Влияние газов на процессы замораживания-оттаивания и выживаемость клеточных культур при низкотемпературной консервации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Уграицкая Светлана Владимировна

• Уграицкая Светлана Владимировна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Уграицкая Светлана Владимировна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ

1. 1 Газы, рассматриваемые в криобиологии

1. 2 Теория гидратообразования

1. 3 Растворимость газов в растворах

1. 4 Растворимость газов во льду

1. 5 Влияние дегазации на процессы замораживания-оттаивания

1.6 Влияние газов на выживаемость биоматериала при гипотермии и низкотемпературной консервации

1.6.1 Органопротекторное действие инертных газов

1.6.2 Наркотическое действие газов

1.6.3. Гипотермия

1.6.4 Низкотемпературная консервация

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объекты исследования

2.2. Культивирование клеток

2.3. Подготовка клеток к криоконсервации

2.4. Процедура криоконсервации и протокол насыщения клеточной суспензии газам

2.5. Размораживание образцов

2.6. Определение жизнеспособности клеток после размораживания

2.7. Измерение импеданса с помощью системы RTCA iCELLigence DP

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Изучение влияния Не, №, N2 , Кг, Аг, Хе, ББб на выживаемость клеток, характеризующихся высокойхолодовой устойчивостью (HeLa), при криоконсервации в среде без криопротектора

3.2. Изучение влияния газов №, N2 Кг, Аг, Хе, ББб на выживаемость клеток, характеризующихся высокой холодовой устойчивостью (HeLa), при криоконсервации в среде c криопротектором

3.3 Изучение влияния газов №, ^,Кг, Аг, Хе, ББб на выживаемость клеток, характеризующихся низкой холодовой устойчивостью (фибробласты линии L929), при криоконсервации в среде без криопротектора

3.4 Изучение влияния газов №, Кг, Аг, Хе, 8Бб на выживаемость клеток, характеризующихся низкой холодовой устойчивостью (фибробласты линии Ь929), при криоконсервации в среде с криопротектором

3.5 Изучение влияния гелия на клетки линии HeLa в среде без криопротектора в процессе криоконсервации по интенсивному протоколу

3.6 Исследование процессов кристаллизации насыщенной гелием воды методом микроскопического анализа

3.7 Обсуждение

3.7.1 Гипотеза о криозащитных свойствах клатратобразующих газов

3.7.2. Гипотеза о влиянии газов на структуру замороженного раствора за счет образования микропузырьков во время кристаллизации воды

3.7.3. Гипотеза о влиянии жирорастворимых газов на липидный бислой клеточных мембран

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выводы

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

RTCA iCELLIgence - анализатор клеток в реальном времени (запатентованная система производства американской компании Agilent, которая позволяет в режиме реального времени, без использования красителей и других дополнительных меток оценивать жизнеспособность клеточных культур).

DMEM - (Dulbecco's Modified Eagle Medium) - модифицированная по способу Дульбекко среда Игла) с высоким содержанием глюкозы и добавкой GlutaMAX

FBS - (Fetal Bovine Serum) - эмбриональной сыворотки телят ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

HeLa - линия «бессмертных» клеток из раковой опухоли шейки матки L929 - нормальная клеточная линия фибробластов из подкожной соединительной ткани мыши (Клон NCTC 929) ЛКБ - лизосомально-катионные белки ПОЛ - перекисное окисление липидов АОА - антиоксидантная активность

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние газов на процессы замораживания-оттаивания и выживаемость клеточных культур при низкотемпературной консервации»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Сохранение биологического материала в замороженном состоянии является актуальной проблемой в связи с бурным развитием медицины и необходимостью развития долговременных криобанков. Требуется как усовершенствовать существующие подходы, разработанные в основном для консервации клеток, повышая их эффективность, так и создать принципиально новые, чтобы решить проблему обратимого замораживания таких объектов как, фрагменты тканей, изолированные органы.

Это невозможно без понимания биологичеcкиx и физико-xимичеcкиx ^оце^ов, cопутcтвующиx оxлаждению, замоpаживанию и последующему оттаиванию биоматериала, который, как известно, может подвеpгатьcя при криоконсервации меxаничеcкому воздействию ш cтоpоны pаcтущиx ^иста^ов льда и оcмотичеcкому cтpеccу. В средах с биологическим материалом всегда присутствуют растворенные газы, которые оказывают влияние на физические и биологические процессы, сопутствующие охлаждению и замораживанию. Прежде всего, это растворенные газы воздуха: азот, кислород, углекислый газ и аргон. Молекулы этих газов выгоняются из pаcтущиx ^иста^ов льда. До сих пор остается открытым вопрос, какое влияние оказывают данные газы, а также их замена на другие газы (Не, N2, Кг, Аг, Хе, 8Е6) на процессы кристаллизации, сохранность и выживаемость биоматериала в процессе криоконсервации.

Степень разработанности темы. В источниках литеpатуpы ^айне мало информации о криозащитных свойствах газов при замоpаживании-оттаивании. ^и оxлаждении иницииpуетcя pоcт кpиcталлов льда в водном pаcтвоpе, и pаcтвоpенные газы пpеpеpаcпpеделяютcя в оcтавшемcя объеме pаcтвоpа, концентpиpуяcь на ^анице pаздела жидкой и твеpдой фаз. В pезультате жидкоcть вдоль ^аницы pаздела фаз обогащаетcя газом. ^и дальнейшем оxлаждении и увеличении матовой доли твеpдой фазы в одстеме жидкоcть cтановитcя

пеpенаcыщенной газом, котоpый выделяетcя в виде микропузырьков вдоль гpаницы раздела фаз. Обладая низкой теплопроводностью микропузырьки оказывают влияние на тепловые потоки во время замораживания или оттаивания. При медленном замораживании они замедляют охлаждение, повышая вероятность образования термомеханических напряжений в растворе и биоматериале, что способствует не только растрескиванию материала, но и повреждению части клеток.

Помимо образования микропузырьков рассматриваются иные аспекты влияния газов на процессы криоконсервации, включающие (1) влияние жирорастворимых газов на липидный бислой клеточных мембран; (2) криозащитные свойства клатратобразующих газов. Поскольку газовая криоконсервации остаётся до сих пор слабо изученным направлением криобиологии, мы предприняли попытку выяснить, какая из перечисленных гипотез максимально приближена к процессам, происходящим при криоконсервации в газовой атмосфере. Понимание закономерностей поведения газов в растворе и их влияния на биологические объекты при замораживании в перспективе может привести к появлению дополнительного инструмента разработки и оптимизации эффективных протоколов криоконсервации широкого спектра биоматериалов.

Цель и задачи исследования

Цель работы: изучение влияния газов на процессы замораживания-оттаивания и выживаемость клеточных культур при низкотемпературной консервации.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние газов (Не, №, N2, Кг, Аг, Хе, 8Еб) на выживаемость клеток линий HeLa и Ь929 при их криоконсервации с протектором и без его использования. Оценить криозащитные эффекты инертных газов в зависимости от их физико-химических свойств.

2. Исследовать процессы кристаллизации насыщенной газами воды и структуру льда методом микроскопического анализа.

Научная новизна. Впервые предложено рассматривать газы как потенциальные криозащитные агенты. Исследованы криозащитные свойства широкого ряда, включающего 7 газов, при низкотемпературной консервации. Для экспериментов разработана и изготовлена специализированная барокамера, выдерживающая давление до 20 атм. и позволяющая исследовать процессы криоконсервации в атмосфере различных газов в заданных термобарических условиях в реальном времени. Впервые показано, что природа растворенного в жидкости газа оказывает влияние на сохранность клеточных линий HeLa и L929 при криоконсервации. Выживаемость клеток HeLa и L929 уменьшается в ряду He<Ne<SF6<N2<Ar<Kr<Xe. Данный ряд совпадает с ростом растворимости газа в воде. Гелий и неон обладают выраженными криозащитными свойствами, обеспечивая выживаемость до 30% клеток линии HeLa в среде без криозащитных агентов. Предложен и экспериментально обоснован механизм, объясняющий положительные эффекты легких инертных газов на выживаемость клеток в процессе криоконсервации. В основе предложенного механизма лежат низкая растворимость легких инертных газов в воде, что приводит к «мягкой» дегазации клеточной суспензии при замораживании, а также способность гелия и неона растворяться во льду. Лёгкие газы для некоторых объектов могут полностью заменить криопротектор в среде замораживания или могут быть использованы для снижения концентрации классических проникающих протекторов, в частности глицерина с 10-15 до 3%, снижая потенциальные цитотоксические эффекты криозащитного раствора. Полученные результаты представляют интерес как вспомогательный элемент для разработки и внедрения эффективных методов криоконсервации клеток, решения проблемы криоконсервации тканей и органов, что актуально для создания криобанков с целью долговременного хранения биоматериала медицинского назначения.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты работы вносят существенный вклад в изучение механизмов криоповреждений и криозащиты клеточных культур при криоконсервации. В ряду инертных газов степень положительного воздействия на выживаемость клеток после криоконсервации снижается по мере роста молекулярной массы растворенного газа. Предложен способ снижения рабочей концентрации криопротектора (а, следовательно, и связанного с ним токсического действия протектора на биообъекты) за счет применения гелия и неона. Показано, что для некоторых клеточных объектов гелий может быть использован для разработки протоколов криоконсервации с полным отказом от применения традиционных криопротекторов. Последнее может быть востребовано для криоконсервации биологического материала медицинского назначения. Выявленные закономерности также могут быть использованы как вспомогательный элемент при разработке технологии криоконсервации крупных объектов, таких как ткани и органы.

