Влияние гелий-неонового лазерного излучения на цитохимический статус нейтрофилов периферической крови при стрессе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.02, кандидат биологических наук Порозова, Светлана Геннадьевна

• Порозова, Светлана Геннадьевна
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Порозова, Светлана Геннадьевна

СОДЕРЖАНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ОРГАНИЗАЦИИ НЕЙТРОФИЛОВ И ВЛИЯНИЕ НА ИХ РЕАКТИВНОСТЬ ГЕЛИЙ-НЕОНОВОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ (обзор литературы)

1.1. Современные представления о структурно-функциональной организации нейтрофилов

1.1.1. Морфология нейтрофилов

1.1.2. Биохимия нейтрофилов

1.1.3. Функции нейтрофилов в норме и патологии

1.1.3.1. Функциональная активность нейтрофилов в

условиях нормы

1.1.3.2. Функциональная активность и цитохимический

профиль нейтрофилов при патологии

1.2. Некоторые аспекты воздействия низкоинтенсивного гелий- неонового лазерного излучения на систему

крови

1.2.1. Современные представления о механизмах биологического действия низкоинтенсивного лазерного облучения

1.2.2. Влияние излучения гелий-неонового лазера на кровь.. 53 Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Экспериментальные модели и методики для исследования цитохимических параметров поли-морфноядерных лейкоцитов

2.2. Методы статистической обработки результатов исследований

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Глава 3. ВЛИЯНИЕ НИЗКОИНТЕНСИВНОГО ГЕЛИЙ-НЕОНОВОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА ЦИТОХИМИЧЕСКИЙ ПРОФИЛЬ НЕЙТРОФИЛОВ

3.1. Цитохимические параметры нейтрофилов при 15-минутном облучении крови светом гелий-неонового лазера in vitro

3.2. Цитохимические параметры нейтрофилов при 30-минутном облучении крови светом гелий-неонового лазера in vitro

Глава 4. ЦИТОХИМИЧЕСКИЙ СТАТУС НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ СТРЕССЕ И ВОЗМОЖНОСТЬ ЕГО МОДИФИКАЦИИ ГЕЛИЙ-НЕОНОВЫМ ЛАЗЕРНЫМ ОБЛУЧЕНИЕМ

4.1. Влияние транскутанного гелий-неонового лазерного облучения на цитохимические показатели нейтрофилов

при 15-минутном иммобилизационном стрессе

4.2. Влияние транскутанного гелий-неонового лазерного облучения на цитохимические показатели нейтрофилов

при 30-минутном иммобилизационном стрессе

4.3. Влияние транскутанного гелий - неонового лазерного облучения на цитохимические показатели нейтрофилов при кратковременном иммобилизационно - звуковом стрессе

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние гелий-неонового лазерного излучения на цитохимический статус нейтрофилов периферической крови при стрессе»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Низкоинтенсивное лазерное излучение в настоящее время нашло применение практически во всех областях медицины при лечении широкого спектра заболеваний (Крюк A.C. с соавт., 1986; Гордиенко В. И., Залесский В. Н., 1989; Илларионов В.Е., 1992; Павлова Т.Н., 1993; Хомерики С.Г. с соавт., 1994; Кошелев В.Н. с соавт., 1994; Чернышева Л.А., Хан M.A., 1995; Ларюшин А.И., Илларионов В.Е., 1997).

Положительный клинический эффект применения света гелий-неоновых лазеров (ГНЛ) при различных формах патологии позволяет предположить влияние низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) на универсальные системы, реализующие разнообразные формы реагирования живого организма на воздействие патогенных факторов. Одной из таких форм ответа является стресс-реакция.

Воздействие на организм любого достаточно сильного фактора, вносящего возмущение в систему его гомеостаза, сопровождается активацией комплекса стандартных защитно-приспособительных реакций, известных как общий адаптационный синдром (стресс) (Селье Г., 1960, 1979). Стресс-реакция как стандартный ответ организма является неспецифическим элементом патогенеза различных заболеваний и патологических процессов. В настоящее время человек постоянно подвергается воздействию таких спутников цивилизации, как информационный стресс, нервные перегрузки, высокий темп жизни, не говоря уже о химическом, радиационном и биологическом загрязнении окружающей среды. Все эти факторы способствуют формированию у человека "хронического стресса", описанного как "синдром хронической усталости". В этой связи сохранение здоровья населения требует разработки комплекса мер, среди которых важное место занимает выявление изменений реактивности организма под действием стресеорных факторов.

С этой точки зрения несомненный интерес представляет система полиморфноядерных лейкоцитов (ПЯЛ). В последнее время стал общепризнанным тот постулат, что роль нейтрофила не ограничивается только его участием в фагоцитозе и неспецифической резистентности организма. По данным разных авторов, нейтрофильный гранулоцит является универсальным эффектором гомеостаза. Любое изменение внутренней среды организма отражается на системе фагоцитоза, а фагоцитарные реакции занимают одно из центральных мест в регуляции структурного гомеостаза (Маянский А.Н., 1989).

Гомеостаз клетки и характер ее ответа на различные эндогенные и экзогенные стимулы во многом определяют особенности функционирования рецепторных структур и внутриклеточных звеньев сопряжения (Бережная Н.М., 1988). В настоящее время известно, что нейтрофилы экспрессируют на своей мембране разнообразные рецепторы. В частности, нейтрофилы человека экспрессируют Hi и Нг- рецепторы к гистамину (Gesprach С., Abita J., 1982; Seliman В., Fletcher M., Gallin G., 1983), рецепторы к a- и ß-адренергическим веществам (Dulis В.Н., Wilson J.B., 1980; Gerdes J., Stein H., 1980), к цитохрому Ь (Бережная Н.М., 1988), к Fc-фрагменту IgG и IgA (Fleit H., Wright S., Unkeless J., 1982), в определенных условиях к IgM (Белоцкий С.М., Снастина Т.И., Диковская Е.С., 1985), к компонентам комплемента CRI, CR3 и CR4 (Fearon D., 1979; Alexander D., Fearon D., 1983; Dykman T. et al., 1983), к простагландинам и лейкотриенам (Goldman D.W., Goetzl E.J., 1984) и др.

Взаимодействие рецепторов с соответствующими агонистами определяет реактивность нейтрофилов, специфичную для каждого медиатора (Маянский Д.Н., 1982; Адо А.Д., Маянский А.Н., 1983; Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983). Сигналы с разных рецепторных структур приводят к неодинаковым функциональным ответам нейтрофилов: гистамин, простагландин Ei, ß-адренергические агенты

снижают интенсивность секреции этих клеток, а холинергические стимулы -усиливают ее (Маянский Д.Н., 1982; Адо А.Д., Маянский А.Н., 1983).

Список заболеваний, в патогенезе которых нейтрофилы играют определенную роль, постоянно расширяется. Среди них инфаркт миокарда (Клебанов и др., 1987; Крейнина М.В. и др., 1989), профессиональные аллергодерматозы (Иванова JI.A. с соавт., 1987), лучевая болезнь (Чухловин А.Б., 1989), язвенная болезнь желудка (Успенский В.М. с соавт., 1989) и даже СПИД (Друх В.М., Земсков В.М., Воробьев A.A., 1992).

Биохимические изменения, обусловленные патологическим процессом в организме, находят свое отражение в метаболизме клеточных элементов крови, а с помощью цитохимических методов удается выявить ранние сдвиги в обменных процессах клетки. Поэтому большое количество работ посвящено изучению состояния цитохимического спектра нейтрофилов и его корреляции с выраженностью и динамикой патологических процессов (Нагоев Б.С., Шубич М.Г., 1979; Вишневецкий Ф.Е. с соавт., 1981; Казимирко В.К., Пилиева Е.В., Флегонтов В.П., 1981; Суржикова Г.С., Ковалева Л.Г., Гольдберг Е.Д., 1984; Шардаков В.И., Минаков В.Н., 1984; Смиян И.С., Луговая О.И., 1985; Нагоев Б.С., 1988; Подильчак М.Д., Терлецкая Л.М., 1988; Базелюк Л.Т., 1992). В качестве критерия тяжести заболевания рекомендуется определять фагоцитарные реакции, состояние кислородзависимых и кислороднезависимых процессов в нейтрофилах (НСТ-тест и содержание ЛКБ) (Витковский Ю.А., 1997).

Высокодифференцированная клеточная популяция полиморфно-ядерных лейкоцитов находится под влиянием нейросекреторной регуляции центральной нервной системы. Более того, существует концепция, согласно которой система тканевых нейтрофилов выполняет посредническую роль между центральной нервной системой (ЦНС) и соединительной тканью (Бахов Н.И., Александрова Л.З., Титов В.Н., 1988). Нейтрофилы, получая соответствующие сигналы по нейросекреторным каналам, реализуют в тканях свой функциональный потенциал и одновременно осуществляют

механизм обратной связи, информируя клетки вегетативных ядер ЦНС о метаболическом состоянии и клеточной композиции тканей организма.

Теснейшая связь системы нейтрофильных гранулоцитов с нервной и гуморальной регуляцией функций организма и наличие у нейтрофила рецепторов к "гормонам стресса" подразумевает включение этих полифункциональных клеток в процесс реализации стрессорного ответа организма.

В настоящей работе проведен анализ изменений цитохимических показателей нейтрофилов периферической крови при воздействии светом ГНЛ с длиной волны 632,8 нм в условиях in vitro, а также исследованы особенности метаболизма и функциональной активности лейкоцитов при иммобилизационном и иммобилизационно-звуковом стрессе различной длительности и влияние транскутанного лазерного облучения на цитохимический профиль нейтрофилов, характерный для стресс-реакции.

Цель работы. Изучить влияние гелий-неонового лазерного облучения на цитохимический статус нейтрофилов периферической крови в условиях in vitro и при экспериментальном стрессе.

Задачи исследования:

1) изучить влияние излучения гелий-неонового лазера (Х=632,8 нм) на цитохимический профиль полиморфноядерных лейкоцитов при облучении крови в условиях in vitro;

2) исследовать особенности влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на метаболические параметры, энзиматическую и бактерицидную активность нейтрофилов крови в зависимости от дозы и длительности лазерного воздействия;

3) определить характер ответной реакции метаболических, ферментативных и микробицидных систем нейтрофилов на стрессорное воздействие и проанализировать особенности влияния гелий-неонового

лазерного облучения на нейтрофилы в зависимости от длительности действия стресс-фактора;

4) изучить влияние транскутанного гелий-неонового лазерного облучения на цитохимические показатели полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови на этапе запуска стресс-реакции.

Научная новизна. Показано, что облучение крови светом ГНЛ в условиях in vitro оказывает воздействие на цитохимический профиль нейтрофилов и фотоэффект носит дозозависимый характер. Впервые проведен комплексный анализ изменений цитохимических параметров нейтрофилов под влиянием гелий-неонового лазерного облучения на различных моделях стресса. Выявлено модифицирующее и протекторное влияние лазерного воздействия на ряд показателей метаболизма, энзиматической активности, состояние бактерицидных систем нейтрофилов в условиях формирования стрессорного ответа. Впервые обнаружено модулирующее влияние транскутанного облучения светом ГНЛ на метаболический ответ нейтрофилов в начальной стадии стрессорной реакции. Получены новые данные о влиянии лазерного света на клеточные механизмы неспецифической резистентности организма, что дополняет существующие представления о механизмах влияния НИЛИ на организм человека и животных.

Практическая значимость. Установленное в работе стимулирующее влияние света ГНЛ на метаболизм нейтрофилов при облучении цельной крови in vitro может быть использовано в клинической практике как дополнительное воздействие при любых экстракорпоральных манипуляциях с кровью. Дозозависимый характер фотоэффекта должен учитываться при вне- и внутрисосудистом низкоинтенсивном облучении крови и при разработке схем лазеротерапии. Выявленная в работе зависимость между метаболическими сдвигами в нейтрофилах и интенсивностью стрессорного воздействия позволяет рекомендовать

исследование рада цитохимических параметров ПЯЛ для оценки степени изменения гомеостаза при стрессе.

Апробация работы. Результаты диссертационного исследования доложены и обсуждены на научной конференции Центральной научно-исследовательской лаборатории Саратовского государственного медицинского университета (ноябрь 1995; июнь 1998), на заседании научного общества патологоанатомов (ноябрь 1995), на заседании объединенных обществ физиологов, патофизиологов, фармакологов и биохимиков СГМУ (сентябрь 1998). Фрагменты диссертации представлены на Международном Симпозиуме "Biomedical Optics Europe '93" (Budapest, Hungary, 1993), на Международном Конгрессе "Laser in Medicine and Surgery" (Munich, Germany, 1993), на 2-ой Всероссийской конференции "Влияние антропогенных факторов на структурные преобразования органов, тканей, клеток человека и животных" (Саратов, 1993), на Всероссийском Симпозиуме "Лазерная и магнитная терапия в экспериментальных и клинических исследованиях" (Обнинск, 1993), на Всероссийской конференции "Физиология и патология перекисного окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза" (Полтава, 1993), на Международной конференции "Новые достижения лазерной медицины" (Москва-С.-Петербург, 1993), на Третьей Международной конференции "Актуальные вопросы лазерной медицины и операционной эндоскопии" (Москва-Видное, 1994), на СВО'93 International Workshop "Cell and Biotissue Optics: Applications in Laser Diagnostics and Therapy" (Moscow-Nizhny Novgorod, 1994), на I съезде Международного Союза ассоциации патологоанатомов (Москва, 1995), на Международной конференции "Biomedical Optics" (San Jose, USA, 1995), на International Kongress "Laser in Medicine and Surgery" (München, 1995), на Первом Российском Конгрессе по патофизиологии "Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы" (Москва, 1996), на IX Международной научно-

практической конференции "Применение лазеров в медицине и биологии" (Ялта-Харьков, 1997).

Основные положения, выносимые на защиту:

1) Облучение периферической крови светом гелий-неонового лазера с длиной волны 632,8 нм в условиях in vitro оказывает влияние на цитохимический статус полиморфноядерных лейкоцитов.

2) Влияние гелий-неонового лазерного облучения на цитохимический статус нейтрофилов в условиях in vitro носит дозозависимый характер: 15-минутное воздействие оказывает стимулирующий эффект, 30-минутное -способствует формированию адаптивных метаболических реакций клетки.

3) Транскутанное гелий-неоновое лазерное облучение на фоне 15-минутного им мобилизационного стресса оказывает протекторное влияние на стреес-индуцированные изменения ферментативной активности и снижает степень угнетения антимикробного и цитотоксического потенциала нейтрофилов; а при 30-минутном стрессе - способствует снижению активности бактерицидных систем нейтрофилов.

4) Транскутанное облучение светом гелий-неонового лазера на этапе запуска стрессорной реакции оказывает выраженное модулирующее влияние на цитохимический профиль нейтрофилов, способствуя активации их бактерицидных систем, метаболизма и образованию биологически активных молекул, принимающих участие в формировании системного отклика на действие стрессорного фактора.

Публикации: По материалам диссертационного исследования опубликовано 17 работ, в том числе 6 - в зарубежной печати.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 191 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы, содержащей описание материалов и методов исследований, двух глав, включающих результаты собственных исследований, заключения, выводов

и списка использованной литературы. Указатель литературы включает 178 отечественных и 119 зарубежных источников. Работа содержит 25 таблиц и 27 рисунков.

Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ОРГАНИЗАЦИИ НЕЙТРОФИЛОВ И

ВЛИЯНИЕ НА ИХ РЕАКТИВНОСТЬ ГЕЛИЙ-НЕОНОВОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ (обзор литературы)

1.1. Современные представления о структурно-функциональной организации нейтрофилов

1.1.1. Морфология нейтрофилов

Более ста лет назад И.И. Мечников (1892) сформулировал свою, ставшую классической, теорию фагоцитоза и затем в течение долгого времени полиморфноядерные лейкоциты рассматривались как важнейший фактор защиты макроорганизма от инфекций. За два последних десятилетия учение о системе фагоцитоза и составляющих ее компонентов претерпело значительные эволюционные изменения, в результате которых фагоциты перестали считать фактором исключительно антимикробной защиты организма. В настоящее время имеются бесспорные доказательства активного участия нейтрофилов в межклеточных взаимодействиях и способности их к разноплановым регуляторным влияниям (Маянский А.Н., 1983; Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983; Бережная Н.М., 1988; Втюрин Б.В., Каем Р.И., Червонская Н.В., 1989). Расширению границ существовавших понятий о биологической роли нейтрофилов способствовало обнаружение у них способности выделять в окружающую среду широкий спектр биологически активных веществ, что определило новый статус полиморфноядерного лейкоцита как одноклеточной секреторной железы, при этом имеющей преимущество по сравнению с другими секреторными клетками - способность к движению (Пальцын A.A., 1988; Пальцын A.A. с соавт., 1988).

В настоящее время считается доказанным, что нейтрофилы в силу

особенностей своей структурно-функциональной организации являются универсальными эффекторами гомеостаза (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983).

Отсюда вполне естественен интерес исследователей к системе нейтрофильных гранулоцитов, роль которой в развитии патологического процесса все шире обсуждается в последние годы (Маянский А.Н., 1989; Терещенко И.П., Кашулина А.П., 1993).

Нейгрофилы имеют целый ряд особенностей морфологической и структурной организации, которые определяют функциональные и метаболические параметры этих клеток. Зрелые еегментоядерные нейтрофилы представляют собой округлые клетки диаметром 9-12 мкм. Ядро клеток состоит из нескольких (обычно 3-4) сегментов, соединенных тонкими нитями хроматина. Ядерный хроматин при окраске по Романовскому окрашивается в темно-фиолетовый цвет, цитоплазма - в розоватый цвет. В цитоплазме нейтрофилов содержится большое количество мелких гранул, различающихся как по размерам, так и по тинкториальным свойствам (Алмазов В. А. с соавт., 1979).

По данным ультраструктурных исследований в ядре обнаруживается большое количество гетерохроматина, который примыкает к ядерной мембране и прерывается только в области ядерных пор (Кпг I., 1969). Ядрышки встречаются редко или отсутствуют, что указывает на подавление или прекращение синтеза белка. Цитоплазматическая мембрана образует небольшое количество выростов и микроворсинок. Умеренноплотный цитоплазматический матрикс содержит свободные рибосомы и полисомы. Гранулярный эндоплазматический ретикулум (ЭПР) представлен единичными короткими канальцами, на поверхности которых имеется небольшое количество рибосом. Митохондрии -небольшие, преимущественно с непрозрачным матриксом, присутствуют в нейтрофильных лейкоцитах в ограниченном количестве. Комплекс Гольджи слабо развит и образует небольшую сферу в центре клетки,

часто располагается между сегментами ядра. В области комплекса Гольджи обнаруживается центриоль с отходящими от нее микротрубочками (Kriz J., 1969; Scott R.E., Horn R.G., 1970).

По общепризнанной в настоящее время схеме гемопоэза в ходе созревания нейтрофилов выделяют следующие стадии: 1) стволовая плюрипотентная клетка костного мозга; 2) клетка предшественница миелопоэза; 3) лейкопоэтинчувствительная клетка (КОЭ); 4) миелобласт; 5) промиелоцит; 6) миелоцит; 7) метамиелоцит; 8) палочкоядерный нейтрофил; 9) зрелый нейтрофил. На стадиях развития до миелоцита включительно клетки способны к синтезу ДНК и делению митозом и составляют таким образом митотический пул лейкоцитов. На следующих стадиях происходит дифференцировка клеток без митоза (Пальцын A.A., 1988). Начиная со стадии метамиелоцита клетки образуют постмитотический пул. Время созревания гранулоцитов, т.е. время, необходимое для прохождения от стадии миелобласта до зрелого гранулоцита, приблизительно равно 10-14 дням. Число клеточных делений не постоянно и колеблется от 4 до 11. Так, миелоцит, как правило, делится 2 раза, при тяжелой инфекции - 4. Сравнивая генерационное время отдельных клеточных стадий Г.И. Козинец и др. (1976) отмечают, что оно увеличивается по мере созревания гранулоцитов от 9 - 32 ч у миелобласта, до 89 - 108 ч у метамиелоцита.

Созревание гранулоцитов в костном мозге сопряжено со значительными изменениями их морфофункциональных свойств. Морфологически это выражается в постепенном уменьшении размеров ядра с увеличением ядерно-цитоплазматического отношения, исчезновении ядрышек, конденсации хроматина и концентрации его у оболочки ядра, и, конечно, сегментации ядер нейтрофилов. По мере созревания клетки цитоплазма утрачивает базофилию, обусловленную наличием большого количества РНК, и приобретает специфическую нейтрофильную зернистость (Алмазов В.А. с соавт., 1979).

Длительность циркуляции нейтрофилов составляет от 2 до 34 ч (Boggs D.R., 1975; Илюхин A.B., Зубенкова Э.С., Кахетелидзе М.Г., 1976). По мнению Г.И. Козинец с соавт. (1988) время жизни нейтрофилов в русле крови составляет 5-6 ч. Основное время гранулоциты находятся в тканях, где завершают свой жизненный цикл и осуществляют основные функции, погибая в процессе их выполнения. Поли морфноядерные лейкоциты (ПЯЛ), мигрировавшие в ткани, не рециркулируют. Время их пребывания в тканях точно не установлено, по данным D.F. Bainton, J.L. Ullyot, M.G Farguhar (1971) - примерно 1-2 дня, по данным В.А. Алмазова с соавт. (1979), А.Д. Адо и А.Н. Маянского (1983) - 4-5 дней. Нейтрофильный цикл у человека от морфологически распознаваемой клетки-предшественницы в костном мозге до стадии разрушения зрелого гранулоцита, длится 14-23 дня (Metealf D., 1971; Bainton D., 1975).

К настоящему времени изучены ультраструктурные и гистохимические изменения гранулоцитов в процессе их созревания. На стадии миелобласта для клеток характерны хорошо развитый аппарат Гольджи и система эндоплазматического ретикулума (Терентьева Э.И., Шишканова З.Г., 1972; Cline М., 1975). Об активных процессах синтеза нуклеиновых кислот и белков свидетельствует наличие ядрышек, большого количества рибосом. Энергетические потребности миелобластов в значительной мере обеспечиваются за счет процессов окисления, о чем свидетельствует наличие в цитоплазме большого количества митохондрий.

