Влияние нитрита натрия на адаптивные реакции лейкоцитов крови тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.01, кандидат наук Петенкова, Анастасия Андреевна

• Петенкова, Анастасия Андреевна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Петенкова, Анастасия Андреевна

Оглавление

Список сокращений

Введение

1. ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ, А ТАКЖЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ ПРИЕМЫ И ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ В РАБОТЕ МЕТОДЫ

1.1. Постановка экспериментов in vitro и in vivo

1.2. Капиллярный метод исследования влияния различных концентраций нитрита натрия на спонтанную подвижность лейкоцитов крови

1.3. Цитохимические методы анализа влияния нитрита натрия на состояние кислородзависимого и кислороднезависимого звеньев бактерицидности нейтрофилов

1.3.1. Определение базалыюй и стимулированной зимозаном радикал-продуцирующей активности нейтрофильных гранулоцитов по восстановлению нитросинего тетразолия (НСТ-тест)

1.3.2. Определение содержания катионных белков и пептидов в нейтрофилах крови с помощью лизосомально-катионного теста (ЛКТ)

1.4. Оценка влияния нитрита натрия на цитокин-продуцирующую активность лимфоцитов крови при сочетанном применении с митогенами, нейромедиаторами и цитокинами с использованием реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ)

1.5. Метод исследования влияния нитрита натрия на миграционную активность лейкоцитов при инкубации фрагментов ткани сердца в аутологичной плазме крови крыс

1.6. Метод оценки влияния нитрита натрия на миграцию гранулоцитов в ткани сердца по изменению активности тканевой миелопероксидазы

1.7. Метод исследования влияния нитрита натрия на содержание нитратов, нитритов и оксида азота в плазме крови крыс с помощью высокочувствительного колориметрического метода

1.8. Исследование влияния нитрита натрия на содержание ИЛ-10, ИНФу и ФНОа в плазме крови с использованием иммуноферментных методов

1.9. Статистическая обработка результатов

2. ПОДВИЖНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ НИТРИТНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ КАК ИНТЕГРАЛЬНЫЙ ПОКАЗАТЕЛЬ МИГРАЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК БЕЛОЙ КРОВИ

2.1. Молекулярно-клеточные и системные механизмы влияния азотсодержащих веществ на миграцию клеток белой крови в организме

2.2. Результаты исследования и их обсуждение

2.2.1. Влияние различных концентраций нитрита натрия на спонтанную подвижность лейкоцитов крови in vitro

2.2.2. Влияние нитрита натрия на подвижность лейкоцитов крови при сочетанном применении с норадреналином и ацетилхолином

2.2.3. Влияние нитрита натрия на миграционную активность лейкоцитов при инкубации ткани правого и левого желудочков сердца в аутологичной плазме крови

3. ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ОТДЕЛЬНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ НИТРИТНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

3.1. Основные литературные сведения о влиянии азотсодержащих веществ на иммунную систему

3.2. Результаты исследования и их обсуждение

3.2.1. Влияние нитрита натрия на цитокин-продуцирующую активность Т-лимфоцитов крови, индуцированную конканавалином А фитогемагглютинином

3.2.2. Влияние нитрита натрия на цитокин-продуцирующую активность В-лимфоцитов и моноцитов крови при изменении продукции ИЛ-1 с помощью липополисахарида и рецепторного антагониста ИЛ-1

3.2.3. Особенности изменения состояния кислородзависимого и кислороднезависимого звеньев микробицидной активности нейтрофилов крови после аппликации нитрита натрия

4. НИТРИШАЯ ИНТОКСИКАЦИЯ И ПРЕВРАЩЕНИЕ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ВЕЩЕСТВ В ОРГАНИЗМЕ

4.1. Современные представления о существовании цикла оксида азота и механизмах его регуляции

4.2. Результаты исследования и их обсуждение

4.2.1. Влияние аппликации нитрита натрия на уровень метаболитов оксида азота в инкубационной среде при 3-часовой инкубации тканевых препаратов сердца

4.2.2. Динамика изменения содержания азотсодержащих веществ в плазме крови крыс после однократной подкожной инъекции нитрита натрия

4.2.3. Динамика изменения содержания азотсодержащих веществ в плазме крови после однократной подкожной инъекции нитрита натрия на фоне

предварительной интраназальной инфузии иммуномодулятора тимогена

5. ВЛИЯНИЕ ДОНОРОВ ОКСИДА АЗОТА НА МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА

5.1. Современные представления о нитрите натрия как молекуле, обеспечивающей гомеостаз N0 и клеточный сигналинг

5.2. Результаты исследования и их обсуждение

5.2.1. Влияние нитритной интоксикации на миграционную активность фагоцитирующих клеток в ткани сердца, головного мозга и печени

5.2.2. Влияние нитритной интоксикации на миграционную активность фагоцитирующих клеток в ткани сердца, головного мозга и печени после предварительной интраназальной инфузии тимогена

5.2.3. Влияние нитритной интоксикации на содержание ИЛ-10, ИНФу и ФНОа в плазме крови крыс

5.2.4. Влияние нитритной интоксикации на содержание ИЛ-10, ИНФу и ФНОа в плазме крови крыс после предварительной интраназальной инфузии

тимогена

Заключение

ВЫВОДЫ

Список использованных источников

Список сокращений

АФК активные формы кислорода

АХ ацетилхолин

ИЛ-1 р.а. рецепторный антоганист интерлейкина-1

ИЛ-10 интерлейкин

ИНФу интерферон-гамма

КонА конканавалин А

ЛКТ лизосомально-катионный тест

ЛПС липополисахарид

МПО миелопероксидаза

НА норадреналин

НАД(Ф)Н никотинамидадениндинуклеотид (фосфат) восстановленный

нет нитросиний тетразолий

ПОЛ перекисное окисление липидов

ПЯЛ полиморфноядерные лейкоциты

РТМЛ реакция торможения миграции лейкоцитов

ецк средний цитотоксический коэффициент

ФГА фитогемагглютинин

ФНОа фактор некроза опухоли-альфа

цАМФ аденозин-3',5'-монофосфат

цГМФ гуанозин-3',5'-монофосфат

БОР фактор роста фибробластов

НЬ дезоксигемоглобин

МЬ дезоксимиоглобин

МеШЬ метгемоглобин

КаЖ>2 нитрит натрия

N08 синтаза оксида азота

УЕСБ фактор роста эндотелиальных клеток

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние нитрита натрия на адаптивные реакции лейкоцитов крови»

Введение

Актуальность проблемы. О том, что экзогенные нитриты и нитраты токсичны для организма млекопитающих, известно давно. Бытовое отравление неорганическими нитритами было и остается распространенным явлением. Считается, что токсическое действие этих соединений во многом определяется их способностью эффективно окислять гемоглобин до метгемоглобина, то есть вызывать метгемоглобинемию, приводя к снижению кислородной емкости крови и созданию гипоксии. Хотя тяжесть метгемоглобинемий и их исход зависят от многих обстоятельств, тем не менее, смертельные случаи при нитритной интоксикации далеко не редкость.

Способность нитритов и нитратов окислять гемоглобин и родственные гемопротеиды связана с превращением азотсодержащих веществ в организме с образованием оксида азота (NO), обычно существующего в форме радикала -N0*. С помощью нитритредуктазных систем, в крови и клетках тканей при участии дезоксигемоглобина (Hb) и дезоксимиоглобина (Mb) идет восстановление нитрат-иона (N03~) в нитрит-ион (N02~), а затем уже в митохондриях и микросомах клеток, благодаря НАДФН-оксидазной активности, происходит восстановление ионов N02~ в NO.

Впервые N0 был получен более 300 лет назад независимо друг от друга двумя английскими учеными Р. Бойлем и Р. Куком путем нагревания нитрата калия в отсутствие воздуха. Образующуюся при этом не поддерживающую горение газовую субстанцию назвали «volatile nitre» - «азотный воздух» (Зенков и др., 2001). В 1774 году знаменитый английский ученый Д. Пристли провел и описал другую реакцию, газообразный продукт которой назвал селитряным воздухом (Зеленин, 1997).

В течение нескольких столетий после этого относительно детально изучались физико-химические свойства NO и его различных доноров. Синтез NO в организме млекопитающих и его важная биологическая роль получили

широкое освещение в последние десятилетия XX века. В 1992 году журнал "Science" назвал оксид азота молекулой года, а еще через 6 лет сразу трем ученым - Р. Ферчготту, JI. Игнарро и Ф. Мураду - была вручена Нобелевская премия за 1998 год в области физиологии или медицины за открытие роли "оксида азота как сигнальной молекулы в сердечно-сосудистой системе" (Ноздрачев и др., 2003).

