Влияние культур, обогащенных стволовыми клетками, на сперматогенез при экспериментальном двухстороннем крипторхизме тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.40, кандидат медицинских наук Охоботов, Дмитрий Александрович

• Охоботов, Дмитрий Александрович
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Охоботов, Дмитрий Александрович

1. Введение.стр.

2. Цель и задачи работы.стр.

3. Глава 1. Обзор литературы.стр.

4. Глава 2. Материалы и методы.стр.

5. Глава 3. Определение степени нарушений, обратимости и восстановления сперматогенеза при экспериментальном двухстороннем абдоминальном крипторхизме.стр.

6. Глава 4. Влияние ксенотрансплантации культур, обогащенных фетальными стволовыми и прогениторными клетками различных видов, на функциональное состояние крипторхированных яичек.стр.

8. Глава 5. Осложнения экспериментальной работы.стр.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние культур, обогащенных стволовыми клетками, на сперматогенез при экспериментальном двухстороннем крипторхизме»

Актуальность темы

Во всем мире проблема инфертильности имеет не только важное медицинское, но социальное значение. Демографические показатели России и многих стран мира свидетельствуют об увеличении частоты инфертильности у мужчин, достигающей в среднем от 30 до 50 %. Доля «мужского» фактора бесплодия в общей доле бесплодных браков составляет по некоторым данным от 30 до 40 % (Божедомов В.А., 2001, Тер-Аванесов Г.В., 2000).

По данным некоторых авторов за последние десятилетия во всем мире отмечается прогрессирующее снижение качества спермы у мужчин, обеспечивающее их фертильность. Так при анализе эякулята в фиксированной мужской популяции с 1973 по 1992 годы содержание сперматозоидов в эякуляте ежегодно снижалось на 2,1 % (Auger J., 1997). За последние полвека отмечалось снижение показателей спермограммы почти в 3 раза (Irvine S, 1996). Частота бесплодия в браке колеблется от 8-29%. По оценке специалистов, в Европе бесплодны около 10% супружеских пар, в США - 8-15%, в России от 8 до 17,5% и в настоящее время нет тенденции к снижению (Кулаков В.И., 2005).

На фертильность мужчин оказывают влияние различные социальные и демографические факторы, такие как загрязнение окружающей среды, стрессы, привычные интоксикации и другие (Курило Л.Ф., Гришина Е.М., 2006). Полиэтиологичность мужского бесплодия, сложность развития заболевания, функциональная взаимосвязь мужских гонад со всеми системами и органами, создают большие трудности в разработке адекватных методов лечения сперматогенеза (Тер-Аванесов Г.В., 2000).

В связи с увеличением числа бесплодных браков, на фоне увеличения доли мужского бесплодия, актуальной задачей на сегодняшний день, является разработка новых методов лечения инфертильности у мужчин. В последние годы, появившиеся инновационные методики лечения, такие как нанотехнологии, генная инженерия, терапия стволовыми клетками, и успехи их применения, о которых периодически сообщается в мировой печати, заслуживают пристального внимания и могут рассматриваться в качестве перспективных методов для лечения мужского бесплодия. Имеются попытки применения культур, обогащенных различными видами стволовых клеток (сингенных, аутологичных и.т.д.) для восстановления фертильности у мужчин, результаты которых часто являются предметом дискуссии и служат предметом дальнейшего изучения (Ogawa Т, et al., 2003, Shinohara Т., 2006).

Сперматогенез это процесс, осуществляющийся у мужчин на протяжении всей жизни. Обусловлен он делениями спермальных стволовых клеток, имеющих по некоторым данным неограниченный потенциал деления (Russell L.D., 1990). Это предположение основано на том, что эти клетки имеют высокий потенциал дифференцировки, самообновления, и быстрого деления.

Эффективность трансплантации, при пересадке культур, обогащенных сперматогенными стволовыми клетками у животных, в различных вариантах по разным данным, колеблется от 18 до 80% (Brinster R.L.,2002; Nikolaos S., 2004).

Большая разница в показателях, полученная при оценке результатов этих исследований, отсутствие стандартных методик выделения, культивирования трансплантации и оценки эффективности результатов обуславливает актуальность создания модели для изучения эффекта трансплантации обогащенными клеточными культурами или препаратами, содержащими стволовые клетки разных видов, а также для оценки возможности восстановления фертильности и безопасности такой процедуры.

На сегодняшний день публикации по этим вопросам единичны. Все вышеперечисленное определяет актуальность темы, как с научной, так и с практической точки зрения.

Цель работы: Улучшение сперматогенеза у мужчин путем определения влияния ксенотрансплантации клеточных культур, обогащенных стволовыми клетками различных видов, при экспериментальном крипторхизме.

Задачи исследования:

1. Определить степень нарушений, обратимости и восстановления процессов сперматогенеза на модели абдоминального двухстороннего крипторхизма у экспериментальных животных.