Специфические для нейтрофилов структуры появляются на стадии промиелоцита. Закономерности дифференцировки клеток

нейтрофильного ряда хорошо объясняются наличием двух независимых друг от друга циклов внутриклеточной секреторной активности -первичного и вторичного гранулогенеза (Bainton D.F., Farguhar M.G., 1966; Bainton D.F., Ullyot J.L., Farguhar M.G., 1971). Исследования D.F. Bainton., M.G. Farguhar (1966) показали, что самый ранний признак превращения миелобласта в промиелоцит состоит в появлении в каналах

цитоплазматической сети и во внутренних цистернах пластинчатого комплекса секреторного материала, расходуемого на формирование азурофильных гранул. Этот процесс, названный первичным гранулогенезом, начинается с отпочковывания от внутренних цистерн аппарата Гольджи инициальных вакуолей с электронно-плотным центром и светлой периферией, заполненной мелким хлопьевидным материалом. Важнейшим свойством этих вакуолей является их способность к агрегации и слиянию, после чего они мигрируют в периферические отделы цитоплазмы. После конденсации содержимого вакуоли превращаются в зрелые азурофильные (первичные или промиелоцитарные) гранулы, заполненные мелкозернистым материалом высокой электронной плотности. Диаметр зрелых азурофильных гранул в промиелоцитах человека составляет в среднем 0,5 мкм (Bainton D.F., Ullyot J.L., Farguhar M.G., 1971). Азурофильные гранулы содержат большое количество ферментов и биологически активных веществ. Поскольку значительную часть энзимов составляют кислые гидролазы (эластазы, протеазы, пептидазы, кислая фосфатаза, оксигеназа и т.д.) (Cline М., 1975), азурофильные гранулы относят к типичным лизосомам. В составе лизосом идентифицированы лизоцим (муромидаза), катепсин, липолитичесьсие ферменты, миелопероксидаза, кислые

гликозаминогликаны, неферментные катионные белки (Baggiolini М., Bretz U., Gusas В., 1974; Bretz U., Baggiolini М., 1974; Cline М., 1975). Методом электронной гистохимии миелопероксидаза найдена во всех отделах секреторного аппарата промиелоцита - в каналах цитоплазматической сети, во внутренних цистернах цитоплазматического комплекса, в незрелых и зрелых азурофильных гранулах (Bainton D.F., Farguhar M.G., 1966). Этот фермент синтезируется только на стадии промиелоцита и признан биохимическим и цитохимическим маркером промиелоцитарной стадии. Колебания в его содержании зависят от степени зрелости промиелоцита и от митотических делений, вдвое уменьшающих количество

гранул в дочерних клетках. Промиелоциты характеризуются высокими темпами образования лизосом, именно на этой стадии развития клеток система эндоплазматического ретикулума достигает максимального развития. На стадии промиелоцита в клетке начинается формирование специфических гранул, которые называются еще вторичными, а процесс их образования - вторичным гранулогенезом (Алмазов В.А. с соавт., 1979; Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983). Прекращение синтеза миелопероксидазы, совпадающее с прекращением формирования азурофильных гранул и появление специфических гранул указывает на переход клетки в стадию миелоцита (Ванйоп В.Р., 1Л1уо1 IX., Ра^иЬаг М.С., 1971).

Миелоциты являются наиболее высоко дифференцированными элементами гранулоцитарной серии, способными к делению. Данная клеточная популяция по своим морфофункциональным свойствам существенно отличается от миелобластов и промиелоцитов. В миелоцитах замедляются темпы синтеза нуклеиновых кислот, уменьшается количество митохондрий, менее развита система эндоплазматического ретикулума. Цитоплазма почти полностью утрачивает базофилию. Таким образом, на стадии миелоцита происходит значительное изменение свойств гранулоцитарных клеток, связанное с прекращением митотической активности. При этом в миелоцитах ярко выражены процессы, направленные на формирование внутриклеточных структур и синтез соединений, обеспечивающих жизнедеятельность зрелой клетки. В миелоцитах активно синтезируются специфические гранулы. В цитоплазме существенно увеличивается содержание гликогена и липидов, а их концентрация достигает максимума в зрелых нейтрофилах (Алмазов В.А., Павлов Б.А., 1961).

Первичные и вторичные гранулы в сегментоядерных нейтрофилах отличаются как по морфологии, цитохимии, так и по ультраструктуре. Азурофильные гранулы большого размера (5-8 нм), имеют высокую

Таблица 1.

Компоненты азурофильных и специфических гранул нейтрофилов человека

(Пауков B.C., Кауфман О.Я., 1983; Оглобина О. Г., 1988; В.Е.Пигаревский., 1983; Бахов Н.И., Александрова Л.З., Титов В.Н., 1988)

Азурофильные Специфические

Кислые гидролазы Р -глицерофосфатаза 1Ч-ацетил- а-глюкозаминидаза р -глюкуронидаза а -маннозидаза Катепсин О Катепсин В Отсутствуют

Нейтральные протеиназы Неспецифическая коллагеназа Хемотрипсинподобный фермент (аналогичный катепсину О) Сериновые протеиназы: Эластаза Катепсин О Нейтральные протеиназы Специфическая коллагеназа Вторая коллагенолитическая протеиназа

Миелопероксидаза (маркерный фермент) Щелочная фосфатаза (маркерный фермент)

Лизоцим Лизоцим

Неферментные катионные белки Неферментные катионные белки

Лактоферрин

Белок, связывающий витамин В12

электронную плотность, по форме - округлые или элипсоидные. Количество первичных гранул в зрелом нейтрофиле невелико и составляет не более 10-30% (Borysenko М., Beringer Т., 1984). Специфические гранулы меньшего размера (2-5 нм) и также могут быть округлой или вытянутой формы. Однако, они обладают меньшей электронной плотностью, чем первичные гранулы. В зрелом нейтрофиле специфические гранулы составляют 70-90% всех гранул (Steidel Ch., Huhn Р., 1970; Hirsch J.G., 1974).

При центрифугировании в градиенте плотности сахарозы можно разделить азурофильные и специфические гранулы. Скорость осаждения азурофильных гранул в 3-4 раза больше, чем у специфических. Средняя плотность азурофильных гранул 1,23, а специфических - 1,19. Биохимические исследования (Baggiolini М., Bretz U., Gusas В., 1974; Bretz U., Baggiolini М., 1974) показали, что азурофильные гранулы содержат всю внутриклеточную пероксидазу, большую часть лизосомальных ферментов и половину лизоцима. Специфические гранулы содержат оставшийся лизоцим и не содержат других компонентов азурофильной зернистости (табл. 1).

Имеются данные о существовании еще одного типа гранул - С-гранул, которые представляют собой малые везикулоподобные секреторные органеллы. В их состав входят 1Ч!-ацетил-Р-глюкозаминаза, катепсины, желатиназы (Dewald В., Bretz U., Baggiolini М., 1982; Baggiolini М., Dewald В., 1984).

Первичные гранулы по набору ферментов являются типичными лизосомами, поскольку кислые гидролазы - общепризнанная "эмблема" истинных лизосом - содержатся в азурофильных гранулах и отсутствуют в специфических (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983). Кроме того, в азурофильных гранулах идентифицировано большое количество основных (катионных) белков, кислых мукополисахаридов. Энзимы и белки лизосом принимают участие в разрушении фагоцитированных микробов, в инактивации бактериальных энзимов. При определенных условиях

(фагоцитоз, взаимодействие с комплексом антиген-антитело и т.д.) нейтрофилы активно выделяют содержимое лизосом в окружающую среду, где и проявляется специфическое действие лизосомальных энзимов и белков (Алмазов В.А. с соавт., 1979; Пальцын A.A., 1988).

Что же касается вторичных гранул, то они представляют собой типичную специфическую зернистость нейтрофилов, в состав которой входят гликоген, липиды, щелочная фосфатаза, специфическая коллагеназа, лактоферрин и др. (Пауков B.C., Кауфман О.Я., 1983).

1.2. Биохимия нейтрофилов

Зрелые сегментоядерные нейтрофилы отличаются рядом особенностей метаболизма, связанных с их функцией (Сейц И.Ф., Луганова И.С., 1967). Наиболее существенной из них является высокий уровень гликолиза. Этим объясняется способность нейтрофилов к фагоцитозу даже в анаэробных условиях (воспалительный экссудат). Гликолиз - единственный источник энергии, обеспечивающий все формы движения нейтрофила. Основным субстратом гликолиза в лейкоцитах является экзогенная глюкоза, в меньшей мере галактоза и фруктоза. Гликолитические реакции осуществляются непосредственно в цитоплазме нейтрофилов.

Однако при недостаточном поступлении глюкозы нейтрофилы широко используют в качестве субстрата для гликолитических реакций гликоген, содержание которого в нейтрофилах достаточно велико: оно составляет 7,32+2,05 мг на 109 нейтрофилов (1,4-5% сухого веса клетки) (Алмазов В.А. с соавт., 1979). В норме, когда клетка работает на ограниченном метаболическом обеспечении, содержание гранул гликогена практически не меняется. Только при стимуляции, в условиях повышенных затрат энергии, резко усиливается гликолиз и расходуются цитоплазматические запасы гликогена. Поэтому любая реакция, при

которой нейтрофил достаточно долго находится в состоянии активации, приводит к снижению уровня внутриклеточного гликогена. Этот факт явился основанием использования цитохимической реакции на гликоген для оценки функционального статуса и реактивности нейтрофилов (Лапотников И.А. с соавт., 1973; Раппопорт Ж.Ж., Гончарук З.И., 1973; Фрадкин В.А., 1975).

Зрелый нейтрофил располагает ферментами для синтеза гликогена, что было показано в эксперименте Н.Г. Хрущова, Н.И. Комарович, М.Г. Скурской (1969) с инкубацией гепаринизированной крови морской свинки с меченой глюкозой в течение 1 ч при 37° С. Нейтрофилы, активно синтезирующие гликоген, составляли около 90%. Подавление синтеза РНК и белка не меняло интенсивности гликогенеза.

Как известно, дыхание клетки включает три этапа: а) окислительное образование ацетилкоэнзима А из пирувата, аминокислот и жирных кислот, б) метаболизм ацильных групп в цикле трикарбоновых кислот, в) перенос электронов к молекулярному кислороду с одновременным окислительным фосфорилированием АДФ.

Роль дыхания в жизнедеятельности нейтрофилов сравнительно невелика: ингибиторы митохондриального транспорта не подавляют кислородзависимую активацию метаболизма клетки, а чисто морфологически это подтверждается относительно небольшим количеством митохондрий. Таким образом, отличительной особенностью зрелых нейтрофилов является то, что дыхание клетки не зависит полностью от митохондрий (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983). Лишь несколько процессов являются абсолютно зависимыми от реакций окислительного фосфорилирования, сопряженных с митохондриальными мембранами, в частности выработка некоторых вазоактивных соединений и уничтожение нескольких типов бактерий уже после их поглощения.

Метаболический профиль нейтрофилов кардинально изменяется при

стимуляции. К наиболее значимым сдвигам относится резкое увеличение расхода глюкозы в реакциях ГМФШ (гексозомонофосфатный или фосфоглюконатный путь): до 30% всей глюкозы окисляется таким образом, тогда как в нестимулированном состоянии нейтрофила - только 1-2% (Murphy Р., 1976). Стимуляция вызывает в нейтрофиле значительную активизацию потребления кислорода и генерацию таких сверхактивных метаболитов, как перекись водорода, супероксидный анион, гидроксильный радикал, синглетный кислород, хлорноватистая кислота (Babior В.М., 1984; Britigan В.Е. et al., 1986; Оглобина О. Г., 1988). Скорость и внезапность возникновения и протекания этих процессов так велика, что их сравнивают со взрывом: потребление кислорода возрастает в 10-15 раз (Roos D., 1980).

Респираторный взрыв носит универсальный характер, так как стимуляторы различной физико-химической природы вызывают запуск качественно однотипных метаболических реакций. В частности, один из механизмов активации нейтрофилов крови заключается в том, что образующиеся при активации лейкоцитов крови активные формы кислорода могут перемещаться довольно далеко от места их образования и в присутствии ионов железа продуцировать гидроксильные радикалы, что приводит к инициации перекисного окисления липидов в мембранных системах (Клебанов Г.И. с соавт., 1988). В тоже время продукты перекисного окисления липидов способны сенсибилизировать ПЯЛ (Владимиров Ю.А. с соавт., 1988; Vladimirov Yu.A. et al., 1990), вызывая "прайминг-эффект", выражающийся как в активации реакций респираторного взрыва, так и в увеличении экспрессии на поверхности нейтрофилов рецепторов и повышении концентрации внутриклеточного Са2+ (Koval'chuk L.V. et al., 1991). Увеличение в циркулирующей популяции нейтрофилов клона активированных клеток вносит заметный вклад в развитие патологического процесса, в частности инфаркта миокарда (Крейнина М.В. и др., 1989).

В процессе активации нейтрофилов разные стимулирующие агенты так или иначе реагируют с плазматической мембраной, меняя ее молекулярную топографию (Клебанов Г.И. и др., 1990). Между моментом связывания стимулирующего фактора и началом продукции супероксида обнаруживается лаг-период продолжительностью от 16 до 60 с и более в зависимости от вида стимулятора (Korchak Н.М. et al., 1984). Поглощение кислорода и продукция супероксида начинают снижаться через 20-30 минут после активации и к 60-й минуте в несколько раз уступают интенсивности процесса в начале (Jandl R.C. et al., 1978). Эта деактивация необратима - вторичной стимуляцией не удается добиться возобновления респираторной активности (Segal A.W., Coade S.B., 1978).

Начальным этапом всего механизма активации метаболизма клетки при респираторном взрыве является активация мембранных оксидаз, катализирующих процесс окисления NADPH2 до NADP+ с переносом образующихся при этом электронов на молекулярный кислород и активирующих первый этап ГМФШ. Новые порции NADPH2, нарабатываемые в реакциях ГМФШ, замыкают положительную обратную связь. Молекулярный кислород, приняв от NADPH2 электроны, образует О2- - супероксидный анионный радикал (супероксид-анион), который может восстанавливаться до молекулы Н2О2 при помощи фермента супероксиддисмутазы (СОД) и далее до молекулы воды и молекулярного кислорода в присутствии фермента каталазы (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983). Образующиеся в ходе этих процессов и их промежуточных стадий активные метаболиты кислорода являются мощными биоокеидантами и обеспечивают нейтрофилу реализацию одной из важнейших его функций - цитотоксической. Необходимо отметить, что респираторный взрыв не является физиологическим звеном энергетического жизнеобеспечения нейтрофила, а помогает решать чисто эффекторные задачи в условиях стимуляции и мобилизации всех функций клетки против факторов, нарушающих структурный гомеостаз (Klebanoff

S.J., Clark R.A., 1978; Klebanoff S.J., 1982; Lane Th.A., Lamkin G.E., 1984).

Реакция бессубстратного восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) отражает степень активации кислородзависимого метаболизма, и прежде всего функцию ГМФШ и связанную с ним наработку свободных радикалов (Маянский А.Н., Рассанов С.П., 1983). Принцип метода состоит в том, что, сталкиваясь с активированным нейтрофилом, бесцветный в растворе HCT восстанавливается в диформазан, который в виде нерастворимых темных гранул легко определяется в мазке крови (Пирс Э., 1962; Досон Р. с соавт., 1991). С помощью электронной микроскопии показано, что восстановление красителя происходит в гладком эндоплазматическом ретикулуме (Humbert J.R., Solomons С.С., Ott J.E., 1971), и митохондриях (Novikoff A.B., Shin W.Y., Drucker J., 1961). Непосредственную роль в восстановлении HCT играет супероксид-анион, образующийся из молекулярного кислорода при активации ГМФШ. Количество образовавшегося диформазана служит критерием интенсивности реакции. Информативность и, следовательно, клиническое значение НСТ-теста заключается в том, что он позволяет выявить компоненты, которых нет в покоящемся нейтрофиле, поэтому с его помощью проводят дифференцировку интактных и стимулированных клеток. Кроме того, НСТ-тест отражает активацию одной из ключевых ферментных систем, ответственных за цитотоксический потенциал нейтрофила. Различают спонтанный и индуцированный НСТ-тест.

Спонтанный НСТ-тест отражает степень функционального раздражения нейтрофилов in vivo, являясь зеркалом гомеостаза. Как показали исследования Т. Wiktrom с соавт. (1996) наличие корреляции между уровнем хемилюминесценции и величиной восстановленного HCT свидетельствует о том, что спонтанный НСТ-тест достаточно точно отражает уровень окислительного метаболизма нейтрофилов. Стимулированный НСТ-тест характеризует функциональный резерв

нейтрофилов, вскрывая потенциальные резервы клеток. Патология кислородзависимых механизмов бактерицидности нейтрофилов коррелирует с нарушением способности к восстановлению HCT (Baechner R.J., Nathan D.G., 1967), что позволяет рассматривать индуцированный НСТ-тест как биохимический критерий готовности нейтрофилов к завершенному фагоцитозу. Большое внимание исследователей привлекала возможность применения этого теста для дифференциальной диагностики бактериальных и вирусных инфекций как это было предложено в работе Park В.Н., Fikrig S.M., Smithwick Е.М. (1968). Однако последовавшие за этим многочисленные исследования поколебали неоспоримость подобного утверждения (Демин A.A., Дробышева В.П., 1984), и в настоящее время данный вопрос остается открытым.

В нейтрофилах представлены все группы ферментов, позволяющие осуществлять метаболизм глюкозы как посредством гликолитических реакций, так и реакций пентозофосфатного пути. Если энергия, освобождаемая при гликолизе, в основном используется для реализации двигательной и фагоцитарной активности нейтрофилов, то пентозофосфатный путь окисления глюкозы особенно существенен при синтезе жирных кислот, в процессе которого нейтрофилы способны удлинять их молекулы посредством ряда ферментативных реакций (Алмазов В.А. с соавт., 1979). Синтезируемые липиды, в частности, фосфоглицеролы, сфинголипиды и гликолипиды, могут встраиваться в клеточные мембраны. Так, фосфоглицеролы встраиваются в основном в липидный бислой эндоплазматического ретикулума. Липиды могут встраиваться в митохондриальные мембраны (Ленинджер А.Л., 1985). В связи со специфической функцией ПЯЛ (участие в процессах фагоцитоза), синтез липидов в них идет очень активно, и интенсивно синтезируемые фосфолипиды и триглицериды используются при построении мембран лизосом, фагосом, оболочки клетки (Алмазов В.А. с соавт., 1979), что особенно важно, если учесть такую форму реакции нейтрофила как

секреторная дегрануляция.

В качестве источников энергии нейтрофилы могут использовать не только углеводы, но и жирные кислоты. Специфические гранулы нейтрофилов содержат большое количество разнообразных

липолитических ферментов. Кроме того, окисление свободных жирных кислот может осуществляться и в митохондриях. Это происходит при образовании в наружной мембране митохондрий соответствующих КоА-эфиров, легко проникающих внутрь митохондрий.

В то же время способность зрелых нейтрофилов к синтезу цитоплазматических белков, по-видимому, минимальна. Морфологические особенности и короткий срок жизни зрелого нейтрофила дают основание считать его специализированной клеткой, располагающей готовым набором биологически активных веществ, которые при выполнении специфической функции лишь расходуются, но не восполняются. Об этом прежде всего свидетельствуют результаты многочисленных исследований способности этих клеток утилизировать меченые аминокислоты. В частности, в исследованиях В.А. Алмазова, С.И. Рябова (1963) было показано, что созревание нейтрофилов сопровождается быстрым снижением способности к утилизации 835-метионина. Эти данные подтверждают и результаты электронно-микроскопических исследований, говорящие о резкой редукции рибосом и системы эндоплазматического ретикулума в зрелых нейтрофилах (Алмазов В.А. с соавт., 1979). В нейтрофилах, находящихся в крови, синтез РНК отсутствует, либо настолько слаб, что не обнаруживается методом электронно-микроскопической радиоавтографии (Саркисов Д.С., Пальцын A.A., Втюрин Б.В., 1980). Авторы, применившие более чувствительный биохимический метод для исследования нейтрофилов, выделенных из крови, пришли к выводу, что клетки в покое мало или совсем не синтезируют РНК и очень слабо синтезируют белок (Murphy Р., 1976; Cline М., 1975).

Однако, при активации (фагоцитозе шариков латекса) нейтрофилов человека M.Cline (1966) впервые наблюдал усиление синтеза РНК. Используя биохимический метод, он обнаружил усиленное включение меченого уридина фагоцитирующими нейтрофилами по сравнению с нефагоци'1 ирующими клетками. Несколько позже M.Cline с соавт. (1968) отмечал увеличение в 1,7 раза включения уридина в РНК при активировании нейтрофилов человека эндотоксином кишечной палочки. При обработке нейтрофилов конканавалином А также было отмечено усиление включения уридина в РНК клеток (Granelli-Piperno A., Vassal Ii J.D., Reich Е., 1979). Исследованиями Д.С. Саркисова с соавт. (1986), применявшими методы электронно-микроскопической радиоавтографии, показано, что нейтрофилы крови способны включать уридин in vitro. Специфическое для мест синтеза РНК расположение метки, характерное для РНК перемещение метки из ядра в цитоплазму, торможение включения уридина ингибитором синтеза РНК - актиномицином D убедительно показывают усиление синтеза РНК. Авторы отмечают низкий уровень синтеза РНК при инкубации нейтрофилов крови в отсутствие стимуляторов и его возрастание при стимуляции лейкоцитов объектами фагоцитоза, причем как путем усиления интенсивности синтеза РНК в клетках, так и увеличения числа синтезирующих клеток. Вопрос о том, какую функцию нейтрофила обеспечивает синтез РНК при его активации до настоящего времени окончательно не решен.

Темпы метаболизма нейтрофилов в значительной мере зависят от особенностей микроокружения. В частности, в присутствие достаточного количества кислорода отмечается угнетение гликолиза в нейтрофилах, хотя полного его подавления не происходит. Фагоцитоз и передвижение нейтрофилов сопровождаются резкой активацией окислительного фосфорилирования, гликолиза, метаболизма лигшдов и т.д.

