Влияние химиотерапии на систему апоптоза и клиничекский ответ при хроническом лимфолейкозе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.21, кандидат наук Захаров Сергей Геннадьевич

• Захаров Сергей Геннадьевич
• кандидат наук
• 2019

Оглавление диссертации кандидат наук Захаров Сергей Геннадьевич

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Клиническая и молекулярно-биологическая характеристика хронического лимфолейкоза

1.2. Процессы апоптоза в опухолевых клетках при ХЛЛ

1.3. Влияние химиотерапии на экспрессию генов внешнего и внутреннего путей апоптоза при ХЛЛ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Диагностика ХЛЛ

2.2. Клиническая характеристика больных ХЛЛ

2.3. Исследование экспрессии генов внешнего пути апоптоза методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) с применением специфических праймеров к генам

Глава 3. Экспрессия генов апоптоза у больных с впервые выявленным хроническим лимфолейкозом в сравнении с клиническими проявлениями болезни и ответом на RFC-терапию

3.1. Уровень экспрессии генов внешнего пути апоптоза и клинические проявления впервые выявленном хроническом лимфолейкозе

3.2. Оценка влияния ритуксимаб+флударабин+циклофосфан (RFC ) программы на уровень экспрессии генов внешнего пути апоптоза

3.3. Анализ взаимосвязи уровня экспрессии генов внешнего пути апоптоза после проведенного курса RFC терапии в сравнении с клиническими данными

Глава 4. Экспрессия генов внешнего пути апоптоза у больных резистентным/рецидивирующим хроническим лимфолейкозом в сравнении с клиническими проявлениями болезни и ответом на терапию ритуксимабом и бендамустином (КБ)

4.1 Общая характеристика больных с резистентным/рецидивирующим ХЛЛ

4.2 Интенсивность уровня экспрессии генов внешнего пути апоптоза и клиническая характеристика больных резистентным/рецидивирующим хроническим лимфолейкозом

4.3. Эффективность противорецидивной программы КБ в подгруппах больных с различной интенсивностью уровня экспрессии генов внешнего пути апоптоза

4.4 Анализ уровня экспрессии генов внешнего пути апоптоза до и после проведения курса ПХТ у больных с резистентным/рецидивирующим хроническим лимфолейкозом

Заключение

Выводы:

Практические рекомендации

Список сокращений

СПИСОК ЛИТЕРАТРУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние химиотерапии на систему апоптоза и клиничекский ответ при хроническом лимфолейкозе»

Актуальность темы

Хронический лимфолейкоз ХЛЛ относится к В-клеточным лимфопролиферативным процессам, в основе которого лежит накопление опухолевых клеток. Это приводит к выраженным клиническим проявлениям болезни с развитием лимфоцитоза периферической крови, лимфоаденопатии, гепатоспленомегалии, а также опосредованным снижением функции костного мозга.

Работами отечественных авторов была показана связь между процессами накопления опухолевых клеток при ХЛЛ, имеющих аберрантный фенотип (CD19+ CD5+ CD23+ CD20 low+ CD22 low +) и снижение уровня экспрессии FAS-APO на поверхности лимфоцитов, который является ключевым фактором активности системы апоптоза. Эти исследования были сделаны методами проточной цитофлюорометрии и по существу подтверждали концепцию «накопления» в патогенезе опухолевого роста на основе сниженной активности системы апоптоза. При этом было показано, что наибольшим пролиферативным потенциалом обладает менее одного процента клеток [1] [2]

Ключевым фактором внешнего пути апоптоза является взаимодействие FAS-лиганда и FAS-рецептора. Это приводит к активации каспаз 8 и 3 через внутриклеточный адаптер с последующим активированием процессов апоптоза. Кроме FAS - опосредованного существуют и другие механизмы внешнего пути. К ним относятся взаимодействие TNF и TNF рецептора (TNFR1-2); TRAIL и DR (4/5), а также DR3 с лигандом TL1a при ХЛЛ [3] [4]. Таким образом, проведённый анализ показал, что апоптоз как биологическая и клиническая проблема представляется актуальной для онкологии и для ХЛЛ, в частности.

Следует отметить, что работы по внешнему пути апоптоза при ХЛЛ касаются в основном только фенотипической характеристики механизма действия FAS-

рецептор- FAS лиганд. Недостаточно работ, в которых бы был одномоментно изучен уровень экспрессии генов внешнего пути апоптоза у больных с впервые выявленным (в/в) ХЛЛ в связи с клиническими проявлениями болезни.

Актуальным также является изучение влияния RFC (ритуксимаб, флударабин, циклофосфан) терапии на уровень экспрессии генов апоптоза в сравнении с клиническими эффектом, что позволяет дать более глубокую характеристику противоопухолевой фармакодинамики широко применяемой комбинации лекарственных препаратов.

Цель исследования

Изучить формирование противоопухолевого ответа и результаты лечения после RFC - и RB- терапии впервые выявленного и резистентного / рецидивирующего ХЛЛ с помощью оценки в динамике экспрессии генов внешнего пути апоптоза FAS, TNFR2, DR3, DR4/5, TRAIL и генов-модуляторов апоптоза TP53, Hsp27, XIAP, p21, PRAME.

Задачи исследования

1. Оценить значения уровня экспрессии изучаемых генов и клинические проявления болезни до начала RFC и RB терапии.

2. Проанализировать динамику уровня экспрессии изучаемых генов после завершения одного курса RFC и RB терапии.

3. Провести анализ клинических данных после терапии в зависимости от исходной экспрессии генов апоптоза.

4. Определить роль генов системы апоптоза в формировании противоопухолевого ответа на RFC и RB терапию у больных ХЛЛ

Научная новизна исследования

Настоящее исследование является одним из первых в России, в котором

проблема апоптоза освещается с позиции экспрессии генов, синтезирующих факторы, регулирующие апоптоз. Новым в данном исследовании является трансляционный подход, предполагающий изучение связи молекулярно-биологических методов, дающих функциональную характеристику генов и клинических проявлений болезни. В результате работы появились новые данные, позволяющие установить роль изучаемых генов и клинических проявлений ХЛЛ на основании сравнительного анализа с аналогичными показателями группы здоровых лиц. Было установлено, что у больных с впервые выявленными ХЛЛ активность генов FAS и TNFR2 связана с проапоптотическим фенотипом, DR4/5 связан с блокированием апоптоза, а ген PRAME является B-ХЛЛ-специфическим маркером. Новые результаты были получены при анализе уровня экспрессии генов у больных с впервые выявленными ХЛЛ в зависимости от величины экспрессии гена FAS относительно среднего показателя по группе. В этом анализе были идентифицированны группы про - и антиапоптотических генов. К генам, активирующим апоптоз относятся гены FAS, TNFR2, TRAIL. К группе генов, блокирующих апоптоз, отнесены DR3, Hsp27, XIAP. Функциональная характеристика указанных генов была подтверждена сравнением с клиническими данными, при котором было установлено, что в группе больных ХЛЛ с низкой активность проапоптотических генов и одновременно высокой активностью антиапоптотических было статистически значимо большим вовлечение печени, большее количество лимфоцитов крови, снижение уровня гемоглобина, снижение количества эритроцитов.

Важно подчеркнуть, что низкий уровень экспрессии проапоптотических генов сочетался с повышенным уровнем экспрессии антиапоптотических генов, что создавало предпосылки для угнетения апоптоза.

Новым подходом в оценочной системе RFC терапии является сравнительный анализ динамических показателей уровня экспрессии проапоптотических генов FAS и TNFR2 после курса лечения и противоопухолевого ответа после 1 и 6 циклов. Уровень экспрессии этих генов статистически значимо возрастал после

курса RFC терапии, что сопровождалось статистически значимым снижением количества лимфоцитов периферической крови. Полученные результаты позволяют сформулировать новый взгляд на RFC терапию при ХЛЛ, свидетельствующий о влиянии программы на активацию экспрессии генов апоптоза и рассматривать апоптоз как клеточный процесс, поддающийся регулированию при помощи лекарственных препаратов. Это означает, что противоопухолевый эффект RFC терапии в определенной степени обусловлен активацией апоптоза за счет мембран опосредованного действия ритуксимаба и генноопосредованного действия флударабина и циклофосфана.

Новизна работы заключается также в том, что подтверждена проапоптотическая направленность генов FAS, TNFR2, TRAIL у больных с резистентным/рецидивирующим (р/р) ХЛЛ на основании сравнения с клиническими данными. Основываясь на анализе данных литературы, указывающих на митохондриальный путь активации апоптоза через TP53 под влиянием бендамустина при ХЛЛ, наши результаты дают новую трактовку этому явлению. После RB терапии отмечено статистически значимое снижение уровня экспрессии гена внешнего пути апоптоза TNFR2, в то время как в процессе клинического наблюдения был зафиксирован противоопухолевый эффект. Это означает, что фармакодинамика изученных химиотерапевтических программ имеет разные точки приложения в геноме опухолевой клетки с вовлечением (RFC- терапия) или без вовлечения (RB-терапия) генов внешнего пути апоптоза.