2. Изучить фертильность экспериментальных животных на фоне сформированного двухстороннего абдоминального крипторхизма, оценить изменения и возможности восстановления после его устранения.

3. Оценить особенности клинического эффекта ксенотрансплантации культур, обогащенных стволовыми клетками различных видов на всех этапах эксперимента.

4. Исследовать воздействие ксенотрансплантации культур, обогащенных фетальными стволовыми и прогениторными клетками человека, на репродуктивную способность экспериментальных животных.

5. Сформулировать критерии эффективности ксенотрансплантации обогащенных клеточных культур при лечении инфертильности, обусловленной формированием абдоминального крипторхизма у экспериментальных животных.

Научная новизна

Дана комплексная оценка экспериментальному, линейному, управляемому, абдоминальному, двухстороннему крипторхизму, который может быть использован в качестве биологической модели для оценки эффекта новых методов лечения инфертильности в эксперименте, в том числе при ксенотрансплантации культур, обогащенных человеческими фетальными прогениторными и стволовыми клетками различных видов. Продемонстрирована безопасность ксенотрансплантации клеточных культур в эксперименте у животных. Отмечено восстановление показателя фертильности при ксенотрансплантации культур, обогащенных человеческими фетальными прогениторными и стволовыми клетками разных групп в поздние сроки наблюдения.

Доказано что гипогонадизм у крыс развивается вследствие непосредственного поражения тестикулярной ткани при абдоминальном крипторхизме и характеризуется гипоплазией яичек, повышением уровней гонадотропинов в крови и снижением уровня общего тестостерона.'

Ксенотрансплантация культур обогащенных стволовыми и прогениторными клетками у животных приводит к более быстрому и более полноценному восстановлению сперматогенеза и общего тестостерона в сравнении с контрольной группой.

Установлено, что нормальные показатели уровня общего тестостерона у крыс после трансплантации обогащенных клеточных культур обеспечиваются за счет гиперфункции имеющейся стабильной популяции клеток Лейдига, с признаками нормохромии ядер и средним количеством хромафинных зерен. Доказано, что при отсутствии лечения относительная нормализация уровней гонадотропинов и общего тестостерона обеспечивается, за счет количественных показателей гиперплазированной популяции клеток Лейдига, находящихся в крайнем функциональном напряжении.

Обосновано, что трансплантация обогащенных клеточных культур усиливает эффективность восстановления герминогенной и сперматогенной функции яичек.

Практическая значимость работы

Усовершенствована модель экспериментального двухстороннего абдоминального крипторхизма. Изучены особенности повреждения и восстановления сперматогенеза у экспериментальных животных на разных сроках. Установлены сроки восстановления фертильности и синтеза общего тестостерона у животных при экспериментальном крипторхизме. Разработана оптимальная техника тканевой трансплантации под капсулу яичка и доказана ее эффективность и безопасность для животных. Проведена оценка эффективности восстановления сперматогенеза при экспериментальном крипторхизме. после введения обогащенных клеточных культур различных видов. Исключено влияние операционного стресса на фертильность экспериментальных животных.

Связь с планом НИР ФГУ «НИИ урологии Росмедтехнологий»

Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ (НИР) ФГУ «НИИ урологии Росмедтехнологий», а также с планами НИР Проблемной комиссии №24.00 Межведомственного Научного Совета по «Уронефрологии» РАМН и Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации - № государственной регистрации 0120.0 807031.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 36 отечественных и 100 зарубежных источников литературы. Работа иллюстрирована 12 таблицами и 22 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Урология», Охоботов, Дмитрий Александрович

106 Выводы.

1. Экспериментально вызванное угнетение сперматогенеза при формировании двухстороннего абдоминального крипторхизма развивается вследствие непосредственного поражения тестикулярной ткани, что приводит к развитию первичного гипогонадизма и характеризуется гипоплазией яичек, повышением уровней гонадотропинов в крови и снижением уровня общего тестостерона. После устранения абдоминального крипторхизма у экспериментальных животных происходит частичное восстановление сперматогенного эпителия с уменьшением гиперплазии клеток Лейдига.

2. Стрессовое воздействие оперативного вмешательства не оказывает влияния на фертильность экспериментальных животных, так как животные хорошо переносят фантомные (ложные) операции, оставаясь фертильными к 21 суткам. Двухсторонний абдоминальный крипторхизм в течение 14 суток приводит к выраженной инфертильности у крыс. После его устранения происходит частичное восстановление фертильности в отдаленные сроки максимального наблюдения, не ранее 72 суток, при этом, чем больше экспозиция, тем меньше вероятность восстановления этой функции.

3. Интратестикулярное введение обогащенных клеточных культур стимулирует усиление гормональной функции клеток Лейдига. При отсутствии клеточной ксенотрансплантации нормальные показатели общего тестостерона достигаются за счет выраженной гиперплазии клеток Лейдига с признаками функционального истощения.

