель исследования. Расширить фармакологическую характеристику и установить возможные механизмы действия водных и спиртовых извлечений из листьев растений семейства Грушанко-вых (Pyrolaceae): зимолюбки зонтичной - Chimaphyla umbellate (L.) Barton, ортилии однобокой - Orthilia secunda (L.) House, и грушанки круглолистной - Pyrola rotundifolia L.

Задачи исследования:

1. Исследовать влияние отваров и настоек зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной на процессы свободно-радикального окисления в эксперименте in vitro.

2. Разработать экспериментальную модель активации свободно-радикального окисления на подопытных животных.

3. Изучить изменения показателей оксидантного и антиокси-дантного статуса у интактных животных и на фоне экспериментального воспаления.

4. Исследовать влияние длительного введения водных и спиртовых извлечений из листьев зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной на изменения показателей оксидантного и антиоксидантного статуса у крыс на фоне экспериментальной активации свободно-радикального окисления.

5. Выявить извлечения с наибольшей антиоксидантной активностью.

Научная новизна. Впервые было проведено определение про-оксидантной и антиоксидантной активности препаратов из листьев зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной как в эксперименте in vitro, так и у подопытных животных на фоне экспериментальной активации свободно-радикального окисления. Установлены антиоксидантные свойства ряда использованных извлечений, выявлены препараты, обладающие наибольшей активностью.

Практическая значимость. Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать отвары и настойки зимолюбки, ортилии и грушанки для клинических испытаний в качестве эффективных антиоксидантных средств. Изученные растения могут служить основой для создания новых препаратов, применяемых в клинике внутренних болезней для лечения воспалительных заболеваний.

Полученные результаты расширяют знания относительно анти-оксидантной активности флавоноидсодержащих растений, увеличивая возможности фитотерапии.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Водные и спиртовые извлечения из листьев зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной оказывают выраженное (хотя и разнонаправленное) влияние на процессы свободно-радикального окисления в условиях in vitro.

2. В экспериментах на крысах разработана новая адекватная экспериментальная модель активации свободно-радикального окисления.

3. На фоне экспериментального воспаления отмечается значительная динамика показателей оксидантного и антиоксидант-ного статуса подопытных животных.

4. Длительное введение водных и спиртовых извлечений из листьев изученных растений оказывает благоприятное влияние на течение экспериментального оксидативного стресса.

5. В условиях длительного применения наибольшую антиоксидантную активность проявляют отвары зимолюбки.

Апробация материалов диссертаци: Материалы диссертации доложены на XII съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (г. Санкт-Петербург, 2004 г.), на конференции, посвященной 50-летию АГМУ (г. Барнаул, 2004 г.), на Всероссийской научно-практической конференции "Болезни почек: эпидемиология, диагностика, лечение" '(г. Кызыл, 2004 г.), на VI городской конференции "Молодежь - Барнаулу" (г. Барнаул, 2004 г.), на совместной научно-практической конференции АГМУ и фармацевтической компании "Эвалар" (г. Бийск, 2004 г.), на VI конгрессе молодых ученых и специалистов (г. Томск, 2005 г.), на Всероссийской научно-практической конференции (г. Новосибирск, 2005 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 167 страницах машинописного текста, иллюстрирована 42 рисунками, тремя таблицами, состоит из введения, списка условных сокращений, 3 глав, заключения, выводов, списка цитируемой литературы, в котором приведено 186 источников, из них 124 - иностранных авторов.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Арбузова, Яна Сергеевна

ВЫВОДЫ

1. Водные и спиртовые извлечения из листьев зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной оказывают выраженное влияние на процессы свободно-радикального окисления, моделируемые in vitro. Более выраженное воздействие на процессы пероксидации in vitro оказывают отвары Грушанковых, среди которых максимальный антиоксидантный эффект выявлен у отваров зимолюбки.

2. Для спиртовых извлечений из листьев Грушанковых наравне с антиоксидантной активностью in vitro характерны значительные прооксидантные свойства.

3. Длительное введение водных и спиртовых извлечений из листьев Грушанковых оказывает благоприятное влияние на течение моделируемого оксидативного стресса у животных с экспериментальным воспалением.

4. Максимальное снижение содержания свободно-радикальных прооксидантов в плазме крови крыс на фоне экспериментального воспаления происходит в условиях длительного введения отваров зимолюбки зонтичной. Отвары грушанки проявляют выраженные свойства прооксидантов.

5. Для настоек Грушанковых наравне с антиоксидантным действием установлена некоторая прооксидантная активность, обусловленная присутствием в качестве экстрагента этилового спирта. При этом настойка ортилии на 70° этаноле делает наибольший вклад в повышение уровня свободно-радикальных продуктов в крови.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время общепризнанным является широкое участие процессов свободно-радикального окисления в развитии различных патологических состояний, в частности заболеваний, имеющих воспалительную компоненту. Принимая во внимание ключевую роль свободно-радикальных интермедиатов в прямом или косвенном повреждении всех без исключения органов и систем организма, патогенетически оправданным является применение с целью профилактики и лечения воспалительных заболеваний препаратов из группы антиоксидантов. Несмотря на длительный исторический период изучения проблематики свободно-радикального окисления и огромное количество исследовательских работ, список препаратов, обладающих антиоксидантным действием, в частности препаратов растительного происхождения, весьма ограничен, а потому вопрос поиска новых антиоксидантных средств и внедрения их в практику является чрезвычайно актуальным.

В последние годы пристальное внимание уделяется изучению препаратов из растений - продуцентов биофлавоноидов. Существует масса экспериментальных данных, доказывающих противо-микробное, противовирусное действие флавоноидов, а также их антиканцерогенную, антиагрегантную, противовоспалительную, антиаллергическую, гепатопротекторную и антиоксидантную активность.

Растения семейства Грушанковых (зимолюбка зонтичная, ор-тилия однобокая и грушанка круглолистная), произрастающие на территории Алтайского края, традиционно применяются в народной медицине при воспалительных заболеваниях мочеполовой сферы. Ранее в нашей лаборатории установлено, что содержание фенольных соединений в листьях зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной не уступает содержанию последних в листьях известного уроантисептика - толокнянки обыкновенной, а мочегонные и противовоспалительные эффекты отваров Грушанковых сопоставимы по силе с эффектами отваров толокнянки [40]. Принимая во внимание ключевое значение перок-сидации в развитии воспаления, а также установленную ранее значительную фармакологическую активность отваров Грушанковых, возник вопрос, не обусловлено ли противовоспалительное действие препаратов Грушанковых возможным их влиянием на процессы свободно-радикального окисления?

С целью предварительной оценки возможного влияния водных и спиртовых извлечений из листьев зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной на процессы СРО нами были поставлены эксперименты по определению оксидантной и антиоксидантной активности препаратов в условиях in vitro. Для этого готовили отвары из листьев названных растений в соотношении 1:10 и настойки в соотношении 1:5. При этом настойки из листьев зимолюбки зонтичной и ортилии однобокой готовились на 70% спирте, из листьев грушанки круглолистной - с использованием 40% этанола. Все извлечения изготавливали согласно методикам Государственной Фармакопеи СССР (1986).

