Влияние нейрометаболического протектора на апоптоз лимфоцитов периферической крови больных алкоголизмом и здоровых лиц тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, кандидат биологических наук Епимахова, Елена Викторовна

• Епимахова, Елена Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Епимахова, Елена Викторовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Апоптоз и механизмы его реализации.

1.1.1 Апоптоз как форма запрограммированной клеточной гибели.

1.1.2 Молекулярный контроль апоптоза (пути реализации апоптоза).

1.2 Апоптоз при алкоголизме.

1.2.1 Влияние этанола и окислительного стресса на апоптоз клеток.

1.2.2 Состояние гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы у лиц злоупотребляющих алкоголем.

1.3 Нейропротективный препарат Кортексин: состав, свойства и применение в неврологической и психиатрической практике.

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Основные этапы работы.

2.2 Характеристика клинического материала.

2.3 Клинико-психологическое обследование.

2.4 Лабораторные методы исследования.

2.4.1 Выделение лимфоцитов.

2.4.2 Подсчет лимфоцитов в камере Горяева.

2.4.3 Определение лимфоцитов с маркером апоптоза CD95 непрямым иммунофлюорисцентным методом.

2.4.4 Оценка модуляции экспрессии рецептора лимфоцитов CD95.

2.4.5 Определение доли аннексии \/+-мононуклеаров методом проточной цитофлюориметрии.

2.4.6 Оценка морфологических признаков апоптоза лимфоцитов.

2.4.7 Определение уровня белков апоптоза Вс1-2 и caspase-3.

2.4.8 Определение концентрации гормонов.

2.4.9 Культивирование лимфоцитов периферической крови in vitro.

2.4.10 Культивирование клеток нейробластомы in vitro.

2.5 Методы статистической обработки

ГЛАВА 3 ИССЛЕДОВАНИЕ АПОПТОЗА И РЕГУЛЯТОРНЫХ ГОРМОНАЛЬНЫХ ФАКТОРОВ У БОЛЬНЫХ АЛКОГОЛИЗМОМ.

3.1 Характеристика процессов апоптоза лимфоцитов периферической крови больных алкоголизмом и здоровых лиц на рецепторном и клеточном уровнях.

3.2 Определение концентрации гормонов кортизола и дегидроэпиандростерона сульфата у больных алкоголизмом.

3.3 Математическая модель прогноза развития ремиссии у больных алкоголизмом после проведенной терапии.

ГЛАВА 4 ВЛИЯНИЕ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО ПРОТЕКТОРА КОРТЕКСИНА НА ПРОЦЕССЫ АПОПТОЗА В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ ПРИ ДЕЙСТВИИ ЭТАНОЛА И ИНДУКЦИИ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА.

4.1 Эффект кортексина на процессы апоптоза нейробластомы С-1300 в условиях индуцированного окислительного стресса и под влиянием этанола.

4.2 Влияние кортексина на процессы апоптоза лимфоцитов периферической крови здоровых доноров в условиях экспериментального окислительного стресса и при действии этанола.

ГЛАВА 5 ВЛИЯНИЕ КОРТЕКСИНА НА ДИНАМИКУ КЛИНИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ И ПАРАМЕТРЫ АПОПТОЗА ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У ПАЦИЕНТОВ, СТРАДАЮЩИХ АЛКОГОЛИЗМОМ.

5.1 Эмоциональное состояние и когнитивные функции больных алкоголизмом в динамике терапии.

5.2 Влияние фармакотерапии кортексином на реализацию запрограммированной клеточной гибели в лимфоцитах периферической крови больных алкоголизмом.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние нейрометаболического протектора на апоптоз лимфоцитов периферической крови больных алкоголизмом и здоровых лиц»

Алкоголизм - одна из актуальнейших социальных и медицинских проблем, стоящих перед современным обществом [Бохан Н.А., 2006; Иванец Н. Н. и соавт., 2008; Бурлака О.П. и соавт., 2009]. Количество публикаций, посвященных изучению различных аспектов злоупотребления алкоголем, не уменьшается, напротив, исследования в этой области в последние годы расширились и ведутся по различным направлениям с использованием междисциплинарных методов и подходов.

В патологический процесс формирования алкогольной зависимости вовлечены различные механизмы, связанные с нарушением функционирования в основных гомеостатических системах организма [Панченко Л.Ф. и соавт., 2008; Adinoff В. et al., 1998; Fernandez-Sola J. et al., 2007]. На сегодняшний день представлено множество работ, доказывающих роль апоптоза, запрограммированной клеточной гибели, в патогенезе алкоголь-индуцированного поражения органов [Brooks P.J., 2000; Spirodopolous I. et al., 2001; Reed D.J., 2004; Rodriguez D.A., 2004; Watts L.T. et al., 2005; Haorah J. et al., 2008; Sheth D.S. et al., 2009]. Исследования, выполненные на моделях животных, показали, что этанол повреждает ЦНС за счет сокращения нейронов в коре головного мозга, мозжечке, гиппокампе, спинном и среднем шве [Tajuddin N.F., 1999; Chen W.J. et al., 2001; Jacobs J.S. et al., 2001; Moulder K.L. et al., 2002]. Имеются данные, свидетельствующие о том, что этанол усиливает апоптотическую нейродегенерацию в мозге эмбрионов крыс и в гепатоцитах взрослых особей [Ikonomidou С. et al., 2000]. Нейробиологические исследования демонстрируют, что мозг людей, злоупотребляющих этиловым спиртом, обеднен как белым, так и серым веществом [Brooks P.J., 2000]. Этанол-индуцированная клеточная гибель лежит в основе развития коморбидных расстройств, выявляемых у больных алкоголизмом, в том числе печеночной и сердечной недостаточности, миопатии, нейродегенеративных расстройств и др. [Wu D. et al., 2006]. Однако, вне поля зрения остаются вопросы программированной клеточной гибели лимфоцитов периферической крови при алкоголизме, в то время как изменение уровня апоптоза иммунокомпетентных клеток может приводить к серьезным нарушениям в иммунной системе.

Несовершенство лекарственной терапии аддиктивных расстройств делает необходимым изыскание и разработку новых, более эффективных фармакологических средств профилактики и лечения аддикций. В последние годы показана перспективность использования препаратов, обладающих разносторонними спектрами действия [Ветлугина Т.П. и соавт., 2005; Бишева И.В. и соавт., 2007; Беленичев И.Ф. и соавт, 2009]. Одним из возможных таких препаратов является нейропротектор кортексин (полипептидный препарат, выделенный из мозга телят), который обладает тканеспецифическим, регуляторным и восстановительным действием [Скоромец Т.А, 2004; Лебедев A.A. и соавт., 2006], повышает эффективность энергетического метаболизма нейронов, регулирует процесс метаболизма нейромедиаторов и перекисного окисления в коре головного мозга, препятствует образованию избыточного количества свободных радикалов [Скороходов А.П. и соавт., 2003]. Препарат успешно применяется в терапии различных неврологических и психических расстройств. Имеются единичные исследования, показывающие, что включение кортексина в схему терапии аддиктивных расстройств приводит к снижению уровня невротизации и тревоги, улучшению самочувствия пациентов [Востриков В.В. и соавт., 2005]. Однако отсутствуют данные по оценке влияния исследуемого метаболического протектора на биологические показатели, в том числе запрограммированную клеточную гибель у больных алкоголизмом. В то время как изучение параметров основных гомеостатических систем несет важную биологическую информацию и является целесообразным для более полной характеристики лекарственных средств и механизма их действия. В связи с вышеизложенным, были сформулированы цель и задачи диссертационной работы.

Цель исследования: изучить влияние нейрометаболического протектора на показатели апоптоза лимфоцитов периферической крови у больных алкоголизмом и здоровых лиц.

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать показатели апоптоза лимфоцитов периферической крови на клеточном и рецепторном уровнях у больных алкоголизмом.

2. Исследовать влияние этанола, гипертермии и преднизолона на показатели апоптоза лимфоцитов периферической крови больных алкоголизмом и здоровых лиц в нагрузочных пробах in vitro.

3. Оценить влияние кортексина на показатели апоптоза лимфоцитов периферической крови здоровых доноров и на модели клеток нейробластомы в экспериментальных условиях in vitro при действии этанола и индуцированного окислительного стресса.

4. Изучить влияние нейропротектора кортексина на запрограммированную гибель клеток периферической крови у больных алкоголизмом в процессе фармакотерапии постабстинентного синдрома.

Научная новизна исследования

В результате проведенного комплексного исследования показано, что у лиц, больных алкоголизмом, наблюдается повышенная апоптотическая активность лимфоцитов на рецепторном и клеточном уровнях, проявляющаяся в усилении экспрессии CD95, увеличении Annexin \/+-клеток и повышении содержания лимфоцитов с морфологическими признаками фрагментации ядра. У лиц с алкогольной зависимостью выявлена корреляция экспрессии маркера апоптоза CD95 с концентрацией стресс-реализующего гормона кортизола.

Впервые оценено влияние модуляторов (гипертермии, преднизолона) на реализацию апоптоза лимфоцитов периферической крови у больных алкоголизмом в нагрузочных пробах in vitro. Показано, что индукторы апоптоза (гипертермия и преднизолон) in vitro вызывают усиление клеточной гибели лимфоцитов здоровых лиц и не оказывают выраженного действия на лимфоциты больных алкоголизмом.

Получены новые данные фундаментального характера о влиянии лекарственного препарата кортексина на показатели апоптоза при действии этанола и индуктора окислительного стресса гидроперекиси третичного бутила в экспериментальных культурах клеток на модели мононуклеаров периферической крови и нейробластомы.

Получены сведения об эффективности препарата метаболического типа действия кортексина на клеточную гибель и ее регуляцию в процессе фармакотерапии постабстинентных расстройств у больных алкоголизмом. Включение кортексина в терапевтические программы у больных алкоголизмом приводит к улучшению эмоционального состояния и когнитивных функций, положительной динамике экспрессии рецептора CD95 и к достоверному снижению числа связанных с аннексином клеток.

Практическая значимость Полученные данные об особенностях процессов апоптоза лимфоцитов периферической крови и его регуляции у больных алкоголизмом могут быть использованы для научно обоснованных рекомендаций по оценке адаптационных возможностей организма. Результаты исследования по клинической и биологической эффективности отечественного препарата метаболического типа действия на процессы апоптоза лимфоцитов периферической крови и новые экспериментальные данные позволяют дать патогенетическое обоснование к применению нейропептидов в комплексных программах терапии алкоголизма.

Разработанная и апробированная математическая модель прогнозирования ремиссии у больных алкоголизмом позволяет повысить точность оценки эффективности результатов лечения. Применение этой модели в практическом здравоохранении будет способствовать правильному выбору терапевтических мероприятий и улучшению качества оказания специализированной наркологической помощи.

Результаты исследования представлены в учебно-методическом пособии «Оценка апоптоза клеток периферической крови при фармакотерапии психических расстройств» и пособии для врачей «Новые подходы к терапии аддиктивных расстройств с включением иммуномодуляторов и антиоксидантов».

Основные результаты диссертационной работы включены в программу обучения врачей-ординаторов и аспирантов ФГБУ «НИИПЗ» СО РАМН, в учебные программы студентов, интернов, клинических ординаторов и врачей-психиатров кафедры психиатрии, наркологии и психотерапии ГБОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России. Результаты внедрены в клиническую практику и используются в клиниках ФГБУ «НИИПЗ» СО РАМН.

Положения, выносимые на защиту:

1. Хроническое употребление этанола у больных алкоголизмом приводит к усилению апоптоза лимфоцитов периферической крови, проявляющейся на рецепторном и клеточном уровнях на фоне повышения кортизола.