Разработанный в ходе выполнения работы метод газовой криоконсервации может быть использован в научно-исследовательских Институтах биологического и медицинского профилей для создания криобанков. Получен патент на изобретение № RU2660075C1 (Российская федерация) «Способ хранения клеточных культур в суспензии».

Методология и методы исследования. В работе использованы методы биофизики и криобиологии, культивирования клеток, микроскопического анализа и оценки жизнеспособности клеток после криоконсервации. Изучение влияния газов (He, Ne, N2, Кг, Аг, Xe, SF6) на процессы замораживания-оттаивания и выживаемость клеточных культур проведено при низкотемпературной консервации до минус 130°С. Все исследования проведены на модельных системах in vitro.

Положения, выносимые на защиту:

1. Природа растворенного в клеточной суспензии газа оказывает влияние на сохранность клеток при криоконсервации. Выживаемость клеток уменьшается с ростом растворимости газа в воде в ряду: Не<№<ЗБ6< №<Аг<Кг<Хе. Таким образом, чем менее растворим газ, тем выше сохранность клеток в процессе медленного замораживания.

2. Легкие газы (гелий, неон) в 1.5 - 2 раза увеличивают жизнеспособность клеток линии НеЬа при медленном замораживании без криопротекторов. Синергия 3% глицерина и легких газов на 20-30% улучшает жизнеспособность более чувствительных к холоду клеток линии Ь929. Концентрации глицерина свыше 10% в значительной степени нивелируют положительные эффекты легких газов.

3. Предложена гипотеза, объясняющая причину сохранности клеточных культур в средах, обработанных легкими газами. При насыщении жидкости лёгким газом происходит вытеснение растворенных газов воздуха по градиенту концентраций и дегазация среды. При этом способность легких газов растворяться во льду приводит к тому, что в растворе снижается процесс образования скоплений микропузырьков, являющихся потенциальными участками образования трещин при замораживании, и, как следствие, не происходит разрушения биоматериала, связанного с растрескиванием массива льда.

Степень достоверности и апробация результатов. Апробация работы

проведена на совместном научном семинаре Института биофизики клетки и Института теоретической и экспериментальной биофизики. Все результаты, представленные в работе, статистически достоверны и воспроизводимы. Основные результаты диссертационного исследования представлены на конференциях: Актуальные вопросы биологической физики и химии БФФХ XVI международной научной конференции Актуальные вопросы биологической физики и химии БФФХ (Севастополь, 2021); Российская конференции с международным участием «Экспериментальная и компьютерная биомедицина»

памяти члена-корреспондента РАН Владимира Семёновича Мархасина (Екатеринбург, 2021)

Личный вклад автора. Личное участие автора в получении результатов состояло в подготовке обзора данных, опубликованных в научной литературе, и их детальном анализе, самостоятельном планировании и проведении экспериментов, обработке и интерпретации результатов, представлении и апробации результатов исследований на конференциях, подготовке научных публикаций по выполненной работе.

Публикации. По результатам диссертационного исследования опубликовано 6 печатных работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых научных изданиях, рекомендуемых ВАК, 1 патент и 2 публикации в материалах конференций.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ

Длительное хранение жизнеспособного биологического материала является необходимым элементом многих технологий в биологии, медицине, сельском хозяйстве. Наиболее длительные сроки хранения биоматериала обеспечивает криоконсервация. Криоконсервация - это процесс, описывающий глубокий анабиоз, сопровождающийся приостановкой обменных и биохимических реакций. Криоконсервация обеспечивает обратимое сохранение объекта на длительный период времени с возможностью дальнейшего перевода в исходное состояние [Цуцаева A.A., 1983; Белоус А. М. и др., 1987; Белоус A. M., 1994].

Сегодня в криобиологии имеется много нерешенных проблем. До сих пор не разработаны эффективные методы замораживания некоторых видов клеток, например, икры рыб и амфибий, а также крупных объектов: массивов тканей и целых органов. Также остается актуальным совершенствование методов криоконсервации клеток крови, стволовых клеток, половых клеток и эмбрионов животных и человека.

В криобиологической литературе крайне мало уделено внимания поведению растворенных газов при криоконсервации. Между тем, биологический материал всегда содержит некоторое количество растворенных газов, которые могут оказывать существенное влияние на физические и физиологические процессы, связанные с глубоким замораживанием. Увеличение либо снижение количества растворенных газов, а также изменение их состава с большой вероятностью будет воздействовать на выживаемость биологического материала.

1. 1 Газы, рассматриваемые в криобиологии

Газы, входящие в состав воздуха (О2, N2, CO2)

Невозможно обойти вниманием газы, входящие в состав воздуха, при работе с живыми объектами, так как они насыщены ими. Растворимость любых газов зависит не только от характеристики объекта, но и его температуры,

давления окружающей среды. При замораживании необходимо учитывать присутствие данных газов как в биологическом объекте, так и в криозащитных средах. Более внимательно рассмотрим газы, входящие в состав воздуха (таблица 1)

Таблица 1. Химический состав сухого воздуха в % [Химическая энциклопедия Т. 5,1998]

Компонент воздуха Объем в процентах Масса в процентах

Азот 78,084 75,5

Кислород 20,948 23,15

Аргон 0,934 1,292

Углекислый газ 0,0314 0,046

Неон 0,001818 0,0014

Метан 0,0002 0,000084

Гелий 0,000524 0,000073

Криптон 0,000114 0,003

Водород 0,00005 0,00008

Ксенон 0,000009 0,00004

Азот (К). В обычных условиях молекула азота двухатомная - К2. Электронная формула: 1822$2р3. Атомный вес - 14,008 а.е.м. Молекулярный вес -28,016 г/моль. В воздухе свободный азот (в виде молекулы N2) составляет 78,09%. (вся информация об упомянутых ниже газах взята из [Химическая энциклопедия Т. 5 , 1998]. Это бесцветный, без вкуса и запаха, нетоксичный, невоспламеняемый, невзрывоопасный и не поддерживающий горение газ. В газообразном состоянии при обычной температуре азот обладает высокой инертностью. Малорастворим в воде (2,3 мл/100 г при 0 °С, 1,5 мл/100 г при 20 °С, 1,1 мл/100 г при 40 °С, 0,5 мл/100 г при 80 °С), плотность 1,2506 кг/м3 (при нулевой температуре и давлении 101,3 кПа - н. у.). Температура кипения минус 196 °С, температура плавления -

210 °С. Между атомами в молекуле N2 реализуется тройная связь, вследствие этого молекула газа чрезвычайно прочна: энергия химической связи составляет 945 кДж/моль. Даже при 3000 °С степень распада молекулы азота на атомы достигает всего 0,1 %.

Кислород (О). В обычных условиях молекула кислорода двухатомная - О2 Электронная конфигурация: Ь22822р4. Атомный вес - 15,994 а.е.м. Молекулярный вес - 31,988 г/моль. [Химическая энциклопедия Т. 5 , 1998]. Объемное содержание кислорода в воздухе 20,95%. Это газ без цвета, вкуса и запаха. Слабо растворяется в воде (4,9 мл/100 г при 0 °С, 2,09 мл/100 г при 50 °С), плотность равна 1,43 кг/м3 (при н. у.). При температуре минус 183 °С превращается в жидкость голубого цвета, а при температуре минус 219 °С затвердевает.

Углекислый газ (диоксид углерода, СО2). Молекулярный вес - 44,01 г/моль. В воздухе содержится около 0,04% углекислого газа. Это газообразное вещество без цвета и запаха, не ядовито, тяжелее воздуха. Плотность в 1,524 раза больше плотности воздуха и равна 1,977 кг/м3 (при н. у.). [Химическая энциклопедия Т. 5 , 1998]. Углекислый газ широко распространен в природе. Растворяется в воде (растворимость в воде 1,48 кг/м3), образуя угольную кислоту Н2СО3. Термически устойчив. При сжатии и охлаждении легко переходит в жидкое и твердое состояния. Углекислый газ в твердом агрегатном состоянии носит название «сухой лед» и легко возгоняется при комнатной температуре.

Водород (Н) В обычных условиях молекула водорода двухатомная - Н2. Электронная формула: Ь1 . Атомный вес 1,008 а.е.м. Молекулярный вес 2,016 г/моль, самый лёгкий из элементов периодической таблицы. Его одноатомная форма - самое распространённое химическое вещество во Вселенной, составляющее примерно 75 % всей барионной массы, содержание его в земной коре 1 % (по массе). При обычных условиях водород - газ, состоящий из двухатомных молекул. Он не имеет ни цвета, ни запаха, мало растворим в воде (1,82 мл в 100 г воды при 20 С). При сильном сжатии и охлаждении переходит в жидкое состояние. Жидкий водород кипит при минус 253 °С. Твердый водород образуется при охлаждении до минус 259 °С. Благодаря маленькому радиусу

атомы и молекулы водорода могут проникать через резину, стекло и даже через металлы. Некоторые металлы, например, платина и палладий, способны растворять значительные количества газообразного водорода. Водород в 14,5 раз легче воздуха, 100 л водорода при 0 °С весят всего 9 г. [Химическая энциклопедия Т. 5 , 1998].