Научно-практическая ценность исследования

Полученные результаты имеют большое значение для понимания патогенеза опухолевого роста при ХЛЛ, роли генов, кодирующих внешние пути апоптоза, а также генов, ингибирующих апоптоз. Проведённое исследование по существу подтверждает существующую гипотезу о кумулятивном типе опухолевого роста при ХЛЛ. Оригинальными являются результаты, касающиеся экспрессии гена PRAME при ХЛЛ.

Важным является установление проапоптотического характера генов внешнего пути апоптоза FAS, TNFR2, TRAIL. Ценными являются результаты, позволяющие, трактовать противоопухолевую фармакодинамику широко распространенных химиотерапевтических программ лечения ХЛЛ (RFC и RB) с позиций функции генома опухолевой клетки.

Практическую ценность имеют результаты показавшие, что в процессе проведения RFC программ активируются гены внешнего пути апоптоза, что сопровождается противоопухолевым ответом. При проведении RB программы противоопухолевый ответ достигается альтернативными механизмами без вовлечения генов внешнего пути апоптоза. Практическая ценность работы заключалась в том, что полученные результаты, имеющие фундаментально клиническое значение, доводились до сведения практикующих врачей гематологов путем чтения лекций, проведения семинаров, печатных публикаций.

Положения, выносимые на защиту

1.При выраженных клинико-гематологических проявлениях ХЛЛ отмечено снижение уровня экспрессии генов внешнего пути апоптоза FAS, TNFR2, TRAIL, обладающих проапоптотических действием и одновременно повышенная экспрессия генов, замедляющих апоптоз Hsp27, XIAP, DR3.

2.Гены внешнего пути апоптоза при ХЛЛ FAS, TNFR2, TRAIL обладают проапоптотическим действием, в то время как гены этой группы DR3, DR4/5 замедляют апоптоз.

3.Комбинация противоопухолевых препаратов RFC повышает уровень экспрессии проапоптотических генов FAS, TRAIL в опухолевых клетках больных ХЛЛ, с последующим развитием противоопухолевого ответа.

4.Комбинация противоопухолевых препаратов ритуксимаб, бендамустин RB не оказывает влияние на уровень экспрессии генов внешнего пути апоптоза

FAS, TRAIL, но снижает уровень экспрессии гена этой же группы TNFR2. Последующий противоопухолевый ответ не связан с активацией генов внешнего пути апоптоза при р/р ХЛЛ.

Внедрение в практику

Полученные результаты используются в практике врачей-гематологов МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского и гематологических отделений Московской области. Обнаруженные возможности влияния на активность генов системы апоптоза при помощи изученных программ лечения ХЛЛ создали предпосылки для их совершенствования с учетом полученных данных.

Степень достоверности и апробация результатов

Основные положения диссертационной работы доложены:

04.04.2018 на научно-практической конференция «Применение генетических и иммунологических методов оценки лечения инновационными препаратами гематологических заболеваний» ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского; Общество гематологов Московской области. «Экспрессия генов внешнего пути апоптоза у больных с впервые выявленным хроническим лимфолейкозом в процессе терапии ритуксимабом, флюдарабином, циклофосфаном»

09.04.2018 На XXV российский национальном конгрессе «Человек и лекарство» Экспрессия генов внешнего пути апоптоза у больных с впервые выявленным хроническим лимфолейкозом

26.09.2018 на научно-практической конференция «Современное лечение лимфопролиферативных заболеваний» ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского; Общество гематологов Московской области.» Экспрессия генов апоптоза у больных при хроническом лимфолейкозе в процессе противоопухолевой терапии 1-ой и 2-ой линии.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Клиническая и молекулярно-биологическая характеристика хронического лимфолейкоза

Хронический лимфолейкоз относится к группе лимфопролиферативных процессов, в основе которого лежит клональная пролиферация и аккумуляция морфологически зрелых лимфоцитов. Их иммунологический фенотип представлен CD5+, CD19+, CD20+dim, CD23+ и поверхностным иммуноглобулина dim, что указывает на клоновый характер происхождения [5] [6][7][8]

Кумулятивный принцип опухолевого роста при ХЛЛ впервые сформулировал Dameshek [9], что наиболее точно отражает патогенез заболевания. Это подтверждается работами других авторов [10] [11] [12]

установивших нарушения процессов апоптоза. В тоже время имеются работы, указывающие на пролиферацию в небольшом количестве опухолевых клеток [13][14]. Развитие заболевания сопровождается распространением опухолевых В-лимфоцитов, которые обнаруживаются не только в крови, но также в костном мозге, лимфатических узлах, печени, селезенке [15]. Это может приводить к выраженному гиперлейкоцитозу, массивной лимфоаденопатии, гепато- и спленомегалии, что значительно ухудшает качество жизни больных и требует проведения противоопухолевой химиотерапии [16].

Распределение опухолевых клеток в организме больного ХЛЛ происходит неравномерно, что создает топографическую асимметрию системного опухолевого процесса. В связи с этим была затруднена оценка эффективности противоопухолевой химиотерапии, так как лизис опухоли под влиянием лечения не происходит синхронно по всем топографическим зонам.

Внедрение в клиническую практику стадирования ХЛЛ (Rai) позволило дать интегральную оценку распространенности болезни на основе топографической и функциональной характеристики. Кроме того, данная система стадирования ХЛЛ имеет прогностическое значение. Установлено, что Ме выживаемости при 0-стадии составляет> 150 при 1-101, 2- 71, при 3- 19 и 4- 19 месяцев.

Согласно другой классификации (Binet) выделяются 3 стадии АВС на основе вовлечения зон лимфатических узлов и наличия цитопении.

Следует учитывать, что стадии являются обобщенными показателями активности болезни и не всегда отражают индивидуальные характеристики заболевания у каждого больного. Поэтому была введена дополнительная прогностическая информация [17] [18].

К ней относится степень вовлечения костного мозга, возраст, пол, время удвоения лимфоцитов крови, концентрация В2 микроглобулина.

Указанные критерии в сочетании со стадиями значительно улучшают прогнозирование течения болезни. В дополнение к клиническим факторам прогноза течение ХЛЛ используются молекулярно-биологические и иммунофенотипические и цитогенетические маркеры. К ним относятся мутационный статус вариабельного региона IgVH тяжелой цепи иммуноглобулинов, интерфазная in situ флуоресцентная гибридизация (FISH), экспрессия на опухолевых клетках CD38 и ZAP-70, хромосомные аномалии такие как del 13q, del 11q, del 17q, и приводящие к амплификации генов NOTCH1, SF3B1, BLRC3, TP53, ATM, Myd38.

Опухолевая трансформация «накладывается» на процессы нормального иммуногенеза лимфоцитов, происходящие в зародышевых центрах фолликулов лимфатических узлов. В результате фактически образуется два типа ХЛЛ: мутационный и немутационный.

Мутационный вариант ХЛЛ подразумевает, что опухолевая трансформация

произошла в лимфоците, который прошел стимуляцию антигеном и в котором возникшие мутации IgVH были инициированы для расширения спектра распознаваемых антигенов и повышения авидности синтезируемых антител. Эти формы ХЛЛ отличаются более благоприятным течением. В отличие от тех форм ХЛЛ, где опухолевая трансформация произошла В-лимфоците, не прошедшем через зародышевый центр. При этом значительно различается показатель общей выживаемости, который составляет 9 лет в случаях ХЛЛ с NIgVH против 20 лет при MIgVH генах. [19] [20].

Важное прогностическое значение IgVH мутационного статуса трудно определять для каждого больного в реальной клинической практики из-за достаточно сложной технологии. В связи с этим проводились исследования, направленные на изучение корреляции между IgVH мутационным статусом и фенотипической характеристикой опухолевых клеток. Было показано [21], что CD38+ коррелирует с отсутствием IgVH мутаций, однако в других работах его способность идентифицировать мутационный статус остается недоказанной [22].

В работах, направленных, на изучение связи экспрессии генов и IgVH мутационного статуса опухолевых клеток при ХЛЛ установлено корреляция только с белком ZAP-70. Из этого следует, что экспрессия ZAP-70 является важным фактором прогноза ХЛЛ. [23] [24] [25]

Введение в клиническую практику хромосомного анализа методом FISH, позволило визуализировать многие хромосомные нарушения при ХЛЛ, так как стандартная цитогенетика не обладала такими возможностями из-за низкой пролиферативной активности опухолевых клеток и ограниченного количества метафаз. Клинический анализ этого метода позволил выявить прогностическое значение основных хромосомных нарушений [26]. При этом установлено, что del 13q прогнозирует выживаемость 133 месяца, del 11q-79; трисомия 12-114; del 17p-32; при нормальном геноме - 111 месяцев.

