Влияние кадмия на морфогенез, анатомию стебля и процесс регенерации льна-долгунца из клеточных и тканевых культур in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Гончарук, Евгения Александровна

• Гончарук, Евгения Александровна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Гончарук, Евгения Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Состояние окружающей среды и проблемы ее загрязнения в связи с изменением природной экологии.

1.1.1 Характеристика антропогенного воздействия на природные процессы, регулирующие состояние окружающей среды.

1.1.2. Проблема загрязнения окружающей среды тяжелыми металлами.

1.2. Кадмий, как один из основных элементов загрязнения природной среды тяжелыми металлами.

1.2.1. Источники поступления кадмия в окружающую среду.

1.2.2. Поведение кадмия в системе почва-растение.

1.2.3. Основы механизма токсичности кадмия.

1.2.4. Пути снижения токсического действия кадмия различными мет одами.*.;., *.

1.2.5. Перспективные методы селекции растений на устойчивость к тяжелым металлам.

1.3. Влияние повышенных концентраций кадмия на анатомическое строение растений.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.

2.1. Биологические особенности культуры.

2.2. Характеристика исходных сортов.

2.3. Культивирование льна-долгунца в условиях in vitro.

2.3.1. Экспланты и среды.

2.3.2. Клеточная селекция.

2.4. Лабораторные и вегетационные опыты.

2.5. Анатомическое строение стебля.

2.5.1. Световая микроскопия.

2.5.2. Электронная микроскопия.

2.6. Анализ элементного состава зеленой массы льна-долгунца.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ МОРФОФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ И БИОХИМИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ ПРИ ВЫРАЩИВАНИИ ЛЬНА-ДОЛГУНЦА В ПРИСУТСТВИИ КАДМИЯ.

3.1 .Влияние ионов кадмия на рост и развитие растений льна-долгунца в условиях вегетационного опыта.

3.2. Содержание тяжелых металлов в растениях льна, культивируемых в условиях присутствия кадмия.

3.3. Влияние ионов кадмия на формирование проростков в условиях лабораторного опыта.

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ МЕЗО- И УЛЬТРАСТРУКТУРЫ СТЕБЛЯ ЛЬНА-ДОЛГУНЦА ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ КАДМИЯ.

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛЬНА-ДОЛГУНЦА В УСЛОВИЯХ IN VITRO.

ГЛАВА 6. КЛЕТОЧНАЯ СЕЛЕКЦИЯ ЛЬНА-ДОЛГУНЦА НА УСТОЙЧИВОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ ПОВЫШЕННЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ КАДМИЯ В СУБСТРАТЕ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние кадмия на морфогенез, анатомию стебля и процесс регенерации льна-долгунца из клеточных и тканевых культур in vitro»

В последние годы уделяется особое внимание проблеме загрязнения окружающей природной среды тяжелыми металлами. Эти вещества поступают из различных антропогенных источников. Рассеиваясь, они попадают в почву, а затем в растения и оказывают отрицательное действие как на биоту, так и на живые организмы. Среди тяжелых металлов выделяется кадмий, который является наиболее опасным и одним из самых распространенных элементов-загрязнителей данной группы. В настоящее время разрабатываются различные приемы ведения сельского хозяйства в условиях поступления поллютантов, снижающие риск дальнейшего загрязнения окружающей среды. Актуальность данной проблемы выражается и в том, что исключить присутствие тяжелых металлов невозможно, поэтому необходимо использовать разрабатываемые способы для ведения сельского хозяйства в условиях повышенного содержания данных элементов-загрязнителей.

Для достижения поставленной задачи используют различные мелиоративные приемы, направленные на максимальное физико-химическое связывание тяжелых металлов в почве, что позволяет снизить их миграцию в грунтовые воды. К таким приемам относится известкование, внесение органических и минеральных удобрений, использование цеолитов и других сорбентов, а также, в экстремальных случаях, нанесение почвенного слоя. Помимо данных способов, определенный интерес представляют биологические методы деконтаминации загрязненных почв при помощи растений. Такие приемы основаны на способности некоторых видов и генотипов растений извлекать из почвы тяжелые металлы. Исключив возможность дальнейшего загрязнения почв и занимая поля техническими культурами, а также растениями, дающими экологически безопасную продукцию, можно постепенно снизить содержание тяжелых металлов за счет естественных процессов самоочищения в результате выноса элементов растениями. Для достижения этой цели необходимы растения, естественно устойчивые к повышенному содержанию тяжелых металлов в почвенном растворе, поэтому важно создавать такие растения.

Лен - одна из важнейших исконно российских технических культур комплексного использования. Продукты переработки льна-долгунца востребованы во многих отраслях промышленности. В то же время селекция льна, проводимая на основе традиционных методов, остается трудоемким процессом, требующим длительного времени и определенных навыков. Следует отметить, что на сегодняшний день биотехнологические методы выращивания этой культуры с целью получения новых форм и генотипов освоены слабо. В настоящее время помимо селекции на качество (тонковолокнистость, структурный состав волокнистой части, состав масла), устойчивость к полеганию и комплексу болезней, семенную продуктивность и дружность созревания растений, важно вести селекцию на экологическую устойчивость с учетом экологических особенностей региона будущего возделывания сорта и характер последующей переработки продукции льна. Учитывая широкий ареал возделывания данной культуры, включая страны центральной и северной Европы, следует отметить неодинаковую экологическую обстановку в регионах возделывания данной культуры. Так, в России, Украине и Белоруссии наблюдается значительное загрязнение почв тяжелыми металлами. В связи с этим целесообразно использовать данную культуру для рекультивации земель с возможностью последующего получения волокна и продуктов его переработки.