Столь высокая награда была дана ученым за доказательство существования эндотелиального фактора релаксации, играющего важную роль в поддержании тонуса кровеносных сосудов, и демонстрацию что этот фактор представляет собой NO. Синтезируемый эндотелиальными клетками оксид азота попадает в гладкомышечные клетки стенок кровеносных сосудов, где действует на белки, содержащие гемовое железо, что вызывает расслабление гладких мышц сосудов, посредством чего осуществляется локальная ауторегуляция кровотока (Ignarro, 1989).

В связи с обнаружением двойственной роли NO концепция о токсичности попадающих в организм человека экзогенных нитритов и нитратов стала подвергаться критике. Сообщалось, что введение азотсодержащих веществ лабораторным животным ограничивает зону некроза и повышает выживаемость при инфаркте миокарда (Duranski et al., 2005; Doganci et al., 2012), препятствует развитию гипертонии (Pasero et al., 2013), защищает пищеварительную систему от агрессивного действия аспирина (Ricciardolo, 2004).

NO представляет собой 2-атомную свободнорадикальную молекулу массой 28 Да, имеет один электрон с неспаренным спином и является высоко реакционной молекулой с широким спектром биологического действия. В организме млекопитающих образование NO происходит при ферментативном окислении L-аргинина (Зенков и др., 2001; Murad, 2006; Habib, Ali, 2011).

Синтез оксида азота осуществляется с помощью цитохром-Р-450-подобных гемопротеинов - NO-синтаз (NOS). Существует две основные формы NO-синтаз: конститутивная (эндотелиальная и нейрональная) и индуцибельная (iNOS). Все три изоформы NOS для синтеза оксида азота используют

кофакторы НАДФН, ФАД, ФМН, тетрагидробиоптерин и комплекс протопорфирина с двухвалентным железом. Образующийся оксид азота распространяется посредством простой диффузии и действует прямо на внутриклеточные мишени. Значение N0 отнюдь не ограничивается его неоспоримой ролью в регуляции кровяного давления, он является универсальным регулятором внутри- и межклеточных сигнальных систем и эффектором многих процессов жизнедеятельности.

N0, легко проникая через мембраны, диффундирует от нейронов к пресинаптическим мембранам и выступает как нейромедиатор. Его способность активировать растворимую форму гуанилатциклазы является необходимым условием феномена, связанного с функционированием механизмов памяти и формированием устойчивых патологических связей в нервной системе (Болдырев, 2001). С оксидом азота связаны регуляция секреции инсулина (МиЬашшес!, ЬипсЩшз^ 8а1еЫ, 2012) и развитие диабета (Natali е1 а1., 2013), регуляция почечной фильтрации (РШ1 е1 а1., 2012), репаративных процессов в костной и кожной тканях, слизеобразования в кишечном эпителии и многие другие процессы.

В медицинской практике широко используются терапевтические воздействия, направленные на усиление образования N0, например, в пульмонологии при острой респираторной недостаточности, отеке легкого, синдроме шокового легкого. Ингаляция газовой смеси, содержащей N0, снижает уровень легочной гипертонии и предотвращает гипоксию в легких -важнейший фактор в развитии асфиксии новорожденных. Может оказаться полезным и насыщение окисью азота инфузируемых растворов. В эксперименте таким способом удавалось предотвращать развитие ишемической болезни сердца (ЬосЬпег е1 а1., 2009).

Другой положительный пример использования азотсодержащих веществ в медицине - кардиологический препарат нитроглицерин. Нитроглицерин -типичный пример пролекарства. Пролекарство - химически модифицированная форма лекарственного препарата, которая в биосредах в результате

метаболических процессов превращается в само лекарственное средство. Нитроглицерин быстро всасывается клетками слизистых оболочек ротовой полости, стенками желудка и диффундирует в кровяное русло, где легко гидролизуется с образованием нитрит-иона, который в свою очередь при взаимодействии с гемоглобином крови и железосодержащими ферментными системами гладкомышечных клеток сосудистой стенки восстанавливается с образованием оксида азота.

Положительное влияние доноров оксида азота, не отменяет его негативного действия на различные системы организма. Результаты ряда исследований свидетельствуют, что образование свободного радикала в организме в ходе NO-синтазных и нитритредуктазных реакций может выступать как патогенетическое звено в механизмах канцерогенеза и быть причиной появления некоторых видов опухолей (Граник, Григорьев, 2004; Запорожан, 2004; Nakamura et al., 2006; Chen et al., 2008; Rahat, Hemmerlein, 2013). Известно, что избыточная продукция NO чревата немедленными тяжелыми последствиями, реализующимися при эндотоксическом шоке, когда грамотрицательные бактерии вызывают мощное образование NO в гладких мышцах сосудов, падение кровяного давления и развитие других характерных для шока нарушений кровообращения.

В настоящее время проблема механизмов регуляции образования и функционирования NO в организме вышла на одно из первых мест по числу опубликованных работ. Экспериментальных данных об использовании NO-генерирующих соединений и ингибиторов NO-синтаз накопилось достаточно много. Установлено, что в основе биологических эффектов оксида азота лежат три реакции:

- взаимодействие с гемовым и негемовым железом;

- реакции с SH- и NH2- группами;

- участие в свободнорадикальных процессах.

Особенно актуальным является изучение эффектов азотсодержащих веществ в связи с регуляцией иммунной системы. В первую очередь, это

связано с тем, что N0 выступает в качестве одного из основных эффекторов системы клеточного иммунитета, оказывая антимикробное и противоопухолевое действие. Антимикробная активность N0 наблюдается при повышении и длительно поддерживаемой продукции этого агента ¡N08, экспрессия которой наблюдается в макрофагах, кардиомиоцитах, астроглии, гепатоцитах, гладкомышечных клетках.

Цитотоксическое действие N0 проявляется в отношении внеклеточных и внутриклеточных паразитов. N0 быстро диффундирует через клеточную стенку прокариот или клеточную мембрану собственных клеток организма, оказывая на них цитотоксическое или цитостатическое действие. Микробицидное и цитотоксическое действие оксида азота зависит от содержания в среде окислов азота, нитрита, нитрата и пероксинитрита (0Ж>0~). N03" и N02 , как сильные окислители, могут ингибировать ДНК-лигазу, необходимую для восстановления целостности ДНК в процессах транскрипции и репарации. Их цитотоксичность возрастает при низких рН, а также в присутствии перекиси водорода и миелопероксидазы.

Как известно, в очаге воспаления накапливается продукт частичного восстановления кислорода - супероксид-анион. N0 и супероксид-анион подвергаются быстрому радикал-радикальному взаимодействию с образованием высокотоксичного пероксинитрита.

Пероксинитрит способен индуцировать процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в мембранах, вызывать однонитевые разрывы ДНК и ингибировать митохондриальное дыхание. Этот агрессивный агент может повреждать сосудистый эндотелий, увеличивать агрегацию тромбоцитов и участвовать в процессах эндотоксемии, остром легочном повреждении при респираторном дистресс-синдроме.

При воспалении оксид азота ингибирует активацию нейтрофилов за счет угнетения активности НАДФН-оксидазы. Взаимодействуя с 02, N0 уменьшает активность миелопероксидазы и снижает продукцию полиморфоядерными лейкоцитами продукцию гипогалоидов. Указанные факты позволяют

и

рассматривать возрастание уровня N0 при воспалительных процессах, как защитный механизм против цитотоксического действия фагоцитов на итактные клетки собственного организма.

NO-радикалы тормозят пролиферацию лимфоцитов, индуцированную Т- и В-клеточными митогенами, что связывают с иммуносупрессией при острых вирусных инфекциях. В литературе имеются весьма противоречивые данные о влияние N0 на миграционную активность лейкоцитов. Сообщалось, что N0 ингибирует агрегацию тромбоцитов и адгезию нейтрофилов к эндотелию сосудов посредством регуляции экспрессии молекул адгезии ICAM-1, Р- и Е-селектина на эндотелиальных клетках (Weinberger et al., 2001). В то время как другие авторы показали, что оксид азота способен индуцировать экспрессию РЕСАМ-1, VLA-4 и Мас-1, тем самым усиливая трансэндотелиальную миграцию нейтрофилов (Isenberg, 2003; Conran et al., 2003; Liu et al., 2012).

Биологическая активность оксида азота (про- и противоопухолевая) зависит от его концентрации. Низкие дозы N0 могут стимулировать пролиферацию клеток, тогда как высокие концентрации - вызывают цитотоксический эффект (Запорожан и др., 2004). Предполагают, что эндогенная активность конститутивно экспрессируемых форм NOS способствует пролиферации клеток, а продукция N0, индуцированная iNOS, тормозит рост клеток.