2. На клеточных моделях в эксперименте in vitro этанол является индуктором ранних этапов апоптоза: приводит к экспрессии рецепторов апоптоза, выходу фосфотидилсерина на поверхность клеточной мембраны и снижению уровня антиапоптотического фермента Bcl-2, не оказывая непосредственно прямого токсического действия на морфологические изменения ядра клеток.

3. Механизм протективного действия кортексина на апоптоз клеток in vitro связан с восстановлением баланса про- и антиапоптотических белков.

4. Включение кортексина в комплексные программы терапии алкоголизма является клинически эффективным и патогенетически обоснованным.

Апробация работы

Результаты проведенных исследований докладывались и обсуждались на научной студенческой конференции «Старт в науку» (Томск, 2008); на региональной конференции молодых ученых и специалистов «Современные проблемы психических и соматических расстройств: грани соприкосновения» (Томск, 2008); на X конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2008); на 9th World Congress of Biological Psychiatry (Paris, France, 2009); на 22nd ECNP Congress (Istanbul, Turkey, 2009); на II региональной конференции молодых ученых и специалистов «Современные проблемы психических и соматических расстройств: грани соприкосновения» (Томск, 2010); на

XI Российском конгрессе с международным участием молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2010); на XV съезде психиатров России (Москва, 2010); на 11th ECNP Regional Meeting (St. Petersburg, 2011); на пятой Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2011); на III региональной конференции молодых ученых и специалистов «Современные проблемы психических и соматических расстройств: грани соприкосновения» (Томск, 2012).

Исследования поддержаны государственными контрактами № К-16-НИР/46-8 (2010) «Разработка методов оценки качества оказания специализированной медицинской помощи больным психическими расстройствами на основе применения клинико-иммунофизиологических и биохимических критериев» и «Разработка моделей диагностики, прогноза и оценки эффективности терапии аффективных и аддиктивных расстройств на основе иммунофизиологических, молекулярно-биологических и молекулярно-генетических подходов» (2011) в рамках подпрограммы «Психические расстройства» Федеральной целевой программы «Предупреждение и борьба с социально значимыми заболеваниями (2007-2011 гг.)»; грантом РФФИСибирь № 11-04-98054-р (2011-2012) «Разработка научных основ технологии прогнозирования риска асоциального поведения в регионе Сибири».

Публикации

По теме диссертационного исследования опубликовано 24 печатных работы, в том числе 6 статей в научных журналах, рекомендованных ВАК, 1 учебно-методическое пособие, 1 пособие для врачей.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, библиографического списка, приложений. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 11 рисунками. Библиографический список включает 223 источника: 95 отечественных и 128 зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Епимахова, Елена Викторовна

ВЫВОДЫ

1. У больных алкоголизмом выявлены достоверное по сравнению со здоровыми лицами усиление экспрессии рецептора CD95, увеличение доли Annexin \/+-клеток и статистически значимое повышение количества лимфоцитов с морфологическими признаками фрагментации ядра. Усиление показателей клеточной гибели лимфоцитов у больных алкоголизмом наблюдается на фоне повышения концентрации кортизола в сыворотке крови.

2. В экспериментальных пробах in vitro показано усиление клеточной гибели лимфоцитов здоровых лиц при действии этанола и различных температурных режимов культивирования. Инкубация лимфоцитов периферической крови больных алкоголизмом с модуляторами апоптоза и этанолом не приводила к значимым изменениям исследуемых параметров.

3. В условиях окислительного стресса в культуре лимфоцитов здоровых доноров выявлены увеличение уровня проапоптотического белка caspase-З, повышение доли клеток с морфологическими признаками апоптоза, усиление выхода фосфотидилсерина на поверхность клеточных мембран и снижение уровня антиапоптотического белка Bcl-2. При инкубации клеток с этанолом выявлены увеличение доли Annexin \/+-клеток и снижение концентрации Bcl-2 по сравнению с интактными клетками. Клетки нейробластомы С-1300 в присутствии этанола и индуктора окислительного стресса реагировали снижением уровня Bci-2.

4. Прединкубация лимфоцитов периферической крови здоровых лиц in vitro с кортексином приводила к сдерживанию апоптотического действия гидроперекиси и этанола: снижению уровня caspase-З, увеличению уровня Bcl-2 и нормализации числа клеток с морфологическими признаками апоптоза.

5. Включение в комплексные программы терапии аддиктивных расстройств нейрометаболического препарата кортексин приводит к положительной динамике эмоционального состояния и когнитивных функций больных алкоголизмом и нормализации показателей апоптоза (экспрессии рецептора CD95 и количества Annexin \/+-клеток).

109

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Настоящее исследование посвящено установлению эффекта действия этанола на процессы запрограммированной клеточной гибели и гормональные показатели, характеризующие состояние стрессреализующих и стресслимитирующих систем организма на экспериментально-клеточных моделях и у больных алкоголизмом. В ходе исследования изучены механизмы действия кортексина на процессы апоптоза нервных клеток нейробластомы и лимфоцитов периферической крови в условиях индуцированного окислительного стресса и под влиянием этанола in vitro, выявлена клиническая и биологическая эффективность препарата в отношении терапии аддиктивных расстройств.

Характеристика процессов апоптоза и гормональных показателей у больных алкоголизмом и здоровых лиц Изучение процессов апоптоза у больных алкоголизмом показало статистически значимое увеличение количества апоптотических форм лимфоцитов периферической крови на рецепторном и клеточном уровнях по сравнению с аналогичными показателями в группе здоровых доноров. Так содержание в кровотоке лимфоцитов, несущих на поверхности маркер апоптоза CD95 у пациентов составило 16,00 (13,00-20,00)% (10,49 (10,00-13,68)% - в контроле, р<0,001); доля Annexin V+-клеток у мужчин, страдающих алкоголизмом, оказалась достоверно выше контрольных значений (21,56 (18,02-26,21)% и 15,93 (15,10-17,49) % соответственно, р<0,05); у больных алкоголизмом также наблюдалось 2-х кратное увеличение лимфоцитов с морфологическими признаками апоптоза 4,44 (3,27-5,61)% и 1,87 (1,48-2,10)% соответственно, р<0,001) и достоверное увеличение индекса реализации апоптоза (25,81(19,34-33,77)%, и 17,01(14,88-21,13)% в контроле р<0,05).

Механизмы нарушения процессов апоптоза мононуклеаров периферической крови при алкоголизме могут быть связаны как с изменением метаболических процессов на молекулярно-биохимическом уровне через активацию процессов перекисного окисления липидов, так и с непосредственным воздействием этанола на клетки [Wu D., 2006]. Кроме того, фактором, приводящим к усилению апоптоза клеток периферической крови у больных алкоголизмом, может являться дисбаланс про- и антиапоптотических регуляторов. В частности, алкоголь вызывает увеличение содержания проапоптотических факторов TNF-alfa, Fas-лигандов [Ни J.,2003; Rodriguez D.A, 2004].

Такой паттерн реагирования с усилением процессов апоптоза лимфоцитов периферической крови объясняет снижение устойчивости иммунной системы больных алкоголизмом по отношению к инфекциям и повышенному риску развития опухолей, вирусных и аутоиммунных заболеваний и, возможно, является одним из механизмов возникновения иммунной недостаточности, наблюдаемой у больных с аддиктивными расстройствами.

В экспериментальных пробах in vitro показано, что инкубация с 0,5% этанолом не приводила к изменению состава апоптотических лимфоцитов у пациентов больных алкоголизмом. Так уровень рецепторов, экспрессирующих CD95, после инкубации составил 20,82 (18,00-29,17)% (до инкубации 18,04 (16,41-19,44)%). Однако у здоровых доноров наблюдалось статистически значимое повышение CD95+-клеток (10,49 (10,00-13,68)% - до инкубации, 16,00 (13,00-20,00)% - после инкубации, р<0,05), а так же наблюдалась достоверное увеличение клеток с гранулированным хроматином ядра. Возможно, это свидетельствует об определенной десенсибилизации лимфоцитов к этанолу в организме в условиях хронической алкоголизации.

Существенная роль в обеспечении гомеостаза и осуществлении адаптационных реакций организма принадлежит нейроэндокринным факторам. Реакция эндокринной системы организма обусловлена нейрохимическими изменениями, усилением активности симпатико-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой систем (ГГН) [Зозуля A.A. с соавт., 2007; Dinan T.G., 2001]. Существует гипотеза, что сниженный ответ гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы на стресс участвует в развитии алкоголизма и может передаваться по наследству [King A. et al., 2000]. Согласно литературным данным, при хроническом злоупотреблении алкоголем характерен сдвиг гормонального баланса и длительное повышение уровня глюкокортикоидов. В результате проведенного нами исследованя у больных алкоголизмом, выявлено статистически значимое увеличение уровня кортизола в сыворотке крови по сравнению со здоровыми донорами (686,74 (566,49-808,01), нмоль/л и 519,5 (396,00-571,00) нмоль/л соответственно, р<0,05).

Накапливающиеся в организме продукты деятельности стрессовых механизмов приводят к разрушению процессов саморегуляции, сбивая биологические ритмы людей, изменяются гормональные и иммунные функции стрессированного организма, что приводит к обострению соматических заболеваний, утяжелению клинической симптоматики психических расстройств и их затяжному течению [Александровский Ю.А., 2006; Greenberg J., 2002]. Показано, что стресс и гиперсекреция кортизола являются индуцирующими факторами апоптоза лейкоцитов периферической крови Во^поиимчивость Т-клеток к глюкокоотикоидам

Г "I" Г Г I i • • зависит от стадии развития лимфоцитов, пре-Т-кпетки костного мозга и незрелые Т-клетки тимуса «встают» на путь гибели при физиологических дозах глюкокортикоидов. Ранее считалось, что зрелые тимоциты и периферические лимфоциты резистентны к глюкокортикоидам. Однако было установлено, что определенные субпопуляции зрелых Т-лимфоцитов (натуральные киллеры, цитотоксические Т-лимфоциты) претерпевают апоптоз под действием глюкокортикоидов [Сергеев П.В. и соавт., 1996]. Также глюкокортикоиды вызывают непосредственную гибель нейронов и уменьшают адаптационные способности нервных клеток, делают их уязвимыми для других патологических факторов: ишемии, гипогликемии, токсического воздействия [Кочетков А.Я., 2004]. Кроме того длительная гиперсекреция кортизола сдвигает метаболизм в сторону катаболических процессов [Александров Ю.И., 2007]. Повышение стресс-лимитирующих гормонов в период абстиненции может являться защитным механизмом реакции организма в ответ на интоксикацию продуктами метаболизма этанола [Стояк В.А. и соавт., 2010].

При определении содержания в сыворотке крови ДГЭА-сульфата у больных алкоголизмом не выявлено отличий от показателей в группе психически и соматически здоровых доноров (3,63 (2,42-4,41) и 3,10 (2,50-3,49) мкг/мл). Соотношение ДГЭАС к кортизолу, характеризующее анаболическо-катаболический баланс, являющееся маркером стрессоустойчивости организма, достоверно снижено у больных алкоголизмом по сравнению с контрольными значениями (0,71 (0,561,16) и 1,49 (1,15-1,69) соответственно, р<0,05). Полученные результаты могут свидетельствовать об истощении анаболических возможностей организма по мере длительности стрессорного воздействия. В ряде работ показано, что снижение соотношения ДГЭАС/кортизол ассоциировано с развитием и прогрессированием нарушений таких функций ЦНС, как память, запоминание, неустойчивостью настроения, деменцией и т.д. [Анохина И.П. и соавт., 2004], и таким образом может являться неблагоприятным прогностическим признаком, отражающим последствия длительного злоупотребления алкоголем.

Для характеристики взаимосвязей исследуемых показателей нами применен корреляционный анализ между параметрами апоптоза, уровнем кортизола и уровнем ДГЭАС. Выявлена положительная корреляция «кортизол - С095», подтверждающая роль кортикостероидов в регуляции экспрессии маркера апоптоза на иммунокомпетентных клетках.