1.1.3. Функции нейтрофилов в норме и при патологии 1.1.3.1. Функциональная активность нейтрофилов в

условиях нормы

Сочетание готового эффекторного потенциала со способностью к быстрой его реализации - свойство, которое делает нейтрофил одним из главных участников ранней ответной реакции на любые изменения гомеостаза в организме.

В понятие реактивности нейтрофила входит способность быстро перестраивать метаболизм клетки в ответ на широкий спектр стимулирующих воздействий (респираторный взрыв), адгезия к различным субстратам, агрегация, миграция, интернализация корпускулярных частиц, фагоцитоз и эндоцитоз, активизация каскадных гуморальных систем организма и такие свойства, которые выявляются при взаимодействии с другими типами клеток, - цитотоксичность, цитостатичность, способность отщеплять клетки от монослойных культур, влиять на функциональную активность других клеточных элементов соединительной ткани.

Специфическая функция нейтрофилов осуществляется в двух основных формах: в виде фагоцитоза микробов с последующим их уничтожением и перевариванием и путем секреторной дегрануляции в межклеточное пространство бактерицидных и цитотоксических веществ, содержащихся в гранулах.

Фагоцитоз бактерий и инородных частиц складывается из 4 фаз: 1) хемотаксис; 2) опсонирование; 3) поглощение; 4) внутриклеточное переваривание. Способность нейтрофилов к фагоцитозу обусловлена рядом особенностей, в частности, высокой двигательной активностью: скорость их передвижения в идеальных условиях составляет 35-40 мкм в минуту (Hirsch J.G., 1974). Среди различных типов лейкоцитов нейтрофилы обладают наиболее выраженной двигательной активностью. Исследования в фазовоконтрастном микроскопе свидетельствуют о наличии у

нейтрофилов нескольких видов двигательной активности. Прежде всего -это броуновское движение гранул, что показано при микроскопии в фазовом контрасте (Klebanoff S.J., Clark R.A., 1978; Wright D.G., 1982), во-вторых - спонтанное перемещение нейтрофилов (миграция), и, наконец, целенаправленное перемещение клеток к объекту фагоцитоза (хемотаксис) (Алмазов В.А. с еоавт., 1979). Известно множество факторов, которые вызывают хемотаксис нейтрофилов. В осуществлении хемотаксиса особенно большую роль играет активация следующих компонентов системы комплемента: термоустойчивого комплекса комплемента С567 и СЗа и низкомолекулярного пептида каскада комплемента С5а (Струков А.И., 1980). Кроме производных комплемента и других факторов плазмы прямую стимуляцию вызывают продукты окисления арахидоновой кислоты, медиаторы лейкоцитов, бактерий (Маянский А.Н., Маянский Д.П., 1983). Структурной основой миграционной функции служат сократительные белки, подобные, но не идентичные актину и миозину мышечных клеток. Они собраны в микрофиламенты, которые располагаются на клеточной периферии и агрегируют при стимуляции с образованием сократительных волокон - двигательного аппарата нейтрофила. Нейтрофилы, дефектные по содержанию актин-микрофиламентов, способны к респираторному взрыву и секреторной дег-рануляции, но двигательные функции у них нарушены: они не распластываются и не передвигаются по стеклу, не поглощают объектов фагоцитоза (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983).

Большое значение в процессе фагоцитоза имеет опсонизация микробов. Описан следующий механизм ее реализации. Термостабильные опсонины или антитела и термолабильные факторы компонента комплемента связываются с соответствующими рецепторами, затем рецептор для СЗЬ осуществляет контакт с микробом и прилипание, а рецептор для поверхности Fc-антитела (иммуноглобулина) - захватывание микроба и погружение (Струков А.И., 1980).

На прилипание и захват частиц лейкоцит отвечает повышением уровня метаболической активности - респираторным взрывом. По морфологическим данным, этому процессу сопутствует дегрануляция нейтрофила. J.G. Hirsch (1962) проследил за динамикой этого явления при помощи фазово-контрастной микрокиносъемки. Было обнаружено, что как только частицы зимозана соединялись со свободной поверхностью нейтрофилов, часть гранул, расположенных вблизи наружной клеточной мембраны, разрывалась.

Любая дегрануляция сочетается с направленной мобилизацией гранул, которые перемещаются либо к фагосоме, либо к плазматической мембране. Как одна из форм клеточного движения (в данном случае движения органелл), дегрануляция связана общими механизмами с поглощением, хемокинезом и хемотаксисом. Все они зависят от гликолиза, наличия катионов Са2+, свободных сульфгидрильных групп, поверхностной серин-эстеразы, не нуждаются в окислительно-восстановительных реакциях, в частности в активации ГМФШ, индифферентны к ингибиторам белкового синтеза. Подобно хемотаксису для дегрануляции характерна поляризация внутриклеточных органелл (гранул), которая совершается при участии микротрубочек (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983).

Поглощение объекта фагоцитоза - энергетически зависимый процесс. Интенсивность поглощения существенно не нарушается при отсутствии в среде кислорода и резко тормозится всеми ингибиторами гликолиза (Алмазов В.А. с соавт., 1979). Процесс поглощения приводит к образованию фагоцитарной вакуоли (фагосомы). Первичные и вторичные гранулы нейтрофила активно перемещаются к фагосоме и сливаются с ней. Было показано, что у кролика в фагосому попадает вначале (через 30 секунд после поглощения частицы) содержимое вторичных гранул, а затем (через 1-3 минуты) - первичных (Baggiolini М., 1980; Bainton D.F., 1980). Аналогичные данные были получены относительно нейтрофилов

человека (Brentwood В J., Henson P.M., 1980). В то же время есть сообщения, что в нейтрофилах человека оба типа гранул изливаются в фагосому одновременно через 20-60 секунд после стимуляции (HofFstein S., 1980; Segal A., Darling J., Coade S., 1980).

Дальнейшие этапы фагоцитоза - гибель бактерий, их переваривание -осуществляется при помощи поступивших в фагосому биологически активных веществ и энзимов. Убивание микроорганизмов осуществляется оксидантами и веществами, содержащимися в гранулах нейтрофилов: пептидными антибиотиками - дефензинами (первичные гранулы), лизоцимом, катионными белками (первичные и вторичные гранулы), кобалофилином, лактоферрином (вторичные гранулы). Эти вещества тормозят рост микробов и действуют микробицидно, а за переваривание убитых микробов отвечают гидролитические ферменты первичных гранул (Пигаревский В.Е., 1978; Brunham R.C., Holmes К.К., 1983; Riley L., Robertson D., 1984a, 19846). В отличие от элементов оксидантной системы, антимикробный потенциал нейтрофилов, содержащийся в их гранулах, преформирован. В зрелом покоящемся нейтрофиле присутствуют микробицидные факторы, накопленные в процессе гранулогенеза, и при стимуляции они только расходуются (Rado Т. A. et al., 1984). Внутриклеточному перевариванию предшествует бактерицидное действие миелопероксидазной системы и катионных белков азурофильных гранул нейтрофилов.

В нейтрофилах существует несколько бактерицидных систем. По отношению к кислороду бактерицидные системы нейтрофилов можно разделить на две группы: кислородзависимые и кислороднезависимые.

Кислородзависимые антимикробные системы S.J. Klebanoff (1975) подразделяет на две основные группы. Одна из них требует для реализации бактерицидного действия присутствия миелопероксидазы.

Миелопероксидаза (МП) -это железосодержащий катионный белок, изоэлектрическая точка которого находится в области pH 10,0, а

относительная молекулярная масса равна 122000. Она составляет в человеческих нейтрофилах около 5% их сухой массы. Бактерицидное действие миелопероксидазы проявляется при наличии в среде галогенов и перекиси водорода. Все три компонента содержатся в фаголизосоме нейтрофилов, что и объясняет появление в них мощной антибактериальной системы при фагоцитозе, эффект которой по своей силе значительно превышает соответствующий эффект составляющих ее компонентов (Пигаревский В.Е., 1978). Так, например, Н.Ю.Говоровой с соавт. (1989) было показано повреждающее действие на эритроциты человека системы МП - Н2О2 - СК При этом в присутствии МП лизис эритроцитов протекал весьма незначительно, в то время как инкубация с НОС1 приводила к лизису этих клеток в большей степени.

Как известно, образование МП происходит на ранних стадиях созревания нейтрофилов, начиная с метамиелоцита до зрелого сегментоядерного нейтрофила. Существенного образования МП позднее не происходит, и функционирует ранее накопленный фермент (Шафран М.Г., Шабанова Л.Ф., Ашмарин И.П., 1976).

Спектр бактерицидного действия миелопероксидазной системы изучен еще недостаточно. Эта система способна нейтрализовать активность многих грамположительных и грамотрицательных бактерий. МП образует с субстратом Н2О2 фермент-субстратный комплекс, который окисляет галогены, генерируя продукты с высокой реакционной способностью. При реакции с ионами С!" комплекс МП- Н2О2 образует гипохлористую кислоту (точнее - ОСЬ), С1+ и СЬ. Подобные продукты могут быть получены и при взаимодействии с другими галогенами. Хорошо известна реакция образования Юг при взаимодействии ОС1- и Н2О2 (Рюкауег А.Н. а!., 1972):

Н2О2 +ОС1--^ Ю2+Н20+С1.

Таким образом, система МП- Н2О2 - галоген продуцирует синглетный кислород - чрезвычайно реакционноспоеобный агент.

Возможны два пути реагирования продуктов системы МП с субстратом - галогенизация и оксигенация. Механизм галогенизирования белков бактерий заключается в замещении протонов или молекулярных групп субстрата на продукты системы МП-ШОг-галоген. Реакция протекает по следующей схеме (Klebanoff S J., 1981):

МП

Х- + Н2 О 2 + АН -АХ + ОН- + Н2 О,

где Х - галогены (1% Cl", Br), А - белки бактерий.

Оксигенация системой МП может выражаться в окислении SH-групп, переокислении липидов, окислении образованных при гидролизе пептидов, в реакциях окислительного дезаминирования, декарбоксилирования аминокислот с образованием альдегидов, гидроксилирования липидных и белковых компонентов цитоплазматической мембраны клеток и микроорганизмов (Thomas E.L., Aune Т.М., 1977; Hess M.L., Manson N.H., Okabe E., 1982; Boyle M.D.P. et al., 1985).

Концентрация компонентов миелопероксидазной системы в нейтрофилах возрастает при фагоцитозе. Перекись водорода образуется в результате окисления глюкозо-6-фосфата через гексозомонофосфатный шунт. При фагоцитозе ее образование в нейтрофилах увеличивается в 2-4 раза по сравнению с нормой. Наибольшему бактерицидному эффекту миелопероксидазной системы способствует подкиеление содержимого фаголизосомы до pH 5,0 (Пигаревский В.Е., 1978).

Система МП-Нф может быстро инактивировать полипептид С5а, хемоаттрактанты (Alexander N.M., 1974; Clark R.A., Klebanoff S. J., 1979), ai -антитрипсин (Murphy P., 1976). Снижение концентраций любого из трех компонентов миелопероксидазной системы ведет к падению ее бактерицидной активности.

Вторая группа кислородзависимой антимикробной системы проявляет свою активность и в отсутствие МП - это перекись водорода,

синглетный кислород, супероксиданион, гидроксильный радикал.

Синглетный кислород образуется в ходе реакции спонтанной дисмутации супероксидных анионов (Khan A.U., 1970):

+ 2Н+

Ог + О2- -^ Н2 О 2 + ю2.

Кроме того, синглетный кислород вырабатывается при взаимодействии 02_ с Н2О2, точнее при взаимодействии 02" с ОН в цикле Хабера-Вейса:

г-» О2 +Н2О2 +Н+ 02 +Н2О + ОН

он +н2о2 -> н2о + о2- +н+

Образовавшиеся в цикле Хабера-Вейса гидроксильные радикалы реагируют с Ог", давая Ю2 (Kellogg E.W., Fridovich J., 1975):

Or +ОН ОН- + Юг.

Кислородзависимые процессы, индуцированные взаимодействием нейтрофилов с микроорганизмами, сопровождаются хемилюминесценцией (Ногап Т., English D., McPherson Т., 1982). Тест хемилюминесценции нейтрофилов применяется в медицинской практике для дифференциальной диагностики ряда заболеваний ( Lewandowiez-Uszynska A., Jankowski А., 1995).

Кислороднезависимая антимикробная система включает кислые гидролазы, нейтральные протеазы, лизоцим, лактоферрин, неферментные катионные белки.

Лизоцим (мурамидаза) - основной ферментный белок, содержащийся в специфических и азурофильных гранулах нейтрофилов. Его изоэлектрическая точка лежит в пределах рН 10,0-11,0, а относительная молекулярная масса равна 13000-29000. Бактерицидное действие лизоцима связано с его способностью к деполимеризации полисахаридов клеточной стенки микроба. Наибольшая бактерицидная активность фермента

наблюдается при рН 7,2 (Пигаревский В.Е., 1978). Эта активность заметно возрастает при сочетанном действии лизоцима и гистона. Лизоцим обнаружен в плазме крови, молоке, слезной жидкости, слюне, мокроте, перитонеальной жидкости. Сходное распространение в организме имеет другой бактерицидный белок лейкоцитов - лактоферрин.

Лактоферрин содержится в специфических гранулах нейтрофилов. На одну молекулу белка (относительная молекулярная масса 80000-85000) приходится два атома железа. При недостаточном насыщении железом лактоферрин отщепляет метаболически важное железо от гемсодержащих бактерий и тем самым подавляет их активность. Лактоферрин активен в отношении гемсодержащих бактерий, но спектр его бактерицидной активности, по-видимому, не так широк, как у миелопероксидазной системы и неферментных катионных белков (Пигаревский В.Е., 1978).

Лизосомальные катионные белки (ЛКБ) по аминокислотному составу подобны гистонам, но для них характерны значительно большее содержание цистеина и меньшая относительная молекулярная масса (Кокряков В.Н., 1973). И.П. Ашмарин с соавт. (1972) выдвинул гипотезу об общности происхождения и идентичности отдельных фракций лизосомных катионных белков и ядерных белков нейтрофилов.

Способность гистонов распадающегося хроматина и катионных белков лизосом в малых концентрациях стимулировать, а в больших -подавлять основные биохимические процессы в клетках указывает на двойственный характер их действия в очагах воспаления. Это свойство, а также влияние на проницаемость клеточных и сосудистых мембран, позволило отнести лизосомные катионные белки нейтрофилов к медиаторам воспаления.

ЛКБ представлены ферментными (миелопероксидаза, лизоцим, нейтральная эластаза, катепсин О) и неферментными катионными белками (Пигаревский В.Е., 1983). Общее содержание катионных белков лизосом нейтрофила в клетке близко к 7* 109 мг (Ашмарин И.П., Кокряков В.Н.,

Пигаревский В.Е., 1973; Кокряков В.Н., Ашмарин И.П., Пигаревский В.Е., 1973). Лизосомные катионные белки обладают высокой бактерицидной активностью, которая основана на нарушении структуры и функции мембран микробной клетки. Вследствие нарушения проницаемости мембран в первые 15-30 мин (обратимая фаза) часть компонентов микробной клетки попадает во внешнюю среду. Вторая фаза (необратимая) длится 1-5 ч и связана с деструкцией клеточной стенки (Ашмарин И.П. с соавт., 1972; Ждан-Пушкина С.М., 1973). Считается, что механизмом взаимодействия между катионными белками и фагоцитированными бактериями является электростатическое взаимодействие анионных компонентов бактериальной клетки с катионными белками. Бактерицидным действием белки обладают в концентрациях, исчисляемых в микрограммах на 1 мл (Ждан-Пушкина С.М., 1973). Бактерицидное действие ЛКБ заметно возрастает при снижении величины рН, причем максимальный эффект отмечен в кислых средах, содержащих молочную кислоту, которая, как известно, образуется при гликолизе и способствует подкислению содержимого фаголизосом.

Было обнаружено участие МП и ЛКБ не только в подготовке процессов фагоцитоза, но и в экстренном пополнении общего фонда антибактериальных факторов межклеточных жидкостей организма после проникновения инфекционных агентов. Отмечается, что нейтрофилы могут секретировать значительные количества МП во внеклеточную среду - более 20% от содержания в клетке (Smith R.J., Speziale S.C., Bowman B.J., 1985). Так, при взаимодействие бактерий с нейтрофилами кролика в опытах со Staph.aureus (Жекова М.М., Анатолий С.А., Ашмарин И.П., 1976) выброс МП начинался не позднее, чем через 9-12 минут, т.е. еще на стадии сорбции бактерий, и достигал максимума к 30-й минуте. Обнаружено, что выход МП из клетки возможен не только при прямом контакте с бактериями, но и под воздействием "сигнала", передаваемого от клеток, которые уже контактировали с бактериями. В качестве такого сигнального фактора

выступают JT КБ. Отмечено, что в концентрации порядка 10 мкг/мл Л КБ способны усиливать выход МП из нейтрофила. Подобная концентрация достигается при выбросе всего 10-15% клеточного запаса ЛКБ, причем в объеме среды, превышающем объем единичной клетки более, чем в 100 раз. Таким образом, сформулирована гипотеза "лавинного" включения системы выделения МП, когда единичная бактерия может инициировать выброс МП и ЛКБ из единичного нейтрофила, которые, в свою очередь, определяют выход МП и ЛКБ из других клеток уже без участия бактерий.

Выход содержимого из гранул нейтрофилов имеет существенное значение в метаболизме тканей. Он не зависит от респираторного взрыва, хотя часто протекает одновременно с ним. Нейгрофилы располагают набором биологически активных молекул практически для любой мишени в межклеточном веществе и на мембране клеток.

В последнее время убедительно доказано, что нейгрофилы являются / не только "профессиональными" фагоцитами, но и принимают активное , участие в межклеточных взаимодействиях, что резко расширяет границы существующих представлений о биологической роли этих клеток.

В настоящее время многие исследователи уделяют большое внимание регуляторному влиянию лейкоцитов на систему гемостаза. Б.И. Кузник, Н.В. Васильев и H.H. Цыбиков (1989) высказали предположение об иммунологическом или клеточно-гуморальном контроле регуляции гемостаза, отведя лейкоцитам важную роль в этих процессах. А. Zatta с соавт. (1991) показали, что ПЯЛ после инкубации лейкоцитарно-тромбоцитарной суспензии способны усиливать агрегацию тромбоцитов, что объясняется выбросом из лейкоцитов метаболитов арахидоновой кислоты, свободных радикалов и клеточных протеаз. Описан механизм действия фактора активации тромбоцитов, также вещества лейкоцитарного происхождения. Он заключается в быстром (максимум - 3 мин) образовании инозитолфосфатов, активации секреции серотонина и

последующей агрегации тромбоцитов (Nunez D. et al., 1990). Однако, помимо активации коагуляционного звена гемостаза, лейкоциты могут оказывать и антикоагулянтное действие (Люсов В.А., Утешев Д.Б., Дюков И.В., 1993). При определенных условиях лизосомальные ферменты могут выделяться из нейтрофилов и, с одной стороны, усиливать синтез Pg, а с другой - активизировать фактор ХПа, который запускает не только внутренний, но и внешний путь образования протромбиназы, что явно ускоряет свертывание крови (Schärpe S. et al., 1991). Кроме того, фактор XII усиливает фибринолиз и активизирует кининогенин-кининовую систему. Таким образом, лейкоциты одновременно регулируют сосудисто-тромбоцитарный гемостаз (через Pg), свертываемость крови, фибринолиз (через фактор XII) и сосудистый тонус (через калликреин-кининовую систему).

Нейтрофилы могут регулировать функциональную активность эозинофилов (Tesch Н., Konig W., 1980) и тромбоцитов (Lynch J.M., Lotner G.Z., Betz S.J., 1979), степень влияния иммунных комплексов на базофилы (Camussi G., Mencia-Muerta J., Benveniste J., 1977). Нейтрофилы способны разрушать пораженные вирусом клетки в присутствии комплемента. Этот феномен носит название "комплементзависимая цитотоксичность нейтрофилов" (Khan A.U., 1970). Комплементзависимая цитотоксичность нейтрофилов - первая и активнейшая линия защиты организма от проникновения вирусной инфекции. Присутствие нейтрофилов in vitro предотвращает бласттрансформацию лимфоцитов на специфические антигены и фитогемагглютинин. При этом нейтрофилы способны не j только ингибировать, но и стимулировать функциональную активность -лимфоцитов и фибробластов (Visher T.L., Bretz U., Baggiolini M., 1976; Korec S., 1980; Маянский A.H., Маянский Д.Н., 1983). Ответ лимфоцитов ' на различные стимулы может быть усилен предварительной инкубацией лимфоцитов с нейтрофилами в течение 24 ч (Larson R., Kluskens L., Vachin S., 1984). Нейтрофилы обладают способностью нарушать целостность

монослоя клеток эндотелия сосудов и фибробластов человека. Фибробласты в дальнейшем способны к рекультивации (Lundren G., Zukoski С.Н., Moller G., 1968; Harlan J.M. et al., 1981).

Нейтрофилы, активированные воспалительным экссудатом, значительно усиливают свою реактивность в отношении других клеток. При этом отмеченная активность нейтрофилов не всегда обладает видоспецифичностью. Так, например, супернатанты, полученные при культивировании нейтрофилов крыс, стимулируют лимфоциты человека, а нейтрофилы человека - тимоциты крыс (Sheng Y. et al., 1984).

Нейтрофилы отщепляют от монослоя клетки опухолей, подавляя при этом их пролиферацию (Takasugi М., Akira D., Kinoshita К., 1975). Гранулоциты крыс при индукции пептоном in vivo проявляют цитолитическую активность против опухолевых клеток (Pickaver А.Н. et al., 1972).

Таким образом, система нейтрофилов выступает как универсальный i регулятор в реакциях межклеточного взаимодействия, с помощью которого , разные клеточные популяции могут усиливать или уменьшать свою активность.

