Влияние физических нагрузок на концентрацию ростовых факторов человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.51, кандидат биологических наук Сахаров, Дмитрий Андреевич

• Сахаров, Дмитрий Андреевич
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сахаров, Дмитрий Андреевич

Список используемых сокращений.- 3

Введение.- 4

Глава I. Ростовые факторы и гены раннего ответа (Обзор литературы).-8

Глава II. Материалы и методы исследования.- 43

Глава III. Антитела против гормона роста, аффинные сорбенты и конъюгаты антител.- 52

Глава VI. Нагрузочное тестирование и концентрация ростовых факторов.- 97

Глава VII. Гены раннего ответа.- 106

Глава VIII. Заключение.-116

Выводы.- 123

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние физических нагрузок на концентрацию ростовых факторов человека»

Физические нагрузки являются одним из основных стимулов активации системы гормон роста (ГР) - инсулиноподобный фактор роста 1 (ИФР1) (Gibney J., 2007; Nindl B.C., 2007), играющей важную роль в процессах клеточного роста и развития. В крови присутствуют несколько сплайс-изоформ гормона роста и инсулиноподобного фактора роста (Baumann G., 1991а). Сплайсинг их пре-мРНК осуществляется в ядре клетки при участии сплайсосомы - мегадальтонного комплекса между РНК и белками. Известно, что различные стрессорные факторы оказывают влияние на функционирование сплайсосомы и могут приводить к изменению ее активности или нарушениям сплайсинга. Таким образом, исследование влияния физического стресса на процесс сплайсинга гормона роста, соотношение его изоформ в крови, а также на систему ростовых факторов в целом, является современной задачей восстановительной и спортивной медицины.

Известно, что физические нагрузки разной интенсивности приводят к запуску большого количества биохимических, молекулярных и генетических механизмов, лежащих в основе адаптационных реакций организма на физиологический стресс (Coffey V.G., 2007а). Процессы адаптации организма к кратковременным высокоинтенсивным физическим нагрузкам связаны как с появлением изоформ ростовых факторов, так и с активацией системы генов раннего ответа (ГРО), и привлекают все больше внимания исследователей (Buttner Р., 2007; Connolly Р.Н, 2004).

Начальными активаторами ГРО являются стрессорные факторы, связанные с физической нагрузкой (гипотермия, ишемия, метаболический стресс, изменение электролитного баланса и т.п.), которые могут воздействовать на экспрессию ГРО как напрямую, так и опосредованно -через гуморальную систему и ЦНС (Simon Р., 2006).

Результатом работы сигнальных каскадов ГРО является активация транскрипции большого количества генов; она является пусковым звеном в механизмах белкового неосинтеза, а также активации т.н. «поздних генов», формирующих специфический фенотипический ответ организма на стресс.

Процессы активации системы ростовых факторов и генов раннего ответа, протекающие в организме спортсмена в первые минуты интенсивной физической нагрузки, в литературе не описаны, и их изучение весьма актуально и проводится впервые.

Гипотеза:

Предполагается, что работа максимальной аэробной мощности проводит к запуску процессов срочной адаптации организма: происходят изменения концентраций ростовых факторов в крови и увеличивается экспрессия генов раннего ответа. Мониторинг концентраций ростовых факторов и экспрессии мРНК генов раннего ответа в условиях физиологических тестирований различной интенсивности представляет собой новую диагностическую технологию оценки функциональных резервов организма.

Цель исследования:

Оценка влияния работы максимальной аэробной мощности на систему ростовых факторов человека: гормона роста и инсулиноподобного фактора роста 1, а также на экспрессию мРНК генов раннего ответа.

Задачи исследования:

1. Получение моно- и поликлональных антител против рекомбинантного гормона роста человека и разработка иммуноферментной (ИФА) тест-системы определения его концентрации в сыворотке крови человека;

2. Разработка методов и подходов к определению соотношения изоформ гормона роста в сыворотке крови человека;

-63. Определение изменений концентраций гормона роста и его изоформ, инсулиноподобного фактора роста 1 и инсулиноподобного фактора роста связывающего белка 3 (ИФРСБЗ) после нагрузок максимальной аэробной мощности; 4. Анализ экспрессии мРНК генов раннего ответа в лейкоцитах крови спортсменов до и после работы максимальной аэробной мощности.