При окислительном стрессе или воспалении оксид азота, являясь активированным кислородным метаболитом, индуцирует апоптоз для удаления старых, дефектных, несущих чужеродную информацию клеток, а также участвует в инициации иммунного ответа. Сам по себе или совместно с провоспалительными цитокинами (интерферон-у, ФНО) он активирует синтез iNOS в макрофагах, эндотелиоцитах и гладкомышечных клетках, тем самым усиливая продукцию NO-радикалов. N0, проникая через мембрану клетки и оказавшись в цитоплазме, повреждает ДНК клетки-мишени путем ее дезаминирования или ингибирования рибонуклеотидредуктаз, которые регулируют скорость репликации ДНК.

Кроме того, N0 инактивирует глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу, блокируя этим гликолитический синтез АТФ, а также ингибирует электронный транспорт в митохондриях. Можно полагать, что высокие концентрации N0 вызывают повреждение ДНК и последующую гибель клеток, в том числе аутореактивных. Избыточное накопление оксида азота, вызывая повреждение собственных тканей и иммуносупрессию, может ассоциироваться с грозными аутоиммунными заболеваниями - ревматоидным артритом, рассеянным склерозом, диабетом (\Villenborg а1., 2007).

По современным представлениям, оксид азота, являясь важнейшим фактором, определяющим состояние окружающей атмосферы и внешние условия существования человека, выступает мощным внутренним биорегулятором. Обобщая известные на сегодняшний день данные об этой молекуле, справедливо сделать вывод, что, помимо регуляторных эффектов (вазодилатация, нейротрансмиссия, снижение агрегации тромбоцитов, иммунорегуляция, регуляция тонуса гладких мышц, состояние памяти), оксид азота может оказывать защитные эффекты (способность выступать в роли антиоксиданта, уменьшать вызванные активированными лейкоцитами повреждения тканей, осуществлять бактерицидное действие) и повреждающие эффекты (ингибирование ферментов, повреждение ДНК, запуск ПОЛ, истощение запасов антиоксидантов, увеличение чувствительности к облучению и токсичным металлам).

Тройственная роль оксида азота в биологических процессах организма, определяет его неоднозначное положение в современной науке и требует дальнейших интенсивных исследований. Широкое распространение азотсодержащих ксенобиотиков в среде обитания человека делает особенно актуальным анализ эффектов нитритов на различные звенья врожденного и приобретенного иммунитета, в том числе исследование их влияния на отдельные популяции лейкоцитов.

Целью работы явилось изучение функциональной активности различных популяций лейкоцитов при избытке метаболитов оксида азота. Были поставлены следующие задачи:

1. Оценка влияния различных концентраций нитрита натрия (NaN02) на двигательную активность лейкоцитов, продукцию ими провоспалительных цитокинов и их миграцию в тканевые препараты сердца.

2. Изучение влияния NaN02 на базальную и индуцированную цитокин-продуцирующую активность лимфоцитов, а также на микробицидную активность нейтрофилов in vitro.

3. Анализ изменений содержания метаболитов оксида азота в инкубационной среде и в плазме крови на фоне аппликаций и инъекций NaN02.

4. Оценка в динамике нитритной интоксикации миграции нейтрофилов по уровню активности миелопероксидазы (МПО) в тканях сердца, головного мозга, печени с одновременным определением содержания в плазме крови ИЛ-10, ИНФ-у и ФНО-а.

5. Исследование особенностей влияния нитритной интоксикации на миграцию нейтрофилов в ткани сердца, головного мозга, печени и на содержание в плазме крови метаболитов NO, ИЛ-10, ИНФ-у и ФНО-а при стимуляции иммунной системы тимогеном.

Научная новизна работы. В результате проведенных экспериментальных исследований получены новые данные об особенностях влияния нитрита натрия на спонтанную и индуцированную митогенами и нейромедиаторами подвижность клеток крови в условиях in vitro. Впервые изучена зависимость функциональной активности и миграции различных популяций лейкоцитов от уровня содержания в инкубационной среде метаболитов N0. Впервые исследовано влияние нитрита натрия на миграцию отдельных популяций лейкоцитов в ткани в условиях целостного организма в нормальных условиях и при стимуляции иммунной системы тимогеном.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. In vitro NaN02 дозозависимо уменьшает двигательную активность лейкоцитов крови, ослабляет стимулирующее действие норадреналина на продукцию клетками провоспалительных цитокинов и уменьшает в ранние сроки инкубации миграцию лимфоцитов из эксплантатов тканей левого желудочка сердца.

2. NaN02 ослабляет индуцируемую липополисахаридом продукцию провоспалительных цитокинов В-лимфоцитами и активирует НАДФН-оксидазную систему нейтрофилов.

3. Наибольшее содержание метаболитов NO в плазме крови наблюдается в первые 30 мин нитритной интоксикации. Нитрит натрия стимулирует продукцию N0 переживающей тканью левого желудочка сердца интенсивнее и быстрее, чем тканью правого желудочка.

4. В ранние сроки после введения NaN02 происходит усиление миграции нейтрофилов в ткани головного мозга и правого желудочка сердца с одновременным увеличением содержания ФНО-а и снижением ИНФ-у в плазме крови.

5. При предварительной стимуляции иммунной системы тимогеном нитритная интоксикация в более поздние сроки сопровождается ускорением метаболизма N0, ослаблением миграции нейтрофилов в ткани головного мозга и правого желудочка сердца и уменьшением содержания в плазме крови ИЛ-10.

Теоретическое и практическое значение работы. Проведенные исследования расширяют существующие представления о влиянии метаболитов оксида азота на функциональную активность различных популяций лейкоцитов крови. Впервые установлено, что присутствие низких концентраций нитрита натрия не изменяет способность Т-лимфоцитов продуцировать провоспалительные цитокины в ответ на митогены конканавалин А и фитогемагглютинин. NaN02 угнетает двигательную активность лейкоцитов и их чувствительность к регуляторным влияниям катехоламинов и липополисахарида. Выявленный феномен, что нитрит натрия уменьшает миграцию лимфоцитов из эксплантатов тканей левого желудочка сердца, может

служить стимулом для дальнейшего исследования иммунной системы самого сердца. Использование в качестве инкубационной среды аутологичной плазмы крови весьма удобно для поддержания жизнедеятельности клеток сердца при их длительном культивировании. Проведение экспериментов на переживающей ткани сердца является перспективной моделью для изучения миграции лейкоцитов и ее роли в регуляции деятельности кардиомиоцитов. Обнаруженное увеличение активности МПО в тканях мозга и правого желудочка сердца в ранние сроки нитритной интоксикации представляет практический интерес для фармакологов и кардиологов, использующих нитраты для коррекции деятельности сердечно-сосудистой системы.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: Multidisciplinary International Conference of Biological Psychiatry «Stress and Behavior» (St.Peterburg, 2007), Международной конференции по иммунологии «Физиология и патология иммунной системы» (Москва, 2008), Всероссийской конференции с международным участием «Механизмы адаптации физиологических систем организма к факторам среды», посвященной 85-летию со дня основания Института физиологии им. И.П. Павлова РАН (Санкт-Петербург, 2010), III Съезде физиологов СНГ (Ялта, 2011), XVI International Congress on Rehabilitation in Medicine and Immunorehabilitation (Paris, 2011), Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 220-летию со дня рождения академика K.M. Бэра «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2012), XVI Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей (с международным участием) «Фундаментальная наука и клиническая медицина - человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2013).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 23 работы (2 статьи, 1 монография, 20 тезисов).

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, описания методических приемов, четырех глав экспериментальной работы

(каждая из которых включает в себя литературную предпосылку, результаты исследования и их обсуждение), заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 129 страницах машинописного текста, содержит 4 таблицы и 28 рисунков. Библиографический указатель содержит 44 отечественных и 100 иностранных источников.

1. ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ, А ТАКЖЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ ПРИЕМЫ И ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ В РАБОТЕ МЕТОДЫ

Объект исследования - самцы крыс линии Вистар с массой тела 180-250г (п=100). Животных содержали в стандартных условиях вивария при температуре окружающей среды 17-23°С, при естественном световом режиме и свободном доступе к воде и пище. Крысы помещались в стандартные клетки (кювета с решетчатой сеткой), не более 5 животных на клетку. В качестве пищи использовали гранулированный корм для грызунов, выпускаемый виварием Института физиологии им. И.П. Павлова РАН, поилки заполняли водопроводной водой, а в качестве подстилки применяли древесные опилки. Все опыты проводили в утреннее время в зимне-весенний период.

