Влияние мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, выделенных из плаценты, на регенерацию быстрообновяющихся тканей зрелых и старых лабораторных животных при воздействии экстремальных факторов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат медицинских наук Маклакова, Ирина Юрьевна

• Маклакова, Ирина Юрьевна
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Маклакова, Ирина Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о механизмах регенерации тканей.

1.1.1. Основные теории старения.

1.2. Экстремальные состояния и проблема регенерации тканей.

1.3. Использование стволовых клеток для оптимизации процессов регенерации в условиях старения и воздействия экстремального повреждения.

1.3.1. Проблема использования стволовых клеток в эксперименте и клинике.

1.3.2. Использование стволовых клеток в условиях старения и воздействия экстремальных факторов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, выделенных из плаценты, на регенерацию быстрообновяющихся тканей зрелых и старых лабораторных животных при воздействии экстремальных факторов»

Актуальность проблемы

Последние десятилетия развития мировой медицинской науки характеризуются повышенным интересом к изучению биологии стволовых клеток и возможностями их использования в медицинской практике. Имеющиеся результаты таких исследований свидетельствуют о значительных возможностях для внедрения новых методов клеточной и тканевой терапии для лечения самых сложных болезней, при которых альтернативные лечебные мероприятия оказываются бессильными [4, 30, 36, 92,111,151,165].

Между тем, следует заметить, что многие вопросы, связанные с изучением механизмов терапевтического действия стволовых клеток, возможности их доставки в поврежденную ткань, направленной дифференцировки стволовых клеток остаются в значительной мере неизученными [3, 5, 68, 89, 114, 115, 153, 212, 216]. При старении организма развитие регенерации осуществляется на ином, отличном от молодого организма уровне, что может определять существенные различия в выраженности регенераторного ответа в ответ на действие экстремального фактора [10, 59, 75].

В процессе старения развивается генерализованный G1/S - блок для процессов дифференцировки и пролиферации, нарушающий процессы клеточного самообновления [59]. Одной из возможностей преодолеть такой блок является увеличение в организме количества клеток, способных к дифференцировке и пролиферации [26, 45, 46, 108, 215]. С этой целью можно использовать стволовые клетки. Различные стволовые клетки в эксперименте и клинике находят все более широкое применение [11, 18, 38,99, 112, 113, 159, 161, 203, 207]. Можно полагать, что при использовании стволовых клеток для коррекции процессов старения в организме происходит повышение синтеза факторов роста, необходимых для поддержки дифференциации и пролиферации клеток, приводящее к восстановлению нарушенных при старении функций органов и систем [19, 40, 77,103,105,190].

В настоящем исследовании изучалась возможность использования аллогенной трансплантации ММСК для воздействия, на процессы регенерации в органах и системах при действии экстремальных факторов — ИИ, острой кровопотери, характер повреждений в которых во многом напоминает таковые, развивающиеся в результате старения организма [27, 53, 117]. Основным источником получения стволовых клеток, используемых в терапевтической практике, является костный мозг, жировая ткань, периферическая и пуповинная кровь [25, 52, 116, 122, 156, 170, 204, 218]. Между тем, фетальные органы по содержанию мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток превосходят выше названные источники [20, 126, 138, 174, 176]. Однако получение таких клеток связано с определенными методическими трудностями. Также ограничивают их использование этические и некоторые другие проблемы. Можно также полагать, что мезенхимальные стволовые клетки плаценты имеют еще одно преимущество в сравнении с мезенхимальными стволовыми клетками, полученными из других источников - они находятся в начальном периоде своей жизни и могут обладать в этой связи пролонгированным терапевтическим эффектом, что особенно существенно при их использовании в гериатрической практике.

Все вышеизложенное и явилось основанием для постановки основной цели и задач настоящего исследования:

Цель исследования

Изучить влияние мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток на регенерацию тканей зрелых и старых лабораторных животных в физиологических условиях и при воздействии экстремальных факторов (кровопотеря, ионизирующее излучение).

Задачи исследования:

1. Оценить состояние пролиферативной активности быстрообновляющихся тканей зрелых и старых лабораторных животных в физиологических условиях.

2. Изучить влияние мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, выделенных из плаценты, на состояние миелоидной ткани зрелых и старых лабораторных животных в физиологических условиях.

3. Изучить влияние мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, выделенных из плаценты, на состояние миелоидной ткани зрелых и старых лабораторных животных в условиях воздействия экстремальных факторов - ионизирующего излучения и острой кровопотери.

4. Изучить влияние мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, выделенных из плаценты на состояние эпителия кишечника зрелых и старых лабораторных животных в физиологических условиях и при воздействии экстремальных факторов.

5. Дать сравнительную оценку воздействия трансплантации ММСК на активность регенерации быстрообновляющихся тканей у зрелых и старых лабораторных животных в физиологических условиях и в условиях экстремального повреждения.

Научная новизна

На основании проведенного исследования доказана возможность использования мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, выделенных из плаценты, для обеспечения эффективной регенерации тканей в физиологических условиях и в условиях воздействия на организм экстремальных факторов. Показано, что трансплантация ММСК в физиологических условиях оказывает стимулирующее действие на эритропоэз зрелых и старых лабораторных животных, вызывает увеличение содержания криптального эпителия тощей кишки. У старых животных при этом происходит снижение уровня цитогенетически измененных клеток. В условиях воздействия ионизирующего излучения трансплантация ММСК также приводит к существенному увеличению средней клеточности крипты. У зрелых лабораторных животных данный механизм реализуется за счет повышения митотической активности эпителиоцитов и угнетения апоптоза, у старых — за счет ингибирования запрограммированной клеточной гибели.

Установлено, что в условиях воздействия экстремальных факторов (ионизирующего излучения, острой кровопотери) введение ММСК зрелым и старым лабораторным животным приводит. к стимуляции эритропоэза, снижению мутагенной активности, стимуляции гранулоцитопоэза у зрелых животных.

На основании проведенных исследований можно заключить, что старые лабораторные животные сохраняют способность при воздействии ММСК к активации регенерации быстрообновляющихся тканей, как в физиологических условиях, так и после воздействия экстремальных факторов.

Проведенные исследования дали основания для получения патента: «Способ восстановления регенерации миелоидной ткани после воздействия ионизирующего излучения, путем аллогенной трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, выделенных из плаценты». '

Теоретическая и практическая значимость работы

Выполненная работа явилась доказательством возможности использования трансплантации ММСК для повышения активности регенерации быстрообновляющихся тканей в условиях воздействия экстремальных факторов. При этом, активация регенерации после введения ММСК зарегистрирована как у зрелых, так и у старых лабораторных животных.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Трансплантация ММСК зрелым лабораторным животным в физиологических условиях и в условиях воздействия экстремальных факторов (ионизирующее излучение, острая кровопотеря) оказывает стимулирующее действие на пролиферативную активность быстрообновляющихся тканей (эпителий тощей кишки, миелоидная ткань).

2. У старых лабораторных животных сохраняется способность к активации регенерации быстрообновляющихся тканей при трансплантации ММСК, как в физиологических условиях, так и в условиях воздействия экстремальных факторов.

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

1. 63-й Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и студентов «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения» на секции «Медико-биологические дисциплины» среди молодых ученых г. Екатеринбург, 2008 г.

2. 64-й Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения» среди молодых ученых на секции «Медико-биологические науки» г. Екатеринбург, 2009 г.

3. IV съезд физиологов Урала (с международным участием), г. Екатеринбург, 2009 г.

4. Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Вопросы патогенеза типовых патологических процессов» г. Новосибирск, 2009 г.

Практическое внедрение результатов исследования

Результаты исследований внедрены в учебный процесс на кафедрах патологической физиологии и биохимии в разделы: экстремальные воздействия, геронтология.

Разработанная методика по выделению и культивированию ММСК внедрена в работу лаборатории геронтологии ГУЗ СО института медицинских клеточных технологий.

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Маклакова, Ирина Юрьевна

выводы

1. В условиях возрастной инволюции отмечены более низкие показатели пролиферативной активности быстрообновляющихся тканей, как в физиологических условиях, так и при воздействии экстремальных факторов — ионизирующего излучения и острой кровопотери.

2. Трансплантация ММСК зрелым лабораторным животным в физиологических условиях оказывает стимулирующее действие на эритропоэз, а у старых животных происходит снижение количества цитогенетически измененных клеток и стимуляция эритропоэза.