Легкие инертные газы (He, №)

Свойства гелия и неона находят применение в медицине. Наши работы, как будет показано ниже, помещают эти газы в раздел перспективных и для криобиологии.

Гелий (Не). Одноатомный инертный газ. Электронная конфигурация: Ь2. Атомная масса - 4,003 а.е.м. Объемное содержание гелия в воздухе 0,00052%. Гелий значительно легче воздуха, плотность 0,1785 кг/м3 при н.у. Температура кипения минус 268,9 °С. Бесцветный, без запаха, неядовитый, негорючий и невзрывоопасный газ, хорошо диффундирует через твердые тела. [Химическая энциклопедия Т. 5 , 1998], плохо растворим в воде (0,83 мл в 100 г воды при 20 С). Дисперсионные силы межмолекулярного взаимодействия у гелия рекордно малы.

Неон (№). Одноатомный инертный газ. Электронная конфигурация: 182282 2р6. Атомная масса - 20,183 а.е.м. Содержание неона в атмосфере составляет 0,0018% по объему или 0,0012% по весу. Плотность - 0,4835 кг/м3. В жидком виде неон - после гелия и водорода - является наиболее низкокипящей (минус 246°С) и трудно замерзающей (минус 249°С) жидкостью. Неон - бесцветный, без запаха и вкуса, не токсичный, неактивный газ. Не вступает в реакции с другими химическими элементами в обычных условиях. Трудно поддается сжижению и адсорбции, как и гелий. Неону присущи высокая электрическая проводимость, яркая эмиссия света при пропускании электрических разрядов. Неон образует наиболее холодную после гелия и водорода жидкость, но это уже обычная жидкость без специфических для сверхтекучего гелия квантовомеханических эффектов. Радиус атома неона (1,62 А) достаточно мал, чтобы он мог в тысячи раз быстрее большинства газов диффундировать через тонкие перегородки из

тефлона, кварцевого или боросиликатного стекла. Если принять проницаемость гелия за 100%, то проницаемость неона составит 2% [Химическая энциклопедия Т. 5 , 1998]

Клатратообразующие газы

Инертные клатратообразующие газы (Аг, Кг, Хе).

В рамках поиска новых направлений для дальнейшего развития криобиологии в конце 60-х годов возникла идея применения газовых гидратов для криоконсервации биообъектов. В 1969-м году Р. Прегода теоретически обосновал возможность использования инертных газов в качестве криопротекторов [РгеИоёа К 1970]. Благодаря размеру молекул, инертные газы свободно проникают через мембраны клеток и при этом не подвергаются какой-либо биотрансформации, поскольку не вступают в химические реакции. Идея газогидратного подхода к криоконсервации состоит в том, чтобы при замораживании биоматериала заместить процесс образования кристаллов льда на процесс образования кристаллов газовых гидратов. Таким образом, теоретически решаются основные проблемы криоконсервации крупных объектов:

1. вместо кристаллов льда формируются кристаллы газовых гидратов;

2. инертные газы заполняют весь объем органа;

3. инертные газы не токсичны.

При этом в качестве перспективного гидратообразующего газа рассматривается ксенон, поскольку в ряду Аг-Кг-Хе газогидраты ксенона отличаются наибольшей стабильностью и образуются при околонулевой температуре и давлении порядка 1,5 атмосфер. Также для ксенона показан опыт медицинского применения; в России активно развивается техника ксенонового наркоза. Чтобы при 0°С получить гидрат криптона, необходимо приложить давление - 14,5 атм., аргона до 150 атм. Условия образования гидрата аргона могут реализовываться при низкой температуре. Неон и гелий образуют гидраты при очень высоких давлениях, мало совместимых с выживанием биологических объектов.

Однако газогидратная криоконсервация как подход до сих пор практически не исследована. Количество публикаций, посвященных криоконсервации с использованием газов, способных к образованию стабильных газогидратов, ограничено.

Аргон (Аг). Одноатомный инертный газ. Электронная конфигурация: 1б2 2б2 2р6 3б2 3р6. Атомная масса - 39,948. а.е.м. Плотность - 1,78 кг/м3 при нулевой температуре и нормальном давлении. Температура плавления составляет минус 89,35°С. Температура кипения - минус 185,85 °С. В 100 мл воды при 20 °С растворяется около 3,3 мл аргона (в некоторых органических растворителях аргон растворяется значительно лучше, чем в воде). С большинством элементов аргон не образует химических соединений, кроме некоторых гидридов. При обычных условиях - бесцветный, негорючий, неядовитый газ, без запаха и вкуса [Химическая энциклопедия Т. 5 , 1998].

Криптон (Кг). Одноатомный инертный газ. Электронная конфигурация: Ь22822рб3823рб3^04824рб. Атомная масса - 83,86 а. е. м. [Химическая энциклопедия Т. 5 , 1998]. Содержание криптона в земной коре составляет 1,1410-4 % Плотность (при н. у.) - 3,745 кг/м3 (в 3 раза тяжелее воздуха). Температура плавления составляет минус 111,85 °С. Температура кипения - минус 153 °С, а уже при минус 156,6 °С криптон отвердевает. Растворимость в воде - 0,11 л/кг (0 °С), 0,054 л/кг (25 °С). Криптон, одноатомный газ, бесцветный, без запаха и вкуса, не токсичен, химически инертен, неактивен - не воспламеняется и не поддерживает горение. Криптон не вступает в реакции с химическими элементами в обычных условиях. Криптон - первый из тяжелых благородных газов. Точки кипения криптона и гелия разнятся на 116,1 °С. Сильно отличаются и другие важнейшие характеристики. Объяснить это логичнее всего характером сил межмолекулярного взаимодействия: с увеличением молекулярного веса благородного газа резко вырастает сила взаимопритяжения молекул.

Ксенон (Хе). Одноатомный инертный газ. Электронная конфигурация: 1822822рб3823рб3с1104824рб4^05825рб. Атомная масса - 131,293 а.е.м. Содержание ксенона в земной коре составляет 2,0х10-9 % [Химическая энциклопедия Т. 5 ,

1998]. Плотность (при н. у.) 5,894 кг/м3 (что в 4 раза выше, чем у воздуха). Температура плавления составляет минус 111,85 °С. Температура кипения минус 107,05 °С. Растворимость в воде (0,141 мл/100 г при 0 °С, 0,07 мл/100 г при 25 °С, 0,049 мл/100 г при 50 °С, 0,042 мл/100 г при 80°С). У ксенона диамагнитная восприимчивость в 22 раза больше, чем у гелия, так как она пропорциональна числу электронов в атоме и квадратам их расстояний от ядра. Ксенон, как и все инертные газы VIII группы таблицы Менделеева, состоит из одноатомных молекул, не имеет ни запаха, ни цвета, не горит и не поддерживает горение, не взрывоопасен, слабо растворяется в воде. Ксенон химически индифферентен - не вступает ни в какие химические реакции. Физические свойства инертных газов сведены в таблицу 2.

Таблица 2. Физические свойства инертных газов [Физическая энциклопедия. 1988].

Параметры Не N0 Аг Кг Хе Яд

Атомный номер 2 10 18 36 54 86

Атомная масса (вес) 4,003 20,183 39,944 83,80 131,30 22

Радиус атома, А 1,25 1,62 1,92 1,97 2,18 2,2

Плотность, г/л 0,1785 0,8990 1,7837 3,736 5,851 9,96

Критическая температура, °С -267,9 -228,7 -120 -62,5 +16,6 +104,5

Критическое давление, атм 2,26 26,6 50 54,3 58,2 2,4

Критическая плотность, г/см3 0,069 0,4 0,4 0,7 0,9 1,2

Температура кипения, °С -268,98 -246,03 -185,87 -152,9 -107,1 -62

Температура плавления, °С -272,1 -248,6 -189,4 -156,6 -111,5 -71

Теплота испарения, ккал/моль 0,022 0,44 1,50 2,31 3,27 4,3

Первые потенциалы ионизации, эВ 24,58 21,56 15,76 14,00 12,13 10,75

Другие клатратообразующие газы

Помимо упомянутых инертных газов существует достаточное количество гидрофобных газов и легколетучих органических жидкостей - СН4, С2Н4, С2Н6, С3Н8, изо-С4Н10, С12, СБ2, галогенопроизводные углеводородов С1-С4, элегаз, а также некоторых гидрофильных соединений - СО2, Б02, окись этилена, тетрагидрофуран, ацетон и т. п., способных образовывать клатратные соединения.

Среди этих газов интерес для криобиологии представляет элегаз, поскольку практически не вступает в химические реакции.

Гексафторид серы или элегаз (SFб). Молекулярный вес - 146,06 г/моль

— один из самых тяжелых известных газов. Его плотность при 20°С и при давлении, равном одной атмосфере равна 6,139 кг/м3, почти в пять раз выше, чем у воздуха. Температура плавления при 0,227 МПа минус 50,8°С. Растворимость в воде при 20 ° С составляет 0,56 мл в 100 г воды. Он является химически инертным газом, бесцветным и не имеет запаха, не воспламеняется, не растворяется в воде, нетоксичен и может находиться в жидком состоянии только при повышенном давлении. Гексафторид серы классифицируется как слабый анестетик. Он образует устойчивые газогидраты в условиях, близких к ксенону. При этом в отличие от ксенона элегаз не имеет анестезирующих свойств. Гексафторид серы можно рассматривать как один из возможных кандидатов на применение в клатратной криоконсервации.