В ходе экспериментов по определению общей прооксидант-ной активности, базирующихся на способности препаратов стимулировать в условиях in vitro окисление ТВИН-80, установлено, что наименьшими прооксидантными свойствами обладают отвары зимолюбки зонтичной. Иными словами, в опытах in vitro отвары зимолюбки практически не обладали способностью индуцировать напрямую перекнсное окисление клеточных мембран, которые имитирует ТВИН-80. Наряду с этим отвары зимолюбки проявили самую высокую антиоксидантную активность, определение которой основано на способности препаратов подавлять в условиях in vitro окисление ТВИН-80, индуцированное аскорбатом железа. Отвары же ортилии однобокой и грушанки круглолистной проявили в эксперименте довольно выраженные прооксидантные свойства на фоне более низких показателей антиоксидантной активности. Таким образом, мы заключили, что, несомненно, водные извлечения из листьев Грушанковых оказывают существенное, хотя и разнонаправленное, влияние на течение процессов свободно-радикального окисления, моделируемые in vitro. Принимая во внимание особенности модели СРО in vitro, а также высокие показатели общей антиоксидантной активности отваров зимолюбки, мы предположили, что возможно, последние обладают способностью напрямую улавливать свободные радикалы и, тем самым, подавлять процесс пероксидации, то есть, выступать в роли прямых ан-тиоксидантов.

При установлении возможного влияния спиртовых извлечений из листьев Грушанковых на процессы свободно-радикального окисления in vitro, а также для адекватного сравнения выраженности их оксидантных и антиоксидантных свойств с эффектами отваров необходимо было принять во внимание то, что при изготовлении настоек из листьев исследуемых растений используется спирт в концентрации 40° (настойки грушанки) и 70° (настойки зимолюбки и ортилии). Перед нами стоял вопрос: может ли этиловый спирт, присутствующий в настойках Грушанковых оказывать сколько-нибудь значимое влияние на процессы СРО in vitro и, как следствие, модулировать оксидантные и антиоксидантные свойства Грушанковых?

В ходе определения возможного влияния 40° и 70° этанола на процессы пероксидации в условиях in vitro установлено, что оба разведения этилового спирта обладают низкой прооксидантной и антиоксидантной активностью. Однако, при этом, в отличие от 40° этанола, вероятно в силу более высокой концентрации, 70° спирт обладает более значительной оксидантной активностью. Этот факт, необходимо принимать во внимание при оценке эффектов настоек из растений, изготовленных на 70° этаноле. Можно было ожидать, что последний будет выступать не только в роли экстра-гента, но и в качестве агента, потенцирующего прооксидантные свойства настоек Грушанковых.

В результате эксперимента по установлению возможного влияния спиртовых извлечений Грушанковых на СРО in vitro установлено, что настойки ортилии, изготовленные на 70° спирте, обладают наименьшей прооксидантной способностью по сравнению с настойками зимолюбки и грушанки. Причем способность настойки ортилии индуцировать пероксидацию ТВИН-80 была существенно ниже, чем у отваров той же ортилии. Однако, наравне со снижением оксидантной активности снижается и антиоксидантная активность настойки ортилии. Возможно, благодаря введению 70° этанола в изготовление настойки из ортилии извлекается меньше водорастворимых прооксидантов и веществ с антирадикальным действием, чем при изготовлении отваров, что закономерно приводит к некоторому угасанию ее эффектов. Подобная картина наблюдается у настойки зимолюбки, у которой антиоксидантная активность почти в 2 раза ниже, чем у отваров этого растения. При этом существенно усиливаются оксидантные эффекты. Возможно, в случае зимолюбки, присутствие 70° спирта не только обусловливает меньшее содержание водорастворимых антиоксидантов в настойке, но и приводит к потенцированию ее оксидантных эффектов по сравнению с отваром. Настойка же грушанки на 40° этаноле проявила четко выраженные свойства прооксиданта. Причем, ок-сидантные эффекты настойки грушанки сопоставимы по силе с таковым у отваров грушанки на фоне снижающейся до минимума ан-тиоксидантной активности. Учитывая, что 40° этанол не влияет на СРО in vitro, как показано нами ранее, мы предположили, что введение 40° этанола при изготовлении настойки грушанки существенно снижает антиоксидантную активность последней по сравнению с отваром и наделяет ее исключительно свойствами прооксиданта.

Таким образом, суммируя предварительные данные, полученные нами в ходе эксперимента in vitro, мы заключили, что водные извлечения из листьев Грушанковых обладают более выраженным влиянием на процессы СРО, чем спиртовые. Причем среди них наибольшей активностью обладают отвары зимолюбки зонтичной, которые, возможно, выступают в роли «ловушек» для свободных радикалов, и, тем самым, способны прямо подавлять процесс пе-роксидации. Среди исследуемых настоек наибольшей активностью in vitro обладают настойки ортилии, изготовленные на 70° этаноле и проявляющие наименьшие прооксидантные эффекты по сравнению с настойками зимолюбки и грушанки. У настойки же грушанки выявлены выраженные прооксидантные свойства.

Учитывая данные, полученные в ходе предварительного анализа оксидантных и антиоксидантных эффектов водных и спиртовых извлечений из листьев Грушанковых in vitro, мы предположили, что препараты Грушанковых могут влиять на процессы СРО и в условиях организма. Для установления возможности этого влияния нами была разработана экспериментальная модель активации СРО у белых беспородных крыс обоего пола массой 200-250 г. С целью активации СРО была избрана модель острого воспаления, индуцированного у крыс. В качестве модели воспаления использовали методику образования формалинового отека обеих задних лап животных. Через 1, 2, 3, 5 суток после субплантарных инъекций раствора формалина определяли показатели оксидантной (ТБРП и ОПА) активности плазмы и антиоксидантной (КАТ, СОД, ГПО, ОАА) активности. Оказалось, что уже в первые сутки после инъекции флогистика значительно возрастает содержание свободно-радикальных прооксидантов и продуктов пероксидации в плазме крови животных, свидетельствующих о взрыве реакций СРО и ок-сидативном стрессе. В последующие сутки на фоне всевозрастающей концентрации прооксидантов отмечается значительное снижение ТБРП. Рискнем предположить, что, возможно, подобное поведение ТБРП и ОПА обусловлено активацией неких протектив-ных факторов антиоксидантной системы организма, направленных, прежде всего, на «оборону» клеточных мембран против свободных радикалов. В то время как иные факторы антиоксидантной защиты, напрямую «улавливающие» радикалы, еще не активировались или активировались в недостаточной степени. В последующие сутки вовлекаются все возможные факторы антирадикальной защиты, что приводит к значительному снижению ТБРП и ОПА до значений, присущих здоровым животным.

