Влияние полиовирусной инфекции на нуклеоцитоплазматический транспорт тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Лидский, Петр Владимирович

• Лидский, Петр Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Лидский, Петр Владимирович

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2. 1. нуклеоцитоплазматическии транспорт.

2. 1. 1. Строение и свойства ядерной поры.

2. 1. 2. Транспорт макромолекул через ядерные поры.

2. I. 3. Регуляция нуклеоцитотазматического транспорта отдельных белков.

2. I. 4. Регуляция систем нуклеоцитотазматического транспорта.

2. 1. 5. Модификации белков комтскса ядерной поры.

2. 1. 6. Нарушения нуклеоцитотазматического транспорта при апоптозе.

2.2. Общие сведения о полиовирусе.

2.3. Взаимодействие полиовируса и клетки.

2. 3. 1. Угнетение клеточной транскрипции.

2. 3. 2. Угнетение кэп-зависимой трансляции.

2. 3. 3. Модификация мембран и мембранного транспорта.

2. 3. 4. Перестройка цитоскелета.

2. 3. 5. Гибель зараженной клетки.

2. 3. 6. Воздействие на иуклеоцитотазматический транспорт.

3. ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ.

4. МАТЕРИАЛЫ 11 МЕТОДЫ.

4.1. Методы клонирования ДНК.

4. 1. 1. Получение клеток компетентной культуры штамма Е. coli ТОР-10.

4. 1. 2. Трансформация клеток компетентной культуры тазмидной ДНК.

4. 1. 3. Выделение тазмидной ДНК.

4. 1. 4. Рестрикция.

4. 1. 5. Обработка щелочной фосфатазой.

4. 1. 6. Обработка ДНК фрагментом Кленова.

4. 1. 7. Электрофорез в агарозном геле и выделение фрагментов ДНК из геля.

4. 1. 8. Лигирование.

4. 1. 9. Полимеразная цепная реакция (PCR).

4. 1. 10. Секвенирование тазмидной ДНК.

4.2. Плазмиды.

4. 2. 1. Исходные тазмиды.

4. 2. 2. Получение тазмид.

4.3. Методы работы с эукариотическими клетками.

4. 3. 1. Культуры клеток.

4. 3. 2. Заражение клеток вирусом.

4. 3. 3. Трансфекция клеток тазмидной ДНК.

4. 3. 4. Метод ретровирусной транедукции и получение моноклонов.48 '

4. 3. 5. Получение лизатов эукариотических клеток.

4. 3. 6. Получение пермеабилизованных клеток.

4. 3. 7. Выделение ядер.

4.4. Ингибиторы.

4.5. Микроскопия.

4. 5. 1. Иммунофлуоресценция.

4. 5. 2. Флуоресцентная микроскопия.

4. 5. 3. Электронная микроскопия.

5. РЕЗУЛЬТАТЫ.

5.1. Исследование проницаемости ядерной оболочки в клетке, зараженной полиовирусом.

5. 1. 1. Выход Ттег-ЫЬБ из ядра в цитоплазму зараженной клетки.

5. I. 2. Создание культуры клеток, экспрессирующих ЗхЕСРР-ИЬБ.

5. 1. 3. Выход ядерного белка из препаратов ядер зараженных клеток.

5. 1. 4. Вход цитоплазматических белков в ядро зараженной клетки.

5.2. Исследование ядерных пор в зараженной полиовирусом клетке.

5.3. Исследование механизма повышения проницаемости ядерной оболочки полиовирусом.

5. 3. 1. Повышение проницаемости ядерной оболочки в отсутствие каспаз 3 и 9.

5. 3. 2. Повреждение ядерной оболочки здоровых клеток, вызванное лизатом из зараженных клеток.

5. 3. 3. Подавление ингибиторами 2Арго способности полиовируса вызывать выход белков из ядра.

5. 3. 4. Нарушение ядерного транспорта, вызванные экспрессией полиовирусного белка

6. ОБСУЖДЕНИЕ.

6.1. Нарушение барьерной функции ядерной оболочки при полиовирусной инфекции

6.2. Разрушение ядерных пор в зараженной полиовирусохм клетке.

6. 3. 2АРКО полиовируса вызывает нарушения ядерной оболочки.

6.4. Взаимодействие вирусов и систем нуклеоцитоплазматического транспорта

6.5. Биологическое значение нарушений нуклеоцитоплазматического транспорта при полиовирусной инфекции.

7. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние полиовирусной инфекции на нуклеоцитоплазматический транспорт»

Актуальность проблемы. Пикорнавирусы и, в частности, вирус полиомиелита (полиовирус) являются возбудителями важных заболеваний человека и животных. Этим во многом объясняется пристальный интерес, который уделяют исследователи этой группе вирусов. В течение последнего десятилетия достигнуты значительные успехи в понимании молекулярно-биологических основ репродукции пикорнавирусов и вызываемых ими изменении физиологических процессов в зараженной клетке. Вместе с тем, до полного понимания всей картины взаимодействия этих вирусов с клеткой еще далеко. Несколько лет назад в нашей лаборатории был обнаружен еще один интересный аспект воздействия полиовируса на клетку - нарушение нуклеоцитоплазматнческого транспорта.

Макромолекулярный состав ядра эукариотической клетки существенно отличается от белкового состава ее цитоплазмы. Эта асимметрия достигается благодаря барьерной функции ядерной оболочки, и за счет действия специальных механизмов транспорта белков, РНК и рнбопуклеопротеидов. Многие вирусы эукариот, часть репликативного цикла которых протекает в ядре, используют эти транспортные механизмы для того, чтобы попасть в ядро или выйти из ядра [Izaurralde et. al. 1999]. Некоторые из них модифицируют системы нуклеоцитоплазматического транспорта в соответствии с собственными интересами [Whittaker, 2003]. Аспекты взаимодействия размножающихся в цитоплазме вирусов (к которым относится и полиовирус) с транспортными системами клетки пока остаются менее изученными, хотя также представляют значительный интерес.

Цели и задачи исследования. В предыдущих исследованиях было показано, что при заражении клеток полиовирусом происходит нарушение нуклеоцитоплазматического транспорта белков: ядерные белки оказываются в цитоплазме [Belov et. al., 2000; Gustin and Sarnow, 2001]. Настоящая работа посвящена исследованию данного эффекта. Нашей задачей было установить характер изменений, происходящих с ядерной оболочкой при инфекции, выяснить, какой из продуктов полиовируса ответственен за это изменение, а также исследовать механизм развития эффекта.

Научная новизна и практическая значимость работы. В ходе данной работы с помощью флуоресцентных зондов было показано, что ядерная оболочка в инфицированной клетке теряет свою барьерную функцию и становится проницаемой для белков большой молекулярной массы. С подавляющей вероятностью этот эффект связан с деградацией ядерных пор, которая была продемонстрирована с помощью электронной микроскопии. Метод ингибиторного анализа показал, что продукт вируса, ответственный за нарушение ядерного транспорта - это нротеаза 2Арго. Индивидуальная экспрессия этого белка в клетках приводила к нарушениям ядерного транспорта, сходным с происходящими при заражении.

Углубленное исследование этого явления представляет значительный интерес, поскольку не только разъясняет проблему взаимодействия цитоплазматического вируса с ядром клетки, но и расширяет наши знания о системах нуклеоцитоплазматического транспорта, их устройстве, регуляции, роли в организации внутриядерного пространства.

Апробация работы. По материалам диссертации были опубликованы две статьи. Результаты настоящей работы были доложены на XII и XIII международных конференциях «Молекулярная биология пикорнавирусов» в 2002 г. на мысе Кейп-Код, США и в 2005 г. в Люнтерене, Голландия соответственно, на международных семинарах по программе ШТАБ в 2003 г. в Москве, и в 2004 г. в Финляндии, на семинарах в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов им М. П. Чумакова.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Лидский, Петр Владимирович

7. ВЫВОДЫ

1. Показано, что при полиовирусной инфекции флуоресцентный белок с сигналом ядерной локализации покидает ядро, а цитоплазматические белки сусИп В-ЕОРР, САОРН и пентамер ЕОРР без входят в ядро. ЗхЕОРР-МЬБ эффективно выходил из полученных разными способами препаратов ядер зараженных клеток. Следовательно, полиовирусная инфекция приводит к увеличению проницаемости ядерной оболочки для пассивной диффузии в обоих направлениях.

2. Методом электронной микроскопии показано, что полиовирусная инфекция сопровождается деградацией комплексов ядерных пор, что вероятно, и является причиной увеличения проницаемости ядерной оболочки.

3. Разработана экспериментальная система, позволившая протестировать ряд ингибиторов на способность подавлять индуцированные полиовирусом изменения ядерной оболочки. С помощью данной системы, а также путем экспрессии в клетках отдельных полиовирусных белков, показано, что за нарушение нуклеоцитоплазматического барьера отвечает полиовирусная протеаза 2Арго.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Лидский, Петр Владимирович, 2005 год

1. Агол В.И. Трансляционный контроль фенотипа пикорнавирусов. 2001. Мол биол. 35:691-701

2. Adam S, Marr S, Gerace L. Nuclear protein import in permeabilized mammalian cells requires soluble cytoplasmic factors. 1990. J Cell Biol. 111:807-816