Поскольку экспериментов по изучению культивирования льна-долгунца в условиях in vitro с последующим получением форм растений, устойчивых к тяжелым металлам, не проводилось, то целью данной работы являлось получение методами клеточной селекции форм растений льна-долгунца, устойчивых к кадмию, а также изучение влияния данного металла на процесс формирования лубяных пучков стебля льна. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• изучить условия культивирования каллусной ткани льна-долгунца in vitro с последующей оптимизацией питательных сред, обеспечивающих получение растений-регенерантов;

• разработать и провести клеточную селекцию льна-долгунца in vitro на устойчивость к кадмию;

• изучить влияние кадмия на рост и развития растений льна-долгунца в условиях вегетационного и лабораторного опытов;

• сравнить содержание кадмия и других тяжелых металлов в диких и культурных растениях льна, выращиваемых в условиях повышенного содержания кадмия;

• изучить влияние кадмия на мезо- и ультраструктуру стебля льна. Научная новизна работы заключается в том, что впервые была разработана и проведена клеточная селекция на устойчивость к кадмию in vitro. Показано, что присутствие кадмия в питательной среде в концентрации 25 и 35 мг/л приводило к быстрому ингибированию всех изучаемых процессов. Поэтому эти концентрации не целесообразно использовать в работах по клеточной селекции. Концентрация кадмия в питательной среде 15 мг/л позволяет проводить отбор клеток, и получать растения-регенеранты, устойчивые к металлу. В результате работ in vivo было показано влияние кадмия на мезо- и ультраструктуру стебля льна. Установлено, что кадмий воздействует на строение лубяных пучков, снижая в них число элементарных волоконец и приводя к образованию нитевидных лубяных пучков толщиной в 1-2 клетки, а также к некомпактному расположению клеток элементарных волоконец в пучке. Изменений различных слоев клеточной стенки, пластид, цитоплазмы и ядра при воздействии кадмия не было выявлено. Сравнительный анализ по накоплению хрома, никеля и кадмия у культурных и диких растений льна позволил установить, что культурные виды льна накапливают кадмий, не концентрируя при этом в вегетативной массе хром и никель, тогда как дикие виды льна, напротив, не накапливают кадмия в растениях, но концентрируют хром и никель.

Практическая значимость работы заключается в том, что линии, полученные при помощи методов селекции биотехнологии, в дальнейшем могут быть использованы для рекультивации земель в качестве культур, очищающих почву от соединений токсичных элементов, или в качестве сырья для получения различной продукции, не употребляемой человеком в пищу, такой как технических масла, прядильное волокно и др.

Полученные результаты были доложены на IV Международной конференции "Регуляторы роста и развития растений" (Москва, 1997), VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда" (Москва, 1997), на V Международной конференции "Регуляторы роста и развития растений" (Москва, 1999), на Научной конференции МСХА (Москва, 7-10 декабря, 1999).

Вся экспериментальная работа была выполнена на кафедре сельскохозяйственной биотехнологии ТСХА под руководством академика РАСХН Шевелухи B.C. и кандидата биологических наук Калашниковой Е.А.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Гончарук, Евгения Александровна

Выводы

1. Установлено, что внесение кадмия в почву приводит к торможению роста стеблевой и корневой частей растения льна-долгунца на 9-13% с одновременным уменьшением надземной массы растений на 10-15% по сравнению с контролем.

2. Показано, что выращивание растений льна-долгунца в стрессовых условиях приводит к сокращению онтогенетических фаз развития, следующих за фазой "елочки" на 7-10 дней по сравнению с контролем.

3. Выявлено, что культурные виды растений льна поглощают ионы кадмия, но не накапливают ионы хрома и никеля, в то время как дикие виды поглощают ионы хрома и никеля, не накапливая при этом кадмий в вегетативной массе.

4. Мезо- и ультраструктурный анализ стеблей льна-долгунца показал, что присутствие кадмия в субстрате негативно влияет на формирование лубяных пучков, что выражается в уменьшении количества клеток элементарных волоконец в пучке, в формировании нитевидных лубяных пучков, некомпактном расположении клеток элементарных волоконец в лубяном пучке, а также в неравномерности размеров клеток элементарных волоконец в пределах одного пучка и в сроках формирования вторичной клеточной стенки. Изменений ультраструктуры различных слоев клеточной стенки, пластид, цитоплазмы и ядра не выявлено.

5. Установлено, что присутствие кадмия в субстрате вызывает одревеснение срединных пластинок клеток элементарных волоконец большей части лубяного пучка относительно контрольного варианта, в котором лигнификации были подвержены всего 2-3 срединные пластинки всех клеток лубяного пучка.

6. Отмечено, что процессы каллусогенеза и морфогенеза наиболее интенсивно происходят на сегментах гипокотилей, изолированных с 5-7-дневных проростков льна, культивируемых на питательной среде, содержащей 2,4-Д и БАП в концентрациях по 1 мг/л.

