Влияние метформина на устойчивость миокарда к ишемии при сахарном диабете 2 типа (клинико-экспериментальное исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.02, кандидат наук Кравчук, Екатерина Никодимовна

• Кравчук, Екатерина Никодимовна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Кравчук, Екатерина Никодимовна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Степень разработанности темы исследования

Цель исследования

Задачи исследования

Научная новизна

Теоретическая и практическая значимость

Методология и методы исследования

Экспериментальная часть исследования

Экспериментальная модель сахарного диабета 2 типа и введение

метформина

Экспериментальная модель ишемии-реперфузии миокарда и

регистрация гемодинамических показателей

Методика определения размера экспериментального инфаркта

миокарда

Клиническая часть исследования

Дизайн исследования и характеристика обследованных пациентов

Методы исследования

Опрос пациентов

Объективный осмотр

Оценка течения интраоперационного и послеоперационного

периодов

Биохимический анализ крови

Оценка биохимических маркеров повреждения миокарда в сыворотке

крови

Забор образцов скелетной мышцы и внутренней грудной артерии во

время оперативного вмешательства

Вестерн блоттинг

Выделение белковой фракции из материала

Электрофорез белков и перенос на нитроцеллюлозную мембрану

Блокирование мембраны

Инкубирование с антителами и детекция

Денситометрия

Статистическая обработка данных

Основные положения, выносимые в защиту

Степень достоверности и апробация работы

Личный вклад автора

Публикации

Объем и структура диссертации

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Сердечно-сосудистые заболевания и сахарный диабет

1.1.1. Распространенность и эпидемиология

1.1.2. Особенности развития ишемической болезни сердца при сахарном диабете

1.2. Кардиопротекция при сахарном диабете

1.3. Клинические эффекты и механизмы действия бигуанидов при ишемической болезни сердца и сахарном диабете

1.3.1. История применения бигуанидов к клинической практике

1.3.2. Метформин и сердечно-сосудистые заболевания у пациентов с сахарным диабетом 2 типа

1.3.2.1. Влияние метформина на окислительный стресс

1.3.2.2. Влияние метформина на липидный спектр и атерогенез

1.3.2.3. Влияние метформина на реологические свойства и свертывающую систему крови

1.3.2.4. Влияние метформина на сосудистый тонус, регионарный

кровоток и артериальное давление

1.3.2.5. Кардиопротективные эффекты метформина

1.4. Роль аденозинмонофосфат-активируемой протеинкиназы в метформин-

опосредованной кардиопротекции

ГЛАВА 2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2Л. Экспериментальная часть исследования

2Л Л. Характеристика экспериментальных групп

2Л.2. Влияние метформина и сахарного диабета 2 типа на устойчивость

миокарда к ишемическому и реперфузионному повреждению

2Л.З. Влияние метформина и сахарного диабета 2 типа на активность аденозинмонофосфат -активируемой протеинкиназы в миокарде при

ишемии-реперфузии

2.2. Клиническая часть исследования

2.2.1. Характеристика обследованных больных

2.2.2. Влияние терапии метформином на степень повреждения миокарда при выполнении кардиохирургического вмешательства в условиях экстракорпорального кровообращения

2.2.3. Активность аденозинмонофосфат -активируемой протеинкиназы в скелетной мышце и сосудистой стенке

ГЛАВА 3. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние метформина на устойчивость миокарда к ишемии при сахарном диабете 2 типа (клинико-экспериментальное исследование)»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Сахарный диабет 2 типа (СД2) является одним из наиболее распространенных хронических заболеваний и представляет собой серьезную проблему здравоохранения, так как приводит к снижению качества жизни, ранней инвалидизации и высокой летальности (Кисляк O.A., Мышляева Т.О., Малышева Н.В., 2008). При этом заболеваемость СД2 в большинстве стран мира неуклонно растет. По данным Государственного регистра больных сахарным диабетом (СД) в России на 1 января 2009 г. СД выявлен более чем у 3 млн. человек, причем около 90% из них страдают СД2. В то же время, эпидемиологические исследования показывают, что истинная численность больных СД в России превышает официально зарегистрированную в 3-4 раза и составляет около 8 млн. человек (5,5% от всего населения России) (Сунцов Ю.И. и соавт., 2011).

СД занимает третье место среди непосредственных причин смерти после сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний, поэтому решение вопросов, связанных с профилактикой и лечением СД, поставлено во многих странах на государственный уровень (Emerging Risk Factors Collaboration, 2010; Демидова Т.Ю., 2010). Ведущей причиной смертности у пациентов с СД2 является ишемическая болезнь сердца (ИБС) и инфаркт миокарда (ИМ), которые встречаются у больных СД2 в 2-4 раза чаще, чем в недиабетической популяции (Баранов B.JL, Нагибович O.A., 2003; Haffner S.M. et al., 1998). К числу основных патогенетических факторов, способствующих развитию ИБС у больных СД2, относятся гипергликемия, гиперинсулинемия, дислипидемия и протромботическое состояние (Северина A.C. и соавт., 2007).

В случае развития необратимого ишемического повреждения миокарда зона некроза является основной детерминантой, определяющей дальнейший прогноз, как при наличии СД, так и при его отсутствии. Таким образом, возможность ограничения ишемического повреждения миокарда является крайне важной в клинической практике. В то же время, специфических методов предотвращения

ишемического повреждения миокарда у пациентов с СД2 в настоящее время не существует. Исходя из этого, особенно актуальным становится применение у больных СД2 и ИБС препаратов, обладающих не только сахароснижающей активностью, но и воздействующих на патогенетические механизмы ишемического-реперфузионного повреждения миокарда. На роль одного из таких препаратов может претендовать метформин, являющийся сегодня единственным разрешенным к применению в клинической практике препаратом из группы бигуанидов.

Основными доказанными эффектами метформина являются: 1) снижение инсулинорезистентности и увеличение утилизации глюкозы периферическими тканями; 2) угнетение глюконеогенеза в печени; 3) снижение тромбообразования, улучшение гемореологии; 4) положительное воздействие на липидный обмен. При этом в литературе последних лет имеются экспериментальные данные о возможных кардиопротективных эффектах метформина, проявляющихся ограничением размера инфаркта и улучшением постишемической функции левого желудочка (Bhamra G.S. et al., 2008; Calvert J.W. et al., 2008).

Между тем механизм кардиопротективного действия метформина остается не до конца ясным. Результаты ряда исследований свидетельствуют о том, что большинство эффектов метформина опосредовано активацией аденозинмонофосфат-активируемой протеинкиназы (АМФК) (Zhou G., 2001). Этот фермент играет важнейшую роль в регуляции углеводного и липидного обмена, а также контролирует энергетический баланс в клетке. Проведенные исследования подтвердили, АМФК активно участвует в регуляции метаболизма, включая синтез и окисление жирных кислот (Kudo N. et al., 1995; Kudo N. et al., 1996; Luiken J.J. et al. 2003), угнетение печеночной продукции глюкозы (Коо S.H. et al., 2005;), активацию гликолиза (Marsin A.S. et al., 2000), подавление синтеза триглицеридов и белков (Steinberg G.R., Kemp В.Е, 2009), экспрессию транспортеров глюкозы (GLUT-4) на мембранах клеток (Fujii N. et al., 2004; Richter E.A., Hargreaves M., 2013). Кроме этого, доказано, что АМФК повышает

фосфорилирование и активность эндотелиальной NO-синтазы (Chen Z.P. et al., 1999; Nagata D., Hirata Y., 2010).

В результате активация АМФК приводит к повышению устойчивости миокарда к таким стрессорным факторам, как ишемия и гипоксия, уменьшению эндотелиальной дисфункции, уменьшению оксидативного стресса и выработки активных форм кислорода, улучшению утилизации глюкозы и биологической активности инсулина. Такая метаболическая активность делает этот фермент одним из основных факторов защиты сердечно-сосудистой системы в условиях СД и ИБС.

Большой интерес представляет изучение феномена метаболического прекондиционирования миокарда, который проявляется парадоксальным повышением устойчивости миокарда к ишемии-реперфузии при наличии экспериментально индуцированных хронических метаболических заболеваний, таких как СД (Ravingerova Т. et al., 2003), гипо- и гипертиреоз (Pantos С. et al., 2003). Таким образом, актуальной проблемой является изучение выраженности ишемического-реперфузионного повреждения миокарда при СД2 в условиях терапии метформином в эксперименте и в клинической практике, а также исследование молекулярных механизмов кардиопротективного эффекта метформина и метаболического прекондиционирования при СД2.

Степень разработанности темы исследования

В литературе последних лет имеются экспериментальные данные о возможных кардиопротективных эффектах метформина, проявляющихся ограничением размера инфаркта и улучшением постишемической функции левого желудочка (Legtenberg RJ. et al., 2002; Bhamra G.S. et al., 2008; Calvert J.W. et al., 2008; Solskov L. et al., 2008; Paiva M.A. et al., 2010). Кроме того, в исследованиях, посвященных изучению активности АМФК, было доказано повышение резистентности миокарда к ишемии при активации этого фермента (Pons S. et al.,

2012; Rüssel III R.R. et al., 2004). Изучение кардиопротективных свойств метформина в зависимости от путей введения препарата с уточнением молекулярно-биологических основ его эффектов является весьма перспективной темой научного исследования.