3. Agol V. Picornavirus genome: An overview, in Molecular Biology of Picornaviruses. Eds. Semler B, Wimmer E. Washington. 2002. Am Microbiol Soc. P. 127-148

4. Agol V, Belov G, Bienz K, Egger D, Kolesnikova M, Raikhlin N, Romanova L, Smirnova E, Tolskaya E. Two types of death of poliovirus-infected cells: caspase involvement in the apoptosis but not cytopathic effect. 1998. Virology. 252:343-353

5. Agol V, Belov G, Bienz K, Egger D, Kolesnikova M, Romanova L, Sladkova L, Tolskaya E. Competing death programs in poliovirus-infected cells: commitment switch in the middle of the infectious cycle. 2000. J Virol. 74:5534-5541

6. Allen T, Cronshaw J, Bagley S, Kiseleva E, Goldberg M. The nuclear pore complex: mediator of translocation between nucleus and cytoplasm. 2000. J Cell Sci. 113:1651-1659

7. Banerjee R, WeidmanM, Navarro S, Comai L, Dasgupta A. Modifications of both selectivity factor and upstream binding factor contribute to poliovirus-mediated inhibition of RNA polymerase I transcription. 2005. J Gen Virol. 86:2315-2322

8. Barco A, Feduchi E, Carrasco L. Poliovirus protease 3C(pro) kills cells by apoptosis. 2000. Virology. 266:352-360

9. Barton D, Flanegan J. Coupled translation and replication of poliovirus RNA in vitro: synthesis of functional 3D polymerase and infectious virus. 1993. J Virol. 67:822-831

10. Beck M, Forster F, Ecke M, Plitzko J, Melchior F, Gerisch G, Baumeister W, Medalia O. Nuclear pore complex structure and dynamics revealed by cryoelectron tomography. 2004. Science. 306:1387-90

11. Belov G, Evstafieva A, Rubtsov Y, Mikitas O, Vartapetian A, Agol V. Early alteration of nucleoeytoplasmie traffic induced by some RNA viruses. 2000. Virology. 275:244-248

12. Belov G, Fogg M, Ehrenfeld E. Poliovirus proteins induce membrane association of GTPase ADP-ribosylation factor. 2005. J Virol. 79:7207-7216

13. Belov G, Romanova L, Tolskaya E, Kolesnikova M, Lazebnik Y, Agol V. The major apoptotic pathway activated and suppressed by poliovirus. 2003. J Virol. 77:45-56

14. Bhardwaj A, Aggarwal B. Receptor-mediated choreography of life and death. 2003. J Clin Immunol. 23:317-332

15. Egger D, Bienz K. Intracellular location and translocation of silent and active poliovirus replication complexes. 2005. J Gen Virol. 86:707-718

16. Blom N, Hansen J, Blaas D, Brunak S. Cleavage site analysis in picornaviral polyproteins: discovering cellular targets by neural networks. 1996. Protein Sci. 5:2203-2216

17. Bogerd H, Benson R, Truant R, Herold A, Phingbodhipakkiya M, Cullen B. Definition of a consensus transportin-specific nucleocytoplasmic transport signal. 1999. J Biol Chem. 274:9771-9777

18. Bovee M, Marissen W, Zamora M, Lloyd R. The predominant elF4G-specific cleavage activity in poliovirus-infected IleLa cells is distinct from 2A protease. 1998. Virology. 245:229-240

19. Bras M, Queenan B, Susin S. Programmed cell death via mitochondria: Different modes of dying. 2005. Biochemistry (Moscow). 70:231-239

20. Braun I, Rohrbach E, Schmitt C, Izaurralde E. TAP binds to the constitutive transport element (CTE) through a novel RNA-binding motif that is sufficient to promote CTE-dependent RNA export from the nucleus. 1999. EMBO J. 18:1953-1965

21. Buendia B, Santa-Maria A, Courvalin J. Caspase-dependent proteolysis of integral and peripheral proteins of nuclear membranes and nuclear pore complex proteins during apoptosis. 1999. J Cell Sci. 112 :1743-1753

22. Bui M, Whittaker G, Ilelenius A. Effect of Ml protein and low pH on nuclear transport of influenza virus ribonucleoproteins. 1996. J Virol. 70:8391-8401

23. Bustamante J, Michelette E , Geibel J, Hanover J, McDonnell T, Dean D. Dendrimer-assisted patch-clamp sizing of nuclear pores. 2000. Pflugers Arch Eur J Physiol. 439:829-837

24. Colbere-Garapin F, Pelletier I, Ouzilou L. Persistent infection by picornaviruses. in Molecular Biology of Picornaviruses. Eds. Semler B, and Wimmer E. Washington. 2002. Am Microbiol Soc. 437-448