3. Внутривенное введение ММСК зрелым лабораторным животным в условиях ионизирующего излучения и острой кровопотери оказывает стимулирующее действие на эритропоэз, гранулоцитопоэз, снижает индуцированный мутагенез, у старых животных происходит активация эритропоэза, снижение индуцированного мутагенеза.

4. В физиологических условиях и в условиях воздействия ИИ трансплантированные ММСК вызывают увеличение содержания криптального эпителия тощей кишки зрелых и старых лабораторных животных. У зрелых лабораторных животных это происходит за счет повышения пролиферативной активности, в то время как у старых - за счет ингибирования апоптоза.

5. Старые лабораторные животные сохраняют способность при воздействии ММСК к активации регенерации быстрообновляющихся тканей, как в физиологических, так и в условиях воздействия экстремальных факторов.

ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние годы наметился существенный интерес к такому направлению медицины, как клеточная терапия. Основой для развития клеточной терапии являются стволовые клетки, способные в зависимости от микроокружения превращаться в клетки разных органов и тканей. Одна такая клетка может дать множество функционально активных потомков [25, 68, 93, 156, 193, 198]. В настоящее время в мире активно разрабатываются подходы к культивированию стволовых клеток, а также интенсивно исследуются возможности их генетической модификации. Список болезней, при лечении которых клеточные технологии уже используются или их применение планируется в ближайшем будущем, быстро растет. В этот список, по-видимому, войдут все болезни, практикуемое медикаментозное лечение которых малоэффективно [9, 30, 38, 71, 151, 199, 209]. Одним из типов стволовых клеток являются мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки, открытые еще в 70 - х годах прошлого века, но только сейчас их начали использовать в экспериментальной медицине и клинике. Классическим источником ММСК является костный мозг, но, наряду с ним, ММСК могут быть выделены и из других тканей: пуповинной крови, жировой ткани, тканей эмбриона, слизистой оболочки носоглотки, плаценты, плацентарной и пуповинной крови новорожденных [135, 141, 142, 143, 184, 188, 189, 194]. Причем, клетки, полученные из разных источников, не отличаются ни по основным морфологическим признакам, ни по способности дифференцироваться в остеоциты, хондроциты, адипоциты и другие типы клеток соединительной ткани при воздействии соответствующих биологических агентов [39, 128, 133, 164, 202]. Фетальные органы являются наиболее богатыми источниками ММСК. Однако актуальным остается вопрос эффективного получения клеток с характеристиками ММСК из доступных источников, не связанных с этическими или иными ограничениями. В этом отношении особое внимание привлекает плацента. Плацента, которая является органом, происходящим из тканей, как матери, так и плода, может быть получена неоперативным путем без высокого риска инвазивности. При этом удается получить из плаценты на порядок больше клеток, чем из других источников [135, 143, 188, 189]. После родов плаценту можно сохранять в лаборатории и получать клетки даже спустя несколько дней. Выделение ММСК из послеродовых тканей позволит создавать более «богатые» персональные фамильные клеточные банки. Получение ММСК из плаценты может стать новой уникальной услугой криобанков пуповинной крови. ММСК плаценты могут явиться серьезной альтернативой аналогичным клеткам, выделенным из костного мозга взрослых и пуповинной крови. Поэтому в данном исследовании использовалось выделение ММСК из плаценты.

В экспериментах по совместному культивированию разных клеток показано, что ММСК не подвергаются аллогенному отторжению, как у людей, так и у экспериментальных животных [57, 123, 131, 187]. В основе этого эффекта лежат три основных механизма. Во-первых, ММСК не содержат антигена гистосовместимости. Во-вторых, эти клетки предотвращают Т-клеточный ответ непрямым путем через модуляцию дендритных клеток и непосредственно, нарушая функцию и пролиферацию №С-клеток, а также СР8+ и СБ4+ Т-лимфоцитов. В-третьих, ММСК индуцируют супрессивное местное микроокружение путем продукции простагландинов и интерлейкина-10, который ингибирует продукцию у-интерферона Т-лимфоцитами и продукцию всех провоспалительных цитокинов макрофагами [38, 63, 112, 187]. А также путем экспрессии индоламин 2,3,-диоксигеназы, которая исчерпывает местный уровень триптофана. Все эти данные расширяют возможности клинического применения ММСК. Также известно, что ММСК секретируют растворимые факторы (цитокины), которые создают иммуносупрессивную среду. Это дает возможность широкого применения ММСК в практической медицине [57, 113, 123, 131, 165].

Особое внимание привлекает возможность использования ММСК для коррекции нарушений в системах и органах в процессе старения. Если старение - разрушительный процесс, то есть и возможность затормозить этот процесс. Защитить организм от воздействия повреждений и повреждающих факторов маловероятно, поскольку длительное функционирование органа или ткани - процесс ее неизбежного износа и последующего повреждения. Восстановить формирующиеся в процессе жизни повреждения для клетки и ткани — это значит воздействовать на регенерацию. Процесс регенерации в значительной мере обеспечивается участием стволовых клеток, способных к пролиферации и дифференцировке в направлении поврежденных или разрушенных клеток и тканей. Между тем, известно, что в процессе онтогенеза количество стволовых клеток неуклонно уменьшается. Кроме того, с возрастом формируется блок G1/S, что снижает функциональные возможности клеток, ингибирует их пролиферацию и дифференцировку клеток, в том числе и стволовых [10, 26, 59, ]. Учитывая непосредственную связь стволовых клеток с регенерацией, нарушение которой является важнейшей причиной старения, можно считать, что снижение с возрастом количества стволовых клеток и нарушение их участия в поддержании оптимальной регенерации может оказаться важнейшим механизмом старения организма.

Все это делает перспективным использование трансплантации стволовых клеток для ингибирования старческих нарушений в органах и тканях. Можно полагать, что при использовании стволовых клеток для коррекции процессов старения в организме происходит повышение синтеза факторов роста, необходимых для поддержки дифференциации и пролиферации клеток, приводящее к восстановлению нарушенных при старении функций органов и систем. На данный момент в отечественной и зарубежной литературе делаются лишь теоретические предположения о возможном применении ММСК с целью коррекции процессов старения, тогда как экспериментальные доказательства отсутствуют [103, 190].

В проведенном нами исследовании изучалось действие ММСК на процессы клеточной регенерации на лабораторных животных разного возраста (зрелого и старого) в физиологических условиях, а также в условиях воздействия экстремальных факторов.

Экстремальные условия моделировали воздействием на организм ионизирующего излучения и острой кровопотери, поскольку в этих условиях для восстановления гемопоэза требуется высокая активность регенерации в быстрообновляющихся тканей [29, 50, 80]. Также следует отметить, что возникающие в организме изменения после воздействия ионизирующего излучения сходны с изменениями, развивающимися при старении организма [53, 69, 130].

Состояние миелоидной ткани оценивали на основании анализа миелограммы. Рассчитывали клеточность эритроидного и гранулоцитарного ростков кроветворения, а также митотический индекс соответствующих дифферонов. В миелоидной ткани производилась оценка мутагенной активности посредством определения микроядерного теста, что позволяет оценить уровень цитогенетически измененных клеток.

Для оценки регенерации эпителия тощей кишки производилось определение митотического, апоптотического индексов, а также средней клеточности крипты [34, 51].

Состояние регенерации исследуемых тканей оценивалось в физиологических условиях у зрелых и старых лабораторных животных, а также при воздействии ионизирующего излучения и острой кровопотери. Кроме того, изучалась возможность воздействовать на процессы регенерации после трансплантации ММСК дозе 6 млн кл/кг массы тела животного в физиологических условиях и через 1 час после воздействия экстремального фактора.

Анализируя показатели миелограммы зрелых и старых лабораторных животных в физиологических условиях, отмечено сниженное содержание клеток пролиферативного пула гранулоцитарного дифферона -промиелоцитов и повышенное содержание клеток созревающего пула -метамиелоцитов у старых животных по сравнению со зрелыми. При анализе эритроидного дифферона также отмечено сниженное содержание клеток пролиферативного пула - базофильных нормобластов у старых животных по сравнению со зрелыми лабораторными животными.

Также можно заметить, что у зрелых и старых лабораторных животных меняется соотношение пролиферирующих и созревающих клеток. У старых животных преобладают созревающие клетки костного мозга, тогда как у зрелых - пролиферирующие. Это можно объяснить увеличением продолжительности митотического цикла старых лабораторных животных по сравнению со зрелыми животными [96, 98].