Научная новизна:

Впервые проведено комплексное исследование влияния работы максимальной аэробной мощности на систему ростовых факторов и генов раннего ответа человека.

Разработана иммуноаффинная методика определения изоформ гормона роста в сыворотке крови, а также ИФА тест-система определения его суммарной концентрации с использованием полученных в работе моно- и поликлональных антител против рекомбинантного гормона роста (рГР).

Проанализированы образцы сывороток спортсменов после работы максимальной аэробной мощности и впервые показано, что концентрация ГР значительно увеличивается после нагрузки, а соотношение изоформ ГР остается неизменным. Концентрация ИФР1 в сыворотке выше у более подготовленных спортсменов; также наблюдается тенденция к увеличению общего содержания ИФР1 и ИФРСБЗ после нагрузки.

Впервые проведено исследование экспрессии на мРНК-чипах всех генов человека до и после нагрузки максимальной аэробной мощности и определены группы генов, вовлеченных в ранний ответ организма на физический стресс.

Теоретическая значимость:

Работа направлена на решение фундаментальных проблем адаптации организма спортсмена к нагрузкам максимальной аэробной мощности.

Изучены процессы ответа организма на стресс, а также запуск механизмов активации генов ранней экспрессии. Разработанные методики определения концентраций и соотношений изоформ гормонов открывают возможности для детального изучения влияния физиологического стресса на систему ростовых факторов, что важно для мониторинга утомления и восстановления в современной восстановительной медицине.

Практическая значимость:

Разработанные методики определения ростовых факторов могут быть использованы для оценки подготовленности спортсменов к нагрузкам различной интенсивности и применяться в диагностике нарушений и патологий.

Используемые подходы к детектированию изоформ гормона роста могут быть применены в анализе биологических образцов на присутствие экзогенных субстанций, при допинг-контроле сложных полипептидных субстанций.

Методики оценки экспрессии мРНК генов раннего ответа необходимы при разработке новых подходов к мониторингу физического состояния спортсменов, процессов тренировки и восстановления; при проведении анализа воздействия нагрузок на организм и оценке его функциональных резервов. Результаты исследования внедрены в работу кафедры спортивной медицины ФГУ РГУФКСиТ и кафедры физического воспитания и спорта МГУ имени М.В. Ломоносова, что подтверждено актами о внедрении. Перспективным является также внедрение результатов настоящей работы в диагностических и лечебно-профилактических медицинских учреждениях.

Результаты работы опубликованы в 4 статьях.

Заключение диссертации по теме «Восстановительная медицина, спортивная медицина, курортология и физиотерапия», Сахаров, Дмитрий Андреевич

Выводы

1. Получены высокоактивные моноклональные мышиные антитела и поликлональные аффинно очищенные антитела кролика против рекомбинантного гормона роста человека, которые можно использовать в ИФА и иммуноблоттинге.

2. Разработана ИФА тест-система определения гормона роста. Чувствительность и селективность данной тест-системы позволяют использовать ее в определении концентрации гормона роста в сыворотке крови человека для мониторинга функционального состояния спортсмена на различных этапах тренировочной и соревновательной деятельности.

3. Разработан метод определения изоформ гормона роста в сыворотке крови, основанный на аффинном выделении гормона роста и анализе полученного образца с использованием двумерного электрофореза и иммуноблоттинга. Метод позволяет детектировать 22 и 20 кДа изоформы гормона для выявления нарушений сплайсинга.

4. Показано, что после нагрузок максимальной аэробной мощности абсолютное увеличение концентрации гормона роста и базальный уровень инсулиноподобного фактора роста 1 больше у спортсменов с более высоким максимальным потреблением кислорода. Доказано, что концентрация ростовых факторов до и после нагрузочного тестирования максимальной аэробной мощности может быть маркером оценки подготовленности спортсменов.