Влияние метаболического протектора кортексина в экспериментальных условиях при действии этанола на модели лимфоцитов периферической крови и нейробластомы С-1300.

Эффект кортексина на нейробластому С-1300. Алкоголь, являясь нейротоксическим веществом, нарушает нормальное функционирование нервной ткани вызывающие ее необратимые повреждения и/или клеточную гибель [Беленичев И.Ф. и соавт., 2009]. В наибольшей степени уязвимы для алкоголя нейроны, активность метаболизма которых очень высока. Однако использование нервных клеток пациентов невозможно для биологических исследований, поэтому в качестве удобной и доступной алтернативы можно применять клеточную линию нейробластомы.

Нейробластома относится к эмбриональным опухолям симпатической нервной системы. Нейробласты представляют собой недифференцированные клетки на разных стадиях эмбриогенеза. Дифференцировка нервных клеток в культуре морфологически проявляется образованием нервных отростков - дендритов и аксонов. В основе формирования этих структур лежат последовательные перестройки цитоскелета.

Клетки нейробластомы имеют важные свойства, типичные для нервных клеток: они электрически и химически возбудимы и имеют ионные каналы и рецепторы; они обладают ферментативным аппаратом для синтеза медиаторов, а также системой, необходимой для их инактивации, они образуют отростки, подобные нервным волокнам [ОптЫу С. е1 а1., 2009]. Относительная простота перевивки и высокая скорость роста нейробластомы позволяет в короткие сроки на небольшом количестве клеток моделировать действие различных эффекторов вызывающих апоптоз. Работа на клеточной линии нейробластомы С-1300 позволяет провести экспериментальное моделирование реализации процессов апоптоза в нейронах.

Перевиваемые культуры нейробластомы человека и животных широко используются при изучении механизмов действия разных повреждающих факторов, таких как глутаматная токсичность, окислительный стресс (опухолевые клетки реализуют идеальный ответ на окислительный стресс, обладают мощной антиоксидантной защитой), кислородно-глюкозное голодание, а также для поиска веществ, обладающих нейропротекторными свойствами [Платонова Т.Н. и соавт., 2005]. В нашем эксперименте нейробластома культивировалась с препаратом кортексин в концентрации 0,1 мкг/мл в течение 16 часов, а затем действовали индуктором окислительного стресса (140 мкМ ГПТБ в течение 4 часов) и 0,5% этанолом. В серии предварительных экспериментов нами определена концентрация гидропероксида третичного бутила необходимая для индукции окислительного стресса в культуре нейробластомы С-1300. Для этого нервные клетки периферической крови инкубировали с 5мкМ, 14мкМ и 140мкМ ГПТБ в течение 4 часов. По оценки активности ряда антиоксидантных ферментов было доказано, что концентрации 5 мкМ и 14 мкМ не вызывают индукцию окислительного стресса и не повреждают клетки, а наиболее четкие результаты получены при использовании концентрации 140 мкМ ГПТБ. Кроме того, в диссертационной работе Л.П. Смирновой (2003) показано, что данная концентрация ГПТБ являются токсичной для клеток (уже при концентрации 7x10"4 M происходит угнетение синтеза ДНК клеточной линии Р815 мастоцитомы, а при концентрации 1,5x10"6 M резко снижается синтез ДНК в опухолевых клетках карциомы Эрлиха).

Концентрация кортексина выбрана согласно литературным данным. Так в работе Гранстрема O.K. с соавторами (2010) описан защитный эффект препарата в отношении гибели нейронов при гиперстимуляции глутаматом.

В ряде исследований показано, что механизмы, которыми АФК регулируют апоптоз, включают активацию рецептора, активацию каспаз и белков семейства Bcl-2 [Ryter S. et al., 2007]. Поэтому в нашем исследовании проведена оценка уровня каспазы-3 и Bcl-2 в клеточном лизате, а также оценены морфологические изменения апоптоза. По результатам нашего эксперимента инкубация in vitro нейробластомы с гидроперекисью третичного бутила и этанолом приводила к достоверному снижению уровня антиапоптотического белка Bcl-2 (14,48 (13,10-16,20) нг/мл - инкубация с ГПТБ, 15,55 (11,73-17,61) нг/мл инкубация с этанолом, 20,20 (17,77-23,50) нг/мл - контроль). Полученные результаты согласуются с литературными данными. Так, Tejedo J. с соавторами (1999) доказали, что при действии оксида азота на клетку сильно понижается уровень внутриклеточного Bcl-2 белка. В работе Лямзаева К.Г. (2007) показано, что пероксид водорода вызывал гибель 20-30% клеток HeLa через 17 часов после добавления. Уровень caspase-3 в клетках нейробластомы не изменялся при действии этанола (2,40 (1,82-3,92) мкг/мл), однако в условиях экспериментального окислительного стресса наблюдалось статистически значимое увеличение данного параметра (3,95 (3,53-4,02) мкг/мл и 2,61 (2,43-3,57) мкг/мл в контроле, р<0,05).

Кортексин существенно повышал концентрацию антиапоптотического белка в клеточной культуре нейробластомы инкубированной с ГПТБ и 0,5% этанолом, по сравнению с инкубацией в тех же условиях без добавления протектора. Кортексин снижает интенсивность свободнорадикального окисления, проявляет антиоксидантное действие, обладает нейропротекторным и антиапоптозным действием, воздействует на все этапы патологической цепи молекулярных событий, приводящих к гибели нейронов. Установлено, что кортексин снижает уровень апоптоза нейронов, вызванного избыточным накоплением глутамата в синаптической щели [Pinelis V.G. et al., 2008]. В последние годы показано наличие у кортексина множественных эффектов, затрагивающих каскадную регуляцию апоптоза, экспрессию нейротрофических факторов, энергетическое обеспечение нервной клетки и митохондриальный потенциал, функционирование рецепторов глутамата и регулирование концентрации кальция в клетке, что выражается в нейропротекторном и нейротрофическом действии препарата [Гранстрем O.K. и соавт., 2010].

Эффект кортексина на лимфоциты периферической крови здоровых людей. Вне поля зрения остаются вопросы программированной клеточной гибели лимфоцитов периферической крови при алкоголизме, в то время как изменение апоптоза мононуклеаров может приводить к серьезным патологическим нарушениям и способствовать патоморфозу в течение алкогольной аддикции.

Лимфоциты периферической крови здоровых доноров инкубировали с кортексином в концентрации 0,1 мкг/мл, 1 мкг/мл, 10 мкг/мл в течение 16 часов, а затем действовали индуктором окислительного стресса (140 мкМ ГПТБ в течение 4 часов) и 0,5% этанолом. Три концентрации были использованы для выяснения является ли протекторный эффект препарата дозо-зависимым.

Как и с клетками нейробластомы, культивирование клеток с гидроперекисью третичного бутила приводило к достоверному снижению уровня белка Вс1-2 (7,59 (6,72-9,53) нг/мл и 10,01 (8,56-11,75) нг/мл - в контроле, р<0,05). Добавление в культуральную среду 0,5% этанола также вызывало статистически значимые изменения в содержании Вс1-2 (6,99 (4,95-8,9) нг/мл). Уровень саэразе-З достоверно увеличивался при добавлении в инкубационную среду ГПТБ (5,02 (4,33-5,74) мкг/мл, в контроле - 3,76 (3,59-4,11) мкг/мл, р<0,05). Инкубация клеток с этанолом не приводила к достоверным изменениям концентрации исследуемого белка (4,54 (3,81-4,79) мкг/мл, в контроле - 3,76 (3,59-4,11) мкг/мл). В условиях индуцированного окислительного стресса наблюдается достоверное увеличение доли Аппех'ш \/+- лимфоцитов по сравнению с контрольными значениями (17,71(16,80-17,80)% и 12,8(10,5-13,5)%, соответственно, р<0,05). Аналогичный эффект выявлен при добавлении в культуральную среду этанола (18,15(15,55-18,00)%).

Выявлены защитные свойства препарата в концентрации 0,1 мкг /мл по отношению к экспериментальному окислительному стрессу: уровень проапоптотического белка сазраэе-З достоверно снижался до 3,93 мкг/мл под действием кортексина (5,02 (4,33-5,74) мкг/мл без добавления протектора), а уровень Вс1-2 достоверно увеличивается до 11,25 нг/мл (10,01 (8,56-11,75) - в контроле). Статистически значимое повышение на уровень антиапоптотического белка оказывает препарат в концентрации 10 мкг/мл. Кортексин в концентрации 0,1 мкг/мл также вызывает достоверное повышение Вс1-2 и снижение доли Аппехт \/+-лимфоцитов культивированных с добавлением индуктора (0,5% этанола).

Возможным механизмом реализации протекторного эффекта исследуемого препарата в отношении процессов апоптоза лимфоцитов является восстановление нарушенного баланса про- и антиапоптотических белков. Выявленные в работе нейропротективные свойства кортексина могут быть связаны не только с его непосредственным действием на апоптоз лимфоцитов и баланс белков, но и опосредовано за счет снижения уровня окислительного стресса. Так показано, что в процессе терапии больных алкоголизмом с включением кортексина уровень продуктов ПОЛ снижается как в эритроцитах, так и в сыворотке, наблюдается увеличение антиоксидантных свойств сыворотки, снижение содержания МДА, уменьшение уровня эндотоксикоза [Иванова С.А., 2010].

Таким образом, представленные выше собственные экспериментальные данные согласуются с литературными и свидетельствуют о том, что кортексин in vitro оказывает выраженный антиапоптотический эффект на лимфоциты периферической крови здоровых людей, защищая их от пагубного воздействия активных форм кислорода и этанола.

Когнитивные функции и параметры апоптоза лимфоцитов периферической крови у больных алкоголизмом: эффекты нейрометаболической коррекции В процессе развития аддиктивной патологии и нарастания органических расстройств помимо аффективно-личностных нарушений наблюдаются расстройства интеллектуальной деятельности, которые интерпретируются в контексте понятий о "когнитивном дефиците" [Мандель А.И., 1997]. С позиции многих исследователей когнитивный дефицит рассматривается как нарушение концентрации внимания, ослабление памяти, снижение уровня ассоциативного мышления в континууме эмоционально-личностных расстройств, связанных с проблемами контроля над поведением и нарушениями адаптации у больных алкоголизмом.

По результатам исследования терапия кортексином в сочетании с традиционными методами лечения постабстинентоного состояния способствует быстрой и полной редукции астенического, психовегетативного, гипотимического симптомокомлексов.

До применения препарата возможности оперативной памяти пациентов были снижены, воспроизведение являлось неполным. После предьявлении испытуемым 10 слов до начала терапии усредненная кривая запоминания носила следующий характер: 5,3; 5,8; 6,4; 6,7; 6,8. После проведения лечения при повторном обследовании динамика воспроизведения 10 слов изменилась, воспроизведения 10 слов, в среднем, происходила к 4 повторению: 7,2; 8; 8,4; 9,6; 9,8.

У больных основной группы, получавших полипептидный препарат кортексин, выявлено достоверное снижение показателей личностного теста MMPI по шкалам «реализации эмоциональной напряженности», «аутизации», «депрессии», «тревожности» и повышение значений шкал «коррекции» и «уровня активности и оптимизма».

В ряде исследований описан положительный эффект кортексина на психологческий статус пациентов с разными формами психических расстройств. Так О.М. Перфильевой и И.В. Подсонной (2007) показана эффективная терапия когнитивных расстройств у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС при использовании нейропротектора. Л.С. Чутко с соавторами (2006) представили данные, свидетельствующие о том, что под влиянием кортексина у подростков, страдающих невротическими психическими расстройствами, происходит выраженное улучшение психического состояния, уменьшается утомляемость, улучшается внимание и память, уменьшается реактивная тревожность. Применение нейропептида оказывает более четкую положительную динамику регрессии клинических проявлений невротических состояний с усилением когнитивных функций [Алешина Н. В. И соавт., 2007].

