Влияние биологически активного препарата "Плазмарал" на регенерацию костной ткани в эксперименте тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.13, кандидат биологических наук Сигарева, Наталия Александровна

• Сигарева, Наталия Александровна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сигарева, Наталия Александровна

СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. РЕГЕНЕРАЦИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ И СПОСОБЫ ЕЕ РЕГУЛЯЦИИ (обзор литературы)

1.1. Виды регенерации костной ткани

1.2. Способы регуляции регенераторных способностей костной ткани

1.3. Роль полипептидных факторов роста в регуляции регенераторных способностей костной ткани

1.4. Остеоиндуктивные препараты, содержащие

пол и пептидные факторы роста

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал исследования и экспериментальные модели

2.2. Методы исследования

2.2.1. Морфометрические методы

2.2.2. Биохимические методы

2.2.3. Морфогистохимические методы 43 Глава 3. ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА «ПЛАЗМАРАЛ»

НА ПРОЦЕСС РЕГЕНЕРАЦИИ КОСТНОЙ ТКАНИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЯХ БЕДРЕННОЙ КОСТИ

(результаты собственных исследований

3.1. Характеристика функциональной активности регенерата в области неполного дефекта диафиза бедренной кости при введении препарата «Плазмарал»

3.2.Морфогистохимические особенности регенерации неполною дефекта бедренной кости при введении препарата «Плазмарата»

3.3. Особенности регенерации при экспериментальных переломах бедренной кости 68 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ 85 ВЫВОДЫ 93 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

И РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК АББРЕВИАТУР

аРНК— активаторная рибонуклеиновая кислота

БАВ - биологически активное вещество

ГАГ — гликозаминогликан

ДКМ - деминерализованный костный матрикс

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИФР — ннсулинподобный фактор роста

КОКф—колониеобразующие фибробластические клетки

МБК — морфогенетический белок кости

ОДА — опорно-двигательный аппарат

ПТГ - паратиреоидный гормон

ПФО - полипептндные факторы остеогенеза

ПФР - полипептцдные факторы роста

РНК — рибонуклеиновая кислота

СБ - связывающие белки

СТГ — соматотропный гормон

ТФР — трансформирующий фактор роста

ФР— факторы роста

ФРТП- фактор роста тромбоцитарного происхождения

ФРФ- фактор роста фибробластов

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

ЭФР - эиидермальный фактор р оста

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние биологически активного препарата "Плазмарал" на регенерацию костной ткани в эксперименте»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Проблема регенерации костной ткани после повреждения является одной из древнейших в медико-биологической науке. Несмотря на многовековую историю, она остается далеко не разрешенной и до сих пор достаточно актуальной в связи с тем, что травматические повреждения костей привод яг часто к ин-валидизации пострадавших, у мелких домашних животных - к неоправданной гибели, а у сельскохозяйственных животных - к выбраковке.

Многолетняя практика лечения костных повреждений показала, что кость обладает способностью к регенерации после повреждения с дальнейшим восстановлением формы и функции (Каплан A.B., Чернявский В.А., 1967; Родионова Н.В., 1980; Хэм А., Кормак Д., 1983; Лаврищева Г.И., Оноприенко Г.А., 1996).

В течение многих лет учеными и практическими врачами проводится поиск оптимальных условий для осуществления репаративной регенерации. Прежде сущность врачебной медицины сводилась к созданию условий, благоприятных проявлению лишь компенсаторных возможностей кости (Маркс В.О., 1962). Следующим этапом стало применение различных средств фиксации костных фрагментов, широкое использование способов, нормализующих кровоснабжение костной раны (трансплантация богато снабжаемых кровью мышц и др.), кроме того, средств, повышающих общий обмен веществ в организме (анаболические стероиды) (Виноградова Т.П., Лаврищева Г.И., 1974; Илизаров Г.А., Попова Л.А., Шевцов В.И., 1986).

Однако использование этих средств в полной мере не решило проблему оптимизации репаративной регенерации. Данные факты подтверждают то, что лечение повреждений костной ткани остается до настоящего времени одной из важнейших проблем в медико-биологической науке.

В последние десятилетия в связи с ухудшением экологической обстановки, увеличением транспортных средств на дорогах, несбалансированным питанием возросло количество повреждений и патологий опорно-двигательного аппарата (переломы, остеопороз, опухоли кости и др.) (Reed B.Y. et al., 1993; Франке Ю., Рунге Г., 1995). При этом отмечается снижение регенераторных способностей костной ткани и, следовательно, интенсивности регенераторных процессов (Родионова Н.В., 1989; Северин М.В. с соавт., 1993). В связи с этим оправдан поиск фармакологических средств, способных оптимизировать течение репа-ративного остеогенеза.

Одним из перспективных и новых направлений коррекции процесса регенерации является применение биологически активных полипептидных факторов роста (Десягниченко К.С. с соавт., 1989; Новохат-ский A.C., 1994; Lind М., 1998). Накопленный за последние годы материал свидетельствует о том, что полипептидные факторы роста (ПФР) регулируют процессы остеогенеза и резорбции кости (Сумароков Д.Д., Гулкин Д.В., 1987; Щепеткин И.А.,1994; Wergedal I.E. et al., 1990; Trippel S.B. et al., 1997). В настоящее время разработаны способы очистки ПФР из тканей животных, а также методы получения рекомби-нантных аналогов этих белков (Соловьев Г.С., Колпаков В.В., 1973; Suttie Т.М., Fennessy P.F., 1985). Это делает реальным создание компо-

зиционных материалов с остеоиндуктивными свойствами для лечения травм кости и дефектов скелета.

Представителем данной группы препаратов является «ПЛАЗМАРАЛ» (автор препарата - Елыкамов В.А., 1994, г.Барнаул), полученный из плазмы крови маралов в период активного роста пантов (гигиенический сертификат Государственного комитета санитарно-эпидемиологического контроля РФ №1-П/11-178 от 23,02,94). «Плаз-марал» является белковым препаратом и содержит некоторые ПФР, такие как инсулиноподобный фактор роста - 1 (ИФР-1), эпидермальный фактор роста (ЭФР), которые, по экспериментальным и клиническим данным, активизируют процессы регенерации костнй ткани (Десягни-ченко К.С. с соавт., 1990; Rodau G.A., 1991; Lind М., 1998). Однако механизм действия и способ воздействия этого биологически активного препарата на регенерацию костной ткани остается недостаточно выясненным.

