Влияние микробного фермента литиказы на развитие экспериментального кандидозного вагинита тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат биологических наук Сачивкина, Надежда Павловна

• Сачивкина, Надежда Павловна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сачивкина, Надежда Павловна

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность темы.

Цель и задачи исследования.

Научная новизна.

Практическая значимость.

Положения, выносимые на защиту.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы.

2.1.1. Коллекция микроорганизмов.

2.1.2. Характеристика продуцентов литиказы.

2.1.3. Питательные среды.

2.1.4. Тест — системы.

2.1.5. Реагенты.

2.1.6. Биообъекты.

2.1.7. Оборудование.

2.2. Методы.

2.2.1. Определение активности литиказы.

2.2.1.1. Определение литического действия литиказы по отношению к

С.albicans по модифицированному методу J. Scott и Schekman R.

2.2.1.2. Определение фунгицидного и фунгистатического действия литиказы.

2.2.1.3. Определение фунгицидного и фунгистатического действия литиказы методом серийных разведений в жидкой питательной среде.

2.2.1.4. Определение жизнеспособности Candida albicans после обработки литиказой.

2.2.2. Оценка влияния литиказы на Candida albicans, наблюдаемое при электронной микроскопии.

2.2.3. Определение способности дрожжеподобных грибов адгезироваться на эпителиоцитах влагалища.

2.2.4. Коадгезия лактобацилл к дрожжеподобным грибам.

2.2.5. Определение влияния литиказы на способность дрожжеподобных грибов фагоцитироваться.

2.2.5.1. Реакция фагоцитоза с перитонеальными макрофагами мышей in vitro.

2.2.5.2. Реакция фагоцитоза с альвеолярными макрофагами крыс in vitro.

2.2.6. Методы изучения индукции морфогенеза С. albicans.

2.2.7. Определение протеиназной активности С. albicans.

2.2.8. Статистическая обработка полученных данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Получение литиказы.

3.1.1. Выделение и очистка литиказы из культуральной жидкости Cellulomonas cellulans АС-870.

3.1.2. Оценка острой токсичности полученного фермента литиказы.

3.2. Действие литиказы на биообъекты.'.

3.2.1. Литическое действие фермента на дрожжеподобные грибы-.

3.2.2. Влияние литиказы на Candida albicans, наблюдаемое при электронной микроскопии.

3.2.3. Изменение адгезивных свойств С. albicans после обработки литиказой.

3.2.4. Коадгезия лактобацилл к дрожжеподобным грибам, обработанным литиказой.

3.2.5. Влияние литиказы на способность Candida albicans фагоцитироваться.

3.2.5.1. Реакция фагоцитоза с перитонеальными макрофагами мышей.

3.2.5.2. Реакция фагоцитоза с альвеолярными макрофагами крыс in vitro.

3.2.6. Факторы индукции морфогенеза C.albicans.

3.2.7. Влияния ингибитора протеиназы - контрикала на морфогенез C.albicans.

3.2.8. Влияние литиказы на морфогенез C.albicans.

3.3. Изучение терапевтического действия литиказы при моделировании кандидозной инфекции у мышей.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние микробного фермента литиказы на развитие экспериментального кандидозного вагинита»

Актуальность проблемы

Среди микотических инфекций кандидоз занимает ведущее место [6,9,56]. Особое значение эта патология приобретает в гинекологической практике. По данным ряда авторов, кандидозный вагинит (KB) составляет до 20-30% в структуре инфекций урогенитального тракта [42,109]. Прилепская В.Н. и Байрамова Г.Р. отмечают, что ежегодно в мире регистрируется более 2 млн. случаев заболеваний KB [46]. Практически каждая вторая женщина за свою жизнь имеет хотя бы один эпизод КВ. Несмотря на то, что современная антимикотическая терапия достаточно эффективна в отношении острой инфекции, лечение хронического рецидивирующего KB не всегда является результативным [43]. Так, при назначении системных антимикотиков (препаратов из группы азолов), процент излечиваемости в острой фазе KB обычно составляет 80-90 % [37,50,51]; при этом рецидивы заболевания наблюдаются в течение 6 месяцев у 20-22 % женщин [40,43].

По данным Sobel J.D. [163,165], значительная частота рецидивов KB заставляет врача пролонгировать схему лечения или увеличивать дозу антимикотика. По мнению Хамановой И.В. [62] и Odds F.S. [142], удлинение периода лечения способно лишь сдвинуть во времени вероятность повторных проявлений кандидоза, а увеличение дозы препарата ведёт к дополнительным побочным эффектам [144]. Проблема противорецидивной терапии осложняется ещё и тем, что при широком использовании препаратов азоловой группы возможно формирование устойчивости кандид к ним [56].

В этой связи возникает необходимость поиска альтернативных путей этиотропной терапии КВ. Возможным перспективным направлением такого поиска является изучение ферментов, воздействующих на дрожжеподобные грибы (ДПГ). Одним из них является литиказа, разрушающая маннопротеиновый комплекс — основной структурный элемент клеточной стенки Candida albicans. Исходя из вышеизложенного, особо актуальным является изучение действия литиказы на вирулентность кандид, что может служить основанием для использования указанного фермента в создании препарата, альтернативного существующим антимикотикам.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы было оценить фермент литиказу, расщепляющий маннопротеиновый комплекс клеточной стенки Candida albicans, как основной элемент нового антимикотического препарата в комплексном лечении рецидивирующего кандидозного вагинита.