Приведенные выше клинические случаи эффективности нейропептидного препарата могут быть объяснены и подтверждены исследованиями механизмов действия кортексина. Так, нейродегенеративные заболевания и черепно-мозговые травмы имеют различные клинические проявления и этиологию, но сопутствующая им гибель нервных клеток происходит вследствие патологических каскадных процессов со сходными молекулярными механизмами. Ключевыми из них являются эксайтотоксичность, вызванная чрезмерной активацией глутаматных рецепторов, и последующий вход ионов кальция в клетку. Избыток кальция запускает процессы, ведущие к гибели клеток по пути некроза или апоптоза.

Клиническая эффективность ноотропного и нейропротекторного препарата подтверждается биологическими исследованиями терапевтических возможностей кортексина. Применение кортексина в дополнение к базисной медикаментозной терапии приводит к статистически значимому снижению экспрессии рецептора С095 -маркера апоптотического сигнала (13,00 (10,00-18,00) % - до терапии и 9,00 (6,20-10,00)% - после терапии р<0,05) и достоверному снижению лимфоцитов на ранней стадии апоптоза (22,80 (14,70-24,96)% - до терапии и 18,97 (17,46-24,03)% - после терапии).

Таким образом, включение препарата с цитопротекторными свойствами в программы реабилитации позволяет повысить клиническую и биологическую эффективность терапии больных алкоголизмом за счет восстановления состояния гомеостатических систем организма. В целом представляется, что использование Кортексина является патогенетически обоснованным в связи с установленным эффектом на ряд клинических и лабораторных показателей и включение Кортексина в терапию аддиктивных расстройств приводит к метаболическому балансу в организме.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Епимахова, Елена Викторовна, 2012 год

1. Александровский, Ю.А. Пограничная психиатрия / Ю.А. Александровский. М.: Издательство РЛС Москва. - 2006. - 1280 с.

2. Александров, Ю.И. Психофизиология: Учебник для вузов / Ю.И. Александров. СПб.: Питер, 2007. - 464 с.

3. Анохина, И.П. Основные достижения в области наркологии, токсикомании, алкоголизма / И.П. Анохина, H.H. Иванец, В.Я. Дробышева // Вестник РАМН 1998. - Т.7. - С.29-37.

4. Анохина, И.П. Экспериментаьное изучение антиалькогольной и антинаркотической зависимости производных кортикостероидов / И.П. Анохина, А.В.Станишевская, Н.Л. Векшина // Патол. физиол. эксп. терап. -2004. -Т.4. С.31-38.

5. Барышников, А. Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А.Ю.Барышников, Ю.В. Шишкин. М.: Эдиториал УРСС - 2002. -320 с.

6. Белецкий, И. П. Пути передачи цитотоксического сигнала рецепторами семейства TNF-Rs / И.П. Белецкий, А.Б. Мошникова, О.В. Прусакова // Биохимия. 2002. - Т.67. - С.377-395.

7. Белушкина, Н. Н. Контроль процесса апоптоза белками семейства Bcl-2 / Н. Н. Белушкина // Вопр. биол. мед. фарм. химии. 2000. - №4. -С. 9-16.

8. Бохан, H.A. Молекулярные механизмы влияния этанола и его метаболитов на эритроциты in vitro и in vivo / H.A. Бохан, В.Д. Прокопьева. Томск, 2004. - 166 с.

9. Бохан, H.A. Наркологическая ситуация и психическое здоровье населения: региональные тренды деятельности / H.A. Бохан, В.Я. Семке, А.И. Мандель, // Психическое здоровье. М.: Гениус, 2006. - № 1.-С. 32-39.

10. Бочкова, Л. Г. Ноотропная и нейропротекторная терапия новорожденных с натальной цервикальной травмой / Л.Г. Бочкова, О.М. Носова // Перинатология и педиатрия. 2008. № 1. - С. 32-34.

11. Буко, В.У. Метаболические последствия алкогольной интоксикации / В.У. Буко, О.Я. Лукивская, А.М. Хоха Минск. - 2005. - 208 с.

12. Бурлака, О. П. Качество жизни больных алкоголизмом с коморбидными половыми дисфункциями / О. П. Бурлака, Н. А. Бохан, И. Г. Ульянов // Сибирский вестник психиатрии и наркологии. 2009. - № 3.- С. 28-30.

13. Бурчинский, С. Г. Регуляторные нейропептиды новый этап развития проблемы нейропротекции / С.Г. Бурчинский // Судин. Захворювання Гол. Мозку. - 2007. - № 2. -С. 61-64.

14. Бурчинский, С. Г. Фармакопрофилактика заболеваний, вызванных хроническим стрессом / С.Г. Бурчинский // Участковый терапевт. 2009- №2. С. 15-16.

15. Волкова, Т.О. Молекулярные механизмы апоптоза лейкозной клетки / Т.О. Волкова, H.H. Немова (отв. Ред. Ф.И.Шевченко); Ин-т биологии НЦРАНю М.: Наука. - 2006. - 205с.

16. Герасимова, М. М. Влияние кортексина на цитокиновый обмен при пояснично-крестцовых радикулопатиях. / М.М. Герасимова, А.Ю. Петушков // Нейроиммунология. 2004. - Т.2. - № 2. - С. 26.

17. Говорин, Н. В. Прогностическая роль нейроиммунных показателей у детей с экологообусловленными органическими психическими расстройствами в процессереабилитации / Н.В. Говорин, Т.П. Злова,

18. B.B. Ахметова // Социальная и клиническая психиатрия. 2005. - №15.1. C. 27-31.

19. Головкин, В. И. Кортексин в лечении эпилепсии / В.И. Головкин // Медико-фармацевт. вестн. Татарстана. 2006. - № 6 (234). - С. 15.

20. Гончаров, Н. П. Кортикостероиды: метаболизм, механизм действия и клиническое применение / Н.П. Гончаров, Г.С. Колесникова. М.: 2002. - С. 62-75.

21. Гончаров, Н.П. Дегидроэпиандростерон и функции мозга / Н.П. Гончаров, Г.В. Кация, А.Н. Нижник// Вестник Российской АМН. 2005. -№8. - С. 37-43.

22. Дьяконов, М. М. К вопрсу о нейропротекторном действии пептидных препаратов / М.М. Дьяконов, П.Д. Шабанов // Вестник российской военно-медицинской академии. 2011. - № 1(33). - С.255-258.

23. Иванец, H.H. Наркология: национальное руководство / H.H. Иванец, И.П. Анохина, М.А. Винникова М.: ГЭОТАР-Медиа. - 2008. -720с.

24. Иванова, С. А. Запрограммированная клеточная гибель лимфоцитов и нейтрофилов при алкоголизме / С.А. Иванова, H.A. Бохан // Сибирский вестник психиатрии и наркологии. 2006. - №3 (42). -С.47-49.

25. Иванова, С.А. Окислительнй стресс при алкоголизме: возможности метаболической коррекции на этапе формирования ремиссии / С.А. Иванова, H.A. Бохан.// Наркология. 2010. - № 10. - С.45-49.

26. Иммуноклеточный статус и выраженность эндотоксинемии у больных алкоголизмом с различной степенью алкогольного поражения печени / Л.Ф. Панченко, C.B. Пирожков, Т.А. Наумова и др. // Наркология. 2008. - №10. - С. 42-48.

27. Иммунотерапия и экстраиммунотерапия в клинической наркологии / Т.П. Ветлугина, H.A. Бохан, Т.И. Невидимова и др. // Пособие для врачей Томск. - 2006. - 42 с.

28. Иммунофлюоресцентный анализ / П.С. Барбан, P.A. Пшеничное, А.Н. Пантюхина и др. Свердловск: УрО АН СССР, 1988. - 176с.

29. Катепсин мозга способен расщеплять субстрат каспазы / A.A. Яковлев, А.Ю. Гороховатский, М.В. Онуфреев и др. // Биохимия. 2008.- Том 73. Вып.З. - С.408-413.

30. Катепсин мозга способен расщеплять субстрат каспазы / A.A. Яковлев, А.Ю. Гороховатский, М.В. Онуфреев и др. // Биохимия. 2008.- Т.73. Вып.З.-С.408-413.

31. Князькин, И.В. Апоптоз в онкоурологии / И.В. Князькин, В.Н. Цыган,- СПб.: Наука 2007. - 240 с.

32. Когнитивные и психотропные эффекты препарата Кортексин при лечении больных эпилепсией / В. В. Калинин, Е. В. Железнова, Л. В. Соколова и др. // Психиатрия и психофармакотерапия. 2009. - Т. 11.— № 3. - С. 50-54.

33. Кожевникова, В. Ю. Опыт применения кортексина в комплексном лечении больных эпилепсией, резистентных к базовой терапии / В.Ю. Кожевникова, И.О. Калачева, Б.Л. Шпрехер // Педиатрия. 2010. - Том 89.- №3.-С. 106-110.

34. Комплексное исследование иммуномодулирующего влияния препаратов с ноотропным механизмом действия на иммунокомпетентные клетки / Л.В. Гарманчук, H.H. Храновская, А.Н. Макаренко и др.// Журнал НАМИ Украина. 2001. - Т. 17. - № 3. - С. 218-226.

35. Кондратьев, А. Н. Возможности кортексина в интенсивной терапии пациентов в вегетативном состоянии / А.Н. Кондратьев, Е.А. Кондратьева // Terra Medica Кортексин. - 2004. - № 1. - С. 19-20.

36. Кортексин в терапии постабстинентного синдрома у больных алкоголизмом / В. В. Востриков, В. П. Павленко, П. Д. Шабанов // Лечащий врач. 2005. - № 6. - С. 92-93 .

37. Кортексин на молекулярном уровне / O.K. Гранстрем, Е.Г. Сорокина, М.А. Салыкина и др.// Нейроиммунология. 2010. - Т. VIII, № 1-2. - С. 34-40.

38. Кортизол, дегидроэпиандростерон сульфат и их соотношение у больных алкоголизмом / В.А. Стояк, Е.В. Жернова, H.A. Бохан, С.А. Иванова // Сибирский Вестник психиатрии и наркологии. 2010. - №4 (61). - С. 88-90.

39. Кочетков, Я.А. Депрессия и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая ось: новые стратегии изучения / Я.А. Кочетков //

40. Современные проблемы психиатрической эндокринологии: Сборник научных трудов. -М., 2004. С. 160-175.

41. Лаврик, И. Н. Регуляция апоптоза, индуцируемого через CD95/FAS и другие "рецепторы смерти"/ И.Н. Лаврик // Молекулярная биология. -2011.-Т. 45.-№ 1.-С. 173-179

42. Лисяный, Н. И. Нарушение апоптотических процессов при глиоме головного мозга. // Н.И. Лисяный, Л.Д. Любич. // Украинский нейрохирургический журнал. 2004. - № 4. - С.4-12.

43. Лущак, В. И. Свободнорадикальное окисление белков и его связь с функциональным состоянием организма / В.И. Лущак // Биохимия. -2007. Том 72. - № 8. - С. 995-1017.

44. Лямзев, К.Г. Митохондрии при окислительном стрессе в культуре клеток Hela / К.Г. Лямзев // автореф. дис. канд. биол. наук. Москва. -2007. - с.25.

45. Мандель, А.И. MMPI как метод индивидуализации психотерапевтической тактики при алкоголизме / А.И. Мандель // Совр. технологии психиатр, сервиса. Под. ред. акад. РАМН В.Я. Семке -Томск. 1997.-С.73-74.