1.1. Постановка экспериментов in vitro и in vivo

В экспериментах in vitro для исследования влияния нитрита натрия на функциональную активность лейкоцитов крови собирали кровь декапитированных интактных крыс в пробирки с гепарином (100 ед/мл). Направленность и интенсивность воздействий определенных концентраций NaN02 на функционирование отдельных популяций лейкоцитов оценивали, инкубируя в присутствии азотсодержащего ксенобиотика или без него кровь или плазму крови. Последнюю получали путем центрифугирования крови в течение 10 минут при 150g. В опытах с изучением влияния NaN02 на миграцию лейкоцитов из ткани или, наоборот, в ткань правого и левого желудочков сердца после взятия крови у крыс дополнительно извлекали сердце. Орган помещали в стаканчик с бикарбонатным буфером Кребса-Рингера (рН 7.3), тщательно промывали, извлекали под контролем бинокулярной лупы правый и левый желудочки. Внешние границы обоих желудочков определяли по прохождению продольных борозд и их смыканию у верхушки сердца (Ноздрачев, Поляков, 2001). Дополнительным критерием служила перегородка,

отделяющая внутреннюю полость левого и правого желудочков (она является более выпуклой в сторону правого желудочка). В экспериментах использовали ткань стенки вводной части желудочков сердца

В опытах in vivo проводилось две серии экспериментов на наркотизированных золетилом животных (60 мг/кг внутрибрюшинно). В первой серии спустя 20 минут после наркоза, опытным крысам подкожно вводили 2,5 мл нитрита натрия (3 мг/100 г массы тела), контрольной группе животных делали инъекции эквивалентного объема физиологического раствора (хлорид натрия, 0,9%). Через 30 и 60 минут после инъекции крыс декапитировали с помощью гильотины (Open Sciense). Для проведения биохимического анализа кровь собранную в пробирки с гепарином (100 ед/мл), центрифугировали 10 минут при 150g для получения плазмы крови. В плазме крови определяли содержание азотсодержащих веществ и некоторых цитокинов с использованием энзиматического спектрофотометрического и иммуноферментного методов. Для оценки миграции нейтрофилов в ткани извлекали головной мозг, печень, правый и левый желудочки сердца. Образцы тканей и плазму крови замораживали в жидком азоте и хранили при -80°С до момента использования.

Для исследования особенностей влияния NaN02 на фоне стимуляции деятельности иммунной системы во второй серии опытов крысам предварительно в течение трех дней 2 раза в сутки (10.00 и 14.00) интраназально с помощью микрошприца вводили 0,07 мкг иммуностимулятора тимогена («Цитомед», Санкт-Петербург) в объеме 10 мкл в каждую ноздрю. На четвертый день через 40 минут после последней седьмой инфузии иммуностимулятора опытным животным подкожно вводили нитрит натрия (3 мг/100 г массы тела), контрольным - физиологический раствор (хлорид натрия, 0,9%). Спустя 30 минут животных наркотизировали указанным выше способом, а затем еще через 30 минут декапитировали, собирали кровь и извлекали исследуемые ткани.

1.2. Капиллярный метод исследования влияния различных концентраций нитрита натрия на спонтанную подвижность лейкоцитов крови

Спонтанная подвижность лейкоцитов - миграция в отсутствие хемоаттрактантов отражает способность клеток выходить из кровеносного русла в ткань, поглощать объекты фагоцитоза и освобождать в среду защитные факторы (Тотолян, Фрейдлин, 2000).

Прингщп метода. Метод основан на сравнительном анализе миграции клеток белой крови в 5-канальных стеклянных капиллярах (Хаитов, 1995) в присутствии №N02 или замены его на эквивалентный объем физиологического раствора.

Ход определения. В отдельные лунки 96-луночных полистирольных планшетов, наливали 50 мкл гепаринизированной крови крысы, добавляли 10 мкл физиологического раствора (контрольная проба) или 10 мкл раствора нитрита натрия (растворитель - физиологический раствор), приготовленного таким образом, чтобы концентрация ШЖ>2 в лунке составляла 10"12 М, 10"ПМ, 1О"10М, 10"9М, 10"8М, 10"7М, 10"6М, 10'5М, 10"4М, 10"3 М (опытные образцы). 5-канальные стеклянные капилляры (длина 35 мм и внутренний диаметр - 1мм) вертикально опускали в каждую лунку планшета и заполняли кровью на 2/3 длины, концы заделывали пластилином. Затем капилляры центрифугировали в течение 10 минут при 100§ для осаждения клеток, помешали в термостат и инкубировали при 37°С в течение 24 часов.

Учет результатов. При малом увеличении микроскопа с помощью измерительного окуляр-микрометра определяли длину зоны миграции (ДЗМ) основной массы лейкоцитов от границы эритроцитарного осадка в контрольных и опытных образцах. ДЗМ определяли во всех пяти каналах, а результат выражали в виде средней от 5-ти измеренных величин в условных единицах (у.е.).

1.3. Цитохимические методы анализа влияния нитрита натрия на состояние кислородзависимого и кислороднезависимого звеньев бактерицидности нейтрофилов

Для оценки характера влияния нитрита натрия на функциональную активность фагоцитирующих клеток применялись широко использующиеся в клинической практике тесты. В лунки полистирольного планшета наливали по 50 мкл гепаринизированной крови и 10 мкл раствора нитрита натрия

о

(концентрация составляла 10" М) - опытные пробы. В контрольные образцы наливали по 50 мкл гепаринизированной крови и 10 мкл физиологического раствора. Полученные таким образом образцы крови инкубировали в течение 40 минут при 37°С, а затем определяли изменение функциональной активности нейтрофилов .под воздействием нитрита натрия.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Петенкова, Анастасия Андреевна, 2013 год

Список используемых источников

Ажипа, ЯМ. Экологические и медико-биологические аспекты загрязнения окружающей среды нитратами и нитритами / Я.И. Ажипа, В.П. Реутов, Л.П. Каюшин // Физиология человека. - 1990. - Т.16, №3. - С. 131-149.

Болдырев, A.A. Окислительный стресс и мозг / А. А. Болдырев // Соросовский образовательный журнал. - 2001. - Т.7, № 4. - С. 21-28.

Граник, В.Г. Оксид азота (N0). Новый путь к поиску лекарств / В.Г. Граник, Н.Б. Григорьев. - М.: Вузовская книга, - 2004. - 360 с.

Дубынин В.А. Регуляторные системы организма человека: учеб. пособие / В. А. Дубынин, А. А. Каменский, М. Р. Сапин, В. И. Сивоглазов. - М.: Дрофа, 2003.-367 с.

Запорожан, В.Н. Биологическая активность оксида азота в механизмах опухолевого роста / В.Н. Запорожан, А.И. Гоженко, Т.В. Корнеенко, В.Г. Дубинина // Успехи физиол. наук. - 2004 - Т.35, № 1 - С. 66-83.

Зеленин, К.Н. Оксид азота(П): новые возможности давно известной молекулы / К.Н. Зеленин // Соросовский образовательный журнал. - 1997. -№10.- С. 105-110.

Зенков, Н.К. Окислительный стресс / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меныцикова. - М.: Наука/Интерпериодика, 2001. - 343 с.

Ивашкин, В.Т. Клиническое значение оксида азота и белков теплового шока / В.Т. Ивашкин, О.М. Драпкина. - ГЭОТАР-Медиа, 2011. - 376 с.

Корнева, Е.А. Введение в иммунофизиологию: учеб. пособие / Е.А. Корнева. - СПб.: Элби-СПб, 2003. - 48 с.

Мажитова, М. В. Возрастные и половые особенности антиоксидантной защиты и свободнорадикальных процессов в мозгу белых крыс / М.В. Мажитова, H.H. Тризно, Д.Л. Тёплый // Успехи геронтологии. - 2010. - Т. 23, №3.- С. 396-399.

Малкоч, А. В. Физиологическая роль оксида азота в организме / A.B. Малкоч, В.Г. Майданник, Э.Г. Курбанова // Нефрология и диализ. - 2000. - Т. 2, №1. - С. 22-29.

Марков, Х.М. L-аргинин оксид азота в терапии болезней сердца и сосудов / Х.М. Марков // Кардиология. - 2005. - № 6. - С. 87-95.

Меньшиков, И.В. Основы иммунологии: Лабораторный практикум / И.В. Меньшиков, Л.В. Бедулева. - Ижевск: ИД Удмуртский ун-т, 2001. - 136 с.

Мечников, И.И. Этюды оптимизма / И.И. Мечников. - М.: НАУКА, 1988. -328 с.

Морозов, В.Г. Пептидные тимомиметики / В. Г. Морозов, В. X. Хавинсон, В. В. Малинин. - СПб.: Наука, 2000. - 158 с.

Нагоев, Б.С. Модификация цитохимического метода восстановления нитросинего тетразолия / Б.С. Нагоев // Лаб. Дело. - 1982. - № 8. - С. 7-10.