Параллельно на фоне экспериментального воспаления отмечается значительная динамика показателей активности антиокси-дантных ферментов крови крыс. Уже в первые сутки экспериментального отека в ответ на рост концентрации прооксидантов в крови крыс значительно активизируется фермент каталаза, в то время как СОД и ГПО проявляют менее лабильный характер. Вероятно, одной из причин столь «отсроченного» вступления этих энзимов в борьбу с радикалами может быть необходимость достижения нео гр кои пороговой концентрации последних. Таким образом, мы заключили, что именно каталаза — энзим первой линии антиокси-дантной защиты, к которому позднее последовательно подключаются ГПО и СОД. Кроме того, динамика каталазы на фоне развития оксидативного стресса имеет постепенный характер, в отличие от СОД и ГПО. Так, для СОД характерен довольно длительный латентный период индукции, сменяющийся резким взлетом активности, совпадающий с третьими сутками эксперимента, после чего активность фермента поддерживается (даже на фоне низкой концентрации прооксидантов) на высоком уровне. Для индукции же ГПО требуется меньше времени, чем в случае с СОД, однако и активность фермента угасает гораздо быстрее. Вероятно, последнее обусловлено быстрым истощением глутатиона, играющего ключевую роль в глутатионпероксидазной системе. Таким образом, максимальная активация антиоксидантной системы организма крыс приходится на третьи сутки экспериментального воспаления и совпадает с пиком воспалительной реакции.

На пятые сутки экспериментального воспаления отмечается значительное снижение всех антиоксидантных показателей, обусловленное, вероятно, снижением в крови концентрации прооксидантов. Это свидетельствует о «затухании» свободно-радикальных реакций и, как следствие, об окончании воспалительного процесса. Таким образом, можно сделать вывод, что на фоне экспериментального формалинового воспаления наблюдается резкая активация процессов свободно-радикального окисления, а пиком экспериментального воспаления следует считать третьи сутки формалинового отека.

В результате экспериментов на подопытных животных с экспериментальным воспалением, предварительно получавших водные и спиртовые извлечения Грушанковых, установлено, что наибольшее влияние на процессы СРО оказывают водные извлечения Грушанковых. Причем, наибольшей активностью обладают отвары зимолюбки зонтичной. Так, на фоне экспериментального формалинового отека отвары зимолюбки снижают содержание свободных радикалов более чем в 3,5 раза. Этот факт подтвердил наши ожидания предполагаемого механизма действия отваров зимолюбки. Таким образом, можно сделать вывод, что водные извлечения зимолюбки зонтичной оказывают самое непосредственное влияние на процессы пероксидации, причем, прежде всего, выступая в роли прямых антиоксидантов. Иными словами, отвары зимолюбки способны напрямую уничтожать свободные радикалы, практически без помощи «внутренних» факторов антиоксидантной системы организма. Это не только приводит к быстрому «угасанию» оксида-, тивного стресса, но и препятствует излишней активации дорогостоящих для организма антиоксидантных энзимов.

В отличие от отваров, настойка зимолюбки на 70° этаноле проявила меньшую способность непосредственно подавлять СРО. Содержание прооксидантов на фоне длительного введения настойки зимолюбки снижается в меньшей степени, чем на фоне введения отваров зимолюбки. Последнее, вероятно, обусловлено присутствием в настойке 70° этанола, проявляющего свойства прооксидан-та. Однако это компенсируется более высокой активностью антиоксидантных энзимов. Кроме того, учитывая довольно высокий антиоксидантный статус животных, получавших настойку зимо-. любки, по сравнению с крысами, получавшими отвары зимолюбки, можно сделать вывод, что спиртовые извлечения из листьев зимолюбки сочетают в себе свойства не только прямых антиоксидан-тов, но и антиоксидантов, косвенно ингибирующих СРО, посредством стимуляции антиоксидантных факторов организма.

Подобно отварам зимолюбки, длительное введение отваров ортилии однобокой вызывает значительное снижение показателей оксидантного статуса. Так, у животных, получавших отвары ортилии, содержание прооксидантов в плазме крови снижалось почти в 2 раза, что, в свою очередь, указывает на способность отваров ортилии проявлять прямые антиоксидантные свойства. При этом, однако, у животных отмечается значительное повышение общего ан-тиоксидантного статуса на фоне довольно низкой активности антиоксидантных энзимов. Это позволило нам сделать вывод, что наряду со способностью выступать в роли «ловушек» для свободных радикалов, отвары ортилии стимулируют некоторые факторы антиоксидантной защиты организма, нами не определявшиеся. Вероятно, отвары ортилии, в отличие от отваров зимолюбки, проявляют и прямое, и косвенное воздействие на течение СРО у подопытных животных.

Для настойки ортилии, изготовленной на 70° этаноле, также характерна способность снижать активность ферментов антиоксидантной защиты каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпе-роксидазы. При этом общий антиоксидантный статус крыс, получавших спиртовое извлечение ортилии, так же, как и в случае с ее водными извлечениями, остается на высоком уровне. Так что, можно предположить, что подобно отварам, настойка ортилии обладает способностью стимулировать некие другие антиоксидантные факторы организма, кроме, определяемых нами энзимов, и, тем самым, подавлять течение оксидативного стресса. Однако, на фоне введения настойки ортилии отмечается довольно высокая концентрация радикальных прооксидантов. Последнее, вероятно, обусловлено присутствием 70° спирта, который, как указано ранее, обладает прооксидантным действием, а потому нивелирует анти-оксидантные эффекты ортилии.

В отличие от отваров зимолюбки и ортилии, на фоне длительного введения отваров грушанки в крови подопытных животных значительно возрастает содержание прооксидантов. Вероятно, отвары грушанки не обладают способностью прямо «улавливать» свободные-радикалы, либо содержат наравне с антиоксидантами, вещества прооксидантного характера, противодействующие антирадикальным эффектам грушанки. Причем последнее предположение выглядит более убедительно, поскольку недавно в нашей лаборатории установлено, что из всех изучаемых препаратов Гру-шанковых, только отвары грушанки круглолистной содержат кофейную кислоту [15]. Между тем, давно известно, что при окислении фенольных кислот образуется значительное количество супероксида, запускающего дальнейшее образование других более токсичных радикалов [1]. Возможно, именно присутствие кофейной кислоты и определяет некоторые прооксидантные свойства отваров грушанки, а также довольно высокие концентрации свободно-радикальных интермедиатов в крови животных. Кроме того, с этой позиции можно объяснить низкую активность каталазы и глутати-онпероксидазы на фоне высокого антиоксидантного статуса животных. Возможно, длительное введение отваров грушанки приводит к значительной «перегрузке» ферментных систем организма и истощению запасов каталазы и глутатиона. Однако, несмотря на присутствие довольно выраженных прооксидантных эффектов, грушанка, по всей вероятности, стимулирует ряд факторов антиок-сидантной системы организма ферментной или неферментной природы, что и объясняет высокую антиоксидантную активность крови подопытных животных.

В результате эксперимента по выявлению возможного влияния на процессы СРО длительного введения настойки грушанки круглолистной на 40° этаноле, установлено, что спиртовые извлечения грушанки обладают гораздо меньшей прооксидантной активностью, нежели отвары. По характеру проявляемых эффектов, настойка грушанки имеет значительные сходства с настойкой зимолюбки зонтичной. В отличие от отваров, настойка грушанки значительно снижает содержание прооксидантов в крови животных. При этом активность антиоксидантных ферментов сопоставима с показателями в норме. Этот факт, вероятно, обусловлен, присутствием 40° спирта. Возможно, в процессе приготовления спиртового извлечения в настойку извлекается меньшее количество водорастворимых прооксидантов, а потому не столь существенно их влияние на буферную емкость ферментных систем, в связи с чем не происходит их истощения. Следовательно, можно предположить, что в сравнении с отварами грушанки, проявляющими значительный прооксидантный характер, настойка грушанки сочетает в себе свойства как прямых, так и непрямых антиоксидантов.