25. Cronshaw J, Krutchinsky A, Zhang W, Chait B, Matunis M. Proteomic analysis of the mammalian nuclear pore complex. 2002. Cell Biol. 158:915-927

26. Cuconati A., Molla A., Wimmer E. Brefeldin A inhibits cell-free, de novo synthesis of poliovirus. 1998. J Virol. 72:6456-6464

27. Daigle N, Beaudouin J, Hartnell L, Imreh G, Hallberg E, Lippincott-Schwartz J, Ellenberg J. Nuclear pore complexes form immobile networks and have a very low turnover in live mammalian cells. 2001. J Cell Biol. 154:71-84

28. Danker T, Oberleithner H. Nuclear pore function viewed with atomic force microscopy. 2000. Pflugers Arch Eur J Physiol. 439:671-681

29. Deszcz L, Seipelt J, Vassilieva E, Roetzer A, Kuechler E. Antiviral activity of caspase inhibitors: effect on picornaviral 2A proteinase. 2004. FEBS Lett. 560:51-55

30. Dodd D, Giddings T, Kirkegaard K. Poliovirus 3A protein limits interleukin-6 (IL-6), IL-8, and beta interferon secretion during viral infection. 2001. J Virol. 75:8158-8165.

31. Doedens J, Kirkegaard K. Inhibition of cellular protein secretion by poliovirus proteins 2B and 3A. 1995. EMBO J. 14:894-907

32. Doedens J, Maynell L, Klymkowsky M, Kirkegaard K. Secretory pathway function, but not cytoskeletal integrity, is required in poliovirus infection. 1994. Arch Virol Suppl. 9:159-172

33. Donnelly M, Gani D, Flint M, Monaghan S, Ryan M. The cleavage activities of aphthovirus and cardiovirus 2A proteins. 1997. J Gen Virol. 78:13-21

34. Egger D, Gosert R, Bienz K. Role of cellular structures in viral RNA replication, in Molecular Biology of Picornaviruses. Eds. Semler BL, Wimmer E. Washington. 2002. Am Microbiol Soc. P. 247-253

35. Egger D, Teterina N, Ehrenfeld E, Bienz K. Formation of the poliovirus replication complex requires coupled viral translation, vesicle production, and viral RNA synthesis. 2000. J Virol. 74:6570-6580

36. Emig S, Schmalz D, Shakibaei M, Buchner K. The Nuclear Pore Complex Protein p62 Is One of Several Sialic Acid-containing Proteins of the Nuclear Envelope. 1995. J Biol Chem. 270:13787-13793

37. Fagerlund R, Melen K, Kinnunen L, Julkunen I. Arginine/Lysine-rich Nuclear Localization Signals Mediate Interactions between Dimeric STATs and lmportin 5. 2002. J Biol Chem. 277:30072-30078

38. Faleiro L, Lazebnik Y. Caspases disrupt the Nuclear-Cytoplasmic Barrier. 2000. J Cell Biol. 151:951-959

39. Faubion W, Guicciardi M, Miyoshi H, Bronk S, Roberts P, Svingen P, Kaufmann S, Gores G. Toxic bile salts induce rodent hepatocyte apoptosis via direct activation of Fas. 1999. J Clin Invest. 103:137-45.

40. Feldherr C, Akin D. Stimulation of nuclear import by simian virus 40-transformed cell extracts is dependent on protein kinase activity. 1995. Mol Cell Biol. 15:7043-7049

41. Feldherr C, Akin D, Cohen R. Regulation of functional nuclear pore size in fibroblasts. 2001. J Cell Sci. 114: 4621-4627

42. Fischer U, Huber J, Boelens W, Mattaj I, Luhrmann R. The HIV-1 Rev activation domain is a nuclear export signal that accesses an export pathway used by specific cellular RNAs. 1995. Cell. 82:475^83

43. Flint S, Gonzalez R. Regulation of mRNA production by the adenoviral E1B 55-kj.,a and E4 Orf6 proteins. 2003. Curr Top Microbiol Immunol. 272:287-330

44. Follett E, Pringle C, Pennington T. Virus development in enucleate cells: echovirus, poliovirus, pseudorabies virus, reovirus, respiratory syncytial virus and Semliki Forest virus. 1975. J Gen Virol. 26:183-196

45. Fuentes-Prior P, Salvescn G. The protein structures that shape caspase activity, specificity, activation and inhibition. 2004. Biochem J. 384:201-232

46. Galy V, Olivo-Marin J, Scherthan H, Doye V, Rascalou N, Nehrbass U. Nuclear pore complexes in the organization of silent telomcric chromatin. 2000. Nature. 403:108-112