В связи с этим перспективным представляется исследование влияния препарата «Плазмарал», содержащего полипептидные факторы роста на остеогенез при экспериментальном моделировании различных повреждений трубчатой кости животных с целью оптимизации процессов репарации и выяснения механизма действия препарата «Плазма-рал».

Цель исследования. Выявить влияние биологически активного препарата «Плазмарал» на морфофункциональное состояние костной ткани при регенерации на экспериментальных моделях различных повреждений трубчатой кости.

Задачи исследования

1. Исследовать влияние препарата «Плазмарал», содержащего полипептидные факторы роста, на регенераторные способности костной ткани: пролиферацию, дифференцировку клеток остеобластического рада и репродукцию компонентов костного матрикса в зоне повреждения.

2. Изучить динамику фосфорно-кальциевого обмена, активность щелочной фосфатазы, содержание гидроксипролина в сыворотке крови экспериментальных животных.

3. Исследовать влияние препарата «Плазмарал» на процесс регенерации костной ткани при неполном дефекте диафиза бедренной кости без пластического замещения в эксперименте.

4. Изучить влияние препарата «Плазмарал» на процесс регенерации костной ткани при экспериментальных переломах бедра.

Новизна исследования. В результате развернутых морфофунк-циональных и биохимических исследований были установлены особенности регенерации при различных повреждениях костной ткани при введении биологически активного препарата «Плазмарал». Было показано, что препарат «Плазмарал» стимулирует процессы репаративной регенерации костной ткани и способствует сокращению сроков заживления на 10-14 дней в эксперименте. Подтверждены остеоиндуктивные свойства препарата «Плазмарал», содержащего ПФР, которые проявлялись в интенсификации митотической и метаболической активности клеток остеобластического рада в зонах повреждений. Обнаруженный феномен согласуется с концепцией о роли полипептидных рострегули-рующих факторов в репаративной регенерации костной ткани. Доказа-

на эффективность использования биологически активного препарата «Плазмарал» в целях оптимизации регенераторных процессов при различных видах костных травм и целесообразность его применения в клинической практике.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты в значительной степени дополняют и уточняют имеющиеся сведения о роли полипептидных факторов роста (ИФР-1; ЭФР) в регенерации костной ткани и раскрывают особенности репаративного остеогенеза при комплексном использовании ИФР-1 и ЭФР в составе препарата «Плазмарал». Выявленная способность «Плазмарала» активизировать костеобразование указывает на целесообразность применения этого биологически активного препарата в целях стимуляции ос-теорепарации в клинической практике. Фактический материал, изложенный в диссертации, может быть использован в учебном процессе на медицинских, ветеринарных, биологических факультетах.

Положения, выносимые на защиту

1. Препарат «Плазмарал», содержащий полипептидные факторы роста, активизирует процессы пролиферации, дифференцировки и синтетическую активность клеток остеобластического ряда в зоне повреждения бедренной кости в эксперименте.

2. При введении биологически активного препарата «Плазмарал» животным с моделями повреждений бедренной кости наблюдается стимуляция регенераторных процессов костной ткани и сокращение сроков заживления по сравнению с контролем.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Международной конференции «Проблемы клинической и экперименталь-ной лимфологии», Новосибирск, 1996; на III Международном симпозиуме «Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма», Чолпон-Ата, 1997; на симпозиуме-семинаре «Диагностика, лечение и профилактика осте огтороза в ортопедии и травматологии», Санкт-Петербург, 1998; на II научно-практической конференции « Актуальные вопросы ветеринарии», Новосибирский государственный аграрный университет, 1999; на 60-ой сессии студентов и молодых ученых, Новосибирский медицинский институт, 1999.

Внедрение результатов исследования

Результаты исследования внедрены в практику учебной работы кафедры анатомии, физиологии и валеологии естественно-географического факультета Новосибирского государственного педагогического университета, в учебный процесс кафедры патологической анатомии и кафедры топографической анатомии Новосибирского медицинского института, в лекционный курс гистологии, патологической анатомии, фармакологии факультета ветеринарной медицины Новосибирского Государственного Аграрного университета и в лечебную практику ветеринарной клиники при НГАУ.

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы.

Обьем и структура работы. Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материала и методов исследования, трех разделов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 150 работ (из 1шх 76 - отечественных, 74 - зарубежных); изложена на 110 страницах машинописного текста, иллюстрирована 30 рисунками и 6 таблицами.

Данная работа выполнялась в рамках темы 017: «Пути совершенствования репаративного остеогенеза» (номер государственной регистрации 01.9.70001430).

ГЛАВА 1. РЕГЕНЕРАЦИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ И СПОСОБЫ ЕЕ РЕГУЛЯЦИИ (обзор литературы)

1.1. Виды регенерации костной ткани

Процесс регенерации костной ткани издавна является предметом подробных и тщательных исследований. Несмотря на большое количество работ, посвященных регенераторным процессам костной ткани, на соответствующие успехи экспериментальной и клинической медицины, ряд вопросов еще далек от окончательного разрешения. К их числу относятся вопросы, имеющие принципиальное значение для понимания процессов стимуляции регенераторных способностей костной ткани.

Регенерация костной ткани может быть физиологической и репара-тивной.

Физиологическая регенерация предполагает постоянное ремодели-рование костной ткани в течение жизнедеятельности организма. Ремо-делирование костной ткани осуществляется на основе тесной взаимосвязи процессов костеобразования и резорбции (Виноградова Т.П., Лавршцева Г.И., 1974). В норме процессы резорбции и костеобразования уравновешены согласно физиологическим потребностям организма. В ряде патологий (остеопороз, опухоли кости и др.) гармония между этими процессами нарушается в сторону преобладания костеобразования или резорбции костного вещества, что находит свое выражение в характере костных изменений и соответствующих клинических проявлениях (Аврунин Н.В. с соавт., 1998).