7. Присутствие дополнительно в питательной среде нитрата серебра, ас-парагина, кокосовой воды или эпина не приводит к повышению морфофизиоло-гического потенциала каллусной ткани, культивируемой в нормальных и стрессовых условиях.

8. Разработана и проведена клеточная селекция льна-долгунца к содержанию кадмия в питательной среде. Установлено, что присутствие кадмия в питательной среде в концентрации 15 мг/л позволяет провести клеточную селекцию и получить растения-регенераты, обладающие устойчивостью к воздействию данного металла.

Заключение

В последнее десятилетие агроэкологическое состояние регионов традиционного сеяния льна-долгунца подверглось существенным изменениям. Соединения тяжелых металлов, включая наиболее распространенный и опасный элемент - кадмий, поступают в почву из антропогенных источников и, являясь термодинамически неустойчивыми в почвенных условиях, необратимо переходят в жидкую фазу почв. При регулярном загрязнении почв антропогенными формами соединений кадмия они могут сохраняться и накапливаться в почвах. Увеличивающиеся размеры загрязнения окружающей среды выбросами промышленных предприятий, содержащими тяжелые металлы, в том числе кадмий, приводят к повышению содержания этого металла в агроценозах и, как следствие, к уменьшению количества и снижению качества урожая. Так, техногенное загрязнение окружающей среды отрицательно сказывается на состоянии почв и процессах поглощения и утилизации элементов питания растениями, поэтому возникла проблема создания новых форм льна-долгунца при помощи методов селекции. При этом существование корреляционных связей между изменением условий выращивания и структурными анатомическими особенностями растений предполагают проведение анализа данных изменений. В связи с этим в работе наряду с получением устойчивых к повышенным концентрациям кадмия форм растений льна-долгунца был проведен мезо- и ультраструктурный анализ изменений, происходящих в стебле льна при воздействии стрессового фактора.

В проведенных нами вегетационных и лабораторных экспериментах было установлено, что кадмий угнетал линейный рост растений, а также способствовал снижению массы их надземной части. В то же время воздействие стрессового фактора приводило к смещению онтогенетических фаз развития льна-долгунца, что выражалось в опережении контрольного варианта опытными растениями. Экспериментально было также показано, что влияние, оказываемое кадмием на растения, определялось генотипом, поскольку реакция растений различных сортов на воздействие стрессового фактора проявлялось в различной степени в зависимости от генотипа. При этом общая тенденция угнетения анализируемых показателей прослеживалась у растений всех анализируемых сортов.

Проведенный сравнительный анализ элементного состава вегетативной массы растений дикорастущего и культурного льна показал, что кадмий поглощался культурными видами растений, тогда как дикие формы льна данный элемент не накапливали даже при выращивании в стрессовых условиях. Однако относительно других анализируемых металлов (хром, никель) следует отметить тенденцию их накопления дикорастущим льном при том, что культурные растения льна-долгунца эти элементы не накапливали.

При изучении воздействия кадмия на мезо- и ультраструктуру стебля льна-долгунца было установлено, что присутствие металла в почвенном растворе негативно влияло на формирование лубяных пучков. Это выражалось в уменьшении количества клеток элементарных волоконец в пучке, в формировании нитевидных пучков, толщиной в 1-2 клетки, а также в нарушении компактности расположения клеток элементарных волоконец в лубяном пучке. В то же время, при воздействии кадмия наблюдалась неравномерность размеров клеток элементарных волоконец в пределах одного пучка. Все эти факторы являются косвенными показателями волокна невысокого качества. При анализе ультраструктуры клеток лубяных пучков под влиянием стресса заметных изменений различных слоев клеточной стенки, пластид, цитоплазмы и ядра не наблюдалось. Однако присутствие кадмия отрицательно влияло на равномерность формирования клеток пучка и сроки формирования вторичной клеточной стенки.

В связи с поставленными задачами нами проводились исследования по изучению условий культивирования льна-долгунца in vitro, в результате которых было выявлено, что оптимальным первичным эксплантом для индукции каллусогенеза являются сегменты гипокотилей, изолированные с 5-7-дневных проростков. Также было установлено, что наиболее интенсивно каллусная ткань формировалась на среде, содержащей 2,4-Д в концентрации 1 мг/л. При изучении условий для индукции процесса морфогенеза нами определена оптимальная юз концентрация БАП 1 мг/л , при которой процент образования морфогенного каллуса на начальных этапах культивирования составил 95-100%. Полученные экспериментальные данные по выращиванию культуры льна-долгунца in vitro использовались при проведении селекции на устойчивость растений к кадмию. В процессе проведения селекции определена обратная зависимость прироста каллусной ткани от возрастающих показателей концентрации кадмия в субстрате и числа субкультивирований, что также позволило определить оптимальную концентрацию металла 15 мг/л для проведения дальнейшего селекционного процесса и, впоследствии, отобрать устойчивые каллусные клетки. Относительно более высоких концентраций (25 и 35 мг/л) следует отметить, что в данных условиях каллусная ткань некротизировалась и отмирала, в связи с этим, использование этих концентраций в дальнейших сериях эксперимента было нецелесообразным.