Большинство клинических исследований посвящены изучению в основном факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний при длительном проспективном наблюдении пациентов в отсутствие острых событий, либо при проведении терапии после уже состоявшегося события (UK Prospective Diabetes Study (UKPDS) Group., 1998; Singh M. et al., 2004; Lamanna С. et al., 2011; Zhao J.L. et al., 2011). Попытка экстраполяции экспериментальных данных в клиническую практику является одним из основных направлений медицинской науки.

Цель исследования: изучить проявления ишемического-реперфузионного повреждения миокарда при сахарном диабете 2 типа в условиях лечения метформином в эксперименте и в клинической практике для выявления возможных кардиопротективных эффектов препарата.

Задачи исследования

1. Оценить влияние экспериментального сахарного диабета 2 типа, как метаболического прекондиционирующего фактора, на ишемическое-реперфузионное повреждение миокарда.

2. Изучить эффект введения метформина на степень ишемического-реперфузионного повреждения миокарда у здоровых животных и у животных с сахарным диабетом 2 типа.

3. Сравнить выраженность ишемического-реперфузионного повреждения миокарда при использовании системного и локального (интракоронарного) пути введения метформина.

4. Проанализировать изменения тканевой активности аденозинмонофосфат-активируемой протеинкиназы при сахарном диабете 2 типа и/или ишемии миокарда, а также на фоне терапии метформином.

5. Исследовать влияние лечения метформином на степень повреждения миокарда и течение раннего послеоперационного периода после операции аорто-коронарного шунтирования у пациентов с сахарным диабетом 2 типа, прооперированных в условиях экстракорпорального кровообращения.

Научная новизна

В настоящем исследовании выявлен феномен метаболического прекондиционирования при экспериментальном неонатальном стрептозотоцин-индуцированном СД2. Показано, что метформин вызывает ограничение размера инфаркта только при интракоронарном введении в периоде реперфузии, но не при регулярном системном введении до ишемии миокарда. Установлено, что интракоронарное введение метформина в сердце животных с СД2 не приводит к дополнительному усилению имеющегося кардиопротективного эффекта метаболического прекондиционирования.

Впервые показано, что активация АМФК является необходимым условием для реализации кардиопротективного эффекта изученных воздействий, а именно, метаболического прекондиционирования при экспериментальном СД2 и терапии метформином. При этом менее выраженная степень активации АМФК, вызванная системным введением метформина, не сопровождается инфаркт-лимитирующим действием. Выявлено, что активация АМФК обратно коррелирует с размером зоны некроза.

Теоретическая и практическая значимость

Полученные результаты позволяют судить о механизмах кардиопротективного эффекта метформина. Одним из путей реализации этого

эффекта является активация АМФК в миокарде. В работе подтвержден феномен метаболического прекондиционирования при неонатальном стрептозотоцин-индуцированном СД2, также ассоциированный с активацией АМФК. Возможность дополнительного усиления кардиопротективного эффекта метаболического прекондиционирования с помощью терапии метформином маловероятна.

В клинической части исследования терапия метформином на догоспитальном этапе у пациентов с СД2 и ИБС, перенесших операцию аорто-коронарного шунтирования, не оказывала отрицательного влияния на течение раннего послеоперационного периода.

Методология и методы исследования

Экспериментальная часть исследования

Экспериментальная модель сахарного диабета 2 типа и введение метформина

В настоящий момент исследователи используют несколько моделей СД2 у крыс. Некоторые из них связаны с различными генетическими мутациями, такие как крысы Zucker с мутацией рецептора лептина (Yamashita Т. et al., 1997). Другие были получены из беспородных крыс путем селекции определенного фенотипа с нарушением уг леводного обмена - крысы Гото-Какизаки (крысы ГК) и крысы Bureau of home economics (Goto Y. et al., 1976; Berdanier C.D. et al., 1979). В настоящем исследовании мы использовали модель неонатального стрептозотоцинового СД у крыс, являющегося широко используемым экспериментальным аналогом СД2 (Islam M.S., Lootsdu Т., 2009). Индукция СД2 проводилась путем однократного интраперитонеального введения стрептозотоцина, растворенного в цитратном буфере (pH 5,5), в дозе 65 мг/кг крысятам мужского пола линии Wistar в возрасте 4-5 дней. В контрольной группе вводили цитратный буфер в том же объеме. Эта модель СД2 за свою

более чем 30-летнюю историю привлекала внимание многих исследователей, в первую очередь простотой воспроизведения, и была детально изучена. По результатам большинства исследований в таком случае у животных развивается гипергликемия на фоне инсулинорезистентности (Bagrov Y.Y. et al., 2005; Takada J. et al., 2007; Cavalher-Machado S.C. et al., 2008).

Животные содержались в условиях 12/12-часового светового режима и получали стандартный корм и питьевую воду ad libitum. Все эксперименты были проведены в соответствии с «Руководством по уходу и использованию лабораторных животных» (публикация Национального Института Здоровья США № 85-23) и «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» и были одобрены этическим комитетом ФГБУ «ФЦСКЭ им. В.А. Алмазова» Минздрава РФ.

На 8-10 неделе жизни животным проводили глюкозотолерантный тест путем введения перорально 40% раствора глюкозы из расчета 3 г глюкозы на кг веса животного. Образец крови получали из хвостовой вены, уровень глюкозы измеряли глюкометром (Roche, Германия). Измерение проводили исходно (0 мин) и далее через 15, 30, 60 и 120 мин после введения глюкозы.

Кроме этого, уровень глюкозы определяли перед выполнением эксперимента глобальной ишемии-реперфузии миокарда.

Для выбора оптимального пути введения метформина был проведен анализ литературных данных. Ранее в экспериментальных исследованиях использовались различные схемы введения препарата. К наиболее распространенным относятся: 1) длительное введение метформина перорально в питьевой воде (Zhou G. et al., 2001; Yin M. et al., 2011, Whittington H. J., 2013), 2) интракоронарно в ходе перфузии изолированного сердца (Paiva М.А. et al., 2010), 3) интраперитонеально (Davis B.J. et al„ 2006, Calvert J.W. et al., 2008).

В настоящем исследовании использовали 2 различных пути введения метформина: системное введение до моделирования ишемии миокарда интраперитонеально и интракоронарное введение метформина сразу после периода глобальной ишемии миокарда в начале реперфузии.

При интраперитонеальном введении расчет дозы метформина проводили на основании литературных данных. Введение метформина (1,1-диметилбигуанид гидрохлорид, Sigma, США), растворенного в физиологическом растворе, проводили в течение трех дней интраперитонеально в дозе 200 мг/кг один раз в день. В контрольной группе вводили растворитель в том же объеме.

Интракоронарно препарат вводили в концентрации 50 микроМ, растворенный в буферном растворе Кребса-Хенселейта, сразу после начала реперфузионного периода в течение 15 мин (Bhamra G.S. et al., 2008; Paiva M. et al., 2009; Paiva M.A. et al., 2010).

Экспериментальная модель ишемии-реперфузии миокарда и регистрация гемодинамических показателей

Для решения поставленных задач использовали модель перфузии изолированного сердца крысы по Лангендорфу с воспроизведением глобальной ишемии-реперфузии.

Методика перфузии изолированного сердца была предложена австрийским физиологом О. Лангендорфом в 1895 году (Langendorff О., 1895), и широко используется по настоящий момент.

Животных наркотизировали уретаном в дозе 1200 мг/100 г. Грудную клетку вскрывали широким чрездиафрагмальным билатеральным разрезом, сердце быстро вырезали и помещали в модифицированный ледяной (4°С) раствор Кребса-Хенселейта, содержащий (в шМ): глюкозы - 11; NaCl - 118; КС1 - 4,7; СаС12 - 1,5; MgS04 - 1,2; КН2Р04 - 1,2; NaHC03 - 25.

После остановки сердца его присоединяли к модифицированному аппарату Лангендорфа (Leiris J. et al., 1984) и осуществляли ретроградную

перфузию через канюлю, введенную в аорту, раствором Кребса-Хенселейта под постоянным давлением гидростатического столба 80 мм. рт. ст.

Использовали металлическую аортальную канюлю собственной конструкции с наличием поперечных насечек для облегчения фиксации аорты на нужном уровне. Температуру перфузионного раствора, насыщенного газовой смесью (карбогеном), содержащей 95% кислорода и 5% углекислого газа, поддерживали на уровне 37,0 ± 0,5 °С. рН раствора равнялось 7,3-7,4. В ходе эксперимента регистрировали частоту желудочковых сокращений (ЧСЖ) и давление в левом желудочке (ДЛЖ), по кривой которого программным методом вычисляли диастолическое внутрижелудочковое давление (ДЛЖД), систолическое (СДЛЖ) и пульсовое давление (ПЛЖД). Обработка сигнала проводилась при помощи программного обеспечения PhysExp 2.0. ДЛЖ измеряли в изоволюмическом режиме путем введения в полость левого желудочка (ЛЖ) через митральное кольцо полиэтиленового баллона, заполненного физиологическим раствором и соединенного с датчиком давления (Baxter, США). Датчик давления располагали на уровне сердца. В ходе эксперимента регистрировалась низкоамплитудная исходная кривая ДЛЖ. Далее приступали к созданию «преднагрузки» путем медленного нагнетания в баллон жидкости с помощью шприцевого инъектора. При этом ориентировались на уровень ДЛЖД (подачу жидкости прекращали по достижении величины 10 мм рт. ст.) и уровень развиваемого сердцем СДЛЖ, которое в среднем достигало 110-120 мм рт. ст. при ДЛЖД 10 мм рт. ст. Величину коронарного потока (КП) измеряли путем сбора оттекающего от сердца перфузата в градуированный цилиндр и выражали в мл/мин. Для облегчения оттока перфузата из правого желудочка в начальном отделе легочной артерии делали небольшой надрез.