Поставленная цель достигалась путём последовательного решения следующих задач:

1. Выбор перспективного штамма — продуцента литиказы.

2. Отработка режима его культивирования и оптимизации получения фермента.

3. Отработка способа выделения, очистки литиказы и её стандартизации.

4. Оценка действия полученного препарата на клинические изоляты Candida albicans: определение литического действия, влияние на жизнеспособность ДПГ, адгезивные свойства, морфогенез, способность к фагоцитозу и продукцию ферментов агрессии — протеиназ.

5. Создание модели рецидивирующего KB на лабораторных животных.

6. Исследование действия литиказы на течение рецидивирующего KB у мышей.

Научная новизна

Предложена оригинальная модель рецидивирующего кандидозного вагинита, адекватная KB женщин. В опытах in vivo доказан терапевтический и противорецидивный эффект литиказы.

Определено фунгицндное и фунгистатическое действие литиказы.

Установлено, что возбудитель KB, подвергшийся действию литиказы, теряет способность адгезироваться на вагинальном эпителии, но остаётся способным коадгезироваться с лактобактериями. Кандиды, обработанные литиказой, активнее фагоцитируются и становятся доступными действию лизосомных ферментов макрофагов.

Впервые было показано, что коммерческий препарат Контрикал ингибирует продукцию ферментов агрессии Candida albicans - аспартил-протеиназ, в результате чего переход ДПГ в мицелиальную форму не реализуется. А под действием литиказы происходит нарушение структуры клеточной стенки, что способствует образованию проростковых трубок без индукции протеиназ. Такой вариант морфогенеза не сопровождается повышением инвазивности.

Установленные факты позволяют считать рациональным включение в схему лечения KB литиказы и ингибиторов протеиназ.

Практическая значимость

Разработана технология получения литиказы из природного продуцента Cellulomonas cellulans АС-870. Предложенная схема выделения и очистки искомого продукта позволяет получить литиказу, превышающую по удельной активности современные коммерческие образцы. Полученный по предложенной технологии фермент может быть основой лечебного препарата, предназначенного для лечения KB и профилактике его рецидивов. Включение в схему лечения KB фермента, разрушающего маннопротеиновый комплекс клеточной стенки ДПГ и ингибитора протеиназ, можно рассматривать как альтернативу использования антимикотиков из группы азолов в случае развития к ним резистентности.

Положения, выносимые на защиту

1. Рецидивирующий кандидозный вагинит воспроизводится на лабораторной модели путём заражения мышей, предварительно обработанных антибиотиками и эстрадиолом, адаптированным штаммом С. albicans. Рецидив инфекции вызывается аналогичной повторной обработкой мышей, но без дополнительного их заражения.

2. На лабораторной модели рецидивирующего KB был продемонстрирован терапевтический эффект литиказы, заключавшийся в быстрой санации влагалища и отсутствии рецидива инфекции после попытки его индукции.

3. Выбран продуцент литиказы — Cellulomonas cellulans АС-870.

4. Разработана технология получения и очистки литиказы путём культивирования на сердечно-мозговом бульоне с добавлением пекарских дрожжей и последующим выделением искомого продукта с молекулярной массой в интервале 100-30 кД методом ультрафильтрации. Установлен терапевтический эффект литиказы за счёт частичной гибели популяции ДПГ в результате их лизиса, а также снижение адгезии оставшихся жизнеспособными кандид на вагинальном эпителии.

5. Доказано, что ДПГ, обработанные литиказой, сохраняют коадгезивные свойства в отношении лактобактерий, но становятся более доступными к действию фагоцитов.

6. Подтверждено, что ДПГ под действием литиказы, несмотря на активацию морфогенеза, не активируют ферменты агрессии — аспартил-протеиназы.

7. Разработан и рекомендуется к применению новый способ снижения патогенного потенциала С. albicans за счёт использования ингибитора SAP, блокирующего переход ДПГ в мицелиальную форму.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Сачивкина, Надежда Павловна

ВЫВОДЫ

1. Из числа исследованных объектов наиболее продуктивным в отношении литиказы оказался штамм Cellulomonas cellulans АС-870. Предложена технология получения и очистки литиказы путём культивирования на сердечно-мозговом бульоне с добавлением пекарских дрожжей и последующим выделением искомого продукта с молекулярной массой в интервале 100-30 кД методом ультрафильтрации. Полученный по данной технологии фермент превышал удельную активность коммерческого препарата сравнения.

2. Установлено, что терапевтический эффект литиказы обусловлен гибелью популяции дрожжеподобных грибов в результате их лизиса и снижением адгезии оставшихся жизнеспособными кандид на вагинальном эпителии.

3. Подвергшиеся воздействию литиказы дрожжеподобные грибы сохраняют коадгезивные свойства в отношении лактобактерий, но лучше фагоцитируются. Изменённые под действием литиказы кандиды, несмотря на активацию морфогенеза, не активируют ферменты агрессии аспартил-протеиназы.

4. Установлено, что ингибиторы аспартил-протеиназ блокируют переход С. albicans в инвазивную мицелиальную форму. Эти препараты могут быть рекомендованы для лечения рецидивирующего кандидозного вагинита.

5. Разработана экспериментальная модель рецидивирующего кандидозного вагинита, включающая сочетанную обработку животных антибиотиками и эстрадиолом, заражение адаптированного к ним штаммом С. albicans №40, и, после естественной санации, провокацию рецидива инфекции путём повторной обработки антибиотиками и гормоном.