После проведения клеточной селекции нами были получены растения-регенеранты из отобранных каллусных клеток, устойчивых к воздействию кадмия. При этом было установлено, что процент образования адвентивных почек у исследуемых сортов невысокий как в стрессовых, так и в контрольных условиях (20%). В связи с этим нами были проведены работы по оптимизации состава питательной среды для культивирования морфогенных каллусных клеток с целью увеличения выхода растений-регенерантов. Было показано, что применение изучаемых веществ (аспарагин, кокосовая вода, гибереллиновая кислота, инно-зит, нитрат серебра) не оказывало существенного влияния на интенсивность образования адвентивных почек и формирование растений-регенерантов. Наряду с данными веществами было изучено влияние эпина, относящегося к группе брассиностероидов, на исследуемые показатели регенерации. Однако, применение эпина существенно не влияло на морфогенетическую активность по сравнению с другими веществами. Однако, при использовании концентрации анализируемого вещества 1 мг/л отмечалось некоторое стимулирование морфогенети-ческих процессов, особенно у сорта Спартак. При сопоставлении полученных данных по образованию адвентивных почек и выходу растений-регенерантов с

104 данными по применению БАП было отмечено, что БАП интенсивнее стимулировал морфогенез по сравнению с другими веществами.

Таким образом, в результате работы было изучено влияние соли кадмия на интактные растения льна-долгунца в условиях вегетационного, лабораторного опыта, а также разработана и проведена клеточная селекция льна-долгунца на устойчивость к соли кадмия.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Гончарук, Евгения Александровна, 2000 год

1. Акентьева Л.И., Беляева В.А.,Экологические проблемы интродукции растений на современном этапе: вопросы теории и практики//Материалы международной научной конференции, ч.1, Краснодар, 1993, 377 с.

2. Алексеев Ю.В., Биологическое качество растительной продукции в условиях интенсивного загрязнения/ЛПерспективы создания экологически чистых технологий возделывания сельскохозяйственных культур. JL: 1990, с. 53-54.

3. Алексеева-Попова Н.В. Устойчивость к тяжелым металлам дикорастущих видов. Ленинград, 1991, 213 с.с 5. Алексеенко В.А. и др., Цинк и кадмий в окружающей среде, М: Наука, 1992, 200 с.

4. Анталова С. и др., Исследование поведения кадмия в системе почва-растение в полевых экспериментах/ЛПоведение поллютантов в почвах и ландшафтах, Пущино, Институт почвоведения и фотосинтеза, 1990, с. 9096.

5. Бабанская Т.Н., Влияние меди и кадмия на агрохимические свойства почв, рост и продуктивность растений//Тез.докладов междунар. студ. конф. "Кризис почвенных ресурсов: причины и следствия", С-Пб, 1997, 155 с.

6. Бацелис К., Мутагенез в селекции льна-долгунца// Сельскохозяйственная наука, №2,1997.

7. Белецкий Ю.Д., Щербакова Л.Б., Янчич В.И. Улыраструктурные особенности тканей подсолнечника in у^о//Международн. конф. Биология культивируемых клеток и биотехнология, Новосибирск, 1988, 200 с.

8. Виленский В.Д., Миклишанский А.З., Химический состав снежного покрова Восточной Антарктиды, Геохимия, №11, 1976.

9. Гамзикова О.И., Барсукова B.C., Возможности регулирования устойчивости пшеницы к присутствию кадмия и никеля в среде//Совершенствование методологии агрохимических исследований, М: МГУ, 1997,416 с.

10. Гамзикова О.И., Барсукова B.C. К изучению генетического контроля устойчивости мягкой пшеницы к кадмию и никелю//Изогенные линии и генетические коллекции, Новосибирск, 1993,193 с.

11. Глазовская М.А., Геохимия природных и техногенных ландшафтов СССР, М.: Высшая школа, 1988, 328 с.

12. Головатый С.Е., Жигарев П.Ф., Решецкий Н.П., Оценка способов снижения поступления кадмия в растениеводческую продукцию/ЯТочвенные исследования и применение удобрений, вып. 23, Минск, 1995, 314 с.

13. Горешникова Е.В., Влияние свойств дерново-подзолистой почвы и известкования на поступление кадмия, цинка и свинца в растения, автореферат канд. дисс. М. 1995, 24 с.

14. Горшкова Т., Джибео Д., Ибрагимов М., Метаболизируемые полисахариды клеточных стенок в фотосинтетических pulse-chase-экспериментах с растениями льна//Физиология растений, т.43, №2, 1996, с. 180-185.

15. Горшкова Т.А., Метаболизм полисахаридов растительной клеточной стенки//Автореф. дис. на соиск уч. степ. д.б. н., М, 1996.

16. Джое Лети, Получение форм твердой пшеницы устойчивых к грибу Septoria nodorum в условиях in vitro//Автореф. дисс. на соиск уч. степ, канд. с-х. наук, М, 1998.

17. Добровольский В.В., Тяжелые металлы в окружающей среде, М.: МГУ, 1989,210 с.

18. Доронин С.В., Игитова Н.С., Повышение качества льняного волок-на//Почва, биология растений и агротехника их возделывания, тез. докл-ов научн. конф., Киров, 1997.