Вместе с тем, ПЯЛ играют ведущую роль в обеспечении неспецифической резистентности организма. Именно лейкоциты и J макрофаги являются центральным звеном, от деятельности которого зависит течение реакции фагоцитоза и продукция гуморальных неспецифических факторов защиты, таких как лизоцим, интерферон, комплемент.

К настоящему времени в лейкоцитах, макрофагах, тучных клетках и клетках ткани легких обнаружены лейкотриены (ЛТ) - биологически активные вещества, впервые выделенные из лейкоцитов. ЛТ являются продуктами метаболизма липооксигеназного цикла превращения арахидоновой кислоты. В комплексе с другими метаболитами арахидоновой кислоты (простагландинами (Pg), гидроксилированными

высокомолекулярными кислотами) JIT являются важнейшими медиаторами ^

i

воспаления. Нейтрофилы в основном депонируют JIT, хотя JITB4 синтезируется преимущественно нейтрофилами и влияет на миграцию лейкоцитов непосредственно в очаге воспаления (Бережная Н.М., 1988, Беклемишев Н.Д., 1989). При внутривенном введении JITB4 усиливается хемотаксис нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов и макрофагов, а также высвобождение лизоцима из лейкоцитов. Под действием JITB4 резко возрастает адгезия лейкоцитов к эндотелию в посткапиллярных венулах. Накопление нейтрофилов под действием ЛТВ4 в присутствии вазодилататоров, не влияющих на проницаемость кровеносных сосудов, сопровождается значительным повышением уровня PgE2. Однако синергизм JITB4 по отношению к PgE2 проявляется только при наличии полиморфноядерных лейкоцитов. JITB4 стимулирует продукцию супероксида и высвобождение лизосомальных ферментов из нейтрофилов (Кузник Б.И., Васильев Н.В., Цыбиков H.H., 1989).

Гомеостаз клетки и характер ее ответа на различные эндогенные и экзогенные стимулы во многом определяют особенности функционирования рецепторных структур (Бережная Н.М., 1988). В j настоящее время известно, что нейтрофилы экспрессируют на своей мембране разнообразные рецепторы. В частности, нейтрофилы человека экспрессируют Hi и Н2- рецепторы к гистамину (Gesprach С., Abita J., 1982; Seliman В., Fletcher M., Gallin G., 1983), рецепторы к ос- и ß-адренергическим веществам (Dulis В.Н., Wilson J.B., 1980; Gerdes J., Stein H., 1980), к цитохрому В (Бережная Н.М., 1988), к Fc-фрагменту IgG и IgA (Fleit H., Wright S., Unkeless J., 1982), в определенных условиях к IgM (Белоцкий С.М., Снастина Т.И., Диковская Е.С., 1985), к компонентам комплемента CRI, CR3 и CR4 (Fearon D., 1979; Alexander D., Fearon D., 1983; Dykman T. et al., 1983) и др.

Эти рецепторы, полифункциональные по своей природе, участвуют в качестве компонентов общего механизма преобразования внешнего

'РОССИЙСКАЯ 41 ^СУДАРСТВЕНИА

стимула в реакции эффекторных органелл нейтрофилов. У нейтрофилов в инициации каскадного механизма передачи и преобразования внешнего сигнала в функциональный ответ этих клеток принимают участие процессы мобилизация кальция, активации протеинкиназы С, выхода из клетки арахидоновой кислоты (для образования ее производных), активации гуанилат- и аденилатциклазы (McPhall L.C., Shyderman R., 1984).

При взаимодействии специфических рецепторных структур с соответствующими агонистами в нейтрофилах генерируются присущие этому взаимодействию сигнальные молекулы, при этом все они в процессе инициации используют общий механизм преобразования внешнего сигнала, который основан на гидролизе мембранных фосфоинозитолов (Теппермен Дж., Теппермен X., 1989). Гидролиз мембранных фосфоинозитолов с образованием инозитолтрифосфата и диацилглицерола

- ключевая реакция механизма трансдукции и реализации внешнего сигнала с последующим развитием реакций респираторного взрыва, экзоцитоза и т.д. (Sha'afi R.J. et al., 1983; Volpi M. et al., 1983; Berridge M.J., 1984).

Таким образом, по современным представлениям зрелые нейтрофилы

- это высокодифференцированные клеточные элементы, содержащие богатейший набор биологически активных веществ (биооксиданты, простагландины, тромбоксаны, лейкотриены и др.), и при стимуляции быстро проявляющие свои потенциальные возможности.

1.1.3.2. Функциональная активность и цитохимический профиль нейтрофилов при патологии

Цитохимические и функциональные методы исследования нейтрофилов широко используются для определения защитно-адаптационных реакций организма (Шелыгина Н.М., Пилиева Е.В., 1986). В последние годы накоплен значительный материал, который позволяет рассматривать изменения функционально-метаболической активности

лейкоцитов крови в качестве чувствительного показателя нарушений | гомеостаза организма (Адо А.Д., Маянский А.Н., 1983).

Используя корреляционный анализ, Ч.Д. Асадов, Л.С. Нумерова и М.Э. Мирзоева (1990) в своей работе убедительно показали наличие связи между фагоцитарной функцией нейтрофила, отражаемой такими общепринятыми лабораторными показателями как фагоцитарный индекс, индекс завершенности фагоцитоза, и его цитохимическими параметрами. Авторами сделан вывод о том, что функциональная активность | нейтрофилов в процессах фагоцитоза, в частности во внутриклеточном переваривании, зависит от содержания в них энергетических источников (гликогена), активности ферментов азурофильных и специфических гранул ' (миелопероксидазы, щелочной фосфатазы) и функционирования оксидазных систем, генерирующих супероксидные радикалы, активность которых отражает НСТ-тест.

Рядом авторов изучалось функциональное и метаболическое состояние нейтрофилов при различных заболеваниях. Б.С.Нагоев и М.Г.Шубич (1979), изучая функциональную активность лейкоцитов у больных пневмонией, обнаружили, что в разгар заболевания параметры НСТ-теста достоверно повышаются в 3-4 раза относительно контроля.

У больных с гнойно-воспалительными процессами установлено снижение активности МП (Подильчак М.Д., Терлецкая Л.М., 1988). Отмечена обратная корреляция между активностью МП и щелочной фосфатазы. Автор дает рекомендации к использованию данных цитохимических параметров как показателя состояния неспецифической реактивности организма для широкого применения в практической медицине.

Б.С. Нагоев (1988) изучал функционально-метаболическую активность лейкоцитов у больных скарлатиной. В результате проведенных цитохимических исследований автором было выявлено, что у больных в разгар заболевания наблюдается достоверное максимальное повышение

содержания гликогена в лейкоцитах и активности щелочной и кислой фосфатазы, в то время как содержание лизосомальных катионных белков и активность миелопероксидазы максимально снижены. Параметры спонтанного НСТ-теста у больных достоверно повышаются и также достигают максимальных значений в период разгара заболевания. Автор делает вывод, что глубокие количественные и качественные сдвиги интралейкоцитарных компонентов указывают на возможный неблагоприятный прогноз течения заболевания.

И.С. Смиян и О.И. Луговая (1985) изучая активность МП, щелочной и кислой фосфатазы, содержание гликогена в нейтрофилах крови при хроническом гломерулонефрите у детей, показали, что характер и степень ферментных сдвигов в нейтрофилах периферической крови зависят от особенностей клинического течения заболевания. Авторы указывают на целесообразность изучения цитохимического профиля нейтрофилов для оценки активности процесса и тяжести течения гломерулонефрита у детей.

В.К. Казимирко, Е.В. Пилиева и В.П.Флегонтов (1981) проводили определение внутриклеточного гликогена, нейтральных жиров, фосфолипидов, щелочной фосфатазы, МП, цитохромоксидазы, общих дегидрогеназ в нейтрофилах крови при хронических воспалительных заболеваниях легких. Авторами показано, что эти методики не дублируют стандартные лабораторно-гематологические показатели (лейкоцитоз, увеличение количества нейтрофилов, ядерный сдвиг влево), имеют самостоятельное клинико-диагностическое значение и сделан вывод о необходимости широкого комплексного применения цитохимических показателей в пульмонологической практике в качестве критерия диагностики обострения воспалительного процесса в легких, а также с целью контроля за эффективностью лечения и процессом выздоровления.

Цитохимические исследования нейтрофилов периферической крови применяются для ранней диагностики профессиональных заболеваний, в частности, Л.Т. Базелюк (1992) использовал для этой цели определение в

нейтрофилах крови показателей лизоеомально-катионного теста, НСТ-теста и активности миелопероксидазы.

Таким образом, современные цитохимические методики исследования нейтрофилов периферической крови в настоящее время все шире используются в клинической практ ике для ранней и экспресс-диагностики различной патологии.

Как известно, стандартным ответом организма на любое достаточно сильное воздействие является стресс или общий адаптационный синдром, описанный Г. Селье. Известно, что стресс является неспецифическим элементом патогенеза различных заболеваний и патологических процессов. Поэтому неудивительно, что в последние годы повышен интерес исследователей к проблеме стресса.

Поддержание гомеостаза организма при воздействиях на него стрессорных факторов окружающей среды обеспечивается организованными определенным образом и соподчиненными между собой системами: во-первых, системой, специфически реагирующей на данный раздражитель, во-вторых, стрессреализующими адренергической и гипофизарно-адреналовой системами, неспецифически реагирующими на самые различные изменения в среде обитания (Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г., 1988).

Накопленные за последнее время данные позволяют представить нейтрофилы не только как основное звено в реакциях фагоцитоза, но считать их универсальными эффекторами гомеостаза. Установлено, что практически любое изменение внутренней среды фиксируется системой фагоцитоза, а состояние метаболических процессов нейтрофилов является индикатором этих изменений в организме. Выяснилось, что нейтрофилы обеспечивают не только первую линию защиты гомеостаза, но и участвуют в последующих процессах как иммунологического, так и неиммунологического характера.

Как указывает И.П.Терещенко и А.П.Кашулина (1993) среди

возможных путей влияния факторов внешней среды на нейтрофильные гранулоциты центральное место занимает нервная система, под непосредственным контролирующим влиянием которой находятся рассматриваемые клетки крови. Гиперкатехоламинемия, сопровождающая стресс, может быть одним из механизмов активации их функции, на что указывают данные собственных исследований авторов. Кроме того, авторы считают, что гиперкортицизм, гипертиреоз, гиперхолестеринемия либо как составные части хронического стресса, либо обусловленные другими причинами, могут играть такую же роль, активируя нейтрофилы.

Одним из проявлений неспецифического ответа организма на стрессорные воздействия является участие нейтрофилов в развитии адаптационных реакций и, как следствие, изменение их метаболизма и ферментативной активности. В качестве показателей неспецифической защиты организма используют цитохимические исследования лейкоцитов периферической крови, наиболее тонко отражающие состояние метаболических процессов на клеточном уровне (Мельниченко П.И. с соавт., 1992).

Рядом авторов были изучены метаболические параметры, активность ферментативных и микробицидных систем лейкоцитов в условиях стресса.

При изучении влияния хирургического стресса на бактериальную активность нейтрофилов было показано, что у больных, перенесших операционное вмешательство без осложнений, отмечается повышенная активность миелопероксидазы, в то время как в лейкоцитах больных с послеоперационной инфекцией активность миелопероксидазы, напротив, была снижена (8Ы§етИзи У. ек а1., 1992).

При изучении влияния холодового стресса на розеткообразование лимфоцитов и фагоцитарную активность нейтрофилов крови кроликов было выявлено снижение числа фагоцитов и фагоцитируемых бактерий (ОагЬиНшкл Т. <А а1,1991).

Изучая состояние субстратно-ферментных систем лейкоцитов в

первые минуты после нанесения шокогенной травмы, В.И. Шепотиновский и З.И.Микашинович (1980) обнаружили зависимость активности сукцинатдегидрогеназы от тяжести посттравматической реакции. Так, активность СДГ снижается у животных с легким течением шока - на 34%, у резистентных к шоку - на 59%, а с тяжелым течением - повышается на 236%. Этот факт, а также характер изменений таких показателей, как активность глюкозо- 6 - фосфатдегидрогеназы, гексокиназы, цитохром-оксидазы, содержание лактата и пирувата в различных группах животных j дало возможность авторам говорить о зависимости формирования резистентности от энергетического уровня клеточного метаболизма, степени мобилизации пластических и энергетических процессов.

О метаболических перестройках в нейтрофилах при стрессе говорит, например, факт подавления активности липооксигеназ и активирование ^ циклооксигеназного пути окисления арахидоновой кислоты в лейкоцитах, что было отмечено при 2,5-часовой иммобилизации крыс (Паносян А.Г., Дадаян М.А., Геворкян Г.А., 1989).

О.П. Ломов и Е.В. Татаринова (1981) выявили корреляционную взаимосвязь содержания гликогена и уровня функциональной активности лейкоцитов периферической крови людей. Воздействие шумом с прерывистым сигналом по 30 сек в течение 4 часов с акустической энергией 95 дБ вызывало резкое снижение показателей функционального состояния сегментоядерных нейтрофилов, в то время как столь же длительное воздействие шума 80 дБ приводило к незначительному снижению этих показателей с их повышением в дальнейшем.

После действия 12-часовой иммобилизации кроликов была выявлена активация лизосомального аппарата нейтрофилов (Вовк С.В., 1993), что ' проявлялось в усилении процессов дегрануляции клеток и увеличении абсолютного числа дегранулированных нейтрофилов, особенно в первые двое суток после стресса. Результаты, полученные автором подтверждают участие (3-адренорецепторов в реакции лизосомального аппарата ПЯЛ при

формировании стресс-синдрома.

При изучении влияния физических нагрузок на лизосомальный аппарат нейтрофилов периферической крови кроликов было показано (Шинкарев С.И., 1983), что после проведения эксперимента количество лизосом в клетках уменьшается, достигая максимального снижения на 3-й сутки, когда 54% клеток не содержат лизосом. На 7-е сутки эти показатели сопоставимы с контрольным уровнем. Та же тенденция отмечается в динамике декатионизации нейтрофилов.

Н.В. Лунина, H.A. Агафонова (1986) выявили уменьшение содержания лизосом и лизосомальных катионных белков нейтрофилов периферической крови кроликов после иммобилизации животных в течение 3 часов. Повторное стрессорное воздействие (иммобилизация в течение 5 дней по 3 часа) вызывало адаптацию лизоеомального аппарата клеток к воздействию стресс-фактора.

Н.В. Лунина и Л.В. Абакумова (1991) изучали возрастные особенности реакции лизоеомального аппарата нейтрофилов периферической крови кроликов при действии 12-часовой иммобилизации. Авторами установлено, что у животных в возрасте 1 месяца в ответ на стрессорное воздействие возникает стойкий и выраженный лейкоцитоз, а на 6-е сутки - и нейтрофилез, тогда как у животных 3-месячного возраста нейтрофильный лейкоцитоз в периферической крови не выявлялся, а лейкоцитоз отмечался лишь в первые сутки после иммобилизации. Дегрануляция нейтрофилов была более выраженной и заканчивалась раньше у животных старшей группы.

В работе Ю.А. Мазинга, O.E. Зубаревой и В.М. Клименко (1995) показано, что иммобилизация крыс в течение 1 часа приводит к повышению уровня ЛКБ, которое наблюдается сразу же после окончания стрессорного воздействия и приближается к норме только через 12 часов.

Таким образом, обобщая вышеизложенное, можно сделать вывод, что цитохимические исследования нейтрофилов периферической крови имеют

несомненное значение как в экспериментальной, так и в клинической медицине. Поскольку любая патология является для организма стрессом, то возникает необходимость более полного и комплексного изучения цитохимического профиля нейтрофилов при действии стрессорных факторов.

1.2. Некоторые аспекты воздействия низкоинтенсивного гелий-неонового лазерного облучения на систему крови

1.2.1. Современные представления о механизмах биологического действия низкоинтенсивного лазерного излучения

Излучение различных типов лазеров нашло широкое применение в клинической и экспериментальной медицине. Облучение светом ГНЛ 1 (длина волны - 632,8 нм) несомненно является успешным в лечении целого ряда заболеваний (Крюк A.C. с соавт., 1986; Бабиченко Е.И. с соавт., 1994; Кошелев В.Н. с соавт., 1980, 1981, 1994; Чернышова Л.А., Хан М.А., 1995; Ларюшин А.И., Илларионов В.Е., 1997).

Несмотря на полученные многочисленные данные об эффективности облучения светом ГНЛ, вопрос о механизмах действия низкоинтенсивного лазерного излучения до сих пор остается открытым.

В основе действия низкоэнергетического лазерного излучения на биологические структуры, по-видимому, лежат фотохимические и фотобиологические процессы. Особенности действия лазерного излучения в первую очередь определяются начальными стадиями взаимодействия кванта света с биологическим субстратом. Поэтому в настоящее время важнейшей задачей является решение двух основных вопросов: 1) поиск акцептора энергии излучения низкоинтенсивных лазеров; 2) изучение механизма генерализации местных эффектов НИЛ И, т.е. расшифровка

способа реализации общебиологического действия низкоэнергетического лазерного излучения.

С целью выяснения молекулярного механизма и закономерностей воздействия низкоинтенсивного видимого света были проведены систематические исследования с объектами различной степени сложности: бактериями (Тифлова O.A., Кару Т.Й., 1986, 1987а; Кару Т.Й., Тифлова O.A., 1987), дрожжами (Федосеева Г.Е. с соавт., 1986, 1987), млекопитающими (Кару Т.Й. с соавт., 1982, 1983). В результате проведенных экспериментов было выявлено влияние облучения светом видимой части спектра на скорость синтеза ДНК в клетках HeLa (Кару Т.Й. с соавт., 1983), на скорость синтеза белка в дрожжах (Федосеева Г.Е. с соавт., 1987), скорость роста культуры Escherichia coli (Кару Т.Й., Тифлова O.A., 1987) с максимумами вблизи 404, 620, 680, 760, 830 нм, а два последних исследуемых объекта - еще и при 570 нм. Во всех спектрах отмечен максимум около 620 нм. Авторы подчеркивают, что для каждой культуры существует свой, довольно узкий дозовый интервал, за пределами которого эффект НИ Л И отсутствует. При облучении светом ГНЛ отмечено усиление синтеза АТФ (Кару Т.Й. с соавт., 1993), изменение адгезивных свойств клеточной мембраны (Кару Т.Й., Пятибрат Л.В., Календо Г.С., 1993) в культивируемых in vitro клетках HeLa.

Универсальный характер фоточувствительности к

низкоинтенсивному монохроматическому свету различных клеток (прокариот, примитивных и сложных эукариот) предполагает существование одного и того же молекулярного механизма со сходными первичными фотоакцепторами. В качестве акцептора лазерного света разными авторами указываются различные субстанции. Обобщив имеющиеся сведения И.М. Корочкин и Е.В. Бабенко (1990), отметили три принципиальных позиции исследователей.

Согласно первой точке зрения имеется специфическое поглощение квантов красного света ферментами порфиринового ряда, например,

каталазой (Зубкова С.М., 1978; Зубкова С.М., Соколова З.А., 1978). Возможными специфическими акцепторами излучения могут быть медьсодержащие окислительно-восстановительные ферменты церулоплазмин, цитохромоксидаза. Эта гипотеза подтверждается исследованиями ряда авторов (Жуманкулов М.С., Плужников М.С., 1989).

Согласно второй точке зрения имеется неспецифическое полевое воздействие, акцептором которого являются важнейшие биополимеры (белки, липиды, ферменты, биологические мембраны), а также биологические жидкости (вода, плазма, лимфа, кровь). Так, были проведены эксперименты по изучению влияния НИЛИ на важнейшие ферментативные процессы, определяемые по активности глутаматдегидрогеназ митохондриальной фракции, изоферментов аспартатаминотрансферазы субклеточных фракций мозга и печени, дегидрогеназ цикла Кребса, в том числе сукцинатдегидрогеназы, в гомогенатах мозга и сердца. Полученные данные дают основание предполагать, что важную роль в реализации эффектов лазерного излучения играют, по-видимому, изменения структуры биополимеров (Крюк A.C. с соавт., 1986).

Приверженцы третьей точки зрения на природу акцептора излучения ГНЛ указывают на избирательное поглощение квантов света молекулой кислорода и образование синглетного кислорода, который и обеспечивает генерализацию и многоликость биологических реакций на лазерный свет (Иванов A.B. с соавт., 1989). Так, показано, что гелий-неоновое лазерное облучение стимулирует собственную хемилюминесценцию клеток селезенки мыши и усиливает интенсивность стимулированной С. albicans хемилюминесценции в интервале доз от 100 до 300 Дж/м2, что свидетельствует о влиянии лазерного облучения на процессы образования активных форм кислорода (Кару Т.Й. с соавт., 1989).

В качестве акцептора лазерного света может выступать не только одна биомолекула, а цепь взаимосвязанных между собой молекул,

отвечающих за какой-либо процесс. Высказано предположение, что первичными фотоакцепторами являются компоненты дыхательной цепи (Кару Т.Й., 1986, 1989). В пользу этого говорят данные о том, что с помощью добавления редокс-агентов можно модифицировать действие света определенных длин волн. Так, восстановительный агент Na2S2Ü4 нивелировал рост-стимулирующее действие красного и дальнего красного света в экспериментах с Е. coli (Тифлова O.A., Кару Т.Й., 1987а). Это подтверждает и тот факт, что добавление в культуру Е. coli до облучения ауксина, являющегося разобщителем дыхания и окислительного фосфорилирования, предотвращало эффекты красного света (Тифлова O.A., Кару Т.Й., 19876).

Одной из последних гипотез, выдвинутых на основе многолетних j

I

исследований, явилось предположение о том, что гуанилатциклаза и NO-синтетаза - клеточные регуляторные ферменты - могут выступать в качестве первичных акцепторов света гелий-неонового лазера (Брилль Г.Е., Брилль А.Г., 1997)

Ни одна из точек зрения не является самодостаточной, они связаны i между собой и дополняют друг друга (Конторщикова К.Н., Перетягин С.П., 1992), что убедительно показывает множественность точек приложения низкоинтенсивного излучения ГНЛ.