6. Показано антимикотическое действие литиказы на модели*рецидивирующего кандидозного вагинита у мышей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сачивкина, Надежда Павловна, 2010 год

1. Агольцов В.А. Кандидоз, аспергиллез и мукороз животных (диагностика и меры борьбы) // Автореферат дисс. докт. ветер, наук. Н.Новгород -2006.-26 с.

2. Акопян Т.Э. Бактериальный вагиноз и кандидозный вагинит у беременных (диагностика и лечение) // Дисс. канд. медиц. наук. -М.- 1996.- 141 с.

3. Анкирская A.C. Бактериальный вагиноз // Ж. акушерства и гинекологии. 1995.-№6. -С. 13-16.

4. Анкирская A.C., Муравьева В.В., Фурсова С.А., Миронова Т.Г. Некоторые аспекты лечения урогенитального кандидоза // Вест. Росс, ассоц. акуш. и гинекол. 2000. - № 1 - С. 106-109.

5. Анохина И.В. Материалы к характеристике лектинсвязывающего адгезина в поверхностных структурах лактобактерий // Дисс. канд. медиц. наук.-М.-2007.-112 с.

6. Антоньев A.A., Бульвахтер Л.А., Глазкова Л.К., Ильин И.И. Кандидоз кожи и слизистых оболочек // М., Медицина. 1985. - 155 с.

7. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях // С.-Петербург, 1962. — 178 с.

8. Байрамова Г.Р. ВКВ. Рациональная фармакотерапия // Гинекология. -2006, Экстравыпуск. С . 11-14.

9. Байрамова Г.Р. Кандидозный вульвовагинит // М., Медицина для всех. -1999.-№ 1-С. 19-22.

10. Борисов Л.Б., Кузьмин-Соколов Б.Н., Фрейдлин И.С. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии // М., Медицина. 1993. - 239 с.

11. Борисов Л.Б., Смирнова A.M., Фрейдлин И.С. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология // М., Медицина. — 1994.- 528 с.

12. Бурова С.А. Особенности течения и терапии грибковых инфекций у детей // Доктор. Ру. 2003. - № 12 - С. 24-25.

13. Бурова С.А., Воинова Г.В. Клинические разновидности и лечение кандидоза // Вестник дерматологии и венерологии. 1997. — № 4 — С. 2428.

14. Быков В.Л. Динамика инвазивного роста Candida albicans в тканях хозяина // Вестник дерматологии и венерологии. 1990. — № 4 — С. 25-28.

15. Быков В.Л. Этиология, эпидемиология и патогенез кандидозного вульвовагинита // Акушерство и гинекология. 1986. - № 9 — С. 5-7.

16. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов // Л., Медицина. 1978. - С. 72-75.

17. Долгов Г.В., Абашин В.Г. Возможности повышения эффективности лечебного эффекта Флуконазола у больных хроническим (рецидивирующим) кандидозным вульвовагинитом // Успехи медицинской микологии. — 2004. — № 4 — С. 162-163.

18. Дуглас С.Д., Куи П.Г. Исследование фагоцитоза в клинической практике // Пер. с англ. М., Медицина. - 1983. - С. 63-64, 87-88.

19. Егорова Е.В., Минскер О.Б. Грибковые и некоторые паразитарные заболевания женских половых органов // М., Медицина. 1988. — 221 с.

20. Иммунологические методы // Пер. с нем. под ред. Г.Фримеля. М., Медицина. - 1987. - С. 333-338, 384-386.

21. Караев З.О., Лебедева Т.Н. К вопросу о биологической активности

22. Candida albicans // Микотическая инфекция и сенсибилизация. Сборник науч. труд. Ленинград - 1982. - С. 14-17.

23. Кашкин К.П., Дмитриева Л.Н. Белки системы комплемента: свойства и биологическая активность // Клин. лаб. диагн. 2000. - № 7 - С. 25-32.

24. Кашкин П.Н., Шеклаков Н.Д. Руководство по медицинской микологии // Ленинград - 1978. - 121 с.

25. Кирющенков А. Бактериальный вагиноз и генитальный кандидоз // Ж. Врач. 2003. - № 1 - С. 11-15.

26. Кисина В.И. Комбинированная терапия смешанных инфекций влагалища // Consilium Medicum. 2005. - № 1 - С. 7.

27. Климов Л.А. Адгезивные свойства грибов рода кандида, выделенных от детей дома ребенка, страдающих воспалительными заболеваниями респираторного тракта // Вест. Ряз. мед. ин-та. — 1991. — 10 с.

28. Коломойцева Т.Н. Особенности микробного пейзажа влагалища женщин репродуктивного возраста в условиях колонизации грибами рода Candida // Материалы региональной научно-практической конференции. — Пермь -2003.-С. 61-64.

29. Лабинская A.C. Практикум по медицинской микробиологии // М., Медицина. 1963. - 463 с.

30. Лиходед В.Г., Бондаренко В.М. Антиэндотоксиновый иммунитет в регуляции численности эшерихиозной микрофлоры кишечника // М., Медицина. 2007. - 216 с.

31. Лурье A.A. Хроматографические материалы. Справочник // М., Химия. — 1978.-С. 190-191.

32. Майбогин A.M. Изучение фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов при взаимодействии с липосомами.// Электронный ресурс, Минск, 2002 URL: http://www.bsmu.by/bioch/files/Majbog.pdf. (дата обращения: 01.06.2009).

33. Матвеева Е.А. Влияние ожоговой травмы на течение пневмонии, вызванной Pseudomonas aeruginosa // Дисс. канд. медиц. наук. М. - 1980.- 143 с.

34. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник // М., Медицина. 1987. -С. 310-311.

35. Мирзабалаева А.К. Основные принципы лечения хронического кандидоза гениталий у женщины // Вестник дерматологии и венерологии. 2004. —2.С. 20-22.

36. Мирзаболаева А.К., Долго-Сабурова Ю.В., Колб З.К. Опыт применения вагинальных суппозиториев "Ливарол" у больных ОВКВ // Гинекология.- 2006. № 2 - С. 8-11.

37. Муравьева В.В. Микробиологическая диагностика бактериального вагиноза у женщин репродуктивного возраста // Автореф. дис. канд. медиц. наук. — М. — 1997. 23 с.

38. Мюллер Э., Лёффлер В. Микология // М., Мир. 1995. - 343 с.

39. Низаева А.Р. Новые подходы к терапии хронического рецидивирующего вульвокандидозного вагинита // Вестник Санкт-Петербургскойгосударственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. 2006. -№3 - С. 142-146.

40. Определитель бактерий Берджи. Под редакцией Хоулта Д., Крига Н., Снита П. 9 издание. Том 2. М., Мир. - 1997. - 315 с.

41. Осипова И.Г. Корректирующее действие пробиотиков при экспериментальном дисбактериозе // Дисс. доктора биолог, наук. -Москва-2003.- 118 с.

42. Падейская E.H., Бакланова О.В. Синтетические химиотерапевтические препараты для лечения микозов // Химико-фармацевтический журнал. -2003. -№ 4-С. 12-21.

43. Под редакцией Ф.Герхарда и др. Методы общей бактериологии // Пер. с англ. М., Мир. - 1984. - т. 2 - 469 с.

44. Прилепская В.Н. Генитальный кандидоз. Современные подходы к лечению // Акушерство и гинекология. 1996. - № 6 - С. 28-29.

45. Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р. Вульвокандидозный вагинит -современные пути решения проблемы // Трудн. Пациент. — 2006. — № 9 -С. 33-37.

46. Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р. Современные представления о вагинальном кандидозе // Русский медицинский журнал. 1998. - № 5 — С. 301-308.

47. Роговская С.И, Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р. Опыт применения Дифлюкана при лечении генитального кандидоза // Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов. 1997. - № 1 - С. 100-107.

48. Рожкова И.Ю. Селекция варианта штамма-продуцента лактобактерина Lactobacterium fermentum 90-TS-4 для использования в гинекологической практике // Дисс. канд. медиц. наук. М. - 1999. - 154 с.

49. Романовская Т.А. Современная практика и вопросы стандартизации терапии кандидозного вульвовагинита // Гинекология. 2004. - №1 -С. 57-73.

50. Романовская Т.А., Сергеев Ю.В. Хронический кандидозный вагинит: новые возможности терапии // Журнал иммунопатол., аллергол., инфектол. 2005. - № Г - С. 18-23.

51. Роуз Э. Химическая микробиология // М., Медицина 1971. - С. 89-90.

52. Савичева A.M. Диагностика и лечение урогенитального кандидоза // Трудн. пациент. 2006. - № 9 - С. 28-33.

53. Самсыгина Г.А., Буслаева Г.Н., Корнюшин М.А. Кандидоз новорождённых и детей раннего возраста // М., Медицина. 2006. - 40 с.

54. Сергеев А.Ю. Иммунитет при кандидозе // Иммунопатология, аллергология, инфектология. — 1999. № 1 - С. 81-86.

55. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Иммунопатогенез грибковых инфекций и иммунокоррекция // М., Медицина. 2000. - 256 с.

56. Серов В.Н. Рациональная терапия влагалищной инфекции // Гинекология. 2005. -№ 2-С. 34-51.

57. Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови живых организмов // Описание изобретения к патенту РФ. Регистрационный номер заяКВи: 2003107776/15 от 01.09.2004.

58. Тихомиров A.JI. Варианты терапии острого и хронического кандидозного вульвовагинита // Гинекология. — 2005. № 3 — С. 43-46.

59. Тихомиров A.J1. Основные принципы лечения кандидозного вульвовагинита // Consilium Medicum. — 2006. № 6 — С. 58-62.

60. Ткаченко JI.B., Жукова С.И. Преимущества комбинированной терапии хронического рецидивирующего кандидозного вульвовагинита // Гинекология. 2006. - № 2 - С. 73-78.

61. Хамаганова И.В. Кандидозный вульвовагинит // Леч. Врач. 2007. - № 3 -С. 50-53.

62. Хмельницкий O.K. Хмельницкая Н.М. Патоморфология микозов человека // С.-Петербург 2005. - 431 с.

63. Antley P.P., Hazen К.С. Role of yeast cell growth temperature on Candida albicans virulence in mice // Infect. Immun. 1988. - № 11 - P. 2884-2890.

64. Belcher R.W., Carney J.F., Monahan F.G. An electron microscopic study of phagocytosis of Candida albicans by polymorphonuclear leukocytes // Lab. Invest. 1993. - № 12 - P. 620-627.

65. Biely P. Enzymes of the yeast lytic system produced by Arthrobacter bacterium and their role in the lysis of yeast cell walls // Z. Allg. Mikrobiol. — 1997. -№6-P. 465-480.

66. Blasi E., Pitzurra L., Bartoli A., Puliti M., Bistoni F. Tumor necrosis factor as an autocrine and paracrine signal controlling the macrophage secretory response to Candida albicans // Infect. Immun. 2004. - № 4 - P. 1199-1206.