Изменения в структуре пролиферативного пула миелоидных клеток старых лабораторных животных могут быть связаны с состоянием митотической активности клеток этой ткани. Так митотический индекс эритроидного дифферона у старых животных почти на 49 % ниже, чем у зрелых, а гранулоцитарного дифферона на 39 % ниже аналогичного показателя зрелых животных.

При анализе показателей мутагенной активности гемопоэтических клеток костного мозга, отмечен более высокий уровень цитогенетически измененных клеток (в 2,7 раза) у старых лабораторных животных по сравнению со зрелыми животными, что может быть следствием увеличения с возрастом количества патологических митозов.

В периферической крови отмечено снижение содержания ретикулоцитов и гранулоцитов у старых лабораторных животных относительно зрелых.

Таким образом, в физиологических условиях у старых лабораторных животных отмечено снижение пролиферативной активности клеток костного мозга и повышение уровня цитогенетически измененных клеток по сравнению со зрелыми животными.

Митотический индекс эпителиоцитов тощей кишки старых лабораторных животных на 37,7 % ниже показателя зрелых, апоптотический индекс на 20,2 % выше, а средняя клеточность одной крипты на 26,6 % ниже относительно зрелых, что свидетельствует о снижении пролиферативной активности эпителия тощей кишки у старых животных.

Трансплантация ММСК зрелым и старым лабораторным животным в физиологических условиях оказывает стимулирующее действие на процессы регенерации миелоидной ткани и эпителия тощей кишки. Так, на 7 сутки после введения ММСК у зрелых лабораторных животных выявлено повышение содержания эритроидных элементов на 37 % (40,3 ± 6,47, р < 0,05), у старых - на 35,6 %. И у зрелых, и у старых лабораторных животных отмечено снижение гранулоцитарно-эритробластического соотношения, что говорит о преимущественной стимуляции в физиологических условиях эритроидного ростка при трансплантации ММСК.

В периферической крови на 7 сутки после введения ММСК в физиологических условиях отмечено увеличение числа эритроцитов как у зрелых (на 35,5 %), так и у старых лабораторных животных (на 27 %). У старых лабораторных животных отмечено снижение уровня цитогенетически измененных клеток на 41 %, что можно объяснить снижением в этих условиях уровня патологических митозов.

При введении ММСК повысилась средняя клеточность одной крипты у зрелых и старых лабораторных животных (зрелые: 91,60 ± 3,03, р < 0,05; старые: 70,52 ± 2,18, р < 0,05).

На 7 сутки после воздействия ИИ в контрольной подгруппе зрелых и старых лабораторных животных в миелоидной ткани сохранялось снижение всех изучаемых показателей в клетках эритроидного и гранулоцитарного дифферонов. При этом у зрелых лабораторных животных содержание лимфоцитов достигло значений нормы, тогда как у старых животных восстановления содержания лимфоцитов не произошло (3,88 ± 0,92, р < 0,05).

Установлено также, что содержание цитогенетически измененных клеток в исследуемый период было выше значений СУМ (на 64,4 % выше СУМ у зрелых и на 37,8 % у старых животных).

Количество митотически делящихся клеток тощей кишки и средняя клеточность крипты на 7 сутки после воздействия ИИ достигли исходной величины, в то время как содержание клеток в состоянии апоптоза оставалось существенно выше значений нормы (на 36,2 % у зрелых животных и на 19,2 % у старых).

Трансплантация ММСК к 7 суткам после воздействия ИИ оказывала стимулирующее действие на эритропоэз, на гранулоцитопоэз и пролиферативную активность клеток кишечника зрелых и старых лабораторных животных относительно соответствующих показателей контрольных подгрупп. Так, у зрелых лабораторных животных отмечено повышение содержания эритроидных и гранулоцитарных элементов (эр.эл.: 14,67 ± 2,79, р < 0,05; гр.эл.: 48,42 ± 2,38, р < 0,05), у старых животных увеличилось содержание всех эритроидных элементов (24,23 ± 1,58, р < 0,05). Отмечено существенное увеличение средней клеточности одной крипты у зрелых и старых животных. У зрелых лабораторных животных это произошло за счет повышения митотической активности эпителиоцитов на 26,2 % и угнетения апоптоза на 28 %, у старых - за счет ингибирования запрограммированной клеточной гибели.

Цитопротективное действие ММСК также обнаруживалось в изменении показателей миелоидной ткани - уровень цитогенетически измененных клеток на 7 сутки после воздействия ИИ на фоне введения ММСК снизился на 47,8 % у зрелых и на 19,7 % у старых лабораторных животных.

Выявленный в данном исследовании цитопротективный эффект можно объяснить способностью ММСК синтезировать различные колониестимулирующие факторы (ГМ-КСФ, Г-КСФ). Возможно, это не единственный механизм участия ММСК в восстановлении гемопоэза. ММСК также синтезируют многочисленные ангиогенные факторы (ангиопоэтин 1, platelet-derived growth factor), могут вырабатывать цитокин EDDF-la (hypoxia-inducible factor 1 alpha), который оказывает цитопротективное действие и ингибирует апоптоз.

Можно также полагать, что в условиях экстремального повреждения ММСК значительно увеличивают продукцию белков теплового шока (БТШ) (HSP 70), уровень которых при этом многократно увеличивается.

Состояние регенерации кроветворной ткани зрелых и старых лабораторных животных исследовалось также в условиях острой кровопотери и трансплантации ММСК.

Острую кровопотерю вызывали кровопусканием из хвостовой вены крысы в объеме 2 % от массы тела, что составляет 25 - 35 % от общего объема циркулирующей крови. Производилась оценка показателей миелограммы, периферической крови, мутагенной активности гемопоэтических клеток костного мозга на 5 сутки после острой кровопотери и введения ММСК.

На 5 сутки после острой кровопотери отмечена выраженная активация эритропоэза у зрелых и, в меньшей степени, у старых лабораторных животных. Так, увеличилось общее содержание эритроидных элементов костного мозга у зрелых животных на 30,4 %. Кроме того, на 5 сутки после острой кровопотери выявлено увеличение митотического индекса эритроидного дифферона на 40,5 % у зрелых и на 48,7 % у старых лабораторных животных, повысилось содержание цитогенетически измененных клеток у зрелых животных на 57,8 %.

На фоне проведенной трансплантации ММСК на 5 сутки после острой кровопотери отмечается выраженный регенераторный ответ со стороны эритропоэза. Так, при подсчете миелограммы зрелых и старых лабораторных животных выявлено повышение активности эритроидного дифферона по сравнению с контрольными подгруппами. Отмечено увеличение общего содержания эритроидных элементов на 27,6 % у зрелых и на 27,4 % у старых лабораторных животных. Показатель ГЭС был существенно ниже аналогичного показателя в контрольной группе, что свидетельствует о преобладающей стимуляции эритропоэза над стимуляцией гранулоцитопоэза у зрелых и старых лабораторных животных после острой кровопотери на фоне трансплантации ММСК.

В гранулоцитарном ростке костного мозга зрелых лабораторных животных, отмечено повышение содержания миелобластов (1,93 ± 0,27 %, р < 0,05), промиелоцитов (2,57 ± 0,33 %, р < 0,05) и миелоцитов (11,08 ± 0,33 %, р < 0,05) относительно контрольной группы. Установлено также повышение митотической активности элементов гранулоцитарного ростка (МИ Гр.эл.: 4,00 ± 0,33 %о, р < 0,05). Эти изменения сопровождались увеличением общего содержания гранулоцитарных элементов в миелоидной ткани зрелых животных, в то время как у старых лабораторных животных активность гранулоцитарного дифферона существенно не изменяется.

После введения ММСК как у зрелых, так и у старых лабораторных животных уровень цитогенетически измененных клеток снижался.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о более низком уровне пролиферативной активности клеток костного мозга и регенераторной активности эпителия тощей кишки в физиологических условиях и в условиях экстремального повреждения у старых лабораторных животных.

Установлено также, что внутривенная трансплантация суспензии ММСК в физиологических условиях у зрелых и старых лабораторных животных приводит к стимуляции эритропоэза (рисунок 1), увеличению скорости клеточного обновления криптального эпителия тощей кишки (рисунок 2). Обнаружена способность ММСК снижать мутагенную активность миелоидной ткани старых лабораторных животных в физиологических условиях и ингибировать апоптоз.