4. Трансплантация обогащенных клеточных культур, является безопасным методом, который усиливает эффективность восстановления герминогенной и сперматогенной функции яичек. Использование данного метода приводит к усилению собственных регенераторных возможностей, более быстрому, чем в контроле, восстановлению сперматогенеза и показателя фертильности с достаточно высокими индексами.

Наиболее выраженное восстановление фертильности у крыс оказывает трансплантация обогащенной культуры клеток фетального яичка. Влияние ксенотрансплантации культур обогащенных стволовыми и прогениторными клетками других видов на сперматогенез выражено меньше. Ксенотрансплантация культур, обогащенных стволовыми и прогениторными клетками различных видов, приводит к эффективному восстановлению утраченных при крипторхизме функций яичка, но зависит от степени повреждения тканей, которая определяется временем воздействия. Прогноз ксенотрансплантации обогащенных клеточных культур у крыс с абдоминальным крипторхизмом, сроком более 21 суток - неблагоприятен.

В отдаленные сроки у животных в тканях семенников были выявлены клетки трансплантированной культуры, окрашенные бромдиоксиуридином, а клетки меченные специфическими моноклональными антителами выявлены не были, что свидетельствует о том, что трансплантированные человеческие клетки длительно выживают в семенниках у крыс, стимулируя собственный сперматогенез животных. Сперматозоидов, обладающих человеческими антигенами, при идентификации моноклональными кроличьими антителами к суммарному антигену сперматозоидов человека у крыс выявлено не было. После ксенотрансплантации обогащенных клеточных культур в семенных канальцах происходит снижение индекса сперматогенеза, что говорит об активном увеличении форменных элементов сперматогенеза по отношению к общему количеству-клеток Сертоли.

108

Практические рекомендации

1. Экспериментальная модель двухстороннего абдоминального крипторхизма является удобной и достаточной для изучения и внедрения новых методов лечения инфертильности и гипергонадотропного гипогонадизма.

2. Клинический эффект восстановления функции яичек при ксенотрансплантации обогащенных клеточных культур у экспериментальных животных зависит от длительности воздействия на яички при формировании абдоминального крипторхизма. В связи с этим использование данного метода при сроке экспериментального крипторхизма более 21 суток неэффективно.

3. Эффекта восстановления фертильности у крыс после ксенотрансплантации обогащенными клеточными культурами следует ожидать не ранее, чем через 72 дня после операции.

4. Наиболее опасными осложнениями при формировании двухстороннего абдоминального крипторхизма являются кровотечения и передозировка эфирного наркоза, поэтому необходимо уделять пристальное внимание контролю гемостаза и глубины эфирного наркоза.

5. Ксенотрансплантация осуществляется путем перфорации белочной оболочки тонкой иглой и введением клеточной культуры в субкапсулярное пространство. При этом игла должна направляться параллельно капсуле с одновременной гидропрепаровкой. Это максимально снижает риск повреждения семенных канальцев.

6. При формировании абдоминального крипторхизма яички животных должны располагаться в глубине латеральных каналов как можно дальше от белой линии, что исключает их повреждение при повторном доступе.

7. При формировании фиксирующей яичко спайки необходимо захватывать паратестикулярную клетчатку. При этом соединительнотканная спайка формируется более грубой и исключает миграцию яичка в мошонку.

8. Полученные в работе данные могут служить базовой моделью для изучения стимулирующего влияния ксенотрансплантации обогащенных клеточных культур на сперматогенез человека.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Охоботов, Дмитрий Александрович, 2008 год

1. Артюхин А. Репродуктивная ангиоандрология. Москва, 2006

2. Артюхин A.A. Зарайский Е.И.; Способ лечения больных с нарушением мужской половой функции методом трансплантации. №2200010 10.03.03

3. Артюхин A.A. Зарайский Е.И.; Романов А.И. Способ лечения больных с нарушением мужской половой функции методом трансплантации. Патент РФ на изобретение №2200012, 10.03.2003

4. Берсенев A.B., Крашенинников М.Е., Онищенко H.A., Клеточная терапия дислипидемий и атеросклероза, (аналитический обзор). Вестник трансплантологии и искусственных органов 2001; 2: 46-53.

5. Берсенев A.B. Клеточная трансплантология: история, современное состояние и клеточные перспективы. Обзор литературы. Клеточная трансплантология и тканевая инжененрия. №1,2005, стр. 49-56.

6. Божедомов В.А., Лоран О.Б., Николаева М.А., Сухих Г.Т. Влияние антиспермальных антител на мужскую репродуктивную функцию. // Андрология и генитальная хирургия. 2000. - №2.- С.25-33.

7. Божедомов В.А., Лоран О.Б., Сухих Г.Т. Этиология и патогенез мужского аутоиммунного бесплодия. Часть 2. // Андрология и генитальная хирургия. 2001. -№1. - С.78-87.

8. Боярский К.Ю. Старение репродуктивной системы и результативность вспомогательных репродуктивных технологий (обзор литературы)// Проблемы репродукции. 1996.-№4. -с.37-42.