47. Gingras A, Svitkin Y, Belsham G, Pause A, Sonenberg N. Activation of the translational suppressor 4E-BP1 following infection with encephalomyocarditis virus and poliovirus. 1996. Proc Natl Acad Sci USA. 93:5578-5583

48. Goldberg M, Wiese C, Allen T, Wilson K. Dimples, pores, star-rings, and thin rings on growing nuclear envelopes: evidence for structural intermediates in nuclear pore complex assembly. 1997. J Cell Sci. 110:409-420

49. Goldstaub D, Gradi A, Bercovitch Z, Grosmann Z, Nophar Y, Luria S, Sonenberg N, Kahana C. Poliovirus 2A protease induces apoptotic cell death. 2000. Mol Cell Biol. 20:1271-1277

50. Gonzalez M, Carrasco L. Viroporins. 2003. FEBS Lett. 552:28-34

51. Gorlich D. Transport into and out of the cell nucleus. 1998. EMBO J. 17:2721-2727

52. Gorlich D, Kutay U. Transport between the cell nucleus and the cytoplasm. 1999. Annu Rev Cell Dev Biol. 15:607-660

53. Greber U, Fassati A. Nuclear import of viral DNA genomes. 2003. Traffic. 4:136-143

54. Grigorieva J, Dainiak M, Katrukha A, Muronetz V. Antibodies to the nonnative forms of d-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase: identification, purification, and influence on the renaturation of the enzyme. 1999. Arch Biochem Biophys. 369:252-260

55. Guinea R, Carrasco L. Phospholipid biosynthesis and poliovirus genome replication, two coupled phenomena. 1990. EMBOJ. 9:2011-2016.

56. Gustin K, Sarnow P. Effects of poliovirus infection on nucleo-cytoplasmic trafficking and nuclear pore complex composition 2001. EMBO J. 20:240-249

57. Gustin K, Sarnow P. Inhibition of nuclear import and alteration of nuclear pore complex composition by rhinovirus. 2002. J Virol. 76:8787-8796

58. Fahrenkrog B, Stoffler D, Aebi U. Nuclear pore complex architecture and functional dynamics. 2001. Curr Top Microbiol Immunol. 259:95-117

59. Follett E, Pringle C, Pennington T. Virus development in enucleate cells: echovirus, poliovirus, pseudorabies virus, reovirus, respiratory syncytial virus and Semliki Forest virus. 1975. J Gen Virol. 26:183-196

60. Iwatsuki-Horimoto K, Horimoto T, Fujii Y, Kawaoka Y. Generation of influenza A virus NS2 (NEP) mutants with an altered nuclear export signal sequence. 2004. J Virol. 78:10149-10155

61. Izaurralde E, Kann M, Panto N, Sodeik B, Hohn T. Viruses, microorganisms and scientists meet the nuclear pore. 1999. EMBO J. 18:289-296

62. Izumi R, Valdez Ö, Banerjee R, Srivastava M, Dasgupta A. Nucleolin stimulates viral internal ribosome entry site-mediated translation. 2001. Virus Res. 76:17-29

63. Jänicke R, Sprengart M, Wati M, Porter A. Caspase-3 Is Required for DNA Fragmentation and Morphological Changes Associated with Apoptosis. 1998. J Biol Chem 273:9357-9360.

64. Jans D. The regulation of protein transport to the nucleus by phosphorylation. 1995. Biochem J. 311:705-716

65. Jiang X, Wang X. Cytochrome c-mediated apoptosis. 2004. Annu Rev Biochem. 73:87-106.

66. Johannes G, Carter M, Eisen M, Brown P, Sarnow P. Identification of eukaryotic mRNAs that are translated at reduced cap binding complex eIF4F concentrations using a cDNA microarray. 1999. ProcNall Acad Sei USA. 96:13118-23

67. Kaffman A, O'Shea EK. Regulation of nuclear localization: a key to a door. 1999. Annu Rev Cell Dev Biol. 15:291-339

68. Kann M, Sodeik B, Vlachou A, Gerlich W, Helenius A. Phosphorylation-dependent binding of hepatitis B virus core particles to the nuclear pore complex. 1999. J Cell Biol. 145:45-55

69. Kehlenbach R, Gerace L. Phosphorylation of the Nuclear Transport Machinery Down-regulates Nuclear Protein Import in Vitro. 2000. J Biol Chem. 275:17848-17856

70. Kihlmark M, Rustum C, Eriksson C, Beckman M, Iverfeldt K, Hallberg E. Correlation between nucleocytoplasmic transport and caspase-3-dependent dismantling of nuclear pores during apoptosis. 2004. Exp Cell Res. 293:346-356