Не менее важным для понимания механизма действия ГНЛ является | вопрос о том, каким образом первичный местный эффект облучения ГНЛ вызывает формирование системного отклика организма. Считается доказанным, что на клеточном и тканевом уровнях биологическое j действие излучения ГНЛ объясняется структурно-функциональной перестройкой биомембран и повышением активности основных метаболических систем клетки. Первичная резонансная абсорбция энергии кванта света и распределение поглощенной энергии между колебательно возбужденными состояниями отдельных атомных группировок вызывают конформационные перестройки макромолекул (Девятков Н.Д. с соавт.,

1987). При этом нормализуется митотическая активность клеток и их поверхностно-адгезивные свойства. Этот механизм лежит в основе активации местных репаративных процессов, а также иммунной системы организма. Возможность влиять на биосинтетические реакции в клетках различного происхождения является существенным моментом терапевтической эффективности лазерного света (Крюк A.C. с соавт., 1986).

С.П. Гладких с соавт. (1995) рассматривают три типа триггерных молекулярных механизмов формирования биологических эффектов лазерной терапии при эпикутанном облучении светом низкоинтесивного лазера в диапазоне длин волн 350 - 1500 нм: 1) фотосенсибилизированные окислительно-восстановительные реакции с участием эндогенных порфиринов; 2) окислительно-восстановительные реакции с участием синглетного кислорода, генерация которого осуществляется

непосредственно лазерным излучением без участия фотосенсибилизаторов; 3) окислительно-восстановительные реакции комплексных соединений с участием гема. Автор указывает, что в зависимости от дозы облучения и нозологической формы патологического состояния ведущую роль в формировании интегральных эффектов терапии могут играть как отдельные механизмы, так и различные их комбинации, что и случается на практике чаще всего.

Обобщив многолетний опыт использования низкоэнергетических лазеров в условиях эксперимента и клиники, Г.Е. Брилль (1994) j сформулировал ряд принципиальных положений относительно природы

/

взаимодействия НИЛИ с биообъектами. Так, специфичность лазерного эффекта определяется прежде всего длиной волны излучения. Эффекты НИЛИ зависят от дозы, интенсивности, временного режима и способа облучения. Взаимодействие НИЛИ с живой системой вызывает запуск триггерных механизмов генерализации биоэффектов, т.е. носит сигнально-

информационный характер. Ответ организма всегда представляет собой целостную, интегральную и системную реакцию.

1.2.2. Влияние излучения гелий-неонового лазера на кровь

Современная медицина все шире применяет на практике низкоинтенсивное гелий-неоновое лазерное облучение. Независимо от j способа облучения, будь то внутрисосудистое облучение крови (Кипшидзе H.H. с соавт; Олесин А.И. с соавт., 1992; Кошелев В.Н., Чалык Ю.В., Штытов С.Н., 1994), транскутанное лазерное воздействие или облучение раневой поверхности (Астафьева О.Г., Пронченкова Г.Ф., Горбатенкова Е.А., 1980; Кошелев В.Н., 1980, 1981), эффекты лазерного воздействия не ограничиваются только местными проявлениями. Это убедительно доказано при использовании транскутанного облучения светом ГНЛ и ВЛОК в кардиологии для лечения сердечно-сосудистых заболеваний различного генеза (Михайлова С.Д. с соавт., 1996; Бабушкина Г.В. с соавт., 1997; Костин С.Г. с соавт., 1997), в экспериментах по модификации стрессорного ответа (Брилль Г.Е. с соавт., 1994а, 1995; Романова Т.П., Бриль Г.Е., 1994), амплитудных и временных характеристик деятельности сердца (Порозов Ю.Б., 1997; Porozov Yu.B., Brill G.E., Kiritchuk V.F., 1997), перекисного окисления липидов в различных тканях при транскутанном фотовоздействии (Брилль Т.Е. с соавт., 1994в; Brill G.E. et al., 1994), кислотно-щелочного баланса и газового состава крови (Брилль Г.Е., Купчиков В.В., Куликова Е.Г., 1994), гемокоагуляции (Брилль Г.Е. с соавт., 19946) и лимфоциркуляции (Захарова Е.И., Бриль Г.Е., 1994). Очевидно, что механизм такой генерализации кроется в сложных нейрогуморальных отношениях, связывающих в единое целое акцепторы лазерного света, возможные "усилители", "переносчики" фотосигнала и эффекторы разного уровня организации. А поскольку, по определению, нейро-гуморальная

регуляция подразумевает заинтересованность системы крови, то чрезвычайно важным представляется изучение прямого и опосредованного влияния света ГНЛ как на отдельные компоненты крови, так и на цельную кровь.

Так, Ю.И. Гринштейн (1995), изучая уровень продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в сыворотке и эритроцитах здоровых доноров и больных с нарушением функции почек при облучении светом гелий-неонового лазера (мощность - 1,5-3,0 мВт) цельной крови in vitro, обнаружил снижение уровня диеновых коньюгатов (ДК) в эритроцитах и малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови начиная с 1 -2 минуты облучения, которое достигало максимума к 40-60 минуте. Ингибирующий эффект на ПОЛ лазерного света был более выражен у больных. При увеличении экспозиции отмечалась тенденция к активации процессов ПОЛ, а при 120-минутном облучении крови уровень изучаемых параметров достигал исходного и даже превышал таковой. Описана динамика изменений уровня продуктов ПОЛ и активности катал азы и супероксиддисмутазы (СОД) в эритроцитах крови больных с хроническим гломерулонефритом. Автор делает вывод, что индуцируемая светом ГНЛ активность ферментов-антиоксидантов нейтрализует выраженную липопероксидацию как при облучении крови in vitro, так и при облучении низкоинтесивным лазерным светом крови больных.

Рядом авторов проводились эксперименты по изучению влияния гелий-неонового лазерного облучения на сыворотку крови. Так, Б.И. Элькина с соавт. (1990) обнаружила изменения оптической плотности, вязкости и электрофоретической подвижности сывороточного альбумина человека в полиакриламидном геле под действием света ГНЛ. Установлено, что облучение с плотностью мощности 3 мВт/см2 приводит к уменьшению оптической плотности раствора и уменьшению вязкости, тогда как при плотности мощности 0,1 мВт/см2 эффект зависит от времени облучения. Показано, что облучение в течение 15 минут вызывает увеличение

оптической плотности и вязкости, а 30-минутное облучение способствует их уменьшению. Авторами выдвинуто предположение о том, что терапевтическое действие красного света связано с процессом диссоциации белковых агрегатов. Л.В. Савина и Т.М. Зиньковская (1992) обнаружили положительное влияние красного света на показатели гуморального иммунитета, гликопротеидного обмена и метаболическое структурирование сыворотки крови при внутривенном облучении крови больных ишемической болезнью сердца светом ГНЛ (плотность мощности -15-20 мВт, экспозиция - 45 мин, курс 5-8 процедур).

При облучении светом ГНЛ (мощность светового потока - 0,2 мВт, время экспозиции - 30 сек) консервированной эритроцитарной массы Н.В. Морозовой, М.И. Баталовой и Г.Я. Левиным (1995) было выявлено снижение содержания в эритроцитах ДК и МДА на фоне усиления активности каталазы. Как известно, акцептором красного лазерного излучения является порфириновое кольцо активного центра каталазы, обладающее максимумом поглощения в области испускания ГНЛ. Авторы считают, что в основе полученных эффектов лежит процесс депротонирования гис-61, входящего в состав активного центра каталазы. Поскольку при хранении уже через 6-7 суток в консервированной эритроцитарной массе отмечено значительное (более чем в 1,5 раза) усиление процессов ПОЛ, то предложенное авторами облучение светом ГНЛ позволяет значительно улучшить функциональные свойства эритроцитов и предотвратить таким образом развитие пострансфузионных осложнений.

В.Н. Колмаков с соавт. (1985) проводили облучение взвеси эритроцитов человека светом ГНЛ (плотность мощности 25 мВт) в течение 2-30 мин. Изменения свойств мембраны эритроцитов определялись по интенсивности мочевинного гемолиза. Было показано, что 2-минутное облучение взвеси эритроцитов вызывает достоверное снижение проницаемости мембран, что говорит об их стабилизации и улучшении

показателей клеточного гомеостаза. При более длительном облучении в течение 4-6 мин показатель проницаемости возвращался к исходному уровню и только на 20-30 мин наблюдалось повторное снижение проницаемости мембран. Полученные авторами данные подтверждают клинические наблюдения о целесообразности применения кратковременных сеансов лазерной терапии.

В.М. Генкин с соавт. (1989) в своих экспериментах использовали цельную кровь, плазму и тромбоцитарную массу, а влияние облучения ГНЛ оценивали с помощью флюоресцентных зондов. Цельную кровь облучали светом ГНЛ при плотности мощности 0,9 мВт/см2, а тромбоцитарную массу и плазму - при плотности мощности 45 мВт/см2 в течение 5-60 минут. Был сделан вывод о том, что облучение ГНЛ запускает процессы, приводящие к изменению заряда белков крови, а выраженность эффектов зависит от дозы и времени инкубации после облучения.

В работе O.K. Скобелкина с соавт. (1995) показано влияние низкоинтенсивного гелий-неонового лазерного облучения с мощностью светового потока от 2 до 8 мВт на уровень биогенных аминов в структурах периферической крови больных бронхиальной астмой. Выявленная динамика уровня гистамина, серотонина, катехоламинов в плазме, эритроцитах, нейтрофилах, лимфоцитах, моноцитах, тромбоцитах, эозинофилах и базофилах свидетельствует о непосредственном воздействии лазерного излучения на патогенетические механизмы данного заболевания.

Было изучено влияние света ГНЛ на обмен липидных фракций между сывороткой крови и мембраной лимфоцитов (Гринштейн Ю.И., Осетрова И.В., 1995). Цельная кровь в течение 3 мин облучалась светом ГНЛ с мощностью на выходе световода 1,5 - 3,0 мВт. Обнаружено, что наряду с индуцированным фотовоздействием, переходом холестерина из сыворотки крови в мембрану лимфоцитов, наблюдается обратный процесс обмена эфиров холестерина. Авторы делают вывод, что именно с переходом холестерина в мембрану и восстановлением его уровня в

лимфоцитах связано понижение количества общих липидов в сыворотке крови, наблюдаемое после облучения крови больных с хроническим гломерулонефритом и хронической почечной недостаточностью.

При изучении влияния гелий-неонового лазерного излучения на структурные изменения хроматина лимфоцитов, которые оценивались по доступности ДНК к низкомолекулярному лиганду акридиновому оранжевому (АО), Кару Т.Й. с соавт. (1990) был отмечен наиболее выраженный эффект при использовании дозы лазерного облучения от 28 до 56 Дж/м2. При этом увеличение доступности ДНК в хроматине для АО в первые 6 часов после облучения светом ГНЛ сопровождалось увеличением его транскрипционной активности, выражающейся в ускорении синтеза РНК.

При изучении действия облучения светом ГНЛ (плотность мощности - 0,95 мВт/см2, экспозиция - 30 мин) цельной крови, взятой из вены доноров, и крови, взятой из полости сердца, после 2-минутного его облучения при кардиохирургической операции отмечалось снижение содержания Т-лимфоцитов и уровней IgA и IgG (Приходченко A.A. с соавт., 1981).

В результате проведенных исследований Г.И. Клебанов с соавт. (1997) при гелий-неоновом лазерном облучении с различными дозами (0,050,15 Дж/см2) суспензий лейкоцитов обнаружили увеличение функционального потенциала клеток. Обнаруженная в процессе лазерного облучения активация лейкоцитов проявлялась только в результате последующей стимуляции клеток зимозаном, что позволило авторам рассматривать эффект облучения светом ГНЛ в рамках явления, получившего название "прайминг". Содержащийся в лейкоцитах эндогенный или экзогенный фотосенсибилизатор при лазерном облучении вызывает перекисную модификацию липидной фазы клеточных мембран, что, в свою очередь, приводит к увеличению содержания Са2+ в цитозоле клеток и праймингу лейкоцитов. Таким образом, исследователи заключают, что лазерное облучение может выступать в зависимости от

содержания фотосенсибилизатора в виде триггера функционального потенциала фагоцитов.

Были исследованы особенности фагоцитоза облученными (плотность мощности - 0,5 Вт1м1, экспозиция -15 сек) лейкоцитами крови человека опсонизированных клеток кишечной палочки, выращенной на среде с 3Н-тимидином. Через 1 мин после облучения число поглощенных бактериальных клеток оказалось в 1,5-1,6 раза, а доля убитых клеток - в 1,62,4 раза выше, чем в контроле. Через 5 мин - в 1,2 и 1,2-1,4 раза соответственно, а через 30 мин показатели приблизились к контрольным значениям (Гамалея Н.Ф., Шишко Е.Д., Яниш Ю.В., 1983). В.В. Коржова с соавт. (1990) выявили суточные колебания фагоцитарной активности лейкоцитов и показали, что фагоцитарная активность перитонеальных лейкоцитов крыс активизируется при воздействии излучения ГНЛ. Авторами была обнаружена фаза "ареактивности", устойчивости организма к лазерному излучению, когда отсутствует статистически достоверный отклик системы и показано, что эта фаза приходится на 18 часов. Суточные колебания чувствительности к гелий-неоновому лазерному облучению фагоцитарной активности лейкоцитов и киллерной активности лимфоцитов исследовал Н.Ф. Гамалея с соавт. (1991).

Рядом авторов наряду с другими форменными элементами крови изучалось влияние излучения ГНЛ на нейтрофилы. При облучении цельной крови доноров в течение 5 и 10 минут в дозе 3 и 6 Дж/см2 соответственно В.Н. Шабалин с соавт. (1990) отметили значительное повышение параметров НСТ-теста нейтрофилов, что по мнению авторов связано со стимуляцией локализованных в гранулах цитоплазмы ферментов ГМФШ, в частности НАДФН-оксидазы, глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы и др.

В работе Г.В. Плаксиной с соавт. (1990) выявлено снижение активности щелочной фосфатазы нейтрофилов с исходно повышенным ее уровнем у больных с заболеваниями периферической нервной системы под действием проводимой лазеротерапии светом гелий-неонового лазера с

плотностью мощности от 0,1 до 2 мВт/см2 и экспозицией от 1 до 5 минут, (курс лечения -10 сеансов).

Рядом авторов получены данные о влиянии облучения ГНЛ на экспрессию на поверхности мембраны нейтрофилов различных рецепторных структур. Так, облучение светом гелий-неонового лазера (мощность светового потока - 1 мВт, экспозиция - 20 мин) венозной крови здоровых доноров вызывало снижение лектининдуцированной агрегации нейтрофилов (Хомерики С.Г., Кубатиев A.A., Шляпников В.Н., 1993). При этом эффект лазерного воздействия был специфичен для каждого типа примененных в эксперименте лектинов (WGA, PHA-L, Кон-А, SB А). P.M. Лаптева с соавт. (1989) описали обратный эффект лазерного излучения, что, по-видимому, связано с селективностью лазерного воздействия. С.Г. Хомерики с соавт. (1994) установили, что облучение светом ГНЛ (мощность светового потока - 1 мВт, экспозиция - 20 мин) крови больных ишемической болезнью сердца приводит к изменению соотношения открытых гликопротеидных детерминант на поверхности нейтрофилов: становится больше маннозосодержащих гликоконьюгатов, N-ацетил-D-галактозаминсодержащих - меньше. Эти данные представляют особый интерес, поскольку, как известно, активация нейтрофилов непосредственно связана с рецепторным аппаратом цитоплазматической мембраны, а интернализация, экспрессия или маскировка тех или иных рецепторов существенно влияют на реакцию клеток (Маянский А.Н., Чеботарь И.В., Конышкина Т.М., 1989).

В экспериментах по облучению in vitro цельной крови доноров и больных болезнью Гиршпрунга, с перитонитом, с септикопиемичеекой формой сепсиса светом ГНЛ (плотность мощности 5 мВт/см2, экспозиция -2-5 мин) определялись состояние рецепторной функции нейтрофилов с помощью моноклональных антител ИКО-ГМ1 и ИКО-Г2, показатели НСТ-теста и фагоцитарной активности, а также активность миелопероксидазы и хлорацетат-А80-эстеразы (Нестерова И.В. с соавт.,

1994). Отмечено, что при 2-мин облучении цельной интактной крови в большей степени активизируются рецепция поверхностной мембраны и процессы поглощения микроорганизмов, а при увеличении экспозиции до 5 мин происходит выраженная стимуляция переваривающей активности нейтрофилов и активности микробицидных систем и ферментного аппарата. Полученные результаты позволяют авторам сделать вывод о том, что при облучении ГНЛ крови больных сепсисом оптимальной для коррекции является экспозиция 2 минуты. При болезни Гиршпрунга иммунорегуляторная роль ГНЛ в отношении процессов поглощения и переваривания микроорганизмов отмечена при этой же экспозиции, в то время как увеличение длительности облучения светом лазера до 5 мин вызывало резкое снижение интенсивности указанных процессов. Таким образом, авторы убедительно показали возможность применения излучения ГНЛ как средства, корригирующего дефекты в системе нейтрофилов при патологии.

При внутривенном облучении ГНЛ (выходная мощность - 1 мВт, время - 30 мин, 10 сеансов) крови больных стенокардией отмечена стабилизация параметров НСТ-теста, кроме того выявлена индивидуальная динамика показателей кислородного метаболизма нейтрофилов, благодаря чему авторы делают вывод о необходимости учета индивидуальной реакции при определении длительности проводимых сеансов лазеротерапии (Сюч Н.И. с соавт., 1995).

Облучение ГНЛ (мощность на выходе - 12 мВт, экспозиция 10 мин, 3 сеанса) внутривенно крови кроликов вызывает незначительное повышение активности кислой фосфатазы, миелопероксидазы и СДГ при одновременном снижении уровня ЛКБ в лейкоцитах периферической крови (Григорьев С.Н., 1991).

Таким образом, данные, имеющиеся в отечественной и зарубежной литературе, свидетельствуют о большом интересе как клиницистов, так и ученых, занимающихся фундаментальными исследованиями, к проблемам

патофизиологии стресса и системы нейтрофильных гранулоцитов. Разработаны новые методы мониторинга различных патологических состояний с использованием цитохимических тестов нейтрофилов крови. В настоящее время исследователи располагают большим набором методик, применение которых обеспечивает достаточно полное представление о метаболизме полиморфноядерного нейтрофила и его изменении в условиях патологии.

Одновременно с этим практическая медицина расширяет применение физических методов лечения при многих заболеваниях, в том числе -вызванных, спровоцированных стрессорным воздействием на организм, заболеваний, протекающих с активацией стресс-реализующих нейро-гормональных систем. Теоретических обоснований к такому применению физической и, в частности, лазерной терапии зачастую нет. Так, довольно ограниченное количество работ, в основном в отечественной литературе, касается изучения влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на цитохимические показатели нейтрофилов периферической крови. Отсутствие в литературе работ по исследованию комплекса ферментов полиморфноядерных лейкоцитов крови в динамике стресса и при сочетанном действии стресс-фактора и лазерного излучения малой интенсивности является определенным "белым пятном". В то же время, широкое применение в терапевтической практике различных лазерных приборов вкупе с традиционными методами показало их эффективность при "синдроме хронической усталости", неврозах, различных дистониях и т.д.

На основании вышеизложенного можно сделать вывод о том, что изучение влияния излучения гелий-неонового лазера на метаболические реакции, состояние ферментных и микробицидных систем полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови in vitro и in vivo в условиях стресса с использованием комплекса современных цитохимических методик может вскрыть некоторые патофизиологические

механизмы, реализующие реакцию выбранной экспериментальной системы на воздействие стрессорных факторов. Вскрытие закономерностей изменения цитохимического статуса нейтрофила при воздействии света ГНЛ представляется важным и для понимания феномена "генерализации" ответа биосистемы на лазерный свет.

Заключение диссертации по теме «Патология, онкология и морфология животных», Порозова, Светлана Геннадьевна

ВЫВОДЫ

1. Нейтрофилы периферической крови являются высокореактивными клетками, быстро откликающимися на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения. Облучение крови животных светом гелий-неонового лазера в условиях in vitro вызывает изменение содержания энергетических субстратов, энзиматической активности и состояния кислородзависимых и кислороднезависимых бактерицидных систем в полиморфноядерных лейкоцитах.

2. Влияние гелий-неонового лазерного излучения на нейтрофилы носит дозозависимый характер: 15-минутное облучение крови in vitro вызывает стимуляцию метаболизма гликогена и липидов, повышение активности СДГ, увеличение содержания ЛКБ и активацию кислородзависимых процессов в мембранах нейтрофилов; 30-минутное облучение сопровождается увеличением уровня энергетических субстратов и ЛКБ, повышением активности СДГ и миелопероксидазы в нейтрофилах на фоне уменьшения числа НСТ-позитивных клеток.

3. Транскутанное гелий-неоновое лазерное облучение животных на этапе запуска стрессорного ответа (2-минутный стресс) вызывает активацию метаболизма гликогена и липидов в лейкоцитах, препятствует стрессорному изменению активности АТФ-аз, СДГ и МП, способствует мобилизации стресс-реализующих систем за счет стимуляции образования активных форм кислорода в мембранах нейтрофилов.

4. Транскутанное гелий-неоновое лазерное облучение животных на фоне 15-минутного иммобилизационного стресса оказывает модифицирующее влияние на развитие стрессорных изменений цитохимического профиля нейтрофилов, способствуя перераспределению энергетических субстратов, препятствуя типичному для стресса снижению активности СДГ и уменьшая степень индуцированного стрессом угнетения мембранных кислородзависимых процессов и антимикробного потенциала полиморфноядерных лейкоцитов.

5. Транскутанное гелий-неоновое лазерное облучение животных на фоне 30-минутного иммобилизационного стресса уменьшает степень вызываемых стрессом изменений содержания энергетических субстратов в клетке, однако, вызывает снижение активности МП и уровня ЛКБ в нейтрофилах.