Ключевой клинической проблемой являются вопросы, связанные с назначением противоопухолевого лечения. При этом следует отметить два положения: время, когда нужно начинать терапию и какое лечение следует предпринять. Начало терапии традиционно определяется 3 и 4 стадиями по Rai [27] и временем удвоения лимфоцитов <6 месяцев. Однако в настоящее время этих предпосылок недостаточно, так как новые генетические и фенотипические маркеры меняют взгляды на начало терапии. Кроме того, внедрение в клиническую практику новых лекарственных препаратов с различными точками приложения химиотерапевтического воздействия на опухолевую клетку вновь делают проблему начала терапии дискутабельной, открывая перед клиницистом возможность выбора тактики лечения из нескольких доступных, каждая из которых имеет различные преимущества перед другими.

Иллюстрируя утверждение о возможности выбора терапии приведём примеры основных препаратов, применяемых при терапии B-ХЛЛ в настоящее время: хлорамбуцил, флударабин, пентастатин, кладрибин, алентузумаб, бендамустин, офатумумаб, ритуксимаб.

К новому поколению препаратов относятся ибрутиниб (обинтузумаб) [28] [29] [30] венетоклакс (иделалисиб). Иделалисиб является селективным ингибитором PI3kb, который активирует апоптоз в опухолевых клетках ХЛЛ, не влияет на Т-лимфоциты и сопровождается хорошим клиническим ответом. [31]

Проведенные исследования [32] показали, что у больных с ХЛЛ и делецией 17q или мутацией гена TP53 наблюдается недостаточный противоопухолевый ответ на пуриновые аналоги и терапию алкилирующими препаратами. Однако при таких факторах риска применение алентузумаба сопровождается клиническим эффектом, при этом считается, что данный препарат действует по TP53 -независимому пути [33]

В тоже время делеция 17р в случаях ХЛЛ, рефрактерных к флударабину и алентузумабу не является фактором плохого прогноза при лечении офату-

мумабом [34]

У больных с аномалиями функций белка р53 целесообразно применять препараты на основе моноклональных антител вместо мало эффективных при этом алкилирующих средств и пуриновых аналогов. [35] [36]

Особо следует отметить, что приобретенные дефекты в р53 - пути, мутации NOTCH-1 и SF3Bl и BIRC3, выявляемые у пациентов, свидетельствуют о высоком риске течения болезни, плохом ответе на стандартную химиотерпию и короткую выживаемость. Данные маркеры могут выделить больных с агрессивным течением болезни или с ответом на ХТ вплоть до прогрессии заболевания. Пациентам с нарушенными механизмами восстановления поврежденной ДНК такими как р53 дисфункция показана терапия, включающая ингибиторы тирозинкиназы, BCL2- ингибиторы, моноклональные антитела, аллогенная трансплантация и TCAR-терапия.

Напротив, пациенты с невысоким риском появления новых мутаций могут обычно наблюдаться долгое время и имеют длительный ответ на ХТ вплоть до прогрессии болезни.

Важность генетического и молекулярно-биологического анализа для клинического прогноза ХЛЛ подтверждается многими клиническими исследованиями [37] [38]. Делеция 17р13 включает TP53 локус, а делеция 11q22.3 затрагивает АТМ локус. Первичный диагноз ХЛЛ сопровождается делецией 17р13 в 5% случаев, в 10%-при прогрессировали болезни и 3% при рефрактерности и к пуриновым аналогам [39]. У больных с делецией 17р13 дисфункциональная мутация гена ТР53 встречается в 80% случаев. Кроме того, у 5% больных с впервые выявленным ХЛЛ имеется ТР53 мутация без деления 17р13. Делеция 11q23 затрагивает локус АТМ и встречается у 10 % больных с впервые выявленным ХЛЛ, 20% при прогрессировали болезни и более 20% с рецидивирующим/рефрактерным заболеванием [40] Примерно 30-40 % больных с ХЛЛ и 11q22.3 делецией и мутацией АТМ гена характеризуются более

агрессивным течением так же, как и при дисфункции p53. При наличии дикого типа АТМ болезнь протекает менее агрессивно.

Учитывая изложенное, становится очевидным, что прогностическая точность при ХЛЛ связана с биологией опухолевой клетки и может быть повышена при более широком анализе генетических дефектов, включающих секвенирование р53 и АТМ, а также анализом BiRC3, SF3B1 NoTCH1.

В связи с полученными в последние годы результатами, касающимися молекулярно-биологических нарушений в опухолевых клетках при ХЛЛ, изменились взгляды на традиционные факторы прогноза при этом заболевании. Увеличением количества прогностических факторов создало предпосылки для создания прогностических систем, которые определяют дальнейшее течение заболевания. В настоящее время известно 6 прогностических систем: CLL-IPI; CLL-01; 2011 MDACC; GCLLSG; 2007 MDACC, Barcelona-Brno, которые комбинируют клинические и биологические параметры. Прогностическая система CLL-IPI включает в себя возраст, клиническую стадию (Rai), IGVH -мутационный статус, В2-микроглобулин и del (17p) /tp53 мутацию и деление пациентов на 4 группы с различной общей выживаемостью согласно степени градации от низкой до высокого риска.

В связи со сложностью этой системы, основанной на комбинации клинических и биологических факторов, была предложена упрощенная прогностическая модель (Barcelona - Brno), основанная на анализе IGVH мутационного статуса и определяемой FISH del17q и 11q, которые входят во все прогностические системы [41].

Эта модель разделяет больных ХЛЛ на 3 прогностических группы: группа низкого риска (есть IGVH мутация и нет FISH изменений); промежуточного риска (нет IGVH мутации или есть FISH изменения); высокий риск (нет IGVH мутаций и есть FISH изменения). Клинический анализ показал, что 10-летняя общая выживаемость по данной прогностической системе соответственно

группам риска составляла 90% 50% 30%. Важно отметить, что пациенты из группы низкого риска имеют хорошие отдаленные результаты независимо от стадии болезни, что свидетельствует об определяющей роли биологических факторов в течении заболевания.

1.2. Процессы апоптоза в опухолевых клетках при ХЛЛ

Важной фундаментально-клинической проблемой гематологии является изучение процессов апоптоза опухолевых клеток при ХЛЛ на основании накопленных знаний о программируемой клеточной смерти при лечении онкологических заболеваний. [42] [43] Процесс апоптоза можно условно разделить на три фазы: сигнальную (индукторную), эффекторную и деградационную [44] [45] [46].

Инициация апоптоза может происходить посредством внешних (внеклеточных) или внутриклеточных факторов. Например, в результате гипоксии, гипероксии, субнекротического поражения химическими или физическими агентами, перекрёстного связывания соответствующих рецепторов, нарушения сигналов клеточного цикла, удаления факторов роста и метаболизма и т.д. [45]. Несмотря на разнообразие инициирующих факторов, выделяются два основных пути передачи сигнала апоптоза: рецептор-зависимый (внешний) сигнальный путь с участием рецепторов гибели клетки и митохондриальный (внутренний) путь [47].

Процесс апоптоза часто начинается с взаимодействия специфических внеклеточных лигандов [44] с рецепторами клеточной гибели, экспрессиро-ванными на поверхности клеточной мембраны. Рецепторы, воспринимающие сигнал апоптоза, относятся к суперсемейству TNF-рецепторов TNFR — «рецептор фактора некроза опухолей». [48] Наиболее изученными рецепторами смерти, для которых описана и определена роль в апоптозе, являются CD95 (также известный как Fas или APO-1) и TNFR1 (также называемый p55 или

CD120a). К дополнительным относятся CARI, DR3 (англ. death receptor 3 — «рецептор смерти 3»), DR4 и DR5.Формирование внешних сигнальных путей апоптоза происходит в результате взаимодействия рецепторов и их лигандов на поверхности опухолевых клеток при ХЛЛ. При этом FAS рецептор связывается с FAS-лигандами; TNF-TNFR2; TRAIL-DR4/5; TLA-DR3; [49] [50] [51] [52] [53]

Все рецепторы смерти представляют собой трансмембранные белки, характеризующиеся наличием общей последовательности из 80 аминокислот в цитоплазматическом домене. Данная последовательность называется доменом смерти (death domain или DD) и является необходимой для трансдукции сигнала апоптоза [45] [54]. Внеклеточные участки рецепторов смерти взаимодействуют с тримерами лигандов (CD95L, TNF, Apo3L, Apo2L и т. п.). Тримеры лигандов в результате взаимодействия тримеризуют рецепторы смерти [55]. Активированный таким образом рецептор взаимодействует с соответствующим внутриклеточным адаптером. Для рецептора CD95(Fas/APO-1) адаптером является FADD («белок, взаимодействующий с доменом смерти Fas-рецептора»). Для рецепторов TNFR1 и DR3 адаптером является TRADD «белок, взаимодействующий с доменом смерти TNFR1-рецептора»).