Ремоделирование костной ткани - многоуровневый процесс. Ос-теоцитарное ремоделирование обеспечивает перестройку костного

матрикса только в окружающем остеоцит окололакунарном пространстве. Этот вариант ремоделирования не приводит к изменению формы и размеров костного органа, а сказывается только на структуре лаку-нарного костного матрикса (Родионова Н.В., 1989). Остеоцитарное ре-моделирование происходит в том случае, когда изменение условий существования (в том числе нейрогуморальных влияний и физических нагрузок) не приводит остеоцит к гибели, и клетка за счет изменения структуры перелакунарного пространства максимально снижает влияние этих факторов.

Если же остеоцит погибает, в действие вступает остеобластно-остеокластный тип перестройки (Хэм А.,Кормак Д., 1983). Этот тип ремоделирования обеспечивает изменение не только структуры костного органа, но также размеров и формы.

Выделяют следующие этапы остеобластно-остеокластного ремоделирования (по Н.В.Аврунину, 1998):

1. Формирование участков активного ремоделирования.

2. Формирование органического матрикса.

3. Формирование минерального матрикса.

В полость резорбции мигрируют клетки-предшественники, дифференцирующиеся в остеобласты. Последние синтезируют компоненты органического матрикса, из которых складываются надмолекулярные структуры, заполняющие образовавшееся пространство (Aaron S., 1976). Этими компонентами в числе прочих являются коллаген, протеогликаны, неколлагеновые белки (факторы роста, костные морфогенетические белки и др).

Формирование волокнистой основы костной ткани в процессе остеогенеза, по мнению Г.И.Лавршцевой и Г.А.Оноприенко (1996),

можно разделить на два этапа: первый (внутриклеточный) - биосинтез коллагенового белка и протеогликанов и второй, происходящий во внеклеточном пространстве, - агрегация молекул в надмолекулярные структуры. Клетки остеобластной линии секретируют различные гликозаминогликаны, а также палочковидные молекулы коллагена, которые объединяются в протеофибриллы и микрофибриллы, последние - в фибриллы, а фибриллы - в волокна. Агрегация микрофибрилл в коллагеновые фибриллы и затем в волокна осуществляется при участии протеогликанов. Минеральный матрикс откладывается на ранее образованном органическом. Минеральный компонент кости представлен аморфным и кристаллическим фосфатом кальция. Третий компонент минеральной фазы - карбонат кальция. Ведущую роль в процессе минерализации играют ферменты (щелочная фосфатаза, АТФаза, фосфорилаза и др.). Согласно А.Хэму (1983), остеобласты секретируют щелочную фосфатазу, воздействующую на глицерофосфаты, в результате чего образуется избыток свободных фосфат-ионов, что приводит к увеличению соотношения Са и Р до уровня, при котором фосфат кальция осаждается в окружающем новообразованном матриксе. Затем происходит последовательная перестройка аморфного фосфата кальция в кристаллический. Минерализация - конечный этап образования костной ткани.

На основе физиологической регенерации развивается репаративная регенерация кости, которая представляет собой сложный биологический процесс, начинающийся сразу после травмы (Каплан А. В., 1979). Наиболее типичным примером репаративного остеогенеза является ос-теогенез при переломе - частичном или полном нарушении целостно-

сти кости под влиянием каких либо механических факторов (Лавршце-ва Г.И., Оноприенко Г.А., 1996).

Последствиями такого рода травмы являются прямые и непрямые повреждения тканей, как костной, так и связанных с ней мягких тканей (Маркс В.О.,1962; Ревелл П.А., 1993). Происходит разрыв кровеносных сосудов по линии перелома и в прилежащих мягких тканях. Кровь, излившаяся из поврежденных внутрикостных, мышечных кровеносных сосудов, и отечная жидкость образуют вокруг костных отломков экстравазат (Белендер З.Н., 1967), который свертывается. Вследствие нарушения кровоснабжения по обе стороны от линии перелома наблюдается гибель оетеоцитов гаверсовых систем, отмирание части надкостницы и гибель ткани костного мозга. Погибшие остеоциты подвергаются лизису и окружающий их матрикс резорбируется остеокластами. Согласно А, Хэму (1983), таким образом зона перелома подготавливается к регенерации. Кровоизлияние, продукты тканевого распада, обрывки тканей, возникшие в результате повреждения, приводят в действие механизм регенерации.

Далее заживление сопровождается образованием в периосте области перелома своеобразной остеобластической грануляционной ткани (Виноградова Т.П., Лавргацева Г.И., 1974). Таким образом, на 5-12 сутки после травмы формируется соединительнотканная мозоль. В эту фазу в костеобразующих элементах поврежденной кости резко возрастает интенсивность белкового и фосфорно-кальциевого обмена, активность ферментов - трансаминаз и щелочной фосфатазы, участвующих в биосинтезе коллагена, гликозаминогликанов и минерализации формирующейся мозоли (Фукс Б.Б., Фукс Б.И., 1968). По данным исследова-

ний (Корж A.A., Белоус A.M., Панков Е.Я., 1972), в сыворотке крови значительно повышается биосинтез и распад а, ß, у - глобулинов, возрастает содержание ионов фосфора, кальция (Романенко В.Д., 1975; Аврунин A.C., Корнилов Н.В., 1992).

На следующем этапе репарации в области самого перелома и в близлежащих участках соединительнотканная мозоль, в зависимости от условий сращения, дифференцируется либо непосредственно в костную ткань, либо в начале в хрящевую, а затем в костную (Воробьев H.A., 1967; Хэм А., Кормак Д., 1983). При условии достаточной фиксации отломков и устойчивого их взаимоотношения происходит быстрое восстановление кровоснабжения, а, следовательно, интенсификация клеточной пролиферации и синтеза межклеточного матрикса. При хорошем кровоснабжении костеобразовательный процесс, как правило минует стадию соединительнотканной и хрящевой мозоли. Это свидетельствует о первичном костном сращении (Бердников В.А., 1963; Виноградова Т.П., Лавршцева Г.И., 1974).