67. Blasi E., Pitzurra L., Puliti M., Lanfrancone L., Bistoni F. Early differential molecular response of a macrophage cell line to yeast and hyphal forms of Candida albicans // Infect. Immun. 2002. - № 3 - P. 832-837.

68. Borelli C., Rüge E., Schaller M., Monod M. The crystal structure of the secreted aspartic proteinase 3 from Candida albicans and its complex with pepstatin A // Proteins. 2007. - № 8 - P. 738-48.

69. Borg-von Zepelin M., Beggah S., Boggian K., Sanglard D. The expression of the secreted aspartyl proteinases SAP4 to SAP6 from Candida albicans in murine macrophages // Mol. Microbiol. 1998. - № 8 - P. 543-554.

70. Braude A. Candida, Infectious diseases and Medical Microbiology. 2nd ed. — 1986.-571 p.

71. Brawner D.L., Cutler J.E. Cell surface and intracellular expression of two Candida albicans antigens during in vitro and in vivo growth // Microb. Pathog. 1997.-№4-P. 249-257.

72. Brawner D.L., Cutler J.E., Beatty W.L. Caveats in the investigation of form -specific molecules of Candida albicans // Infect. Immun. 2000. - № 21. P. 378-383.

73. Brown J.M., Frazier R.P. Phenotypic and genetic characterization of Cellulomonas // J. Clin. Microbiol. 2005. - № 3 - P. 1732-1737.

74. Calderone R.A, Braun P.C. Adherence and receptor relationships of Candida albicans // Microbiol. Rev. 2001. - № 3 - P. 11-20.

75. Calderone R.A., Fonzi W.A. Virulence factors of Candida albicans // Trends Microbiol. 2001. - № 9 - P. 327-335.

76. Cannon R.D., Chaffm W.L. Oral colonization by Candida albicans // Crit. Rev. Oral. Biol. 1999. -№ 10 - P. 359-383.

77. Cannon R.D., Holmes A.R., Mason A.B., Monk B.C. Candida: clearance, colonization, or candidiasis // J. Dent. Res. 1995. - № 5. - P. 1152-1161.

78. Casanova M., Chaffm W.L. Cell wall glycoproteins of Candida albicans as released by different methods // J. Gen. Microbiol. 2001. - № 5 -P. 1045-1051.

79. Casanova M., Gil M.L., Cardenoso L., Martinez J.P., Sentandreu R. Identification of wall specific antigens synthesized during germ tube formation by Candida albicans // Infect. Immun. - 1999. - № 1 - P. 262-271.

80. Casanova M., Martinez J.P., Chaffin W.L. Identification of germ tube cell wall antigens of Candida albicans // J. Med. Vet. Mycol. 2001. - № 4 - P. 269272.

81. Cassone A. Cell wall of Candida albicans: its functions and its impact on the host // Curr. Top. Med. Mycol. 1999. - № 3 - P. 248-314.

82. Cassone A. Differential chemokine response of human monocytes to yeast and hyphal forms of Candida albicans and its relation to the ß 1-6 glucan of the fungal cell wall // J. Leukoc. Biol. 2000. - № 8 - P. 923-932.

83. Chaffin W.L., Stocco D.M. Cell wall proteins of Candida albicans // Can. J. Microbiol. 1993. - № 10 - P. 143 8-1444.

84. Chen B., Xiao-Li X. MNN5 Encodes an Iron Regulated a-1,2-Mannosyltransferase Important for Protein Glycosylation, Cell Wall Integrity, Morphogenesis, and Virulence in Candida albicans // Eukaryot Cell. — 2006. — №2-P. 238-247.

85. Cheng G., Wozniak K., Matthew A. Comparison between Candida albicans Agglutinin Like Sequence Gene Expression Patterns in Human Clinical Specimens and Models of Vaginal Candidiasis // Infect. Immun. — 2005. - № 3 -P. 1656-1663.

86. Critchley I.A., Douglas L.J. Isolation and partial characterization of an adhesin from Candida albicans // J. Gen. Microbiol. 1997. - № 3 - P. 629-636.

87. Cutfield S.M., Dodson E.J., Anderson B.F. The crystal structure of a major secreted aspartic proteinase from Candida albicans in complexes with two inhibitors // J. Mol. Biol. 1995. - № 11 - P. 1261-1271.

88. Cutler J.E., Brawner D.L., Hazen K.C., Jutila M.A. Characteristics of Candida albicans adherence to mouse tissues // Infect. Immun. 2000. — № 6 — P. 19021908.

89. Davies D. Method for treating fungal infections using lytic enzymes // United States Patent № 4062947 Dec., 13 - 1977.

90. De Bernardis F., Arancia S., Morelli L., Hube B., Sanglard D. Evidence that members of the secretory aspartyl proteinase gene family, in particular SAP2, are virulence factors for Candida vaginitis // J. Infect. Dis. 1999. — № 9 —1. P. 201-208.

91. De Bernardis F., Cassone A. Rat model of Candida vaginal infection // Handbook of animal models of infection. — 1999. — Academic Press, New York.-P. 735-740.

92. De Bernardis F., Miihlschlegel F.A., Cassone A., Fonzi W.A. The pH of the host niche controls gene expression in and virulence of Candida albicans // Infect. Tmmun. 1998. - № 6 - P. 3317-3325.

93. Diamond R.D. Interaction of phagocytic cells with Candida and other opportunistic fungi // Arch. Med. Res. 1993. - № 24 - P. 361-369.