Адаптер, ассоциированный с рецептором смерти, вступает во взаимодействие с эффекторами - пока ещё неактивными предшественниками протеаз из семейства инициирующих каспаз — с прокаспазами. В результате цепочки взаимодействия «лиганд-рецептор-адаптер-эффектор» формируются агрегаты, в которых происходит активация каспаз [56]. Данные агрегаты именуются апоптосомами, апоптозными шаперонами или сигнальными комплексами, индуцирующими смерть (от англ. DISC — death-inducing signaling complex — «сигнальный комплекс, индуцирующий смерть»). Примером апоптосомы может служить комплекс FasL-Fas-FADD-прокаспаза-8, в котором активируется каспаза-8 [45] [47]. Посредством рецепторов смерти могут быть активированы три инициирующие каспазы: -2; -8 и -10[47]. Активированные инициирующие каспазы далее участвуют в активации эффекторных каспаз.

Другим путем активации апоптоза является митохондриальный сигнальный путь. Митохондриальный сигнальный путь апоптоза реализуется в результате выхода апоптогенных белков из межмембранного пространства митохондрий в цитоплазму клетки. Высвобождение апоптогенных белков, предположительно, может осуществляться двумя путями: за счёт разрыва митохондриальной мембраны или же путём открытия высокопроницаемых каналов на внешней мембране митохондрий [44].

Ключевым событием митохондриального пути апоптоза является повышение проницаемости наружной мембраны митохондрий [47] Существенную роль в этом играют апоптотические Вс1-2-белки — Вах и Вак. Они встраиваются в наружную мембрану митохондрий и олигомеризуются. При этом, вероятно, нарушается целостность внешней мембраны митохондрий, по неизвестному пока механизму [47] [57]. При повышении проницаемости из межмембранного пространства митохондрий в цитозоль высвобождаются растворимые белки, участвующие в апоптозе: цитохром с; прокаспазы -2, -3 и -9; фактор, индуцирующий апоптоз; флавопротеин [44]. Разрыв внешней мембраны митохондрий объясняется увеличением объёма митохондриального матрикса. Данный процесс связывают с раскрытием пор митохондриальной мембраны, приводящим к снижению мембранного потенциала и высокоамплитудному набуханию митохондрий вследствие осмотического дисбаланса. Поры диаметром 2,6—2,9 нм способны пропускать низкомолекулярные вещества массой до 1,5 кДа. [58] [44]. Раскрытие пор стимулируют следующие факторы: неорганический фосфат; каспазы; БИ-реагенты; истощение клеток восстановленным глутатионом; образование активных форм кислорода; разобщение окислительного фосфорилирования протонофорными соединениями; увеличение содержания Са2+ в цитоплазме; воздействие церамида; истощение митохондриального пула АТФ [44]. Цитохром с в цитоплазме клетки участвует в формировании апоптосомы вместе с белком, активирующим апоптоз. Предварительно он претерпевает конформационные

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Захаров Сергей Геннадьевич, 2019 год

СПИСОК ЛИТЕРАТРУРЫ

1. Fegan, C. Apoptosis deregulation in CLL / C. Fegan, C. Pepper // Adv Exp Med

Biol. -2013. 792 P.-151-71. doi: 10.1007/978-1-4614-8051-8_7.

2. Барышников, А.Ю. Принципы и практика вакцинотерапии рака. / А.Ю.

Барышников // Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. - 2004. - 24(2): 59-63.

3. Podhorecka, M. Deregulation of apoptosis -is it still an important issue in

pathogenesis of chronic lymphocytic leukemia / M. Podhorecka, A. Macheta, M. Bozko, A. Bozko, N. Malek, P. Bozko // Curr Cancer Drug Targets. -2016. 16(8) P. - 652-8. doi: 10.2174/ 1568009616666160427103930

4. Pistritto, G. Apoptosis as anticancer mechanism: function and dysfunction of its

modulators and targeted therapeutic strategies / G. Pistritto, D .Trisciuoglio, C. Ceci, et.al. // Aging (Albany NY). - 2016. - 8 (4) P. - 603-19. doi: 10.18632/aging. 100934.

5. Hallek, M. Chronic lymphocytic leukemia: 2017 update on diagnosis, risk

stratification, and treatment / M. Hallek // Am J Hematol. - 2017. 92(9) P. -946-65. doi: 10.1002/ajh.24826

6. Kipps, T. J. Chronic lymphocytic leukaemia. / T. J. Kipps, F. K. Stevenson, C.

J.Wu, C. M.Croce, et.al. // Nature reviews. Disease primers. - 2017. - V. 3. -p. 16096. - doi:10.1038/nrdp.2016.96. — PMID 28102226

7. Ghia, P. Management of chronic lymphocytic leukemia/ P. Ghia, M. Hallek //

Haematologica.-2014. 99(6) P. - 965-72. doi: 10.3324/ haematol. 2013.096107

8. Stilgenbauer, S., Management of chronic lymphocytic leukemia / S.

Stilgenbauer, R.R.Furman, C.S. Zent //Am Soc Clin Oncol Educ Book. -2015. - P. - 164-75. doi: 10.14694/EdBook_AM.2015.35.164

9. Dameshek, W. Chronic lymphocytic leukemia—an accumulative disease of

immunologically incompetent lymphocytes / W. Dameshek, // Blood. -1967- 29(4) P. - 566-584.

10. Billard, C. Apoptosis inducers in chronic lymphocytic leukemia / C. Billard // Oncotarget. -2014. - 5(2) p. - 309-25. doi: 10.18632/oncotarget.1480

11. Gaidano, G., Molecular pathogenesis of chronic lymphocytic leukemia. / G. Gaidano, R. Foa, R. Dalla-Favera // J Clin Invest. - 2012. - T. 122, 10. - P.-3432-3438. - doi: 10.1172/JCI64101. — PMID 23023714

12. Riches, J. C. Chronic lymphocytic leukemia: an update on biology and treatment / J. C. Riches, A. G.Ramsay, J. G. Gribben // Curr Oncol Rep. -2011. -T. 13, 5. - P. -. - 379-385. - doi: 10.1007/s11912-011-0188-6. - PMID 21773694

13. McCarthy, B.A. A seven-gene expression panel distinguishing clonal expansions of pre-leukemic/ B.A. McCarthy, S .Yancopoulos, M .Tipping, X.J. Yan, et.al. // Immunol Res. 2015. - 63(1-3) P. - 90-100. - doi: 10.1007/s12026-015-8688-3

14. Rawstron, A. C. Monoclonal B-cell lymphocytosis and chronic lymphocytic leukemia / A. C. Rawstron, F. Bennett, S. J. O'Connor, M., Kwok et.al // N Engl J Med. - 2008.-359. - № 6. - P. -. 575-83. - doi: 10.1056/NEJMoa075290. — PMID 18687638

15. Defrance, T. The life and death of a B cell / T .Defrance, M. Casamayor-Palleja, P.H. Krammer // Adv Cancer Res. - 2002. - 86- P. - 195-225.

16. Nabhan, C. Chronic lymphocytic leukemia: a clinical review / C.Nabhan, S.T.Rosen//JAMA. - 2014 - 312(21) P. - 2265-76. doi: 10.1001/jama.2014.14553

17. Hamblin, T. J. CD38 expression and immunoglobulin variable region mutations are independent prognostic variables in chronic lymphocytic leukemia, but CD38 expression may vary during the course of the disease / T. J.Hamblin , J. A.Orchard, R. E. Ibbotson, Z. Davis, et.al. // Blood. - 2002. - Vol. 99, no. 3. - P. - 1023 -1029. - PMID 11807008

18. Stilgenbauer, S. Understanding and managing ultra-high-risk chronic lymphocytic leukemia / S. Stilgenbauer, T. Zenz // Hematology Am Soc Hematol Educ Program. - 2010. P. - 481-8.

19. Damle, R.N.Ig V gene mutation status and CD38 expression as novel prognostic indicators in chronic lymphocytic leukemia / R.N. Damle, T. Wasil, F .Fais, F.Ghiotto, et.al // Blood. - 1999. - 94(6) P. - 1840-7.

20. Ziolkowska, E. Bendamustine alone or with rituximab modifies expression of apoptosis-regulating genes and proteins of CLL cells, depending on IGVH mutational status / E .Ziolkowska, D .Wolowiec , P.Karpinski , J.Z. Blonski //Leuk Lymphoma. -2018. P. - 111.doi:10.1080/ 10428194. 2018. 149373074/ jbc.M112.356279. Epub 2012 Jun 5.