Недоспасов, A.A., Беда Н.В. Биогенные оксиды азота / A.A. Недоспасов, Н.В. Беда // Природа. - 2005. - № 7. - С. 35-42.

Ноздрачев, А.Д. Начала физиологии: Учебник для вузов / А.Д. Ноздрачев, Ю.Н. Баженов, И.А. Баранникова, Батуев A.C. и др; под общ. ред. акад. А.Д. Ноздрачева. - СПб.: Лань, 2004. - 1088 с.

Ноздрачев, А.Д. Нобелевские премии по физиологии или медицине за 100 лет. 2-е издание / А.Д. Ноздрачев, А.Т. Марьянович, Е.Л. Поляков, Д.А. Сибаров, В.Х. Хавинсон. - СПб.: Гуманистика, 2003. - 752 с.

Ноздрачев, А.Д. Анатомия крысы (Лабораторные животные) / А.Д. Ноздрачев, Е.Л. Поляков; под ред. акад. А.Д. Ноздрачева. - СПб.: Лань, 2001. -464 с.

Пигаревский, В.Е. К методике применения лизосомально-катионного теста в лабораторной диагностической практике / В.Е. Пигаревский, Ю.А. Мазинг // Лаб. Дело. - 1981. -№ 10. - С. 579-582.

Полякова, В.О. Тимус и старение (нейроиммуноэндокринные механизмы) / В.О. Полякова, И.М. Кветной. - СПб.: Система, 2004,- 102 с.

Полякова, В.О. Динамика процессов апоптоза и пролиферации клеток пинеальной железы человека при старении / В.О. Полякова, Н.С. Линькова, С.А. Пичугин // Бюллетень современной биологии и медицины. - 2010. - Т. 150, № 10.-С. 443^45.

Проскуряков, С.Л. Биология окиси азота / С.Л. Проскуряков, А.Г. Коноплянников, А.И. Иванников, В.Г. Скворцов // Успехи современной биологии. - 1999. - Т. 119, № 4. - С. 380-395.

Реутов, В.П. Цикл оксида азота как механизм стабилизации содержания N0 и продуктов его превращения в организме млекопитающих / В.П. Реутов, Е.Г. Сорокина, А.И. Гоженко, Н.С. Косицын, В.Н. Турин // Актуальные проблемы транспортной медицины. - 2008. - Т. 1, № 11. - С. 22-28.

Реутов, В.П. ТЧО-синтазная и нитритредуктазная компоненты цикла оксида азота / В.П. Реутов, Е.Г. Сорокина // Биохимия. - 1998. - Т. 63, № 7. - С. 10291040.

Реутов, В.П. Цикл окиси азота в организме млекопитающих/ В.П. Реутов // Успехи биологических наук. - 1995. - Т. 35. - С. 189-228.

Реутов, В.П. Роль оксида азота в регуляции работы миокарда. Цикл окиси азота и >Ю-синтазные системы в миокарде / В.П. Реутов, Е.А. Гоженко, Е.Г. Сорокина // Актуальные проблемы транспортной медицины. - 2007. - Т. 4, № 10. - С. 89-112.

Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл; пер. с англ. - М.: Мир, 2002. - 592 с.

Романова, Т.А. Электронная структура комплекса гема гемоглобина с оксидом азота и динамика атомного остова при физиологической температуре / Т.А. Романова, В.О. Краснов, П.В. Аврамов // Вопросы медицинской химии. -2001. - № 3. - С.154-158.

Сепиашвили, Р.И. Основы физиологии иммунной системы / Р.И. Сепиашвили. - М.: Медицина-Здоровье, 2003. - 456 с.

Середенко М.М., Дударев В.П., Лановенко И.И. и др. Механизмы развития и компенсации гемической гипоксии,- Киев: Наукова. Думка. - 1987.-200 с.

Тотолян, A.A. Клетки иммунной системы / A.A. Тотолян, И.С. Фрейдлин. - СПб.: Наука, 2000. - 231 с.

Уразаев, А.Х. Физиологическая роль оксида азота / А.Х. Уразаев, A.JI. Зефиров // Успехи физиологических наук. - 1999.-Т. 30. - С. 54-72.

Хавинсон, В. X. Пептидные биорегуляторы ингибируют апоптоз / В.Х. Хавинсон, И.М. Кветной // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2000. -Т. 130, № 12. -С. 657-659.

Хавинсон, В. X. Регуляторные пептиды и гомеостаз / В.Х. Хавинсон, Т.В. Кветная // Российский химический журнал. - 2005. -№ 1. -С. 112-117.

Хавинсон, В. X Пептидная регуляция репаративных процессов в органах иммунной системы при ускоренном старении / В.Х. Хавинсон, Н.С. Линькова, И.М. Кветной, В.О. Полякова, A.B. Трофимов, H.H. Севостьянова, Р.И, Абдулрагимов // Научные ведомости Белгородского государственно университета. Медицина. Фармация. Геронтология и гериатрия. - 2010. - № 22 (93).-С. 57-61.

Хаитов, P.M. Экологическая иммунология / Р.И. Хаитов, Б.В. Пинегин, Х.М. Истамов. - М.: ВНИРО. - 1995. -219 с.

Хаитов, P.M. Иммунология: учебник для студентов медицинских вузов / P.M. Хаитов. - М.: ВИНИТИ РАН, 2005. - 376 с.

Цой, Е.М. Функциональная активность лейкоцитов крови крыс в динамике нитритной интоксикации / Е.М. Цой, Р.И. Коваленко, А.Д. Ноздрачев // Росс, физиол. журн. -2008. - Т. 94, № 12. - С. 1374-1383.

Цой Е., Коваленко Р. Нитриты и межклеточные взаимодействия в иммунной системе: защитные и повреждающие эффекты. Saarbrucken (Germany): LAP LAMBERT Academic Publishing GmbH & Co. KG. — 2010. — 202 c.

Шугал ей, И.В. Окисление гемоглобина нитритом натрия и методы защиты белка от окислительного повреждения/ И.В. Шугал ей, И.В. Целинский // Журнал общей химии. - 1995. -Т.65, № 11. - С. 1889-1917.

Шумилова, Т.Е. Регуляция перифирического и системного кровообращения у крыс в условиях острой нитритной гипоксии / Т. Е. Шумилова, В. И. Шерешков, А. Д. Ноздрачев // Известия РАН. Серия биологическая. - 2012. - № 6. - С. 635-643.

Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. - М.: Медицина, 1999. - 608 с.

Abu-Soud, Н.М. Nitric oxide is a physiological substrate for mammalian peroxidases / H.M. Abu-Soud, S.L. Hazen // J. Biol. Chem. - 2000. - V.275 - P. 37524-37532.

Baldus, S. Myeloperoxidase enhances nitric oxide catabolism during myocardial ischemia and reperfusion / S. Baldus, T. Heitzer, J.P. Eiserich, D. Lau, H. Mollnau, M.Ortak, S.Petri, B.Goldmann, HJ.Duchstein, J.Berger, U.Helmchen, B.A. Freeman, T. Meinertz, T. Munzel // Free Radic Biol Med. -2004. -V. 37(6) P.-902-911.

Baskaran, P. Aspartate 102 in the Heme Domain of Soluble Guanylyl Cyclase Has a Key Role in NO Activation / P. Baskaran, E.J. Heckler, F. van den Akker, A. Beuve // Biochemistry. - 2011 - V. 50 (20). - P. 4291-4297.

Beck, R.W. Functional Neurology for Practitioners of Manual Therapy / R.W. Beck, F. Carrick. Elsevier Health Sciences, 2008. - 535 p.

Bellinger, D.L. Sympathetic nervous system and lymphocyte proliferation in the Fischer 344 rat spleen: a longitudinal study / D.L. Bellinger, D. Silva, A.B. Millar // Neuroimmunomodulation. - 2008. - V.15. - P.260-271.

Bir, S.C. Nitrite anion stimulates ischemic arteriogenesis involving NO metabolism / S.C. Bir, C.B. Pattillo, S. Pardue, G.K. Kolluru, J. Docherty, D. Goyette, P. Dvorsky, C.G. Kevil // Am J Physiol Heart Circ Physiol. - 2012. - V. 303(2)-P. 178-188.

Bosco, M.C. Monocytes and dendritic cells in a hypoxic environment: sportlights on chemotaxis and migration / M.C. Bosco, M. Puppo, F. Blenqio // Immunobiology- 2008. - V.213.- P. 733-749.

Bryan, N.S. Cardioprotective actions of nitrite therapy and dietary considerations / N.S. Bryan // Front Biosci (Landmark Ed) -2009 -V.14 - P.4793-08.