94. Doi K., Doi A. Cloning and expression in Escherichia coli of the gene for Micrococcus beta-( 1 -3)-glucanase // J. Bacteriol. 2006. - № 12 - P. 12721276.1. V.

95. Douglas L.J. Adhesion of Candida species to epithelial surfaces // Crit. Rev. Microbiol. 1997. - № 1 - P. 27-43.

96. Edwards J.E. Invasive Candida infections: evolution of a fungal pathogen // N. Engl. J. Med. 1991. - № 4 - P. 1060-1062.

97. Edwards J.E., Mayer C.L., Calderone R.A. Cell extracts of Candida albicans block adherence of the organisms to endothelial cell // Infect. Immun. 1992. -№6-P. 3087-3091.

98. Elliott K.A. Managing patients with vulvovaginal candidiasis // USA. Nurse Pract. 1998. - №3 - P. 44-53.

99. Elorza M.V., Murgui A., Sentandreu R. Dimorphism in Candida albicans: contribution of mannoproteins to the architecture of yeast and mycelial cell walls // J. Gen. Microbiol. 1999. - № 9 - P. 2209-2216.

100. Ernst J. Transcription factors in Candida albicans environmental control of morphogenesis // Microbiology. - 2000. - № 4 - P. 1763-1774.

101. Eschenbach D.A. Bacterial vaginosis: Emphasis on Upper Genital Tract Complications // Obstet. Gyn. Clin. Nort. Am. 1989. - № 3 - P. 593-610.

102. Felk A., Kretschmar M. Candida albicans hyphal formation and the expression of the Efgl regulated proteinases Sap4 to Sap6 are required for the1 invasion of parenchymal organs // Infect. Immun. — 2002. - № 7 — P. 36893700.

103. Ferrer P., Hedegaard L., Halkier T., Diers I., Savva D., Asenjo A. Molecular cloning of a lytic enzyme from Micrococcus // Ann NY Acad. Sci. 1996. -№5-P. 555-565.

104. Fidel P.L., Lynch M.E. Candida specific cell - mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis // Infect. Immun. -1993. -№ 1 - P. 1990-1995.

105. Fidel P.L., Lynch M.E., Sobel J.D. Circulating CD4 and CD8 T cells have little impact on host defense against experimental vaginal candidiasis // Infect. Immun. 1995. - № 7 - P. 2403-2408.

106. Fidel P.L., Sobel J.D. Immunopathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis // Contracept Fertil. Sex. 1996. - № 2 - P. 33-40.

107. Fiske M.J., Tobey-Fincher K.L., Fuchs R.L. Cloning of two genes from Bacillus circulans WL-12 which encode 1,3-beta-glucanase activity // J. Gen. Microbiol. 1990. ~№ 12 - P. 2377-2383.

108. Floyd L., Wormley Jr., Joseph C. Cell Adhesion Molecule and Lymphocyte Activation Marker Expression during Experimental Vaginal Candidiasis // Infect. Immun. 2001. - № 8 - P. 5072-5079.

109. Ghannoum M.A. Potential role of phospholipases in virulence and fungal pathogenesis // Clin. Microbiol. Rev. 2000 - 13 - p. 122-143.

110. Gil M.L., Casanova M., Martinez J.P., Sentandreu R. Antigenic cell wall mannoproteins in Candida albicans isolates and in other Candida species // J. Gen. Microbiol. 1997. - № 5 - P. 1053-1061.

111. Gilkes N.R., Henrissat B., Kilburn D.G., Miller R.C., Warren R.A. Domains in microbial a-mannases: sequence conservation, function, and enzyme families // Microbiol. Rev. 1996. - № 6 - P. 303-315.

112. Gilmore B.J., Retsinas E.M., Lorenz J.S., Hostetter M.K. An iC3b receptor on Candida albicans: structure, function and correlates for pathogenicity // J. Infec. Dis. 1988. - № 1 - P. 38-46.

113. Gow N.A. Germ tube growth of Candida albicans // Curr. Top. Med. Mycol. -1997. -№ 8 -P. 43-55.

114. Gustafson K.S., Vercellotti G.M., Bendel C.M., Hostetter M.K. Molecular mimicry in Candida albicans // J. Clin. Invest. 1991. - № 87 - P. 1896-1902.

115. Hamad M., Ghaleb M. Persistent colonization and transient suppression of DTH responses in an estrogen dependent vaginal candidosis murine model // New Microbiol. - 2002. - № 1 - P. 65-73.

116. Hazen B., Hazen K. Dynamic expression of cell surface hydrophobicity during initial yeast cell growth and before germ tube formation of Candida albicans // Infect. Immun. 1998. - №9 - P. 2521-2525.

117. Hazen K. Cell surface hydrophobicity of medically important fungi, especially Candida albicans // American Society for Microbiology. 1990. - № 11. P. 249-295.

118. Hube B. Possible role of secreted proteinases in Candida albicans infection // Rev. Iberoam. Micol. 1998. - № 15 - P. 65-68.

119. Hube B., Naglik J. Candida albicans proteinases: resolving the mystery of a gene family // Microbiology. 2001. - № 14 - P. 1997-2005.

120. Jack D. Epidemiology and pathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis // Am. J. Obst. 1995. - № 3 - P. 78-85.

121. Jeffries T.W., Eveleigh D.E., Reese E.T. Enzymatic hydrolysis of the walls of yeast cells and germinated fungal spores // Biochim. Biophys. Acta. — 1997. — № 10-P. 10-23.