9. Временная инструкция о порядке исследований в области клеточных технологий и их использования в учреждениях здравоохранения. Экспертный Совет Минздрава России (18.04.2002)

10. Дендеберов Е.С. Культуральная аллотрансплантация неонатальных эндокриноцитов семенников. Дисс. На соиск. Уч.ст.к.м.н., Москва, 1993

11. Дендеберов Е.С., Кирпатовский И.Д., Михалева Л.М.; Новые подходы к лечению крипторхизма, сочетающегося с вторичным гипогонадизмом. Проблемы репродукции №2 2001 год

12. Джарбусынов Б.У., Мужское бесплодие (диагностика и лечение), Диссертация на соискание уч.ст дмн, 1983

13. Зарайский Е.И.; Артюхин A.A.; Романов А.И. Способ получения первичной культуры клеток семенника, обогащенной клетками Лейдига Патент РФ на изобретение №2220200, 27.10.2003

14. Калашникова Е.А., Антигены сперматозоидов и антиспермальные антитела, ассоциированные с бесплодием. Обзор литературы. (Sperm antigens and antisperm antibodies associated with infertility), Москва Проблемы репродукции , Том 10, 4, 2004

15. Кирпатовский И.Д., Макажанов О.Х., Баскаков В.В. Андрологические аспекты хирургического лечения крипторхизма. Урология и нефрология 1986; 1: 116-119.

16. Ковалевский К.Л., Лабораторное животноводство. Практическое руководство по разведению, содержанию и применению лабораторных животных. Издательство АМН СССР, Москва, 1951.

17. Кулаков В.И., Бесплодный брак, издание под.ред., 2005

18. Курило Л.Ф. Некоторые этические вопросы технологии эмбриональных стволовых клеток, проблемы репродукции, №3, 2000.

19. Курило Л.Ф., Гришина Е.М. Роль структурных хромосомных аномалий в развитии патозооспермии у мужчин с бесплодием. №4, 2006, с. 36-41

20. Лищук В.А., Мосткова Е.В., «Стволовые клетки: исследования и практика». Валеология, №2, 2003.

21. Мираков К.К., с соавт. Лечение крипторхизма у детей. Прил. к журн. Андрология и генитиальная хирургия. Тезисы научных трудов Международного конгресса по андрологии, Москва, 2006

22. Моисеев А.Я., Самарин ДМ, Кустов СМ и др. Опыт применения трансплантационной фетальной терапии в гинекологической практике при лечении рубцово-спаечных процессов. Бюлл. Эксп.Биол.Мед. 1998, 126 Прилож 1:129.

23. Райцина С.С. Травма семенника и аутоиммунитет.- М.: Медицина, 1970.- 183 с.

24. Репин B.C., Сухих Г.Т., Медицинская клеточная биология, 1998 г.

25. Рунович АА, Курильская ТЕ, Никифоров СБ и др.: Эффективность фетальной терапии в комплексном лечении ишемической болезни сердца. Материалы 2 Межрегиональной научно-практической конференции (г.Омск, 27-28 июня 2000 г.): 76-80.

26. Сергеев B.C., Иммунологические свойства стромальных (мезенхимальных) стволовых клеток. Клеточные технологии, 04,2005.

27. Симодейко A.A. Рациональные подходы хирургического лечения и реабилитации больных крипторхизмом. Автореф. д-ра мед. наук. М 1994.

28. Стрункин ДН, Самарин ДМ, Сидоров СВ. Трансплантация кроветворных фетальных клеток в лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Материалы 2 Межрегиональной научно-практической конференции (г.Омск, 27-28 июня 2000 г.): 194-195.

29. Сухих Г.Т., Трансплантация фетальных клеток в медицине: настоящее и будущее. Трансплантация фетальных тканей и клеток. Сборник научных трудов. Приложение 1 к журналу «Бюллетень экспериментальной биологии и медицины», Москва, 1998.

30. Тер-Аванесов Г.В. Андрологические аспекты бесплодного брака. Практ. Руководство. М. 2000.

31. Филатов В.Ф., Загорцева Л.Л., Яковцева А.Ф., Желудева В.И., Журнал болезней уха, горла и носа, №5, 1978, с.72.

32. Хеффнер Л., Половая система в норме и патологии: Учеб. Пособ./ Перс. С англ. А.Г.Гунина.- М.ГЭОТАР-МЕД 2003, с.28.

33. Шумаков В.И., Блюмкин В.И., Скалецкий Н.Н. Трансплантация островковых клеток поджелудочной железы. М.: 1995.

34. Юнда И.Ф., Имшинецкая Л.П.; К вопросу об эндокринных нарушениях при искусственном крипторхизме у крыс.- В сб.: Физиология, биохимия и патология эндокринной системы. Матер. Респ. Конф. К. 1969, 231-232. '

35. Ярыгин В.Н., Клеточные технологии медицине. Докл. на Президиуме РАМН, 29.05.2002.