21. Chiorazzi, N. Chronic lymphocytic leukemia / N. Chiorazzi, K. R. Rai, M. Ferrarini // N Engl J Med. - 2005. - T. 352, 8. - P. -. 804-815. -PMID 15728813

22. Thunberg, U. CD38 expression is a poor predictor for VH gene mutational status and prognosis in chroniclymphocytic leukemia / U .Thunberg, A. Johnson, G .Roos, I. Thorn, et.al. // Blood. - 2001. - 97(6) P. - 1892-4.

23. Bakke, A.C. A robust ratio metric method for analysis of Zap-70 expression in chronic lymphocytic leukemia (CLL) / A. C. Bakke, Z. Purtzer, J. Leis, J. Huang // Cytometry B Clin Cytom. - 2006 .- 70(4) P. - 227-34

24. Baptista ,M.J. Differential gene expression profile associated to induced by dexamethasone in CLL cells according to IGHV/ZAP-70 status/ M. J.

Baptista, A .Muntanola, E .Calpe, P . Abrisqueta et.al. // Clin Cancer Res. -2012. 1-18(21) P. - 5924-33. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-11-2771. Epub 2012 Sep 10.

25. Secchiero, P. Differential gene expression induction by TRAIL in B chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) cells showing high versus low levels of Zap-70 / P .Secchiero, M.G. di Iasio, A .Gonelli, E. Barbarotto, et.al. // Cell Physiol. - 2007. - 213(1) P. - 229-36.

26. Döhner, H. Genomic aberrations and survival in chronic lymphocytic leukemia / H. Döhner, S., Stilgenbauer, A. Benner, E. Leupolt, et.al. // N Engl J Med. - 2000. - T. 343, № 26. - P. - 1910- 6. - PMID 11136261

27. Rai, K.R. Chronic lymphocytic leukemia (CLL)-Then and now / K.R. Rai, P.Jain // Am J Hematol. - 2016. - 91(3) P. - 330-40. doi: 10.1002/ajh.24282. Review

28. O'Brien, S. Ibrutinib as initial therapy for elderly patients with chronic lymphocytic leukaemia or small lymphocytic lymphoma: an open-label, multicentre, phase 1b/2 trial. / S. O'Brien, R.R. Furman, S. E. Coutre, J. P. Sharman, et.al // The lancet oncology. - 2014. - Vol. 15, no. 1. - P. - 48-58. -doi: 10.1016/S1470-2045(13)70513-8. - PMID 24332241

29. Herman, S.E. Ibrutinib inhibits BCR and NF-kB signaling and reduces tumor proliferation in tissue-resident cells of patients with CLL/ S.E. Herman, R.Z.Mustafa, J.A.Gyamfi, S. Pittaluga, // Blood. -2014. - 22. 123(21) P. -3286-95. doi: 10.1182/blood-2014-02-548610. Epub 2014 Mar 21

30. D'Cruz, O. J. Bruton's tyrosine kinase inhibitors currently in development / O. J. D'Cruz , F. M. Uckun Novel // Onco Targets Ther. - 2013. - V. 6. - P. - 161-176. - D0I:10.2147/0TT.S33732. -PMID 23493945

31. Hoellenriegel, J. The phosphoinositide 3'-kinase delta inhibitor, CAL-101, inhibits B-cell receptor signaling and chemokine networks in chronic

lymphocytic leukemia./ J. Hoellenriegel , S.A. Meadows, M .Sivina, W.G. Wierda ,et.al. // Blood. - 2011. - 118(13) P. - 3603-12. doi: 10.1182/blood-2011-05-352492. Epub 2011 Jul 29.

32. Cerhan, J. R.Familial predisposition and genetic risk factors for lymphoma / J. R.Cerhan, S. L. Slager // Blood. - 2015. - Vol. 126, no. 20. - P.- 22652273. - doi: 10.1182/blood-2015-04-537498. — PMID 26405224

33. Hillmen, P. Alemtuzumab compared with chlorambucil as first-line therapy for chronic lymphocytic leukemia / P.Hillmen, A.B. Skotnicki, T. Robak, B Jaksic, et. al. // Oncol. -2007. - 25(35) P. - 5616-23. Epub 2007 Nov 5

34. Wierda, W. G. 0fatumumabassingle-agentCD20 immunotherapy in fludarabine-refractory chronic lymphocytic leukemia. Hx-CD20-406 Study Investigators / W.G. Wierda, T.J. Kipps, J .Mayer, S .Stilgenbauer, et.al // J Clin Oncol. - 2010. - 28(10):1749-55. doi: 10.1200/JC0.2009.25.3187. Epub 2010 Mar 1. Erratum in: J Clin Oncol. -2010. - 28(22) P. - 3670.

35. Castro J.E. Rituximab in combination with high-dose methylprednisolone for the treatment of fludarabine refractory high-risk chronic lymphocytic leukemia / J.E.Castro, J.D. Sandoval-Sus, J.Bole, et al. // Leukemia.-2008.-22(11) P.- 2048-53

36. Dungarwalla, M. High dose methylprednisolone and rituximab is an effective therapy in advanced refractory chronic lymphocytic leukemia resistant to fludarabine therapy / M .Dungarwalla, S.O.Evans, U.Riley, et al. // Haematologica. - 2008. - 93(3) P.- 475-6

37. Edelmann, J. High-resolution genomic profiling of chronic lymphocytic leukemia reveals new recurrent genomic alterations / J .Edelmann, K. Holzmann, F.Miller, D.Winkler, et.al. // Blood. - 2012-. 120(24) P. - 478394. doi: 10.1182/blood-2012-04-423517. Epub 2012 Oct 9,

38. Stilgenbauer, S. Gene mutations and treatment outcome in chronic

lymphocytic leukemia: results from the CLL8 trial / S. Stilgenbauer, A. Schnaiter, P.Paschka, T .Zenz, et.al. // Blood. - 2014. - 123(21) P. - 324754. doi: 10.1182/blood-2014-01-546150. Epub 2014 Mar 20.

39. Foa , R. Clinical Implications Of The Molecular Genetics Of Chronic Lymphocytic Leukemia / R. Foa, I. Del Giudice, A. Guarini, D. Rossi, et.al.// Haematologica .-2013.- 98.- P.-675-685; doi:10.3324/haematol.2012.069369

40. Janssen, O. CD95 ligand - Death factor and costimulatory molecule? / O. Janssen, J.Qian, A. Linkermann, D. Kabelitz // Cell Death Differ. - 2003. -10. P. - 1215-1225.

41. Delgado, J. Chronic lymphocytic leukemia: A prognostic model comprising only two biomarkers (IGHV mutational status and FISH cytogenetics) separates patients with different outcome and simplifies the CLL-IPI / J. Delgado, M. Doubek, T. Baumann, J. Kotaskova, // Am J Hematol. - 2017.-92(4) P. - 375-380. doi: 10.1002/ajh.24660. Epub 2017 Feb 13

42. Michael, G. E. John Kerr and apoptosis / G.E. Michael, A.O. O'Rourke, K. Ellem // Medical Journal of Australia 2000. - 173 (11-12) P. - 616-7.

43. Banfalvi, G. Apoptotic chromatin changes / G. Banfalvi // Springer science + Business media B. V., 2009. - 412 p. - ISBN 978-1-4020-9560-3.

44. Самуилов, В.Д. /В.Д.Самуилов, А.В.Олексин, Е. М. Лагунова // Биохимия. -2006. С. - 1029-1046.

45. Барышников, А. Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А. Ю. Барышников, Ю. В. Шишкин // М.: Эдиториал УРСС, - 2002. - 320 С. -1000 экз. - ISBN 5-8360-0328-9.

46. Knauf, W. U. Serum levels of soluble CD23, but not soluble CD25, predict disease progression in early stage B-cell chronic lymphocytic leukemia. / W. U., Knauf, I.Langenmayer, B.Ehlers, B.Mohr, et.al // Leukemia & lymphoma. - 1997. - Vol. 27, no. 5-6. - P.- 523—532. -

doi: 10.3109/10428199709058320. - PMID 9477135

47. Льюин, Б. Клетки. / Б. Льюин Б. и др. // М.: БИНОМ. Лаборатория знаний. -2011. -951 с. - ISBN 978-5-94774-794-2

48. Migone, T.S. TL1A is a TNF-like ligand for DR3 and TR6/DcR3 and functions as a T cell costimulatory / T.S. Migone, J.Zhang, X. Luo et al. // Immunity. -2002. -16. P.- 479-492

49. Bradley, J.R. TNF-mediated inflammatory disease/ J.R. Bradley // J Pathol. -2008. - 214(2). P. - 149-60.

50. Brenner, D. Regulation of tumour necrosis factor signalling: live or let die / D .Brenner, H. Blaser, T.W. Mak // Nat Rev Immunol. - 2015. - 15(6) P. -362-74. doi: 10.1038/nri3834.