Стабилизация параметров работы сердца происходила в течение 15 минут, после чего моделировали период глобальной ишемии миокарда путем полного прекращения подачи перфузата к сердцу в течение 30 мин с последующей реперфузией в течение 120 мин.

Параметры работы сердца оценивали в исходном состоянии (после 15 минут стабилизационного периода), перед периодом ишемии, на 5, 10, 15, 20, 25 и 30 минутах глобальной ишемии, а также каждые 10 минут реперфузии.

Методика определения размера экспериментального инфаркта миокарда

Оценку размера инфаркта проводили с помощью окраски срезов 1%-м раствором 1,2,3 - трифенилтетразолия хлорида (ТТХ, MP Biomedicals, США). Для этого после завершения 120-минутной реперфузии сердце снимали с аппарата Лангендорфа, разрезали на 5 слоев одинаковой толщины. Непосредственно после этого 4 среза инкубировали в 1%-м растворе ТТХ при температуре 37 °С и рН 7,4. В дальнейшем после фотографирования срезов размер инфаркта для данного среза вычисляли как отношение площади ТТХ-негативных участков миокарда к общей площади среза, а размер инфаркта для данного сердца вычисляли как среднее арифметическое значений, полученных для 4 срезов. Срез верхушки сердца (срез №5) и оставшиеся предсердия сразу после завершения реперфузии замораживали в жидком азоте для последующего Вестерн блоттинга.

Клиническая часть исследования

Дизайн исследования и характеристика пациентов

Характеристика пациентов, включенных в исследование.

Критерии включения в исследование:

1) Мужчины и женщины 40-75 лет

2) Наличие подтвержденного сахарного диабета 2 типа, на терапии метформином не менее 6 мес в дозе не менее 850 мг или без медикаментозной сахароснижающей терапии

3) Уровень глнкнрованного гемоглобина (HbAlc) менее 8,0% при включении в исследование

4) Планируемое выполнение аорто-коронарного шунтирования (АКШ) по результатам коронарографии

5) Подписание информированного согласия

Критерии исключения:

1) Сахарный диабет тип 1

2) Наличие непереносимости метформина в анамнезе

3) Почечная недостаточность (СКФ<60 мл/мин, креатинин более 132 мкмоль/л у мужчин, 123 мкмоль/л у женщин)

4) Нарушение функции печени (повышение ACT, AJ1T более чем в 3 раза от нормы)

5) Текущий инфаркт миокарда

6) Тяжелые заболевания легких с дыхательной недостаточностью

7) Онкологические заболевания в анамнезе

8) Беременность, лактация

9) Хронический алкоголизм, наркомания

10) Психические заболевания, способные помешать пациенту участвовать в исследовании

В исследование были включены 30 пациентов с СД2, из них 15 пациентов на диетотерапии и 15 пациентов получающих терапию метформином в дозе не менее 850 мг/сутки. Кроме этого, в исследование были включены 15 пациентов без СД2, сравнимые по основным критериям, в группу сравнения.

Дизайн исследования: открытое, нерандомизированное, наблюдательное исследование (Рисунок 4).

Рисунок 4 - Дизайн исследования

Все пациенты получали базовую сердечно-сосудистую терапию, включавшую ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента или антагонисты к рецепторам ангиотензина II, (З-адреноблокаторы, статины, дезагреганты, нитраты и мочегонные - по показаниям.

Методы исследования

Опрос пациентов

Проводился сбор анамнеза, с уточнением длительности СД2, ИБС, перенесенных в прошлом инфаркта миокарда (ИМ) и острого нарушения мозгового кровообращения (ОНМК), наличия и функционального класса хронической сердечной недостаточности (ХСН) и стенокардии напряжения. Функциональный класс ХСН оценивали на основании классификации,

предложенной в 1994г Нью-Йоркской кардиологической ассоциацией (КУНА) на основании жалоб пациента. Функциональный класс стенокардии напряжения определяли на основании классификации ВОЗ (1979).

Также оценивали проводимую терапию на момент включения в исследование, наличие вредных привычек у пациента.

Объективный осмотр

Объективный осмотр пациента включал в себя осмотр по системам и органам, измерение роста и веса пациента с расчетом индекса массы тела (ИМТ) по формуле: масса тела (кг)/ рост (м2) = кг/м2. Степень ожирения определялась по классификации ВОЗ (Таблица 3).

Таблица 3 - Классификация избыточного веса и ожирения ВОЗ (1997) (ИМТ - индекс массы тела, кг/м2)

Степень ожирения ИМТ, кг/м2

Недостаток массы тела <18,5

Нормальная масса тела 18,5-24,9

Избыточная масса тела 25,0-29,9

Ожирение I 30,0-34,9

II 35,0-39,9

Морбидное ожирение III >40,0

Оценка течения интраоперационного и послеоперационного периодов

Во время операции определяли время пережатия аорты - время аноксии, длительность экстракорпорального кровообращения (ЭКК) и восстановление сердечной деятельности.

В раннем послеоперационном периоде оценивали длительность искусственной вентиляции легких (ИВЛ), необходимость введения вазопрессоров, время нахождения в реанимационном отделении (РО).

Также оценивались осложнения течения послеоперационного периода, такие как нарушения ритма, необходимость повторных хирургических вмешательств.

Биохимический анализ крови

Биохимический анализ крови с определением холестерина, креатинина, аспартатаминотрансферазы (ACT), алананаминорансферазы (АЛТ); определение гликированного гемоглобина выполняли в ЦКДЛ ФГУ «ФЦСКЭ им. В.А. Алмазова» Минздрава РФ. Результаты оценивали в соответствии с нормами лаборатории (холестерин 3,5-5,0 ммоль/л; креатинин 53-97 ммоль/л; АЛТ 10-40 Е/л; ACT 10-42 Е/л).

Оценка биохимических маркеров повреждения миокарда в сыворотке крови

Для оценки раннего послеоперационного периода и выраженности ишемического повреждения миокарда использовали определение содержания

следующих маркеров в сыворотке крови: MB фракции кретинфосфокиназы (КФК-МВ), тропоиииа I. Содержание ферментативных маркеров в сыворотке выражали в международных единицах в литре (МЕ/л), а тропонина I - в нг/мл. Концентрацию тропонина I определяли на анализаторе ACS 180 иммунохемилюминесцентным методом, разработанным фирмой Bayer. Активность ферментативных маркеров повреждения миокарда определяли на биохимическом анализаторе Spectrum (Abbot, США) методом ферментативной кинетики и иммуноингибирования. Забор крови производили исходно - перед выполнением оперативного вмешательства, через 12, 24 и 72 часа.

Забор образцов скелетной мышцы и внутренней грудной артерии во время оперативного вмешательства

В ходе проведения оперативного вмешательства на сердце (АКШ) проводили забор образца скелетной мышцы - межреберной мышцы, при проведении вскрытия грудной клетки. Сегмент внутренней грудной артерии забирали при подготовке шунта. Образцы сразу замораживали в жидком азоте и хранили при температуре -80°С для проведения дальнейшего исследования -Вестерн блоттинга.

Вестерн блоттинг

Активность АМФК определяли методом Вестерн блоттинга, посредством которого оценивали уровни экспрессии фосфорилированной (активированной) АМФК (фосфо-АМФК) и нефосфорилированной АМФК (АМФК) в полученном от животных материале, скелетной мышце и стенке внутренней грудной

артерии. Активность АМФК определяли по соотношению уровней экспрессии изоформ (фосфорилированной и нефосфорилированной).

Из полученного материала выделяли белковую фракцию, которую подвергали электрофорезу в полиакриламидном геле, затем переносу на мембрану, которую инкубировали с соответствующими антителами (AT) с последующей хемилюминисцентной детекцией и денситометрией.

Выделение белковой фракции из материала

Для выделения белковой фракции ткань лизировали в охлажденном лизирующем буфере (50 мМ TrisHCl pH 7.5, 1 мМ EDTA, 1% triton Х-100, 150 мМ NaCl, ингибитор протеаз (Roche), 10 мМ NaVa04) в соотношении материал/лизирующий буфер - 1/10. Материал гомогенизировали в гомогенизаторе типа шаровая мельница (TissueLyser, Qiagen, Нидерланды), затем инкубировали на льду в течение 30 мин, центрифугировали (+4 ° С, 10 мин, 1200g), после центрифугирования собирали надосадочную жидкость для дальнейшего использования. В полученном материале измеряли концентрацию белка по методу Пирса (Pierce ВСА Protein Assay Kit, Thermo Scientific, USA).

После уравнивания концентраций белка готовили пробы, смешивая полученный белковый материал с 4х-кратным буфером для внесения: 200 мМ Tris-НС (pH 6.8), 400 мМ Ь-МеЕЮН, 4 % SDS, 0,01 % бромфеноловый синий, 40 % глицерол, инкубировали 5 мин при 100 °С, затем сразу помещали на лед.