1. 2 Теория гидратообразования

Аг, Кг, Хе при низкой температуре и повышенном давлении образуют гидраты, представляющие собой кристаллические структуры, напоминающие лед, но по своим физическим свойствам значительно отличающиеся от него. Гидраты

- это такая надмолекулярная организация материи, где при образовании соединений из компонентов играет роль не химическая природа соединений, а пространственная комплементарность (соответствие формы и размера). Газовые

гидраты состоят из каркаса молекул воды (молекулы «хозяина») в полостях которых находятся молекулы газа («гостевые» молекулы). В структурах газовых гидратов молекулы воды образуют четыре водородных связи, направленных из центра к вершинам искаженного тетраэдра [Petrenko V. F. et al., 1999].

Соединяясь по вершинам, такие водные тетраэдры могут образовывать потенциально бесконечное количество трехмерных каркасов, значительную часть которых можно представить, как объединение срощенных по граням полиэдрических полостей (полости с 12 и менее гранями принято называть малыми (D и D'), а остальные - большими (E, H, P, T) (таблица 3, рисунок 1). В чистом виде такие каркасы лабильны, а включение «гостей» стабилизирует их. D-полости наиболее распространены, поскольку их отличает наименьшая напряженность: углы между водородными связями в таких фрагментах составляют 108°, что всего на 1.5° отличается от тетраэдрического угла 109.5°, характерного для льда, и на 3.5° от угла 104.5°, для молекул воды в свободном состоянии [. Davidson D. W, 1973; Dyadin Y. A. et al., 1987; Jeffrey G. A. et al., 1984; Jeffrey G. A. et al., 1996]. Приведенные выше величины углов реализуются в каркасах наиболее распространенных: льда типа Ih для чистой воды и каркасов газогидратов КС-I и КС-II (таблица 3) (существует ещё и структура ГС-III, но она редко встречаема) [Стопорёв А.С., 2016]. Малые D-полости структур гидратов при невысоких давлениях, как правило, заполнены только частично (в существующем при атмосферном давлении и околонулевой температуре гидрате ксенона степень заполнения малых полостей составляет 71.6 % [Davidson D. W, 1986], либо остаются вакантными в случае, когда размер молекулы гостя больше размера малой полости. Степень заполнения больших полостей должна быть равна или, по крайней мере, близка к 100% [Дядин Ю. А. и др., 1991]. В силу указанных причин коэффициенты упаковки образующихся при низких давлениях газовых гидратов, как правило, существенно ниже, чем для типичных молекулярных кристаллов. Так, коэффициенты упаковки гидратов гексафторида серы, метана, ксенона и аргона, приведенные в работе [Истомин В. А. и др., и др., 1992], равны, соответственно 0.603, 0.628, 0.695 и 0.630, тогда как для типичных

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Уграицкая Светлана Владимировна, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. А. Ю. Манаков. Газовые гидраты при высоких давлениях. // Рос. хим. журн. - 2003. - Т. 47, № 3. - С. 28-42.

2. Абезгауз Н. Н. Замораживание белых клеток периферической крови для длительного хранения при ультранизких температурах. // Проблемы гематологии и переливания крови. - 1966. - №9. - С. 24-30.

3. Абросимов В. К. Растворимость и термодинамика растворения гелия в воде при парциальных давлениях газа 0.1-100 МПа в интервале температур 278353 К. // Журнал неорганической химии. - 2013. - Т. 58, № 7. - С. 912-916.

4. Аванов А. Л. Биологические антифризы и механизм их активности. // Молекулярная биология. - 1990. - Т. 24, № 3. - С. 581-597.

5. Бабийчук Л. А. Новые подходы к криоконсервированию и оценки жизнеспособности ядросодержащих клеток кордовой крови. // Украинский химиотерапевтический журнал. - 2008. - №1-2 (22). - С. 85-87.

6. Бари С. А. Зарождение и рост пузырьков на границе раздела лед-вода. // 3 01асю1. - 1974. - V. 13. - Р. 489-520.

7. Белоус А. М. Криобиология. - Киев: Наукова Думка, 1994. - 430 с.

8. Белоус А. М. Биохимия мембран. Замораживание и криопротекция.-Москва: Высшая школа, 1987. - 80 с.

9. Беннетт П. Б. Медицинские проблемы подводных погружений: пер. с англ.- М.: Медицина, 1988. - 672 с.

10. Биоорганическая химия. Химические подходы к механизму действия ферментов / Г. Дюга, К. Пенни, пер. с английского - М.: Мир, 1983. - 512 с., ил.

11. Божко Ю. Ю. Моделирование структуры, состава и структурных переходов гидратов гелия и неона, а также клатратных гидратов смеси неона и метана, гелия и метана: дисс. ...канд. физ.-мат. наук: - 02.00.04 - Новосибирск, 2014 - 118 с.

12. Буслаева М. Н. Термодинамическое исследование стабилизации структуры воды неэлектролитами. // Ж. структурной химии. - 1963. - Т.4. - С.

502-507.

13. Виноград-Финкель Ф. Р. Криоконсервирование эритроцитов и их функциональная полноценность. // Проблемы гематологии и переливания крови. -1973. - Т. 18, № 9. - С. 3-10.

14. Волошин В. П. Долговременные корреляции в диффузионном движении молекул воды и атомов благородных газов в растворах гелия и аргона. // Укр. физ. журн. - 2015. - Т. 60, № 8. - С. 757-763.

15. Гулевский А. К. Антифризные белки. Сообщение и регуляция, происхождение, стабильность и применение. // Проблемы криобиологии. - 2009. -Т. 19, № 3. - С. 273-282.

16. Гулевский А. К. Молекулярные шапероны и холодовая адаптация организмов. // Проблемы криобиологии. - 2003. - №1. - С. 26-37.

17. Довгуша В. В. Дискуссионные вопросы действия индифферентных газов на организм. - СПб. ООО «Пресс-Сервис», 2011. - 116 с.

18. Довгуша В. В. Физические механизмы физиологического и биологического действия инертных газов на организм. - СПб.: ООО « Пресс-Севис», 2012. - 230 с.

19. Довгуша В. В. Водогазовые структуры в природе, биологии и медицине. - Санкт-Петербург: Пресс-Сервис, 2011. - 199 с.

20. Дядин Ю. А. Клатратообразование в системахвода — благородный газ (водород) при высоких давлениях // Ж. структ. химии. - 1999. - Т. 40, № 5. -С. 974-980.

21. Дядин Ю. А. Теоретические модели клатратообразования. -Новосибирск: Наука, 1991. - 128 с.

22. Желиговская Е. А. Кристаллические водные льды. // Успехи химии. -2006. - Т. 75, № 1. - С. 64-85.

23. Жмакин А. И. Физические основы криобиологии. // Успехи физических наук.- 2008.- Т. 178.- № 3.- С. 243-266.

24. Инербаев Т. М. Динамические, термодинамические и механические свойства газовых гидратов структуры I и II. // Рос. хим. ж. - 2003. - Т. XLVII, №3.

- С. 19-27.

25. Истомин В. А. Газовые гидраты в природных условиях. М: Недра, 1992. - 236 с.

26. Истомин В. А., Якушев В. С. Газовые гидраты в природных условиях.- М: Недра, 1992. - C. 236.

27. Кабачный В. И. Производные гетерозидов - эффективные добавки к криозащитным средам. // Проблемы криобиологии. - 2004. - № 2. - С. 28-35.

28. Китайгородский А. И. Молекулярные кристаллы. - M.: Наука, 1971. -

424 с.

29. Кокин Н. С. Растворимость и термохимия ратворения ксенона и кислорода в воде и органических растворителях: дис. ... канд.хим. наук. 02.00.01.

- Иваново, 1984. - 118 с.

30. Корниенко Е. М. Перспективность использования комбинированных криопротекторов при замораживании компонентов крови одноступенчатым способом при температуре -196 °С. // Проблемы криобиологии. - 2008. - Т. 18, № 2. - С.248.

31. Косяков В. И. Моделирование фазовых равновесий в системах гелий-вода и неон-вода. // ЖФХ. - 2002. - Т.76, № 5. - С.815-819.

32. Крестов А. Г. Термодинамическая характеристика связанных с гидратацией ионов структурных изменений воды при различных температурах. // Журн. структур. химии. - 1964. - Т. 5. - С. 510-516.

33. Крестов Г. А. Растворимость и термодинамика растворения аргона в водных растворах ацетамида. // Известия ВУЗов, Химия и химическая технология.

- 1980. - Т. 23, № 9. - С. 1101-1104

34. Крестов Г. А. Современные проблемы химии растворов. - М.: Наука, 1986. - 264 с.

35. Крестов Г. А. Термодинамика растворения и переноса ксенона в системе вода-этиловый спирт. // Известия ВУЗов, Химия и химическая технология. - 1981. - Т. 24, № 8. - С. 1047-1048.

36. Крестов Г. А.Термодинамика растворения аргона в водных растворах

метилового спирта. // Известия ВУЗов, Химия и химическая технология. - 1982. -Т. 25, № 9. - С. 1081-1084

37. Криоконсервирование клеточных суспензий. Под ред. A.A. Цуцаевой. - Киев: Наукова Думка, 1983. - 240 с.