Принимая во внимание результаты экспериментов на подопытных животных с экспериментальной активацией реакций СРО, данные ранних экспериментов по изучению фармакологических эффектов отваров Грушанковых вполне объяснимы. Так, ранее показано, что отвары из листьев грушанки круглолистной обладают более выраженной по сравнению с отварами зимолюбки и ортилии противовоспалительной активностью [41]. Вероятно, это обусловлено фитохимическими особенностями грушанки круглолистной, в водных извлечениях которой методом высокоскоростной газожидкостной хроматографии установлено наибольшее содержание арбутина (90,89 мг%), аскорбиновой кислоты (2,07 мг%), рутина (36,6 мг%), кверцетина (0,2 мг%), а также оксикоричных кислот по сравнению с отварами других Грушанковых [15]. Известно, что эти вещества являются мощными природными антиоксидантами и определяют значительные антиоксидантные свойства растений, их содержащих. В то же время, как выяснилось, длительное профилактическое введение отваров грушанки подопытным животными на фоне экспериментальной активации СРО приводит к значительному росту антиоксидантного статуса животных на фоне низкой активности антиоксидантных ферментов (каталазы, супероксид-дисмутазы и глутатионпероксидазы). Учитывая, что антиокси-дантный статус организма включает в себя различные факторы антирадикальной защиты, и ферментной и неферментной природы, можно сделать вывод, что отвары грушанки способствуют угнетению воспалительной реакции, в том числе, и за счет увеличения в организме содержания неферментных антиоксидантов, в частности, фенольных соединений.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Арбузова, Яна Сергеевна, 2006 год

1. Аверьянов A.A. Участие супероксидного радикала в механизме токсичности кофейной кислоты / A.A. Аверьянов, В.П. Лапикова, Г.Г. Петелина // Биохимия . 1984. — Т. 49, вып. 2 -С. 321-326.

2. Адо А.Д. Патологическая физиология: Учеб. для мед. вузов / А.Д.Адо, В.В. Новицкий. Томск: Изд-во Том. Ун-та, 1994. - 466с.

3. Айзенман Б.Е. Фитонциды и антибиотики высших растений / Б.Е. Айзенман, В.В. Смирнов, A.C. Бондаренко. — Киев: Здоров я, 1984. 278 с.

4. Акопов И.Э. Важнейшие отечественные лекарственные растения и их применение / И.Э. Акопов. Ташкент: Медицина, 1990. - 440 с.

5. Акопов И.Э. Кровоостанавливающие растения / И.Э. Акопов. Ташкент: Медицина, 1981. - 296 с.

6. Алексеев Ю.Е. Лесные травянистые растения. Биология и охрана: Справочник / Ю.Е. Алексеев, М.Г. Вахромеева, Л.В. Денисова, С. В. Никитина. М.: Агропромиздат, 1988. -223с.

7. Барабой В.А. Роль перекисного окисления в механизме стресса / В.А. Барабой // Физиологический журнал. 1989. -т. 35, №5. - С.85-97.

8. Блажей А. Фенольные соединения растительного происхождения / А'. Блажей, Л. Шутый. М.: Мир, 1977. — 239 с.

9. Блинова К.Ф. Растения для нас. Справочное издание / К.Ф. Блинова, В.В. Вандышев, М.Н. Комарова и др.; Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. СПб.: Учебная книга, 1996. - 653 с.

10. Брюханов В.М. Влияние растений семейства Грушанковых на функцию почек в эксперименте / В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, Е.М. Санаров, Т.Н. Пензина, О.В. Леонидова // Фармация. 1997. №4.- С.41-42

11. Верещагин В.И. Полезные растения Западной Сибири / В.И. Верещагин, К.А. Соболевская, А.И. Якубова. М., Л.: Изд-во АН СССР, 1959. - 348 с.

12. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. — М.: Наука, 1972. -252с.

13. Воллосович А.Г. материалы к изучению народной медицины Брянской области / А.Г. Воллосович // Вопросы фармакогнозии. Л., 1965.-Т. 19, вып. З.-С. 179-184.

14. Галактионова Л.П. Состояние перекисного окисления у больных с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки / Л.П. Галактионова, A.B. Молчанов, С.А. Ельчанино-ва, Б.Я. Варшавский // Клин. лаб. диаг. 1998. -С.11-14.

15. Галютева Г.И. Влияние арбутинсодержащих растений на мочеотделение у крыс / Г.И. Галютева. Лекарственные растения Алтайского края. Томск, 1986. - С. 31-36.

16. Галютева Г.И. Диуретические свойства арбутинсодержащих растений / Г.И. Галютева // Регуляция функции почек и вводно-солевого обмена. Барнаул, 1987. - Вып. 7. — С. 5256.

17. Гаммерман А.Ф. Лекарственные растения дикорастущие / А.Ф. Гаммерман, И.Д. Юркевич. Минск: Наука и техника, 1966. - 389 с.

18. Гессен В.К. К исследованию химического состава гру-шанки круглолистной / В.К. Гессен // Лекарственные сырьевые ресурсы Иркутской области. — Иркутск, 1961. — Вып. 3. — С. 34-35.

19. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. 11-е изд., доп. М.: Медицина, 1989. - 400 с.

20. Гринкевич Н.И. Химический анализ лекарственных растений / Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. М.: Высш. шк., 1983.- 176 с.

21. Ефремова H.A. Лекарственные растения Камчатки и Командорских островов / H.A. Ефремова. Петропавловск — Камчатский, 1967. - 123 с.

22. Запрометов М.Н. Достижения и перспективы биохимии фенольных соединений / М.Н. Запрометов // Фенольные соединения и их биологические функции. М.: Наука, 1968. -С. 109-128.

23. Запрометов М.Н. Основы биохимии фенольных соединений / М.Н. Запрометов. М.: Высш. шк., 1974. - 214 с. J

24. Зверев Я.Ф. Противовоспалительное действие диуретиков : Дисс. .д-ра мед наук / Я.Ф. Зверев. Барнаул, 1993. -231с.

25. Землинский С.Е. Лекарственные растения СССР / С.Е. Землинский. М.: Медгиз, 1958. - 610 с.

26. Исламбеков Ш.Ю. Растительные дубильные вещества. Зависимость дубящих свойств экстрактов от их соединений / Ш.Ю. Исламбеков, А.К. Каримджанов А.К., С.М. Мавлянов, А.И. Исмаилов // Химия природных соединений. 1990. -№3, - С. 293-299.

27. Клышев Л.К. Флавоноиды растений (распространение, физико-химические свойства, методы исследования) / Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина. — Алма-Ата: Наука, 1978.- 220 с.

28. Крылов Г.В. Зеленая аптека / Г.В. Крылов, Н.Ф. Козакова, Э.В. Степанов. Кемерово: Современ. отечествен, книга, 1993.- 334 с.

29. Крылов Г.В. Флора Западной Сибири: Рук-во к определению западно-сибирских растений / Г.В. Крылов. При сотрудничестве Б.К. Шишкина и др. Томск, 1937. - Вып. 9. С. 2089-2400.