122. Jenkinson H., Shepherd M. Coaggregation of Streptococcus sanguis and other streptococci with Candida albicans // Infect. Immun. 1990. - № 58 - P. 14291436.

123. Kanbe T., Cutler E. Minimum Chemical Requirements for Adhesin Activity of the Acid Stable Part of Candida albicans Cell Wall Phosphomannoprotein Complex // Infection and Immunity. - 1998. - № 12 - P. 5812-5818.

124. Karen L., Floyd L. Candida Specific Antibodies during Experimental Vaginal Candidiasis in Mice // Infect. Immun. - 2002. - № 10 - P. 5790-5799.

125. Kennedy MJ. Adhesion and association mechanisms of Candida albicans // Curr. Top Med Mycol. 1998. - № 2 - P. 73-169.

126. Klotz S.A. Plasma and extracellulas matrix proteins mediate in the fate of Candida albicans in the human host // Med. Hypotheses. — 1994. — № 5 — P. 328-334.

127. Lee J.C., King R.D. Characterization of Candida albicans adherence to human vaginal epithelial cells in vitro // Infect. Immun. 2003. - № 9 - P. 1024-1030.

128. Li R., Cutler J. Chemical definition of an epitope/adhesin molecule on Candida albicans //J. Biol. Chem. 1993. -№ 25 - P. 182-189.

129. Li Y., Yang P., Yao B. Gene cloning, expression, and characterization of mannanase from Bacillus circulans CGMCC 1416 // J. Microbiol. Biotechnol. -2008, Jan. № 18-P. 160-166.

130. Magliani W. Yeast killer systems // Clin. Microbiol. Rev. 1997. - № 10 - P. 369-400.

131. Mann J., Jeffries T., Macmillan J. Production and Ecological Significance of Yeast Cell Wall Degrading Enzymes from Oerskovia // Environmental microbiology. - 1978. - № 4 - P. 594-605.

132. Mann J.W., Macmillan J.D. Yeast Spheroplasts Formed by Cell Wall -Degrading Enzymes from Oerskovia sp. // J. Bacteriol. 1992. - № 9 - P. 821824.

133. Marcilla A., Elorza M.V., Mormeneo S., Rico H., Sentandreu R. Candida albicans mycelial wall structure: supramolecular complexes released by zymolyase, chitinase and beta-mercaptoethanol // Arch. Microbiol. 2001. -№4-P. 312-319.

134. Mardh P.A. The vaginal ecosystem // Amer. J. Obstet. Gynecol. 1991. - № 12-P. 1163-1168.

135. Marodi L., Johnston R. Enhancement of macrophage candidacidal activity by interferon-gamma // Immunodeficiency. 1993. - № 4 - P. 181-185.

136. Masuoka J. Surface Glycans of Candida albicans and Other Pathogenic Fungi: Physiological Roles, Clinical Uses, and Experimental Challenges // Clin. Microbiol. Rev. -2004. -№ 17(2)-P. 281-310.

137. McLellan Jr., William L. Phosphomannanase (PR-Factor), an enzyme required for the formation of yeast protoplasts // J. Bacteriol. 1998. - № 3 - P. 967974.

138. Meiller T.F., Falkler W.A. Candida dubliniensis and Candida albicans display surface variations consistent with observed intergeneric coaggregation // Rev. Iberoam. Micol. 1999. -№ 16 - P. 187-193.

139. Miyakawa Y, Kuribayashi T. Role of specific determinants in mannan of Candida albicans serotype A in adherence to human buccal epithelial cells // Infect. Immun. 1992. - № 60(6) - P. 2493-2499.

140. Monod M., Togni G., Sanglard D. Multiplicity of genes encoding secreted aspartic proteinases in Candida species // Mol. Microbiol. 1994. - № 13 —1. P. 357-368.

141. Odds F.S. Candida and candidosis // 2nd ed. London, Bailliere Tindall. 1988. - 123 p.

142. Paul L., Fidel J. Effects of Reproductive Hormones on Experimental Vaginal Candidiasis // Infect. Immun. 2000. - № 2 - P. 651-657.

143. Perry C., Whittinton R. Fluconazole. An update of its antimicrobial activity, pharmacokinetic properties and therapeutic use invaginal candidiasis II Drugs. 1995.-№ 1 - P. 994-1006.

144. Poulain D., Tronchin G., Lefebvre B., Husson M. Antigenic variability between Candida albicans blastospores isolated from healthy subjects and patients with Candida infection // Sabouraudia. 1992. - № 9 - P. 173-177.

145. Rangel M.S., Houston A.K., Bale M.J., Wenzel R.P. An experimental model for study of Candida survival and transmission in human volunteers // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1994. - № 13 - P. 590-595.

146. Rico H., Herrero E., Miragall F., Sentandreu R. An electron microscopy study of wall expansion during Candida albicans yeast and mycelial growth using concanavalin A-ferritin labelling of mannoproteins // Arch. Microbiol. — 1991. -№ 15-P. 111-114.

147. Romani L., Mencacci A., Cenci E., Mosci P. Course of primary candidiasis in T cell depleted mice // J. Infect. Dis. - 2002. - № 12 - P. 1384-1392.

148. Rombouts F.M., Phaff H.J. Lysis of yeast cell walls. Lytic ensyms from Bacillus circulans WL-12 // Eur. J. Biochem. 1986. - № 3 - P. 121-130.

149. Ryley J.F., McGregor S. Quantification of vaginal Candida albicans infections in rodents // J. Med. Vet. Mycol. 1986. - № 24 - P. 455-460.