Электрофорез белков и перенос на нитроцеллюлозную мембрану

Для проведения электрофореза использовали 12,5 % полиакриламидный гель. Пробы вносили в гель с учетом концентрации в равных по весу

количествах (30-40 мкг) и проводили электрофорез при постоянной силе тока, 20 мА в концентрирующем и 40 мА в разрешающем гелях. После окончания электрофореза переносили белки на нитроцеллюлозную мембрану при постоянном напряжении 100 В в буфере для переноса: 125 мМ Tris-base, 1,25 М глицин, 0,5 % SDS , Н20 mQ, 20 % метанол. После переноса для проверки качества прохождения электрофореза и эффективности переноса мембрану окрашивали в красителе Ponceau S с последующей отмывкой в дистиллированной воде.

Блокирование мембраны

Для предотвращения неспецифического связывания антител с мембраной ее помещали в 3% раствор белка — бычего сывороточного альбумина с добавлением детергента Tween 20 (0,1 %) на 1 час при комнатной температуре.

Инкубирование с AT и детекция

Раствор первичных AT к искомому белку (АМФК и фосфо-АМФК (Cell signaling, США)) готовили в том же растворе, который использовался для блокирования. Мембрану инкубировали при температуре +4 °С в течение 12 часов в темноте, затем отмывали 3 раза по 10 мин в растворе фосфатно-солевого буфера с добавлением детергента Tween 20 (0,1 %). Для детекции использовали вторичные AT, конъюгированные с пероксидазой хрена. Инкубацию проводили 2 часа при комнатной температуре в темноте. После этого мембрану отмывали 2 раза по 10 мин в растворе фосфатно-солевого буфера с добавленим Tween 20 (0,1%) и 1 раз в чистом фосфатно-солевом буфере.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кравчук, Екатерина Никодимовна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алмазов, В.А. Метаболический сердечно-сосудистый синдром / В.А. Алмазов, Я.В. Благосклонная, Е.В. Шляхто и соавт. // С-Пб: Издательство СПбГМУ, 1999.-202 с.

2. Аметов, A.C. Сахарный диабет 2 типа. Проблемы и решения / A.C. Аметов, Е.В. Сокарева. - М.: Геотар-Медиа, 2011. - 704 с.

3. Балаболкин, М.И. Бигуаниды: антигипергликемическое и вазопротективное действия / М.И. Балаболкин, В.М. Креминская, Е.М. Клебанова // Consilium medicum. - 2003. - Т. 5. - № 9.

4. Баранов, В.Л. Ремоделирование сердца при диабетической нефропатии / В.Л. Баранов, O.A. Нагибович // Арт. гиперт. - 2003. - Т. 9. - № 6. - С. 215-217.

5. Берштейн, Л.М. Бигуаниды: экспансия в практическую онкологию (прошлое и настоящее) / Л.М. Берштейн. - СПб.: Эскулап, 2010. -144 с.

6. Бицадзе, Р. М. Метаболические особенности сердечно-сосудистой патологии у больных сахарным диабетом 2 типа / P.M. Бицадзе, В.В. Дорофейков, А.Г. Обрезан // Вестн. Санкт-Петербургского университета. — 2009. — Т. 11. - № 1. —С. 3-10.

7. Быстров, В. В. Эффективность тромболизиса и баллонной ангиопластики у больных с сочетанным инфарктом левого и правого желудочков сердца / В.

B. Быстров, В. В. Кучеров, А. С. Макаренко и соавт. // Клин. мед. - 2000. -Т. 78. - № 10. - С. 58-62.

8. Ворохобина, Н.В. Комбинированная сахароснижающая треапия. Применение новой фиксированной комбинации гликлазида и метформина у больных сахарным диабетом 2-го типа. / Н.В. Ворохобина, A.B. Кузнецова, Е.В. Арефьева и соавт. // Леч. Врач. - 2012. - №3. - С. 83-86.

9. Демидова, Т. Ю. Сосудистые осложнения сахарного диабета 2 типа за гранью гликемического контроля / Т.Ю. Демидова // Сах.д-т. - 2010. - № 3. -

C. 111.

10. Кисляк, О. А. Сахарный диабет 2 типа, артериальная гипертензия и риск сердечно-сосудистых осложнений / O.A. Кисляк, Т.О. Мышляева, Н.В. Малышева // Сах. д-т. - 2008. - № 1. - С.45.

11. Климов, А.Н. Атеросклероз. Проблемы патогенеза и терапии / А.Н. Климов, Е.В. Шляхто. - СПб.: Медицинская литература, 2006. - 246 с.

12. Кроненберг, Г. М. Эндокринология по Вильямсу. Сахарный диабет и нарушения углеводного обмена / Г.М. Кроненберг, Ш. Мелмед, К.С. Полонски и соавт. - М.: Рид Элсивер, 2010. - 437 с.

13. Нифонтов, Е.М. Устойчивость миокарда к ишемии и эффективность ишемического прекондиционирования при экспериментальном сахарном диабете / Е.М. Нифонтов, A.B. Сыренский, М.М. Галагудза и соавт. // Российский физиологический журнал. - 2006. - № 3. - С. 284-291.

14. Рябов, С. И. Внутренние болезни / С.И. Рябов, В.А. Алмазов, Е.В. Шляхто. -С-Пб.: Спецлит., 2001. - 861 с.

15. Северина, A.C. Роль дисфункции эндотелия в развитии диабетических макроангиопатий / A.C. Северина, H.A. Галицина, Е.В. Парфенова и соавт. -М.: Минздрав, 2007 - 20с.

16. Сунцов, Ю. И. Эпидемиология сахарного диабета и прогноз его распространенности в российской федерации / Ю.И. Сунцов, JI.J1. Болотская, О.В. Маслова и соавт. // Сах. д-т. - 2011. - №1. - С. 15.

17. Шляхто, Е.В. Кардиопротекция: фундаментальные и клинические аспекты / Е.В. Шляхто, H.H. Петрищев, М.М. Галагудза и соавт. - С-Пб.: ООО «Супервэйв Групп», 2013 - 399 с.

18. Шустов, С.Б. Влияние амарила на углеводный обмен и гемодинамику у больных сахарным диабетом 2 типа / С.Б. Шустов, Б.В. Ромашевский, А.Г. Лысенко И Сах. д-т. - 2001. - №4. - С. 42-44.

19. Ярек-Мартынова, И. Р. Сердечно-сосудистые заболевания у больных сахарным диабетом / И.Р. Ярек-Мартынова, М.В. Шестакова // СагсНоСоматика. - 2010. - №1. - С. 46-50.

20. Asagami, T. Metformin treatment lowers asymmetric dimethylarginine concentrations in patients with type 2 diabetes / T. Asagami, F. Abbasi, M. Stuelinger et al.// Metabolism. - 2002. - Vol. 51. - № 7. - P. 843-846.

21. Bagrov, Y.Y. Marinobufagenin, an Endogenous Inhibitor of a-1 Na/K-ATPase, Is a Novel Factor in Pathogenesis of Diabetes Mellitus / Y.Y. Bagrov, N.B. Manusova, I.A. Egorova et al. // Dokl. Biol. Sci. - 2005. - Vol. 404. - P. 333-337.

22. Bailey, C.J. Traditional plant medicines as treatments for diabetes / C.J Bailey, C. Day // Diabetes Care. - 1989. - Vol. 12 - P. 553-564.

23. Barreto-Torres, G. The Role of PPARa in Metformin-Induced Attenuation of Mitochondrial Dysfunction in Acute Cardiac Ischemia/Reperfusion in Rats / G. Barreto-Torres, R. Parodi-Rullan, S. Javadov // Int. J. Mol. Sci. - 2012. - Vol. 13. - № 6. - P. 7694-7709.

24. Baur, J.A. Resveratrol improves health and survival of mice on a high-calorie diet / J.A. Baur, K.J. Pearson, N.L. Price et al. // Nature. - 2006. - Vol. 444. - № 7117. -P. 337-342.

25. Berdanier, C.D. Effects of age, strain, and dietary carbohydrate on the hepatic metabolism of male rats / C.D. Berdanier, R.B. Tobin, V. DeVore // J. Nutr. -1979. - Vol. 109. - № 2. - P. 261-271.

26. Bestermann, W.H. Jr. The ADMA-Metformin Hypothesis: Linking the Cardiovascular Consequences of the Metabolic Syndrome and Type 2 / W.H. Bestermann Jr. // Diabetes. Cardiorenal. Med. - 2011. - Vol. 1. - № 4. - P. 211219.

27. Bhamra, G.S. Metformin protects the ischemic heart by the Akt-mediated inhibition of mitochondrial permeability transition pore opening / G.S. Bhamra, D.J. Hausenloy, S.M. Davidson et al.// Basic. Res. Cardiol. - 2008. - Vol. 103. - № 3. - P. 274-284.

28. Boyle, J.J. Macrophage activation in atherosclerosis: pathogenesis and pharmacology of plaque rupture / J.J. Boyle // Curr. Vase. Pharmacol. - 2005. -Vol. 3.-№ l.-P. 63-68.