Содержание эритроидных элементов зрелых и старых лабораторных животных

50 45 40 35 30 % 25 20 15 10 5 0 зрелые старые

Рисунок 2

Средняя клеточность крипты зрелых и старых лабораторных животных

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

В условиях экстремального повреждения трансплантация ММСК зрелым и старым лабораторным животным оказывает активирующее влияние на эритропоэз (рисунок 3), гранулоцитопоэз, регенераторную активность эпителиоцитов тощей кишки (рисунок 4), снижает индуцированный мутагенез, оказывает антиапоптогенное действие на эпителиоциты кишечника. зрелые старые

Некоторые показатели миелограммы зрелых и старых лабораторных животных на 7 сутки после воздействия ИИ а МаС1 ■ ммск

Рисунок 4

Средняя клеточность крипты зрелых и старых лабораторных животных на 7 сутки после воздействия ИИ

100 зрелые старые

Результаты полученных экспериментальных исследований позволяют заключить, что старые лабораторные животные сохраняют способность при воздействии ММСК к усилению регенерации в быстрообновляющихся тканях, как в физиологических, так и в условиях воздействия экстремальных факторов.

Результаты собственных исследований и анализ литературных данных позволил предложить схему, демонстрирующую возможности использования ММСК для активации регенерации быстрообновляющихся тканей в физиологических и экстремальных условиях у зрелых и старых лабораторных животных.

Влияние трансплантации ММСК на регенерацию быстрообновляющихся тканей зрелых и старых лабораторных животных в физиологических условиях и при воздействии экстремальных факторов

Физ усл. | эритропоэз митотический индекс | средняя клеточность крипты

ИИ |эритропоэз гранулоцитопоэз 4 МЯТ митотический индекс | средняя клеточность крипты 4 апоптотический индекс

Кровопотеря | эритропоэз | гранулоцитопоэз 4 МЯТ стары© эритропоэз Физ.

4 мят усл.

4 апоптотический индекс средняя клеточность крипты эритропоэз 4 МЯТ

ИИ средняя клеточность крипты 4 апоптотический индекс эритропоэз 4 МЯТ Кровопотеря

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Маклакова, Ирина Юрьевна, 2010 год

1. Абросимов А.Ю. Радиационные повреждения и гибель клеток опухолей / А.Ю. Абросимов, В.М. Загребин, Е.Ф. Лушников // Мед. Радиол. 1992. - Т. 37, № 11.-С. 35-37.

2. Актуальные проблемы патофизиологии (избранные лекции) / под ред. Б.Б. Мороза. М.: Медицина, 2001. - 424с.

3. Александров А.Н. Влияние тяжелой политравмы на миграцию стволовых кроветворных клеток у мышей / Александров А.Н., Сергеев B.C. // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2006. - Vol. 2(4). Р. 59-62.

4. Афанасьев Ю.И. Гистология / Ю.И. Афанасьев, H.A. Юрина, В.Ф. Котовский; под ред. Ю.И. Афанасьева, H.A. Юриной. М.: Медицина, 2001. -744с.

5. Ахаладзе Н.Г. Биологический возраст: история развития проблемы / Н.Г. Ахаладзе // Пробл. Старения и долголетия. 2002. - Т. 11. - № 4. - С. 455464.

6. Беленков Ю.Н. Мобилизация стволовых клеток костного мозга в лечении больных с сердечной недостаточностью / Беленков Ю.Н., Агеев Ф.Т., Мареев В.Г. // Кардиология. 2003. - № 3 - С. 7-12.

7. Биология старения. Серия "Руководство по физиологии". Академия наук СССР. Л.: Наука. 1982.

8. Берсенев A.B. Трансплантация клеток пуповинной крови в область повреждения спинного мозга анализ первого клинического наблюдения / A.B. Берсенев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2006. -№1 (3). - С. 30-31.

9. Берсенев A.B. Выделение и характеристика нейральных стволовых клеток из обонятельной области слизистой оболочки носа млекопитающих / A.B. Берсенев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2006. -№1 - С. 33-34.

10. Берсенев A.B. Клеточная трансплантология — история, современное состояние и перспективы / A.B. Берсенев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2005. - №1. - С. 49-56.

11. Берсенев A.B. Изучение спонтанной онкогенетической трансформации мезенхимальных стволовых клеток человека в культуре / A.B. Берсенев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. — 2005. №1. - С. 14-16.

12. Берсенев A.B. Прогенераторные клетки костного мозга участвуют в метастазировании опухолей / A.B. Берсенев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. -2006. №1. - С. 17-18.

13. Бочков Н.П. Роль молекулярно-генетической диагностики в прогнозировании и профилактике возрастной патологии / Н.П. Бочков, Д.В. Соловьева, Д.Л. Стрекалов // Клин. мед. 2002. - № 2. - С.4 - 9.

14. Брюховецкий A.C. Клинико — патогенетическое обоснование применения фетальных тканей человека при заболеваниях нервной системы / Брюховецкий A.C., Ушаков С.О. // Сб. ст. Трансплантация фетальных тканей человека. М. - 1996. - С. 57-59.

15. Бутенко Г.М. Старение иммунной системы / Бутенко Г.М. // Проблемы старения и долголетия. — 2002. Т. 7. - № 3. - С. 251-258.

16. Викторов И.В. Стволовые клетки мозга млекопитающих: биология стволовых клеток in vivo и in vitro / И.В. Викторов // Известия АН. Серия Биологическая. -2001. № 6. - С. 646-655.

17. Владимирская Е.Б. Биологические основы и перспективы терапии стволовыми клетками / Владимирская Е.Б., Майорова O.A., Румянцев С.А. // М.: ИД Медпрактика-М. 2005. - С. 75.

18. Волчков С.Е. Оценка мезенхимально-стромальных клеток из различных источников / С.Е. Волчков, О.В. Тюмина, А.Н.Тороповский // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. — 2009. Том IV, № 3. С. 8-9.

19. Габбазов З.А. Стромальные стволовые клетки взрослого организма -резерв восстановительной хирургии / З.А. Габбазов, Э.Л. Соболева // Клиническая геронтология. — 2003. Т. 9. - № 5. — С. 20-24.

20. Гаврилов JI.A. Биология продолжительности жизни / Л.А. Гаврилов, Гаврилова Н.С. //. М., Наука. - 1991.

21. Гаркави Л.Х. Адаптационные реакции и резистентность организма / Л.Х. Гаркави, Квакина Е.Б., Уколова М.А. // Ростов н/Д, из-во РГУ. 1990.

22. Генкин Д.Д. Перспективы клинического применения препаратов на основе аллогенных стволовых клеток / Д.Д. Генкин, М.Ю. Васильев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2009. - Том IV, № 3. -С. 9-10.

23. Горизонтов П.Д. Стресс и система крови / П.Д. Горизонтов, О.Н. Белоусова, М.И. Федотова // М., 1983

24. Горностаев B.C. Использование культуры мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани для пластики дефектов суставного хряща / Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. — 2009. Том IV, № 3. С. 9-10.

25. Гольдберг Е.Д. Принципы создания лекарственных препаратов -стимуляторов кроветворения природного происхождения / Е.Д. Гольдберг, A.M. Дыгай, В.И. Агафонов // Эксперим. и клин, фармакол. 1995. - Т. 58, № 1.-С.З-7.

26. Гольдберг Е.Д. Гипоксия и система крови / Е.Д. Гольдберг, А.М. Дыгай, Г.Н. Зюзьков // Томск, 2006.

27. Григорян "A.C. Трансплантация мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток для лечения реакции «трансплантат против хозяина» / A.C. Григорян // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2006. - №3. -С. 31-32.

28. Григорян A.C. Зависимость пролиферации мультипотентных мезенхималыных стромальных клеток от характеристик доноров / A.C. Григорян, П.В. Кругляков, Ю.А. Таминкина // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. — 2009. №2. - С. 31-32.

29. Губин Г.Д. Старение в свете временной организации биологических систем / Г.Д. Губин, Д.Г. Губин, П.И. Комаров // Успехи геронтол. 1998. -№ 2. - С.67-73.

30. Гусев В.А. Свободнорадикальная теория старения в парадигме геронтологии / В.А. Гусев // Успехи геронтологии. 2000. - Вып. 4. -С. 271272.

31. Данилов P.K. Руководство по гистологии В 2Т / Данилов Р.К. // Т.П. СПб.: СпецЛит, 2001. - 733с.