Bryan, N.S., Calvert JW, Elrod JW, Gundewar S, Ji SY, Lefer DJ. Dietary nitrite supplementation protects against myocardial ischemia-reperfusion injury / N.S. Bryan, J.W. Calvert, J.W. Elrod, S. Gundewar, S.Y. Ji, D.J. Lefer // Proc Natl Acad SciUS A. - 2007.-V. 104.-P. 19144-19149

Calvert, J.W. Myocardial protection by nitrite / J.W. Calvert, D.J. Lefer // Cardiovasc Res. - 2009. -V. 83(2) - P. 195-203.

Canteros, G. Nitric oxide synthase content of hypothalamic explants: increase by norepinephrine and inactivated by NO and cGMP / G Canteros, V Rettori, A Genaro, A Suburo, M Gimeno, S M McCann // Proc Natl Acad Sci USA.- 1996. - V. 93(9). - P. 4246^250.

Chavez-Valdez, R. Necrostatin-1 attenuates mitochondrial dysfunction in neurons and astrocytes following neonatal hypoxia-ischemia / R. Chavez-Valdez, L.J. Martin, D.L. Flock, F.J. Northington // Neuroscience.—2012. —V.219 — P. 192-203.

Chen, G.G. Increased inducible nitric oxide synthase in lung carcinoma of smokers / G.G. Chen, T.W. Lee, H. Xu, J.H. Yip, M. Li, T.S. Mok, A.P. Yim // Cancer. - 2008. - V. 11 (2). - P. 372-381.

Chia, S. Association of leukocyte and neutrophil counts with infarct size, left ventricular function and outcomes after percutaneous coronary intervention for ST-elevation myocardial infarction / S. Chia, J.T. Nagurney, D.F. Brown // Am J Cardiol. -2009. -V. 103. -P.333-337.

Clancy, R.M. Nitric oxide, an endothelial cell relaxation factor, inhibits neutrophil superoxide anion production via a direct action on the NADPH oxidase/ R.M. Clancy, J. Leszczynska-Piziak, S.B. Abramson // J. Clin. Invest. - 1992. - V. 90. - P. 1116-1121.

Connelly, L. Macrophage endothelial nitric-oxide synthase autoregulates cellular activation and pro-inflammatory protein expression / L. Connelly, A.T. Jacobs, M. Palacios-Callender, S. Moncada, A.J. Hobbs // J. Biol. Chem. - 2003. - V. 278.-P. 26480-26487.

Conran, N. Nitric oxide has a role in regulating VLA-4-integrin expression on the human neutrophil cell surface/ N. Conran, A. Gambero, H.H. Ferreira et al.// Biochem. Pharmacol. - 2003. - V.66. - P. 43-50.

Dauchet, L. Fruits, vegetables and coronary heart disease. / L. Dauchet, P. Amouyel, J. Dallongeville // Nat Rev Cardiol. - 2009. - V. 6. - P. 599-608.

Doganci, S. Sodium nitrite and cardioprotective effect in pig regional myocardial ischemia-reperfusion injury model / S. Doganci, V. Yildirim, C. Bolcal, P. Korkusuz, B. Gumusel, U. Demirkilic, A. Aydin // Adv. Clin. Exp. Med. - 2012. -V. 21(6).-P.713-726.

Dudzinski, D.M. The regulation and pharmacology of endothelial nitric oxide synthase / D.M. Dudzinski, J. Igarashi, D. Greif, T. Michel // Annu Rev Pharmacol Toxicol. - 2006 - V. 46. - P.235-276.

Duranski, M.R. Cytoprotective effects of nitrite during in vivo ischemia-reperfusion of the heart and liver/ M.R. Duranski, J.J.M. Greer, A. Dejam et al. // Jour, of Clin. Ivest. - 2005. - V.l 15, №5. - P. 1232-1240.

Edwards, J.P. The multikinase inhibitor sorafenib reverses the suppression of IL-12 and enhancement of IL-10 by PGE in murine macrophages / J.P. Edwards, L.A. Emens // Int Immunopharmacol. — 2010. — V. 10(10). — P. 1220-1228.

Elagan, H.H. Selective peripheral regulation of noradrenaline and adrenaline release by nitric oxide/ H.H. Elagan, B.P. Kennedy, H.G. Ziegler // Clin. Exp. Pharmac. Physiol. - 2002. - V. 29. - P. 589-594.

Elenkov, I.J. The sympathetic nerve -an integrative interface between two supersystems: the brain and the immune system / I.J. Elenkov, R.L. Wilder, G.P. Chrousos, E.S. Vizi // Pharmacol. Rev. - 2000. - V. 52. - P. 595-638.

Eriksson, U. Human bronchial epithelium controls TH2 responses by TH1-induced, nitric oxide-mediated STAT5 dephosphorylation: implications for the pathogenesis of asthma / U. Eriksson, U. Egermann, M.P. Bihl, F. Gambazzi, M. Tamm, P.G. Holt, R.M. Bingisser / J Immunol. - 2005. - V.175. - P. 2715-2720.

Faassen, E. Radicals for Life: The Various Forms of Nitric Oxide / E. Faassen, A.F. Vanin, A. Vanin - Elsevier - 2007. - 442 p.

Fiedler, TJ. X-ray crystal structure and characterization of halide-binding sites of human myeloperoxidase at 1.8 A resolution/ T.J. Fiedler, C.A. Davey, R.E. Fenna // J Biol Chem. - 2000. - V. 275- P. 11964-11971.

Freedman, J.E. Nitrated lipids, defining their bioactivity/ J.E. Freedman // Circ. Research. - 2002. - V.91. - P. 371.

Gluckman T.L. Regulation of leukocyte function by nitric oxide donors: the effect of S-nitrosothiol complexes/ T.L. Gluckman, J.E. Grossman, J.D. Folts // J. Toxicol. Environ. Health. - 2000. - V.61, Issuel. - P. 9-26.

Goldsby, R.A. Imunologia / R.A. Goldsby, T. J. Kindt, B.A. Osborne. Rio de Janeiro: Revinter, 2002. - 555 p.

Gonzalez, F.M. Nitrite anion provides potent cytoprotective and antiapoptotic effects as adjunctive therapy to reperfusion for acute myocardial infarction / F.M. Gonzalez, S. Shiva, P.S. Vincent, L.A. Ringwood, L.Y. Hsu, Y.Y. Hon, A.H. Aletras, R.O. Cannon, M.T. Gladwin, // Circulation. - 2008. - V. 117. - P. 2986-2994.

Govoni, M. The increase in plasma nitrite after a dietary nitrate load is markedly attenuated by an antibacterial mouthwash / M. Govoni, E.A. Jansson, E. Weitzberg, J.O. Lundberg // Nitric Oxide. 2008. - V. 19. - P. 333-337.

Habib, S. Biochemistry of Nitric Oxide / S. Habib, A. Ali // Ind. J. Clin. Biochem. - 2011. - V. 26(1) - P.3-17.

Hatanaka, Y. Neuronal nitric oxide synthase inhibition facilitate adrenergic neurotransmission in rat mesenteric resistance arteries / Y. Hatanaka, N. Hobara, J. Honghua et al. // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 2006. - V. 316. - P. 490-497.

Hellwig-Burgel, T. Review: hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1): a novel transcription factor in immune reactions / T. Hellwig-Burgel, D.P. Stiehl, A.E. Wagner, E. Metzen, W. Jelkmann // J. Interferon Cytokine Res. - 2005. - V. 25. - P. 297-310.

Henson, S.E. The ectoenzyme gamma-glutamyl transpeptidese regulates antiproliferative effects of S-nitroso-glutathione on human T- and B-lymphocytes / S.E. Henson, T.C. Nichols, V.M. Hols // J Immunol. -1999.-V.163.(1)- P.1845-1850.

Hoetzenecker, K. Secretóme of apoptotic peripheral blood cells (APOSEC) attenuates microvascular obstruction in a porcine closed chest reperfused acute myocardial infarction model: role of platelet aggregation and vasodilation / K. Hoetzenecker, A. Assinger, M. Lichtenauer, M. Mildner, T. Schweiger, P. Starlinger, // Basic Res Cardiol — 2012. — V. 107(5) — P. 292.

Holzinger, C. T cells from healthy heart really only passengers? Characterization of cardiac tissue T cells / C. Holzinger, A. Zuckermann, C. Reinwald, M. Imhof, A. Schollhammer, G. Kramer, E. Wolner, G. Steiner // Immunol Lett. — 1996. —V. 53(2-3). — P. 63-67.

Ignarro, L.J. Endothelium-derived nitric oxide: actions and properties / L.J. Ignarro // FASEB J. - 1989. - V. 3. - P. 31-36.