71. Kirchhausen T. Three ways to make a vesicle. 2000. Nat Rev Mol Cell Biol. 1:187-198

72. Kleijn M, Vrins C, Voorma H, Thomas A. Phosphorylation state of the cap-binding protein eIF4E during viral infection. 1996. Virology. 217:486-494

73. König H, Rosenwirth B. Purification and partial characterization of poliovirus protease 2A by means of a functional assay. 1987. J Virol. 62:1243-1250

74. Krausslich H, Nicklin M, Toyoda H, Etchison D, Wimmer E. Poliovirus proteinase 2A induces cleavage of eucaryotic initiation factor 4F polypeptide p220. 1987. J Virol. 61:27112718

75. Krull S, Thyberg J, Bjorkroth B, Rackwitz H, Cordes V. Nucleoporins as components of the nuclear pore complex core structure and Tpr as the architectural element of the nuclear basket. 2004. Mol Biol Cell. 15:4261-4277

76. LeHir H, Gatfield D, Izaurralde E, Moore M. The exon-exon junction complex provides a binding platform for factors involved in mRNA export and nonsense-mediated mRNA decay. 2001. EMBO J. 20:4987-4997

77. Lenk R., Penman S. The cytoskeletal framework and poliovirus metabolism. 1979. Cell. 16:289-301.

78. Levine B, Klionsky D. Development by self-digestion: molecular mechanisms and biological functions of autophagy. 2004. Dev Cell. 6:463-477

79. Lombardo E, Ramirez J, Agbandje-Mckenna M, Almendral J. A 13-stranded motif drives capsid protein oligomers of the parvovirus minute virus of mice into the nucleus for viral assembly. J Virol. 2000. 74:3804-3814

80. Lusk C, Makhnevych T, Wozniak R. New ways to skin a kap: mechanisms for controlling nuclear transport. 2004. Biochem Cell Biol. 82:618-625

81. Madison D, Yaciuk P, Kwok P, Lundblad J. Acetylation of the adenovirus-transforming protein El A determines nuclear localization by disrupting association with importin-a. 2002. J Biol Chem. 277:38755-38763

82. Mattaj I, Englmeier L. Nucleocytoplasmic transport: the soluble phase. 1998. Annu Rev Biochem. 67:265-306

83. McBride A, Schlegel A, Kirkegaard K. Human protein Sam68 relocalization and interaction with poliovirus RNA polymerase in infected cells. 1996. Proc Natl Acad Sci USA. 93:22962301 .

84. Meerovitch K, Svitkin Y, Lee H, Lejbkowicz F, Kenan D, Chan E, Agol V, Keene J, Sonenberg N. La autoantigen enhances and corrects aberrant translation of poliovirus RNA in reticulocyte lysate. 1993. J Virol. 67:3798-3807

85. Michael M, Eder P, Dreyfuss G. The K nuclear shuttling domain: a novel signal for nuclear import and nuclear export in the hnRNP K protein. 1997. EMBO J. 16:3587-3598

86. Miller M, Caracciolo M, Berlin W, Hanover J. Phosphorylation and Glycosylation of Nucleoporins. 1999. Arch Biochem Biophys. 367:51-60

87. Molla A, Paul A, Wimmer E. Cell-free, de novo synthesis of poliovirus. 1991. Science. 254:1647-1651

88. Molla A, Hellen C, Wimmer E. Inhibition of proteolytic activity of poliovirus and rhinovirus 2A proteinases by elastase-specific inhibitors. 1993a. J Virol. 67:4688-4595

89. Molla A, Paul A, Schmid M, Jang S, Wimmer E. Studies on dicistronic polioviruses implicate viral proteinase 2Apro in RNA replication. 1993b. Virology. 196:739-747

90. Molla A, Paul A, Wimmer E. Effects of temperature and lipophilic agents on poliovirus formation and RNA synthesis in a cell-free system. 1993c. J Virol. 67:5932-5938

91. Neznanov N, Chumakov P, Ullrich A, Agol V, Gudkov A. Unstable receptors disappear from cell surface during poliovirus infection. 2002. Med Sci Monit. 8:BR391-396

92. Neznanov N, Kondratova A, Chumakov KM, Angres B, Zhumabayeva B, Agol VI, Gudkov AV. Poliovirus protein 3A inhibits tumor necrosis factor (TNF)-induced apoptosis by eliminating the TNF receptor from the cell surface. 2001. J Virol. 75:10409-10420

93. Paragas J, Talon J, O'Neill R, Anderson K, Garcia-Sastre A, Palcse P. Influenza B and C Virus NEP (NS2) Proteins Possess Nuclear Export Activities. 2001. J Virol. 75:7375-7383

94. Pemberton L, Paschal B. Mechanisms of receptor-mediated nuclear import and nuclear export. 2005. Traffic. 6:187-198

95. Pestova T, Hellen C, Shatsky I. Canonical eukaryotic initiation factors determine initiation of translation by internal ribosomal entry. 1996. Mol Cell Biol. 16:6859-6869.