38. Куссмауль А. Р. Биологическое действие криптона на животных и человека в условиях повышенного давления: автореф. дис...канд. мед. наук. 14.00.32. - М., 2007. - 22 стр.

39. Кэрролл Дж. Гидраты природного газа: справ. пособие. Пер. с англ. -М.: Премиум Инжиниринг, 2007. - 289 с.

40. Луговой В. И. Энзиматическая диагностика криоповреждений клеток лейкоконцентрата. // Материалы I Всесоюзного симпозиума «Консервирование крови и ее компонентов». - 27-29 сентября, Москва. 1981. - С. 64-65.

41. Макеев О. Г. Применение клатратобразующего газа для криоконсервирования мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток // Вестник уральской медицинской академической науки, 2010. - № 1. - С. 52-54.

42. Макогон Ю. Ф. Влияние избыточного давления на стабильность гидрата метана. // Газовая промышленность. - 1983. - №4. - С. 37-40.

43. Маленков Г. Г. Гелий, неон и вода. // Журнал струкрурной химии. -2017. - Т. 58, № 1. - С. 166-173.

44. Машковский М. Д. Лекарственные средства: В 2 т. Т. 2. Изд. 14-е, перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2002. - 608 с.

45. Мейер Г.: К теории алкогольной анестезии. Первое общение. Какие свойства анестетиков определяют их наркотическое действие? // Архив экспериментальной патологии и фармакологии. - 1899. - V. 42. - P. 109-118.

46. Мельникова В. Н. Усовершенствование методов консервирования эритроцитов при умеренно-низких и ультранизких температурах. // Мед. технологии. - 1995. - № 5. - С. 23-26.

47. Намиот А. Ю. Клатраты газов во льду. // ЖСХ. - 1965. - Т. 6. - С. 911912.

48. Намиот А. Ю. Растворимость газов в воде под давлением. - М.:

Гостоптехиздат, 1963. - 147 с.

49. Намиот А. Ю. Растворимость газов в воде: справ. пособие - М.:Недра, 1991. - 168 с.

50. Намиот А. Ю. Растворимость газов во льду. // Доклады Академии наук. - 1970. - № 190. - C. 604-606.

51. Патент РФ 2433173 Российская Федерация МПК A01N 1/02, МПК C12N 5/00 Способ криоконсервации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток; заявитель и патентообладатель УрГСХА - 2010122298/10 -заявл. 01.06.2010; опубл. 10.11. 2011, Бюл. №31.

52. Пичугин Ю. И. Итоги и перспективы поиска новых эндоцеллюлярных криопротекторов. // Проблемы криобиологии. - 1993. - №2. - С. 3-10.

53. Пономарев А. И. Исследование консервирующих свойств клатратов инертного газа ксенона на модели краткосрочного хранения кожных лоскутов // Материалы III межрегиональной научно-практической конференции «Клеточные технологии - практическому здравоохранению». 16 октября 2014 г. -Екатеринбург, 2014. - С. 78-83.

54. Пономарев А. И. Применение клатратов ксенона для консервации кожи человека. // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2014. -№ 5. - С. 98-101.

55. Потапов А. В. Влияние жирности и температуры жидкости на растворимость криптона. Результаты экспериментального исследования. // Химическое и нефтегазовое машиностроение. - 2010. - № 8. - С. 27-28.

56. Потапов А. В. Исследование абсорбции ксенона водно-эмульсионными растворами в зависимости от их жирности. // Вестник МГТУ им. Н.Э.Баумана. Машиностроение. - 2009. - №3. - С. 96-100.

57. Потапов А. В. Исследование равновесной абсорбции ксенона и криптона водно-эмульсионными растворами в зависимости от жирности и температуры растворителя: дисс. ... канд. техн. наук 05.04.03 - Москва, 2011. -153 с.

58. Пульвер А. Ю. Криоконсервация клеточных культур млекопитающих

с использованием ксенона. // Теоретические и практические аспекты современной криобиологии. Материалы Международной заочной научно-практической конференции (24 марта 2014 г. Россия - Украина) Сыктывкар, 2014. - С. 226-232.

59. Растворимость некоторых газов в воде (аргона, метана, этилена, этанола, углекислого газа, диоксида углерода, хлорина, водорода, сероводорода, гелия, азота, аммиака, кислорода, диоксида серы // Технические таблицы: [сайт] -2021. - https://tehtab.ru/Guide/GuidePhysics/Solvability/SolvabilityOfSomeGases/ (дата обращения - 23.08.2021).

60. Робертсон Дж. Д. Мембранная структура. // Журнал клеточной биологии. -1981. - V. 91. -Р. 189-204.

61. Сведенцов Е. П. Использование холодового анабиоза (-40°С) для консервирования гранулоцитов. // Пермский медицинский журнал. - 2004. - Т. 21, №3. - С. 82-85.

62. Сведенцов Е. П. К классификации разных уровней отрицательных температур, используемых для консервирования биообъектов. // Материалы научной сессии (30-31 марта 2004 г.). Киров: Изд-во Кировского областного Бюро медицинской статистики и информатики. - 2004. - С. 117-120.

63. Сведенцов Е. П. Консервирование компонентов крови при отрицательных температурах. // Глава в кн.: Руководство по трансфузионной медицине. Киров. - 1999. - С. 263-297.

64. Сведенцов Е. П. Консервирование лейкоцитов замораживанием при низких температурах (-60°С -80° С). // Актуальные проблемы гематологии и трансфузиологии. С.Петербург. - 2000. - С. 261-262.

65. Сведенцов Е. П. Криозащитное действие лемнана, пектина ряски малой. // Доклады академии наук. - 2008. - Т.421, № 4. - С. 559-561.

66. Сведенцов Е. П. Криоконсерванты для живых клеток. - Сыктывкар. Коми научный центр УрО РАН, 2010. - 80 с.

67. Сведенцов Е. П. Новый ограждающий раствор для низкотемпературного (-80°С -90°С) консервирования костного мозга. // Вопросы трансфузиологии и клинической медицины. Материалы научно-практической

конференции. Киров. - 1995. - C. 1-12.

68. Сведенцов Е. П. Отечественные криоконсерванты для костного мозга. // Вестник службы крови России. - 1997. - № 1. -С. 26-27.

69. Сведенцов Е. П. Переливание концентрата лейкоцитов. Глава в кн.: Руководство по трансфузионной медицине. Киров. -1999 - С. 421-426.

70. Сведенцов Е. П. Получение и криоконсервирование костного мозга для клинического применения: автореферат дисс.... док. мед. наук. - Л. - 1987. -45 с.

71. Сведенцов Е. П. Фагоцитарная активность нейтрофилов и лимфоцитов после различных сроков хранения в состоянии холодового анабиоза (-40°С). // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2004. - Т. 138, № 10. - С. 400-402.

72. Старикова Е. Г. Молекулярные механизмы действия газовых трансмиттеров при дизрегуляции апоптоза и пролиферации клеток линии Jurkat дисс. ...док-ра мед. наук 14.03.03, 03.03.04. - Томск, 2014. - 237 с.

73. Стопорёв А.С. Газовые гидраты в нефтяных суспензиях: дис. ... кандидата химических наук: 02.00. Ин-т неорган. химии им. А.В. Николаева СО РАН. - Новосибирск, 2016. - 23 с.

74. Сукач А. Н. Перспективы использования наночастиц ферромагнетиков для криоконсервирования клеток. // Проблемы криобиологии. -2008. - Т.18, №4. - С. 401-403.

75. Тасаки И. Нервные импульсы в отдельных волокнах слухового нерва морской свинки. // Журнал нейрофизиологии. - 1954. - V. 17, № 2. - P. 97-122.

76. Тельпухов В. И. Клатратная криоконсервация. // Вопросы реконструктивной и пластической хирургии. - 2012. - Т. 15, № 3. - С. 77-80.

77. Терентьева Э. И. Электронная микроскопия лейкоцитов в процессе их хранения. // Проблемы гематологии и переливания крови. - 1966. - №1. - С. 2834.

78. Термодинамические свойства полиморфных модификаций кристаллических водных льдов высокого давления: бакалаврская работа. -

Москва, 2014.

79. Тытика Д. Л. Эффект рассеяния ультрафиолетового излучения деионизированной водой. // Журнал физической химии. - 2019. - T. 93, № 12. - C. 1865-1869

80. Федотенков А. Г. Консервирование косного мозга для клинических целей: автореф. дис....докт. мед. наук. - Москва. -1967. - 43 с.

81. Физическая энциклопедия: [в 5 т.]. Гл. ред. А. М. Прохоров; Редкол.: Д. М. Алексеев [и др.]. - М.: Сов. энцикл. : Большая Рос. энцикл., 1988. - C. 27.

82. Франке Ф. Вода и водные растворы при температурах ниже 0°С. Под ред. Ф. Франке. - Киев: Наукова Думка, 1985. - 387 с.

83. Химическая энциклопедия: в 5 т. Гл. ред. Н. С. Зефиров. - М. : Большая российская энциклопедия, 1998. - Т. 5: Три-Ятр. - 783 с.

84. Хлусов И. А. Клеточные эффекты ксенона in vitro в гипотермических условиях. // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2007. - № 2. - С.74-77.

85. Худяков А. Н. Использование инертных газов для консервации клеток и тканей // Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины. -2015. - № 1. - C. 137-140.

86. Чечеткин A. B. Низкотемпературные технологии хранения клеток крови и костного мозга в современной трансфузиологии. // Здравоохранение и медтехника. - 2005. - №4. - С. 16-19.