Isenberg, J.S. Inhibition of nitric oxide synthase (NOS) conversion of L-arginine to nitric oxide (NO) decreases low density mononuclear cell (LD MNC) trans-endothelial migration and cytokine output / J.S. Isenberg // J. Surg. Res. - 2003. -V.114. -P.100-106.

Iwama, D. Lack of inducible nitric oxide synthases attenuates leukocyte-endothelial cell interactions in retinal microcirculation / D. Iwama, S. Miyahara, H. Tamura // Br. J. Ophthalmol. - 2008. - V.92. - P.694-698.

Jacobs, A. T. Nuclear factor-K B and mitogen-activated protein kinases mediate nitric oxide-enhanced transcriptional expression of interferon-p / A.T. Jacobs, LJ. Ignarro //J. Biol. Chem. - 2003. - V. 278. P. 8018-8027.

Jung, K.H. Early intravenous infusion of sodium nitrite protects brain against in vivo ischemia-reperfusion injury / K.H. Jung, K. Chu, S.Y. Ko, S.T. Lee, D.I. Sinn, D.K. Park, J.M. Kim, E.C. Song, M. Kim, J.K. Roh // Stroke. -2006. - V. 37. - P. 2744-2750.

Karpuzoglu, E. Estrogen Up-Regulates Inducible Nitric Oxide Synthase, Nitric Oxide, and Cyclooxygenase-2 in Splenocytes Activated with T Cell Stimulants: Role of Interferon-gamma / E. Karpuzoglu, J.B. Fenaux, R.A. Phillips, A.J. Lengi, F. Elvinger, S.A. Ahmed // Endocrinology. - 2006. -V. 147. - P. 662-671.

Kelpke, S.S. Sodium nitrite protects against kidney injury induced by brain death and improves post-transplant function / S.S. Kelpke, B. Chen, K.M. Bradley, X. Teng, P. Chumley, A. Brandon, B. Yancey, B. Moore, H. Head, L. Viera, J.A. Thompson, D.K. Crossman, M.S. Bray, D.E. Eckhoff, A. Agarwal, R.P. Patel // Kidney Int. - 2012. - V.82 (3). - P. 304-313.

Kimura, H. Hypoxia response element of the human vascular endothelial growth factor gene mediates transcriptional regulation by nitric oxide: Control of hypoxia inducible factor-1 activity by nitric oxide. / H. Kimura, A. Weisz, Y. Kurashima, K. Hashimoto, T. Ogura, F. d'Acquisto, R. Addeo, M. Makuuchi, H. Esumi // Blood. 2000. - V.95. - P.l89- 197.

Kiss, J.P. Nitric oxide and other diffusible messengers/ J.P. Kiss // Springer Science. - 2008. - P. 404-412.

Klebanoff, SJ. Meloperoxidase: friend and foe / S.J. Klebanoff // J. Leuk. Biology. - 2005. - V. 77. - P. 598-615.

Kleinbongard, P. Plasma nitrite reflects constitutive nitric oxide synthase activity in mammals / P. Kleinbongard, A. Dejam, T. Lauer, T. Rassaf, A. Schindler, O. Picker // Free Radic Biol Med. 2003.- V. 35- P. 790-796.

Kolo, L.L. Nitric oxide the biological activity of norepinephrine resulting in altered vascular tone in the rat mesenteric arterial bed/ L.L. Kolo, T.C Westfall., H. Macarthur // AJP Heart Circ. Physiol. - 2004. - V. 286. - P. 296-303.

Kreckler, L. M. Adenosine suppresses lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor-a production by murine macrophages through a protein kinase A- and exchange protein activated by cAMP-independent signaling pathway / Kreckler L. M., Gizewski E., Wan T. C., Auchampach J. A. // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 2009. -V.331.-P. 1051-1061.

Lahat, N. Hypoxia reduced CD80 expression on monocytes but enchances their LPS-stimulated TNF-a secretion/ N. Lahat, M.A. Rahat, M. Ballan et al. // J. Leuk. Biol. - 2003. - V. 74. - P. 197-205.

Lang, J.D. Inhaled NO accelerates restoration of liver function in adults following orthotopic liver transplantation / J.D. Lang, X. Teng, P. Chumley, J.H.

Crawford, T.S. Isbell, B.K. Chacko, Y. Liu, N. Jhala, D.R. Crowe, A.B. Smith, R.C. Cross, L. Frenette, E.E. Kelley // J. Clin. Invest. -2007. — V. 117. - P. 2583-2591.

Li, W.J. The hepatoprotective effect of sodium nitrite on cold ischemia-reperfusion injury / W. Li, Z.Meng R.P.Patel, J.D.Lang // Transplant. -2012.-P.1-10.

Licinia, J. Handbook af the autonomic nervous system in health and desease / J. Licinia, S. Govoni, C.L. Piolis. - Marcel Dekker. - 2003. - 696 p.

Lin, C.F. IFN-gamma synergizes with LPS to induce nitric oxide biosynthesis through glycogen synthase kinase-3-inhibited IL-10 / C.F. Lin, C.C. Tsai, W.C. Huang, C.Y. Wang, H.C. Tseng, Y. Wang, J.I. Kail, S.W. Wang, Y.L. Cheng // J Cell Biochem. - 2008. - V.105(3). - P.746-55.

Liu, G. ICAM-1 -activated Src and eNOS signaling increase endothelial cell surface PECAM-1 adhesivity and neutrophil transmigration / G. Liu, A.T. Place, Z. Chen, V.M. Brovkovych, S.M. Vogel, W.A. Muller, R.A. Skidgel, A.B. Malik, R.D. Minshall//Blood.-2012.-V. 120(9).-P. 1942-52.

Lochner, A. Protection of the ischaemic heart: investigations into the phenomenon of ischaemic preconditioning / A. Lochner, E. Marais, S. Genade, B. Huisamen, E.F. Toit, J.A. Moolman // Cardiovasc J Afr. - 2009. -V. 20(1).-P.43- 51.

Lucas, M. Dendritic cells prime natural killer cells by trans-presenting interleukin-15 / M. Lucas, W. Schachterle, K. Oberle, P. Aichele, A. Diefenbach // Immunity. - 2007. -V. 26. - P. 1-15.

Lundberg, J.O. Inorganic nitrate is a possible source for systemic generation of nitric oxide / J.O. Lundberg, M. Govoni // Free Radic Biol Med. - 2004. -V. 37. - P. 395-400.

Machha, A. Dietary nitrite and nitrate: a review of potential mechanisms of cardiovascular benefits / A. Machha, A.N. Schechter // Eur J Nutr. - 2011. - V. 50(5).-P. 293-303.

Macphail, S.E. Nitric oxide regulation of human peripheral blood mononuclear cells: critical time dependence and selectivity for cytokine versus chemokine expression / S.E. Macphail, C.A. Gibney, B.M. Brooks, C.G. Booth C.G. // J. Immonol. - 2003. -V. 171. - P. 4809-4815.

Martinez, F. O. Macrophage activation and polarization / Martinez F. O., Sica A., Mantovani A., Locati M. // Front. Biosci. - 2008. - V.13. - P. 453^61.

Maulik, N. Redox signaling in vascular angiogenesis / N. Maulik, D.K. Das // Free Radic. Biol. Med. - 2002. V. 33. - P. 1047-1060.

Meyer, S. Hypoxia attenuates effector-target cell interaction in the airway and pulmonary vascular compartment / S. Meyer, B.R. Z'qraqqen, S. Blumenthal, A. Borqeat, M.T. Ganter, L. Reyes, C. Booy, T.A. Neff, D.R. Spahn, B. Bech-Schimmer // Clin. Exp. Immunol. - 2007. - V.150. - P.358-367.

Miura, T. Effect of 6-hydroxydopamine on host resistance against Listeria monocytogenes infection/ T. Miura, T. Kudo, A. Matsuki // Infect. Immun. - 2001. -V.69. -P.7234-7241.

Morikawa, M. Enhancing and inhibitory effects of nitric oxide on superoxide anion generation in human polymorphonuclear leukocytes/ M. Morikawa, M. Inoue, S. Tokumaru // Br. J. Pharmacol. - 1995. - V. 115. - P. 1302-1306.

Muhammed, S.J. Pancreatic p-cell dysfunction, expression of iNOS and the effect of phosphodiesterase inhibitors in human pancreatic islets of type 2 diabetes / S.J. Muhammed, I. Lundquist, A. Salehi // Diabetes Obes Metab. - 2012. -V. 14(11). P.1010-1019

Murad, F. Shattuck Lecture: Nitric oxide and cyclic GMP in cell signaling and drug development / F. Murad // New. Engl. J Med. - 2006. -V. 355. - P. 2003-2011.