46. Мнихович, М. В. Оценка апоптоза при раке молочной железы по данным изучения полутонких срезов и электронной микроскопии. / М.В. Мнихович // Морфология. 2011. - Том 5. - № 2. - С. 45-48.

47. Негативная регуляция а 2а Адренорецепторами экспрессии каспазы-3 в коре неонатального мозга / П.Н.Меньшиков, A.B. Баннова, Ф.А. Ильиных и др. // Бюллетень эксперим. Биологии и медицины. -2007. -Том 143,- №3- С.244-246.

48. Новиков, В. С. Программируемая клеточная гибель / B.C. Новиков -С-Пб.: Наука, 1996. -276с.

49. Новые возможности лечения алкогольной болезни. Перспективы применения цереброкурина / И.Ф. Беленичев, C.B. Павлов, Е.П. Соколик и др.// Международный неврологический журнал. 2009. - №1(23). - С. 166-180.

50. Островский, Ю.М. Пути метаболизма этанола и их роль в развитии алкоголизма / Ю.М. Островский, М.Н. Садовник // Итоги науки и техники. Токсикология,- М.: ВИНИТИ,- 1984. Т.13. - С.93-150.

51. Очерки биохимической фармакологии / П.В. Сергеев, .Галенко, П.А. Ярошевский, H.J1. Шимановский. М.: РЦ «Фармединфо», 1996. -132 с.

52. Пальцев, М. А. Межклеточные взаимодействия / М.А.Пальцев, A.A. Иванов, С.Е. Северин. 2-ое изд., перераб. и доп. - М.: Медицина. -2003. - 288с.

53. Паунова, С. С. Апоптоз физиология и потология (обзор литературы) / С.С. Паунова // Нефрология и диалез. - 2004. - № 2. - С. 132-137.

54. Пептидные биорегуляторы и их преминение: от неонтологии до геронтологии / В.М. Студеникин, Л.А. Пак, С.Ш. Турсенхужаева и др. // Лечащий врач. 2010. - №6. - С.72-75.

55. Перфильева, О. М. Лечение когнитивных расстройств у ликвидаторов последствий аварии / ОМ. Перфильева, И.В. Подсонная // TERRA MEDICA nova. 2007. - №3(47). - С. 7-11.

56. Петрищев, H. H. Содержание растворимых маркеров апоптоза и циркулирующих аннексин\/-связанных апоптотических клеток в крови больных острым коронарным синдромом // H.H. Петрищев, Л.В. Васина,

57. A.B. Луговая // Вестник санкт-петербургского университетаю 2008. -Вып. 1.-С. 14-23.

58. Петров, Р. В. Диагностика иммунопатологических состояний на основании оценки баланса в функционировании иммунной системы / Р.В. Петров, К.А. Лебедев // Иммунология. 1984. - №6. - С.38-43.

59. Печугин, A.B. Апоптоз клеток иммунной системы при туберкулезной инфекции / A.B. Печугин // Проблемы туберкулеза. 2005. - № 12. - С. 3-7.

60. Пинелис, В.Г. Влияние кортексина на выживаемость культивируемых нейронов мозга, подвергнутых токсическому действию глутамата или лишенных ростовых факторов / В.Г. Пинелис // Пептидная нейропротекция. 2009. - СПб. Наука. - С. 107-125.

61. Платонова, Т. Н. Применение Кортексина при заболеваниях центральной нервной системы у детей / Т.Н. Платонова, Г.А. Рыжак. -СПб.-2004.-48с.

62. Применение кортексина в детской неврологии: опыт и перспективы / В. М. Студеникин, Л. А. Пак, В. И. Шелковский и др. // Фарматека. -2008.-№ 14. -С. 23-29.

63. Профилактическое лечение эпилепсии: возможности кортексина (нейроиммунофизиологическое и биохимическое исследование) / С. Л. Хоршев, Е. А. Корсакова, И. Д Столяров и др. // Нейроиммунология. -2008. Т. VI. - № 1. - С. 22-26.

64. Рапопорт, Е. M. Участие сиалосвязывающих макрофагальных лектинов в фагоцитозе апоптотических телец / Е. М. Рапопорт, Ю. Б. Сапотько., Г. В. Пазынина // Биохимия. 2005. - Т 70, №3. - С.406-415.

65. Румянцев, А.П. Метаболизм органических соединений жирного ряда / А.П. Румянцев, Л.В. Тиунова, H.A. Остроумова // Итоги науки и техники. Токсикология. М.: ВИНИТИ. - 1981. - Т. 12. - С.65-116

66. Симбирцев, A.C. Интерлейин-1: физиология, патология, клиника /, A.C. Симбирцев. М.: Фолиант. - 2011.-480с.

67. Скоромец, Т.А. Применение кортексина в остром периоде черепно мозговой травмы / Т.А. Скоромец // Человек и лекарство: Тез. докл. XI конгр. Москва. - 2004. - С.342.

68. Скоромец, А. А. Кортексин пятилетний опыт отечественной неврологии / A.A. Скоромец, М.М. Дьяконов. - СПб. - 2005. - 224с.

69. Скоромец, А. А. Кортексин: новые возможности в лечении ишемического инсульта / A.A. Скоромец, Л.В. Стаховская, A.A. Белкин и др. // Нейропротекция при острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения. 2007. - С. 7-16.

70. Скоромец, А. А. Нейропротекция при острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения / A.A. Скоромец, М.М. Дьяконов. СПб. - 2007. - 200с.

71. Скороходов, А.П. Кортексин в консервативном лечении геморрагического инсульта / А.П. Скороходов, В.В. Белинская // Цереброваскулярная патология и инсульт: Тез. докп.1 Рос. конгр. -Москва. -2003. С. 182.

72. Смирнова, Л.П. Роль активных ферментов в регуляциипролиферации опухолевых клеток : автореф. дис. канд. м. наук/Л.П. Смирнова-Томск. -2003.- 22с.

73. Суханова, Г. А. Апоптоз / Г.А. Суханова, O.E. Акбашева. Томск: Изд-во ТПУ. - 2006. - 172с.

74. Уманский, С. Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы / С.Р. Уманский // Мол. Биол. 1996. - Т.ЗО. - С.487-502.

75. Утаганова, Г. X. Натальные шейно-спондилогенные поражения у детей раннего возраста (клиника, диагностика, лечение). Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 2010. -28с.

76. Федунова, Г. В. Опыт применения кортексина при симптоматической эпилепсии у детей / Г. В. Федунова, Е. Н. Сысоева // Глав. врач. 2008. - № 4 (16). - С. 32.

77. Фильченков, А. А. Апоптоз и рак / A.A. Фильченков, P.C. Стойка // Изд-во Национ. Академии наук Украины, 1999. 102с.

78. Фильченков, А. А. Апоптоз кортикальных нейронов при развитии ишемических инсультов / А. А. Фильченков, В. Н. Залесский // Нейрофизиология. 2002. - Т. 34, № 6. - С. 468-484.

79. Хаитов, Р. М. Иммунология / P.M. Хаитов М.: Медицина, 2000. -С. 151-161.

80. Хаитов, P.M. Иммунология: Атлас. V / P.M. Хаитов, A.A. Ярилин, Б.В. Пинегин М.: ГЭОТАР-Медиа. - 2011. - 624с.

81. Хайдуков, С. В. Цитометрический анализ субпопуляций Т-хелперов (Th1, Th2, Treg, Th17, Т-хелперы активированные) / С. В. Хайдуков, А. В.

82. Зурочка // Медицинская иммунология : Официальный журнал Санкт-Петербургского регионального отделения Российской Ассоциации аллергологов и клинических иммунологов. 2011. - № 1. - С. 7-16.

83. Цыган, В. Н. Память, внимание, сон и Кортексин (коррекция нарушений интегративных функций мозга) / В.Н. Цыган // Кортексин. Пятилетний опыт отечественной неврологии. СПб: Наука, 2006. — С. 185-197.

84. Черных, Е.И. Апоптоз лейкоцитов периферической крови, индуцированный действием гипертермии и преднизолона, у лиц с расстройством адаптации / Е.И.Черных, К.Г.Языков, В.Я. Семке // Бюл. экспер. биологии и медицины. 2002. - Т.134. - №12. - С. 617 - 619.

85. Чурина, Е. Г. Роль регуляторных Т- клеток в иммунопатогенезе туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью: автореф. дис. д-ра мед. наук / Е.Г. Чурина Томск. - 2012. - 44с.

86. Чутко, Л.С. Применение кортексина при неврастении у подростков / Л.С. Чутко, Ю.Д. Кропотов, С.Ю. Сурушкина и др. //Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2006. - №2. - С. 50-51.

87. Шабанов, Н. П. Кортексин в нейропедиатрии: Методические рекомендации./ Н. П. Шабанов, Т. Н. Платонова, А. П. Скоромец. СПб., 2006. - 64с.

88. Шрам, С. И. Фармакологическое исследование нейропротекторов пептидной природы в культуре клеток / Материалы II Российского симпозиума по химии и биологии пептидов. СПб. 2005. - 140с.

89. Эффективность Кортексина при лечении эпилепсии / В. Н. Цыган, А. В. Миролюбов, М. М. Богословский и др. // Terra Medica Nova. 2008. - № 4. - С. 20-24.

90. Ярилин, А. А. Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и при патологии / A.A. Ярилин // Актуальные проблемы патофизиологии. Под ред. Б.Б. Мороза. М.: Медицина - 2001. - С. 13-56.

91. A receptor for phosphatidylserine-specifi с clearance of apoptotic cells / V. Fadok, D.M. Rose, A. Pearson et al. // Nature. 2000. - Vol. 405. - P. 8590.

92. A serotonin-1A agonist provides protection against the ethanol-induced decrease of endogenous antioxidant enzymes in fetal rhombencephalic neurons / J.H. Lee, N.F. Tajuddin, P.T. Le, M.J. Druse // Alcohol. Clin. Exp. Res. 2007. - Vol. 31. - P. 37A.

93. A serotonin-1A agonist provides protection against the ethanol-induced decrease of endogenous antioxidant enzymes in fetal rhombencephalic neurons / J.H. Lee, N.F. Tajuddin, P.T. Le, M.J.Druse // Alcohol. Clin. Exp. Res. 2007. - Vol.31. - P. 37A.

94. Adachi, M. Role of mitochondria in alcoholic liver injury. / Adachi M., Ishii H. // Free Radic Biol Med. 2002. - Vol.32. - P.487-491.

95. Aggarwal, В. B. Signalling pathways of the TNF superfamily: a double-edged sword / B.B. Aggarwal // Nature Reviews Immunology. 2003. - Vol. 3, N 9. - P. 745-756.

96. Amundson, S. A. Roles for p53 in growth arrest and apoptosis: Putting on the brakes after genotoxic stress / S.A. Amundson, T.G. Myers, A.J. Fornace // Oncogene. 1998. - Vol.17, № 25. - P. 3287-3299.

97. Analysis of the composition, assembly kinetics and activity of native Apaf-1 apoptosomes / M.M. Hill, C. Adrain, P.J. Duriez et al. // Embo J. -2004. Vol. 23. - P. 2134-2145.

98. Antonio, A. M. Antioxidants Prevent Ethanol-Associated Apoptosis in Fetal Rhombencephalic Neurons / A.M. Antonio, M.J. Druse // Brain Res. -2008. -Vol.1204. -P. 16-23.

99. Apoptosis is rapidlytriggered by antisens depletion of MCL-1 in differentiating U937 cells / D.A. Moulding, R.V. Giles, D.G. Spiller et al. // Blood. 2000. - Vol.96. - P. 1756-1763.

100. Arends, M. Y. Apoptosis: The role of the endonuclease / M.Y. Arends, R.G. Morris, A.N Wyllie // Am. J. Pathol. 1990. - Vol. 136. - P. 593.