87. Чистяков Ю. В. Исследование структурных особенностей смесей вода-пропиленгликоль методом растворимости аргона. // Ж. структ. Химии. -1980. - Т. 21, № 5. - С. 85-90.

88. Чистяков Ю. В. Исследование структурных особенностей смесей вода-пропиленгликоль методом растворимости аргона. // Ж. структ. Химии. -1980. - Т. 21, № 5. - С. 85-90.

89. Чуйко В. А. Механизмы криозащитной эффективности и фармакологические свойства ДМСО. // Криобиология. - 1989. - № 1. - С. 310.

90. Чухарева Н. В. Определение условий гидратообразования при

транспорте природного газа в заданных технологических условиях эксплуатации промысловых трубопроводов: Методические указания. - Издательство НИ ТПУ, 2010. - 30 с.

91. Шишова Н. В. Перспективы использования газов и газовых гидратов в криоконсервации. // Биофизика. - 2015. - T. 60, вып. 5. - C. 947-974.

92. Щербаков П. В. Бессмертие под газом. // Химия и жизнь. - 2006. - № 8. - С. 34-39.

93. Amidi F. The role of antioxidants in sperm freezing: a review. // Cell Tissue Bank. -2016. - V. 17, № 4. - P. 745-756.

94. Amir G. Subzero nonfreezing ctyopresevation of rat hearst using antifreeze protein I and antifreerze protein III. // Cryobiology. - 2004. - V. 48, № 3. - P. 273-282.

95. Arnold G. P. Neutron Diffraction Study of Ice Polymorphs. III. Ice Ic. // J. Chem. Phys. - 1968. - V. 49, № 10. - P. 4365-4369.

96. Atsunori N. Therapeutic Antioxidant Medical Gas. // Clin Biochemistry and Nutrition. - 2009. - V.44. - P. 1-13.

97. Bari S. A. Nucleation and growth of bubbles at an ice-water interface. // J. Glaciol. - 1974. - V. 13. - P. 489-520.

98. Barrett J. Thermal hysteresis proteins. // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 2001. - V. 33, Iss. 2. - P. 105-117.

99. Bartlett F. D. Effect of diluent composition on survival and fertility of bovine spermatozoa stored in carbonated diluents. // J. Dairy Sci. -1962. - V. 45. - P. 360-367.

100. Battino R. The solubilities of seven gases in olive oil with references to theories of transport through the cell membrane. // Journal of the American Oil Chemists' Society. - 1968. - V. 45, № 12. - P. 830-833.

101. Baust J. Cell viability improves following inhibition of cryopreservation-induced apoptosis. \ // In Vitro Dev. Biol. Animal. - 2000. - V. 36, № 4. - P. 262-270.

102. Belosludov V. Prediction of structure, composition and phase behavior of helium hydrates. // Proceedings of the 7th International Conference on Gas Hydrates. Edinburg, UK July 17-21, 2011.

103. Belosludov V. R. Hydroquinone Clathrates and the Theory of Clathrate Formation. // J. Inclusion Phenom. Mol. Recognit. Chem. - 1985. - V. 3. - P. 243-260

104. Bernal J. D. A theory of water and ionic solutions, with particular reference to hydrogen and hydroxyl ions. // J. Chem. Phys. - 1933. - V. 1, № 8. - P. 515-548.

105. Biological evaluation of medical devices. - Part 5: Tests for cytotoxicity: in vitro methods (1999). - https://www.iso.org/standard/36406.html

106. Booke R. Biophysical changes induced by xenon on phospholipid bilayers. // Biochim. Biophys. Acta. - 2013. -V. 1828. - P. 1347-1356.

107. Borderie V. Cryopreservation and culture of human corneal keratocytes. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 1998. - V. 39, № 8. - P. 1511-1519.

108. Carrol J. Normal fertilization and development of frozen-thawed mouse oocytes: protective action of certain macromolecules. // Biol. Reprod. - 1993. - V. 48. -P. 606-612.

109. Chakrabartii A. Structure-function relationship in a winter flounder antifreeze polypeptide. II. Alteration of the component growth rates of ice by synthetic antifreeze polypeptides. // J. Biol.Chem. - 1989. - V. 264, № 19. - P. 313-316.

110. Chaplin M. Water Structure and Behavior. / Режим доступа: http://www.lsbu.ac.uk/water/ South Bank University: London. - UK - accessed 20.08 2021.

111. Chetverikova E. P. DNA damage by active oxygen species in cryopreservation and the antioxydative properties of cryoprotectants. // Biofizika. -2012. -V. 57, № 2. - P. 368-376.

112. Crockett E. L. Cholesterol function in plasma membranes from ectotherms: membrane-specific roles in adaptation to temperature // Am Zool. - 1998. - V. 38. - P. 291-304.

113. Crowley J. R. The recovery, structure and function of hyman blood leukocytes after freeze- preservation. // Cryobiology. - 1974. -V. 11, № 3. - P. 395409.

114. Dalvit G. C. Effect of alpha tocopherol and ascorbic acid on bovine sperm in vitro fertilization. // Theriogenology. - 1988. - V. 49, № 3. - P. 619-627.

115. David R. Lide. CRC Handbook of Chemistry and Physics. - 1997. -2496 p.

116. Davidson D. W. Water. A comprehensive treaties. V.2. Water crystalline hydrates. Aqueous solutions of simple non-electrolites. Eds. F. Franks. - N.-Y.: Plenum Press, 1973. - P. 115-234.

117. Davidson D. W. Xenon-129 NMR and the thermodynamic parameters of xenon. Hydrate // J. Phys. Chem. - 1986. - V. 90, № 24. - P. 6549-6552.

118. de la Cruz Torres B. Analysis of heart rate variability at rest and during aerobic exercise. // British Journal of Sports Medicine. - 2008. - V. 42, № 9. - P. 715720.

119. Derwall M. Xenon: recent developments and future perspectives // Minerva Anestesiol. - 2009. - V. 75. -P. 37-45

120. Djurassi J. Demithylacetamide, a New Cryopotective Agent for Platelets. // Transfusion. - 1971. - V. 11, № 2. - P.72-76.

121. Drobnis E. Z. Cold shock damage is due to lipid phase transitions in cell membranes: a demonstration using sperm as a model. // J Exp Zool. - 1993. - V. 265. -P. 432-437.

122. Duman J. G. Antifreeze and ice nucleator proteins in terrestrial arthropods. // Annu. Rev. Physiol. - 2001. - V. 63. - P. 327-357.

123. Durante W. Carbon monoxide and vascular cell function. // Int J Mol Med. - 1998. - V. 2. - P. 255-262.

124. Dyadin Y. A. Clathrate Polyhydrates of Peralkylonium Salts and Their Analogs. // Russ. J. Struct. Chem. - 1987. - V. 28, № 3. - P. 394-432.

125. Dyadin Yu. A. The solubihty of hehum and hydrogen an ice Ih at high pressures. // PoUsh J. Chem. - 1994. - V. 68. - P. 343-348.

126. Dyadin Yu. A. Clathrate hydrates of hydrogen and neon. // Mendeleev Coramun. - 1999. - P. 209-210.

127. Elliotta G. D. Cryoprotectants: A review of the actions and applications of cryoprotective solutes that modulate cell recovery from ultra-low temperatures. // Cryobiology. -2017. - № 76. - P.74-91.

128. Fortes A. D. The incompressibility and thermal expansivity of D2O ice II

determined by powder neutron diffraction. // J. Appl. Cryst. - 2005. - V. 38. - P. 612618.

129. Freshney R. I. Culture of Animal Cells, a Manual of Basic Technique. / R. I. Freshney. 5th Edition. - John Wiley & Sons, Hoboken. - 2005. - 410 p.

130. Gorr T. A. Sensing and responding to hypoxia via HIF in model invertebrates. // J. Insect Physiol. - 2006. - V. 52. - P. 349-364.

131. Goyal P. Upregulation of NAD(P)H oxidase 1 in hypoxia activates hypoxiainducible actor 1 via increase in reactive oxygen species // Free Radic Biol Med. - 2004. - V. 36. - P. 1279-1288.

132. Graumann P. L. A superfamily of proteins that contain the cold-shock domain. // Trends Biochem. Sci. - 1998. - V. 23. - P. 286-290.

133. Gurtuvenko A. A. Modulating the structure and properties of cell membranes: the molecular mechanism of action of dimethylsulfoxide. // J. Phys. Chem. B. - 2007. -V. 6, № 11. - P. 453-460.

134. H. R. Müller. On the structure of gas hydrate // J. Chem. Phys. - 1951. -19. - P. 1319-1320.

135. Hakim L. Novel neon-hydrate of cubic ice structure. // Physica A. - 2010. -№ 389. - P. 1834-1838.

136. Hakim L. Phase Behavior of Different Forms of Ice Filled with Hydrogen Molecules. // Phys. Rev. Lett. - 2010. -V. 104. - P. 115-121.

137. Handa Y. Effect of hydrostatic pressure and salinity on the stability of gas hydrates II // J. Phys. Chem. - 1990. - V.94. - P.2652-2657.

138. Hatayama N. Different effects of partial pressure in a high-pressure gaseous mixture of carbon monoxide and oxygen for rat heart preservation. // Nature. -2019. - P. 74-80.