32. Деев Р.В. Роль стволовых стромальных (мезенхимальных) стволовых клеток в формировании гетеротопических оссификатов / Р.В. Деев, A.B. Берсенев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2005. - №1. - С. 46-48.

33. Деев Р.В. Научное наследие Александра Максимова и современность / Р.В. Деев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия.-2005.- №1.-С.4-8.

34. Донцов В.И. Фундаментальные механизмы старения: возможности для оценки «истинного возраста» человека и влияний на него / В.И. Донцов // Профилактика старения. 2000. - Выпуск 3.

35. Донцов В.И. Системный подход к анализу процесса старения / В.И. Донцов // Физиология человека. 1998. - Т.24. № 1. - С. 82-87.

36. Донцов В.И. Старение: механизмы и пути преодоления / В.И. Донцов, Крутько В.Н., Подколзин A.A. // М.: Биоинформсервис. 1997.

37. Дыгай A.M. К природе и биологической роли лимфоцитоза, развивающегося в кроветворной ткани костного мозга при его локальном облучении / A.M. Дыгай, Е.Д. Гольдберг, Е.В. Мелик Гайказян // Радиобиология. -1981. - Т. 21. № 6. - С. 873 - 878.

38. Захаров Ю.М. Эритробластический островок / Ю.М. Захаров, А.Г. Рассохин // М.: Медицина. 2002. - 280 с.

39. Зенков Н.К. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин Меньшикова Е.Б. // М.: МАИК «Наука/Интерпериодика». 2001. 343 с.

40. Иванов A.A. Роль методов клеточной и молекулярной биологии в патологии / A.A. Иванов, М.А. Пальцев // Архив патологии. 1998. - № 3. - С. 3-5.

41. Кауламбаева М.З. Определение оптимальных условий выделения стволовых клеток пуповинной крови для культивирования in vitro / М.З.

42. Кауламбаева // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2009. -Том IV, №3. С. 13-14.

43. Квачева Ю.Е. Апоптотическая гибель клеток костного мозга в восстановительном периоде острой лучевой болезни и ее роль в патогенезе гематологического синдрома / Ю.Е. Квачева // Мед. радиол, и радиац. безопасность. 2002. - Т. 47, № 5. - С. 17 - 22.

44. Концепция клеточной терапии аутоиммунных заболеваний / Ю.Л. Шевченко, С.А. Бойцов, A.A. Новик, К.В. Лядов // Российские медицинские вести. 2004. - Т.9, № 2. - С. 6-11.

45. Кишкун A.A. Биологический возраст и старение: возможности определения и пути коррекции: руководство для врачей / A.A. Кишкун // М., 2008. 976 с.

46. Королькова Т.Н. Современные теории старения // Вестн. дерматол. венерол. 2001. - № 5. - С. 15-22.

47. Корочкин Л.И. Стволовые клетки как генетическая проблема / Л.И. Корочкин // Вестник ВОГиС. 2004. - Том 8. - № 2. - С. 73-80.

48. Кругляков П.В. Мезенхимальные стволовые клетки и иммунопатологические состояния организма / П.В. Кругляков, Е.А. Лохматова, В.Б. Климович // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2005. - №3 (5). - С. 36-41.

49. Крупицкая Л.И. Формирование анемии у животных, перенесших острую гипоксию / Л.И. Крупицкая // Гематол. и трансфузиол. 1998. - Т. 33, № 12. -С. 39-41.

50. Крутько В.Н. Проблемы старения с позиций системного подхода, Системные исследования / В.Н. Крутько, Донцов В.И. // Российская академия наук. Институт системного анализа РАН. М.:1996. С.329-348.

51. Кухарчук А.Л. Регенеративная медицина: Направления, достижения, проблемы и перспективы развития. Часть II: Стволовые пространства / А.Л. Кухарчук, В.В. Радченко, В.М. Сирман // Украшский медичний часопис. -2004. №3 (41) - V-VI. - С. 99-107.

52. Лапин А. Лабораторная диагностика в гериатрии / А. Лапин // Лаб. медицина. 2003. № 6. - С. 14 - 20.

53. Лищук В.А., Стволовые клетки исследования и практика / В.А. Лищук, Мосткова Е.В. // Валеология. - 2003. - N2. - С. 11.

54. Мазурик В.К. Молекулярные механизмы главных радиобиологических последствий эффекта ионизирующей радиации на млекопитающих / В.К. Мазурик, В.Ф. Михайлов // Радиационная биология. Радиоэкология. 1999. -Т.4, №1. - С. 89-96.

55. Малайцев В.В. Современные представления о биологии стволовой клетки /В.В. Малайцев, И.М. Богданова, Г.Т. Сухих // Архив патологии. -2002.-Т. 4.-С. 7-11.

56. Маянский H.A. Каспазозависимый механизм апоптоза нейтрофилов: апоптогенный эффект туморонекротического фактора а / H.A. Маянский // Иммунология. 2002. - Т.23, №1. - С. 15-18.

57. Мелихова B.C. Клеточные популяции, выделяемые из пуповинно-плацентарного комплекса и перспективы их научно-практического использования / B.C. Мелихова, A.A. Исаев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. — 2007. — Том II, № 4. С 31-38.

58. Материалы межрегиональной конференции биохимиков Урала, Западной Сибири и Поволжья. — Оренбург. — 2003. С. 15-28.

59. Мусина P.A. Сравнительная характеристика мезенхимальных стволовых клеток, полученных из разных тканей человека / P.A. Мусина, Е.С. Бекчанова, Г.Т. Сухих // Клеточные технологии в биологии и медицине. -2005. №2. - С. 89-94.

60. Муханкин А.И. Причина старения / А.И. Муханкин // Сборник «Лекции по актуальным вопросам медицины», РГМУ, Москва. 2002. - С. 124-131.

61. Новик A.A. Клеточная терапия / A.A. Новик, P.A. Иванов // М.: ООО «Медицинское информационное агентство». 2008. - 240 с.

62. Новик A.A. Принципы трансплантации костного мозга и стволовых клеток периферической крови / А.А.Новик, А.Н. Богданов. СПб.: Военно-медицинская академия. - 2001. - 168 с.

63. Новиков В.В. Стресс: современный патофизиологический подход к лечению /В.В. Новиков // Харьков: Консум. 2002. — 240 с.

64. Оловников A.M. Редусомная теория старения и контроля > биологического времени в индивидуальном развитии / A.M. Оловников // Биохимия.-2003.-Т. 68.-Вып. 1.-С. 7-41.

65. Оловников A.M. Старение как универсальная хроническая "болезньIколичественных признаков": клеточное старение и РНК-зависимая ионная модуляция продуктивности генов / A.M. Оловников // Медлайн РУ. -2003. -Т. 4.-С. 31.

66. Осипенко A.B. Иммунный контроль иммуномодуляции регенерации тканей // A.B. Осипенко, В.В. Базарный, В.А. Сырнев // Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы. М., 1996. С. 155.

67. Осипенко A.B. Иммунобиологические механизмы регенерации тканей Текст. / A.B. Осипенко, В.А. Черешнев СПб.: УрО РАН, 1997. - 130с.

68. Пальцев М.А. // Введение в молекулярную медицину. М.: «Медицина», 2004. 496 с.

69. Пальцев М.А. Морфология повреждения. Лекции по общей патологической анатомии / М.А. Пальцев; под ред. В.В. Серова, М.А. Пальцева. М.: Медицина, 1996. - 20 с.

70. Патент на изобретение, №2004110701/13. Способ выделения мезенхимальных стволовых клеток / Тепляшин A.C.; дата подачи заявки 2004.04.09, дата публикации: 2005.05.20.

71. Подколзин A.A. Количественная оценка показателей смертности, старения, продолжительности жизни и биологического возраста: Учебн.-метод. пособие для врачей / A.A. Подколзин, В.Н. Крутько, В.И. Донцов // М.: МГМСУ. -2001.-55 с.

72. Потапенко А.И. На пути поиска программы и инициального субстрата старения / А.П. Потапенко, Акифьев А.П. // Медлайн РУ. 2003. - Т. 4. - С. 103-107.

73. Пушкарев В.П. Об изменении эритропоэза в эритробластических островках костного мозга крыс после однократной кровопотери / В.П. Пушкарев, Ю.М. Захаров, А.Г. Рассохин // Физиол. Журнал им. И.М. Сеченова. 1991. - Т. 77, № 4. - С. 16-23.