5. Выявлена группа генов, экспрессия которых в лейкоцитах периферической крови у спортсменов в результате нагрузки максимальной аэробной мощности в кратковременном периоде увеличивается. В данную группу входят гены, участвующие в передаче клеточного сигнала: киназы и фосфатазы. Анализ экспрессии мРНК данных генов способствует в дальнейшем разработке новых методик мониторинга утомления и восстановления спортсмена.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сахаров, Дмитрий Андреевич, 2008 год

1. Давыдов Я.И. and Тоневицкий А.Г. Предсказание линейных В-клеточных эпитопов // Молекулярная биология. 2009. - Vol. 43. - N1.-C. 166-174v

2. Меерсон Ф.З. и Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессовым ситуациям и физическим нагрузкам. М.: Медицина, 1988. 25ЬС.

3. Сахаров Д. А., Тевис М., Тоневицкий А.Г. Анализ основных изоформ гормона роста человека до и после интенсивных физических нагрузок // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2008 - Т.146. -№Ю-¿.446-450.

4. Шкурников М.Ю., Сахаров Д.А., Акимов Е.Б., Тоневицкий А.Г. Свободный тестостерон как маркер адаптации к нагрузкам средней интенсивности // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2008 Т.146. - №9 -¿.330-332.

5. Barkan A.L. Defining normalcy of the somatotropic axis: an attainable goal? // Pituitary. 2007. - Vol. 10. - N2.-P. 135-9.

6. Baumann G. Growth hormone heterogeneity: genes, isohormones, variants, and binding proteins // Endocr Rev. -1991a. Vol. 12. - N4.-P. 424-49.

7. Baumann G. Metabolism of growth hormone (GH) and different molecular forms of GH in biological fluids // Horm Res. 1991b. - Vol. 36 Suppl 1. -.-P. 5-10.

8. Baumann G. Growth hormone heterogeneity in human pituitary and plasma // Horm Res. 1999. - Vol. 51 Suppl 1. -.P. 2-6.

9. Bazan J.F. Structural design and molecular evolution of a cytokine receptor superfamily // Proc Natl Acad Sci US A.-1990. Vol. 87. - N18.-P. 6934-8.

10. Benjamin D.C., Berzofsky J.A., East I.J. et al. The antigenic structure of proteins: a reappraisal // Annu Rev Immunol. -1984.-Vol. 2.-.-P. 67-101.

11. Bidlingmaier M., Suhr J., Ernst A. et al. High-sensitivity chemiluminescence immunoassays for detection of growth hormone doping in sports // Clin Chem. 2009. - Vol. 55. -N3.-P. 445-53.

12. Bigbee A.J., Gosselink K.L., Roy R.R. et al. Bioassayable growth hormone release in rats in response to a single bout of treadmill exercise // J Appl Physiol. 2000. - Vol. 89. - N6.- P. 2174-8.

13. Bikle D.D., Harris J., Halloran B.P. et al. The molecular response of bone to growth hormone during skeletal unloading: regional differences // Endocrinology. 1995. -Vol. 136. - N5.-P. 2099-109.

14. Buttner P., Mosig S., Lechtermann A. et al. Exercise affects the gene expression profiles of human white blood cells // J Appl Physiol. 2007. - Vol. 102. - N1.- P. 26-36.

15. Charles C.H., Sun H., Lau L.F. et al. The growth factor-inducible immediate-early gene 3CH134 encodes a protein-tyrosine-phosphatase // Proc Natl Acad Sei USA.- 1993. -Vol. 90.-Nil.-P. 5292-6.

16. Chi H., Barry S.P., Roth R.J. et al. Dynamic regulation of pro-and anti-inflammatory cytokines by MAPK phosphatase 1 (MKP-1) in innate immune responses // Proc Natl Acad Sei U S A. 2006. - Vol. 103. - N7.- P. 2274-9.