139. Huo Z. Methane hydrate nonstoichiometry and phase diagram II. // AIChE J. - 2003. - V. 49. - P. 1300-1306.

140. Ikeda A. Liver graft exposure to carbon monoxide during cold storage protects sinusoidal endothelial cells and ameliorates reperfusion injury in rats. // Liver Transpl. - 2009. V. 15, № 11. - P. 1458-1468.

141. Irani Y. Noble gas (argon and xenon)-saturated cold storage solutions reduce ischemia-reperfusion injury in a rat model of renal transplantation. // Nephron Extra. -2011. -V. 1, № 1. - P.272-282.

142. Jawad N. Neuroprotection (and lack of neuroprotection) afforded by a series of noble gases in an in vitro model of neuronal injury. // Neurosci Lett. - 2009. -V. 460. -P. 232-236.

143. Jawad N. Neuroprotection (and lack of neuroprotection) afforded by a series of noble gases in an in vitro model of neuronal injury. // Neurosci Lett. - 2009. -V. 460. - P. 232-236.

144. Jeffrey G. A. Comprehensive Supramolecular Chemistry - Oxford: Elsevier Science Ltd., 1996. - P. 757-789.

145. Jeffrey G. A. Hydrate inclusion compounds. - London: Academic Press, 1984. - P. 135-190.

146. Kaizu T. Carbon monoxide inhalation ameliorates cold-ischemia reperfusion injury after rat liver transplantation. // Surgery. - 2005. - V. 138. - P. 229235.

147. Kamb B. Ice II: A proton-ordered form of ice // Acta cryst. - 1964. - V. 17. - p. 1437-1449.

148. Kitani K. In vitro determination of solubility of 133 Xenon and 85 Krypton in human liver tissue with varying triglyceride content. // Scand J Clin Lab Invest. -1972. - V. 29, № 2. - P. 173-176.

149. Kitani K. Solubility coefficients of 85 Krypton and 133 Xenon in water, saline, lipids, and blood. // Scand J Clin Lab Invest. - 1972. - V. 29, № 2. - P.167-172.

150. Klein E. Effect of dimethyl sulphoxide on lipiproyeins stored at low temperatures. // Cryobiology. - 1967. - V. 4, № 3. - P. 328-334.

151. Kletetschka G. Dissolved Gases and Ice Fracturing During the Freezing of a Multicellular Organism: Lessons from Tardigrades. // Biores Open Access. - 2015. -V. 4, № 1. - P. 209-217.

152. Kletetschka G., Hruba J. Dissolved Gases and Ice Fracturing During the Freezing of a Multicellular Organism: Lessons from Tardigrades. // Biores Open

Access. - 2015. - V. 4, № 1. - P. 209-217.

153. Knez Z. High-Pressure Solubility Data for Palm Oil-SF6 and Coconut Oil-SF6 Systems. // Journal of Chemical & Engineering Data. - 2010. - V. 55, № 12. -P. 5829-5833.

154. Koetting M. Gaseous persufflation with carbon monoxide during ischemia protects the isolated liver and enhances energetic recovery. // Cryobiology. - 2010. - V. 61, № 1. - P. 33-37.

155. Kuhs W. F. The structure of ice-Ih / W. F. Kuhs, M. S. Lehmann // Water Science Reviews 2 (Cambridge University Press) - 1986. - P. 1-66.

156. Laptev D. S. The Use of Inert Gas Xenon for Cryopreservation of Leukocytes // Bulletinof Experimental Biology and Medicine. - 2014. - V. 157, № 2. -P. 282-284.

157. Laroche V. Cell loss and recovery in umbilical cord blood processing: a comparison of postthaw and postwash samples. //Transfusion. - 2005. - V. 45, № 12. -P. 1909-1916.

158. Lee R. E. Insect cold-hardiness: to freeze or not to freeze? How insects survive low temperatures. // Bioscience. - 1990. - № 39. - P. 308-313.

159. Lim J. G. A new modified cut standard straw vitrification technique reduces the apoptosis of mouse blastocysts and generates more live mouse offspring. // Cryo Letters. - 2013. -V. 34, № 6. - P. 598-607.

160. Lindguist S. The heat shock response. // Ann. Rev.Biochem. - 1986. - № 55. - P. 1151-1191.

161. Liu J. Q. Chronic hypoxia-enhanced murine pulmonary vasoconstriction: role of superoxide and gp91phox. // Chest. - 2005. - V. 128. - P. 594-596.

162. Lobban C. The p-T dependency of the ice II crystal structure and the effect of helium inclusion. // J. Chem. Phys. - 2002. - V. 117. - P. 3928-3934.

163. Lobo N. Hypothermia and Xenon: New Noble Guardians of Hypoxic-Ischemic Encephalopathy? // J. of Neuroscular Research. - 2013. -V. 91. - P: 473-478.

164. Lodono D. Formation, stability, and structure of helium hydrate at high pressure. // J. Chem. Phys. - 1992. - V. 97- P. 547.

165. Loetscher P. D. Argon: neuroprotectionin in vitro models of cerebral ischemia and traumatic brain injury. // Crit Care. - 2009. - V. 13. - P. 206.

166. Lokshin K. A. Fast synthesis method and phase diagram of hydrogen clathrate hydrate. // Appl. Phys. Lett. - 2006. - V. 88. - P. 131-139.

167. Lokshin K. A. Structure and Dynamics of Hydrogen Molecules in the Novel Clathrate Hydrate by High Pressure Neutron Diffraction // Phys. Rev. Lett. -2004. - V. 93, № 12. - P. 125-133.

168. Londono D. Enclathration of helium in ice II: the first helium hydrate. // Nature. - 1988. - V. 332. - P. 141-142.

169. Ma D, Hossain M. Xenon and hypothermia combine synergistically to provide neuroprotection from neonatal asphyxia. // Ann Neurol. -2005. - V. 58. -P.182-193.

170. Malenkov G. G. Dynamics of Some He and Ar Clathrate Hydrates. Computer Simulation Study // J. Inclus. Phenom. Macrocyclic Chem. - 2004. - V. 48, № 1. - P. 45-54.

171. Mao W. L. Hydrogen Clusters in Clathrate Hydrate // Science. - 2002. -V. 297. - P. 2247-2249.

172. Margaritis A. Principles and biotechnological applications of bacterial ice nucleation. \ // Crit. Rev. Biotechnol. - 1991. - V. 11, № 3. - P. 277-295.

173. Martin G. Kinetics of occurrence of some features of apoptosis during the cryopreservation process of bovine spermatozoa. // Human Reproduction. - 2007. - V. 22, № 2. - P. 380-388.

174. Matsuda S. Hydrate Formation Using Water Spraying onto a Cooled Solid Surface in a Guest Gas. // AIChE J. - 2006. - V.52, №8. - P.2978-2987.

175. Matsumoto S. Effects of synthetic antifreeze glycoprotein analogue on islet cell survival and function during cryopreservation. // Cryobiology. - 2006. - V. 52, № 1. - P. 90-98.

176. Miller D. Heat-shock proteins to the rescue. // New Scientist. - 1989. -№1. - P. 47-50.

177. Morita T. Carbon monoxide controls the proliferation of hypoxic vascular

smooth muscle cells. // J Biol Chem. - 1997. - V. 272. - P. 804-809.

178. Moskovitz Y. Modelling of noble anaesthetic gases and high hydrostatic pressure effects in lipid bilayers. // Soft Matter. - 2015. - V. 11, № 11. - P. 2125-2138.

179. Muryoi N. Cloning and expression of afpA, a gene encoding an antifreeze protein from the arctic plant growth-promoting rhizobacterium Pseudomonas putida GR12-2. // J. Bacteriol. - 2004. - V. 186, № 17. - P. 5661-5671.

180. Olsona S. Y. Regulation of apoptosis-related genes by nitric oxide in cancer. // Nitric Oxide. - 2008. - V. 19. - P.1-14.

181. Overton E. Studien u'ber die Narkose zugleich ein Beitrag zur allgemeinen Pharmakologie. - Jena, Germany: Verlag von Gustav Fischer, 1901 - 625 p.

182. Pauling L. J. The structure and entropy of ice and of other crystals with some randomness of atomic arrangement. // J. Am. Chem. Soc. - 1935. - V. 57, № 12. - P. 2680-2684

183. Pegg D. E. Attempted canine renal cryopreservation using dimethyl sulphoxide helium perfusion and microwave thawing. // Cryobiology. - 1978. - V. 15, № 6. - P. 618-626.

184. Pennell C. A. Heat shock proteins in immune response in the Fall of 2004. // Immunology. - 2005. - V. 114, № 3. - P. 297-300.

185. Peterson S. W. A Single-Crystal Neutron Diffraction Study of Heavy Ice. // Acta Crystallographica. - 1957. - V. 10. - P. 70-76.

186. Petrenko V. F. Physics of Ice.- Oxford: Oxford University Press, 1999. -

373 p.

187. Piantodosi C. A. Biological chemistry of carbon monoxide. // Antioxid and redox sign. - 2002 - V. 4, № 2. - P. 259-270.

188. Power G. G., Stegall H. Solubility of gases in human red blood cell ghosts. // Journal of Applied Physiology. - 1970. - V. 29, № 2. -P.145-149.