36. Aggarwal S. and Pittenger М. Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses. Blood 2005; 105: 1815-1822

37. Almici C., Carbo-Stella C., Mangoni L. et al. Biologic and phenotypic analisis of early hematopoietic progenitor cells in umbilical cord blood// Blood.- 1997.- Vol.90, N.10.-P.339b (4274).

38. Arcese W., Aversa F., Bandini G. et al. Clinical use of allogeneic hematopoietic stem cells from sources other than bone marrow// Haematologica.- 1998.- Vol. 83.- N. 2.- P. 159-182.

39. Atkinson K., Clinical Bone Marrow and Blood Stem Cell Transplantation. "Cambridge University Press" 2003; 3rd ed., 2000.

40. Auger J ; Evolution of male fertility in the last twenty years; Contracept Fertil Sex. 1997 Jul-Aug;25(7-8):524-9.

41. Baccarani U, Adani G.L, Sanna A. et al. Portal vein thrombosis after intraportal hepatocytes transplantation in a liver transplant recipient, Transpl Int 2005; 186): 750.

42. Baksh D., L. Song, R. S. Tuan, Adult mesenchymal stem cells: characterization, differentiation, and application in cell and gene therapy, J. Cell. Mol. Med. Vol 8, No 3,2004 pp. 301-316

43. Bartholomew A, et al. Mesenchymal stem cells suppress lymphocyte proliferation in vitro and prolong skin graft survival in vivo. Exp Hematol 2002; 30: 42-48

44. Bertolini F., Battaglia M. et al. Placental blood collection: Effects on Newborns// Blood.-1995.- Vol.85.-P.3361-3362

45. Bianchi G., Banfi A., Mastrogiacomo M., Notaro R., Luzzatto L., Cancedda R., Quarto R., Ex vivo enrich ment of mesenchymal cell progenitors by fibroblast growth factor 2, Exp. Cell Res., 287: 98-105, 2003

46. Bianco P., Riminucci M., Gronthos S., Robey P.G., Bone marrow stromal stem cells: nature, biology, and potential applications, Stem Cells, 19: 180-192, 2001

47. Brinster R & Zimmermann J., Spermatogenesis following male germ cell transplantation. Proc Natl Acd Sci USA 91:11298-11302, 1994.

48. Brinster R.L.; Germline stem cell transplantation and transgenesis; Science. 2002 Jun 21; 296(5576):2174-6

49. Brittberg M., Tallheden T. Sjogren-Jansson a. et al. Autologous chondrocytes used for articular cartilage repair: an update. Clin Orthop Retat Res 2001; 331: 337.

50. Carlsen E, Petersen JH, Andersson AM, Skakkebaek NE; Effects of ejaculatory frequency and season on variations in semen quality; Fertil Steril. 2004 Aug;82(2):358-66

51. Castro-Malaspina H., Gay R.E., Resnick G., Kapoor N., Meyers P., Chiarieri D., McKenzie S., Broxmeyer H.E., Moore M.A., Characterization of human bone marrow fibroblast colony-forming cells (CFU-F) and their progeny, Blood, 56: 289-301, 1980

52. Clouthier D, Avarbock M, Maika S, Hammer RE, Brinster RL.; Rat spermatogenesis in mouse testis. Nature 381: 418-421, 1996.

53. Cremades N, Bernabeu R, Barros A, Sousa M.; In vitro maturation of round spermatids using co-culture on Vero cells. Hum Reprod 14: 1287-1293, 1999.

54. De Kretser DM, Kerr JB. The cytology of the testis. In: Knobil E, Neill JD (eds.), The Physiology of Reproduction. New York: Raven Press; 1994: 1177-1290

55. Dejbakhsh-Jones S, et al. Extrathymic maturation of alpha beta T cells from hemopoietic stem cells. J Immunol 1995; 155: 3338-3344

56. Di Nicola M, et al. Human bone marrow stromal cells suppress T-lymphocyte proliferation induced by cellular or nonspecific mitogenic stimuli. Blood 2002; 99: 38383843

57. Djouad F, et al. Immunosuppressive effect of mesenchymal stem cells favors tumor growth in allogeneic animals. Blood 2003; 102: 3837-3844

58. Dobrinski I, Ogawa T, Avarbock MR, Brinster RL.Computer assisted image analysis to assess colonization of recipient seminiferous tubules by spermatogonial stem cells from transgenic donor mice. Mol Reprod. Dev 1999; 53:142-148.

59. Doi M., Nagano A., Nakamura Y., Molecular cloning and characterization of a novel gene, EMILIN-5, and its possible involvement in skeletal development, Biochem.Biophys. Res. Commun., 313: 888-893, 2004

60. Ferguson J., Scothorne R.J. Extended survival of pancreatic islet allografts in the testis of guinea-pigs. J Anat. 1977 Sep; 124 (Pt l):l-8

61. Fisch H, Ikeguchi EF, Goluboff ET; Worldwide variations in sperm counts. Urology.- 1996 Dec;48(6):909-11.

62. Friedenstein A.J., Osteogenetic activity of transplanted transitional epithe lium, Acta Anat. (Basel), 45: 31-59, 1961.