51. Gasparini, C. NF-kB pathways in hematological malignancies / C .Gasparini, C .Celeghini, L .Monasta, G .Zauli //Cell Mol Life Sci. - 2014. - 71(11) P. -2083-102. doi: 10.1007/s00018-013-1545-4. Epub 2014 Jan 14.

52. Joshua, E. Regulation of the human TRAIL gene / E .Joshua, A. and S. Wafik El-Deiry. // Cancer Biol Ther. - 2012. - 13(12) P. - 1143--1151. doi: 10.4161/cbt.21354

53. Moreno, E. Evolution of TNF signaling mechanisms: JNK-dependent apoptosis triggered by Eiger, the Drosophila homolog of the TNF superfamily / E. Moreno, M. Yan, K. Basler // Curr Biol. -2002. - 12(14). P. - 1263-1268

54. Wang, L. The Fas-FADD death domain complex structure re-veals the basis of DISC assembly and disease mutations / L. Wang, J.K.Yang, V. Kabaleeswaran et al. // Nat Struct Mol Biol. - 2010. - 17(11). P. - 1324-9

55. Delgado, J.Chronic lymphocytic leukemia: A prognostic model comprising only two biomarkers (IGHV mutational status and FISH cytogenetics)

separates patients with different outcome and simplifies the CLL-IPI / J .Delgado, M .Doubek, T .Baumann, J .Kotaskova, et.al. //Am J Hematol. -2017. - 92(4) P. - 375-380. doi: 10.1002/ajh.24660. Epub 2017 Feb 13.

56. Bellosillo, B. Complement-mediated cell death induced by rituximab in B-cell lymphoproliferative disorders is mediated in vitro by a caspase-independent mechanism involving the generation of reactive oxygen species/ B .Bellosillo, N.Villamor, A.Lopez-Guillermo, Marce S, et.al. // Blood. -2001. - 98(9) P. - 2771-7.

57. Карапетян, В.Л. Экспрессия маркеров апоптоза (Р53, BCL-2, BAX) и их прогностическое значение при эпителиальных новообразованиях яичников ранних стадий /В.Л. Карапетян, Е.В. Степанова, А.Ю. Барышников, С. О. Никогосян и др. // Российский биотерапевтический журнал. -2011. -Т. 10. № 2. - С.- 45-49.

58. Гордеева, А. В. Апоптоз одноклеточных организмов: механизмы и эволюция / А. В Гордеева. Ю. А. Лабас, Р. А. Звягильская // Биохимия. - 2004. - Т. 69. - вып.- 10. - С.- 1301-1313.

59. Alberts, B. / Alberts B. at al. // Molecular biology of the cell. - 5th edition. -Garland science. - 2008. - 1601 P. - ISBN 978-0-8153-4105.

60. Wierda, W.G. Hx-CD20-406 Study Investigators / W.G. Wierda, T.J, Kipps , J. Mayer, S. Stilgenbauer, et.al. // J Clin Oncol. - 2010 - 1- 28(10) - 174955. doi: 10.1200/Jm.2009.25.3187. Epub 2010 Mar 1. Erratum in: J Clin Oncol.- 2010 Aug 1; 28(22) P. - 3670.

61. Fegan, C. Apoptosis deregulation inCLL / C. Fegan, C. Pepper // Adv Exp Med Biol. -2013. - 792. - P. -151-71. doi:10.1007/978-1-4614-8051-8_7.

62. Сербин, М. Е. Апоптоз и его молекулярные эффекторы / М. Е. Сербин, Е. В. Щербак // Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии: Сборник, под редакцией проф., д. м. н. Н. Н. Ильинских. - Томск:

Сибирский государственный медицинский университет, 2004. - Вып. 1.

63. Linda, E.Cell Death Independent of Caspases: A Review / E. Linda, A. E. Bröker Frank, K. and G. Giaccone // American Association for Cancer Research. - 2005.-doi: 10.1158/1078-0432.CCR-04-2223 Published May 2005.

64. Кузнецов, С. Л. Гистология, цитология и эмбриология: Учебник для медицинских вузов / С. Л.Кузнецов, Н. Н. Мушкамбаров // - М.: ООО «Медицинское информационное агентство». - 2007. -600 с. - ISBN 589481-238-0.

65. Martin, J. Mechanisms of killing by anti-CD20 monoclonal antibodies / R. Glenniea Ruth, M. Frencha, S. Cragga, P. Ronald Taylor //Molecular Immunology. - 2007- . -V. - 44, I. 16. - P.- 3823-3837.

66. Okroj, M. Effector mechanisms of anti-CD20 monoclonal antibodies in B cell malignancies / M. Okroj, A .Österborg, A.M. Blom. // Cancer Treat Rev. -2013. - 39(6) P. - 632-9. doi: 10.1016/j.ctrv.2012.10.008. Epub 2012 Dec 5.

67. Kamburova, E.G. In vitro effects of rituximab on the proliferation, activation and differentiation of human B cells / E.G. Kamburova, H.J. Koenen, L. Boon, L.B. Hilbrands, et.al. // Am J Transplant. - 2012.-12(2) P. - 341-50. doi: 10.1111/j.1600-6143.2011.03833.x. Epub 2011 Nov 9

68. Klepfish, A. Addition of fresh frozen plasma as a source of complement to rituximab in advanced chronic lymphocytic leukaemia / A. Klepfish, A. Schattner, H. Ghoti , E.A. Rachmilewitz // Lancet Oncol. - 2007. - 8(4) P. -361-2.

69. Glennie M.J. Mechanisms of killing by anti-CD20 monoclonal antibodies / M.J.Glennie, R.R.French, M.S. Cragg, R.P.Taylor // Mol Immunol. -2007.-44(16) P. - 3823-37.

70. Гильдеева Г.Н. Механизмы действия ритуксимаба / Г.Н. Гильдеева, Д.

А. Кудлай, С. В. Лукьянов // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2015. - том 78., №12.

71. Cheson, B.D. Bendamustine: rebirth of an old drug / B.D. Cheson // Clin Oncol. - 2009.-. 27(9) P. - 1492-501. doi: 10.1200/jc0.2008.18.7252. Epub 2009 Feb 17.

72. Knauf, W.U. Bendamustine versus chlorambucil as first- line treatment in B-cell chronic lymphocytic leukemia: an updated analysis from an international phase III study / W.U. Knauf, T. Lissitchkov, A. Aldaoud, et al. // Blood. -2008. P. - 112:728.

73. Catovsky, D. Chlorambucil--still not bad: a reappraisal / D. Catovsky, M. Else, S. Richards // Clin Lymphoma Myeloma Leuk. - 2011. - 11 Suppl 1:S2-6.

74. Cheson, B.D. Bendamustine: mechanism of action and clinical data / B.D. Cheson, L. Clin Leoni // Adv Hematol Oncol. - 2011. - 9. - (8 Suppl 19) P. -1-11. Review.

75. Ziolkowska, E. Cytotoxic and apoptosis-inducing effects of bendamustine used alone and in combination with rituximab on chronic lymphocytic leukemia cells in vitro / E .Ziolkowska, D .Wolowiec, B .Cebula-Obrzut, J.Z. Blonski, et.al. // Postepy Hig Med Dosw (Online). -2014. - 68. - P. - 143343.

76. Jablonska, E. TRAIL receptors in the serum of patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia / E. Jablonska, B. Kiersnowska-Rogowska, M. Aleksandrowicz-Bukin, F. Rogowski, et.al // Neoplasma.- 2008.- 55(1) P. -51-4.

77. Kitada, S. Expression of apoptosis-regulating proteins in chronic lymphocytic leukemia: correlations with In vitro and In vivo chemoresponses / S .Kitada, J .Andersen, S .Akar, J.M. Zapata, et.al. // Blood. -1998. - 91(9)

P. - 3379-89.

78. Buggins, A.G. The role of Bcl-2 family proteins in chronic lymphocytic leukaemia/ A.G. Buggins, C.J. Pepper // Leuk Res. - 2010. - 34(7) P. - 83742. doi: 10.1016/j.leukres.2010.03.011. Epub 2010 Mar 31

79. Alas, S. Inhibition of interleukin 10 by rituximab results in down-regulation of bcl-2 and sensitization of B-cell non-Hodgkin's lymphoma to apoptosis / S. Alas, C. Emmanouilides, B. Bonavida // Clin Cancer Res. - 2001 -. 7(3) P. - 709-23.

80. Fernandez, V. Frequent polymorphic changes but not mutations of TRAIL receptors DR4 and DR5 in mantle cell lymphoma and other B-cell lymphoid neoplasms / V .Fernàndez, P .Jares, S. Beà, I. Salaverria // Haematologica. -2004.- 89(11) P. - 1322-31

81. Hallek M. Chronic lymphocytic leukemia: 2017 update on diagnosis, risk stratification,and treatment / M. Hallek // Am J Hematol.- 2017.- 92(9) P. -946-65. doi: 10.1002/ajh.24826.