6. Стимуляция кислородзависимых процессов в мембранах нейтрофилов, закономерно выявляемая при кратковременном облучении светом гелий-неонового лазера, является аргументом в пользу гипотезы о фотоакцепторной роли НАДФН-оксидазы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Порозова, Светлана Геннадьевна, 1998 год

ЛИТЕРАТУРА

1.Адо А.Д., Маянский А.Н. Современное состояние учения о фагоцитозе//Иммунология. - 1983. - № 1. - С. 10-25.

2. Алмазов В.А. и др. Физиология лейкоцитов человека /Алмазов В.А., Афанасьев Б.В., Зарицкий А.Ю. и др. - Л.: Наука, 1979. - 232 с.

3. Алмазов В.А., Павлов Б. А. К изучению двигательной активности лейкоцитов. // Лаб. дело. -1961. - №7. - С. 23-27.

4. Алмазов В.А., Рябов С.И. Методы функционального исследования системы крови. - Л., Медицина, 1963. - 132 с.

5. Анохин П.К. Очерки по физиологии функциональных систем. - М., Медицина. - 1975.

6. Асадов Ч.Д., Нумерова Л.С., Мирзоева М.Э. Связь между фагоцитарной функцией и цитохимическими показателями нейтрофилов крови // Лаб. дело. - 1990. - № 11. - С. 19-21.

7. Астафьева О.Г., Пронченкова Г.Ф., Горбатенкова Е.А. Общее взаимодействие лазерного излучения с органами и тканями //Лазер в лечении ран /Под ред. В.Н. Кошелева - Саратов: Изд-во С ГУ, 1980. - С. 3851.

8. Ашмарин И.П. и др. Антибактериальные и антивирусные функции основных белков клетки и перспективы практического их использования / Ашмарин И.П., Ждан-Пушкина С.М., Кокряков В.Н. и др. // Изв. АН СССР. Серия биол. - 1972. - № 4. - С. 502-508.

9. Ашмарин И.П., Кокряков В.Н., Пигаревский В.Е. Катионные белки лизосом лейкоцитов, деградация и возможности загрязнения гистонами при выделении //Вопр. мед.химии. - 1973. - Т. XIX, вып. 4.-С. 381-386.

10. Бабиченко Е.И. и др. Применение гелий-неонового лазера в лечении больных посттравматическим церебральным арахноидитом /Е.И.

Бабиченко, В.Н. Колесов, Ю.Б. Гвоздев и др. // Применение низкоинтенсивных лазеров и излучения миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике / Под ред. проф. Г.Е. Брилля - Саратов: Изд-во СГМУ, 1994. -С.103-107.

И. Бабушкина Г.В., Корочкин И.М., Картелишев A.B. Вторичная профилактика ишемической болезни сердца методом этапной низкоинтенсивной лазерной терапии //Проблемы лазерной медицины. -Видное, 1997. - С. 158.

12. Базелюк JI.T. Цитохимические исследования эритроцитов и нейтрофилов периферической крови у шахтеров-угольщиков //Гигиена труда и проф. заболевания. - 1992. - № 5. - С. 31-33.

13. Бахов Н.И. и др. Нейтрофилы, их роль в регуляции метаболизма тканей /Бахов Н.И., Александрова Л.З., Титов В.Н. и др.// Усп. совр. биол.-1987.- Т. 104, вып. 2 (5). - С. 281-296.

14. Бахов H.H., Александрова Л.З., Титов В.Н. Роль нейтрофилов в регуляции метаболизма тканей (обзор литературы) // Лаб. дело. -1988. - № 6. - С. 3-12.

15. Беклемишев Н.Д. Роль лейкотриенов в иммунитете и иммунорегуляции //Иммунология. - 1989. - № 4. - С. 14-18.

16. Белоцкий С.М., Снастина Т.И., Диковская Е.С. Fc-рецепторы в нейтрофилах // Бюл. экспер. биол. - 1985. - № 2. - С, 89-92.

17. Бережная Н.М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз. -Киев: Наукова Думка. - 1988. - 190 с.

18. Брилль Г.Е. Некоторые методологические вопросы изучения биологического действия низкоинтенсивного лазерного излучения //Применение низкоинтенсивных лазеров и излучения миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике / Под ред. проф. Г.Е Брилля - Саратов: Изд-во СГМУ, 1994. - С. 4-14.

19. Брилль Г.Е. и др. Влияние предварительного транскутанного

лазерного облучения на изменение цитохимических показателей нейтрофилов при стрессе /Брилль Г.Е., Григорьев С.Н., Романова Т.П., Петрышева С.Г. // Применение низкоинтенсивных лазеров и излучения миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике / Под ред. Г.Е. Брилля - Саратов: Изд-во СГМУ, 1994. - С. 33-37.

20. Брилль Г.Е. и др. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на изменения гемокоагуляции при комбинированном остром стрессе / Брилль Г.Е., Киричук В.Ф., Беспалова Т.А. и др.// Применение низкоинтенсивных лазеров и излучения миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике / Под ред. Г.Е. Брилля - Саратов: Изд-во СГМУ, 1994. - С. 37-43.

21. Брилль Г.Е. и др. Влияние предварительного лазерного облучения на процессы перекисного окисления липидов в крови и тканях при стрессе / Брилль Г.Е., Прошина О.В., Жигалина В.Н., Филимоновская J1.C.// Применение низкоинтенсивных лазеров и излучения миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике / Под ред. Г.Е. Брилля - Саратов: Изд-во СГМУ, 1994.-С. 46-51.

22. Брилль Г.Е. и др. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на метаболизм нейтрофилов при стрессе /Брилль Г.Е., Григорьев С.Н., Романова Т.П., Петрышева С.Г. // Изв. АН СССР. Сер. физич. - 1995. -Т. 59,№6.-С. 175-178.

23. Брилль Г.Е., Купчиков В.В., Куликова Е.Г. Влияние транскутанного лазерного облучения на показатели кислотно-щелочного баланса и газовый состав крови // Применение низкоинтенсивных лазеров и излучения миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике / Под ред. Г.Е. Брилля - Саратов: Изд-во СГМУ, 1994. - С. 43-46.

24. Бышевский А.Ш., Терсенов О.А. Биохимия для врача. -Екатеринбург: Изд.-полигр. предпр. "Уральский рабочий", 1994. - С. 85-86.

25. Венчиков А.И., Венчиков В.А. Основные приемы статистической

обработки результатов наблюдений в области физиологии. - М.: Медицина, 1974. -152 с.

26. Витковский Ю.А. Роль цитокинов в регуляции системы гемостаза.: Автореф. дис. ... док. мед. наук. - Чита, Читинская гос. мед. академия, 1997. - 39 с.

27. Вишневецкий Ф.Е. и др. Клиническое значение цитохимического исследования неферментных катионных белков лейкоцитов периферической крови /Вишневецкий Ф.Е., Вишневецкая И.Ф., Назарова Е.К. и др. // Клин. мед. -1981. - Т. ЫХ, № 11. - С. 88- 92.

28. Владимиров Ю.А. и др. Влияние окисленных фосфолипидов липосомальных мембран на активность полиморфно-ядерных лейкоцитов крови /Владимиров Ю.А., Крейнина М.В., Клебанов Г.И. и др. //Биол. мембр. - 1988. - Т. 5,№ 11. - С. 1192-1198.

29. Вовк С.В. Влияние иммобилизации на морфофункциональные свойства лизосомального аппарата нейтрофильных лейкоцитов в условиях блокады р-адренорецепторов // Физиол. журн. СССР. - 1993. - Т.79, № 9. -С. 42-47.

30. Втюрин Б.В., Каем Р.И., Червонская Н.В. Ультраструктурный анализ взаимодействия нейтрофильных лейкоцитов и макрофагов в очаге воспаления // Бюл. экспер. биол. - 1989. - № 1. - С. 68-71.

31. Гамалея Н.Ф. Лазеры в эксперименте и клинике. - М., Медицина, 1972. - 232 с.

32. Гамалея Н.Ф. и др. Суточные колебания чувствительности натуральных киллеров и фагоцитирующих лейкоцитов к излучению гелий-неонового лазера /Гамалея Н.Ф., Скивка Л.М., Федорчук А.Г., Кращенко В.Н. // Тезисы докл. Международ, конф. "Новое в лазерной медицине". -Москва. - 1991. - С. 89.

33. Гамалея Н.Ф., Шишко Е.Д., Яниш Ю.В. Новые данные по фоточувствительности животной клетки и механизму лазерной биостимуляции // Докл. АН СССР. - 1983. - Т. 273, № 1. - С. 224-227.

34. Генкин В.М. и др. Влияние низкоинтенсивного лазерного облучения на состояние белков крови / Генкин В.М., Новиков В.Ф., Парамонов JI.B., Элькина Б.И. // Бюл. экспер. биол. - 1989. - № 8. - С.188-189.

35. Гладких С.П. и др. Триггерные молекулярные механизмы формирования биологических эффектов при низкоэнергетической лазерной терапии различных патологических состояний / Гладких С.П., Алексеев Ю.В., Эпштейн H.A., Картусова JI.H. //Клиническое и экспериментальное применение новых лазерных технологий: Тез. докл. конф. - Казань, 1995. -С. 288-289.

36. Говорова Н.Ю., Шаронов Б.П., Лызлова С.Н. Окислительное повреждение эритроцитов миелопероксидазой. Защитное действие сывороточных белков //Бюл. экспер. биол. - 1989. - № 4. - С. 428-430.

37. Горбатенкова Е.А. и др. Красный свет гелий-неонового лазера реактивирует супероксиддисмутазу /Горбатенкова Е.А., Владимиров Ю.А., Парамонов И.В., Азизова O.A. // Бюл. экспер. биол. - 1989. - Т. 107, № 3. -С. 302-315.

38. Гордиенко В. И., Залесский В. Н. Об использовании лазеров в медицине (обзор) //Врач. дело. - 1989. - № 10. - С. 4-8.

39. Григорьев С.Н. Энзиматический статус лейкоцитов периферической крови кролика при внутрисосудистом лазерном облучении //Новое в лазерной медицине. - М., 1991. - С. 90.

40. Гринштейн Ю.И. Антиоксидантное действие света гелий-неонового лазера при облучении крови //Клиническое и экспериментальное применение новых лазерных технологий: Тез. докл. конф. - Казань, 1995. -С. 295-296.

41. Гринштейн Ю.И., Осетров И.В. Восстановление обмена липидов между сывороткой и мембраной лимфоцитов при облучении цельной крови светом гелий-неонового лазера //Клиническое и экспериментальное применение новых лазерных технологий: Тез. докл. конф. - Казань, 1995. -С. 297-298.

42. Девятков Н.Д. и др. Физико-химические механизмы биологического действия лазерного излучения /Девятков Н.Д., Зубкова С.М., Лапрун И.Б., Макеева Н.С. // Усп. совр. биол. - 1987. - Т. 103, вып. 1. -С. 31-43.

43. Демин A.A., Дробышева В.П. НБТ-тест (Обзор литературы и собственные наблюдения) // Терап. арх. - 1984. -Т. 56, № 6. - С. 144-147.

44. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. - М., Мир. -1991. - С. 300.

45. Друх В.М., Земсков В.М., Воробьев A.A. Фагоцитарные клетки и инфекция, вызванная вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) //Усп. совр. биол. - 1992. - Т. 112, Вып. 3. - С. 383-397.

46. Ждан-Пушкина С.М. О действии протаминов, гистонов и полипептидов основного характера на микроорганизмы // Науч. докл. высш. школы. Биол. науки. - 1973. - № 8 - С. 82-98.

47. Жекова М.М., Анатолий С. А., Ашмарин И.П. Выброс миелопероксидазы из нейтрофилов при сорбции бактерий. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1976. - № 3.- С. 70 -73.

48. Жуманкулов М.С., Плужников М.С. //Влияние лазерного излучения на кровь. - Киев. - 1989. - С. 15-16.

49. Земсков В.М. Fcy-рецепторы макрофагов // Усп. совр. биол. - 1983. -Т. 95.-Вып. 1.-С. 100-117.

50. Земсков В.М. Фагоцитоз: физиологические и молекулярные аспекты // Усп. совр. биол. - 1984. - Т. 98. - Вып. 2 (5). - С. 219-234.

51. Золотницкая Р. П. Методы гематологических исследований //Лабораторные методы исследования в клинике. /Под ред. проф. В.В.Меньшикова. - М., Медицина, 1987. - С. 127.

52. Захарова Е.И., Брилль Г.Е. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на лимфатические микрососуды// Применение низкоинтенсивных лазеров и излучения миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике / Под ред. Г.Е. Брилля - Саратов: Изд-во СГМУ, 1994. - С. 55-59.

53. Зубкова С.М. О механизме биологического действия излучения гелий-неонового лазера // Биол. науки. - 1978. - № 7. - С. 30-37.

54. Зубкова С.М., Соколова З.А. Состояние митохондрий и хроматина ядер нервных клеток коры головного мозга при лазерном облучении //Вопр. мед. химии. - 1978. - № 3. - С. 326-330.

55. Зубкова С. М., Лапрун И. Б. Влияние лазерного излучения на мембранные системы клеток //Применение лазеров в медицине: Тез. Всесоюзн. конф. (Красноярск, 1983). - Москва, 1984. - С.91.

56. Иванов A.B., Купин В.И., Еремеев Б.В. и др. // Влияние лазерного излучения на кровь. - Киев. - 1989. - С. 186-188.

57. Иванова Л.А. и др. Функциональная и метаболическая активность гранулоцитов крови у больных профессиональными аллергическими дерматозами /Иванова Л.А., Горизонтова М.Н., Соколов В.В. и др. // Профессиональные аллергозы: Сб. науч. тр. - М., 1987. - Вып. 31. - С. 18-25.

58. Илларионов В. Е. Основы лазерной терапии. - М,, 1992. - 124 с.

59. Илюхин A.B., Зубенкова Э.С., Кахетелидзе М.Г. Лейкопоэз / Нормальное кроветворение и его регуляция /Под ред. Н.А.Федорова. - М.: Медицина, 1976. - Гл. 11. - С. 458-488.

60. Казимирко В.К., Пилиева Е.В., Флегонтов В.П. Цитохимическая характеристика нейтрофилов крови при хронических воспалительных заболеваниях легких // Врач. дело. -1981. - № 12. - С. 69-71.

61. Казначеев В.П., Маянский Д.Н. Соединительная ткань и стромально-паренхиматозные взаимоотношения при патологии // Пат. физиол. - 1988. - № 4. - С.79-83.

62. Кару Т.Й. О молекулярном механизме терапевтического действия излучения низкоинтенсивного лазерного света //Докл. АН СССР. - 1986. -Т. 291,№5.-С. 1245-1249.

63. Кару Т.Й. Регуляция клеточного метаболизма низкоинтенсивным лазерным светом // Методы лазерной биофизики и их применение в медицине: Мат. I респ. школы-семинара. -Тарту, 1989. - С. 15-22.

64. Кару Т.Й. и др. /Кару Т.Й., Календо Г.С., Летохов B.C., Лобко В.В. // Квантовая электроника. - 1982. - Т. 9. - С. 1761-1767.

65. Кару Т.Й. и др. /Кару Т.Й., Календо Г.С., Летохов B.C., Лобко

B.В. // Квантовая электроника. - 1983. - Т. 10. - С. 1771-1776.

66. Кару Т.Й. и др. Влияние излучения He-Ne лазера на хемилюминенсценцшо клеток селезенки мыши /Т.Й.Кару, Т. П.Рябых, Федосеева Т.Е., Пучкова Н.И. // Радиобиология. - 1989. - Т. XXIX, вып.2. -

C. 230-234.

67. Кару Т.Й. и др. Действие излучения He-Ne лазера на структурные и функциональные изменения клеток крови и лимфоидных органов /Кару Т.Й., Смольянинова Н.К., Андрейчук Т.Н. и др. //Лазерная биофизика и новые применения лазеров в медицине: Матер, докл. II Всесоюз. сем. -Тарту, 1990. - С. 68-83.

68. Кару Т.Й. и др. Изменение количества АТФ в клетках HeLa под воздействием излучения He-Ne лазера /Т.Й.Кару, Л.В.Пятибрат, Г.С.Календо, Н.Г.Серебряков. // Бюл. экспер. биол. - 1993. - № 6. - С. 617618.

69. Кару Т.Й., Пятибрат Л.В., Календо Г.С. Влияние излучения He-Ne лазера на адгезивные свойства клеточной мембраны //Бюл. экспер. биол. - 1993. -№ 6. - С. 622-623.

70. Кару Т.Й., Тифлова О. А. Влияние низкоинтенсивного монохроматического видимого света на рост культуры Escherichia coli //Микробиология. - 1987. - Т. 56, вып. 4. - С. 626-630.

71. Кипшидзе Н.Н. и др. Профилактика нарушений ритма сердца в острый период инфаркта миокарда внутрисердечным использованием гелий-неонового лазерного излучения / Кипшидзе Н.Н., Чапидзе Г.Э., Бохуа М.Р. и др. //Кровообращение. - 1986. - № 5. - С. 32-36.

72. Клебанов Г.И. и др. Гетерогенность рецепторного аппарата полиморфно-ядерных лейкоцитов крови / Клебанов Г.И., Туркменова Э.М., Крейнина М.В. и др. // Биол. мембраны. - 1987. - Т. 4, № 10. - С. 1084-1092.

73. Клебанов Г.И. и др. Инициирование перекисного окисления липидов мембран липосом активированными полиморфноядерными лейкоцитами крови. /Клебанов Г.И., Владимиров Ю.А., Бенов Л.Ц., Рибаров С.Р. //Бюл. экспер. биол. - 1988. - № 6. - С. 674-677.

74. Клебанов Г.И. и др. Изменение физического состояния мембран в процессе стимуляции полиморфно-ядерных лейкоцитов крови / Клебанов Г.И., Максина А.Г., Крейнина М.В. // Биол. мембраны. - 1990. - Т. 7, № 3. -С. 281-288.

75. Клебанов Г.И. и др. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на функциональный потенциал лейкоцитов / Клебанов Г.И., Теселкин Ю.И., Бабенкова И.В. и др. // Бюл. экспер. биол. - 1997. - Т. 123, №4.-С. 395-398.

76. Кокряков В.11. Катионные белки ядра и лизосом нейтрофилов кролика.: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Л., Ленингр. гос. ун-т им. А.А. Жданова, 1973. - 22 с.

77. Колмаков В.Н. и др. Изменения некоторых свойств мембраны эритроцитов в динамике лазерного облучения /Колмаков В.Н., Хоанг Т. Льен, Белозерова Л.Н. //Влияние лазерного излучения на здоровье человека. - Л., 1985. - С. 10-12.

78. Конторщикова К.Н., Перетягин С.П. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на некоторые метаболические показатели крови постреанимационного периода // Бюл. экспер. биол. - 1992. - № 10. - С. 357359.

79. Козинец Г.И. и др. Морфологическая и функциональная характеристика клеток костного мозга и крови / Козинец Г.И., Терентьева Э.И., Файнштейн Ф.И. и др. / В кн.: Нормальное кроветворение и его регуляция / Под. ред. H.A. Федорова. - М.: Медицина, 1976.-С. 98-158.

80. Козинец Г.И. и др. О стабильности кроветворения и его лабораторных показателях / Г.И. Козинец, В.М. Погорелов, Котельников

B.М. и др. // Лаб. дело. - 1988. - № 7. - С. 3.

81. Кокряков В.Н., Ашмарин И.П., Пигаревский В.Е. О природе некоторых фракций лизосомальных катионных белков лейкоцитов // Биохимия. - 1973. - Т. 38, № 6. - С. 1276-1280.

82. Коржова В.В., Сальникова З.В., Васильченко Н.П. Суточные колебания фагоцитарной активности лейкоцитов белых крыс под действием излучения гелий-неонового лазера низкой интенсивности //Актуальные проблемы лазерной медицины: Республ. сб. науч. тр. - М., 1990. - С. 16-19.

83. Корочкин И.М., Бабенко Е.В. Механизмы терапевтической эффективности излучения гелий-неонового лазера //Сов. мед. - 1990. - № 3 -

C. 3-8.

84. Костин С.Г., Панов A.A., Демидов A.A. Сравнительная оценка различных видов лазерного воздействия в комплексном лечении стенокардии //Проблемы лазерной медицины. - Видное, - 1997. - С. 190-191.

85. Кошелев В.Н. Лазеры в лечении трофических язв и длительно не заживающих ран //Лазеры в клинической медицине /Под ред. С.Д. Плетнева -М.: Медицина, 1981.-С. 313-330.

86. Кошелев В.Н. и др. Лазеры в терапии замедленной консолидации переломов костей /В.Н. Кошелев, Ю.М. Славутский, Т.И. Глущенко и др. //Лазер в лечении ран /Под ред. В.Н. Кошелева - Саратов: Изд-во СГУ, 1980. - С. 84-95.

87. Кошелев В.Н., Чалык Ю.В., Штытов С.Н. Механизмы стимулирующего эффекта ВЛОК у больных с тяжелыми сочетанными травмами живота // Применение низкоинтенсивных лазеров и излучения миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике / Под ред. Г.Е. Брилля - Саратов: Изд-во СГМУ, 1994. - С. 129-132.

88. Крейнина М.В. и др. Функциональная гетерогенность циркулирующих полиморфноядерных лейкоцитов при остром инфаркте миокарда / Крейнина М.В., Клебанов Г.И., Кузнецов C.B. и др. // Бюл. экспер. биол. - 1989. - № 12. - С. 673-676.

89. Крюк A.C. и др. Терапевтическая эффективность низкоинтенсивного лазерного излучения /Крюк A.C., Мостовников В.А., Хохлов И.В., Сердюченко Н.С. - Минск: Наука и техника. - 1986. - 231 с.

90. Кузник Б.И., Васильев Н.В., Цыбиков H.H. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма. - М.: Медицина, 1989. - 220 с.

91. Ларюшин А.И., Илларионов В.Е. Низкоинтенсивные лазеры в медико-биологической практике. - Казань: Изд-во "АБАК", 1997. - 276 с.

92. Лапотников И.А. и др. Показатели функционального состояния лейкоцитов периферической крови здоровых людей /Лапотников И.А., Альперович В.В., Горошникова Э.Н., Козинец Г.И. // Лаб. дело. - 1973. -№ 12. - С. 720-722.