29. Caballero, A.E. The differential effects of metformin on markers of endothelial activation and inflammation in subjects with impaired glucose tolerance: a placebo-controlled, randomized clinical trial / A.E. Caballero, A. Delgado, C.A. Aguilar-Salinas et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2004. - Vol. 89. - № 8. - P. 39433948.

30. Calvert, J.W. Acute metformin therapy confers cardioprotection against myocardial infarction via AMPK-eNOS-mediated signaling / J.W. Calvert, S. Gundewar, S. Jha et al. // Diabetes. - 2008. - Vol. 57. - P. 696-705.

31. Campbell, I.W. Metformin — life begins at 50 / I.W. Campbell // Br. J. Diabetes Vase. Dis. - 2007. - Vol. 7. - № 5. - P. 247-252.

32. Cavalher-Machado, S.C. The allergic inflammatory reaction in neonatal streptozotocininduced diabetic rats: evidence of insulin resistance and microvascular dysfunction / S.C. Cavalher-Machado, R.K. Cuman, J.L. Sartoretto et al. // Inflamm. Res. - 2008. - Vol. 57. - № 11. _ p. 535-541.

33. Chakraborty, A. Effect of metformin on oxidative stress, nitrosative stress and inflammatory biomarkers in type 2 diabetes patients / A. Chakraborty, S. Chowdhury, M. Bhattacharyya // Diabetes Res. Clin. Pract. - 2011. - Vol. 93. - № l.-P. 56-62.

34. Charles, M.A. Effect of weight change and metformin on fibrinolysis and the von Willebrand factor in obese nondiabetic subjects: the BIGPROl Study. Biguanides and the Prevention of the Risk of Obesity / M.A. Charles, P. Morange, E. Eschwege et al. // Diabetes Care. - 1998. - Vol. 21. - № 11. - P. 1967-1972.

35. Chen, Z.P. AMPactivated protein kinase phosphorylation of endothelial NO synthase / Z.P. Chen, K.I. Mitchelhill, B.J. Michell et al. // FEBS Lett. - 1999. -Vol. 443. - № 3. - P. 285-289.

36. Cerielo, A. Hyperglycemia counterbalances the antihypertensive effect of glutathione in diabetic patients: evidence linking hypertension and glycemia through the oxidative stress in diabetes mellitus / A. Cerielo, E. Motz, A. Cavarape et al. // J. Diabetes Complications. - 1997. - Vol.11. - № 4. - P. 250-255.

37. Clerk, L.H. The vasodilatory actions of insulin on resistance and terminal arterioles and their impact on muscle glucose uptake / L.H. Clerk, M.A. Vincent, J.R. Lindner et al. // Diabetes Metab. Res. Rev. - 2004. - Vol. 20. - № 1. - P. 3-12.

38. Contreras, C. Insulin resistance in penile arteries from a rat model of metabolic syndrome / C. Contreras, A. Sánchez, P. Martinez et al. // Br. J. Pharmacol. - 2010. - Vol. 161. - № 2. - P. 350-364.

39. Cusi, K. Insulin resistance differentially affects the PI 3-kinase- and MAP kinase-mediated signaling in human muscle / K. Cusi, K. Maezono, A. Osman et al.// Clin. Invest. - 2000. - Vol. 105. - № 3. - P. 311-320.

40. Davis, B.J. Activation of the AMP-activated kinase by antidiabetes drug metformin stimulates nitric oxide synthesis in vivo by promoting the association of heat shock protein 90 and endothelial nitric oxide synthase / B.J. Davis, Z. Xie, B. Viollet, M.H. Zou // Diabetes. - 2006. - Vol. 55. - № 2. - 496-505.

41. del Valle, H.F. Absence of ischemic preconditioning protection in diabetic sheep hearts: role of sarcolemmal KATP channel dysfunction / H.F. del Valle, E.C. Lascano, J.A. Negroni, A.J. Crottogini // Mol. Cell Biochem. - 2003. - Vol. 249. -P. 21 -30.

42. Desrois, M. Upregulation of eNOS and unchanged energy metabolism in increased susceptibility of the aging type 2 diabetic GK rat heart to ischemic injury / M. Desrois, K. Clarke, C. Lan et al.// Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. - 2010. -Vol. 299. - № 5. - P. 1679-1686.

43. El Messaoudi, S. Metformin therapy in diabetes: the role of cardioprotection / S. El Messaoudi, G.A. Rongen, N.P. Riksen // Curr. Atheroscler. Rep. - 2013. - Vol. 15.-№4.-P. 314.

44. Emerging Risk Factors Collaboration. Diabetes mellitus, fasting blood glucose concentration, and risk of vascular disease: a collaborative meta-analysis of 102 prospective studies / Emerging Risk Factors Collaboration, N. Sarwar, P. Gao et al. // Lancet. - 2010. - Vol. 375. - № 9733. -P. 2215-2222.

45. Enderle, M. D. et al. Preserved endothelial function in IDDM patients, but not in NIDDM patients, compared with healthy subjects / M.D. Enderle, N. Benda, R.M. Schmuelling et al. // Diabetes Care. - 1998. - Vol. 21. - № 2. - P. 271-277.

46. Esteghamati, A. Effects of metformin on markers of oxidative stress and antioxidant reserve in patients with newly diagnosed type 2 diabetes: A randomized clinical trial / A. Esteghamati, D. Eskandari, H. Mirmiranpour et al. // Clin. Nutr. - 2013. - Vol. 32. - 2. - P. 179-185.

47. Ewart, M.A. AMPK and vasculoprotection / M.A. Ewart, S. Kennedy // Pharmacol. Ther. - 2011. - Vol. 131. - № 2. - P. 242-53.

48. Fanghànel, G. Effects of metformin on fibrinogen levels in obese patients with type 2 diabetes / G. Fanghànel, U. Silva, L. Sanchez-Reyes et al. // Rev. Invest. Clin. -1998.-Vol. 50. - № 5. - 89-94.

49. Forlani, S. Preoperative shift from glibenclamide to insulin is cardioprotective in diabetic patients undergoing coronary artery bypass surgery / S. Forlani, F. Tomai, R. De Paulis et al. // J. Cardiovasc. Surg. (Torino). - 2004. -Vol. 45. - № 2. - P. 117-122.

50. Formoso, G. Decreased in vivo oxidative stress and decreased platelet activation following metformin treatment in newly diagnosed type 2 diabetic subjects / G. Formoso, E.A. De Filippis, N. Michetti et al. // Diabetes Metab. Res. Rev. - 2008. -Vol. 24.-№3.-P. 231-237.

51. Fryer, L.G. The Anti-diabetic drugs rosiglitazone and metformin stimulate AMP-activated protein kinase through distinct signaling pathways / L.G. Fryer, A. Parbu-Patel, D. Carling // J. Biol. Chem. - 2002. - Vol. 277. - № 28. - P. 25226-25232.

52. Fujii, N. Regulation of glucose transport by the AMP-activated protein kinase / N. Fujii, W.G. Aschenbach, N. Musi et al. // Proc. Nutr. Soc. - 2004. - Vol. 63. - № 2 -P. 205-210.

53.Garvey W.T. Effects of diabetes on myocardial glucose transport system in rats: implications for diabetic cardiomyopathy/ W.T. Garvey, D. Hardin, M. Juhaszova, J.H. Dominguez // Am. J. Physiol. - 1993. - Vol. 264. - P. 837-844.

54. Gogg, S. Increased MAPK activation and impaired insulin signaling in subcutaneous microvascular endothelial cells in type 2 diabetes: the role of endothelin-1 / S. Gogg, U. Smith, P.A. Jansson // Diabetes. - 2009. - Vol. 58. - № 10.-P. 2238-2245.

55. Goto, Y. Production of spontaneous diabetic rats by repetition of selective breeding / Y. Goto, M. Kakizaki, N. Masaki // Tohoku J. Exp. Med. - 1976. - Vol. 119. - № l.-P. 85-90.

56. Grant, P.J. Metformin reduces circulating factor VII concentrations in patients with type 2 diabetes mellitus / P.J. Grant // Thromb. Haemost. - 1998. - Vol. 80. - № 1. -P. 209-10.

57. Grant, P.J. Diabetes mellitus as a prothrombotic condition / P.J. Grant // J. Intern. Med. - 2007. - Vol. 262. - № 2. - P. 157-172.

58. Gregorio, F. Poorly controlled elderly Type 2 diabetic patients: the effects of increasing sulphonylurea dosages or adding metformin / F. Gregorio, F. Ambrosi, S. Manfrini et al. // Diabet. Med. - 1999. - Vol. 16. - № 12. - P. 1016-1024.

59. Hadden, D.R. Goat's rue - French lilac - Italian fitch - Spanish sainfoin: gallega officinalis and metformin: the Edinburgh connection / D.R. Hadden // J. R. Coll. Physicians Edinb. - 2005. - Vol. 35. - № 3. - 258-260.

60. Hadour, G. Improved myocardial tolerance to ischaemia in the diabetic rabbit / G. Hadour, R. Ferrera, L. Sebbag et al.// J. Mol. Cell. Cardiol. - 1998. - Vol. 30. - № 9.-P. 1869-1875.

61. Haffner, S.M. Mortality from coronary artery disease in subject with type 2 diabetes and nondiabetic subjects with and without myocardial infarction / S.M. Haffner, S. Lehto, T. Ronnemaa // N. Engl. J. Med. - 1998. - Vol. 339. - P. 229234.