В отсутствии применения устойчивого остеосинтеза клетки соединительнотканной мозоли дифференцируются в хрящевые, что дает начало образованию хрящевой периостальной мозоли (Богданов Ф.Р., Крамеров И.А., 1960; Кагшан A.B., 1979). Она соединяет концы костных отломков, устраняя их подвижность. Хрящевая мозоль с течением времени сменяется костной (вторичное костное сращение) (Флоренский Н.Д., 1963; Лавршцева Г.И. с соавт., 1981). Уже на первой неделе в области линий перелома со стороны периоста образуются костные балочьси сначала единичные, затем в виде сети. Костеобразовательный процесс распределяется в направлении линии перелома. Костные ба-

лочки строятся на основе хрящевой ткани мозоли по типу обычного энхондрального окостенения (Хэм А., Кормак Д., 1983). В последующем хрящевая ткань постепенно рассасывается и замещается костной тканью, Эндостальная мозоль, как правило, выражена значительно слабее, сразу строится как костная, без хрящевой стадии. И периостальная й эндостальная мозоли - образования временные (Маркс В.О., 1967).

По исследованиям Г.И. Лаврищевой, Т.П. Виноградовой (1974) спаивает концы отломков по линии перелома интермедиарная мозоль, которая образуется позднее периостальной и эндостальной мозолей. Работы Э.Я. Дуброва и Г.И. Лаврищевой (1966) показали, что для образования инт ермедиарной мозоли по всей линии перелома необходима щель между отломками шириной 100 мкм для лучшего прорастания сосудов со стороны периоста или зндоста. При уничтожении щели (пу-* тем взаимодавления отломков) сращение резко замедляется или вовсе нарушается (Смольянников П.В., 1962). Периостальная и эндостальная мозоли сами по себе не знаменуют сращения отломков, так как периостальная, в основном, осуществляет лишь фиксацию, необходимую для процесса сращения (Виноградова Т.П., Лавршцева Г.И., 1974). После образования достаточно крепкой интермедиарной мозоли, эндостальная и периостальная мозоли полностью редуцируются. Вновь образовавшаяся костная ткань не имеет законченного строения и в функции-ональном отношении неполноценна (Аврунин А.С. с соавт., 1994).

В заключительной фазе репарации поврежденной костной области наблюдается обратное развитие мозоли с перегруппировкой костных балок согласно законам статики и динамики. Со временем место бывшего перелома по своей архитектонике приближается к нормальной

кости (Каплан A.B., 1967; Суханов A.B. с соавт., 1997).

Согласно анализу выше приведенных литературных данных можно представить схему стадий сращения перелома трубчатых костей в условиях неполного обездвижения отломков (по Т.П. Виноградовой и Г.И.Лаврищевой, 1974):

1. Непосредственная местная тканевая реакция на травму (сосудистая, пролиферация клеток);

2. Фиксация отломков путем образования периостальной мозоли; формирование эндостальной мозоли;

3. Период собственно сращения отломков: образование интермедиальной мозоли с постепенной регрессией периостальной и эндостальной мозолей;

4. Период функциональной адаптации кости (путем длительной перестройки);

Все сказанное относится к диафизарным переломам, которые были также моделированы в настоящем исследовании.

Регенерация неполных дефектов диафизов трубчатых костей (в отсутствии пластического замещения) осуществляется подобным образом. По данным Г.И.Лаврищевой и Г.А.Оноприенко (1996), заживление таких дефектов неизменно происходит через стадию образования хряща и соединительной ткани. При разрушении богаторазвитой сосудистой сети костномозгового канала репаративные процессы развиваются очень медленно: у крыс через 6 недель после подобной травмы полноценная костная структура не восстанавливается (Виноградова Т.П., Лавршцева Г.И., 1974). Низкие темпы регенерации в такой ситуации указывают на необходимость применения пластического замещения

дефекта костным трансплантатом или дополнительной медикаментозной стимуляции.

По данным ряда литературных источников (Смольянников A.B., 1962; Каплан A.B., 1979), заживление переломов губчатых костей и губчатых отделов длинных костей требует иных условий.

В губчатой кости сосудистая сеть широких костномозговых пространств обеспечивает развитие остеогенеза сразу же после повреждения. Сращение отломков губчатых костей возможно лишь при плотном их сближении (величина межотломковой щели не более 1-2 мм), при отсутствии таких условий костное сращение не наступает. В компактной кости неполная адаптация отломков друг к другу часто может компенсироваться приспособительной реакцией со стороны периоста, развитого в диафизарной части трубчатой кости и отсутствующей в эпи-физарных концах (Лавршцева Г.И., Оноприенко Г.А., 1996). Это лишает губчатую кость эпифизов возможности проявления таких адаптационных процессов, направленных на сращение отломков кости.

1.2. Способы рефляции регенераторных способностей костной

ткани

Исследования ряда авторов (Илизарова Г.И., 1962; Виноградова Т.П., Лаврищевой Г.И., 1974; Каплан A.B., 1979) показали, что местными факторами, которые определяют характер регенерации костной ткани, являются:

1. Степень сопоставления отломков;

2. Прочность фиксации отломков;

3. Степень повреждения надкостницы, костного мозга и мышц, окружающих кость;

4. Вид поврежденной кости (губчатая или компактная);

5. Функции поврежденной кости.

Так же фактором, влияющим на восстановление целостности кости при ее повреждениях, являются пролиферативные потенции клеток, участвующих в регенерации и регуляция их дифференцировки (Фри-денштейн А.Я., 1958).

Процесс образования кости происходит при непосредственном участии кровеносных сосудов (Венгеровский И.С., Гендлер Э.М., 1962; Бердников В.А., 1963). Васкуляризация является необходимой предпосылкой для развития энхондрального окостенения. Н.В.Родионовой (1989) была показана тесная связь васкуляризации и остеогенеза при реконструкгивно восстановительных процессах кости, а также стимуляция остеогенеза в условиях выраженного кровоснабжения. Так развитие остеогенных клеток имплантата происходит только после врастания в него кровеносных сосудов (Лаврищева Г.И., Карпов С.П., Бачу И.С, 1981). Имплантация сосудистого пучка в неваскуляризованные зоны костей при лечении асептических некрозов, несросшихся переломов и ложных суставов ведет к стимуляции процессов остеогенеза (Гришин И.Г., Лаврищева Г.И., Диваков М.Г.,1983).

Считается (Мажуга П.М.,1966; Ш&1,1971; Кигапе1 О.В., 1ее Ш. Б. 8.,1980), что клетки врастающих в зону остеогенеза кровеносных сосудов могут быть источниками остеобластов. Речь идет об адвенти-циальных клетках, лежащих вдоль капилляров.