82. Rozenfeld-Granot, G. Mutation analysis of the FAS and TNFR apoptotic cascade genes in hematological malignancies / G. Rozenfeld-Granot, A. Toren, N. Amariglio, F. Brok-Simoni // Experimental Hematology. - 2001. -29 (2) P. - 228—233.

83. Billard, C. Apoptosis inducers in chronic lymphocytic leukemia / C. Billard // Oncotarget. - 2014. - 5(2) P. - 309-25. Review.

84. Kolb, J.P. Re-establishment of a normal apoptotic process as a therapeutic approach in B-CLL / J.P. Kolb, C .Kern, C. Quiney, V. Roman, C. Billard // Curr Drug Targets Cardiovasc Haematol Disord.- 2003 .- 3(4) P. - 261-86.

85. Strati, P. Treatment for relapsed or refractory chronic lymphocytic leukaemia: an ongoing challenge / P .Strati // Lancet Haematol. - 2017 .4 (3) P. - 97-98. doi: 10.1016/S2352-3026(17)30020-0.

86. Huber, S. Sorafenib induces cell death in chronic lymphocytic leukemia by translational downregulation of Mcl-1 / S. Huber, M. Oelsner, T. Decker, zum C. M. Büschenfelde // Leukemia.-2011. - 25(5) P. - 838-47. doi: 10.1038/leu.2011.2. Epub 2011 Feb 4.

87. Inoue, S. Apoptosis induced by histone deacetylase inhibitors in leukemic cells is mediated by Bim and Noxa / S.Inoue, J. Riley, T.W. Gant, M.J. Dyer, et.al. // Leukemia. -2007. - 21(8) P. - 1773-82. Epub 2007 May 24.

88. Baou, M. Role of NOXA and its ubiquitination in proteasome inhibitor-induced apoptosis in chronic lymphocytic leukemia cells / M. Baou, S.L. Kohlhaas, M. Butterworth, M. Vogler, et.al. // Haematologica. - 2010. - 95(9) P. - 1510-8. doi: 10.3324/haematol.2010.022368. Epub 2010 Apr 7

89. Zang, Y. The next generation proteasome inhibitors carfilzomib and oprozomib activate prosurvival autophagy via induction of the unfolded protein response and ATF4 / Y. Zang, S.M. Thomas, E.T. Chan, C.J. Kirk, et.al. // Autophagy. -2012. - 8 (12) P. - 1873-4. doi: 10.4161/auto.22185. Epub 2012 Sep 20

90. Iglesias-Serret, D. Aspirin induces apoptosis in human leukemia cells independently of NF-kB and MAPKs through alteration of the Mcl-1/Noxa balance / D. Iglesias-Serret, M. Piqué, M. Barragan, M. Ana,et.al. // Apoptosis.-2010.-15(2) P. - 219-29.doi:10.1007/s10495-009-0424-9.

91. Balakrishnan, K. Phase 2 and pharmacodynamic study of oral forodesine in patients with advanced, fludarabine-treated chronic lymphocytic leukemia / K. Balakrishnan, D .Verma, S.O'Brien, J.M. Kilpatrick // Blood. -2010. -116(6) P. - 886-92. doi: 10.1182/blood-2010-02-272039. Epub 2010 Apr 28.

92. Darcy, J. P. Vinblastine rapidly induces NOXA and acutely sensitizes primary chronic lymphocytic leukemia cells to ABT-737/ J. P. Darcy Bates, V .A. Danilov, et.al. // Mol Cancer Ther. - 2013. - 12(8) P. - 1504-1514.

93. Klein, A. Chemosensitivity of B cell chronic lymphocytic leukemia and correlated expression of proteins regulating apoptosis, cell cycle and DNA repair / Klein, A. O .Miera, O .Bauer, S .Golfier // Leukemia.- 2000- .14(1) P. - 40-6.

94. Fischer, K. Bendamustine combined with rituximab (BR) in first-line therapy of advanced CLL: A multicenter phase II trial of the German CLL Study Group (GCLLSG) / K .Fischer, P .Cramer, S. Stilgenbauer, et al. // Blood.-2009.-114 P. - 89 (abstr 205).

95. Chomczynski, P.The singlestep method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: Twenty something years on / P. Chomczynski, N. Sacchi // Nat Protoc. -2006.-1(2) P. - 581- 5. doi: 10.1038/nprot.2006.83.

96. Орлов, А.И. Непараметрические критерии согласия Колмогорова, Смирнова, омега-квадрат и ошибки при их применении / А.И. Орлов //Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета. -2014. - вып. 97 С. - 31--45.

97. Hallek, M. International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia. Guidelines for the diagnosis and treatment of chronic lymphocytic leukemia: a report from the International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia updating the National Cancer Institute - Working Group 1996 guidelines / M. Hallek, B. D .Cheson, D .Catovsky, et al. // Blood.-2008. - 111(12) P. -5446-56. doi: 10, 1182/blood-2007- 06- 093906.

98. Катаева Е. В. Клинические аспекты определения свободных легких цепей иммуноглобулинов сыворотки крови у больных хроническим лимфолейкозом / Е.В. Катаева, А.К.Голенков, Т.А. Митина. Е.Ф., Клинушкина и др. // Гематология и трансфузиология. -2017.-Т. 62, №3 C. - 153-157.

99. Woyach J. A., Impact of Age on Outcomes Following Initial Therapy with Various Chemotherapy and Chemoimmunotherapy Regimens in Patients with Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL): Results of CALGB Studies / J. A. Woyach, A.S. Ruppert, B. Peterson, et.al. //ASH Annual Meeting Abstracts.-2011.-118 P 289.

100. O'Brien, S. Maintenance therapy for B-chronic lymphocytic leukemia / S. O'Brien, N.E. Kay // Clin Advances in Hematol Oncol. -2011. - 9(1) P. - 2231.

101. Robak, T. Rituximab plus fludarabine and cyclophosphamide prolongs progression-free survival compared with fludarabine and cyclophospha-mide alone in previously treated chronic lymphocytic leukemia / T. Robak, A. Dmoszynska, P. Solal-Celigny, et. al. // J Clin 0ncol.-2010.-28 P. - 17561765.

102. Стругов, В.В. Механизм действия и клиническая эффективность нового алкилирующего препарата бендамустин при хроническом лимфолейкозе Клиническая онкогематология/ В.В. Стругов, Е.А. Стадник, А.Ю. Зарицкий // Фундаментальные исследования и клиническая практика. - Т. - 4 Н. - 3 - 2011. - С. - 217-227.

103. Loeber, R. Cross-linking of the DNA repair protein 0micron6- alkylguanine DNA alkyltransferase to DNA in the presence of antitumor nitrogen mustards/R.Loeber, et.al. // Chem. Res. Toxicol. - 2008. - 21(4) P. - 78795.

104. Gaul, L. Bendamustine induces G2 cell cycle arrest and apoptosis in myeloma cells: the role of ATM-Chk2-Cdc25A and ATM-p53-p21-pathways. /L. Gaul, et.al. // J. Cancer Res. Clin. Oncol. - 2008. - 134(2) P. -245-53.

105. Leoni, L.M. et al. Bendamustine (Treanda) displays a distinct pattern of

cytotoxicity and unique mechanistic features compared with other alkylating agents / L. M. Leoni, et al. // Clin. Cancer Res. - 2008. - 14(1) P. - 309-17.

106. Hillmen, P. Rituximab Plus Chlorambucil In Patients with CD20-Positive B-Cell Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL): Final Response Analysis of An Open-Label Phase II Study. / P. Hillmen, J. Gribben, G. Follows, et. al. // Blood. - 2010. P. - 116 - 697.

107. Roue, G. Bendamustine is effective in p53-deficient B-cell neoplasms and requires oxidative stress and caspase-independent signaling / G. Roue et al. // Clin. Cancer Res. -2008. - 14(21) P. - 6907-15.

108. Shibue, T. BH3-only proteins: integrated control point of apoptosis / T. Shibue, T. Taniguchi // Int. J. Cancer. - 2006. - 119(9) P. - 2036-43.

109. Niemeyer, C. Mitotic catastrophe induced in cells treated with SDX105 (TreandaTM) / C. Niemeyer, et al. // AACR Meeting Abstracts. - 2005. -2005(1) P. - 538.

110. Portugal, J.Mechanisms of drug-induced mitotic catastrophe in cancer cells / J. Portugal, S.Mansilla, M. Bataller //Curr. Pharm. Des. - 2010.-16(1) P. - 6978.

111. Bendall, H.H. Brief exposure to SDX-105 (TreandaTM) activates potent apoptosis and cell death in lymphoma and leukemia cells/ H. H. Bendall, et. al.// AACR Meeting Abstracts - 2005. - 2005(1) P. - 786.