93. Лаптева P.M., Балмуханов Б.С., Бакшева С.А. Влияние излучения гелий-неонового лазера и ионной силы Среды на процесс розеткообразования лимфоцитов // Иммунология. -1989. - № 1. - С. 34-36.

94. Ленинджер А.Л. Основы биохимии. В 3-х т. - М., "Мир", 1985.

95. Лецкий В. Б. Цитохимическое исследование лейкоцитов (методические рекомендации). - Л., НИИ гематол. и перелив, крови. - 1973. -34 с.

96. Локшина Л.А., Соловьева Н.И., Орехович В.Н. Роль лизосомных протеиназ в деструкции ткани //Вопр. мед. химии. - 1987. - Т. 33, № 5. - С. 38-43.

97. Ломов О.П., Татаринова Е.В. Влияние шума на функциональное состояние лейкоцитов крови //Гигиена и санитария. - 1981. - № 12. - С. 2224.

98. Лунина Н.В., Абакумова Л.В. Возрастные особенности реакции лизосомального аппарата нейтрофильных лейкоцитов периферической крови кроликов на действие иммобилизации // Физиол. журн. АН Укр.ССР. -1991. -Т.37, №2. - С. 60-65.

99. Лунина Н.В., Агафонова H.A. Влияние многократного стрессорного воздействия на лизосомальный аппарат нейтрофильных лейкоцитов //Физиол.журн. СССР. - 1986. - Т. LXXXI, № 7. - С. 952-958.

100. Люсов В.А., Утешев Д.Б., Дюков И.В. Лейкоцитарная регуляция системы гемостаза в норме и при патологии // Кардиология. - 1993.- № 12. -С. 75-78.

101. Мазинг Ю.А., Зубарева O.E., Клименко В.М. Действие стрессов различной модальности на защитные свойства нейтрофильных гранулоцитов //Физиологические механизмы развития экстремальных состояний: Сб. науч. тр. РАН, отд. физиологии. - С.-Петербург, Наука. -1995. - С. 54.

102. Маянский А.Н. Нейтрофил как эффектор в реакциях антителозависимой клеточной цитотоксичности // Иммунология. - 1983. -№2.- С. 21-26.

103. Маянский А.Н. Патогенетические аспекты нейтрофилзависимых реакций // Пат. физиол. - 1989. - № 6. - С. 66-72.

104. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. - Новосибирск: Наука, Сиб. отд., 1983. - 256 с.

105. Маянский А.Н., Рассанов С.П. Характеристика лимфокинов, стимулирующих кислородзависимый метаболизм нейтрофила // Иммунология. - 1983. - № 2. - С. 43-46.

106. Маянский А.Н., Чеботарь И.В., Конышкина Т.М. Неоднородность нейтрофилов человека в реакциях специфической адгезии //Иммунология. - 1989. - № 3. - С. 55-58.

107. Маянский Д.Н. Секреция макрофагов // Усп. совр. биол. - 1982. -Т. 93, вып. 1. - С.73-88.

108. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. - М.: Медицина, 1988. - 256 с.

109. Мельниченко П. И. и др. Оценка неспецифической резистентности организма с помощью лизосомально-катионного теста при действии длительного стресса / Мельниченко П.И., Гришанин В.А., Фолошня Г.Т., Козаков А.Н.. // Военно-мед. журнал. - 1992. - № 11. - С. 57-59.

110. Мечников И.И. Лекции о сравнительной патологии воспаления. -С.-Пб., 1892.-91 с.

111. Михайлова С.Д. и др. К вопросу о механизме действия лазерного облучения на развитие ишемических аритмий сердца при стимуляции сенсомоторной зоны коры / Михайлова С.Д., Сторожаков Г.И., Кудинова A.B., Семушкина Т.М. //Бюл. экспер. биол. - 1996. - Т. 122, № 10. - С. 375377.

112. Мозговая Л. А., Рочев В. П. Влияние излучения гелий-неонового лазера на фагоцитарную активность лейкоцитов // Лазерная биофизика и новые применения лазеров в медицине: Сб. науч. тр. - Тарту, 1990.-С. 102-105.

113. Морозова Н.В., Баталова М.И., Левин Г.Я. Влияние лазерного облучения на перекисное окисление липидов в консервированной

эритроцитарной массе // Клиническое и экспериментальное применение новых лазерных технологий: Тез. докл. конф. - Казань, 1995. - С. 325- 326.

114. Нагоев Б.С. Модификация цитохимического метода восстановления нитросинего тетразолия // Лаб. дело. - 1978. - № 1. - С. 7-11.

115. Нагоев Б.С. Цитохимическое изучение состояния микробицидной системы лейкоцитов у взрослых, больных скарлатиной. // Лаб. дело. - 1988.

- № 10. - С. 42- 44.

116. Нагоев Б.С., Шубич М.Г. Функциональная активность лейкоцитов у больных пневмонией. // Клин. мед. - 1979. - Т. LVII, № 4. - С. 31-34.

117. Нарциссов Р.П. Применение n-нитротетразолия фиолетового для количественной цитохимии дегидрогеназ лимфоцитов человека //Арх. анат. -1969. - Т. LVI, № 5. - С. 85-91.

118. Нестерова И.В. и др. Модуляция функций нейтрофильных гранулоцитов низкоинтенсивным лазерным облучением /Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Чудилова Г.А. и др. // Иммунология. - 1994. - № 2. -С. 39-41.

119. Ничков С., Кривицкая Т.Н. Акустический стресс и церебровисцеральные нарушения (Морфо-физиологическое исследование).

- М., Медицина. - 1969. - 231 с.

120. Оглобина О. Г. Биохимические механизмы участия нейтрофилов в реакциях острого воспаления (обзор) //Вопросы мед. химии. - 1988. - № 5.

- С. 2-9.

121. Олесин А.И. и др. Влияние лазерного облучения венозной крови на белково-синтетическую функцию кардиомиоцитов при экспериментальном инфаркте миокарда /А.И. Олесин, О.М. Андрющенко, Я.В. Голуб и др. //Физиол. журн. СССР. - 1992. - Т. 78, № 2. - С. 75-80.

122. Павлова Т.Н. Использование крови, облученной гелий-неоновым лазером в комплексном лечении больных с флегмонами. //Стоматология. -

1993.-Т. 72, №1.-С. 16-18.

123. Пальцын A.A. Некоторые вопросы современного учения о полиморфноядерных лейкоцитах. // Арх. пат. - 1988. - № 8. - С. 85-90.

124. Пальцын A.A. и др. Радиоавтографическое выявление интрацеллюлярного и экстрацеллюлярного бактерицидного действия нейтрофилов / A.A. Пальцын, А.К. Бадикова, Н.В. Червонская и др. // Бюл. экспер. биол. - 1988. - № 11. - С.

125. Паносян А.Г., Дадаян М.А., Геворкян Г.А. Влияние стресса и адаптогена диюпокозида кукурбитацина R на превращение арахидоновой кислоты //Пробл. эндокринол. - 1989. - Т. XXXV, № 1. - С. 58-61.

126. Пауков B.C., Кауфман О.Я. Структурно-функциональная характеристика нейтрофильных лейкоцитов и их роль в формировании воспалительных и иммунных процессов //Арх. пат. - 1983.- Т. XLV. - Вып. 5. -С. 3-13.

127. Пигаревский В.Е. К усовершенствованию метода окраски катионных белков лизосом полиморфноядерных лейкоцитов лабораторных животных и человека //Арх. пат. - 1975. - Т. 37, вып. 4. - С. 77-79.

128. Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. - М., Медицина, 1978. - 127 с.

129. Пигаревский В.Е. Полиморфноядерный лейкоцит и макрофаг в реакциях воспаления и гиперчувствительности. // Арх. пат.- 1983. - Т. XLV, вып. 117.-С. 14-22.

130. Пирс Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная. - М., ИЛ. -1962. - С.508.

131. Плаксина Г.В., Чемный А.Б., Пелепец Л.П. Влияние излучения гелий-неонового лазера на морфофункциональные показатели крови у больных с заболеваниями периферической нервной системы. // Актуальные проблемы лазерной медицины: Республ. сб. науч. тр. - М., 1990. - С. 26-29.

132. Подильчак М.Д., Терлецкая Л.М. Клиническое значение

определения активности миелопероксидазы и щелочной фосфатазы лейкоцитов у больных с гнойно-воспалительными процессами // Клин, хирургия. - 1988. - № 1. - С. 59-60.

133. Порозов Ю.Б. Влияние гелий-неонового лазерного излучения на деятельность сердца.: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Саратов, 1997. -21с.

134. Приходченко A.A. и др. Состояние лимфоидной ткани после лазерного облучения/ Приходченко A.A., Девятьяров JI.A., Щукин B.C. и др. // Применение прямого лазерного облучения в экспериментальной и клинической кардиохирургии. - Новосибирск, 1981. - С. 160-166.

135. Раппопорт Ж.Ж., Гончарук З.И. Фагоцитоз и цитохимический состав лейкоцитов // Лаб. дело. - 1973. - № 5. - С. 259-262.

136. Романова Т.П. Способ моделирования внутримозговых гематом при артериальной гипертензии //Пат. физиол. - 1989. - № 3.- С. 80-81.

137. Романова Т.П., Брилль Г.Е. Влияние предварительного лазерного облучения на тучные клетки при комбинированном стрессе // Применение низкоинтенсивных лазеров и излучения миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике / Под ред. Т.Е. Брилля - Саратов: Изд-во СГМУ, 1994. - С. 87-92.

138. Ромм А.Р. и др. Действие лазерного излучения на перекисную хемилюминесценцию раневого экссудата /Ромм А.Р., Шерстнев М.П., Волков В.В., Владимиров Ю.А. // Бюл. экспер. биол. - 1986. - № 10. - С. 426428.

139. Савина Л.В., Зиньковская Т.М. Влияние лазерной терапии на микроструктуру сыворотки крови больных ишемической болезнью сердца. // Росс. мед. журн. -1992. - № 3. - С. 35-37.

140. Саркисов Д.С. и др. Синтез РНК при активации нейтрофила./ Саркисов Д.С., Пальцын A.A., Колкер И.И. и др. //Арх. пат.- 1986.-№ 12.-С. 6-12.

141. Саркисов Д.С., Пальцын A.A., Втюрин Б.В. Электронно-микроскопическая радиоавтография клетки. - М.: Медицина, 1980, - 264 с.

142. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. - М.: Медгиз, 1960. - 254 с.

143. Селье Г. Стресс без дистресса. - М.: Прогресс, 1979. - 122 с.

144. Сейц И.Ф., Луганова И.С. Биохимия клеток крови и костного мозга в норме и при лейкозах. - Л., Медицина, 1967. - 328 с.

145. Скобелкин O.K. и др. Воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения на уровень гистамина, серотонина и катехоламинов в структурах периферической крови больных бронхиальной астмой /Скобелкин O.K., Саперов В.Н., Гордон Д.С. и др. //Клиническое и экспериментальное применение новых лазерных технологий: Тез. докл. конф. - Казань, 1995. -С. 344-345.

146. Смиян И.С., Луговая О.И. Показатели цитохимического профиля нейтрофилов при хроническом гломерулонефрите у детей // Педиатрия. -1985.-№ 8.- С. 65-66.

147. Смолянинова Н.К., Кару Т.Й., Зеленин A.B. Облучение He-Ne лазеромусиливает бласттрансформацию, вызванную фитогемагглютини-ном // Докл. АН СССР. - 1990. - Т. 315. - N.5.- С. 1256-1259.

148. Струков А.И. Новые данные о полиморфно-ядерных лейкоцитах (нейтрофильных гранулоцитах)// Арх. пат.- 1980.- т. XLII. - вып. 10. - С. 8990.

149. Суржикова Г.С., Ковалева Л.Г., Гольдберг Е.Д. Результаты цитохимического исследования элементов гранулоцитопоэза при остром лейкозе. // Гематол. и трансфузиол. - 1984. - T. XXIX, № 5. - С. 13-16.

150. Сюч Н.И. и др. Обмен кислорода в нейтрофилах периферической крови при внутривенной лазеротерапии /Сюч Н.И., Бабакова C.B., Вокуев И.А., Шабалин В.Н. //Клиническое и экспериментальное применение новых

лазерных технологий / Под ред. проф. О.К.Скобелкина. - Казань, 1995. - С. 412-413.

151. Теппермен Дж., Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринной системы. - М.: Медицина, 1989. - С. 41-84.

152. Терентьева Э.И., Шишканова З.Г. Атлас ультраструктуры клеток кроветворной системы. - М., 1972. - 136 с.

153. Терещенко И.П., Кашулина А.П. Роль системы нейтрофильных гранулоцитов в формировании особенностей развития патологического процесса // Пат. физиол. - 1993. - № 4. - С. 56-60.

154. Тифлова О.А., Кару Т.Й. Действие излучения аргонового лазера и некогерентного синего света на бактерии Escherichia coliH Радиобиология. - 1986. - Т. XXVI, вып. 6. - 829-832.

155. Тифлова О.А., Кару Т.Й. Действие низкоинтенсивного света красной и дальней красной областей спектра на бактерии Escherichia coli //Микробиология. - 1987. - Т. 56, вып.З. - С. 393-396.

156. Тифлова О.А., Кару Т.Й. Влияние низкоинтенсивного лазерного света на нестационарные, метаболические процессы в клетках бактерий Escherichia coli // Докл. АН СССР. - 1987. - Т. 295, № 4. - С. 1002-1005.

157. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Хилл Р. и др. Основы биохимии. -Т.1. - М.: Мир, 1985. - С. 475.

158. Успенский В.М. и др. Роль полиморфноядерных лейкоцитов в механизмах ульцерогенеза /Успенский В.М., Пигаревский В.Е., Сарычев Е.С., Голофеевский В.Ю. //Арх. пат. - 1989. - Т. 51, № 10. - С. 25-28.

159. Фрадкин В.А. Аллергодиагностика in vitro. - М.: Медицина, 1975. -145 с.

160. Федосеева Г.Е. и др. Действие низкоинтенсивного красного света на ферментативную активность дрожжевой культуры Torulopsis sphaerica /Федосеева Г.Е., Кару Т.Й., Ляпунова Т.С. и др. // Микробиология. - 1986. -Т. 55, вып. 6. - С. 944-948.

161. Федосеева Г.Е. и др. Чувствительность различных дрожжевых культур к действию низкоинтенсивного красного света /Федосеева Г.Е., Кару Т.Й., Ляпунова Т.С. и др. // Микробиология. - 1987. - Т. 56, вып.5. - С. 792-796.

162. Фурдуй Ф.И. Физиологические механизмы стресса и адаптации при остром действии сгресс-факторов. - Кишинев: Штиинца. - 1986.

163. Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия. - М.: Медицина, 1983. - С. 218.

164. Хомерики С.Г. и др. Влияние облучения крови гелий-неоновым лазером на агрегацию нейтрофильных гранулоцитов больных ишемической болезнью сердца /Хомерики С.Г., Кубатиев A.A., Корочкин И.М., Шляпников В.Н. // Пат. физиол. - 1994. - № 2. - С. 41-43.

165. Хомерики С.Г., Кубатиев A.A., Шляпников В.Н. Лектининдуцированная агрегация нейтрофильных гранулоцитов до и после облучения крови гелий-неоновым лазером //Гемат. и трансф. - 1993. - № 7. -С. 26-28.

166. Хрущов Н.Г., Комарович Н.И., Скурская М.Г. Цитохимический анализ механизма синтеза гликогена в нейтрофилах периферической крови. //Докл. АН СССР. - 1969. - Т.186, № 6. - С. 1422-1424.

167. Чернышова Л.А., Хан М.А. Низкоинтенсивная лазерная терапия в педиатрии. - М.: Аспект Пресс, 1995. - 27 с.

168. Чухловин А.Б. Клинико-экспериментальные исследования мембранных функций лейкоцитов при лучевой патологии // Мед. радиол. -1989.-№6.-С. 77-83.

169. Шабалин В.Н. и др. Иммунологические и физико-химические эффекты действия лазера на биологические объекты /Шабалин В.Н., Иваненко Т.В., Скокова Т.В., Ольшанский А.Я. // Иммунология. - 1990. -№ 6. - С.30-32.

170. Шардаков В.И., Минаков В.Н. Прогностическое значение

цитохимических исследований у больных хроническим миелолейкозом. //Гематол. и трансфузиол. - 1984. - Т. XXIX, № 5. - С. 16-19.

171. Шафран М.Г. Миелопероксидаза нейтрофильных лейкоцитов. // Вопр. совр. биол. -1981. - Т. 92. - С. 365-379.

172. Шафран М.Г., Шабанова Л.Ф., Ашмарин И.П. Изучение биосинтеза миелоперокеидазы лейкоцитов белых мышей // Биохимия. -1976. - Т. 41, № 3. - С. 496-499.

173. Шелыгина Н.М., Пилиева Е.В. Цитоферментативные показатели и функциональные свойства нейтрофилов крови у больных // Врач. дело. -1986.-№9.-С. 53-55.

174. Шепеткин И.А. и др. Активация раннего хемилюминесцентного ответа нейтрофилов человека совместной обработкой фактором некроза опухоли (ФНО-а) и кальциевым ионофором А 23187 /Шепеткин И.А., Борунов Е.В., Скутина И.Л., Наумов С.А. //Бюл. экспер. биол. - 1991. -Т. CXI, № 2. - С. 148-150.

175. Шепеткин И.А., Удут В.В., Карпов А.Б. Влияние излучения Не-Ne лазера на хемшпоминесценцию нейтрофилов человека. // Радиобиология. - 1993. - Т. 33, вып.З. - С. 377- 382.

176. Шепотиновский В.И., Микашинович З.И. Метаболический ответ лейкоцитов как показатель индивидуальной реакции животного на стресс и шокогенную травму // Бюл. экспер. биол. - 1980. - № 10. - С. 418-420.

177. Шинкарев С.И. Влияние физических нагрузок на лизосомальный аппарат нейтрофильных лейкоцитов периферической крови // Физиол. журн. СССР. - 1983. - Т. LXIX, № 1. - С. 70-73.

178. Элькина Б.И. и др. Структурные перестройки сывороточного альбумина под действием низкоинтенсивного лазерного излучения / Элькина Б.И., Генкин В.М., Прахова Н.В., Новиков В.Ф. // Биофизика. -1990. -Т.35,вып. 3.-С. 533.

179. Alexander N.M. Oxidation and oxidative cleavage of tryptophanyl

peptidebonds during chemical- and peroxidase-catalyzed iodinations // J. Biol. Chem. -1974. - Vol. 249, № 25. - P. 1946-1952.

180. Alexander D., Fearon D. Endocytosis of the C3b receptor of complement on Human polymorphonuclear leucocytes and monocytes//Lab. Invest. - 1983. - Vol. 48, № 2. - P. 162-174.

181. Aniansson H., Stendahl G., Dahlgren C. Comparison between luminol- and lucigenindependent chemiluminescence of polymorphonuclear leukocytes // Acta. Pathol. Microbiol. Immunol. Scand [C]. - 1984. - Vol. 92, № 6. - P. 357-361.

182. Astaldi G., Verga L. The glycogen content of the cells of lymphatic leukaemia. //Acta Haemat. (Basel). - 1957. - Vol. 17. - P. 129-135.

183. Babior B.M. Oxidants from phagocytes: agents of defence and destruction //Blood. - 1984. -Vol. 64, № 5. - P. 959-966.

184. Babior B.M. The respiratory burst of phagocytes // J. Clin. Invest. -1984. - Vol. 73, № 3. - P. 560- 599.

185. Babior B.M. The respiratory burst oxidase // Adv. Enzymol. - 1992.-Vol. 65. - P. 49-95.

186. Baechner R.J., Nathan D.G. Leucocyte oxidase: defective activity in chronic granulamatous disease// Science. - 1967. - Vol. 155. - P. 835-837.

187. Baggiolini M. The neutrophil // The cell biology of inflammation. /Ed. by G. Weissmann. - Amsterdam, 1980.- P. 163-181.

188. Baggiolini M., Bretz U., Dewald B. The polymorphonuclear leukocyte. // Agents and actions. - 1978. - Vol. 8. - P. 3-10.

189. Baggiolini M., Bretz U., Gusas B. Biochemical characterization of azurophil and specific granules from human and rabbit polymorphonuclear leukocytes. // Schweiz. Med. Wschr. - 1974. - Vol. 104. - P. 129-133.

190. Baggiolini M., Dewald B.//Regulation of leucocyte function. N.Y.: Plenum press. - 1984. - P. 221.

191. Bainton D.F. Neutrophil granules // Brit. J. Haematol. - 1975. - Vol.

29, №1.- P. 17-22.

192. Bainton D.F. The neutrophil. // The Cell Biology of Inflammation.-N.Y., 1980.- P. 1-25.

193. Bainton D.F., Farguhar M.G. Origin of granules in polymorphonuclear leukocytes; two types derived from oppositefaces of the Golgi complex in developing granulocytes. //J. Cell. Biol. - 1966. - Vol. 28. -P. 277-301.

194. Bainton D.F., Ullyot J.L., Farguhar M.G. The development of neutrophilic polymorphonuclear leukocytes in human bone marrow. I. Origin and content of azurophil and specific granules // J. Exp. Med. - 1971. - Vol. 134. - P. 907-934.

195. Bentwood B.J., Henson P.M. The sequential release of granule constitutens from human neutrophils II J. Immunol. - 1980. - Vol. 124, № 2. - P. 855-862.

196. Berridge M.J. Inositol trisphosphate and diacylglycerol as second messengers // Biochem J. - 1984. - Vol. 220, № 2. - P. 345-360.

197. Boggs D.R. Physiology of neutrophil. Proliferation, maturation and circulation II Clin. Haemat. - 1975. - Vol. 4. - P. 535-551.

198. Borregaard N. et al. Subcellular localization of the b-cytochrome component of the human neutrophil microbicidal oxidase: translocation during activation /Borregaard N., Heiple J.M., Simons E.R., Clark R.A. //J. Cell Biol. -1983.-Vol. 97, №1.-P. 52-61.