63. Friedenstein AJ, Petrakova KV, Kurolesova AI, Frolova GP . Heterotopic of bone marrow.Analysis of precursor cells for octeogenic and hematopoeietic tissue; Transplantation 1968, v.6: P.230-47.

64. Gangji V., Hauzeur J.P. Treatment of osteonecrosis of the femoral head with implantation of autologous bone-marrow celts. Surgical technique. J Bone Joint Surg Am 2005; 87 Suppl 1.

65. Gratwohl A., Hermans J., Baldmero H.// Bone Marrow Tranplantant.- 1996- Vol. 17.-P.137-148.

66. Guerin J.F.; Testicular tissue cryoconservation for prepubertal boy: indications and feasibility; Gynecol Obstet Fertil. 2005 Oct;33(10):804-8

67. Harada S., Rodan G.A., Control of osteoblast function and regulation of bone mass, Nature, 423: 349-355,2003

68. Head J.R., Neaves WB, Billingham RE. Immune privilege in the testis. I. Basic parameters of allograft survival. Transplantation. 1983 Oct;36(4):423-31.

69. Hill J.R., Dobrinski I.; Male germ cell transplantation in livestock; Reprod Fertil Dev. 2006; 18(1-2): 13-8

70. Huckins C. The spermatogonial stem cell population in adult rats. I.Their morphology, proliferation and maturation. Anat Rec 1971; 169: 533-558.

71. Ilio K.Y., Grayhack J.T., Lee C. Experimental cryptorchidism inhibited growth of the rat ventral prostate. J Androl 2000 May-Jun; 21(3): 438-43.

72. Irvine S, Cawood E, Richardson D, MacDonald E, Aitken J. ; Evidence of deteriorating semen quality in the United Kingdom: birth cohort study in 577 men in Scotland over 11 years; BMJ. 1996 Feb 24;312(7029):467-71.

73. Isojima S. Recent studies of sperm immobilizing antibodies in the sera of sterile women with unknown cause. In: Mohri H, Ed. Proc 6th Annual Meeting of Japan Soc Immunol Reprod, Hayashi-Kobe, Co. Ltd., Tokyo, Japan, pp9-17, 1992.

74. Jahnukainen K, Ehmcke J, Schlatt S.; Testicular xenografts: a novel approach to study cytotoxic damage in juvenile primate testis 2006 Apr l;66(7):3813-8.

75. Jiang F.X.; Male germ cell transplantation: promise and problems; Reprod Fertil Dev. 2001;13(7-8):609-14

76. Jiang X, et al. Human mesenchymal stem cells inhibit differentiation and function of monocyte-derived dendritic cells. Blood (prepublished online Feb 3, 2005); DOI 10.1182/blood-2004-02-0586

77. Jorgensen C, et al. Engineering mesenchymal stem cells for immunotherapy. Gene Therapy 2003; 10: 928-931.

78. Kawakami E., Hori T., Tsutsui T. Function of contralateral testis after artificial unilateral cryptorchidism in dogs. J Vet Med Sci 1999 Oct; 61(10): 1107-11.

79. Kliesh S., Behre H.M., Nieshlag E. Recombinant human follicle-stimulating hormone and human chorionic gonadotropin for induction of spermatogenesis in a hypogonadotrophik male. Fertil.Steril. 1996, 66, 164.

80. Kobayashi N., Okitsu T., Lakey J.R., Tanaka N. The current situation in human pancreatic islet transplantation: problems and prospects. JArcif Organs. 2004; 7: 1.

81. Kogler G., Sarnowski A., Wernet P. Volume reduction of cord blood by Hetastarch for long-term cell banking// Bone Marrow Transplant.- 1998.- Vol. 22.- Suppl. 1.- P. S.14-15.

82. Koller M.R., Manchel I., Palsson B.O., Importance of parenchymal:stromal cell ratio for the ex vivo reconstitution of human hematopoiesis, Stem Cells, 15: 305-313,1997

83. Kondziolka D., Wechsler L. Goldstein S. et al. Transplantation of cultured human neuronal cells for patients with stroke. Neurology 2000; 55: 565

84. Kudo FA, et al. Autologous transplantation of peripheral blood endothelial progenitor cells (CD34+) for therapeutic angiogenesis in patients with critical limb ischemia. Int Angiol 2003; 22; 344-348

85. Kuznetsov S.A., Krebsbach P.H., Satomura K., Kerr J., Riminucci M., Benayahu D., Robey P.G., Single-colony derived strains of human marrow stromal fibroblasts form bone after transplantation in vivo, J. Bone Miner. Res., 12: 1335-1347, 1997

86. Lazarus H.M., Koc O.N., Devine S.M. et al. Cotransplantetion of HLA-identical sibling culture-expanded mesenchymal stem cells and hematopoietic stem cells in hematologic malignancy patients. Biot Blood Marrow Transplant 2005: 11 (5): 389.