30. Кулеш Н.И. Особенности химического состава двух видов Руго1а Ъ. на северных границах ареалов / Н.И. Кулеш, Н.П. Красовская, П.Г. Горовой, О.Б. Максимов // Растительные ресурсы. 1988. - Т. 24, вып. 3. - С. 420-424.

31. Ланкин В.З. Ферментативное перекисное окисление ли-пидов / В.З. Ланкин // Укр. биохим. журн., 1984. Т. 56, №3. — С.317-331.

32. Литвицкий П.Ф. Патофизиология. Курс лекций: Учеб. для мед. вузов / П.Ф. Литвиций, Н.И. Лосев, В.А. Войнов и др. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1997. - 752с.

33. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика / Ф.З. Меерсон. М.: Наука, 1981. - 278с.

34. Минаева В.Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование / В.Г. Минаева. — Новосибирск: Наука, 1978. 255 с.

35. Моин В.М. Простой и специфический метод определения активности глутатионпероксидазы в эритроцитах / В.М. Моин // Лаб. Дело. 1986. - №12. - С.724-727.

36. Новицкий В.В. Патофизиология: Учеб. для мед. вузов / В.В. Новицкий, Е.Д. Гольдберг. Томск: Изд-во Том. Ун-та, 2001.- 716с.

37. Пензина Т.Н. Фармакологическая активность некоторых растений семейства Грушанковых: Автореф. дис. . канд. биол. наук / Т.Н. Пензина. Барнаул, 1999. -24с.

38. Плотников М.Б. Лекарственные препараты: на основе ди-кверитина / М.Б. Плотников, H.A. Тюкавкина, Т.М. Плотникова. Томск: Изд-во Том. ун-та, 2005. - 228с.

39. Прайор У. Свободные радикалы в биологии : Пер. с.англ. / У. Прайор. М.: Мир, 1979. -329С.

40. Ревякина Н.В. Лекарственные растения Алтайского края / Н.В. Ревякина. Барнаул, 1994. - 140 с.

41. Ревякина Н.В. Флора Алтайского края / Н.В. Ревякина. -Барнаул, 1996. 212с.

42. Семерджян Л.В. Влияние органических перекисей на динамику активности ферментов пентозного цикла / Л.В.Семерджян, В.Г.Мхитарян // Журн. Экспериментальной и клинической медицины, 1977.-Т. 17, №4. - с.11-18.

43. Серов В.В. Патологическая анатомия. Курс лекций: Учеб. для мед. вузов / В.В. Серов, М.А. Пальцев. М. Медицина, 1998. - 640с.

44. Соколов С.Я. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия) / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. М.: Недра, 1987. - 512 с.

45. Тахтаджян А.Л. Жизнь растений / А.Л. Тахтаджян. М.: Просвещение, 1981. - Т. 5, ч. 2. - 512 с.

46. Тахтаджян А.Л. Система магнолиофитов / А.Л. Тахтаджян. Л.: Наука, 1987. - 439с.

47. Тевс В.Г. Материалы по биологии и географическому распространению грушанки круглолистной / В.Г. Тевс // Вопросы фармакогнозии. Л., 1964. Вып. 17, ч. 2. — с. 232-249.

48. Телятьев B.B. Целебные клады / B.B. Телятьев. Иркутск, 1991. - 400с.

49. Трубачев A.A. К фитохимическому изучению зимолюбки зонтичной Chimaphila umbellate (L.) Nutt. / A.A. Трубачев // Вопросы фармакогнозии. - Л., 1967. - Т.21, вып. 4. - С. 176182.

50. Трубачев A.A. Фитохимическое изучение зимолюбки зонтичной Chimaphila umbellate (L.) Nutt. / A.A. Трубачев,

51. B.C. Батюк // Фармация. -1969. Т. 18, вып. 3. - с. 48-51.

52. Фруентов Н.К. Лекарственные растения Дальнего Востока / Н.К. Фруентов. Хабаровск, 1972. — 400 с.

53. Чевари С. Определение антиоксидантных параметров крови и их диагностическое значение в пожилом возрасте / С. Чевари, Т. Андял, Я. Штренгер // Лаб. дело. 1991. - №10.1. C. 11-13

54. Шанин Ю.Н., Антиоксидантная терапия в клинической практике / Ю.Н. Шанин, В.Ю. Шанин, Е.В. Зиновьев. СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2003. - 121 с.

55. Шнякина Г.П. О содержании арбутина в листьях некоторых растений Дальнего Востока / Г.П. Шнякина, В.А. Се-дельникова, Н.Б. Цыганкова // Растительные ресурсы. 1981. -Т. 17, вып. 4. - С.568-571.

56. Шретер А.И. Лекарственная флора Дальнего Востока / А.И. Шретер. М.: Медицина, 1975. - 328 с.

57. Яковлев Г.П. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия: Учеб. Пособие / Г. П. Яковлев, К.Ф. Блинова. — СПб.: СпецЛит, 2004. 765 с.

58. Adelwöhrer N. Е. Oxidativer Stress und rezidivierende Soorkolpitis / N.E. Adelwöhrer, M. Lindschinger, A. Klein, A. Falk // Speculum. 2003. - Jahrgang 21. - №1. - S. 9-12.

59. Arnes B.N. Oxidants, antioxidants, and the degenerative diseases of aging / B.N. Ames, M.K. Shigenaga, T.M. Hägen // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1993. - Vol. 90. - pp. 7915-7922.

60. Ames B.N. The causes and prevention of cancer / B.N. Ames, L. Swirsky Gold, W.C. Willettt // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1995. - Vol. 92. - pp. 5258-5265.

61. Baud L. Reactive oxygen species: production and role in the kidney / L. Baud, R. Ardaillou // Am. J. Physiol. Renal Physiol. 1986. - Vol. 251: F765-F776.

62. Beckman K. The Free Radical Theory of Aging Matures / K. Beckman, B.N. Ames // Physiol. Rev. 1998. - Vol. 78. -№2. - P.547-581.

63. Bloch W. Freie Radilale Schlüsselmoleküle für die Gesundheit und das Altern / W. Bloch // Blickpunkt der Mann. -2004. - №3. - S. 5-6.

64. Bloch W. Sport und Freie Radikale / W. Bloch, A. Schmidt // Blickpunkt der Mann. 2004. - №3. - S. 13-20.

65. Bodlaj J. Erhöhter oxidativer Stress bei Patienten mit instabiler Angina pectoris / J. Bodlaj, J. Hofman, A. Gharehgozloo, G. Maurer, K. Huber, K. Kostner // J. Kardiol. 1998. - №6.-S.279-287.

66. Böhm V. Ernährung und Freie Radikale / V. Böhm // Blickpunkt der Mann. 2004. - №3. - S. 19-21.

67. Borchers A. Inflammation and Native American medicine: the role of botanicals / A. T. Borchers, G. L Keen, J. S Stern, M.E. Gershwin // Am J Clin Nutr. 2000. - №72. - P.339-47.