Nakamura, Y. NO in breast cancer: induction of vascular endothelial growth factor-C and correlation with metastasis and poor prognosis. / Y. Nakamura, H. Yasuoka, M. Tsujimoto, K. Yoshidome, M. Nakashara M, K. Nakao, M. Nakamura, K. Kakudo // Clin. Cancer. Res. -2006. - V. 11(4) -P. 1201-1207.

Natali, A. Systemic inhibition of nitric oxide synthesis in non-diabetic individuals produces a significant deterioration in glucose tolerance by increasing insulin clearance and inhibiting insulin secretion / A. Natali, R. Ribeiro, S. Baldi, A. Tulipani, M. Rossi, E. Venturi, A. Mari, M.P. Macedo, E. Ferrannini // Diabetologia. -2013. -V. 56(5).-P. 1183-1191.

Niedbala, W. Nitric oxide induces CD4+CD25+ Foxp3 regulatory T cells from CD4+CD25 T cells via p53, IL-2, and 0X40 / W. Niedbala, B.Cai, H.Liu, N. Pitman, L.Chang, F.Y.Liew //Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-2007 -V.104(39)-P. 15478- 83.

Nolan, S. Nitric oxide regulates neutrophil migration through microparticle formation / S. Nolan, R.Dixon, K.Norman //Am.J.Pathol. -2008. -V.172. -P.265-73.

Pacher, P. Nitric oxide and peroxynitrite in health and disease / P. Pacher, J.S. Beckman, L. Liaudet // Physiol. Rev. - 2007. - V.87. - P.315-424.

Pasero, D. Inhaled nitric oxide versus sodium nitroprusside for preoperative evaluation of pulmonary hypertension in heart transplant candidates / Pasero D, Rana NK, Bonato R, Ribezzo M, Ivaldi F, Ricci D, Grosso Marra W, Checco L, Lupo M, Boffini M, Rinaldi M. // Transplant Proc. — 2013. — V. 45 (7). — P. 2746-2749.

Perkins, D. J. Blockade of nitric oxide formation down-regulates cyclooxygenase-2 and decreases PGE2 biosynthesis in macrophages. / D.J. Perkins, D.A. Kniss // J. Leukoc. Biol. — 1999. — V. 65. — P. 792-799.

Pihl, L. Insulin induces the correlation between renal blood flow and glomerular filtration rate in diabetes: implications for mechanisms causing hyperfiltration / L. Pihl, P. Persson, A. Fasching, P. Hansell, G.F. DiBona, F. Palm // Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. - 2012. V. 1. -P. 303-309.

Qiu, Y.H. Effect of endogenous catecholamines in lymphocytes on lymphocyte function / Y.H.Qiu, C.Cheng, L.Dai, Y.P.Peng // J.Neuroimmunol. -2005. -V.167.-P.45-52.

Rahat, M.A. Macrophage-tumor cell interactions regulate the function of nitric oxide / M.A. Rahat, B. Hemmerlein // Front Physiol. - 2013. - V. 4. - P. 144.

Ricciardolo, F.L.M. Nitric oxide in health and disease of respiratory system / F.L.M. Ricciardolo, P.J. Sterk, B. Gaston, G. Folkerts // Physiol. Rev. - 2004. - V. 84.-P. 731-765.

Schleicher, U. NK cell activation in visceral leishmaniasis requires TLR9, myeloid DCs, and IL-12, but is independent of plasmacytoid DCs. / U. Schleicher, J. Liese, I. Knippertz, C. Kurzmann, A. Hesse, A. Heit, J.A. Fischer, S. Weiss, U. Kalinke, S. Kunz, C. Bogdan // J Exp Med. - 2007. - V. 204. - P. 893-906.

Schroder, K. Interferon-gamma: an overview of signals, mechanisms and functions / K. Schroder, P J. Hertzog, T. Ravasi, D.A. Hume // J Leukoc Biol. - 2004. -V. 75(2).-P. 163-89.

Serafini, P. Phosphodiesterase-5 inhibition augments endogenous antitumor immunity by reducing myeloid-derived suppressor cell function / Serafini P., Meckel K., Kelso M., Noonan K., Califano J., Koch W., Dolcetti L., Bronte V., Borrello I. // J. Exp. Med. - 2006. - V. 203. - P. 2691-2702.

Shiva, S. Mitochondria as metabolizers and targets of nitrite / S. Shiva // Nitric Oxide. - 2010. -V. 22(2) - P. 64.

Singh, M. Dietary nitrite attenuates oxidative stress and activates antioxidant genes in rat heart during hypobaric hypoxia / M. Singh, A. Arya, R. Kumar, K.Bhargava, N. K. Sethy // Nitric oxide. - 2012. - V. 26. - P. 61-73.

Soborg M. Human lymphocyte migration as a parameter of hypersensitivity / M. Soborg, G. Bendixen // Zctz med. Scand. - 1967. - V. 181. - P. 2472-2556.

Tanioka, H. Facilitatory role of NO in neuronal norepinephrine release in the rat kidney/ H. Tanioka, K. Nakamura, S. Fujimura et al. // AJP Requl. Integr. Comp. Physiol. - 2002. V.282. - P. R1436- 1442.

Thomas, D.D. The chemical biology of nitric oxide: Implications in cellular signaling / Thomas D.D., Lisa A. R., J.S. Isenberg, F.-S. Wilmarie, C.H. Switzer., S. Donzelli, H. Perwez, C. Vecoli , N. Paoloccie, S. Ambs, C.A. Colton, C.C. Harris, D.D. Roberts , D.A. Wink // Free Radical Biology & Medicine. - 2008. - V. 45. - P. 18-31.

Tripatara, P. Nitrite-derived nitric oxide protects the rat kidney against ischemia/reperfusion injury in vivo: role for xanthine oxidoreductase / P. Tripatara, N.S. Patel, A. Webb, K. Rathod, F.M. Lecomte, E. Mazzon, S. Cuzzocrea, M.M. Yaqoob, A. Ahluwalia, C. Thiemermann // J Am Soc Nephrol. - 2007. - V.18. - P. 570-580.

Turpaev, K. Nitric oxide-derived nitrosating species and gene expression in human monocytic cells / Turpaev K., Bouton C., Drapier J. C. // Biochemistry. 2004. -V. 43.-P. 10844-10850.

Turpaev, K. Variation in gene expression profilesof human monocytic U937 cells exposed to various fluxes of nitric oxide / Turpaev K., Glatigny A., Bignon J., Delacroix H., Drapier J. C. // Free Radic. Biol. Med. 2010. - V. 48. - P. 298-305.

Van der Veen, R.C. Macrophage-derived nitric oxide inhibits the proliferation of activated T helper cells and is induced during antigenic stimulation of resting T cells / R.C. Van der Veen, T.A. Dieflin, J. Dixon Gray, W. Gilmore // Cell Immunol. -2000.-V. 199.-P. 43-49.

Veskler, B.A. Progress in immunology research / B.A. Veskler. Nova Publischers, 2005. - 260 p.

Vitturi, D.A. Current perspectives and challenges in understanding the role of nitrite as an integral player in nitric oxide biology and therapy / D.A.Vitturi, R.P. Patel // Free Radic Biol Med. - 201 l.-V. 51(4).-P. 805-812.

Wan, F. Specification of DNA binding activity of NFkB proteins / F. Wan, M.J. Lenardo // Cold Spring Harb Perspect Biol. - 2009. -V. 1. -P. 1-16.

Webb, A. Reduction of nitrite to nitric oxide during ischemia protects against myocardial ischemia-reperfusion damage / A.Webb, R.Bond, P.McLean, R.Uppal, N. Benjamin, A. Ahluwalia // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. -2004.-V.101.-P.13683-13688.

Weinberger, B. The Toxicology of Inhaled Nitric Oxide / B. Weinberger, D. L. Laskin, D. E. Heck // Toxicological Sciences. - 2001. - V.59. - P. 5-16.

Willenborg, D.O. The contribution of nitric oxide and interferon gamma to the regulation of the neuro-inflammation in experimental autoimmune encephalomyelitis / D.O. Willenborg, M. Staykova, Fordham S, N. O'Brien, D. Linares // J.Neuroimmunol. - 2007. - V. 191. - P. 16-25.

Wu, D. Nitric oxide donors prevent while the nitric oxide synthase inhibitor 1-NAME increases arachidonic acid plus CYP2E1-dependent toxicity/ D. Wu, A. Cederbaum // Toxicol, and Appl. Pharmacol. - 2006. - V.216. - P. 282 -292.

Zhang, Z. Activation of tumor necrosis factor-a-converting enzyme-mediated ectodomain shedding by nitric oxide / Zhang Z., Kolls J. K., Oliver P., Good D., Schwarzenberger P. O., Joshi M. S., Ponthier J. L., Lancaster J. R. J. // J. Biol. Chem. 2000. - V. 275. - P. 15839-15844.