19. Ефремова Л.Л., Обухов А.И., Охрана и рекультивация почв, загрязненных тяжелыми металлами/ЛГяжелые металлы в окружающей среде и охрана природы, М.:МГУ, 1988, с. 179-182.

20. Жунусова К.Х., Фурсов В.И., Кондыбаева П.Б., Содержание свинца и кадмия в продуктах питания//Актуальные проблемы современной биологии, Алма-Ата, 1991, с. 77-79.

21. Жученко А.А., Лен в России и мировые тенденции его производст-ва//Сб.науч.тр.ВНИИЛ. Торжок, 1994, с.5-19.

22. Ильин В.Б., Кадмий в почве//Химизация сельского хозяйства. №9. 1991.

23. Ильин В.Б., Степанова М.Д., Защитные возможности системы почва-растение при загрязнении почвы тяжелыми металлами// Тяжелые металлы в окружающей среде, М.: МГУ, 1989, с. 80-84.

24. Кабата-Пендиас А., Пендиас X., Микроэлементы в почвах и растениях,1989, М.: Мир, с.166-180.

25. Казакова О.Н., Сячкова Н.С., Устойчивый сорт основа производства экологически чистой продукции льна-долгунца//Проблемы разработки региональной модели устойчивого развития, сб.докл-ов конф., Смоленск,1990.

26. Калашникова З.В., Накопление кобальта и кадмия в урожае некоторых сельскохозяйственных культур при облучении растений на почвах, загрязненных тяжелыми металлами//Агрохимия, №9,1991, с.77-82.

27. Каменова-Юхименко С., Георгиева В., Георгиева Н., Влияние поли-стимулина К на приобретение устойчивости к повышенному содержанию кадмия//Растениеводство, т.32, №3,1995, с.50.

28. Карапетьянц М.Х., Введение в теорию химических процессов, М.: Высшая школа, 1981, 334 с.

29. Кауричев И.С., Ноздрунова Е.М., О миграции и качественном составе воднорастворимого органического вещества в почвах лесолуговой зо-ны//Известия ТСХА. Почвоведение. Агрохимия, 1962, т.5, №48. С.91-106.

30. Кисели Д., Практическая микротехника и гистохимия, Будапешт, 1962, 396 с.

31. Кисс А. Сандр, Исследование аккумуляции кадмия в организме животных и растений, его токсичность и возможность снижения токсичноста с помощью антагонистов магния и цинка//Ншщапап Journal of animal production, vol.43, №1,1994, pp. 61-71.

32. Клейн P.M., Клейн Д.Н., Методы исследования растений, М., 1974, 527 с.

33. Комаров В.Л., Практический курс анатомии растений, М., 1941, 312 с.

34. Кошелева Л.Л., Физиология питания и продуктивность льна-долгунца, Минск, 1980,199с.

35. Кудрявцева Л.П., Совершенствование методики селекции льна-долгунца на устойчивость к антракнозу и полиспорозу// Автореф. дисс. на соиск уч. степ. канд. с-х. наук, М, 1993.

36. Кудрявцева Л.П., Устойчивость к антракнозу коллекционных образцов льна//Селекция, семеноводство, возделывание и первичная обработка льна-долгунца, сб.науч.трудов, вып.28-29, Торжок, 1994, с.63-65.

37. Кузнецов А.В., Методические указания по определению тяжелых металлов в почвах сельхозугодий и продукции растениеводства, Москва, 1992, 61 с.

38. Курчий Б.А., Мелышчук Ю.П., Инициация перекисного окисления ли-пидов клеточных мембран возможный молекулярный механизм действия ионов кадмия/УТез.Докл. II съезда всесоюзного общества физиологов, М., 1992. С.116

39. Ларионов Г.А., Миграция меди, кадмия, свинца в системе почва-растение-животное//Автореф. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук, 1997, 23 с.

40. Лукипудис Сл., Лен-долгунец как почвоочищающая земледельческая культура //Научные труды второй научно-практической конференции "Экологические проблемы сельского хозяйства", вып. XL, кн.2, 1992, с. 99-103.

41. Марченков А.Н., Районированные сорта льна-долгунца, Торжок, 1988, 27 с.

42. Минеев В.Г., Гомонова Н.Ф., Накопление тяжелых металлов в почве и поступление их в растения в длительном агрохимическом опы-те//Докл.РАСХН, вып. 6, 1993, с. 20-22.

43. Москалева Г.И., Куликова А.Е. Анатомическое исследование листа дикорастущих видов льна//Растениеводство, генетика и селекция технических культур, Ленинград, 1992, с. 65-73.

44. Мукосеев В.К., Микрофотографирование фотоувеличите-лем//Ботанический журнал, т.39, №5,1954, с.751-752.

45. Наумов Н.А., Козлов В.Е., Основы ботанической микротехники, М., 1954,312 с.

46. Нгуен Тхи Ли Ань, Повышение устойчивости яровой пшеницы к абиотическим стрессам методами биотехнологии//Автореф. дисс. на соиск уч. степ, канд.с-х. наук, М.: 1995,22 с.

47. Обухов А.И., Бабьева И.П., Гринь А.В., Зырин Н.Г., Научные основы разработки предельно допустимых концентраций тяжелых металлов в почвах// Тяжелые металлы в окружающей среде, М.: МГУ, 1989, 210 с.