62. Hardie, D.G. AMP-activated/SNFl protein kinases: conserved guardians of cellular energy / D.G. Hardie // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. - 2007. - Vol. 8. - № 10. - P. 774-785.

63. Hausenloy, DJ. Glimepiride treatment facilitates ischemic preconditioning in the diabetic heart / D.J. Hausenloy, A.M. Wynne, M.M. Mocanu, D.M. Yellon // J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther. - 2013. - Vol. 18. - № 3. - P. 263-269.

64. Hsueh W.A., Cardiovascular risk continuum: implications of insulin resistance and diabetes / W.A. Hsueh, R.E. Law // Am. J. Med. - 1998. - Vol. 105. - № 1A. - P. 4-14.

65. Hurst R.T. Increased incidence of coronary atherosclerosis in type 2 diabetes mellitus: mechanisms and management / R.T. Hurst, R.W. Lee // Ann. Intern. Med. - 2003. - Vol. 139. - № 10. - P. 824-834.

66. Ishibashi K., Inhibitory effects of insulin on intracellular calcium and aggregatory response of platelets are impaired in hypertensive subjects with insulin resistance / K. Ishibashi, S. Kageyama, T. Sakurai et al. // Hypertens. Res. - 1997. - Vol. 20. -P. 225-231.

67. Islam, M.S. Experimental rodent models of type 2 diabetes: a review / M.S. Islam, D.T. Loots // Methods Find. Exp. Clin. Pharmacol. - 2009. - Vol. 31. - № 4. - P. 249-61.

68. Jansson, P. A. The effect of metformin on adipose tissue metabolism and peripheral blood flow in subjects with NIDDM / P.A. Jansson, H.S. Gudbjornsdóttir, O.K. Andersson, P.N. Lonnroth // Diabetes Care. - 1996. - Vol. 19. - № 2. - P. 160-164.

69. Jialal, I. Management of hypertriglyceridemia in the diabetic patient /1. Jialal, W. Amess, M. Kaur // Curr. Diab. Rep. - 2010. - Vol. 10. - № 4. - P. 316-320.

70. Joslin, E.P. The outlook for the diabetic / E.P. Joslin // Cal. West. Med. - 1927. -Vol. 26.-№3.-P. 328-331.

71. Kannel, W.B. Diabetes and glucose tolerance as risk factors for cardiovascular disease: the Framingham study / W.B. Kannel, D.L. McGee // Diabetes Care. -1979. - Vol. 2. - № 2. - P. 120-126.

72. Kao, J. Relation of metformin treatment to clinical events in diabetic patients undergoing percutaneous intervention / J. Kao, J. Tobis, R.L. McClelland et al. // Am. J. Cardiol. - 2004. - Vol. 93. - № 11. - № 1347-1350.

73. Kashiwagi, A. Glycation, oxidative stress, and scavenger activity: glucose metabolism and radical scavenger dysfunction in endothelial cells / A. Kashiwagi, T. Asahina, Y. Nishio et al. // Diabetes. - 1996. - Vol. 45. - № 3. - P. 84-86.

74. Katakam, P.V. Metformin improves vascular function in insulin-resistant rats / P.V. Katakam, M.R. Ujhelyi, M. Hoenig, A.W. Miller // Hypertension. - 2000. -Vol. 35. - №1. - P. 108-112.

75. Kawabata, H. Cardioprotection by metformin is abolished by a nitric oxide synthase inhibitor in ischemic rabbit hearts / H. Kawabata, K. Ishikawa // Hypertens. Res. - 2003. - Vol. 26. - № 1. - P. 107-110.

76. Keeler, R.F. Individual animal susceptibility and its relationship to induced adaptation or tolerance in sheep to Galega officinalis L / R.F. Keeler, D.C. Baker, J.O. Evans // Vet. Hum. Toxicol. - 1988. - Vol. 30. - № 5. - P. 420-423.

77. Kim, Y.W. Metformin Restores the Penile Expression of Nitric Oxide Synthase in High Fat-Fed Obese Rats / Y.W. Kim, S.Y. Park, J.Y. Kim, J.Y. Huh // J. Androl. -2007. - Vol. 26. - № 3. - P. 34-38.

78. Kim, F. TNF-alpha inhibits flow and insulin signaling leading to NO production in aortic endothelial cells / F. Kim, B. Gallis, M.A. Corson // Am. J. Physiol. Cell. Physiol. - 2001. - Vol. 280. - № 5. - P. 1057-1065.

79. King, G. L. The cellular and molecular mechanisms of diabetic complications / G. L. King, M. Brownlee // Endocrinol. Metab. Clin. North. Am. - 1996. - Vol. 25. -№ 2. - P. 255-270.

80. Kingma, J.G. Jr. Timely administration of AICA riboside reduces reperfusion injury in rabbits / J.G. Kingma Jr., D. Simard, J.R. Rouleau // Cardiovasc. Res. -1994. - Vol. 28. - № 7. - P. 1003-1007.

81. Kloner, R. A. Cardiac protection during acute myocardial infarction: where do we stand in 2004? / R.A. Kloner, S.H. Rezkalla // J. Am. Coll. Cardiol. - 2004. - Vol. 44. - № 2. - P. 276-286

82. Koo, S.H. The CREB coactivator TORC2 is a key regulator of fasting glucose metabolism / S.H. Koo, L. Flechner, L. Qi et al. // Nature. - 2005. - Vol. 437. - № 7062.-P. 1109-1111.

83. Kristiansen, S. B. Ischaemic preconditioning does not protect the heart in obese and lean animal models of type 2 diabetes / S.B. Kristiansen, B. Lofgren, N.B. Stottrup et al. // Diabetologia. - 2004. - Vol. 47. - № 10. - P. 1716-1721.

84. Kudo, N. High rates of fatty acid oxidation during reperfusion of ischemic hearts are associated with a decrease in malonyl-CoA levels due to an increase in 5'-AMP-activated protein kinase inhibition of acetyl-CoA carboxylase / N. Kudo, A.J. Barr, R.L. Barr et al. // J. Biol. Chem. - 1995. - Vol. 270. - № 29. - P. 1751317520.

85. Kudo, N. Characterization of 5AMP-activated protein kinase activity in the heart and its role in inhibiting acetyl-CoA carboxylase during reperfusion following ischemia / N. Kudo, J.G. Gillespie, L. Kung // Biochim. Biophys. Acta. - 1996. -Vol. 1301.-№ 1-2.-P. 67-75.

86. Lamanna C. Effect of metformin on cardiovascular events and mortality: a metaanalysis of randomized clinical trials / C. Lamanna, M. Monami, N. Marchionni, E. Mannucci // Diabetes Obes. Metab. - 2011. - Vol. 13. - № 3. - P. 221-228.

87. Langendorff, O. Untersuchungen am uberlebenden Saugetierherzen / O. Langendorff // Pflugers. Arch. - 1895. - Vol. 61. - P. 291-332.

88. Le Devehat, C. Impaired hemorheological properties in diabetic patients with lower limb arterial ischaemia / C. Le Devehat, T. Khodabandehlou, M. Vimeux // Clin. Hemorheol. Microcirc. - 2001. - Vol. 25. - № 2. P. 43-48.

89. Legtenberg, R.J. Metformin improves cardiac functional recovery after ischemia in rats / R.J. Legtenberg, R.J. Houston, B. Oeseburg, P. Smits // Horm. Metab. Res. -2002. - Vol. 34. - P. 182-185.

90. Lee, Y.S. Berberine, a natural plant product, activates AMP-activated protein kinase with beneficial metabolic effects in diabetic and insulinresistant states /Y.S. Lee, W.S. Kim, K.H. Kim et al. // Diabetes. - 2006. - Vol. 55. - № 8. - P. 22562264.

91. Leiris, J. The isolated rat heart: a model for studying myocardial hypoxia or ischemia / J. Leiris, D.P. Harding, S. Pestre // Basic Res. Cardiol. - 1984. - Vol. 79.-№3.-P. 315-323.

92. Lemkes, B.A. Hyperglycemia: a prothrombotic factor? / B.A. Lemkes, J. Hermanides, J.H. Devries et al.// J. Thromb. Haemost. - 2010. - Vol. 8. - № 8. - P. 1663-1669.

93. Lexis C.P. Metformin in non-diabetic patients presenting with ST elevation myocardial infarction: rationale and design of the glycometabolic intervention as adjunct to primary percutaneous intervention in ST elevation myocardial infarction (GIPS)-III trial / C.P. Lexis, I.C. van der Horst, E. Lipsic et al. // Cardiovasc. Drugs Ther. - 2012. - Vol. 26. - № 5. - P. 417-426.

94. Li, L. Signaling pathways involved in human vascular smooth muscle cell proliferation and matrix metalloproteinase-2 expression induced by leptin: inhibitory effect of metformin / L. Li, J.C. Mamputu, N. Wiernsperger, G. Renier // Diabetes. - 2005. - Vol. 54. - № 7. - P. 2227-2234.

95. Lim, C.T. AMPK as a mediator of hormonal signaling / C.T. Lim, B. Kola, M. Korbonits // J. Mol. Endocrinol. - 2010. - Vol. 44. - № 2. - P. 87-97.

96. Liu, Y. Streptozotocin-induced non-insulin-dependent diabetes protects the heart from infarction / Y. Liu, J.D. Thornton, M.V. Cohen et al. // Circulation. - 1993. -Vol. 88.-№ 3. - P. 1273-1278.