17. Christensen S.E., Jorgensen O.L., Moller N. et al. Characterization of growth hormone release in response to external heating. Comparison to exercise induced release // Acta Endocrinol (Copenh). 1984. - Vol. 107. - N3.- R 295301.

18. Clackson T., Ultsch M.H., Wells J.A. et al. Structural and functional analysis of the 1:1 growth hormone:receptor complex reveals the molecular basis for receptor affinity // J Mol Biol. 1998. - Vol. 277. - N5.- P. 1111-28.

19. Clamp M., Cuff J., Searle S.M. et al. The Jalview Java alignment editor // Bioinformatics. 2004. - Vol. 20. - N3.- P. 426-7.

20. Clemmons D.R., Busby W.H., Arai T. et al. Role of insulinlike growth factor binding proteins in the control of IGF actions // Prog Growth Factor Res. 1995. - Vol. 6. - N2-4.- P. 357-66.

21. Connolly P.H., Caiozzo V.J., Zaldivar F. et al. Effects of exercise on gene expression in human peripheral blood mononuclear cells // J Appl Physiol. 2004. - Vol. 97. - N4.- P. 1461-9.

22. Copeland J.L. and Tremblay M.S. Effect of HRT on hormone responses to resistance exercise in post-menopausal women // Maturitas. 2004. - Vol. 48. - N4.- p. 360-71.

23. Cuneo R.C., Salomon F., Wiles C.M. et al. Growth hormone treatment in growth hormone-deficient adults. II. Effects on exercise performance // J Appl Physiol. 1991. - Vol. 70. -N2.- P. 695-700.

24. Cunningham B.C., Ultsch M., De Vos A.M. et al. Dimerization of the extracellular domain of the human growth hormone receptor by a single hormone molecule // Science. -1991. Vol. 254. - N5033.- P. 821-5.

25. Dong C., Davis R.J. and Flavell R.A. MAP kinases in the immune response // Annu Rev Immunol. 2002. - Vol. 20. -.P. 55-72.

26. Esteban C., Audi L., Carrascosa A. et al. Human growth hormone (GH1) gene polymorphism map in a normal-statured adult population // Clin Endocrinol (Oxf). 2007. - Vol. 66. -N2.- P. 258-68.

27. Farrell P.A., Garthwaite T.L. and Gustafson A.B. Plasma adrenocorticotropin and Cortisol responses to submaximal and exhaustive exercise // J Appl Physiol. 1983. - Vol. 55. - N5.-P. 1441-4.

28. Felsing N.E., Brasel J.A. and Cooper D.M. Effect of low and high intensity exercise on circulating growth hormone in men // J Clin Endocrinol Metab. 1992. - Vol. 75. - N1.- f. 157-62.

29. Fitzgerald L. Exercise and the immune system // Immunol Today. 1988. - Vol. 9. - N11.- R 337-9.

30. Gibney J, Healy M.L. and Sonksen P.H. The growth hormone/insulin-like growth factor-I axis in exercise and sport // Endocr Rev. 2007. - Vol. 28. - N6.-P. 603-24.

31. Giustina A. and Veldhuis J.D. Pathophysiology of the neuroregulation of growth hormone secretion in experimental animals and the human // Endocr Rev. 1998. - Vol. 19. - N6.-P. 717-97.

32. Golde D.W, Bersch N, Chopra I.J. et al. Thyroid hormones stimulate erythropoiesis in vitro // Br J Haematol. 1977. -Vol. 37. -N2.-P. 173-7.

33. Grigorian A.L, Bustamante J.J, Hernandez P. et al. Extraordinarily stable disulfide-linked homodimer of human growth hormone // Protein Sci. 2005. - Vol. 14. - N4.-P. 90213.

34. Grumont R.J, Rasko J.E, Strasser A. et al. Activation of the mitogen-activated protein kinase pathway induces transcription of the PAC-1 phosphatase gene // Mol Cell Biol. 1996. - Vol. 16. - N6.-P. 2913-21.