48. Обухов А.И. Лепнева О.М., Охрана и рекультивация почв, загрязненных тяжелыми металлами//Тяжелые металлы в окружающей среде и охрана природы, М.: МГУ, 1988, с. 23-36.

49. Ордина Н.А., Структура лубоволокнистых растений и ее изменение в процессе переработки, Москва, 1978,127 с.

50. Орешкин В.Н., Кузьменкова B.C., Свинец и кадмий в современных и древних горизонтах тундровых почв//Тез. докл. Криопедология, Сыктывкар, 1997, с. 130.

51. Пашина Л.В., Генетический контроль признака содержания волокна в стебле льна-долгунца//Цитология и генетика, т.27, вып.З, 1993.

52. Петрунина B.C., Геохимическая экология растений в провинциях с избыточным содержанием микроэлементов//Тр.Биогеохимической лаборатории, т.XIII, М„ 1974, с. 57-72.

53. Пиунова В.В., Пинский Д.Л., Золотарева Б.Н., Ионообменная адсорбция кадмия, магния, свинца Са-формой гуминовой кислоты//Тяжелые металлы в окружающей среде, Материалы международного симпозиума 1518 октября, Пущино, 1996, 321 с.

54. Покровская С.Ф., Регулирование поведения свинца и кадмия в системе почва-растение:Обзорная информация, НИИМЭИагропром, М., 1995, 52 с.

55. Полонецкая Л.М., Бочук A.M., Регенерация побегов из различных экс-плантов льна-долгунца//У1 съезд белорусского общества генетиков и селекционеров. Горки, 1992.

56. Поляков А.В., Черкиова О.Ф., Влияние способа стерилизации питательной среды и регуляторов роста на морфогенез льна-долгунца в культуре ткани//Селекция, семеноводство, возделывание и первичная обработка льна-долгунца, Торжок, вып. 28-29,1994, с.131-134.

57. Праздников С.С., Способы рекультивации загрязненных тяжелыми металлами почв//Совершенствование методологии агрохимических исследований, М.: МГУ, 1997,416 с.

58. Проблемы экологического мониторинга и моделирование экосистем, С-Петербург: Гидрометеоиздат, 1992. 260 с.

59. Прозина М.Н., Ботаническая микротехника , М., 1960,206 с.

60. Рассадина В.Г., Клеточная инженерия для сортоулучшения картофе-ля//Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, №4, 1994, с.22.

61. Савин В.А., Эффективность использования продуктов переработки льна-долгунца в рационе лактирующих коров//Автореф. диссертации, СПб, 1995.20 с.

62. Садовникова JI.K., Решетников С.И., Методические основы восстановления низкоплодородных почв, загрязненных тяжелыми металла-ми//Улучшение и использование малопродуктивных почв, Новочеркасск,1991, с. 103-117.

63. Сальников В.В., Агеева М.В., Юмашев В.Н., Лозовая В.В. Ультраструктурный анализ лубяных волокон//Физиология растений, т.40, №3,1992, с. 458-464.

64. Соколова Т.А., Лазарев А.В., Питрюк В.А., Куйбышева И.П., Пространственное варьирование минералогического и химического состава илистых фракций подзолистых почв//Почвоведение, 1990, № 7, с. 82-91.

65. Соколовский В.Г., Состояние природной среды, М.: Лесн. Пром-ть, 1990,176 с.

66. Соловьев А.Я., Льноводство, М.: Колос, 1978, 319 с.

67. Строганова М.Н., Скрябина О.И., Шоба В.Н. Структура почвенного покрова Центрально-лесного государственного заповедника.//Генезис и экология Центрального лесного государственного заповедника, М.: Наука, 1979, с. 54-86.

68. Таланов Г.А., Смирнов A.M., Антропогенные поллютанты, их ветери-нарно-санитарное и токсикологическое значение//Сельскохозяйственная биология, серия биология животных, вып.2, 1994.

69. Тихвинский С.Ф. Улучшение качества прядильного льна. Ленинград, 1978, 112 с.

70. Тяжелые металлы в окружающей среде и охрана природы, М.:МГУ, 1988.

71. Умаров М.М., Азиева Е.Е., Некоторые биохимические показатели загрязнения почв тяжелыми металлами.// Тяжелые металлы в окружающей среде, М.: МГУ, 1989, 210 с.

72. У эр Дж., Проблемы загрязнения окружающей среды и токсикологии, М.: Мир, 1993, 192 с.

73. Хотылева Л.В., Полонецкая Л.М., Корпусенко Л.И., Методика культуры тканей льна-долгунца in УЙго//Известия АН Беларуссии, серия биологичнских наук, №3, 1991, с. 24-26.

74. Цаплина М.А., Распределение тяжелых металлов в основных компонентах лугового биоценоза//Агрохимия, 1992, №9, с. 106-108.

75. Цаплина М.А., Трансформация и транспорт оксидов свинца, кадмия и цинка в дерново-подзолистой почвеШочвоведение, № 1,1994, с.45-50.

76. Шевелуха B.C., Развитие фундаментальных исследований в биологии и стратегия селекции растений//Селекция и семеноводство, №2, 1993.