97. Lobato, N.S. Improvement of metabolic parameters and vascular function by metformin in obese non-diabetic rats / N.S. Lobato, F.P. Filgueira, G.N. Hagihara et al. // Life Sci. - 2012. - Vol. 90. - № 5-6. - P. 228-235.

98. Lucis, O.J. The status of metformin in Canada / O.J. Lucis // Can. Med. Assoc. J. -1983. - Vol. 128. - № 1. - № 24-26.

99. Luiken, J.J. Contraction-induced fatty acid translocase/CD36 translocation in rat cardiac myocytes is mediated through AMP-activated protein kinase signaling / J.J. Luiken, S.L. Coort, J. Willems et al. // Diabetes. - 2003. - Vol. 52. - № 7. - P. 1627-1634.

100. Ma, G. Protection against myocardial ischemia/reperfusion injury by short-term diabetes: enhancement of VEGF formation, capillary density, and activation of cell survival signaling / G. Ma, M. Al-Shabrawey, J.A. Johnson et al. // Naunyn. Schmiedebergs. Arch. Pharmacol. - 2006. - Vol. 373. - № 6. - P. 415-427.

101.Mamputu, J.C. Metformin inhibits monocyte adhesion to endothelial cells and foam cell formation / J.C. Mamputu, N. Wiernsperger, G. Renier // Br. J. Diabetes Vase. Dis. - 2003. - Vol. 3. - № 4. - P. 302 -310.

102.Marfella, R. Metformin improves hemodynamic and rheological responses to L-arginine in NIDDM patients / R. Marfella, R. Acampora, G. Verrazzo et al. // Diabetes Care. - 1996. - Vol. 19. - № 9. - P. 934-939.

103.Marsin, A.S. Phosphorylation and activation of heart PFK-2 by AMPK has a role in the stimulation of glycolysis during ischaemia / A.S. Marsin, L. Bertrand, M.H. Rider et al. // Curr. Biol. -2000. - Vol. 10. - № 20. - P. 1247-1255.

104. Mather, K.J. Improved endothelial function with metformin in type 2 diabetes mellitus / K.J. Mather, S. Verma, T.J. Anderson // J. Am. Coll. Cardiol. - 2001. -Vol. 37. - № 5. - P. 1344-1350.

105.Mathew, V. Outcomes in patients with diabetes mellitus undergoing percutaneous coronary intervention in the current era: a report from the Prevention of REStenosis with Tranilast and its Outcomes (PRESTO) trial / V. Mathew, B.J. Gersh, B.A. Williams et al. // Circulation. - 2004. - Vol. 109. - № 4. - P. 476-480.

106. Mazzone, T. Cardiovascular disease risk in type 2 diabetes mellitus: insights.from mechanistic studies / T. Mazzone, A. Chait, J. Plutzky // Lancet. - 2008. - Vol. 371. - № 9626. - P. 1800-1809.

107.Muller, S. Action of metformin on erythrocyte membrane fluidity in vitro and in vivo / S. Muller, S. Denet, H. Candiloros // Eur. J. Pharmacol. - 1997. - Vol. 337. -№ l.-P. 103-110

108. Nagata, D. The role of AMP-activated protein kinase in the cardiovascular system / D. Nagata, Y. Hirata // Hypertens. Res. - 2010. - Vol. 33. - № 1. - P. 22-28.

109. Nagi, D.K. Effects of metformin on insulin resistance, risk factors for cardiovascular disease, and plasminogen activator inhibitor in NIDDM subjects. A study of two ethnic groups / D.K. Nagi, J.S. Yudkin // Diabetes Care. - 1993. -Vol. 16. - № 4. - P. 621-629.

110. Napoli, C. Pharmacological modulation, preclinical studies, and new clinical features of myocardial ischemic preconditioning / C. Napoli, A. Pinto, G. Cirino // Pharmacol. Ther. - 2000. - Vol. 88. - № 3. - P. 311-33198.

111.Negroni, J.A. Glibenclamide action on myocardial function and arrhythmia incidence in the healthy and diabetic heart / J.A. Negroni, E.C. Lascano, H.F. del Valle HF // Cardiovasc. Hematol. Agents Med. Chem. - 2007. - Vol. 5. - № 1. - P. 43-53.

112.Nieszner, E. Influence of diabetic state and that of different sulfonylureas on the size of myocardial infarction with and without ischemic preconditioning in rabbits / E. Nieszner, I. Posa, E. Kocsis et al. // Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. - 2002. -Vol. 110. -№ 5. -P. 212-218.

113.Nishida, H. Glimepiride treatment upon reperfusion limits infarct size via the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway in rabbit hearts / H. Nishida, T. Sato, M. Nomura // J. Pharmacol. Sci. - 2009. - Vol. 109. - № 2. - P. 251-256.

114. Ogawa, K. Mitiglinide, a Novel Oral Hypoglycemic Agent, Preserves the Cardioprotective Effect of Ischemic Preconditioning in Isolated Perfused Rat Hearts / K. Ogawa, K. Ikewaki, I. Taniguchi et al. // Int. Heart J. - 2007. - Vol. 48. - № 3. - P. 337-345.

115. Omar, M.A. Adenosine-mediated inhibition of 5'-AMP-activated protein kinase and p38 mitogen-activated protein kinase during reperfusion enhances recovery of left ventricular mechanical function / M.A. Omar, S. Verma, A.S. Clanachan // J. Mol. Cell Cardiol. - 2012. - Vol. 52. - № 6. - P. 1308-1318.

116. Ooie T. Ischemia-induced translocation of protein kinase C-e mediates cardioprotection in the streptozotocin-induced diabetic rat / T. Ooie, N. Takahashi, T. Nawata et al. / Circulation Journal. - 2003. - Vol. 67. - № 11. - P. 955-961.

117. Paiva, M. Metformin prevents myocardial reperfusion injury by activating the adenosine receptor / M. Paiva, N.P. Riksen, S.M. Davidson // J. Cardiovasc. Pharmacol. - 2009. - Vol. 53. - № 5. - P. 373-378.

118.Paiva, M.A. Transitory activation of AMPK at reperfusion protects the ischaemic-reperfused rat myocardium against infarction / M.A. Paiva, L.M. Goncalves, L.A. Providencia et al. // Cardiovasc. Drugs Ther. - 2010. - Vol. 24. - P. 25-32.

119. Paulson D.J. The diabetic heart is more sensitive to ischemic injury / D.J. Paulson // Cardiovasc. Res. - 1997. - Vol. 34. - № 1. - P. 104-112.

120. Pavlovic, D. Effect of four-week metformin treatment on plasma and erythrocyte antioxidative defense enzymes in newly diagnosed obese patients with type 2 diabetes / D. Pavlovic, R. Kocic, G. Kocic // Diabetes Obes. Metab. - 2000. - Vol. 2.-№4._ p. 251-256.

121. Pons, S. Regular treadmill exercise restores cardioprotective signaling pathways in obese mice independently from improvement in associated co-morbidities / S. Pons, V. Martin, L. Portal //J. Mol. Cell. Cardiol. - 2013. - Vol. 54. - P. 82-89.

122. Ravingerova, T. Acute diabetes modulates response to ischemia in isolated rat heart / T. Ravingerova, R. Stetka, K.Volkovova // Mol. Cell. Biochem. - 2000. -Vol. 210. - № 1-2. - P. 143-151.

123.Richter, E.A. Exercise, GLUT4, and Skeletal Muscle Glucose Uptake / E.A. Richter, M. Hargreaves // Physiol. Rev. - 2013. - Vol. 93. - № 3. - P.993-1017.

124. Riddle, M. C. Effects of intensive glucose lowering in the management of patients with type 2 diabetes mellitus in the Action to Control Cardiovascular Risk in Diabetes (ACCORD) trial / M.C. Riddle // Circulation. - 2010. - Vol.122. - №> 8. -P. 844-846.

125. Rodrigues B. Metabolic disturbances in diabetic cardiomyopathy / B. Rodrigues, M.C. Cam, J.H. McNeill // Mol. Cell. Biochem. - 1998. - Vol. 180. - № 1-2. - P. 53-57.

126. Ross, R. Atherosclerosis-an inflammatory disease / R. Ross // N. Engl. J. Med. -1999. - Vol. 340. - № 2. - P. 115-126.

127.Ruderman, N.B. Interleukin-6 regulation of AMP-activated protein kinase. Potential role in the systemic response to exercise and prevention of the metabolic syndrome / N.B. Ruderman, C. Keller, A.M. Richard et al. // Diabetes. - 2006. -Vol. 55.-P. 48-54.

128. Russell, R.R. 3rd. AMP-activated protein kinase mediates ischemic glucose uptake and prevents postischemic cardiac dysfunction, apoptosis, and injury / R.R. Russell 3rd, J. Li, D.L. Coven - J. Clin. Invest. - 2004. - Vol. 114. - № 4. - P. 495-503.

129. Schäfers, R.F. Do effects on blood pressure contribute to improved clinical outcomes with metformin? / R.F. Schäfers // Diabetes Metab. - 2003. - Vol. 29. -P. 62-70.

130. Scheen, A.J. Clinical pharmacokinetics of metformin / A.J. Scheen // Clin. Pharmacokinet. - 1996. - Vol. 30. - № 5. - P. 359-371.