87. Le Blanc K, et al. HLA expression and immunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem cells. Exp Hematol 2003; 31: 890-896

88. Lee M.S. LJII M., Makkar R.R. Stem cell transplantation in myocardial infarction. Rev Cardiovasc Med 2004; S: 82.

89. Lindvalt O., Bjorklund A. Cell Therapy in Parkinson's Disease. Neuron* 2004; 1:3B2.

90. Lue Y, Erkkila K, Liu PY, Ma K, Wang C, Hikim AS, Swerdloff RS. Fate of bone marrow stem cells transplanted into the testis: potential implication for men with testicular failure. Am J Pathol. 2007 Mar;170(3):899-908.

91. Marshak D.R., Gardner R.L. and Gottlieb D., Stem Cell Biology. Gold Spring Harbor: Laboratory Press, 2002. - 544 p.

92. Mei-Hui Tai, Chia-Cheng Chang, L. Karl Olson, and James E. Trosko. Oct.4 expression in adult human stem cells: evidence in support of the stem cell theory of carcinogenesis. Carcinogenesis doi:10.1093.

93. Miura M, Miura Y, Padilla-Nash HM, et al. Accumulated chromosomal instability in murine bone marrow mesenchymal stemcells leads to malignant transformation. Stem Cells 2005 Nov 10; E.pub.

94. Nagano M., Patrizio P.,Brinster R.L.; Long-term survival of human spermatogonial stem cells in mouse testes.; Fertil Steril. 2002 Dec; 78(6): 1225-33

95. Niehans P, Die Zellulartherapie. Verlag von Urban & Schwarzenberg. Munhen- Berlin, 1954.

96. Nikolaos S., Apostolos K., Xenophon G., Ikuo M.; How far are ICSI procedures using human spermatozoa generated into animal testicles ? Micro- and macro-concequences of germ cell transplantation techniques. Male infertility today , 4,2004.

97. Odorico J.S., Kaufman D.S., and Thomson J.A. Multilineage differentiation from human embryonic stem cell lines // Stem Cells. 2001. - Vol. 19. - P. 193-204.

98. Ohl D.A., Naz R.K. Infertility due to antisperm antibodies. Urology 1995; 46: 591-602.

99. Ohta H, Yomogida K, Dohmae K, Nishimune Y.;Regulation of proliferation and differentiation In spermatogonial stem cells: the role of c-kit and Its ligand SCF. Development 127: 2125-2131, 2000.

100. Orlic D., Hill J.M., Arai A.E. Stem cells for myocardial regeneration // Circ. Res. -2002.-Vol. 91.-P. 1092-1102.

101. Orth JM. Cell biology of testicular development in the fetus and neonate. In: Desjardins C, Ewing LL (eds.), Cell and Molecular Biology of the Testis. New York: Oxford University Press; 1993: 3-42

102. Oatley J.M.,de Avila D.M., Reeves J.J., McLean D.J.; Spermatogenesis and germ cell transgene expression in xenografted bovine testicular tissue; Biol Reprod. 2004 Aug;71 (2) :494-501.

103. Pittenger M.F., Mackay A.M., Beck S.C., Jaiswal R.K., Douglas R., Mosca J.D., Moorman M.A., Simonetti D.W., Craig S., Marshak D.R., Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells, Science, 284: 143-147, 1999.

104. Potten C.S., Ellis JR, Adult small intestinal stem cells: identification, location, characteristics, and clinical applications; Ernst Schering Res Found Workshop. 2006; (60): 81 -98

105. Rassoulzadegan M, Paquis-Flucklinger V, Bertino B, Sage J, Jasin M, Miyagawa K, Van Heyningen V, Besmer P, Cuzin F.;Transmeiotic differentiation of male germ cells ; in culture. Cell 75: 997-1006, 1993.

106. Rayfer J. Surgical and hormonal-therapy for cryptochidism an overviev, HORMONE RESEARCH, 1988,30(4-5): 139-143

107. Rubio D, Garcia-Castro J, Martin MC, et al. Spontaneous human adult stem cell transformation. Cancer Res 2005; 65: 3035-9

108. Russell LD, Ettlin RA, SinhaHikim AMammalian spermatogenesis. In: Histological and Histopathological Evaluation of the testis. P, Clegg ED (eds.). Clearwater, FL: Cache River Press; 1990: 1-40.

109. Scadden D.T., The stem-cell niche as an entity of action. Nature. Vol. 441, 29 june 2006.

110. Schlatt S, von Schonfeldt V, Nieschlag E. Germ cell transplantation in the male: animal studies with a human perspectiveHum Fertil (Camb). 1999;2 (2): 143-148.