101. Ashwell, J. D. Glucocorticoids in T cell development and function / J. D. Ashwell, F. W. Lu., M. S. Vacchio // Annu. Rev. Immunol. 2000. - Vol.18. -P.11SS5-309.

102. Association between the serotonin transporter promoter polymorphism and personality traits in a primarily female population sample / B.D. Greenberg, Q. Li, F.R. Lucas et al. // Am. J. Med. Genet. 2000. - Vol. 96, N.2. - P. 202-216.

103. Astrocytes protect neurons from ethanol-induced oxidative stress and apoptotic death / L.T. Watts, M.L. Rathinam, S. Schenker, G.I. Henderson // J. Neurosci. Res. 2005. - Vol. 80. - P. 655-666.

104. Astrocytes protect neurons from ethanol-induced oxidative stress and apoptotic death / L.T. Watts, M.L. Rathinam, S. Schenker, G.I. Henderson // J. Neurosci. Res. 2005. - Vol. 80. - P.655-666.

105. Attenuated Cortisol response to alcohol in heavy social drinkers / A. King, G. Munisamy, H. de Wit et al. // Int .J. Psychophysiol. 2006. - Vol. 59, N. 3. - P. 203-209.

106. Bcl-2 and Bax regulate the channel activity of the mitochondrial adenine nucleotide translocator / C. Brenner, H. Cadiou, H. L. A. Vieira et al. // Oncogene. 2000. - Vol. 19, N 3. - P.329-336.

107. Brooks, P.J. Brain atrophy and neuronal loss in alcoholism: a role of DNA damage? / P.J. Brooks // Neurochem Int . 2000. - Vol. 37 - P.403-425.

108. Brune, B. Nitric oxide and its role in apoptosis / B. Brune, A. von Knethen, and K. B. Sandau // Eur. J. Pharmacol. 1998. - Vol. 351 - P. 261-272.

109. Caspase 3 is activated through caspase 8 instead of caspase 9 during H202-induced apoptosis in HeLa cells / Y. Wu , D. Wang , X. Wang et al. // Cell Physiol. Biochem. 2011. - Vol. 27(5). - P. 539-546.

110. Caspase Family Proteases and Apoptosis / T.-J. Fan, L.-H. Han, R.-S. Cong, J. Liang // Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005. - Vol. 37, N 11.-P. 719-727.

111. Caspases are activated in branched proteases cascade and control downstream processes in Fas-induced apoptosis / H. Hirata, A.Takahashi, K. Earnshaw et al. // Curr. Opin. Cell Biol. 1995. - Vol.7 . - P.337-343.

112. Chabaud, S. Apoptosis modulation as a promising target for treatment of systemic sclerosis / S. Chabaud, V. J.Moulin // International journal of rheumatology. 2011. - Vol. 35(6). - P. 431-436.

113. Characterization of 8p21.3 chromosomal deletions in B-cell lymphoma: TRAIL-R1 and TRAIL-R2 as candidate dosage-dependent tumor suppressor genes / F. Rubio-Moscardo, D. Blesa, C. Mestre et al. // Blood. 2005. - Vol. 106. - №9. - P. 3214-3222.

114. Cheema, Z.F. Ethanol induces Fas/Apo apoptosis.-1 mRNA and cell suicide in the developing cerebral cortex / Z.F. Cheema, J.R. West, R.C. Miranda // Alcohol Clin Exp Res. 2000. - Vol.24. - P.535-543.

115. Chen, W.J. Zinc supplementation does not attenuate alcohol-induced cerebellar Purkinje cell loss during the brain growth spurt period // W.J. Chen, E.C. Berryhill, J.R.West //Alcohol. Clin. Exp. Res. 2001. - Vol.25. -P.600-605.

116. Cherian, P.P. Ethanol-mediated DNA damage and PARP-1 apoptotic responses in cultured fetal cortical neurons I P.P. Cherian, S. Schenker, G. I. Henderson// Alcohol Clin Exp Res. 2008.-Vol.32, N.11. - P. 1884-1892.

117. Clement, M. V. Intracellular superoxide and hydrogen peroxide concentrations: a critical balance that determines survival or death / M.V. Clement, S. Pervaiz // Redox. Rep. 2001. - Vol. 6. - P. 211 -214.

118. Cuvillier, O. Sphingosine in apoptosis signaling / O. Cuvillier // Biochim. Biophys. Acta. 2002. - Vol.1985. - P.153-162.

119. Dinan, T.G. Psychoneuroendocrinology of mood disorders / T.G. Dinan // Current opinion in psychiatry. 2001. - Vol.14. - P. 51-55.

120. Disturbances of the stress response: the role of the HPA axis during alcohol withdrawal and abstinence / B. Adinoff, A. Iranmanesh, J. Veldhuis, L. Fisher // Alcohol Health Res World. 1998. - №22(1). - P. 67-72.

121. Dragovich, T. Signal transduction pathways that regulate cell survival and cell death / T. Dragovich, C.M. Rudin, C.B. Thompson // Oncogene. -1998. Vol.17. -P.3207-3213.

122. Earnshaw, W.C. Mammalian caspases structure, activation, substrates, and functions during apoptosis / W.C. Earnshaw, L.M. Martins, S.H. Kaufmann //Ann. Rev. Biochem. 1999. - Vol.68. - P.383-424.

123. Earnshaw, W.C. Nuclear changes in apoptosis / Earnshaw W.C. // Curr. Opin. Cell Biol. 1995. - Vol.7 . - P.337-343.

124. Elmore, S. Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death / S. Elmore // Toxicol Pathol. 2007. - Vol. 35(4). - P. 495-516.

125. Enhancement of germ cell apoptosis induced by ethanol in transgenic mice overexpressing Fas Ligand / J.H. Hu, J. Jiang, Y.H. Ma et al. // Cell.Res. 2003. - Vol.13. - P. 361-367.

126. Ethanol promotes T cell apoptosis through the mitochondrial pathway / A.A. Kapasi, G. Patel, A. Goenka et al. // Immunology. -2003. Vol.108, N.3. -P. 313-320.

127. Ethanol-induced death of postnatal hippocampal neurons / K.L. Moulder, F.T. Melbostad, R.J. Cormier et al. // Neurobiol. Dis. 2002. -Vol.10. - P.396-409.

128. Ethanol-induced neuroapoptosis in the developing rodent cerebellum and related brain stem structures / K. Dikranian, Y.Q. Qin, J. Labruyere et al. // Brain Res Dev Brain Res. -2005. Vol.22. - P. 1-13.

129. Ethanol-induced oxidative stress precedes mitochondrially mediated apoptotic death of cultured fetal cortical neurons / V. Ramachandran, L.T. Watts, S.K. Maffi et al. // J. Neurosci. Res. 2003. - Vol. 74. - P. 577-588.

130. Ethanol-mediated generation of reactive oxygen species in developing rat cerebellum / M.D. Heaton, M. Paiva, J. Mayer, R. Miller// Neurosci. Lett. -2002. Vol. 334. - P. 83-86.

131. Evan, G. I. Proliferation cell and apoptosis in cancer / G.I. Evan, K.H. Vousden // Nature. 2001. - Vol.411. - P. 342-348.

132. Fas and Fas ligand in gut and liver / M.J. Pinkoski, T. Brunner, D.R. Green et.al. // Am. J. Physiol. Gastrointest. 2000. - Vol.278. - P.354-366.

133. Fleury, C. Mitochondrial reactive oxygen species in cell death signaling / C. Fleury, B. Mignotte, J.-LVayssiere // Biochimie. 2002. - Vol. 84. - P. 131-141.

134. Fleury, C. Mitochondrial reactive oxygen species in cell death signaling / C. Fleury, B. Mignotte, J.L. // Vayssiere Biochimie. 2002. - Vol. 84(2-3). -P. 131-141.

135. FLICE is predominantly expressed as two functionally active isoforms, caspase-8/a and caspase-8/b // C. Scaffidi, J.P. Medema, P.H. Krammer, M.E. Peter//J. Biol. Chem. 1997. - Vol. 272. - P. 26953-26958.

136. Freund, G. Apoptosis and gene expression: perspectives on alcoholinduced brain damage / G. Freund // Alcohol. 1994. - Vol.11. -P.385-387.

137. Gondal, M. Surfase markers on human T and B lymphocytes forming non-immune rosettes with sheep blood cells / M. Gondal, J. Holm, H. Wigzell //J. exp Med. 1972. - Vol. 136, N.124. - P. 207-215.

138. Goodlett, C.R. Alcohol-induced Purkinje cell loss with a single binge exposure in neonatal rats: a stereological study of temporal windows of vulnerability / C.R. Goodlett, A.T. Eilers // Alcohol. Clin. Exp. Res. 1997. -Vol.21. -P.738-744.

139. Graves, J.D. Caspase-mediated activation and induction of apoptosis by the mammalian Ste20-like kinase Mst1 / J.D. Graves, Y.Gotoh, K.E. Draves // EMBO J. 1998. - Vol.17. - P.2224-2234.

140. Green, D. R. Apoptotic pathways: The roads to ruin / D.R. Green // Cell. 1998. - Vol.94. - P.695-698.

141. Grimbly, C. Growth hormone production and action in NIE-115 neuroblastoma cell / C. Grimbly, B. Martin, E. Karpinski et al. // J. Mol. Neurosci. 2009. - Vol. 39(1 -2) - P. 117-124.

142. Growth hormone production and action in NIE-115 neuroblastoma cell / C. Grimbly, B. Martin, E. Karpinski et al. // J. Mol. Neurosci. 2009. -Vol.39(1-2). -P.117-124.

143. Herman, J.P. Hypothalamic-pituitary-adrenal axis, glucocorticoids, and neurologic disease / J.P. Herman, K. Seroogy // Neurol. Clin. 2006. - Vol. 24.-P. 461-481.

144. Hormone responses to social stress in abstinent alcohol-dependent subjects and social drinkers with no history of alcohol dependence / C.A. Munro, L.M. Oswald, E.M. Weerts et al. // Alcohol Clin Exp Res. 2005. -Vol.29. - N7. - P. 1133-1138.

145. Hoskenbery, D. Defining apoptosis. Review / D. Hoskenbery//Amer. J. Pathol. 1995. - Vol.146. - P. 16 - 19.

146. Howes, R. Cancer, Apoptosis and Reactive Oxygen Species: A New Paradigm / R. Howes // PHILICA.COM. Article number 86.

147. Howley, B. Caspases as therapeutic targets / B. Howley, H.O. Fearnhead // Journal of Cellular and Molecular Medicine. 2008. - Vol. 12. -P.1502-1516.

148. Huang, X. Design of "smart" probes for optical imaging of apoptosis / X. Huang, S. Lee, X. Chen // Am. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 2011. - Vol. 1(1). -P. 3-17.

149. Ikonomidou, C. Ethanol-induced neurogeneration and fetal alcohol syndrome. / C. Ikonomidou, P. Bittigau, M. J. Ishimaru // Science. 2000. -Vol.287.-P.1056-1060.

150. Jacobs, J.S. Proliferation and death of cultured fetal neocortical neurons: effects of ethanol on the dynamics of cell growth / J.S. Jacobs, M.W. Miller // J. Neurocytology. 2001. - Vol.30. - P.391-401.

151. Jendrossek, V. Celecoxib activates anovel mitochondrial apoptosis signaling pathway / V. Jendrossek, R. Handrick, C. Belka // FASEB. J. -2003. -Vol.17. -№ 11.-P. 640-647.

152. Jung, M. E. Estrogen neuroprotection against the neurotoxic effects of ethanol withdrawal: potential mechanisms / M.E. Jung, M.B. Gatch, J.W. Simpkins // Exp. Biol. Med. (Maywood). 2005. - Vol. 230. - P. 8-22.