131. Schummer C.M. Dysregulated pyruvate dehydrogenase complex in Zucker diabetic fatty rats / C.M. Schummer, U. Werner, N. Tennagels // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. - 2008. - Vol. 294. - № 1. - P. 88-96.

132. Seymour A.M. The effects of hypertrophy and diabetes on cardiac pyruvate dehydrogenase activity / A.M. Seymour, J.C. Chatham // J. Mol. Cell Cardiol. -1997. - Vol. 29. - № 10. - P. 2771-2778.

133. Shirwany, N.A. AMPK in cardiovascular health and disease / N.A. Shirwany, M.H. Zou // Acta. Pharmacol. Sin. - 2010. - Vol. 31. - № 9. - P. 1075-1084).

134. Sobel, B.E. Profibrinolytic, antithrombotic, and antiinflammatory effects of an insulin-sensitizing strategy in patients in the Bypass Angioplasty Revascularization Investigation 2 Diabetes (BARI 2D) trial / B.E. Sobel, R.M. Hardison, S. Genuth // Circulation. - 2011. - Vol. 124. - № 6. - P. 695-703.

135.Solskov, L. Metformin induces cardioprotection against ischaemia/reperfusion injury in the rat heart 24 h after administration / L. Solskov, B. Lofgren, S.B. Kristiansen et al // Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. - 2008. - Vol. 103. - P. 82-87.

136. Soraya, H. Short-term treatment with metformin suppresses toll like receptors (TLRs) activity in isoproterenol-induced myocardial infarction in rat: are AMPK and TLRs connected? / H. Soraya, S. Farajnia, S. Khani et al. // Int. Immunopharmacol. - 2012. - Vol.14. - № 4. - P.785-791.

137. Sprague, A. H. Inflammatory cytokines in vascular dysfunction and vascular disease / A.H. Sprague, R.A. Khalil // Biochem. Pharmacol. - 2009. - Vol. 78. - № 6. - P. 539-552.

138. Stapleton, D. Mammalian AMP-activated protein kinase subfamily / D. Stapleton, K.I. Mitchelhill, G. Gao et al. // J. Biol. Chem. - 1996. - Vol. 271. - P. 611-614.

139. Steiler, T.L. Effect of hyperglycemia on signal transduction in skeletal muscle from diabetic Goto-Kakizaki rats / T.L. Steiler, D. Galuska, Y. Leng // Endocrinology. -2003. - Vol. 144. - P. 5259 -5267.

140. Steiner, M. Increased levels of soluble adhesion molecules in type 2 (non-insulin dependent) diabetes mellitus are independent of glycaemic control / M. Steiner, K.M Reinhardt, B. Krammer et al. // Thromb. Haemost. - 1994. Vol. 72. - № 6. -P. 979-984.

141. Steinberg, G.R. AMPK in Health and Disease / G.R. Steinberg, B.E. Kemp // Physiol. Rev. - 2009. - Vol. 89. - № 3. - P. 1025-1078.

142. Steinberg, H.O. Obesity/insulin resistance is associated with endothelial dysfunction. Implications for the syndrome of insulin resistance / H.O. Steinberg, H. Chaker, R. Learning et al. // J. Clin. Invest. - 1996. - Vol. 97. - № 11. - P. 2601-2610.

143. Sterne, J. Du Nouveau dans les antidiabetiques. La NN dimethylamino guanyl guanidine (N.N.D.G.) / J. Sterne // Maroc. Med. - 1957. - Vol. 36. - P. 1295-1296.

144. Superko, H. R. Effect of fluvastatin on low-density lipoprotein peak particle diameter / H.R. Superko, R.M. Krauss, C. DiRicco // Am J Cardiol. - 1997. - Vol. 80. -№ l.-P. 78-81.

145. Takada, J. Neonatal streptozotocin-induced diabetes mellitus: a model of insulin resistance associated with loss of adipose mass / J.Takada, M.A. Machado, S.B. Peres // Metabolism. - 2007. - Vol. 56. - № 7. - P. 977-984.

146. Tatsumi, T. Energy metabolism after ischemic preconditioning in streptozotocin-induced diabetic rat hearts / Tatsumi T., Matoba S„ Kobara M. et al. // J. Am. Coll. Cardiol. - 1998.- Vol. 31. - P. 707 -715.

147. The ADVANCE Collaborative Group. Intensive Blood Glucose Control and Vascular Outcomes in Patients with Type 2 Diabetes / The ADVANCE Collaborative Group // N. Engl. J. Med. - 2008. - Vol. 358. - № 24. - P. 25602572.

148. Trovati, M. Influence of insulin and of insulin resistance on platelet and vascular smooth muscle cell function / M. Trovati, G. Anfossi // J. Diabetes Complications. - 2002. - Vol. 16. - № 1. - p. 35-40.

149.Tsang, A. Preconditioning the diabetic heart: the importance of Akt phosphorylation / A. Tsang, D.J. Hausenloy, M.M. Mocanu et al. // Diabetes. -2005. - Vol. 54. - № 8. - P. 2360-2364.

150.UK Prospective Diabetes Study (UKPDS) Group. Effect of intensive blood-glucose control with metformin on complications in overweight patients with type 2 diabetes (UKPDS 34) / UK Prospective Diabetes Study (UKPDS) Group // Lancet. - 1998. - Vol. 352. - P. 854-865.

151. Whittington, H.J. The diabetic heart: too sweet for its own good? / H.J. Whittington, G.G. Babu, M.M. Mocanu et al. // Cardiol. Res. Pract. - 2012. - Vol. 2012. - ID 8456

152. Whittington, H.J. Chronic metformin associated cardioprotection against infarction: not just a glucose lowering phenomenon / H.J. Whittington, A.R. Hall, C.P. McLaughlin et al. // Cardiovasc. Drugs. Ther. - 2013. - Vol. 27. - № 1. - P. 516.

153. Wiernsperger, N.F. Microcirculation in insulin resistance and diabetes: more than just a complication / N.F. Wiernsperger, E. Bouskela // Diabetes Metab. - 2003. -Vol. 29. - P. 77-87.

154. Wilcock C. Accumulation of metformin by tissues of the normal and diabetic mouse / C. Wilcock, C.J. Bailey // Xenobiotica. - 1994. - Vol. 24. - № 1. - p. 4957.

155. Wild, S. Global prevalence of diabetes: estimates for the year 2000 and projections for 2030 / S. Wild, G. Roglic, A. Green et al. // Diabet. Care. - 2004. - Vol. 27. -№5.-P. 1047-1053.

156. Wu, M.S. Effect of metformin on carbohydrate and lipoprotein metabolism in NIDDM patients / M.S. Wu, P. Johnston, W.H. Sheu et al. // Diabetes Care. -1990.-Vol. 13.-№ l.-p. 1-8.

157. Wulffele, M.G. The effect of metformin on blood pressure, plasma cholesterol and triglycerides in type 2 diabetes mellitus: a systematic review / M.G. Wulffele, A. Kooy, D. de Zeeuw // J. Intern. Med. - 2004. - Vol. 256. - № 1. - P. 1-14.

158. Yamashita, T. Leptin receptor of Zucker fatty rat performs reduced signal transduction / T. Yamashita, T. Murakami, M. Iida et al. // Diabetes. - 1997. - Vol. 46. -№6.-P. 1077-1080.

159. Yin, M. Metformin improves cardiac function in a nondiabetic rat model of post-Mi heart failure / M. Yin, I.C. van der Horst, J.P. van Melle // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. - 2011. - Vol. 301. - № 2. - P. 459-468.

160. Zhao J.L. Chronic pretreatment of metformin is associated with the reduction of the no-reflow phenomenon in patients with diabetes mellitus after primary angioplasty for acute myocardial infarction / J.L. Zhao, C.M. Fan, Y.J. Yang et al. // Cardiovasc Ther. - 2013. - Vol. 31. - № 1. - P. 60-64.

161. Zhao, Y. Diabetes mellitus is associated with shortened activated partial thromboplastin time and increased fibrinogen values / Y. Zhao, J. Zhang, J. Zhang // PLoS. One. - 2011. - Vol. 6. - № 1 - el6470.

162. Zhou, G. Role of AMP-activated protein kinase in mechanism of metformin action / G. Zhou, R. Myers, Y. Li et al. // J. Clin. Invest. - 2001. - Vol. 108. - № 8. - P. 1167-1174.

163.Zeng, G. Roles for insulin receptor, PI3-kinase, and Akt in insulin-signaling pathways related to production of nitric oxide in human vascular endothelial cells / G. Zeng, F.H. Nystrom, L.V. Ravichandran et al. // Circulation.- 2000. - Vol. 101. -№ 13.-P. 1539-1545.

164. Zou, M.H. Activation of the AMP-activated protein kinase by the anti-diabetic drug metformin in vivo. Role of mitochondrial reactive nitrogen species / M.H. Zou, S.S Kirkpatrick, B.J. Davis et al. // J. Biol. Chem. - 2004. - Vol. 279. - № 42. - P.43940-43951.

165. Zhou, G. Role of AMP-activated protein kinase in mechanism of metformin action / G. Zhou, R. Myers, Y.J. Li et al. // Clin. Invest. - 2001. - Vol. 108. - № 8. - P. 1167-1174.