150. Samaranayake Y., Samaranayake L., So M. The antifungal effect of lactoferrin and lysozyme on Candida krusei and Candida albicans // Microbiol. 1998. -№ 11 - P. 18-34.

151. Schumann P., Weiss N. Reclassification of Cellulomonas cellulans // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. -2001. -№ 51 P. 1007-1010.

152. Scott J.H., Schekman R Lyticase: Endoglucanase and Protease Activities That Act Together in Yeast Cell Lysis // J. Bacteriol. 1990. - №4 - P. 414-423.

153. Segal E. Inhibitors of Candida albicans adhesion to prevent candidiasis // Adv. Exp. Med. Biol. 1996. - № 40 - P. 197-206.

154. Segal E., Soroka A., Lehrer N. Attachment of Candida to mammalian tissues -clinical and experimental studies // Mikrobiol. Hyg. 1994 - № 6 - P. 257265.

155. Segal E., Soroka A., Schecter A. Correlative relationship between adherence of Candida albicans to human vaginal epithelial cells in vitro and candidal vaginitis // Sabouraudia. 1984. - № 22 - P. 191-200.

156. Shah D.T., Glover D.D., Larsen B. In situ mycotoxin production by Candida albicans in women with vaginitis // Gynecol. Obstet. Invest. — 1995. — № 1 P. 67-69.

157. Shen S.H., Slilaty S.N. Primary sequence of the glucanase gene from Oerskovia xanthineolytica // J. Biol. Chem. 1998. - № 6 - P. 1058-1063.

158. Shepherd V., Lane K. Ingestion of Candida albicans down regulated mannose receptor expression on rat macrophages // Arch. Biochem. Biophys. — 1997. -№ 15(344)-P. 350-356.

159. Sherwood J., Gregory D. Contact sensing in Candida albicans: a possible aid to epithelial penetration // J. Med. Vet. Mycol. 1992. - № 30 - P. 461-469.

160. Silen J.L., Agard D.A. Molecular analysis of the gene encoding lytic protease: evidence for a preproenzyme // Gene. — 1998. — № 69 P. 237-244.

161. Sobel J.D. Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis // Ann. NY. Acad. Sci. 1998. - № 4 - P. 547-557.

162. Sobel J.D. Reccurent vulvovaginal candidiasis (RVVC) // Int. J. STD & AIDS. -2001.-№ 12-P. 21-24.

163. Sobel J.D. Vulvovaginitis. When Candida becomes a problem // Dermatol. Clin. 1998. -№ 16 - P. 763-768.

164. Sobel J.D., Muller G., McCormick J.F. Experimental chronic vaginal candidosis in rats // Sabouraudia. 1985. - № 23 - P. 199-206.

165. Soil D.R., Langtimm C.J., Hicks J., Galask R. High frequency switching in Candida strains isolated from vaginitis patients // J. Clin. Microbiol. - 1987. -№25-P. 1611-1622.

166. Staib P., Lermann U. Tetracycline Inducible Expression of Individual Secreted Aspartic Proteases in Candida albicans Allows Isoenzyme - Specific Inhibitor Screening // Antimicrob. Agents. Chemother. - 2008. - № 52(1) - P. 146-156.

167. Sturtevant J., Calderone R. Candida albicans adhesins: biochemical aspects and virulence // Rev. Jberoam. Micol. 1997. - № 14 - P. 90-97.

168. Sullivan R.F., Holtman M.A. Taxonomic positioning of two enzymogenes based on phylogenetic analysis of 16S rDNA, fatty acid composition and phenotypic characteristics // J. Appl. Microbiol. 2003. - № 4 - P. 1079-1086.

169. Sundstrom P.M., Kenny G.E. Enzymatic release of germ tube specific antigens from cell walls of Candida albicans // Infect. Immun. - 1995. - № 3 -P. 609-614.

170. Tan J., Zhang S. Susceptibility to vaginal candidiasis under different conditions in mice // Technolog. Med. Sci. 2005. - № 6 - P. 744-756.

171. Taylor B., Staib P. Profile of Candida albicans Secreted Aspartic Proteinase Elicited during Vaginal Infection // Infect. Immun. — 2005. - № 73(3)1. P. 1828-1835.

172. Tomme P., Gilkes R. Cellulose hydrolysis by bacteria and fungi // Adv. Microb. Physiol. 1995. - № 7 - P. 51-81.

173. Tronchin G., Bouchara J.P., Senet J.M. Fungal cell adhesion molecules in Candida albicans // Eur. J. Cell. Biol. 1991. - № 7 - P. 23-33.

174. Villarroya H.,Williams J. Purification and Properties of Mannanases from the Germinated Seeds of Trifolium repens // Biochem. J. 1978. - № 1751. P. 1079-1087.

175. Warren J., Stoll D. Mannan Degrading Enzymes from Cellulomonas fimi // Appl Environ Microbiol. - 1999. - № 65(6) - P. 2598-2605.

176. White T.C., Agabian N. Candida albicans secreted aspartyl proteinases: isoenzyme pattern is determined by cell type, and levels are determined by environmental factors // J. Bacteriol. 1995. - № 77 - P. 5215-5221.

177. Yahata N., Tanaka H. Structure of the gene encoding ensyms of Bacillus circulans WL-12//Gene.-1990.-№ 1-P. 113-117.

178. Yu Z., Staddon W. Partial characterization of a Candida albicans flmbrial adhesin // Infect. Immun. 1994. - № 62 - P. 2834-2842.