68. Capatano A.L. Antioxidant effect of flavonoids / A.L. Ca-patano // Angiology. 1997. - №48 (1). - pp.39-44.

69. Chen Y.T. Flavonoids as superoxide scavengers and antioxidants / Y.T. Chen, R.L. Zheng, Z.J. Jia, Y. Ju // Free Radic. Biol. Med. 1990. - №9 (1). - pp.19-21.

70. Chevion S. Plasma antioxidant status and cell injury after severe physical exercise / S. Chevion, D.S. Moran, Y. Heled, Y. Shani, G. Regev, B. Abbou, E. Berenshtein, E.R. Stadtman, Y. Epstein // P.N.A.S. 2003. - Vol. 100. - №9. - pp. 5119-5123.

71. Cutler R.G. Peroxide-producing potential of tissues: Inverse correlation with longevity of mammalian species / R.G. Cutler // Proc. Natl. Acad.Sci. USA.: Medical Sciences. 1985. - Vol. 82. - pp. 4798-4802.

72. Cuzzocrea S. Antioxidant Therapy: A New Pharmacological Approach in Shock, Inflammation, and Ischemia/Reperfusion Injury / S. Cuzzocrea, D. Riley, A. Caputi, D. Salvemini // Pharmacol. Rev. 2001, 53: 135-159.

73. Devasagayam T.P.A. Free Radicals and Antioxidants in Human Health: Current Status and Future Prospects / T.P.A. Devasagayam, J.C. Tilak, K.K. Boloor, K. S Sane, S.S. Ghaskadbi, R.D. Lele // JAPI. 2004. - Vol. 52. - pp. 794-803.

74. Doroshow J.H. Role of hydrogen peroxide and hydroxyl radical formation in the killing of Ehrlich tumor cells by anticancer quinines / J.H. Doroshow // Proc. Natl. Acad.Sci. USA.: Medical Sciences. 1986. - Vol. 83. - pp. 4514-4518.

75. Droge W. Free Radicals in the Physiological Control of Cell Function / W. Droge // Physiol. Rev. 2002. - Vol. 82. -p.47-95.

76. Eastwood M.A. Interaction of dietary antioxidants in vivo: how fruit and vegetables prevent disease? / M.A. Eastwood // Q. J. Med. 1999. - №92. - pp.527-530.

77. Floyd R.A. Antioxidants, Oxidative Stress and Degenerative Neurological Disorders / R.A. Floyd // P.S.E.B.M. 1999. -Vol. 222. - pp.236-245.

78. Forgione, M.A. Cellular glutathione peroxidase deficiency and endothelial dysfunction / A. M Forgione, L., N. Weiss, S. Heydrick, Andre Cap, E.S. Klings, C. Bierl, R.T. Eberhardt // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2002. - Vol. 282: HI 255-H1261.

79. Frei B. Antioxidant defenses and lipid peroxidation in human blood plasma / B. Frei, R. Stocker, B.N. Ames // Proc. Natl. Acad.Sci. USA.: Medical Sciences. 1988. - Vol. 85. - pp. 97489752.

80. Fuhrman B. Flavonoids protect LDL from oxidation and attenuate atherosclerosis / B. Fuhrman, M. Aviram // Current Opinion in Lipidology. 2001. - Vol. 12 (1). - pp.41-48.

81. Gabor. M. Anti-inflammatory substances of plant origin / M. Gabor, Vane J., Ferreira S. // Handbook of Experimental Pharmacology: Anti-Inflammatory Drugs, Springer-Verlag, New York. 1979. - 739p.

82. Gilgun-Sherki Yo. Antioxidant Therapy in Acute Central Nervous System Injury: Current State / Yo. Gilgun-Sherki, Z. Rosenbaum, E. Melamed, D. Offen // Pharmacol. Reviews. -2002. №54. - pp.271-284.

83. Girotti A.W. Lipid hydroperoxide generation, turnover, and effector action in biological systems / A.W. Girotti // J. Lipid Res. 1998. - №39. - pp.1529-1542.

84. Grisham M. Nitric Oxide I. Physiological chemistry of nitric oxide and its metabolites: implications in inflammation / M. Grisham, D. Jourheuil, D A. Wink // Am. J. Physiol. 1999. -Vol. 276 (Gastrointest. Liver Physiol. 39): G315-G321.

85. Grisham M.B. Oxidants and free radicals in inflammatory bowel disease / M.B. Grisham // Lancet. 1994. - Vol. 344: 859-861.

86. Halliwell B. Free radicals, antioxidants, and human disease: Where are we now? / B. Halliwell, J.M.C. Gutteridge, C.E. Cross // J. Lab. Clin. Med. 1992. - Vol. 119: 598-620.

87. Halliwell B. Free radicals and antioxidants: a personal view / B. Halliwell // Nutr. Rev. 1994. - Vol. 52: 253-265.

88. Halliwell B. Free Radicals in Biology and Medicine / B. Halliwell, J.M.C. Gutteridge // Oxford, New York. 2001. -904p.

89. Halliwell B. Lipid peroxidation: Its mechanism, measurement, and significance / B. Halliwell, S. Chirico // Am J Clin Nutr.- 1993, 57: 715S-724S.

90. Halliwell B. Reactive oxygen species in living systems: Source, biochemistry, and role in human disease / B. Halliwell // Am. J. Med. 1991, 91: 14S-22S.

91. Halliwell B. Role of free radicals and catalytic metal ions in human disease: An overview / B. Halliwell, J. Gutteridge // Methods Enzymol. 1990. - Vol.186: 1-85.

92. Halliwell B. Role of iron in oxygen radical reactions / B. Halliwell, and G.M.C.Gutteridge // Methods Enzymol. 1984. -Vol. 105: 47-56.

93. Halliwell B. Vitamin C: antioxidant or prooxidant in vivo? / B. Halliwell // Free Radic. Res.- 1996. Vol. 25: 439-454.

94. Harborne J.B. A chemotaxonomic survey of flavonoids and simple phenols in leaves of the Ericaceae / J.B. Harborne, C.A. Williams // Bot. J. Linn. Soc. 1973. - Vol. 66, №1. - P.37-54.

95. Higdon J.V. Tea catechins and polyphenols: Health effects, metabolism, and antioxidant functions / J.V. Higdon, B. Frei // Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 2003. - Vol. 43(1). - pp.89-143.

96. Hoidal J.R. Reactive Oxygen Species and Cell Signaling / J.R. Hoidal // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2001. - Vol. 25, pp. 661-663.

97. Husain S. R. Hydroxyl radical scavenging activity of fla-vonoids / S. R. Husain, J. Cillard, P. Cillard // Phytochemistry. -1987. Vol. 26. - Issue 9. - pp.2489-2491.

98. Inouye H. Auftreten von Hydrochinontyp-Glucosiden, Chi-maphilin und monotropein in den Pyrolazeen / H. Inouye, T. Arai, Y. Yasi, Agawa // Chem. Pharm/ Bull. 1964. - Vol. 12, №2. - P.255-256.

99. Inouye H. Structure of renifolin and reconfirmation of the structure of pirolatin / H. Inouye, K. Inouye // Phytochemistry. -1985. Vol. 24, №8. - P,1857-1859.

100. Jacobson J. Mitochondrial oxidative stress and cell death in astrocytes requirement for stored Ca2+ and sustained opening of the permeability transition pore / J. Jacobson, M. R. Duchen // Journal of Cell Science. - 2002. - №115. - pp. 1175-1188.