74. Рабинович С.С. Клеточная терапия в системе реанимации больных с тяжелой черепно-мозговой травмой / С.С. Рабинович, В.И. Селедцов, C.B. Астраков // Вестник интенсивной терапии. 2004. - № 4. - С. 24-27.

75. Репин B.C. Эмбриональные стволовые клетки: фундаментальная биология и медицина / B.C. Репин, A.A. Ржанинова, Д.А. Шаменков // М., «Реметэкс». — 2002. -175 с.

76. Румянцев А.Г. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток у детей / А.Г. Румянцев, A.A. Масчан // Москва. «МИА». 2003. - 910 с.

77. Сазонов C.B. Особенности состояния пролиферативных процессов в условиях возрастной инволюции организма: диссертация на соискание ученой степени доктора мед. наук. Сазонов Сергей Владимирович. 1999. -372.

78. Сазонов C.B. Особенности регенераторных процессов в органах с низкой скоростью клеточного обновления при старении организма / C.B. Сазонов,

79. A.П. Ястребов // Цитология. 1997. - Т. 39. - № 6. - С. 508-509.

80. Северин М.В. Регенерация тканей при экстремальных воздействиях на организм / М.В. Северин, Б.Г. Юшков, А.П. Ястребов; Екатеринбург: Изд-во УрГМИ, 1993.

81. Селедцов В.И. Иммунологические и клинические аспекты применения клеточной терапии в лечении последствий черепно-мозговой травмы / В.И. Селепцов, С.С. Рабинович, Э.А. Кащенко // Клеточные технологии в биологии и медицине. 2006. №1. - С. 12-14.

82. Семенов В.Н. Апоптоз и его роль в патогенезе критических состояний /

83. B.H. Семенов, И.Н. Пасечник // Вестн. интенсив, тер. 2004. - №1. - С. 3-7.

84. Симбирцев, A.C. Цитокины: классификация и биологические функции / A.C. Симбирцев // Цитокины и воспаление. 2004.-Т. 3, № 2.-С. 16-22.

85. Соколова И.Б. Коррекция ориентировочно-исследовательского дефицита у крыс с помощью мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток / И.Б. Соколова, O.P. Федотова, Е.Г. Гилерович //

86. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2009. - Том IV. № 4. -С. 28-32.

87. Уманский С.Р. Генетическая программа клеточной гибели: гипотеза и некоторые приложения (трансформация, канцерогенез, старение) / С.Р. Уманский // Успехи совр. биол. 1999. - Т. 93. № 1. - С. 139 - 148. .

88. Федоров В.А. Клеточные технологии в современной медицине / В.А. Федоров // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2009. -Том IV, №3. С. 15-17.

89. Халявкин A.B. Взаимодействие "организм-среда" и причины старения / А.В Халявкин. // Успехи геронтологии. 1998. - Вып. 2. - С. 43-48.

90. Халявкин A.B. Средовая и генетическая модификация картины старения. Границы пластичности / A.B. Халявкин, Яшин А.И. // Пробл. старения и долголетия. 2003. - Т. 12. - № 4. - С. 417-425.

91. Шахов В.П. Представление о системе мезенхимопоэза и мезенхимальных стволовых клетках / В.П. Шахов, Я.В. Латюшин // Вестник ЧГПУ. 2008. - № 8. - С. 267-284.

92. Шевченко Ю.Л. Клеточные технологии в кардиологии / Ю.Л. Шевченко // Вестник Российской Академии медицинских наук. 2003. - № 11.-С. 6-10.

93. Шевченко Ю.Л. Концепция клеточной терапии аутоиммунных заболеваний Ю.Л. Шевченко, A.A. Новик, Б.В. Афанасев // Российские медицинские вести. 2004. - Т. 46, № 10. - С. 949.

94. Шевченко Ю.Л. Концепция высокодозной терапии с трансплантацией стволовых клеток при аутоиммунных заболеваниях нервной системы Ю.Л. Шевченко, A.A. Новик, К.В. Лядов // Неврологический журнал. 2004. - № 3. с. 44-47.

95. Шубич М.Г. На пути к открытию стволовых клеток костного мозга / М.Г. Шубич//Морфология. 2001. Т 119, № 1.- С 94-95.

96. Шумаков В.И. Костный мозг как источник получения мезенхимальных клеток для восстановительной терапии поврежденных органов / В.И. Шумаков, H.A. Онищенко, М.Е. Крашенинников // Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2002. - № 4. - С. 7-11.

97. Ярмоненко С.П. Радиобиология человека и животных / С.П. Ярмоненко, A.A. Вайнсон; под ред. С.П. Ярмоненко. М.: Высш. шк. - 2004. - 549с.

98. Ярыгин Н.Е. Значение программированной гибели эндотелия в построении внутриорганного кровеносного русла в эмбриогенезе человека / Н.Е. Ярыгин, A.B. Кораблев // Арх. пат.- 1995. Т. 57, вып. 6. - С. 39 - 44.

99. Ястребов А.П. Старение, перекисное окисление липидов и биовозраст / А.П. Ястребов, В.Н. Мещанинов. Екатеринбург: Издательство ООО «Уральский следопыт», 2005. - 220с.

100. Ястребов А.П. Регуляция гемопоэза при воздействии на организм экстремальных факторов / А.П. Ястребов, Б.Г. Юшков, В.Н. Большаков; под ред. О.А. Пястолова. — Свердловск: Уральский рабочий, 1988. 152 с.

101. Abdallah В.М. The use of mesenchymal (skeletal) stem cells for treatment of degenerative diseases: current status and future perspectives / B.M. Abdallan, M. Kassem J. // Cell Physiol. 2009. - Vol. 218(1). P. 9-12.

102. A clonogenic common myeloid progenitor that gives rise to all myeloid lineages / Akashi K, Traver D, Miyamoto T, Weissman IL // Nature. 2000. № 404.-C. 193-197.

103. Aggarwal S. Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responces / S. Aggarwal, M.F. Pittenger // Blood. 2005. - Vol. 105. - P. 1815-1822.

104. Alviano F. Term Amniotic membrane is a night throughput- source for multipotent Mesenchymal Stem Cells With The ability to differentiate into endothelial cells in vitro / F. Alviano, V. Fossati, C. Marchionni // BMC Dev. Biol. -2007.-Vol.7.-P. 11-19.

105. Autologous cultured fibroblasts: a protein repair system / W.K. Boss, H. Usal, P.B. Fodor, G. Chernoff// Ann. Plast. Surg. 2000. - Vol. 44. - P. 536-542.

106. Bailo M. Engraftment potential of human amnion and chorion cells derived from term placenta / M. Bailo, M. Soncini, E. Vertua // Transplantation. 2004. -Vol. 78.-P. 1439-1448.

107. Barry, F.P. Biology and Clinical Applications of Mesenchymal Stem Cells / F.P. Bany // Birth. Defects. Res. C. Embryo Today. 2003. - Vol. 69, N 3. - P. 250-256.

108. Barry, F.P. Mesenchymal Stem Cells: Clinical Applications and Biological Characterization / F.P. Barry, J.M. Murphy // Int. J. Biochem. Cell Biol. 2004. -Vol. 36,N4.-P. 568-584.

109. Baty D.U. The future of genetic screening // Eur. Clin. Lab. 2002. - Vol. 21.-N2.-P. 18-20.

110. Bingham S.J. Stem cell transplantation for autoimmune disorders. Rheumatoid arthritis / S.J. Bingham, JJ. Moore // Best Pract. Res. Clin. Haematol. -2004.-Vol. 17, №2.-P. 263-276.

111. Blau HM. The evolving concept of a stem cell: entity or function? / HM Blau, TR Brazelton, JM Weimann // Cell. 2001.- № 105. - C. 829-841.

112. Bochkov N.P. Chromosome variability of human multipotent mesenchymal stromal cells / N.P. Bochkov, E.S. Voronina, N.V. Kosyakova // Bull. Exp. Biol. Med. 2007. - Vol. 143(1). P. 122-126.

113. Burger S.R. Current regulatory issues in cell and tissue therapy / S. R. Burger // Cytotherapy. 2003. - Vol. 5, № 4. - P. 289 - 298.

114. Campagnoli C. Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human first trimester fetal blood, liver, and bone marrow / C. Campagnoly, I.A. Roberts, S. Kumar // Blood. 2001. - Vol. 98. - P.2396-2402.

115. Caplan A.I. Mesenchymal stem cells as trophic mediators / A.I. Caplan, J.E. Dennis // J. Cell Biochem. 2006. - Vol. 98. - P. 1076-84.