96. Pestova T, Kolupaeva V, Lomakin I, Pilipcnko E, Shatsky I, Agol V, Hellen C. Molecular mechanisms of translation initiation in eukaryotes. 2001. Proc Natl Acad Sci USA. 98:70297036

97. Petersen J, lier L, Varvel V, Lund E, Dahlberg J. The matrix protein of vesicular stomatitis virus inhibits nucleocytoplasmic transport when it is in the nucleus and associated with nuclear pore complexes. 2000. Mol Cel Biol. 20:8590-8601

98. Petersen J, Her L, Dahlberg J. Multiple vesiculoviral matrix proteins inhibit both nuclear export and import. 2001. Proc Natl Acad Sci USA. 98:8590-8595

99. Pollack R, Goldman R. Synthesis of infective poliovirus in BSC-1 monkey cells enucleated with cytochalasin B. 1973. Science. 179:915-916

100. Porter A, Dhakshinamoorthy S. Apoptosis initiated by dependence receptors: a new paradigm for cell death? 2004. Bioessays. 26:656-664.

101. Rabut G, Doye V, Ellenberg J. Mapping the dynamic organization of the nuclear pore complex inside single living cells. 2004. Nat Cell Biol. 6:1114-1121

102. Rakowska A, Danker T, Schneider SW, Oberleithner II. ATP-induced shape changes of nuclear pores visualized with the atomic force microscope. 1998. J Membrane Biol. 163:129136

103. Romanova L, Belov G, Lidsky P, Tolskaya E, Kolesnikova M, Evstafieva A, Vartapetian A, Egger D, Bienz K, Agol V. Variability in apoptotic response to poliovirus infection. 2005. Virology. 331:292-306

104. Roulston A, Marcellus R, Branton P. Viruses and apoptosis. 1999. Annu Rev Microbiol. 53: 577-628

105. Rust R, Landmann L, Gosert R, Tang B, Hong W, Hauri H, Egger D, Bienz K. Cellular COPII proteins are involved in production of the vesicles that form the poliovirus replication complex. 2001. J Virol. 75:9808-9818

106. Sandoval I, Carrasco L. Poliovirus infection and expression of the poliovirus protein 2B provoke the disassembly of the Golgi complex, the organelle target for the antipoliovirus drug Ro-090179. 1997. J Virol. 71:4679-4693

107. Schmitz H. Reversible nuclear translocation of glyceroaldehyde-3-phosphate dehydrogenase upon serum depletion. 2001. Eur J Cell Biol. 80:419-427

108. Schwartz T. Modularity within the architecture of the nuclear pore complex. 2005. Curr Opin Struct Biol. 15:221-226

109. Schlegel A, Giddings T, Ladinsky M, Kirkegaard K. Cellular origin and ultrastructure of membranes induced during poliovirus infection. 1996. J Virol. 70:6576-6588

110. Sandri-Goldin R.Viral Regulation of mRNA Export. 2004. J Virol. 78: 4389-4396

111. Semler B, Wimmer E. editors. Molecular Boilogy of Picornaviruses. 2002. ASM Press Washington DC

112. Shen Y, Igo M, Yalamanchili P, Berk A, Dasgupta A. DNA binding domain and subunit interactions of transcription factor IIIC revealed by dissection with poliovirus 3C protease. 1996. Mol Cell Biol. 16:4163-4171

113. Smith W, Schurter B, Wong-Staal F, David M. Arginine methylation of RNA helicase a determines its subcellular localization. 2004. J Biol Chem. 279:22795 22798

114. Sommergruber W, Ahorn H, Zophel A, Maurer-Fogy, Fessl F, Schnorrenberg G, Liebig H, Blaas D, Kuechler E, and Skern T. Cleavage specificity on synthetic peptide substrates of human rhinovirus 2 proteinase 2A. 1992. J Biol Chem. 267: 22639-22644

115. Stanway G, Joki-Korpela P, Hyypia T. Human parechoviruses—biology and clinical significance. 2000, Rev Med Virol. 10:57-69

116. Stofiler D, Goldie K, Aebi U. Calcium-mediated structural changes of native nuclear pore complexes monitored by time-lapse atomic force microscopy. 1999. J Mol Biol. 287:741-752

117. Stommel J, Marchenko N, Jimenez G, Moll U, Hope T, Wahl G. A leucine-rich nuclear export signal in the p53 tetramerization domain: regulation of subcellular localization and p53 activity by NES masking. 1999. EMBO J. 18:1660-1667