77. Элиас В.В., Плеханова Н.О., Плеханов С.Е., Карташева Н.В. Тяжелые металлы в поверхностных водах Байкала// Проблемы экологии, т.2, Ново-сибирск:Наука, 1995,285 с.

78. Ягодин Б.А., Агрогеохимия и мониторинг состояния окружающей среды, Известия ТСХА, вып.5,1990г.

79. Ягодин Б.А., Решетникова Н.В., Али Мохамед Аль-Мосава, Влияние металлургических шлаков на прорастание семян и содержание тяжелых металлов в почве и растениях при длительном взаимодействии с почвой, Агрохимия, № 9,1994.

80. Alloway В., The accumulation of cadmium by vegetables grown on soils contaminated from a varity of sources//The science of the total environment, № 91. 1991, pp. 223-236.

81. Anke M. et al., Essentiality of fluorine molybdenum, vanadium, nickel, arsenic and cadmium//Acta Agronomica Hungarica 40, 1991, pp.210-213.

82. Barakat M.N., Cocking ^C., Regeneration of plants from linum protoplasts/ZPlant protoplasts and genet., Berlin, 1989, p. 160-172.

83. Bednarek W., Lipinski W., Cadmium and nikel in soil influenced by different mineral fertilization// Cadmium, nikel and lithium in natural environment, Warsaw, 1997, p.388.

84. Веке G.J., Graham D.P., Growth and chemical composition of flax cultivars on artifically salinized soil//Plant Scince, vol. 75, №1,1995, p.159-161.

85. Chamel A., Gambonnet В., Air pollution and ecosystems: Int.Symp., Grenoble, 18-22 May, 1988, 671-677.

86. Cointry E.L., Mroginskiy L.A., Picardi L.A., Influence of different growth regulators concentrations on Linum Usitatissimum shoots formation//Agri Scientia, vol.10,1993.

87. Deischen Т., Untersuchungen zur Schwermetallverfugharkeit in Klarschlammgedungen Boden und im Gefassversuch, Bonn, 1989, 162 s.

88. Deischen Т., Durch Bodenberdecking Sanierung schwermetallbelasteter Garten//Wasser+Boden, Bd.46, № 12,1994, s.19-23.

89. Der Knoterich "frisst" auch Schwermetalle//Taspo, №5,1989,8 s.-109 Ebbs S.D., Lasat M.M., Cornish J., Gordon R., Phytoextraction of cadmium and zinc from a contaminated soil//Agricultural research service, U.S.Plant, soil &nutrl, 1997.

90. El-Enany A.E., Allevaiation of cadmium toxicity on maiz seedlings by calcium//Biologia Plantarum, 37 (1), 1995, p. 93-99.

91. Eriksson J.E., The influenceof pH, soil tipe and time on absorbtion and uptake by plants of Cd added tothe soil//Water, air and soil pollution, 1989, vol.48, №3-4,p. 317-335. '

92. Franken S., Heyland K., Bildanalyse als methode zur differenzierung der faserqualitat von lein (Linum usitatissimum L.) an Stengelquerschnitten und118deren bedeutung fur die Zuchtung// Konressband Gottingen, №38,1994, p. 501504.

93. Freidt W., Nichterlein K., Nickuel M., Biotehnology in breeding of flax (Linum usitatissimum): the present status and future prospects//FLAX: Breed and Utis: Proc.EEC Flax Workshop., Brussels, 4-5 Vay, 1988, p. 5-13.

94. Gaudchau, Michael; Schneider, Martin; Investigation of heavy metall accumulation in various medicinal plants and linseed// International symposium-fcybreeding research on medicinal and aromauc plants, 1996,433 p.

95. Glinski J., Turski R., Heavy metal pollution of polish soil//New enviromental aspects of land use in Poland and Hungary, 1993, №400, p. 1-5.

96. Hardiman R.T., Yacoby В., Absorption and translocation of Cd in bush beans/ZPhysiologia plantarum, vol. 61, №4,1987, pp. 670-674.

97. Hatch D.J. The effect of pH on the uptake of cadmium by four plants species grown in flowing solution culture//Plant and soil, vol.105, №1, 1988, pp. 121126.

98. Helal H.M., Rietz E., Sauerbeck D., Aufhahme und Verlagerung von Schwermetallen in Leinpflanzen// Konressband Gottingen, 1991, p. 757-760.

99. Hitoshi Obata, Noriyki Inoue, Kunio Imai and Masano Umebayashi, Cadmium tolerance of calli induced from roots of plants with differences in cadmium tolerance//Soil Sci. Plant Nutr., vol. 40, №2,1994, p. 351-354.

100. Ivanka G. Dimitrova, Dafiia I. Ninova, Histological changes in leaves of herbaceous plants in response to emissions of metallurgical industry/ZBotanique, T.85,1994, pp.137-145.

101. Jackson P.J. et al., Poly (gamma-glutamilcysteinyl) glycin: its role in cadmium resistance in plant cells/ZProc. Nat. Acad.Sci.USA, vol. 84, №11, 1987, p. 6619-6623.

102. Jianjun Chen, Peter B.Goldsbrough. Increased Activity of Glutamylcysteine Synthetase in Tomato Cells Selected for Cadmium Tolerance/ZPlant Physiol, 1994, vol.106, №1, p.233-239.(23)

103. Joshi K.K. Embryogenesis in endosperm, stem and leaf calli of Linum austriacum// Embryology and seed reproduction, XI Int. Symp., Leningrad, 1990, p.67.