116. Castro-Malaspina H. Characterization of human bone marrow fibroblast colony-forming cells (CFU-F) and their progeny H. Castro-Malaspina, Gay R.E., Resnick G. // Blood. 1980. Vol. 56 P. 289-301.

117. Chang C.M. Placenta-derived multipotent stem cells induced to differentiate into insulin-positive cells / C.M. Chang, C.L. Kao, Y.L. Chang // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2007. - Vol. 357, № 2. - P. 414-420.

118. Chen X. Multip'otency of purified, transplanted globose basal cells in olfactory epithelium / X Chen, H. Fang, J. Schwob // J. Comp. Neural. 2004. -Vol. 469. - P. 457-474.

119. Coulomb B. Skin cell culture and wound healing / B. Coulomb, L. Dubertret // Wound Repair Regen. 2002. - Vol. 10, № 2. - P. 109-112.

120. Crisan M. A perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiple human organs / Crisan M., Yap S., Casteilla L. // Cell Stem Cell 2008. Vol. 3(3). P. 301-313.

121. De Bari C. Multipotent mesenchymal stem cells from adult human synovial membrane / De Bari C., Dell'Accio F., Tylzanowski P. // Arthritis Rheum. 2001. -Vol. 44.-P. 1928-1942.

122. Dennis, J. Origin and Differentiation of Human and Murine Stroma Stem Cells / J. Dennis, P.P. Charbord // Cells. 2002. - №20. - C. 205-214.

123. Dewey W.C. Radiation induced apoptosis: relevance to radiotherapy / W.C. Dewey, C.C. Ling, R. Meyn // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. - 1995. -Vol.33.-P. 781-796.

124. Devine S.M. Mesenchymal stem cells distribute to a wide range of tissues following systemic infusion into nonhuman primates / S.M. Devine, C. Cobbs, M. Jennings//Blood.-2003. Vol. 101 (8). - P. 2999-3001.

125. Dominici M. Heterogeneity of multipotent mesenchymal stromal cells: from stromal cells to stem cells and vice versa / M. Dominici, P. Paolucci, P. Conte // Transplantation. 2009. - Vol. 87 (9). - P. 36-42.

126. Dominici K. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells / K. Dominici, Le Blanc K., Mueller I. // The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy 2006. Vol. 8(4). - P. 315-317.

127. Eto N. Eluctuation of the fibrosis markers with aging / N. Eto, Yoshino J., Inui K. // Nippon Ronen Igakkai Zasshi. 2002. - Vol. 39. - N 2. - P. 176-180.

128. Evans M.J. Establishment in culture of pluri-potential cells from mouse embryos / Evans M.J., M.H. Kaufman // Nature. -1981. Vol. 292. - P. 154-156.

129. Fisher J.W. Extremal messenger and erythropoietin production / J.W. Fisher? M. Kuno // Annals N.Y.Acad.Sci. 1999. - Vol. 554. - P. 9-20.

130. Fujikawa T. Teratoma formation leads to failure of treatment for type I diabetes using embryonic stem cells-derived insulin-producing cells / T. Fujikawa, Oh S.H., PiL. //Am. J. Pathol. -2005. -Vol. 166.- P. 1781. .

131. Gao J. The dynamic in vivo distribution of bone marrow-derived mesenchymal stem cells after infusion / J. Gao, Dennis J.E., Muzic R.F. // Cells Tissues Organs. -2001. Vol. 169 (1), - P. 12-20.

132. Grontos S. The growth factors requirements of Stro-1 positive human stromal precursors under serum-deprived conditions in vitro / S. Grontos, Simmons PJ. // Blood. 1995. - Vol. 85. - P. 929-940.

133. Hamada H. Mesenchymal Stem Cells (MSC) as Therapeutic Cytoreagents for Gene Therapy / H. Hamada, M. Kobune, K. Nakamura // Cancer Sci.-2005. Vol. 96. - N 3.- P.149-156.

134. Heynesworth S.E. Characterization of cells with osteogenic potential from the human bone marrow / S.E. Heynesworth, Goshima J., Goldberg V.M., Calplan A.I. // Bone. 1995. - Vol. 13. - P.81-95.

135. Hofstetter C. Allodynia limits the usefulness of intraspinal neural stem cell grafts and directed differentiation improves outcome / C. Hofstetter, Holmstrom N., Lilja J. // Nat.Neurosci. 2005. - March. - Vol.8 (3), - P. 259-260.

136. Horwitz E.M. Clarification of the nomenclature for MSC: The International Society for Cellular Therapy position statement / Horwitz E.M., Le Blanc K., Dominici M. // Cytotherapy. 2005. - Vol. 7(5). - P 393-395.

137. Hussan M.A. Stem-cell therapy for diabetes mellitus / M.A. Hussan, N.D. Theise // Lancet. 2004. - Vol. 364, № 9429. - P. 203-205.

138. Intercellular induction apoptosis through modulation of endogenous survival factor concentration: a review / S. Dormann, A. Schwieger, J. Hanusch, T. Haufel, I. Engelmann, G. Bauer // Anticancer Res. 1999. - Vol.19, №la. - P. 87-103.

139. Iwanami A. Transplantation of human neural stem cells for spinal cord injury in primates / A. Iwanami, Kaneko S., Nakamura M. // J. Neurosci. Res. -2005. -Apr, № 15. -Vol. 80 (2). P. 182-190.

140. Jaganathan, B. Rho Inhibition Induces Migration of Mesenchymal Stromal Cells / B. Jaganathan, B. Ruester, L. Dressel // Stem Cells. 2007. - Vol. 25. - P. 1966- 1974.

141. Jiang Y. Multipotent progenitor cells can be isolated from postnatal murine bone marrow, muscle, and brain / Jiang Y, Vaessen B., Lenvik T. // Exp. Hematol.- 2002. Vol. 30(8). - P. 896-904.

142. Jiang, Y. Pluripotency of Mesenchymal Stem Cells Derived From Adult Marrow / Y. Jiang B.N. Jahagirdar, R.L. Reinhardt // Nature. Vol. 2002.-V. 418.- P.41-49.

143. Jorgensen C. Engineering mesenchymal stem cells for immunotherapy / C. Jorgensen, F. Djouad, F. Apparailly // Gene Ther. 2003. Vol. 10(10). P. 928-931.

144. Kakishita K. Implantation of human amniotic epithelial cells prevents the degeneration of nigral dopamine in rats with 6-hydroxydopamine lesion / K. Kakishita, N. Nakao, N. Sakuragawa // Brain Ress. 2003. - Vol. 980. - P. 48-56.

145. Kassem, M. Mesenchymal Stem Cells: Biological Characteristics and Potential Clinical Applications / M. Kassem // Cloning Stem Cells. 2004. - Vol. 6, N 4. - P.369-374.

146. Kassem, M. Mesenchymal Stem Cells: Cell Biology and Potential use in Therapy / M. Kassem, M. Kristiansen, B.M. Abdallah // Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. 2004. - Vol.95, 5. - P. 209-914.

147. Khakoo A.Y. Human mesenchymal stem cells exert potent antitumorigenic effects in a model of Kaposi's sarcoma / A.Y. Khakoo, Pati S., Anderson S.A. // J. Exp. Med. 2006. - №15. - Vol. 203 (5). - P. 1235-1247.

148. Koerner J. Equine Peripheral Blood-Derived Progenitors in Comparison to Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells / Koerner J., Nesic D., Romero J.D. // Stem Cells. 2006. - Vol. 24(6). - P. 1613-1619.

149. Kostka Т. Physical activity, aerobic capacity and selected markers of oxidative stress and the anti-oxidant defence system in healthy active elderly men / Kostka T. Drai J., Berthouze S.E. // Clinical Physiology. 2000. - Vol. 20. - N 3. -P. 185-190.

150. Krampera M. Regenerative and immunomodulatory potential of mesenchymal stem cells / Krampera M., Pasini A., Pizzolo G. // Curr. Opin. Pharmacol. 2006. -Vol. 6(4). - P. 435-441.

151. Kratpera M. Mesenchymal stem cells: from biology to clinical use / M. Kratpera, M. Franchini, G. Pizzolo // Blood Transfus. 2007. - Vol 5(3). - P. 120129.