118. Suhy D, Giddings T, Kirkegaard K. Remodeling the endoplasmic reticulum by poliovirus infection and by individual viral proteins: an autophagy-like origin for virus-induced vesicles. 2000. J Virol. 74:8953-8965

119. Svitkin Y, Imataka H, Khaleghpour K, Kahvejian A, Liebig H, Sonenberg N. Poly(A)-binding protein interaction with elF4G stimulates picornavirus IRES-dependent translation. 2001. RNA. 7:1743-1752

120. Svitkin Y, Meerovitch K, Lee H, Dholakia J, Kenan D, Agol V, Sonenberg N. Internal translation initiation on poliovirus RNA: further characterization of La function in poliovirus translation in vitro. 1994. J Virol. 68:1544-1550

121. Takizawa C, Morgan D. Control of mitosis by changes in the subcellular location of cyclin-Bl-Cdkl and Cdc25C. 2000. Curr Opin Cell Biol. 12:658-665

122. Tcrskikh A, Fradkov A, Ermakova G, Zaraisky A, Tan P, Kajava A, Zhao X, Lukyanov S, Matz M, Kim S, Wcissman I, Siebert P. "Fluorescent timer": protein that changes color with time. 2000. Science. 290:1585-1588

123. Tolskaya E, Romanova L, Kolesnikova M, Ivannikova T, Smirnova E, Raikhlin N, Agol V. Apoptosis-inducing and apoptosis-preventing functions of poliovirus. 1995. J Virol. 69:11811189

124. Tolskaya E, Romanova L, Kolesnikova M, Ivannikova T, Agol V. Final checkpoint in the drug-promoted and poliovirus-promoted apoptosis is under post-translational control by growth factors. 1996. J Cell Biochem. 63:422-431

125. Weed H, Krochmalnic G, Penman S. Poliovirus metabolism and the cytoskeletal framework: detergent extraction and resinless section electron microscopy. 1985. J Virol. 56:549-557

126. Weidman M, Yalamanchili P, Ng B, Tsai W, Dasgupta A. Poliovirus 3C Protease-Mediated Degradation of Transcriptional Activator p53 Requires a Cellular Activity. 2001. Virology. 291:260-271

127. Weidman M, Sharma R, Raychaudhuri S, Kundu P, Tsai W, Dasgupta A. The interaction of cytoplasmic RNA viruses with the nucleus. 2003. Virus Res. 95:75-85

128. Welsh J, Swimmer C, Cocke T, Shenk T. A second domain of simian virus 40 T antigen in which mutations can alter the cellular localization of the antigen. 1986. Mol Cell Biol. 6:2207-2212.

129. Whittaker G. Virus nuclear import. 2003. Adv Drug Deliv Rev. 55:733-747

130. Willis S, Day C, Hinds M, Huang D. The Bcl-2-regulated apoptotic pathway. 2003. J Cell Sci. 116:4053-4056

131. Whittaker G, Bui M, Helenius A. The role of nuclear import and export in influenza virus infection. 1996. Trends Cell Biol. 6:67-71

132. Yalamanchili P, Harris K, Wimmer E, Dasgupta A. DNA binding domain and subunit interactions of transcription factor IIIC revealed by dissection with poliovirus 3C protease. 1996. Mol Cell Biol. 16:4163-4171

133. Yalamanchili P, Banerjee R, Dasgupta A. Poliovirus-encoded protease 2APro cleaves the TATA-binding protein but does not inhibit host cell RNA polymerase II transcription in vitro. 1997a. J Virol. 71:6881-6886

134. Yalamanchili P, Datta U, Dasgupta A. Inhibition of host cell transcription by poliovirus: cleavage of transcription factor CREB by poliovirus-encoded protease 3Cpro. 1997b. J Virol. 71:1220-1226

135. Yalamanchili P, Weidman K, Dasgupta A. Cleavage of transcriptional activator Oct-1 by poliovirus encoded protease 3Cpro. 1997c. Virology 239:176-185

136. Yanagiya A, Jia Q, Ohka S, Horie H, Nomoto A. Blockade of the poliovirus-induced cytopathic effect in neural cells by monoclonal antibody against poliovirus or the human poliovirus receptor. 2005. J Virol. 79:1523-1532

137. Yu S, Lloyd R. Identification of essential amino acid residues in the functional activity of poliovirus 2A protease. 1991. Virology. 182:615-625

138. Zamora M, Marissen W, Lloyd R. Multiple eIF4GI-specific protease activities present in uninfected and poliovirus-infected cells. 2002. J Virol. 76:165-177

139. Zoll J, Galama J, van Kuppeveld F, Melchers W. Mengovirus leader is involved in the inhibition of host cell protein synthesis. 1996. J Virol. 70:4948-4952