35. Haro L.S, Lewis U.J, Garcia M. et al. Glycosylated human growth hormone (hGH): a novel 24 kDa hGH-N variant // Biochem Biophys Res Commun. 1996. - Vol. 228. - N2.- P. 549-56.

36. Hattori N., Saito T., Yagyu T. et al. GH, GH receptor, GH secretagogue receptor, and ghrelin expression in human T cells, B cells, and neutrophils // J Clin Endocrinol Metab. -2001. Vol. 86. - N9.- P 4284-91.

37. Hepner F., Cszasar E., Roitinger E. et al. Mass spectrometrical analysis of recombinant human growth hormone (Genotropin(R)) reveals amino acid substitutions in 2% of the expressed protein // Proteome Sci. 2005. - Vol. 3. - N1.- P. 1.

38. Hettiarachchi M., Watkinson A., Leung K.C. et al. Human growth hormone fragment (hGH44-91) produces insulin resistance and hyperinsulinemia but is less potent than 22 kDa hGH in the rat // Endocrine. 1997. - Vol. 6. - N1.- P. 47-52.

39. Holt R.I. and Sonksen P.H. Growth hormone, IGF-I and insulin and their abuse in sport // Br J Pharmacol. 2008. -Vol. 154.-N3.-f. 542-56.

40. Holt R.I., Webb E., Pentecost C. et al. Aging and physical fitness are more important than obesity in determining exercise-induced generation of GH // J Clin Endocrinol Metab. 2001. - Vol. 86. - N12,-P. 5715-20.

41. Hunter W.M., Fonseka C.C. and Passmore R. Growth hormone: important role in muscular exercise in adults // Science. 1965a. - Vol. 150. - N699.-p. 1051-3.

42. Hunter W.M., Fonseka C.C. and Passmore R. The role of growth hormone in the mobilization of fuel for muscular exercise // Q J Exp Physiol Cogn Med Sci. 1965b. - Vol. 50. -N4.-P. 406-16.

43. Hymer W.C., Kraemer W.J., Nindl B.C. et al. Characteristics of circulating growth hormone in women after acute heavyresistance exercise // Am J Physiol Endocrinol Metab. 2001. -Vol. 281. - N4.-P. E878-87.

44. Irizarry R.A., Bolstad B.M., Collin F. et al. Summaries of Affymetrix GeneChip probe level data // Nucleic Acids Res. -2003a.-Vol. 31.-N4.-?. el 5.

45. Irizarry R.A., Hobbs B., Collin F. et al. Exploration, normalization, and summaries of high density oligonucleotide array probe level data // Biostatistics. 2003b. - Vol. 4. - N2.-P. 249-64.

46. Jeffrey K.L., Brummer T., Rolph M.S. et al. Positive regulation of immune cell function and inflammatory responses by phosphatase PAC-1 // Nat Immunol. 2006. -Vol. 7.-N3.-P. 274-83.

47. Jones J.I. and Clemmons D.R. Insulin-like growth factors and their binding proteins: biological actions // Endocr Rev. -1995.-Vol. 16. -Nl.- P. 3-34.

48. Kanaley J.A., Weatherup-Dentes M.M., Jaynes E.B. et al. Obesity attenuates the growth hormone response to exercise // J Clin Endocrinol Metab. 1999. - Vol. 84. - N9.-P. 3156-61.

49. Kooijman R., Gerlo S., Coppens A. et al. Growth hormone and prolactin expression in the immune system // Ann N Y Acad Sci. 2000. - Vol. 917. -.-P. 534-40.

50. Kraemer W.J., Fleck S.J. and Evans W.J. Strength and power training: physiological mechanisms of adaptation // Exerc Sport Sci Rev. 1996. - Vol. 24. -.- P 363-97.

51. Kraemer W.J., Fragala M.S., Watson G. et al. Hormonal responses to a 160-km race across frozen Alaska // Br J Sports Med. 2008. - Vol. 42. - N2.- P. 116-20; discussion 120.