152. Kuehnle I., Goodell M.A. The therapeutic potential of stem cells from adults // BMJ. 2002. -V. 325, - P. 372-376.

153. Lanza R. Essentials of Stem Cell Biology / Lanza R., Gearhart J., Hogan B. // ELSEVIER. 2005. P - 548.

154. Larysa Pevny. Многообразие стволовых клеток / Larysa Pevny, Mahendra S. Rao // Аллергология и иммунология. 2006 - том 7. - N 4. - С. 471-481.

155. Le Blanc К. HLA expression and immunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem cells / K. Le Blanc. C.Tammik., K. Rosendahl // Exp. Hematol. 2003. - Vol. 31. - P. 890 - 896.

156. Malouf N.N. Adult-Derived Stem Cells from the Liver Become Myocytes in the Heart in Vivo / N.N. Malouf, Coleman W.B., Grisham J.W. // Amer. J. Pathol. -2001.-Vol. 158.-P. 1929-1935.

157. Majumdar M.K. Isolation, characterization, and chondregenic potential of human bone marrow-derived multipotential stromal cells / M.K. Majumdar, Banks V., Peluso D.P., Morris E.A. // J. Cell. Physiol. 2000.- Vol. 185. - P. 98-106.

158. Means R.T. Progress in understanding the pathogenesis of the anemia of chronic disease / R. T. Means, S.B. Krantz // Blood. 1992. - Vol. 80.

159. Miki T. Identification of stem cell marker-positive cells by immunofluorescence in term human amnion / T. Miki, K. Mitamura, M.A. Ross // Immunol. 2007. - Vol. 75, № 2. - P. 91-96.

160. Minguell, J.J. Mesenchymal Stem Cells / J.J. Minguell, A. Erices, P. Conget // Exp. Biol. Med. 2001. - Vol. 226.- P. 507-520.

161. Murrell W. Multipotent stem cells from adult olfactory mucosa / W. Murrell, F. Feron, Wetzig A. // Dev. Dyn. 2005. - Jun. - Vol. 233 (2), - P. 496-515.

162. Nakamura Y. Xenotransplantation of long-term-cultured swine bone marrow-derived mesenchymal stem cells / Y. Nakamura, X. Wang, C. Xu // Stem Cells. 2007. - Vol. 25(3). P. 612-620.

163. Ohnishi, S. Mesenchymal Stem Cells for the Treatment of Heart Failure / S. Ohgushi, H. Ohgushi, S. Kitamura // Int. J. Hematol. 2007. - Vol. 86, N 1. - P. 17-21.

164. Ozaki, K. Mechanisms of Immunomodulation by Mesenchymal Stem Cells / K. Ozaki, K. Sato, I. Oh // Int. J. Hematol. 2007. - Vol. 86, N 1. - P.5-7.

165. Parolini O. Isolation and Characterization of Cell from Human Term Placenta: Outcome of the First International Workshop on Placenta Derived Stem Cells / O. Parolini, F. Alviano, G.P. Bagnara // Stem Cells Express, published online November 1, 2007.

166. Portmann Lanz C.B. Placental mesenchymal stem cells as potential autologous graft for pre- and perinatal neuroregeneration / C.B. Portmann Lanz, A. Schoeberiein, A. Huber // Am. J. Obstet. Gynecol. 2006. - Vol. 194. - P 664-73.

167. Rao M.S. Stem cell and aging: expanding the possibilities M.S. Rao, Mattson M.P. // Mech. Ageing Dev. 2001. - Vol. 122. - P. 713-734.

168. Reyes M. Characterization of multipotent adult progenitor cells, a subpopulation of mesenchymal stem cells / M. Reyes, C.M. Verfaillie // Ann NY AcadSci 2001.-938. 231-3; discussion 233-5.

169. Rice C.M. Stem cells for the treatment of neurological disease / C.M. Rice, C.A. Halfpenny, NJ. Scolding // Transfus. Med. 2003. - Vol. 13, № 6. - P. 351361.

170. Roisen F J. Adult human olfactory stem cells / F.J. Roisen, Klueber K.M., Lu C.L. // Brain. Res. 2001. - Vol. 890, - P. 11-22.

171. Romanov Y.A. Searching for alternative sources of postnatal human mesenchymal stem cells: candidate MSC-like cells from umbilical cord / Y.A. Romanov, Svinitskaya V.A., Smimov V.N. // Stem Cells. 2003. - Vol. 21. -P.105-110.

172. Rubio D. Spontaneus human adult stem cells transformation / D. Rubio, Garcia-Castro J., Martin M.C // Cancer Res. 2005. - Vol. 65. - P. 3035.

173. Sabatini F. Human bronchial fibroblasts exhibit a mesenchymal stem cell phenotype and multilineage differentiating potentialities / Sabatini F., Petecchia L, Tavian M. // Lab Invest 2005. - Vol. 85. - P. 962-71. ;

174. Sankar V. Role of human amniotic epithelial cell transplantation in spinal cord injury repair research / V. Sankar, R. Muthusamy // Neuroscience. 2003. -Vol. 118.-P. 11-17.

175. Seale P. The Potential of Muscle Stem Cells / Seale P., Asakura A., Rudnicki M.A. // Developmental Cell. 2001. - Vol. 1. - P. 333-342.

176. Toma J.G. Isolation of multipotent adult stem cells from the dermis of mammalian skin / Toma J.G., Akhavan M., Fernandes K.J. Nat. // Cell Biol. -2001.-Vol.3.-P. 778-784.

177. Tondreu T. Bone marrow-derived mesenchymal stem cells already express specific neural proteins before any differentiation T. Tondreu, Lagneaux L., Dejeneffe M. // Differentiation. 2004. - Vol. 72 (7). - P. 319-326.

178. Tsai, M.S. Isolation of Human Multipotent Mesenchymal Stem Cells From Second-Trimester Amniotic Fluid Using a Novel Two-Stage Culture Protocol / M.S. Tsai, J.L. Lee, Y.J. Chang // Hum. Reprod. 2004. - Vol. 19. - P. 1450-1456.

179. Van Engeland M. Annexin V affinity assay: a review on an apoptosis detection system based on phosphatidylserine exposure / M. Van Engeland, L.J.W. Nieland, F.C.S. Ramaekers // Cytometry. - 1998. - Vol.31. - P. 1 - 9.

180. Vanquero J., Cell therapy using bone marrow stromal cells in chronic paraplegic rats: Systemic or local administration? / J. Vanquero, Zurita M., Oya S., Santos M. // Neurosci. Lett. 2006. - Vol. 394 (1). - P. 1-6.

181. Vogt C. The role of the blood island during normal and 5-Fluorouracil-perturbated hemopoiesis / C. Vogt, G. Noe, J.N. Rich // Blood cells. 1991. - Vol. 17.-P. 105-125.

182. Wagers, A J. Plasticity of Adult Stem Cells / A.J. Wagers, I.L. Weissman // Cell. 2004. - Vol. 116. - P. 639-648.

183. Watt, F.M. Out of Edam: Stem Cells and Their Niches / F.M. Watt, B.L. Hogan // Science. 2000. - Vol. 287. - P. 1427-1430.

184. Willing A.E. Mobilized peripheral blood cells administered intravenously produce functional recovery in stroke / A.E. Willing, Vendrame M., Mallery J. // Cell. Transplant. 2003. - Vol. 12, - P. 449-454.

185. Zhang X. Mesenchymal progenitor cells derived from chorionic villi of human placenta for cartilage tissue engineering / X. Zhang, A. Mitsuru, K. Igura // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006. - Vol. 340. - P. 944-952.

186. Wright J.V. Maximize Your Vitality and Potency: For Men Over 40 / J.V. Wright, Lenard L. 2000. - P. 256.

187. Zhang Z.X. Cytogenetic analysis of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells passaged in vitro / Z.X, Zhang, L.X. Guan, K, Zhang // Cell Biol. Int. 2007. - Vol. 31. P. 645-648.

188. Zdzienicka M.Z. Molecular processes and radiosensitivity / M.Z. Zdzienicka // Strahlenter Oncol. 1997. - Vol.173, №9. - P. 457-461.

189. Zuk P.A. Human adipose tissue is source of multipotent stem cells / P.A. Zuk, M. Zhu, Ashjian P. // Molecular Biology of the Cell. 2002. - Vol. 13. - P. 42794295.

190. А Н АТ ОЛИЮ ПЕТРОВИЧУ ЯСТРЕБОВУза выбор темы диссертационного исследования, за постоянное внимание к работе и непосредственное руководство при ее выполнении.