189. Prange T. Exploring hydrophobic sites in proteins with xenon or krypton. // Proteins. - 1998. - V. 30. - P. 61-73.

190. Preckel B. Molecular Mechanisms Transducing the Anesthetic, Analgesic, and Organ-protective Actions of Xenon // Anesthesiology. - 2006. - V. 105. - P. 187-

191. Preckel B. Xenon administration during early reperfusion reduces infarct size after regional ischemia in the rabbit heart in vivo. // Anesth Analg - 2000. -V. 91. -P. 1327-32.

192. Prehoda R. W. Suspended Animation: The Research Possibility That May Allow Man to Conquer the Limiting Chains of Time. // Bioscience. - V. 20, Iss. 9. -1970. - P. 577.

193. Prehoda R.W. Suspended Animation. Chilton Book Company, 1969. - 316

p.

194. Robles V. The antifreezeprotein type I (AFP I) increases seabream (Sparus aurata) embryos tolerance to low temperatures. // Theriogenology. - 2007. - V. 68. - P. 284-289.

195. Rowe A. Phagocytic activity and antigic inferity of leukocytes preserved with DMSO at a cryogenic temperature (-196°C). // Vox. Sang. - 1965. - V. 10, № 3. -P. 382-384

196. Said T. M. Implication of apoptosis in sperm cryoinjury. // Reprod Biomed Online. -2010. - V. 21, № 4. - P. 456-462.

197. Sakai A. Cryopreservation of nucellar cells of navel orange (Citrus sinensis Osb. var. brasiliensis Tanaka) by vitrification. // Plant Cell Reports - 1990. - V. 9. - P. 30-33.

198. Scotter A. J. The basis for hyperactivity of antifreeze proteins // Cryobiology. - 2006. - V. 53, № 2. - P. 229-239.

199. Semenza G. L. Regulation of physiological responses to continuous and intermittent hypoxia by hypoxia-inducible factor 1. // Exp. Physiol. - 2006. - V. 91. -P. 803-806.

200. Sen, N. Protein modifications involved in neurotransmitter and gasotransmitter signaling. // Trends Neurosci. - 2010. - V. 33. - P. 493-502.

201. Seo J. M. Cryopreservation of amniotic fluid-derived stem cells using natural cryoprotectants and low concentrations of dimethylsulfoxide. // Cryobiology. -2011. - V. 62, № 3. - P. 167-173.

202. Shannon P. Contribution of seminal plasma, sperm numbers and gas phase to dilution effects of bovine spermatozoa. // J. Dairy Sci. - 1965. - V. 48. - P. 13571361.

203. Shannon P. Contribution of seminal plasma, sperm numbers and gas phase to dilution effects of bovine spermatozoa. // J. Dairy Sci. -1965. - V. 48. -P. 13571361.

204. Shannon, P. Semen studies. // N. Z. Dairy Board. - 1971. - V. 47. - P. 1617.

205. Sheleg S. Cardiac Mitochondria l Membrane Stability after Deep Hypothermia using a Xenon Clathrate Cryostasis Protocol - an Electron Microscopy Study. // International Journal of Clinical and Experimental Pathology. - 2008. - V.1, № 5. - P. 440-447.

206. Sheleg, S. Cardiac mitochondrial membrane stability after deep hypothermia using a xenon clathrate cryostasis protocol - an electron microscopy study. // Int J Clin Exp Pathol. - 2008. - V. 1. - P. 440-447.

207. Storey K. B. Living in the cold: freeze-induced gene responses in freeze-tolerant vertebrates. // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. - 1999. - V. 26, № 1. - P. 57-63.

208. Strom C. S. Chinese hamster ovary K2 cell lipid droplets appear to be metabolic organelles involved in membrane traffic. // Biol. Chem. - 2004. - V. 279, № 31. - P. 324-337.

209. Subbotin O. S. Computer Simulation of Methane - Helium Gas Mixture Separation by Means of Gas Hydrate Formation Physics and Chemistry of Ice. -Sapporo: Hokkaido Univ. Press, 2011. - P. 183-187.

210. Svalgaard J. D. Low-molecular-weight carbohydrate Pentaisomaltose may replace dimethyl sulfoxide as a safer cryoprotectant for cryopreservation of peripheral blood stem cells. // Transfusion. - 2016. - V. 56, № 5. - P. 1088-1095.

211. Takahashi T. Calorimetric studies of the state of water in deeply frozen human monocytes. // Biophys. J. - 1985. - V. 47, №3. - P. 373-380.

212. Toyofumi A. High-pressure carbon monoxide preserves rat kidney grafts from apoptosis and inflammation. // Lab Invest. - 2017. - V. 97, № 4. - P. 468-477.

213. Trudell J. R. A molecular description of how noble gases and nitrogen bind to a model site of anesthetic action. // Anesth Analg. - 1998. - V. 87. - P. 411-418.

214. Tsvetkov T. Isolation and cryopreservation of human peripheral blood monocytes. // Cryobiology. - 1986. -V. 23, № 5. - P. 433-439.

215. Udachin K. A. Single crystal diffraction studies of structure I, II and H hydrates: structure, cage occupancy and composition. // J. Supramol. Chem. - 2002. -V. 2. - P. 405-408.

216. Udachin K. A. Structure H hydrate: a single crystal diffraction study of 2,2-dimethylpentane*5(Xe, H2S)*34H2O. // Supramol. Chem. - 1997. - V. 8, № 3. - P. 173-176.

217. Van Demark N. L. Preliminary fertility results from the preservation of bovine semen at room temperatures. // J. Dairy Sci. - 1957. - V. 40. - P. 438-439.

218. van-der-Waals J. H. Advances in Chemical Physics. - N.-Y.: Interscience, 1959. - P.1-57.

219. Volk G. M. Survival of mint shoot tips after exposure to cryoprotectant solution components. // Cryobiology. - 2006. - V. 52. - P. 305-308.

220. Von Stackelberg M. Feste Gashydrate II. Structur und Raumchemie. // Z. Elektrochem. - 1954. - Bd. 58, № 1. - S. 25-39.

221. Vos W. L. Novel Нз - НзО clathrates at high pressures. // Phys. Rev. Lett. - 1993. - V. 71. - P. 3150-3153.

222. Wan C. Experimental study on the cryopreservation of LLC-PK1 epithelial cells with hypoxic UW solution. // Univ Sci Technolog Med Sci. -2007. -V. 27, № 4. -P. 426-428.

223. Wang J. H. A comprehensive evaluation of the effects and mechanisms of antifreeze proteins during low-temperature preservation. // Cryobiology. - 2000. - V. 41, № 1. - P. 1-9.

224. Wang J. H. The dual effect of antifreeze protein on cryopreservation of rice (Oryza sativa L.) embryogenic suspension cells. // Cryoletters. - 2001. - V. 22, № 3. -P. 175-182.

225. Wang. R. Two's company, three's a crowd: can H2S be the third

endogenous gaseous transmitter? // FASEB J. - 2002. -V. 16. -P. 1792-1798.

226. Wouters J. A., Rombouts F. M., Kuipers O. P. The role of cold-shock proteins in low-temperature adaptation of food related bacteria. // Syst. Appl. Microbiol. - 2000. - V. 23. - P.165-173.

227. Yamada T. Hydrogen supplementation of preservation solution improves viability of osteochondral grafts. // Scientific World Journal. - 2014. - P.109-117.

228. Yamamoto E. Diffusive nature of xenon anesthetic changes properties of a lipid bilayer: molecular dynamics simulations. // J. Phys. Chem. B. - 2012. - V. 116. -P. 8989-8995.

229. Yang G. Hydrogen sulfide-induced apoptosis of human aorta smooth muscle cells via the activation of MAP kinases and caspase-3. // FASEB J.. - 2004. -V. 18. - P.1782-1784.

230. Yarin Y. M. Argon protects hypoxia-, cisplatin- and gentamycin-exposed hair cells in the newborn rat's organ of Corti. // Hear Res. -2005. - V. 201. - P. 1-9.

231. Zhang X. Carbon monoxide inhibition of apoptosis during ischemia-reperfusion lung injury is dependent on the p38 mitogen-activated protein kinase pathway and involves caspase 3. // J. Biol Chem. - 2003. - V. 278. - P. 1248-1258.

232. Zhang X. Carbon monoxide inhibition of apoptosis during ischemia-reperfusion lung injury is dependent on the p38 mitogen-activated protein kinase pathway and involves caspase 3. // J. Biol Chem. - 2003. - V. 278. - P. 1248-1258.

233. Zinchenko Y., Laureano E., Coger R. B. Use of Directional Solidification to Quantify the Termophysical Properties or DMSO-based Cryoprotectant Solutions. // Cell Preserv. Technol. - 2004. - № 2. - P. 276.

234. Zuckerbraun B. S. Therapeutic delivery of carbon monoxide: W02008/003953. // Expert Opinion on Therapeutic Patents. -2008. - V. 2. - P. 13211325.

131

БЛАГОДАРНОСТИ

Выражаю искреннюю благодарность своему научному руководителю к.б.н. Фесенко Евгения Евгеньевича за всестороннюю поддержку и неоценимую профессиональную помощь на всех этапах проведенного диссертационного исследования; д.м.н. Гаховой Эдит Николаевне за постоянное внимание и ценные замечания по работе; к.б.н. Шишовой Наталии Владимировне за активное содействие в проведении исследований, а также всем сотрудникам Лаборатории криобиологии и биофизики воды Института биофизики клетки РАН за создание благоприятной атмосферы для работы и моральную поддержку.