52. Kraemer W.J., Marchitelli L., Gordon S.E. et al. Hormonal and growth factor responses to heavy resistance exercise protocols // J Appl Physiol. 1990. - Vol. 69. - N4.- P. 1442-50.

53. Kraemer W.J., Rubin M.R., Hakkinen K. et al. Influence of muscle strength and total work on exercise-induced plasma growth hormone isoforms in women // J Sci Med Sport. -2003. Vol. 6. - N3.- P. 295-306.

54. Kugler S., Schuller S. and Goebel W. Involvement of MAP-kinases and -phosphatases in uptake and intracellular replication of Listeria monocytogenes in J774 macrophage cells // FEMS Microbiol Lett. 1997. - Vol. 157. - N1.- f. 1316.

55. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. -Vol. 227. - N5259.-P. 680-5.

56. Lassarre C., Girard F., Durand J. et al. Kinetics of human growth hormone during submaximal exercise // J Appl Physiol. 1974. - Vol. 37. - N6.- P. 826-30.

57. Lewis U.J. Growth Hormone What is it and what does it do? // Trends Endocrinol Metab. 1992. - Vol. 3. - N4.-f. 117-21.

58. Lewis U.J., Lewis L.J., Salem M.A. et al. A recombinant-DNA-derived modification of human growth hormone (hGH44-191) with enhanced diabetogenic activity // Mol Cell Endocrinol. 1991. - Vol. 78. - N1-2.-P. 45-54.

59. Lopez-Guajardo C.C., Armstrong L.S., Jordan L. et al. Generation, characterization and utilization of anti-human growth hormone 1-43, (hGHl-43), monoclonal antibodies in an ELISA // J Immunol Methods. 1998. - Vol. 215. - N1-2.-P. 179-85.

60. Luger A., Watschinger B., Deuster P. et al. Plasma growth hormone and prolactin responses to graded levels of acute exercise and to a lactate infusion // Neuroendocrinology. -1992.-Vol. 56.-Nl.-P. 112-7.

61. Nindl B.C. Exercise modulation of growth hormone isoforms: current knowledge and future directions for the exercise endocrinologist // Br J Sports Med. 2007. - Vol. 41. - N6.- P. 346-8; discussion 348.

62. Nindl B.C., Hymer W.C., Deaver D.R. et al. Growth hormone pulsatility profile characteristics following acute heavy resistance exercise // J Appl Physiol. 2001. - Vol. 91. - N1.-P. 163-72.

63. Nindl B.C., Kraemer W.J., Marx J.O. et al. Growth hormone molecular heterogeneity and exercise // Exerc Sport Sei Rev. -2003.-Vol. 31.-N4.-P. 161-6.

64. Northoff H., Symons S., Zieker D. et al. Gender- and menstrual phase dependent regulation of inflammatory gene expression in response to aerobic exercise // Exerc Immunol Rev. 2008. - Vol. 14. -.- P. 86-103.

65. Pritzlaff C.J., Wideman L., Weltman J.Y. et al. Impact of acute exercise intensity on pulsatile growth hormone release in men // J Appl Physiol. 1999. - Vol. 87. - N2.- P. 498-504.

66. Rajaram S., Baylink D.J. and Mohan S. Insulin-like growth factor-binding proteins in serum and other biological fluids: regulation and functions // Endocr Rev. 1997. - Vol. 18. -N6,-P. 801-31.

67. Ranke M.B., Orskov H., Bristow A.F. et al. Consensus on how to measure growth hormone in serum // Horm Res. 1999. -Vol. 51 Suppl 1.-.-P. 27-9.

68. Raynaud J., Drouet L., Martineaud J.P. et al. Time course of plasma growth hormone during exercise in humans at altitude // J Appl Physiol. 1981. - Vol. 50. - N2.- R 229-33.

69. Roberts B. and Katznelson L. Approach to the evaluation of the GH/IGF-axis in patients with pituitary disease: which test to order // Pituitary. 2007. - Vol. 10. - N2.- P. 205-11.