Рыхлая соединительная ткань эндоста и периоста рассматривается

как продолжение стромы костного мозга, а ретикулярные клетки стро-мы - как исходные формы остеобластов (Фриденштейн А.Я., Луриа Е.А., 1980; Weiss L., Sakai Н., 1984). При репаративной регенерации эндост становится "активной" структурой со специфическими остео-генными свойствами (Русаков A.B., 1959; Виноградова Т.П., Лавршце-ва Г.И., 1974). Внутренний (камбиальный) слой периоста (надкостницы) отчетливо выражен при репаративной регенерации кости. В этих условиях внутренний слой богат пролиферирующими клетками - от недифференцированных до клеток фибробластического и остеобласти-ческого типа (Родионова Н.В., 1980).

Стромальные клетки костного мозга также принимают участие в формировании клеток хрящевой и фиброзной тканей. Среди клеток костного мозга при культивировании (Лациник Н.В.,Горская Ю.Ф.с со-авт., 1986; Фриденштейн А.Я., Чайлахян Р.К., Герасимов Ю.В., 1986) выделены интенсивно пролиферирующие колониеобразующие фиб-робластические клетки (КОКф), показана возможность дифференци-ровки их в остеобласты с формированием костного вещества. КОКф синтезируют фибронектин, коллаген 1 и 3 типов, выделяют в среду антиген фибробластов - у-глобулин (Лациник Н.В. с соавт., 1986). К настоящему времени накопились данные, характеризующие стромальные механоциты, которые представляют собой более ранние и более поздние предшественники остеобластов, различающиеся по степени диф-ференцировки (Фриденштейн А.Я., Лурия Е.А., 1980).

На основании этой теоретической концепции были проведены эксперименты, в которых на скорость и качество восстановления поврежденной кости воздействовали с помощью клеточных взвесей костно-

мозговых клеток и их первичной культуры (Чобану П.И., Лаврищева Г.И., Козлюк A.C., 1989). Показано, что остеогенез можно стимулировать и в условиях эксперимента на животных, и в клинической практике. Недифференцированные и малодифференцированные соединительнотканные клетки скелетогенной ткани, имеющие мезенхимальное происхождение и содержащиеся среди клеток костного мозга, при введении их в костную рану, пролиферируя, формируют остеобластиче-скую ткань. При этом образуется межклеточное костное вещество, увеличивается объем репаративных костеобразовательных процессов, возникающих при повреждении кости (Owen M., 1977; Tavassoli M., Taka-hashi К., 1982).

Заживление костной травмы не только местный процесс. Оно сопровождается общей реакцией организма, именуемой «синдром перелома» (Cartier et al., 1960). Это выражается в изменениях минерального обмена и мобилизации минеральных солей из различных отделов скелета. На перелом реагирует костная система в целом, а не только поврежденный орган. Методом радиакгивных изотопов была установлена общая реакция скелета на костное повреждение (Kolar J., Babicky А., 1961). Так, у крыс в диафизе бедренной кости при переломе другой одноименной, поглощение радиактивного фосфора превышало норму.

Повреждение кости сопровождается реакцией не только костной системы, но и всего организма.

Считают, что процесс заживления костной раны происходит при непосредственном участии и контроле нервной системы, особенно в начальный период регенерации (Меттсон II., 1982). Вопросы нервной регуляции при повреждении костей нашли свое отражение в ряде работ

(Русаков A.B., 1959; Емец Г.Л. с соавт., 1964; Воробьев H.A., 1967; Виноградова Т.П., Лаврищева Г.И., 1974; Ревелл П.А., 1993). Установлено, что при переломе кости в регенерате, образующимся в первые дни после травмы, нервные волоконца, отходящие от предсуществовавших нервов параостальных тканей, появляются уже в первые дни после перелома. Это обеспечивает появление связи между очагом поражения кости и организмом в целом через центральную нервную систему. Перевязка периферических нервов, как и длительное торможение коры головного мозга, приводит к замедлению регенерации ( Хомулло Г.В., 1964).

Процесс остеогенеза также находится и под контролем гормональной системы организма и целого рада других биологически активных веществ (факторов роста, ферментов, витаминов). Механизм действия на пролиферативную активность и метаболизм клеток костной ткани паратиреоидного гормона, кальцитонина, саматотропного гормона, стероидных гормонов, а также витаминов А, С, Д представлены в специальных исследованиях (Торбенко В.П., Касавина B.C., 1977; Aaron J., 1976; Hall В.К., Dickson I.R., 1985; Щепеткин И.А., 1994).

Паратгормон (ПТГ), продуцируемый клетками паращитовидной железы, активизирует остеокластическую резорбцию и остеоцитарный остеолиз, тормозит синтез коллагена в остеобластах, стимулирует превращение преостеокластов в остеокласты (Heath J.K., Alkinson S.G., et al., 1984). Основное действие этого гормона - повышение уровня каль-цияв крови (Булатов A.A., 1976). Однократное введение паратиреоидного гормона в организм стимулирует костную резорбцию и ингибиру-ет костеобразование, тогда как хроническое ежедневное применение

препарата в низких дозах приводит к увеличению костеобразования у животных (Guness-Hey M., Hock I. M., 1984; Raisz L.G.,1985). Ростсти-мулирующее действие ПТГ, а также ПТГ-родственного гормона, по-видимому, связано со стимулящтей этими гормонами секреции полипептидных факторов роста (ПФР) (Bell G.I., 1985; Linkhart Т.A., Mohan S., 1989).

Кальцитонин образуется в богатых митохондриями околофолликулярных клетках щитовидной железы. Основное действие этого гормона состоит в торможении остеокластической резорбции, т.е. угнетает действие ПТГ, а так же регулирует функциональную активность остеобластов (Булатов A.A., 1976). В опытах in vitro в остеобластах кальцитонин тормозит синтез производных гиалуроновой кислоты (Severson A.R., 1985).

Гормоны щитовидной железы (тироксин, трийодтиронин) позитивно влияют на активность остеобластов, стимулируя процесс остео-генеза. При ггтофункции щитовидной железы регенерация протекает вяло, образуется неполноценная костная мозоль (Кравченко Г.Ф., 1987).