153. Kerr, J. F. Apoptosis a basic biological phenomenon with wide-ranging implication in tissue kinetics / J.F. Kerr, A.H. Wyllie, A.R. Currie // Brit. J. Cancer. 1972. - Vol.26.N4. - P.239-257

154. Khodarev, N. N. An inducible lymphocyte nuclear Ca/Mg-dependent endonuclease associsted with apoptosis / N.N. Khodarev, J.D. Ashwell // J. Immunol. 1996. - Vol. 156. - P. 922 - 931.

155. Khodarev, N.N. An inducible lymphocyte nuclear Ca/Mg-dependent endonuclease associsted with apoptosis / N.N. Khodarev, J.D. Ashwell // J. Immunol. 1996. - Vol. 156. - P. 922 - 931.

156. Kim, M.S. Suppression of DHEA sulfotransferase (Sult2A1) during the acute-phase response / M.S. Kim, J. Shigenaga, A. Moser et al. // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2004. - Vol. 287. - P. 731 -738.

157. Kol, J. P 53: puzzle and paradigm / J. Kol, C. Prive // Genes Develop. -1996. Vol. 10, № 9. - P. 1054-1072.

158. Krammer, P. H. Life and death in peripheral T cells / P.H. Krammer, R. Arnold, I.N. Lavrik // Nat. Rev. Immunol. 2007. - Vol. 7. - P. 532- 542.

159. Krammer, P. H. CD95's deadly mission in the immune system / P.H. Krammer // Nature. 2000. - Vol.407. - P.789-795.

160. Krieger, C. Mitochondria, Ca2+ and neurodegenerative disease / C. Krieger, M. R. Duchen // Europ. J. Pharmacol. 2002. - Vol. 47. - P. 177188.

161. Krzyzanski, W. Mechanism of ethanol enhancement of apoptosis and caspase activation in serum-deprived PC12 cells / W. Krzyzanski, J. Oberdoester, R.A. Rabin // Life Sei. 2007. - Vol. 81, N.9. - P. 756-64.

162. Lavrik, I. N. Caspases: pharmacological manipulation of cell death / I. N. Lavrik, A. Golks, P.H. Krammer // J. Clin. Invest. 2005. - Vol. 115. - P. 2665-2672.

163. Lieber, C. S. Pathogenesis and treatment of alcoholic liver disease: progress over the last 50 years / C.S. Lieber // Rocz. Akad. Med. Bialymst. -2005. Vol. 50. - P. 7-20.

164. Logue, S. E. Caspase activation cascades in apoptosis / S. E. Logue, S. J. Martin // Biochem. Soc. Trans. 2008. - Vol. 36. - P. 1-9.

165. Martin, S.J. Protease activation during apoptosis / S.J. Martin, D.R. Green // Cell. 1995. - Vol.82. - P.349-352.

166. Mechanism of alcohol-induced oxidative stress and neuronal injury I J. Haorah, S.H. Ramirez, N. Floreani et al. // Free Radic Biol Med Free Radic Biol Med.-2008.-Vol. 45, N.11.-P.1542-1550.

167. Mechanisms of Cell Death in Oxidative Stress/ S. Ryter, W. Kim, H. P. Hoetzel et al. // Antioxidants and redox signaling. 2007. - Vol 9, N.1. - P. 49-89.

168. Mechanisms of cytochrome c release from mitochondria / C. Garrido, L. Galluzzi, M. Brunet et al. // Cell Death Differ. 2006. - Vol. 13. - P. 14231433.

169. Meier, P. Apoptosis in development / P. Meier, A. Finch, G. Evan // Nature. 2000. - Vol.407. - P.796-801.

170. Molecular and cellular events in alcohol-induced muscle disease / J. Fernandez-Solà, V.R. Preedy, C.H. Lang et. al. // Alcohol Clin Exp Res. -2007. Vol. 12. - P. 1953-1962.

171. Mucin-induced apoptosis of monocyte-derived dendritic cells during maturation / A. Ishida, M. Ohta, M. Tod et al. // Proteomics 2008. Vol.8? N.16. - P.3342-3349.

172. Nagata, J. Apoptotic DNA fragmentation // Exp. Celle Res. 2000. -Vol.256.-P.12-18.

173. Nakahara, T. Acute and chronic effects of alcohol exposure on skeletal muscle c-myc, p53, and Bcl-2 mRNA expression / T. Nakahara, K. Hashimoto, M. Hirano // Amer.J.Physion Endocrinol Metab. 2003. - V. 285 -P. 1273-1281.

174. Neuroactive steroids and ethanol / R.H. Purdy, C.F. Valenzuela, P.H. Janak et al. //Alcohol Clin Exp Res. 2005. - Vol. 29, N.7. - P. 1292-1298.

175. Neuroprotective effects of cortagen, cortexin and semax on glutamate neurotoxicity / V.G. Pinelis, T.P. Storozhevykh, A.M. Surin et al. // J. Peptide Science.-2008. Vol. 14, N.8. - P.159-160.

176. NO induces a cGMP-independent release of cytochrome c from mitochondria which precedes caspase 3 activation in insulin producing RINm5F cells / J.C. Tejedo, G.M.Cahuana, R.Ramirez et al. // FEBS Letters-1999. Vol. 459. - P.238-243.

177. ON/OFF and Beyond A Boolean Model of Apoptosis / R. Schlatter, K. Schmich, I. A. Vizcarra, P. Scheurich // PLoS Computational Biology. - 2009. -Vol. 5.N.12. — e1000595.

178. Orlinck, J. R. Structure and function of Fas/Fas ligand / J.R. Orlinck, A.K. Vaishnaw, K.W. Elkon // Int. Rev. Immunol. 1999. - Vol.18. - P. 293308.

179. Pervaiz, S. A permissive apoptotic environment: function of a decrease in intracellular superoxide anion and cytosolic acidification / S. Pervaiz, M.V.

180. Clement // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. - Vol. 290(4). - P. 1145-1150.

181. Pervaiz, S. Hydrogen peroxide-induced apoptosis: Oxidative or reductive stress? / S. Pervaiz, M.V. Clement // Methods Enzymol. 2002. -Vol. 352.-P. 150-159.

182. Pexider, T. Cell death in morphogenesis and teratogenesis of the heart IT. Pexider//Adv. Anat. Embriol. Cell Biol. 1975. - Vol.1. - P. 100.

183. Possible metabolic pathways of ethanol responsible for oxidative DNA damage in human peripheral lymphocytes./ Y. Yan, J.Y. Yang, Y.H. Мои et al.//Alcohol Clin Exp Res. 2011. - Vol.35, N.1. -P.1-9.

184. Recruitment of TNF receptor 1 to lipid rafts is essential for TNFa-mediated NF-кВ activation / D. F. Legler, O. Micheau, M. A. Doucey et al. // Immunity. 2003. - Vol. 18, № 5. - P. 655-664.

185. Reed, D. J. Mitochondrial glutathione and chemically induced stress including ethanol / DJ. Reed // Drug Metab. Rev. 2004. -Vol.36. - P.569-582.

186. Response of the HPA-axis to alcohol and stress as a function of alcohol dependence and family history of alcoholism / X. Dai, J. Thavundayil, S. Santella, C. Gianoulakis // Psychoneuroendocrinology. 2007. - Vol. 32, N. 3. - P. 293-305.

187. Rigaud, A.S. Neuropsychic effects of dehydroepiandrosterone / A.S. Rigaud, J. Pellerin // Ann Med Interne. 2001. - Vol. 3. - P. 43-49.

188. Rodriguez, D. A. Ethanol increases tumor necrosis factor-alpha receptor-1 (TNF-R1) levels in hepatic, intestinal, and cardiac cells. / D.A. Rodrigues, С. Moneada, M.T. Nunez et al. //Alcohol. 2004. -Vol.33. - P. 915.

189. S100B-mediated protection against the pro-apoptotic effects of ethanol on fetal rhombencephalic neurons / M.J. Druse, R.A. Gillespie, N.F. Tajuddin, M. Rich // Dev. Brain Res. 2007. - Vol. 1150. - P. 46-54.

190. San Martin, M. DHEA-sulfate causes a phase-dependent increase in melatonin secretion: a study of perifused rat pineal glands / M. San Martin, Y. Touitou // Steroids. 2000. - Vol. 65. - P. 491 -496.

191. Sapolsky, R.M. The possibility of neurotoxicity in the hippocampus in major depression: a primer on neuron death / R.M. Sapolsky // Biol. Psychiatry. 2000. - Vol. 48. - P. 755-765.

192. Sari, Y. Prenatal alcohol exposure causes long-term serotonin deficit in mice / Y. Sari, F.C. Zhou // Alcohol. Clin. Exp. Res. 2004. - Vol. 28. - P. 941-948.

193. Schuler, M. Mechanisms of p53-dependent apoptosis / M. Schuler, D.R. Green // Biochem. Soc. Trans. 2001. - Vol. 29. - P. 684-688.

194. Sheth, D.S. Antioxidant neuroprotection against ethanol-induced apoptosis in HN2-5 cells / D.S. Sheth, N.F. Tajuddin, M.J. Druse// Brain Res. -2009. Vol. 1285. - P. 14-21.

195. Signaling pathways involved with serotonin1A agonist-mediated neuroprotection against ethanol-induced apoptosis of fetal rhombencephalic neurons / M.J. Druse, N.F. Tajuddin, R.G. Gillespie, T. Le // Dev. Brain Res. -2005. Vol. 159. - P. 18-28.

196. Spyridopolous, I. Alcohol inhances oxysterol-induced apoptosis in human endothelial cells by a calcium dependent mechanism. / I. Spirodopolous, J. Wichhusen, B. Rabenshtein et al. // Arterioscler Thromb Vask Biol. 2001. - Vol.21. - P. 439-444.

197. Suppressed proliferation and apoptotic changes in the rat dentate gyrus after acute and chronic stress are reversible / V.M. Heine, S. Maslam, J. Zareno, et al. // Eur. J. Neurosci. 2004. - Vol. 19. - P. 131 -144.

198. Tajuddin, N. F. A persistent deficit of serotonin neurons in the offspring of ethanol-fed dams: protective effects of maternal ipsapirone treatment / N.F. Tajuddin, M.J. // Druse Brain Res. Dev. Brain Res. 2001. - Vol. 129. - P. 181-188.

199. Tajuddin, N. F. In utero ethanol exposure decreased the density of serotonin neurons. Maternal ipsapirone treatment exerted a protective effect / N.F. Tajuddin, M.J. Druse // Brain Res. Dev. Brain Res. 1999. - Vol. 117.-P. 91-97.

200. Tan, X. The caspase-RB connection in cell death / X. Tan, Y.J. Wang // Trends Cell Biol. 1998. - Vol.8. - P. 116-120.

201. Taylor, R. C. Apoptosis: controlled demolition at the cellular level / R. C. Taylor, S. P. Cullen // Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2008. - Vol. 9, N3.-P. 231-241.

202. The role of CAP3 in CD95 signaling: new insights into the mechanism of procaspase-8 activation / A. Golks, D. Brenner, I. Schmitz et al. // Cell Death Differ. 2006. - Vol. 13. - P. 489-498.

203. The role of cytokine in regulation of the natural killer cell activity / V. Jurisic , S. Stojacic-Djenic , N. Colovic et al. // Srp. Arh. Celok. 2008. -Vol.136. - P.423-429.

204. Thorburn, A. Death receptor-induced cell killing / A. Thorburn // Cellular Signalling. 2004. - Vol. 16, N. 2. - P. 139-144.

205. Vandenabeele, P. Molecular mechanisms of necroptosis: an ordered cellular explosion / P. Vandenabeele, L. Galluzzi, T. Vanden Berghe & Guido Kroemer // Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2010. - №11. - P.700-714.