70. Roth J., Glick S.M., Yalow R.S. et al. Secretion of human growth hormone: physiologic and experimental modification // Metabolism. 1963. - Vol. 12. -.-p. 577-9.

71. Rubin M.R., Kraemer W.J., Kraemer R.R. et al. Responses of growth hormone aggregates to different intermittent exercise intensities // Eur J Appl Physiol. 2003. - Vol. 89. - N2.- P. 166-70.

72. Scacchi M., Pincelli A.I. and Cavagnini F. Growth hormone in obesity // Int J Obes Relat Metab Disord. 1999. - Vol. 23. -N3.-P. 260-71.

73. Scanlon M.F., Issa B.G. and Dieguez C. Regulation of growth hormone secretion // Horm Res. 1996. - Vol. 46. - N4-5.-P. 149-54.

74. Seta K.A., Kim R., Kim H.W. et al. Hypoxia-induced regulation of MAPK phosphatase-1 as identified by subtractive suppression hybridization and cDNA microarray analysis // J Biol Chem. 2001. - Vol. 276. - N48.-f. 44405-12.

75. Sherlock M. and Toogood A.A. Aging and the growth hormone/insulin like growth factor-I axis // Pituitary. 2007. -Vol. 10.-N2.-P. 189-203.

76. Smyth G.K. Linear models and empirical bayes methods for assessing differential expression in microarray experiments // Stat Appl Genet Mol Biol. 2004. - Vol. 3. Article3.

77. Snyder G, Hymer W.C. and Snyder J. Functional heterogeneity in somatotrophs isolated from the rat anterior pituitary // Endocrinology. 1977. - Vol. 101. - N3.-P. 788-99.

78. Stenner E, Gianoli E, Piccinini C. et al. Hormonal responses to a long duration exploration in a cave of 700 m depth // Eur J Appl Physiol. 2007. - Vol. 100. - N1.-?. 71-8.

79. Strasburger CJ, Wu Z, Pflaum C.D. et al. Immunofunctional assay of human growth hormone (hGH) in serum: a possible consensus for quantitative hGH measurement // J Clin Endocrinol Metab. 1996. - Vol. 81. - N7.- P. 2613-20.

80. Sundstrom M, Lundqvist T, Rodin J. et al. Crystal structure of an antagonist mutant of human growth hormone, G120R, in complex with its receptor at 2.9 A resolution // J Biol Chem. -1996. Vol. 271. - N50,-p. 32197-203.

81. Surya S, Symons K, Rothman E. et al. Complex rhythmicity of growth hormone secretion in humans // Pituitary. 2006. -Vol. 9. -N2.-P. 121-5.

82. Ultsch M.H., Somers W., Kossiakoff A.A. et al. The crystal structure of affinity-matured human growth hormone at 2 A resolution // J Mol Biol. 1994. - Vol. 236. - N1.- P. 286-99.

83. Veldhuis J.D., Keenan D.M. and Pincus S.M. Motivations and methods for analyzing pulsatile hormone secretion // Endocr Rev. 2008. - Vol. 29. - N7.- P. 823-64.

84. Vestergaard E.T., Dali R., Lange K.H. et al. The ghrelin response to exercise before and after growth hormoneadministration // J Clin Endocrinol Metab. 2007. - Vol. 92. -Nl.-P. 297-303.

85. Viru A., Karelson K. and Smirnova T. Stability and variability in hormonal responses to prolonged exercise // Int J Sports Med. 1992. - Vol. 13. - N3.- p. 230-5.

86. Wagner K., Hemminki K., Grzybowska E. et al. Polymorphisms in the growth hormone receptor: a case-control study in breast cancer // Int J Cancer. 2006. - Vol. 118. -N11.-p. 2903-6.

87. Wallace J.D., Cuneo R.C., Bidlingmaier M. et al. Changes in non-22-kilodalton (kDa) isoforms of growth hormone (GH) after administration of 22-kDa recombinant human GH in trained adult males // J Clin Endocrinol Metab. 2001a. - Vol. 86. -N4.-P 1731-7.