111. Schofield R. The relationship between the spleen colony-forming cell and the haemopoietic stem cell. Blood Cells 1978 4:7-25

112. Schwartz R.H., A cell culture model for T lymphocyte clonal anergy. Science 1990; 248: 1349-1356

113. Shamblott M.J.,J. Gaerhart et al.Derivation of pluripotent stem cells from cultured human primordial germ cells; Proc.Natl.Acad.Sci.US; 1998,v.95, P.13726-31.

114. Shinohara T., Orwig K.E., Avarbock M.R., Brinster R.L.; Restoration of Spermatogenesis in Infertile Mice by Sertoli Cell Transplantation; BIOLOGY OF REPRODUCTION 68, 1064-1071 (2003)

115. Singh S.K., Hawkins C., Clarke I.D., et al. Identification of human brain tumour initiating cells. Nature 2004; 432: 396-401

116. Song L., Chau L., Sakamoto Y., Nakashima J., Koide M., Tua n R.S., Electric field-induced molecular vibration for noninvasive, high-efficiency DNA transfection, Mol. Ther., 9: 607-616,2004

117. Strauer B.E. and Kornowski R. Stem cell therapy in perspective // Circulation. 2003. -Vol. 107.-P. 929-934.

118. Suzuki N, Withers HR.Exponential decrease during ageing and random lifetime of mouse spermatogonial stem cells. Science 1978; 202: 1214-1215.

119. Tateishi-Yuyama E, Matsubara H, Murohara T, et al. Therapeutic angiogenesis for patients with limb ischaemia by autologous transplantation of bone-marrow cells: a pilot study and a randomized controlled trial. Lancet 2002; 360: 427-435

120. Teiji O. Treatment for limb ulcer with severe ischemia: therapeutic angiogenesis by autologous transplantation of bone-marrow. Wound Repair Regen. 2004; 12; 1: A5

121. Thomson J. et al. Embryonic stem cell lines derived from human blastocyst; Science; 1998, v.282, P.l 145-47.

122. Verfaille C. medical Promise of Adult Stem Cell Research (Present and Projected) // The Presidents Councill of Bioethics 3d meeting. 2002.

123. Yulliet P.R. Greeley M., Hslloran S.M. et all. lntra-coronary arterial injection of mesenchymal stromal cells and microinf a ration in dogs. Lancet 2004; 363: 783.

124. Watson 0. Keller G.S., Lacombe V. et al, Autologous fibroblasts for treatment of facial rhytids and dermal depressions. Arch Facial Plast. Surg 1090: 1: 165.

125. Young-Sup Yoon, Park J.S., Tkebuchava T, et al. Unexpected severe calcification after transplantation of bone marrow cells in acute myocardial infarction Ore 0004; 109: 3154.

126. Zhang C, Wang L.L, Song C., Jin H.M. Allotransplantation of spermatogonial stem cells in KM mice.; Zhonghua Nan Ke Xue. 2003 Sep; 9(6):417-20

127. Zhang Z., Shao S., Meistrich M.L.; Irradiated mouse testes efficiently support spermatogenesis derived from donor germ cells of mice and rats; J Androl. 2006 May-Jun; 27(3):365-75.

128. Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

129. Трансплантация стволовых клеток при лечении мужского бесплодия. // Вторая Всероссийская конференция «Мужское здоровье», тезис, С.56. (Камалов A.A., Сухих Г.Т., Ефремов Е.А., Охоботов Д.А.);

130. Стволовые клетки и их использование в современной клинической практике. (Обзор литературы). // Врачебное сословие, 2007, №4, с. 39-46. (Камалов A.A., Ефремов Е.А., Охоботов Д.А.);

131. Иммунологические факторы бесплодия и антигены сперматозоидов. // Медицинские науки, 2007, №4, с. 31-42. (Охоботов Д.А., Зарайский Е.И., Павлова Г.В., Камалов A.A.);

132. Трансплантация сперматогенных стволовых клеток в эксперименте и клинической практике (аллогенная, ксеногенная, сингенная). // Аспирант и соискатель, 2007 -№5 (42)- с.108-119. (Охоботов Д.А., Камалов A.A., Зарайский Е.И., Павлова Г.В.);

133. Стволовые клетки и их использование в клинической практике. (Обзор литературы). Медицинские науки, 2007, №6, с.24-41. (Охоботов Д.А., Павлова Г.В., Зарайский Е.И., Камалов A.A.);

134. P.A., Зарайский Е.И., Камалов А.А, Кирпатовский В.И., Плотников Е.Ю., Павлова Г.В., Охоботов Д.А.);

135. Стволовые клетки и их использование в клинической практике. (Обзор литературы). // Медицинские науки, 2007, №6, с. 24-41. (Охоботов Д.А., Павлова Г.В., Зарайский Е.И., Камалов A.A.);

136. Перспективы развития высокотехнологической медицинской помощи пациентам андрологического профиля. // IV Российский конгресс «Мужское здоровье», 12-14 ноября 2008 г, тезис, с.6-7 (Камалов A.A., Ефремов Е.А., Охоботов Д.А., Мельник Я.И.)