101. Jenkins R.R. Exercise and oxidative stress methodology: a critique / R.R. Jenkins // Am. J. Clin. Nutr. 2000. - № 72 (suppl). - pp.670S-674S.

102. Ji L.L. Antioxidants and Oxidative Stress in Exercise // L.L. Ji // P.S.E.B.M. 1999. - Vol. 222. - pp.283-292.

103. Johnson M.K. Effects of epigallocatechin gallate and quercetin on oxidative damage to cellular DNA / M.K. Johnson, G. Loo // Mutation Research DNA Repair. - 2000. - №459 (3). -pp. 211-218.

104. Kalyanaraman B. Prologue: Vascular effects of free radicals / B. Kalyanaraman, D.D. Gutterman // Am. J. Physiol.-Heart and Circ. Physiol. 2003. - Vol. 285: H2253-H2254.

105. Kashima M. Effects of catechins on superoxide and hydroxyl radical / M. Kashima // Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 1999. - №47 (2). - pp.279-283.

106. Kaul T. Antiviral effect of flavonoids on human viruses / T. Kaul, E. Middleton, P. Ogra // J. Med. Virol. 1985, 15: 71-79.

107. Khan M.F. Oxidative Modification of Lipids and Proteins in Aniline-induced Splenic Toxicity / M.F. Khan, X. Wu, P.-J. Boor, G.A.S. Ansari // Toxicological Sciences. 1999. - №48. -pp.134-140.

108. Kinscherf R. Die Bedeutung des oxidativen Stress fur Gefa(3wandveranderungen / R. Kinscherf, J. Metz // Deutsche Zeitschrift fur Sportmedizin. -2000. Jahrgang 51. №1. - S.6-10.

109. Knight T. Role of Lipid Peroxidation as a Mechanism of Liver Injury after Acetaminophen Overdose in Mice / T. Knight, M.W. Fariss, A. Farhood, H. Jaeschke // Toxicological Sciences.- 2003. №76. pp.229-236.,

110. Kourie J.I. Interaction of reactive oxygen species with ion transport mechanisms / J.I. Kourie J.I. // Am. J. Physiol. 1998.- Vol. 275 (Cell Physiol. 44): C1-C24.

111. Lampe J.W. Health effects of vegetables and fruit: assessing mechanisms of action in human experimental studies / J. W Lampe // Am. J. Clin. Nutr. 1999. - №70 (suppl). P.475S-90S.

112. Lasse'gue B. Vascular NAD(P)H oxidases: specific features, expression, and regulation / B. Lasse'gue, R. Clempus // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2003. - Vol. 285: R277-R297.

113. Li C. Reactive species mechanisms of cellular hypoxiare-oxygenation injury / C/ Li, R. Jackson // Reactive species mechanisms of cellular hypoxia-reoxygenation injury // Am J Physiol Cell Physiol. 2002. - Vol. 282: C227-C241.

114. Lipton P. Ischemic Cell Death in Brain Neurons / P. Lipton // Physiological Reviews. 1999. - Vol. 79. №4, P.1431-1568.

115. Lum H. Oxidant stress and endothelial cell dysfunction / H. Lum, K. Roebuck // Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 2001. - Vol. 280: C719-C741.

116. Ma Q. Inhibition of Nuclear Factor B by Phenolic Antioxidants: Interplay between Antioxidant Signaling and Inflammatory Cytokine Expression / M. Qiang, K. Kinner, J. Ye, B. Chen // Mol. Pharmacol. 2003. 64:211-219.

117. Manach,C. Polyphenols: food sources and bioavailability / C. Manach, A. Scalbert, C. Morand, C. Remesy,L. Jime'nez // Am. J. Clin. Nutr. 2004. - №79. - pp.727- 747.

118. Marx J. Antibodies Kill by Producing Ozone / J. Marx // Science. 2002. - Vol. 298, Issue 5597. P.1319.

119. Middleton E. The Effects of Plant Flavonoids on Mammalian cells:Implications for Inflammation, Heart Disease, and Cancer / E. Middleton, C. Kandaswami, T. Theoharides // Pharmacol. Rev. 2000. - Vol. 52, Issue 4. - P.673-751.

120. Miller M. Nitric Oxide III. A molecular prelude to intestinal inflammation / M. Miller, M. Sandoval // Am. J. Physiol. -1999. Vol. 276 (Gastrointest. Liver Physiol. 39): G795-G799.

121. Minotti G. Anthracyclines: Molecular Advances and Pharmacologic Developments in Antitumor Activity and Cardiotoxic-ity / G. Minotti, P. Menna, E. Salvatorelli, G. Cairo, L. Gianni // Pharmacol. Rev. 2004. - №56. - pp. 185-229.

122. Moon JY Inhibition of 7-ethoxycoumarin O-deethylase activity in rat liver microsomes by naturally occurring flavonoids: structure-activity relationships / J.Y. Moon, D.W. Lee, K.H. Park // Xenobiotica. 1998. - № 28 (2). - pp.117-126.

123. Moosmann B. The antioxidant neuroprotective effects of estrogens and phenolic compounds are independent from their estrogenic properties / B. Moosmann, C. Behl // Proc. Natl. Acad.Sei. USA.: Biochemistry. 1999. - Vol. 96. - pp. 88678872.

124. Morre D.M. Surface Oxidase and Oxidative Stress Propagation in Aging / D.M. Morre, G. Lenaz, D.J. Morre // Journal of Experimental Biology. 2000. - №203. - pp.1513-1521.

125. Natarajan K. Caffeic acid phenethyl ester is a potent and specific inhibitor of activation of nuclear transcription factor NF-KB / K. Natarajan, S. Singh, T.R. Burke // Proc. Natl. Acad.Sei. USA.: Immunology. 1996. - Vol. 93. - pp. 90909095.

126. Nathan C. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells / C. Nathan // FASEB J. 1992, 6: 3051-3064.

127. Nohr D. Tumorrisiko und Freie Radikale / D. Nohr, H. Bie-salski // Blickpunkt der Mann. 2004. - №3. - S. 21-23.

128. Oberley T.D. Oxidative Damage and Cancer / T.D. Oberley // American Journal of Pathology. 2002;160:403-408.

129. Oury T.D. Extracellular superoxide dismutase, nitric oxide, and central nervous system 02 toxicity / T.D. Oury, Ye-S. Ho, C.A. Piantadosi, J.D. Crapo // Proc. Natl. Acad.Sei. USA.: Physiology. 1996. - Vol. 89. - pp. 9715-9719.

130. Proctor P.H. Free radicals and disease in man / P.H. Proctor, E. Reynolds // Physiological Chemistry and Physics and Medical NMR. 1984. Vol. 16. - P.175-195.

131. Ramadass P. Dietary Flavonoids Modulate PCB-Induced Oxidative Stress, CYP1A1 Induction, and AhR-DNA Binding

132. Activity in Vascular Endothelial Cells // P. Ramadass, P. Meerarani. M. Toborek, L. Robertson, B. Hennig // Toxicological Sciences. 2003. - №76. - pp.212-219.