88. Wallace J.D., Cuneo R.C., Bidlingmaier M. et al. The response of molecular isoforms of growth hormone to acute exercise in trained adult males // J Clin Endocrinol Metab. 2001b. - Vol.86. -Nl.-P. 200-6.

89. Weigent D.A. and Blalock J.E. Expression of growth hormone by lymphocytes // Int Rev Immunol. 1989. - Vol. 4. - N3.- p. 193-211.

90. Wettenhall J.M. and Smyth G.K. limmaGUI: a graphical user interface for linear modeling of microarray data // Bioinformatics. 2004. - Vol. 20. - N18,- P 3705-6.

91. Wideman L., Consitt L., Patrie J. et al. The impact of sex and exercise duration on growth hormone secretion // J Appl Physiol. 2006. - Vol. 101. - N6.- P. 1641-7.

92. Wideman L., Weltman J.Y., Shah N. et al. Effects of gender on exercise-induced growth hormone release // J Appl Physiol. 1999.-Vol. 87.-N3.-P. 1154-62.

93. Wolfe R.R. Isotopic measurement of glucose and lactate kinetics // Ann Med. 1990. - Vol. 22. - N3.-P. 163-70.

94. Wong H.R., Dunsmore K.E., Page K. et al. Heat shock-mediated regulation of MKP-1 // Am J Physiol Cell Physiol. -2005. Vol.289. -N5.-P. CI 152-8.

95. Wood T.J., Sliva D., Lobie P.E. et al. Mediation of growth hormone-dependent transcriptional activation by mammary gland factor/Stat 5 // J Biol Chem. 1995. - Vol. 270. - N16.-P. 9448-53.

96. Woodhouse L.J., Mukherjee A., Shalet S.M. et al. The influence of growth hormone status on physical impairments, functional limitations, and health-related quality of life in adults // Endocr Rev. 2006. - Vol. 27. - N3.-P. 287-317.

97. Wu H., Devi R. and Malarkey W.B. Localization of growth hormone messenger ribonucleic acid in the human immune system—a Clinical Research Center study // J Clin Endocrinol Metab. 1996. - Vol. 81. - N3.-P. 1278-82.

98. Wu Z., Bidlingmaier M., Dali R. et al. Detection of doping with human growth hormone // Lancet. 1999. - Vol. 353. -N9156.-P. 895.

99. Zaccaria M., Varnier M., Piazza P. et al. Blunted growth hormone response to maximal exercise in middle-aged versus young subjects and no effect of endurance training // J Clin Endocrinol Metab. 1999. - Vol. 84. - N7.-p. 2303-7.- 144 -Акт

100. Внедрения результатов научно-исследовательской работы1. Ю » цсЛм200$ г.

101. Объект внедрения: Методика оценки физического состояния человека по концентрации инсулиноподобного фактора роста и гормона роста в сыворотке крови.

102. Место внедрения: Кафедра физического воспитания и спорта Московского Государственного университета им. М.В. Ломоносова

103. Эффект внедрения: Разработанные методики определения концентраций гормона роста и инсулиноподобного фактора роста до и после нагрузочного тестирования, позволяют оценивать функциональное состояние организма

104. Зам. Заведующего кафедрой физического воспитания и спорта1. Сахарой 'ал.1. МГУ1. Ковалев Н.К.

105. Преподаватель кафедры физического воспитания и спорта МГУ1. Тюрин В.Ю.- 145 -Акт

106. Внедрения результатов научно-исследовательской работыуид^р-о, 200 8 г.

107. Объект внедрения: Методика определения концентрации гормона роста и инсулиноподобного фактора роста в сыворотке крови

108. Место внедрения: Кафедра физиологии Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Российский Государственный университет физической культуры спорта и туризма

109. Эффект внедрения: Разработанные методики определения концентраций гормона роста и инсулиноподобного фактора роста позволяют оценивать физиологический стресс, вызванный физическими упражнениями

110. Заведующий кафедрой физиологии РГУФКСиТ, доктор биологических наук, профессор1. Сонькин В.Д.