206. Ward, R. J. Biochemical and Neurotransmitter Changes Implicated in Alcohol-Induced Brain Damage in Chronic or 'Binge Drinking' Alcohol Abuse / R. J. Ward, F. Lallemand, P. de Witte // Alcohol & Alcoholism 2009. - Vol. 44.- N. 2.-P. 128-135.

207. White, M. K. Supression of apoptosis: role in cell growth and neoplasia / M.K. White // Leuremia. 2001. - № 17. - C.7.

208. Wolkowitz, O.M. Stress hormone-related psychopathology: pathophysiological and treatment implications / O.M. Wolkowitz, E. S. Epel, V.l. Reus//World J. Biol. Psychiat. 2001.- Vol.2. - P. 115-143.

209. Wu, D Alcohol-induced oxidative stress and cell responses / D. Wu, Q. Zhai, X. Shi // Journal of Gastroenterology and Hepatology. 2006. - N.21. -P. 26-S29.

210. Zhong, Z. Role of free radicals in failure of fatty liver grafts caused by ethanol / Z. Zhong, J.J. Lemasters // Alcohol. 2004. - Vol. 34. - P. 49-58.1. Анкета1. Ф.И.О.1. Тел.1. Адрес:

211. Дата рождения (Число. Месяц. Год) Полных лет1. Пол: ж/ мВес:кг Рост:см

212. Артериальное давление:мм.рт.ст. Пульс:

213. Гипертензия, диагностированная ранее: нет / даесли да, то продолжительность (лет)

214. Антигипертензивное лечение:

215. Продолжительность (лет) месяцев

216. Недостаточность микроциркуляторного русла (периферическая ишемия):ног: нет/ естьрук: нет/ есть

217. Стенокардия: никогда/ редко/ часто/ всегда

218. Причины предыдущих госпитализаций:

219. Инфекционные, аллергические, аутоиммунные и кожные заболевания

220. Количество вирусных инфекций за год:1. Клещевой энцефалит:1. Туберкулез:1. Гайморит:1. Отит: нет/ да1. Герпес на губах: нет/ да1. Ангина: нет/ да

221. Хронический бронхит: Хроническая пневмония: Эмфизема легких: Фиброз легких:

222. Опухание: глаз: нет/ да; лица: нет/ да

223. Кожные пустулы (гнойнички, прыщики): Контактные дерматиты: Нейродермиты: Ревматизм:1. Ревматоидный артрит:

224. Отеки: стоп: нет/ далодыжек:травы: нет/дасено: нет/ дадомашняя пыль: нет/ дакожа: нет/ дав детстве: нет/ даесли да, то на чтонет/ дачихание: нет/дадругих частей теланетдаголеней:нет/ данет/ данет/ данет/'данет/ данет/ данет/ да

225. Заболевания желудочно-кишечного тракта и выделительной системы1. Гастрит:

226. Язва. желудка, нет/ да; кишечника: нет/ да1. Прободение желудка:1. Описторхоз:1. Гепатит:

227. Другие заболевания печени и желчного пузыря: нет / данетданет/ данет/ данет/ даесли да, то какие1. Подагра: Пиелонефрит:1. Другие заболевания почек:нет / данетI данетI даесли есть, то какие:

228. Варикозное расширение вен: нет/ да/ без дискомфорта/ с дискомфортом

229. Неврологические и эндокринные заболевания, новообразования1. Остеохондроз (радикулит):1. Инсульт:1. Эпилепсия:1. Обмороки:1. Менингит:1. Сахарный диабет:

230. Нарушения щитовидной железы:

231. Опухоли: нет/ да; если да, то какие

232. Кровотечения: нет/ да; если да, то какиенет/ данет/ данет/ данет/ данет/ данет/ данет/ да

233. Заболевания слухового аппарата1. Проблемы слуха: нет/ да;

234. Глухота: нет/ да; если да, то1. Звон в ушах: в правом ухеесли да, топравого уха в левом ухеправого ухалевого ухалевого уха

235. Хирургические вмешательства и травмы

236. Тонзилэктомия (удаление миндалин): Полипоз:1. Черепно-мозговые травмы:

237. Переломы костей: нет/ да; если да, то какие1. Грыжа:нет/ данет/ данет/ данетда1. Ваш образ жизни

238. Связана ли Ваша работа с наличием профессиональных вредностей:1. Химические: нет/ да1. Лекарственные: нет/ да1. Запыление: нет/ да

239. В подземных условиях: нет/ да

240. Частые стрессовые ситуации: нет/ да

241. Время работы в этих условиях1. Биопрепараты: нет/ да1. Облучение: нет/ да1. Загазованность: нет/ да

242. Холод (работа на улице): нет/ да

243. Занятия спортом за последние пол года

244. Курение (в последнее время):сигареты: нет/да; сигары: нет/да; курительная трубка: нет/да

245. Сколько пачек сигарет за месяц:

246. Длительный прием лекарственных препаратов: Антибиотики:если да, то какиенет/ дапродолжительности

247. Гормоны: если да, то какиепродолжительностинетда1. Оральные контрацептивы:если да, то какие1. Витамин Э:1. Анальгетики: нет/ да1. Облучение по поводу:нетдапродолжител ьностьнетдаесли да, то сколько раз в месяц

248. Прием спиртных напитков: Вино: литров/месяцликер: литров/месяцпиво: литров/месяц водка: литров/месяцесли да, то какие1. Психические расстройства1. Депрессии: Шизофрения:

249. Невротические расстройства: нет/ да1. Алкоголизм:

250. Другие сильнодействующие вещества: нет/ да если да, то какие

251. Другие психиатрические расстройства: нет/ да если да, то какие

252. Наличие психических расстройств у членов семьи:

253. Если да, то каких и у когонет нетда /данетданетда

254. Опросник Мини-мульт (сокращенный вариант ММР1)

255. Инструкция: Сейчас вы ознакомитесь с утверждениями, касающимися состояния вашего здоровья и вашего характера.

256. Прочитайте каждое утверждение и решите, верно оно или неверно по отношению к вам. Не тратьте времени на раздумывание. Наиболее естественно то решение, которое первым приходит в голову. Текст опросника.1. У вас хороший аппетит?

257. По утрам вы обычно чувствуете, что выспались и отдохнули.

258. В вашей повседневной жизни масса интересного.

259. Вы работаете с большим напряжением.

260. Временами вам приходят в голову такие нехорошие мысли, что о них лучше не рассказывать.

261. У вас очень редко бывает запор.

262. Иногда вам очень хотелось навсегда уйти из дома.

263. Временами у вас бывают приступы неудержимого смеха или плача.

264. Временами вас беспокоит тошнота и позывы на рвоту.

265. У вас такое впечатление, что вас никто не понимает.

266. Иногда вам хочется выругаться.

267. Каждую неделю вам снятся кошмары.

268. Вам труднее сосредоточиться, чем большинству людей.

269. С вами происходили (или происходят) странные вещи.

270. Вы достигли бы в жизни гораздо большего, если бы люди не были настроены против вас.

271. В детстве вы одно время совершали кражи.

272. Бывало, что по несколько дней, недель или целых месяцев вы ничем не могли заняться, потому что трудно было заставить себя включиться в работу.

273. У вас прерывистый и беспокойный сон.

274. Когда вы находитесь среди людей, вам слышатся странные вещи.

275. Большинство знающих вас людей не считают вас неприятным человеком.

276. Вам часто приходилось подчиняться кому-нибудь, кто знал меньше вас.

277. Большинство людей довольны своей жизнью более чем вы.

278. Очень многие преувеличивают свои несчастья, чтобы добиться сочувствия и помощи.24. Иногда вы сердитесь.

279. Вам определенно не хватает уверенности в себе.

280. У вас часто бывает чувство, как будто вы сделали что-то неправильное или нехорошее.

281. У вас может ухудшиться самочувствие и здоровье, если люди критикуют вас, требуют от вас слишком многого.

282. Обычно вы удовлетворены своей судьбой.

283. Некоторые так любят командовать, что вам хочется все сделать наперекор, хотя вы знаете, что они правы.

284. Вы считаете, что против вас что-то замышляют.

285. Большинство людей способно добиваться выгоды не совсем честным путем.

286. Вас часто беспокоит желудок.

287. Часто вы не можете понять, почему накануне вы были в плохом настроении и раздражены. 34 Временами ваши мысли текли так быстро, что вы не успевали их высказывать.

288. Вы считаете, что ваша семейная жизнь не хуже, чем у большинства ваших знакомых.

289. Временами вы уверены в собственной бесполезности.

290. В последние годы ваше самочувствие было в основном хорошим.

291. У вас бывали периоды, во время которых вы что-то делали и потом не могли вспомнить, что именно.

292. Вы считаете, что вас часто незаслуженно наказывали,

293. Вы никогда не чувствовали себя лучше, чем теперь.

294. Вам безразлично, что думают о вас другие.

295. С памятью у вас все благополучно.

296. Вам трудно поддерживать разговор с человеком, с которым вы только что познакомились.

297. Большую часть времени вы чувствуете общую слабость.45. У вас редко болит голова.

298. Иногда вам бывало трудно сохранить равновесие при ходьбе.

299. Не все ваши знакомые вам нравятся.

300. Есть люди, которые пытаются украсть ваши идеи и мысли.

301. Вы считаете, что совершали поступки, которые нельзя простить.

302. Вы считаете, что вы слишком застенчивы.

303. Вы почти всегда о чем-нибудь тревожитесь.

304. Ваши родители часто не одобряли ваших знакомств.

305. Иногда вы немного сплетничаете.

306. Временами вы чувствуете, что вам необыкновенно легко принимать решения.

307. У вас бывает сильное сердцебиение, и вы часто задыхаетесь.

308. Вы вспыльчивы, но отходчивы.

309. У вас бывают периоды такого беспокойства, что трудно усидеть на месте.

310. Ваши родители и другие члены семьи часто придираются к вам.

311. Ваша судьба никого особенно не интересует.

312. Вы не осуждаете человека, который не прочь воспользоваться в своих интересах ошибками другого.61. Иногда вы полны энергии.

313. За последнее время у вас ухудшилось зрение.

314. Часто у вас звенит или шумит в ушах.

315. В вашей жизни были случаи (может быть, только один), когда вы чувствовали, что на вас действуют гипнозом.

316. У вас бывают периоды, когда вы необычно веселы без особой причины.

317. Даже находясь в обществе, вы обычно чувствуете себя одиноко.

318. Вы считаете, что почти каждый может солгать, чтобы избежать неприятностей.

319. Вы чувствуете острее, чем большинство других людей.

320. Временами ваша голова работает как бы медленнее, чем обычно.

321. Вы часто разочаровываетесь в людях.

322. Вы злоупотребляли спиртными напитками.

323. Паранойяльность (Ра). Основная черта людей с высокими показателями по этой шкале -склонность к формированию сверхценных идей. Это люди односторонние, агрессивные и злопамятные. Кто не согласен с ними, кто думает иначе, тот или глупый человек, или враг.

324. Психастения (Рг). Диагностирует лиц с тревожно-мнительным типом характера, которым свойственны тревожность, боязливость, нерешительность, постоянные сомнения.

325. Психологический тест на оценку кратковременной слуховой памяти. Методика А. Р. Лурия "10 слов" Цель: оценка состояния памяти, утомляемости, активности внимания.

326. Применение: Методика может быть использована как для детей (с пяти лет), так и для взрослых.

327. Тестовый материал: Протокол с десятью короткими односложными и двусложными словами. Наиболее часто используют следующий набор слов: Лес, Хлеб, Окно, Стул, Вода, Конь, Гриб, Игла, Мед, Огонь

328. Методика проведения исследования: Инструкция для взрослых:

329. Дата рожденияДата тестированияВремя опыта

330. Самочувствие испытуемого до опытапосле опытастимула Стимул Ответ Р, К Через 1 час Прим1 2 3 4 5 6 1