133. Rensing L. Warum altern wir? Zur Rolle Freier radikale bei der Begrenzung der Lebenszeit / L. Rensing, A. Gosslau // Blickpunkt der Mann. 2004. - №3. - S. 7-12.

134. Rogers L. Nuclear and Nucleolar Glutathon Reductase, Peroxidase, And Transferase Activities in Livers of male and female Fischer 344 Rats / L. Rogers, S. Gupta, S.E. Welty, T. Hansen, C.V. Smith // Toxicologocal Sciences. - 2002. - №69. - pp.279285.

135. Römer W. Scavenger Östrogene und ihre Wirkungen auf die Aufnahme von oxidiertem LDL-Cholesterin durch Makrophagen / W. Römer, C. Meyer, M. Oettel // J. Menopause. - 2002. -№2.- S. 21-27.

136. Rösen P. Diabetes und oxidativer Stress / P. Rösen, C. Beilin // Blickpunkt der Mann. 2004. - №3. - S. 23-31.

137. Saija A. Flavonoids as antioxidant agents: importance of their interaction with biomembranes / A. Saija, M. Scalese, M. Lanza, D. Marzullo, F. Bonina, F. Castelli // Free Radical Biology and Medicine. 1995. - Vol. 19. - № 4 - pp. 481-486.

138. Sandsteom P.A. Autocrine production of extracellular cata-lase prevents apoptosis of the human CEM T-cell line in serumfree medium / P.A. Sandsteom, T.M. Buttke // Proc. Natl. Acad.Sei. USA.: Medical Sciences. 1993. - Vol. 90. - pp. 47084712.

139. Satyanarayana P.S.V. Quercetin, a bioflavonoid, protects against oxidative stress-related renal dysfunction by cyclosporin in rats / P.S.V. Satyanarayana, D. Singh, K. Chopra //

140. Methods and Findings in experimental and clinical Pharmacology. 2001. - Vol. 23 (4). - pp.175-181.

141. Schroecksnadel K. Immunmodulatorische Wirkung von Wein und Traubensaft / K. Schroecksnadel, G. Neurauter, B. Wirleitner, D. Fuchs // J. Ernährungsmedizin. 2004. - №3. -S.14-19.

142. Sen Ch. K. Thiol homeostasis and supplements in physical exercise / Ch. K Sen, L. Packer // Am. J. Clin. Nutr. 2000. -№72 (suppl). - P.653S-69S.

143. Sevanian A. Characterization of endothelial cell injury by cholesterol oxidation products found in oxidized LDL / A.Sevanian, H. N. Hodis, J. Hwang, L.L. McLeod, H. Peterson // J. Lipid Res. 1995. - № 36. - P. 1971-1986.

144. J 162. Södergren E. Lipid Peroxidation in vivo. Evaluation and Application of Methods for Measurement: Dissertation for thedegree of Doctor of Medical Science in Geriatrics. Uppsala1. Sweden, 2000. 78p.~

145. Sommer F. Freie Radikale und sexuelle Dysfunktion / F. Sommer // Blickpunkt der Mann. 2004. - №3. - S. 31-36.

146. Soto M. Ca2+ -activated K+ channel inhibition by reactive oxygen species / M. Soto, C. Gonzales. E. Lissi, C. Vergara. R. Latorre // Am. J. Physiol. Cell. Physiol.- 2001. Vol. 282: C461-C471.

147. Stocker R. Role of Oxidative Modifications in Atherosclerosis / R. Stocker, J.F. Keaney // Physiol. Rev. 2004. - Vol. 84: 1381-1478.

148. Tanaka Yo. A role for glutathione peroxidase in protecting pancreatic ß cells against oxidative stress in a model of glucose toxicity / Yo. Tanaka, P.O.T. Tran, J. Harmon, R. P. Robertson // PNAS. 2002. - vol.99. - №19. - pp. 12363-12368.

149. Tarpey M. Methods for detection of reactive metabolites of oxygen and nitrogen: in vitro and in vivo considerations / M. Tarpey, D.A. Wink, M.B. Grisham // Am. J. Physiol. Regul. In-tegr. Comp. Physiol. 2004. - Vol. 286:431-444.

150. Thannickal V. Reactive oxygen species in cell signaling / V. Thannickal, B. Fanburg // Am. J. Physiol. Lung. Cell. Mol. Physiol. 2000. - Vol. 279: L1005-L1028.

151. Thomson R. H. Naturally occurring quinines / R.H. Thomson, Academic Press Ltd, London, 1971. - 734p.

152. Tossios P. Freie Radikale und Antioxidantien in der Herzchirurgie / P. Tossios, U. Mehlhorn // Blickpunkt der Mann. 2004. - №3. - S. 36-41.

153. Vallyathan V. The Role of Oxygen Free Radicals in Occupational and Environmental Lung Diseases / V. Vallyathan, X. Shi // Environmental Health Perspectives Supplements. — 1997. -Vol. 105. №S1. - pp. 165-177.

154. Van Heerebeek L.NADPH oxidase(s): new source(s) of reactive oxygen species in the vascular system? / L .Van Heerebeek, C. Meischl, W. Stooker, C.J.L.M. Meijer, H.W.M. Niessen, D. Roos // J. Clin. Pathol. 2002. - № 55. - pp.561-568.

155. Walczak R. An essential non-Watson-Crick base pair motif in 39UTR to mediate selenoprotein translation / R. Walczak, P. Carbon, A. Krol // RNA. 1998. - №4. - pp.74-84.

156. Walle T. Carbon Dioxide Is the Major Metabolite of Quercetin in Humans / T. Walle, U.K. Walle, P.V. Halushka // J. Nutr. 2001. - №131. - pp.2648-2652.

157. Warner D.S. Oxidants, antioxidants and the ischemic brain. Review / D.S. Warner, H. Shengl, I. Batinic'-Haberle // J. of Experimental Biology. 2004. - №206. - pp. 3221-3231.P

158. Wentworth P. Evia-ence for Ozone Formation in Human Atherosclerotic Arteries / P. Wentworth, J. Nieva, C. Takeuchi et al.// Science. 2003. Vol. 302, Issue 5647, P.1053-1056.

159. Woo A.Y.H. Baicalein protects rat cardiomyocytes from hypoxia/reoxygenation damage via a prooxidant mechanism / A.Y.H. Woo, C.H.K. Gheng, M.M.Y. Waye // Cardiovascular Research. 2005. - Vol. 65, Issue 1. - P.244-253.

160. Wood L.G. Biomarkers of lipid peroxidation, airway inflammation and asthma / L.G. Wood, P.G. Gibson, M.L. Garg // Eur. Respir. J.- 2003. №21. - pp.177-186.

161. Young I.S. Antioxidants in health and disease / I.S. Young. J.V. Woodside // J. Clin. Pathol. 2001;54;176-186.

162. Zarkovic N. Antioxidantien in der Krebs Chemotherapie / N. Zarkovic // Pharmazie. -2000. - №4. - S. 25-33.

163. Zhong Z. Role of Free Radicals in Primary Nonfunction of Marginal Fatty Grafts from Rats Treated Acutely with Ethanol / Z. Zhong, H. Connor, R.F. Stachlewitz, M. von Frankenberg // Molecular Pharmacology. 1997. - Vol. 52. - pp.912-919.