Соматотропный гормон (гормон роста) индуцирует секрецию некоторых полипептидных факторов роста клетками костной ткани. Отмечен его положительный эффект на восстановительные процессы поврежденной костной ткани (Щепеткин И.А., 1994).

Кортикостероиды (кортизол) тормозят синтез органических веществ кости, коллагена, гликопротеидов, снижают скорость включения минеральных веществ в костную ткань (Баланж А., Блажек И., 1982).

Половые гормоны (эстрогены) усиливают активность остеобластов

оказывая тем самым влияние на рост и минерализацию кости. 17ß-эстрадиол подавляет секрецию интерферона - ß2 остеобластами и стимулирует синтез трансформирующего фактора роста (ТФР-ß) (Finkelman R.D.,1991; Roodman G.D.,1992). Интерлегасин и интерферон- ß2 являются стимуляторами процесса костной резорбции. Андро-гены угнетают рост хряща и задерживают процессы резорбции костей, стимулируя рост и интенсивность минерализации костной мозоли, повышают синтез и обмен протеогликанов (Antosz М.Е., Bellows C.G., 1987).

Несмотря на мощные потенции организма к остеоиндукции при повреждениях скелета, несмотря на казалось бы отлаженные регуля-торные местные процессы, заживление костной раны (перелом, дефект) бывает замедленно и затянуто во времени. Ученые, врачи с давних времен пытались найти все более продвинутые методы стимуляции процесса регенерации костной ткани.

Так, использование гормонотерапии даёт ускоряющий эффект в репарации переломов на первых этапах заживления. Было установлено, что солевой экстракт из цельных надпочечных желёз оказался наиболее эффективным для стимуляции васкуляризации в области переломов (Kiss F.A., 1964).

Отмечен положительный эффект гормона роста (СТГ) (Koskinen, 1967). Гормон роста индуцирует секрецию ряда ПФР, например, инсу-линподобного фактора роста (ИФР), клетками костной ткани и печени, а также увеличивает число рецепторов к ИФР на остеобластах (Scheven В.А.,1991; Watanade N.,1985). Недавние исследования подтвердили, что у людей, имеющих дефекты рецепторов к СТГ на

клетках-мишенях, наблюдаются низкие концентрации ИФР в сыворотке крови (Goddard A.D., 1995).

Андрогены, эстрогены, тироксин тоже увеличивают скорость регенераторной реакции, хотя и в меньшей степени, чем гормон роста (Аврунин A.C. с соавт., 1998).

Было установлено, что успешное заживление перелома во многом зависит от темпов биосинтеза белков остеогенными клетками. Поскольку биосинтез белков регулируется нуклеиновыми кислотами можно ожидать, что искусственное введение животным гомологичной РНК вызывает интенсификацию репаративного остеогенеза (Панков Е.Я., 1966). Экзогенная РНК рассматривается как спецефический индуктор, реализующий своё действие через генный аппарат клеток (Трубников В.Ф. с соавт., 1969).

Так же отмечено остеопоэтическое влияние сыворотки крови животных, перенесших костную травму (Соловьев Г.С., 1974; Дунаев П.В., 1975). Авторами обнаружено, что сыворотка стимулирует процессы репарации костной ткани, ускоряя дифференцировку элементов остеобластического ряда и их предшественников в очагах эктопического остеогенеза (Соловьев Г.С., Колпаков В.В., 1973). Остеогенный эффект сыворотки крови животных со скелетной травмой обусловлен усиленным выходом в кровь, синтезированных костными клетками и десорбированных с веществами костного матрикса. полипептидных факторов роста (Новохатский A.C., 1994).

Резюмируя представленный выше краткий обзор исследований по репаративной регенерации костной ткани можно отметить, что много-числештыми учеными внесен значительный вклад в разработку наибо-

лее эффективных методов воздействия на скорость репаративного ос-теогенеза, однако рад вопросов до конца еще не изучен. Достаточно дискуссионным остается вопрос об использовании полипептидных факторов роста (ПФР) для регуляции регенерации костной ткани после травмы.

1.3. Роль полипептидных факторов роста в регуляции регенераторных способностей костной ткани

Способность деминерализованного костного матрикса (ДКМ) индуцировать регенерацию травм скелета была обнаружена в 1889 году (Senn N., 1889). Позже было установлено, что внутремышечная имплантация ДКМ крысам приводит к эктопическому костеобразованию (Van de Putte К.A., Urist M.R., 1965). Как оказалось, за остеогенную активность ДКМ ответственна содержащаяся в нем бежовая субстанция - морфогенетический белок кости (МБК) (Urist M.R., Strates B.S., 1971). Сейчас уже известно семь МБК (Мг=16-18 кД). Согласно более поздним исследованиям, скелетная ткань является источником целого ряда полипептидов, модулирующих функциональную активность остеоген-ных клеток (Романчиков Ю.М., 1991; Щепеткин И.А., 1994).

Из среды инкубации костных клеток и костных органных культур был выделен ряд ПФР, модулирующих функциональную активность клеток костной ткани: инсулиноподобные факторы роста (ИФР) 1 и 2; факторы роста фибробластов (ФРФ); трансформирующие факторы роста (ТФР) ßi и ß2; фактор роста тромбоцитарного происхождения (ФРТП); эпидермальный фактор роста (ЭФР), монокины, лимфокины и др. Во-первых, эти вещества относятся к классу "цитокинов", оказывающих ростомодулирующее и цитодифференцирующее влияние на

активность клеток, а во-вторых, к группе так называемых тголипептид-ных факторов роста (ПФР). Благодаря своим свойствам относительно костной ткани ПФР именуются так же, как полипептидные факторы остеогенеза - ПФО (Щепеткин И.А., 1994). Некоторые из полипептидных факторов, например, ТФР-ß, ИФР, МБК представлены в костной ткани в значительном количестве, тогда как содержание других (ФРТП, ЭФР) невелико (Trippel S.B. et al., 1997).

Описанию свойств ПФР посвящен ряд обзорных статей (Fisher L,W., Termin J.D., 1985; Goldring M.B., Goldring S.R., 1990; Finkelman R.D., 1992; Trippel S.B. et al., 1997; Lind M., 1998), однако продолжаются исследования как по механизмам действия уже известных ФР, так и по описанию новых белковых регуляторов.