112. Weiner, G.J. Rituximab: mechanism of action / G.J. Weiner // Semin. Hematol. - 2010. - 47(2) P. - 115-23.

113. Rummel, M.J. In vitro studies with bendamustine: enhanced activity in combination with rituximab. / M.J. Rummel et al. // Semin. Oncol. - 2002. -29 - (4 Suppl. 13) P. - 12-4.

114. Chow, K.U. Synergistic effects of chemotherapeutic drugs in lymphoma cells

are associated with down-regulation of inhibitor of apoptosis proteins (IAPs), prostate-apoptosis-response-gene 4 (Par-4), death-associated protein (Daxx) and with enforced caspase activation. / K. U. Chow et. al. // Biochem. Pharmacol. - 2003. - 66(5) P. - 711-24.

115. Chow, K.U. In AML cell lines Ara-C combined with purine analogues is able to exert synergistic as well as antagonistic effects on proliferation, apoptosis and disruption of mitochondrial membrane potential. / K. U. Chow et. al. // Leuk. Lymphoma - 2003. - 44(1) P. - 165-73

116. Hirota, H. Interference with topoisomerase Ilalpha potentiates melphalan cytotoxicity./ H. Hirota et. al.// Int. J. Oncol. - 2002. - 20(2) P. - 311-8.

117. Knauf, W.U. Phase III randomized study of bendamustine compared with chlorambucil in previously untreated patients with chronic lymphocytic leukemia. /W.U. Knauf et. al.// J. Clin. Oncol. 2009. - 27(26) P. - 4378-84.

118. Beum, P.V. Within peripheral blood mononuclear cells, antibody-dependent cellular cytotoxicity of rituximab-opsonized Daudi cells is promoted by NK cells and inhibited by monocytes due to shaving. / P.V. Beum, M.A. Lindorfer, R.P. Taylor. // J Immunol. - 2008. - Aug. - 15 - 181(4) P. - 291624.

119. Hallek, M. First-line treatment with fludarabine (F), cyclophosphamide (C), and rituximab (R) (FCR) improves overall survival (OS) in previously untreated patients (pts) with advanced chronic lymphocytic leukemia (CLL): results of a randomized phase III Trial on behalf of an International Group of Investigators and the German CLL Study Group. / M. Hallek et. al. // ASH Annual Meeting Abstracts - 2009. - 114(22) P. - 535.

120. Kaina, B. MGMT: key node in the battle against genotoxicity, carcinogenicity and apoptosis induced by alkylating agents./ B. Kaina et. al. // DNA Repair - 2007. - 6(8) P. - 1079-99.

121. Aggarwal, B. B. Signalling pathways of the TNF superfamily: a double-edged sword. Nature Rev. Immunol. - 2003. - 3(9) P. - 745-56. doi: 10.1038/nri1184.

122. Chakrabandhu, K. The extracellular glycosphingolipid-binding motif of Fas defines its internalization route, modeand outcome of signals upon activationby ligand. / K. Chakrabandhu, S. Huault, N. Garmy // Cell Death Differ - 2008. - 15(12) P. - 1824-37. doi: 10.1038/cdd.2008.115.

123. Ea, C. K. Activation of IKK by TNFalpha requires site-specific ubiquitination of RIP1 andpolyubiquitin binding by NEMO. C.K. Ea, L. Deng, Z.P. Xia, et. Al// Mol.Cell. - 2006. - 22(2) P. - 245-57. doi: 10.1016/j.molcel.2006.03.026.

124. Falschlehner, C. TRAIL and other TRAIL receptor agonists as novel cancertherapeutics /C. Falschlehner, T.M. Ganten, R. Koschny // Adv. Exp. Med. Biol.-2009.-647.-P.-195-206 doi: 10.1007/978- 0- 387- 89520- 8_14.

125. LeBlanc, H. N. Apo2L/ TRAIL and its death and decoy receptors. / H.N. LeBlanc, A. Ashkenazi // Cell Death Differ. - 2003. - 10(1) P. - 66-75.doi: 10.1038/sj.cdd.4401187.

126. Santiago, B. Intracellular regulation of Fas-induced apoptosis in human fibroblasts by extracellular factors and cycloheximide. / B. Santiago, M. Galindo, G. Palao, J.L. Pablos // J Immunol. - 2004. - 1 - 172(1) P. - 560-6.

127. Borghi, A. TRAF2 multitasking in TNF receptor-induced signaling to NF-kB, MAP kinases and cell death/ A. Borghi, L. Verstrepen, R. Beyaert,// Biochem Pharmacol. - 2016.P. - 116-1-10. doi: 10.1016/j.bcp.2016.03.009.

128. Wan, Z. Downregulation of SNAIL sensitizes hepatocellular carcinoma cells to TRAIL-induced apoptosis by regulating the NF-kB pathway/ Z. Wan, H. Pan, S. Liu, J. Zhu,// Oncol Rep. - 2015. - 33(3) P. - 1560-6. doi:

10.3892/or.2015.3743. Epub 2015 Jan 20.

129. Meylan, F. TL1A and DR3, a TNF family ligandreceptor pair that promotes lymphocyte costimulation, mucosal hyperplasia, and autoimmune inflammation/ F. Meylan, A.C. Richard, R.M. Siegel// Immunol Rev. -2011. - 244(1) P. - 188-96. - doi: 10.1111/j.1600-065X.2011.01068. x.

130. Wen, L. TL1A-induced NF-kappaB activation and c-IAP2 production prevent DR3-mediated apoptosis in TF-1 cells/ L. Wen, L. Zhuang, X. Luo, P. Wei// J. Biol. Chem. - 2003. - 278(40) P. - 39251-8. - doi: 10.1074/jbc.M305833200.

131. Cavallini, C Expression and function of the TL1A/DR3 axis in chronic lymphocytic leukemia/ C. Cavallini, O. Lovato, A. Bertolaso, E. Zoratti, M. Giorgio, et.al// Oncotarget. - 2015. - 6(31) P. - 32061-32074. - Published online. doi: 10.18632/oncotarget.5201.

132. Halina, A. Alterations in TP53, cyclin D2, c-Myc,P21WAF1/CIP1 and p27KIP1 expression associated with progression in B-CLL/ A. Halina, P.Artur, M.K. Barbara, et.al.// Folia Histochem Cytobiol. - 2010. - 48(4) P. -534-41. - doi: 10.2478/v10042- 010- 0048- 5.

133. Sarto, C. Heat shock proteins in human cancer/ C. Sarto, P. A. Binz, P. Mocarelli// Electrophoresis. - 2000. - 21(6) P. - 1218-26. - doi: 10.1002/(SICI) 1522-2683(20000401)21:6<1218: :AIDELPS1218> 3.0.C0;2-H.

134. Deveraux, Q.L. IAP family proteins-suppressors of apoptosis/ Q. L. Deveraux, J.C. Reed// Genes Dev. - 1999. - 13(3) P. - 239-52.

135. Payda, S. PRAME mRNA levels in cases with chronic leukemia: Clinical importance and review of the literature/ S. Payda, K. Tanriverdi, S. Yavuz, G.Seydaoglu// Leuk Res. - 2007. - 31(3) P. - 365-9. - doi: 10.1016/j.leukres.2006.06.022.

136. Gunn, S.R. Array CGH analysis of chronic lymphocytic leukemia reveals frequent cryptic monoallelic and biallelic deletions of chromosome 22q11 that include the PRAME gene/ S. R. Gunn, A. R. Bolla, L. L. Barron, et.al. // Leuk Res. - 009. -33(9) P. - 1276-81.doi:10.1016/j. leukres. 2008.10.010.

137. Liu, F. NF-kB directly regulates Fas transcription to modulate Fas-mediated apoptosis and tumor suppression/ F. Liu, K. Bardhan, D. Yang, M. Thangaraju, et.al. // J Biol Chem. - 2012. - Jul. - 20. - 287(30) P. - 25530-40.

138. Messmer, B.T. In vivo measurements document the dynamic cellular kinetics of chronic lymphocytic leukemia B cells/ B. T. Messmer, D. Messmer, S. L. Allen, J. Kolitz, et.al. // J Clin Invest. - 2005. - T. - 115. v. 3. - P. - 755-764. - doi.10.1172/jci23409.

139. Eichhorst, B. First-line therapy with fludarabine compared with chlorambucil does not result in a major benefit for elderly patients with advanced chronic lymphocytic leukemia/ B. Eichhorst, R. Busch, S. Stilgenbauer, et.al. // Blood. - 2009. - 114(16) P. - 3382-3391.

140. Roue, G. et.al. Bendamustine is effective in p53-deficient B-cell neoplasms and requires oxidative stress and caspase-independent signaling/ Clin. Cancer Res. - 2008. - 14(21) P. - 6907 -15.