104. Khater A., Abou Seeda M., Soliman S., Cadmimn application on bean plant// Agrochimica, vol. 35, № 5-6, p. 434-442.

105. Leita L., Baca Garcia M.T., Gd uptake by Pisum Sativum//Agrochimica, vol.36, № 3, 1992.

106. M.A.A.Gadallah, Effect of Cd and kinetin on chlorophyll content, sacharides and dry matter accumulation in sunflower plants// Biological plantarum, 37 (2), 1995, 233-240.

107. Ma Mi, Tsang Wing Keung, Kwan К M Frances, Preliminary studies of the identification and expression of metallothionein-like gene in Festuca Rubra//Acta Botanica Sinica, vol.30, № 11, p. 1078-1081.

108. Maroti M., Bognar J., Effect of toxic metals inhibiting the growth of plant callus tissues//Acta Agronomica Hungarica, vol. 40, №1-2,1991, p. 39-47.

109. Marshall G., Courduries P., A seedling bioassy^ for screening putative fusarium oxysporum F.SP. lini resistant somaclonal lines of linseed//Natural fibres, vol. 38,1994, p.27-28.

110. Marshall G., Field analysis of variation in somaclones of fibre flax (Linum Usitatissimum L.)//Natural Fibres, vol.37,1994, p.9-15.

111. Meharg A.A. The role of the plasmalemma in metal tolerance in angiosperms//Physiol.Plant.88,1993, р.191-198.(22).

112. Meharg A.A., Integrated tolerance mechanisms: constitutive and adaptive plant responses to elevated metal concentrations in the environment/ZPlant, cell and environment, vol.17, №9, p. 989-993.

113. Mengel K., Kirkby E.A, Principles of plant nutrition, Switzerland, 1987, 687 P

114. Mersik S., Kubik I., Chelating of heavy metals by the humus acids and influence of peat on the uptake of Zn, Pb, and Cd by plants// Int.conf., vol.422, Warsaw, 1995, pp. 19-31.

115. Metz R., Wilke B.M., Einfluss der Bodenbelastung von Rieseifeldern auf Wachstum, Ertrag und Scnwermetallentzug von Mais//Wiss. Zeltschrifl der Humboldt Universitat zu Berlin, R.Agrarwissenschaflen, Bd.41, №3,1992.

116. Naiki N., Yamagata Sh., Isolation and some properties of copper-binding proteins found in copper-resistant strain of yeast/ZPlant a. Cell Physiol., vol. 17, № 6, 1976, p. 1281-1295.

117. Priem Bernard, Morvan Henri, Influence of different concentrations xylomannoside on Linum Usitatissimum shoots//C.r.Acad. sci, ser.3, №11, 1990, p.411-416.

118. Qi Bin He, Bal Ram Singh, Plant availability of Cd in soils// Acta Agric. Scand, Sect. В., Soil and Plant Sci, 1993, vol.43, p. 134-141.

119. Reese R.N., Wagner G.J., Effects of buthionine sulfoximine on Cd-binding peptide levels in suspension-cultured tobacco cells treated with Cd, Zn or Cu//Plant Physiol, vol.84, №3,1987, p.574, 577.

120. Sawert A., Weigel H.I., Jager H.J.,Aufnahme und organspezifische Vertellung von Cadmium bei Solanaccan//Angewandte Botanik, Bd. 61, H.5/6, s. 439-451.

121. Scheller H.V. et al. Phytochelatin synthesis and glutathione levels in response to heavy metals in tomato celMPlant Physiol., vol.85, №4,1987, p.1031-1935.

122. Schubert S., Untersuchungen zur Aufiiahme und Verlagerung von Cadmium in Diatlein (linum usitatissimum L.)//Konressband Gottingen, №35, 1992, p. 527-530.

123. Shalaby A.M., Al-Wakeel S.A.M.|Biologia plantarum, 37 (1), 1995, p. 101106

124. Sharma G.K., Heavy metals environment: Int.Conf., Athens, Sept, vol.1, 1985,610-611.

125. Technology of obtaining good quality flax fibre//Natural fibres, vol. 38, 1994, p. 47-49.

126. Tejklova E., Long-term in vitro shoot-tip culture and plant regeneration in flax//Rostlinna vyroba, vol.38, №12,1992, p. 1022.

127. Teruo Asami, Soil pollution by metals in Japan//Transaction of the XII Congress Inter.Soc.Soil Sci., vol. 2,1986, p.222-223.

128. Usha Keshan and S.Mukheiji, Effect of cadmium toxicity on chlorophyll content, Hill activity and chlorophyllase activity in Vigna radiata L.Leaves// Plant Physiologi, vol.35, № 3,1992, pp.225-230.

129. Yin-Ming Li, Rufus L.chaney, Albert A.Schneiter, Screening for low grain cadmium phenotypes in sunflower, durum wheat and flax//Euphytica, vol.94, 1997, p.23-30.

130. Zhan Xiang-can, Jones David A., Kerr Allen, Regeneration of flax plants transformed by Agrobacterium rhizogenes//Plant Mol. Biol., №5, 1988, p. 551559.