199. Borysenko M., Beringer T. Functional histology. - 2nd ed. - Boston: Little, Brown and Comp., 1984. - 350 p.

200. Boyle M.D. et al. Nerve growth factor: a chemotactic factor for polymorphonuclear leukocytes in vivo / Boyle M.D., Lawman M.J., Gee A.P., Young M. II J. Immunol. - 1985. - Vol. 134, № 1. - P. 564-568.

201. Bretz U., Baggiolini M. Biochemical and morphological characterization of azurophil and specific granules of human neutrophilic

polymorphonuclear leukocytes. // J. Cell. Biol. - 1974. - Vol. 63. - P. 251-270.

202. Brill G.E. et al. The reaction of blood formed elements to transcutaneous laser irradiation in short-term stress /G.E. Brill, L.S. Filimonovskaya, S.N. Grigoriev et al. // Cell and Biotissue Optics: Proc. SPIE. -1994. - Vol. 2100. - P. 292-301.

203. Brill G.E., Grigoriev S.N., Romanova T.P. Changes of leucocytes metabolism in He-Ne laser blood irradiation in vitro // Optical Methods of Biomedical Diagnostics and Therapy: Proc. SPIE. - 1992. - Vol. 1981. - P. 104109.

204. Britigan B.E., Rosen G.M., Chai Y., Cohen M.S. Do human neutrophils make hydroxyl radical? //J. Biol. Chem. - 1986. - Vol. 261, № 10. - P. 4426-4431.

205. Brunham R.C., Holmes K.K.// Advances in Host Defense Mechanisms.- New York.- 1983.- Vol.2.- P.79-100.

206. Camussi G., Mencia-Huerta J., Benveniste J. Release of a platelet-activating factor and histamine. I. Effect of immune complexes, complement and neutrophils on human and rabbit mastocytes and basophils// Immunology. -1977. - Vol. 33, № 4. - P. 523-534.

207. Clark R.A., Klebanoff S.J. Chemotactic factor inactivation by the myeloperoxidase-hydrogen peroxide-halide system // J. Clin. Invest. - 1979. - Vol. 64,№4. -P. 913-920.

208. Cline M. J. Ribonucleic acid biosynthesis in human leukocytes effects of phagocytosis on RNA metabolism //Blood.-1966.- Vol. 28, № 2. -P. 188-200.

209. Cline M. The White cell. - Cambridge, 1975. - 564 p.

210. Cline M.J. et al. Mechanism of endotoxin interaction with human leucocytes. / Cline M.J., Melmon K.L., Davis W.C., Williams H.E. // Brit. J. Haemat. - 1968. - Vol. 15, № 6. - P. 539-547.

211. Cross A.R. et al. The enzymic reduction and kinetics of oxidation of cytochrome b-245 of neutrophils / Cross A.R., Higson F.K., Jones O.T.G. et al.

I I Biochem. J. - 1982. - Vol. 204, № 2. - P. 479-485.

212. Crawford D.R., Schneider D.L. Identification of ubiquinone-50 in human neutrophils and its role microbicidal events // J. Biol. Chem. - 1982. - Vol. 257, № 12. - P.6662-6668.

213. Cunningham C.C. et al. Identification and quantitation of electron-transport components in human polymorphonuclear neutrophils / Cunningham C.C., DeChatelet L.R., Spach P.I. et al. // Biophys. acta. - 1982. - Vol. 682, № 3. - P. 430-435.

214. De Chatelet L.R., Lees C.J., Shirley P.S. Separation of superoxide generation from NADP formation in subcellular fractions from human neutrophils // Clin. Res. - 1982. - Vol. 30, № 2. - P. 363 A.

215. De Mendez I. et al. Role of p67-phox SH3 domains in assembly of the NADPH oxidase system /De Mendez I., M.C.Garrett, A.G. Adams, T.L.Leto // J. Biol. Chem. -1994. - Vol. 269. - P. 16326-16332.

216. Dewald B., Bretz U., Baggiolini M. Release of gelatinase from a novel secretory compartement of human neutrophils // J. Clin. Invest. - 1982. -Vol. 70, № 3. - P. 518-525.

217. Dulis B.H., Wilson J.B. Signal transduction events in stimulated rat neutrophils // J. Biol. Chem. - 1980. - Vol. 255. - P. 1043.

218. Dykman T. Structural heterogenety of the C3b/C4b receptor (CR1) on human peripheral blood cells / Dykman T., Cole J., lida K., Alkinson J. // J. Exp. Med. - 1983. - 157. - № 7. - P. 2160.

219. Fearon D. Identification of the membrane glycoprotein that is the C3b receptor of the human erythrocyte, polymorphonuclear leucocyte, B-lymphocyte and monocyte // J. Exp. Med. - 1979. - Vol. 152. - № 1. - P. 20-29.

220. Fleit H., Wright S., Unkeless J. Human neutrophil Fc-receptor-distribution and structure // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1982. - Vol. 79, № 9. - P. 3275-3283.

221. Gabig T.G. The NADPH-dependent 0-2-generating oxidase from

human neutrophils //J. Biol. Chem. - 1983. - Vol. 258, № 10. - P. 6352-6356.

222. Gabig T.G., Babior B.M. The 02(-)-forming oxidase responsible for the respiratory burst in human neutrophils. Properties of the solubilized ensyme // J. Biol. Chem. - 1979. - Vol. 254, № 18. - P. 9070-9074.

223. Gabig T.G., Tchervish E.W., Santinga Z.T. Functional relationship of the cytochrome b to the superoxide-generating oxidase of human neutrophils // J. Biol. Chem. - 1982. - Vol. 257, № 8. - P. 4114-4119.

224. Garbulinski T. et al. Responses of neutrophils and lymphocytes in the cold stress: effects of nonsteroid anti-inflammatory drugs /Garbulinski T., Obminska-Domoradzka B., Switala M., Debowy J. // Pol. J. Pharmacol. Pharm. -1991. - Vol. 43, № 5. - P. 353-359.

225. Gerdes J., Stein H. Temperature dependence of certain integrated membrane functions in macrophages // J. Immunology. - 1980. - Vol. 41. -P. 929.

226. Gesprach C., Abita J. Role of the antibody Fc in the immunoclearance // Mol. Farmacol. - 1982. - Vol. 21. - P. 78.

227. Gracham R., Knoll M. Metabolic and morphological observations on the effect of surface-active agents on leukocytes // J. Cell. Biol. - 1967. -Vol. 32. - P. 629-647.

228. Granelli-Piperno A., Vassalli J.D., Reich E. RNA and protein synthesis in human peripheral blood polymorphonuclear leukocytes // J. Exp. Med. - 1979.- Vol. 149, № 1. - P. 284-289.

229. Harlan J.M. et al. Neutrophil-mediated endothelian injury in vitro mechanisms of cell detachment / Harlan J.M., Killen P.D., Harker LA. et al. // J. Clin. Invest. -1981. - Vol. 68, № 6. - P. 1394-1403.

230. Hess M.L., MansonN.H., Okabe E. Involvement of free radicals in the pathophysiology of ischemic heart disease // Can. J. Physiol. Pharmacol. -1982. - Vol. 60, №11.-P. 1382-1389.

231. Hirai K.-M., Moriguchi K., Wang G.-Y. Human neutrophils produce

free radicals from the eell-zymosan interface during phagocytosis and from the whole plasma membrane when stimulated with calcium ionophore A23187 // Exp. Cell. Res. - 1991. - Vol. 194, № 1. - P. 19-27.

232. Hirsch J.G. Microphotographie observations on granule lysis in polymorphonuclear leucocytes during phagocytosis // J. exp. Med. - 1962. - Vol. 116.-P. 827-834.

233. Hirsch J.G. Neutrophil leukocytes //The inflammatory process /Ed. by B.W. Zweifach, L. Grant, R.T. McCluskey. - N.Y.: Academic Press, 1974. - Vol. 1. _P. 411-447.

234. Hoffstein S. // The Cell Biology of Inflammation. - N.Y., 1980. - P. 387-430.

235. Horan T., English D., McPherson T. Association of neutrophil chemiluminescence with microbicidal activity // Clin. Immunol, and Immunopathol. - 1982. - Vol. 22, № 2. - P. 259-269.

236. Humbert J.R., Solomons C.C., Ott J.E. Increased oxidative metabolism by leukocytes of patients with osteogenesis imperfecta and of their relatives//J. Pediat. -1971. - V. 78. - P. 648-653.

237. Imajoh-Ohmi S. et al. Topology of cytochrome b558 in neutrophil membrane analyzed by anti-peptide antibodies and proteolysis /S. Imajoh-Ohmi, K.Tokita, H. Ochiai et al. // J. Biol. Chem. - 1992. - Vol. 267. - P. 180-184.

238. Jandl R.C. et al. Termination of the respiratory burst in human neutrophils / Jandl R.C., Andre-Schwartz J., Borges-DuBois L. et al. //J. Clin. Invest. - 1978. - Vol. 61, № 5. - P. 1176-1185.

239. Kaplow L. S. Histochemical procedure for localizing and evaluating leukocyte alkaline phosphatase activity in smears of blood and marrow // Blood.

- 1955. - Vol. 10, № 10. - P. 1023-1029.

240. Kellogg E.W. 3 rd, Fridovich J. Superoxide, hydrogen peroxide and singlet oxygen in lipid peroxidation by a xantine oxidase system // J. Biol. Chem.

- 1975. - Vol. 250, № 22. - P. 8812-8817.

241. Khan A.U. Singlet molecular oxygen from superoxide anion and susitized fluorescence of organic molecules// Science. - 1970. - Vol. 168. - P. 476.

242. KlebanofF S.J. Antimicrobial mechanisms in neutrophilic polymorphonuclear leukocytes. // Seminars in Hematology. - 1975. - Vol.12. - P. 117-142.

243. Klebanoff S.J. Cytocidal mechanisms of phagocytic// Proc. 4th internat. congr. immunol. - V. 1. - N.Y.: Acad, press. -1981. - P. 720.

244. Klebanoff S.J. Oxygen-dependent cytotoxic mechanisms of phagocytes // Adv. in host defense mechanisms. - N.Y.: Raven press, 1982.-Vol. l.-P. 111-162.

245. Klebanoff S.J., Clark R.A. The Neutrophil: Function and Clinical Disorders. - Amsterdam.: North-Holland publ. Co. - 1978. - Vol. 27. - 810 p.

246. Knaus U.G. et al. Regulation of phagocyte oxygen radical production by the GTP-binding protein Rac 2 / U.G. Knaus, P.G. Heyworth, T.Evans et al. // Science Wash. DC. -1991. - Vol. 254. - P. 1512-1515.

247. Korchak H.M., Vienne K., Rutherford L.E., Weissmann G. Neutrophil stimulation: receptor, membrane and metabolic events //Fed. Proc. -1984. - Vol. 43, № 12. - P. 2749-2754.

248. Korec S. The role of granulocytes in host defense against tumors // Natural cell-mediated immuniti against tumors. N.Y.: Acad.press, 1980.- P. 1301-1307.

249. Koval'chuk L.V. et al. Priming of phagocytes by cytokines and water-soluble products of lipid peroxidation/ Koval'chuk L.V., Klevanov G.I., Ribarov S.R. et al. //Biomed. Science. -1991. - Vol. 2. - P. 221-231.

250. Kriz J. Etude de Infrastructure des leucocytes humains par cryo-decapage.// Nouv. rev. franc, hematol. - 1969.- Vol. 9. - P. 449-457.

251. Lane Th.A., Lamkin G.E. A reassessment of the energy requirements for neutrophil migration: adenosine triphosphate depletion enhances chemotaxis// Blood. - 1984. - Vol. 64, № 5. - P. 986 - 993.

252. Larson R., Kluskens L., Vachin S. The DNA synthetic response of normal and abnormal human lymphocytes to mevalonic acid: The role of granulocytes as a helper population // J. Allergy and Clin. Immunol. - 1984.-Vol. 24, № 3. - P. 280-286.

253. Lewandowicz-Uszynska A., Jankowski A. Application of neutrophils chemiluminescence test in the differential diagnosis of asthma and RRTI in the remission period in children // Ligth and biological systems: Abst. Intern. Conf. -Wroclaw, 1995. - P. 55.

254. Light D.R. et al. Characteristics of the cofactor requirements for the superoxide-generating NADPH oxidase of human polymorphonuclear leukocytes /Light D.R., Walsh C., O'Callagham A.M. et al. //Biochemistry. -1981. - Vol. 20, № 6. - P. 1468-1476.

255. Lundren G., Zukoski C.H., Moller G. Differential effects of human granulocytes and lymphocytes on human fibroblasts in vitro II Clin. Exp. Immunol. - 1968. - Vol. 3. - P. 817-836.

256. Lynch J.M. et al. The release of a platelet-activating factor by stimulated rabbit neutrophils / Lynch J.M., Lotner G.Z., Betz S.J., Henson P.M. // J. Immunol. - 1979. - Vol. 123, № 3. - P. 1219-1226.

257. Maly F.E., Schiirer-Maly C.C. How and Why Cells Make Superoxide: The "Phagocytic" NADPH Oxidase // News in Physiological Sciences. - 1995. - Vol. 10. - P. 233-238.

258. McManus J. F. A. Histological demonstration of mucin after periodic acid//Nature. -1946. - Vol. 52, №10. - P. 158-202.

259. McPhall L.C., Shyderman R. // Regulation of leukocytes function. N.Y.: Plenum press, 1984. - P. 247.

260. Metcalf D. Transformation of granulocytes to macrophages in bone marrow colonies in vitro //J. Cell Physiol. -1971. - Vol. 77. - P. 277-280.

261. Murphy P. The neutrophil. - Oxford: Plenum Med. Press, 1976.

262. Novikoff A.B., Shin W.Y., Drucker J. Mitochondrial localization of

oxidative enzymes: staining results with two tetrazolium salts // J. Biophys. Biochem. Cytol. -1961. - Vol. 9. - P. 47-61.

263. Nunez D. et al. The inhibition of platelet-activating factor-induced platelet activation by cleio aoid is associated with a decrease in polyphosphoinositide metabolism / Nunez D., Randon J., Gandhi C. et al. // J. Biol. Chem. -1990. - Vol. 265, № 30. - P. 18330-18339.

264. Ozawa M. et al. Synergism between protein kinase C activator and fatty acids in stimulating superoxide anion production in guinea pig polymorphonuclear leukocytes / Ozawa M., Ohtsuka T., Okamura N., Ishibashi S. // Arch. Biochem. Biophys. - 1989. - Vol. 273, № 2. - P. 491-496.

265. Park B.H., Fikrig S.M., Smithwick E.M. Infection and nitrobluetetrazolium reduction by neutrophils: a diagnostic aid //Lancet. - 1968. -Vol. 11.-P. 532-534.

266. Pickaver A.H. et al. Cytotoxie effects of peritoneal neutrophils on a syngeneic rat tumour / Pickaver A.H., Ratcliffe N.A., Williams A.E., Smith H. // Nature [New Biol]. - 1972. - Vol.235, № 56. - P.186-187.

267. Porozov Yu.B., Brill G.E., Kiritchuk V.F. Influence of He-Ne laser irradiation of pacemaker on the frog's heart function // In: Nonlinear Dynamics and Structures in Biology and Medicine: Optical and Laser Technologies. - 1997. - Prod. SPIE. - Vol. 3053. - P. 160-171.

268. Rado T.A. et al. Lactoferrin biosynthesis during granulocytopoiesis / Rado T.A., Bollekens J., Laurent G.S. et al. // Blood. -1984. - Vol. 64, № 5. -P.l 103-1109.

269. Riley L.K., Robertson D.S. Ingestion and intracellular survival of Brucella abortus in human and bovine polymorphonuclear leukocytes // Infect. Immun. - 1984. - Vol. 46, № 1. - P. 224-230.

270. Riley L.K., Robertson D.S. Brucellacidal activity of human and bovine polymorphonuclear leukocyte granule exstracts againts smooth and rough strains of Brucella abortus // Infect. Immun. - 1984. - Vol. 46, № 1. - P.

231-236.

271. Roos D. The neutrophil. // The Cell Biology of Inflammation.-New York, 1980.-P.337-385.

272. Rotrosen D. et al. Cytochrome b558: the flavin-binding component of the phagocyte NADPH oxidase /Rotrosen D., C.L.Yeung, T.L.Leto et al. // Science Wash. DC. - 1992. - Vol. 256. - P. 1459-1462.

273. Segal A.W. et al. Absence of a newly described cytochrome b from neutrophils of patients with chronic granulomatous disease // Segal A.W., Jones O.T., Webster D., Allison A.C. // Lancet. - 1978. - Vol. 2, № 8087. - P. 446-449.

274. Segal A., Dorling J., Coade S. Kinetics of fusion of the cytoplasmic granules with phagocytic vacuoles in human polymorphonuclear leucocytes. Biochemical and morphological studies // J. Cell. Biol. - 1980. - Vol. 85, № 1. - P. 42-59.

275. Selye G. The stress of Life. - N.Y., Toronto, London, 1956.

276. Segal A.W., Coade S.B. Kinetics of oxygen consumption by phagocytosing human neutrophils //Biochem. Biophys. Res. Commun. -1978. -Vol. 84,№3. -P. 611-617.

277. Seliman B., Fletcher M., Gallin G. Defenses immunitares au des infections virales //J. Immunol. - 1983. - Vol. 130. - P. 1902.

278. Scott R.E., Horn R.G. Ultrastructural aspects of neutrophil development in humans. //Lab.Invest. - 1970. - Vol. 23, № 2. - P. 202-215.

279. Scharpe S. et al. Proteases and their inhibitors: today and tomorrow / Scharpe S., De Meester I., Hendriks D. et al. // Biochimie. -1991. - Vol. 73., № 1. -P. 121-126.

280. Sha'afi R.I. et al. Phorbol 12-myristate 13-acetate activates rabbit neutrophils without an apparent rise in the level of intracellular free calcium /Sha'afi R.I., White J.R., Molski T.F.P. et al. //Biochem. Biophys. Res. Comun. -1983. - Vol. 114, № 2. - P. 638-645.

281. Sheehan H.L., Storey C.W. An improved method of staining

leucocyte granules with Sudan black B. I I J. Path. Bact. - 1947. - Vol. 59. - P. 336.

282. Sheng Y. Rat and human polymorphonuclear leukocyte derived lymphocyte stimulatory factors / Sheng Y., Bird J., Pompidou et al. // Biomed. Pharmacother. - 1984. - Vol. 38. - P. 304-308.

283. Shigemitsu Y. et al. Influence of surgical stress on bactericidal activity of neutrophils and complications of infection in patients with esophageal cancer /Shigemitsu Y., Saito T., Kinoshita T., Kobayashi M. // J. Surg. Oncol. - 1992. -Vol. 50.-№2.-P. 90-97.

284. Smith R.J., Speziale S.C., Bowman B.J. Neutrophil functions. // Biochem. biophys. Res. Commun. - 1985. - Vol. 130, № 3. - P. 1233-1240.

285. Steidel Ch., Huhn P. Feinstruktur gefriergeatzter neutrophiler Granulozyten. //Blut. - 1970. - Vol. 20, № 2. - P. 90-94.

286. Stole V. Restrained adenyl cyclase in human neutrophils: stimulation of cyclic adenosine 3':5'-monophosphate formation and adenyl cyclase activity by phagocytosis and prostaglandins. // Blood. - 1974. - Vol. 43 - P. 743-748.

287. Takasugi M., Akira D., Kinoshita K. Granulocytes as effectors in cellmediated cytotoxicity of adherent target cells // Cancer Res. - 1975. - Vol. 35, № 8.-P. 2169-2176.

288. Tesch H., Konig W. Phospholipase A2 and arachidonic acid: a common link in the generation of the eosinophil chemotactic factor (ECF) from human PMN by various stimuli // Scand. J. Immunol. - 1980. - Vol. 11, № 4. - P. 409-418.

289. Thomas E.L., Aune T.M. Peroxidase-catalyzed oxidation of protein sulfhydryls mediated by iodine // Biochemistry. - 1977. - Vol. 16, № 16. -P. 3581-3586.

290. Van der Valk P., Herman C.J. Leukocyte functions // Lab. Invest. -1987. - Vol. 56, № 2. - P. 127-137.

291. Vischer T.L., Bretz U., Baggiolini M. In vitro stimulation of

lymphocytes by neutral proteinases from human polymorphonuclear leukocyte granules // J. Exp. Med. - 1976. - Vol. 144, № 4. - P. 863-872.

292. Vladimirov Yu.A. et al. Effect of Oxidized Phospholipids on the Chemiluminescence of Zymosan-activated Leukocytes / Vladimirov Yu.A., Ribarov S.R., Bochev P.G. et al. // Gen. Physiol. Biophys. - 1990. - Vol. 9. - P. 45-54.

293. Volpi M. et al. Chemotactic factor causes rapid desreases in phosphatidylinositol, 4,5-bisphosphate and phosphatidylinositol 4-monophosphate in rabbit neutrophils / Volpi M., Yassin R., Naccache P.H., Sha'afi R.I. //Biochem. Biophys. Res. Comun. - 1983. - Vol. 112, № 3. - P. 957964.

294. Wachstein M., Meisel E. Histochemistry of substrate specific phosphatases at a physiological pH // J. Histochem. Cytochem. - 1956. - Vol. 4. -P. 424.

295. Wiktrom T., Ruiz-Jasbon F., Bagge U., Magnus Braide. Granulocyte priming, Activation and NBT-test // Internatinal Journal of Microcirculation. Clinical and Experimental. / Sixth World Congress for Microcirculation: Abstracts Book. - Munich, Germany. - August 1996. - P. 202.

296. Wright D.G. Neutrophil as a secretory organ of host defense //Adv. in host defense mechanisms. - N.Y.: Raven press, 1982. - Vol. 1. - P. 75-110.

297. Zatta A. et al. Leucocyte-dependent thrombocytes aggregation. Effects of clorioromene / Zatta A., Proadooimi M., Bazzoni G. et al. // Europ. J. Pharmacol. -1991. - Vol. 198, № 1. - P. 97-100.