Мнсулинподебные факторы роста (ИФР)

В сыворотке крови животных и человека были обнаружены поли-пеитидные факторы роста, структурно сходные с проинсулином и названные инсулинподобными факторами роста (ИФР) (Holly J.M.P., Wass J.A.H., 1989). Наиболее подробно охарактеризованы два из них: ИФР-1 (Mr 7,7 кД), ИФР-2 (Mr 7,5 кД). Инсулиноподобные факторы роста (ИФР) регулируют митотичеекие и метаболические функции клеток костной и других тканей организма.

ИФР-1 стимулирует пролиферацию преостеобластов и дифферен-цировку остеобластов, активизирует остеокласты (Merrimen H.L., 1990). При исследованиях in vivo было продемонстрировано, что систематическое введение ИФР-1 способствовало заживлению дефекта скуловой дуги (Thaller S.R. et al, 1993), а также дефекта черепа у крыс

(Dart A. et al., 1993; Vasconez О. et al., 1994).

ИФР-2 влияет на функции дифференцирующихся костных клеток (Mohan S., Baylink D.J., 1991). Он дозозависимо стимулирует синтез коллагена первого типа в линии остеоблаетных клеток (Martin J.L., Baxter R.C., 1986).

ИФР- 1 и ЙФР-2 в сыворотке крови, тканевых экстрактах и куль-туральной среде различных типов клеток, связаны со специфическими белками (ИФР-СБ), играющими важную роль в регуляции действия ИФР и обладающими собственными эффектами на костные клетки (Baxter R.C., 1986; Mohan S., Baylink D. J., 1991).

Содержание ИФР и ИФР-СБ в организме регулируется сомато-тропным гормоном аденогипофиза (Canalis Е,, 1979).

Эпвдермальный фактор роста (ЭФР)

ЭФР (Мг=6 кД) в зависимости от эксперимента может изменять пролиферативный потенциал клеток остеобластной линии и индуцировать резорбцию костной ткани (Antosz М.Е., Bellows C.G., 1987). При систематическом введении ЭФР крысам с различными костными травмами наблюдалась стимуляция периостального и эндостального косте-образования и остеобластической активности (Marie P.J., Hott M., 1990).

Трансформирующий фактор роста (ТФР-ß)

Экспериментально установлено, что ТФР-ß (Mr 25 кД) играет важную роль при образовании, ремоделировании и репарации кости (Robey P.G., Young M.F., 1987). ТФР-ß способен ингибировать резор-бирующие свойства остеокластов и стимулирует синтез остеобластами

таких белков матрикса кости, как коллагены, протеогликаны, остео-понтин и др (Mackie E.I., 1990; Sandberg М. et al., 1988).

Многосторонность действия этого регулягорного белка на клетки костной ткани объясняются и его способностью модулировать синтез ПФО и простагландинов (Marcelli С., Yates A.I., 1990). Экзогенное введение ТФР-ß может активизировать заживление костных дефектов (Lind М., et al., 1993). При подкожном его введении наблюдалась стимуляция регенерации дефектов черепа у кроликов (Beck L.S. et al., 1993), а также перелома болыпеберцовой кости у крыс (Nielsen Н.М., et al., 1994).

Фактор роста фибробластов (ФРФ)

В костном матриксе обнаружены основная (Мг=16кД) и кислая (Мг=Т7кД) формы ФРФ (Hauchka P.V., Mavrakos А.Е. et al., 1986). Общим эффектом обеих форм ФРФ является стимуляция пролиферации широкого спектра клеток, в том числе хондроцитов и остеобластов (Roberts A.B., Sporn М.В., 1985). Местное введение ФРФ экспериментальным животным с моделью перелома стимулировало образование костно-хрящевой мозоли (Lind М., 1998).

Фактор роста тромбоцитарного происхождения (ФРТП)

ФРТП (Mr 28-35 кД) увеличивает скорость синтеза коллагена и не-коллагеновых белков в культурах остеобластов (Centrella М. et al., 1989), стимулирует синтез ДНК и репликацию в культурах клеток костной ткани (Canalis Е., 1988). Кроме того, ФРТП способен стимулировать костную резорбцию (Tashjian А.Н. et al., 1982).

Терапевтический потенциал факторов роста более мощный при комбинированном их использовании (Pfeilschifter J. et al., 1990). Taie, комбинированные ФРТП и ИФР-1 вводились местно при лечении костных дефектов у взрослых свиней. При этом параметры костной мозоли были значительно выше, чем у животных, пролеченных ФРТП и ИФР-1 в отдельности (Lyïich S.E. et al., 1994).

Еще до обнаружения специфического воздействия на костные клетки большинство из факторов роста были обнаружены в сыворотке крови (Филимонов В.И. с соавт., 1977; Лепехова Н.П., 1979). Была предложена концепция высвобождения сорбированных минеральной фазой кости белковых факторов в гуморальное русло вследствие резорбции (Десягниченко К.С., Балдин Ю.П., 1984; Lind M., 1998). Предполагается, что в отсутствии патологии в крови существует базальный уровень концентрации этих факторов за счет физиологического ремо-делирования кости. Деминерализующий сигнал различной природы (химический, механический и др.) ведет к интенсификации процессов резорбции, следствием чего является каскадное высвобождение цито-кинов из костного матрикса и увеличение их концентрации в крови (Щепеткин И.А., 1994). Предполагают, что ПФР могут оказывать системные эффекты на скелетную и другие ткани, достигая клеток-мишеней гуморальным путем.

Многочисленные экспериментальные данные свидетельствуют, что ПФР являются медиаторами действия ряда остеотропных гормонов гипофиза (Watanabe N., et al., 1985; Scheven В.A.A., Hamilton N.J., 1991). Установлено, что гормоны аденопшофиза высвобождаются в систему циркуляции и доставляются к клеткам-мишеням костной тка-

ни и печени, взаимодействуя со специфическими рецепторами на поверхности этих клеток и стимулируя их к наработке ПФР (Holly J.M.P., Wass J.A.H., 1989). Затем ПФР могут поступать в систему кровотока и достигать своих клеток-мишеней, могут действовать местно, взаимодействуя с собственными клетками-продуцентами или с соседними клетками (Sporn М.В., Todaro G.J., 1980; Trippel S.B., 1992).

Так ФРФ и ТФР - ß оказывают регулягорное влияние на клетки капиллярной сети. Мишенями в этом случае могут быть перициты микро- сосудов, видимо являющиеся предшественниками остеобластов (Михайлова Л.Н., Палицин A.A., 1986), а также эндотелеоциты. Эндотелиальные клетки в свою очередь через сеть медиаторов способны регулировать процесс перестройки костной ткани посредством сек-ретируемого белка эндотелина, который ингибирует резорбцию кости остеокластами и модулирует функции остеобластов (Zaidi М., Alam A.S., 1993).

Считают, что механизм местного воздействия ФР на остеогенные клетки связан с рецептор-модулирующим действием ПФР (Кусень С.И., Стойка P.C., 1985).

Клетки-мишени имеют высоко аффинные рецепторы к ПФР на поверхности клеточных мембран (Goldring М.В., Goldring S.R., 1990).

Исследования показывают, что ПФР взаимодействуют со специфическими рецепторами и через сеть внутриклеточных медиаторов (цАМФ, аРНК) влияют на экспрессию генов, регулирующих регенерацию костной ткани на различных этапах: пролиферации остеогенных клеток и секреции белков экстраклеточного матрикса ( коллагена типа 1; фибронекгина, ТФР-ß и др. ПФО); созревания и организации зрелого

экстраклеточного матрикса - процессов, сопровождающихся экспрессией щелочной фосфотазы; продукцией остеокальцина и остеопонтина, отложением в матриксе гидроксиапатита (Johnson C.L. et al., 1994; Trippel S.B. et al., 1997).

Лиганд

Рсцсптор-

связывающая область Клеточная мембрана

Родственная <)>ермент-ная область 1 г yf Цигоплашатические z' факторы

Тождествеиный ()>ерментатив-ный каскад

Другие регуля-ТОрНЫС П}ТИ

Факторы тпанекпипиии

Ядро

ДНК

1

> мРНК

Протеин i

Клеточное деление

Продукт клеточного синтеза

Рис. 1 Схема регуляции клеточной активности фактором роста (noTrippel S.B.,1997)

Таким образом, в последнее десятилетие накоплено значительное количество экспериментального и теоретического материала, свидетельствующего, что процессы остеогенеза и резорбции кости находятся

под регуляторным контролем не только нервной и гормональной систем, но и остеотропных полипептидных факторов. Представляет интерес разработка лекарственных средств с включением полипептидных факторов роста, получаемых из природных источников, с целью коррекции и стимуляции регенерации костной ткани при ее повреждениях.

1.4 Остеоиндуктивные препараты, содержащие полипептидные факторы роста

Согласно литературным данным (Добряков Ю.И., 1968; Kong Y.C. et al., 1986; Fennessy P., 1989), разработаны способы очистки ПФР из тканей животных и на их основе уже получены некоторые препараты с остеоиндуктивными свойствами для лечения переломов кости и дефектов скелета.

В 1986 году Y.C.Kong, P.Fennessy, M.C.Belew и др. выделили впервые эпидермальный фактор роста (ЭФР) из вельвета пантов красного оленя, используя ионнообменную хроматографию и гель-фильтрацию.

Панты - нежная, растущая ткань с небольшой степенью окостенения. В них содержатся органические вещества (52-57%), зола (30-35%), азот (9-10%), жиры (Добряков Ю.И., 1970). В золе пантов марала было обнаружено 20 элементов, основную часть составляют Са, Mg, Fe, Si, Р, К, Na. Из пантов выделено 25 различных аминокислот, 38% из которых составляют глицин, пролин, глутаминовая кислота (Силаев А. Б. с соавт., 1969). Наружний слой пантов богат мезенхимальными клетками, сосредоточенными вокруг волосянных луковиц, сальных желез и кровеносных сосудов. В мозговом слое - хондроидные тяжи с форми-

рующимися костными клетками. Наибольшее количество биологически-активных веществ в верхушке панта (на 25% выше, чем в других частях) (Добряков Ю.И., 1968).

В растущем роге самца красного оленя был установлен повышенный уровень гогсулинопободного фактора роста (ИФР-1) (Fennessy Р., Gtuckman P.D., 1989). Авторы открыли возможность участия этого фактора в регулировании развития пантов. Была продемонстрированна связь между ростом пантового хряща (вельветовый пант) и уровнем ИФР-1. Исследователи показали, что уровень плазменного ИФР значительно повышается во время роста вельветовых пантов. ИФР-1 стимулирует рост органа индивидуально, по принципу гормональной регуляции на уровне митотических и метаболических функций клеток костной, хрящевой и других тканей (Hock J.M., Centrella М., 1988).

Итак, препараты, приготовленные на основе пантов оленей (пантокрин, рантарин и др.), обладают широким спектром действия на организм (Любимов И.М., 1960; Брехман И.И., Добряков Ю.И., Кириллов О.И., 1978; Доценко З.М., Пугач П.В. с соавт., 1992). В том числе эти композиционные материалы рассматриваются и как средства активизации репаративных процессов организма (Алексеев Д., 1975; Путач П.В., Руткевич Ю.В. с соавт., 1992). В связи с этим вышеперечисленные препараты использовались в хирургической практике, для лечения переломов и обширных долго незаживающее кожномышечных ран (Юдин A.M., 1993). Исследования иностранных ученых (Fennessy Р., Gtuckman P.D., 1989) заостряют наше внимание на заслуге полипептидных факторов роста (ЭФР, ИФР-1; 2 и других), входящих в состав этих препаратов, в стгшуляции регенерации тканей.

В последнее время стали внедряться в практику препараты из крови оленей, которые, как выяснилось, часто обладают сходным действием с препаратами, приготовленными на основе экстрактов из пантов, но в гемопрепаратах меньше гонадотропных гормонов (Chunyi Li et al., 1989). Все больше появляется работ о максимальной переработке крови животных и использовании сухих препаратов плазмы, белковых гидролизатов, применении технологии безотходной переработки сыворотки и плазмы (Соловьев Г.С., Колпаков В.В., 1973; Десягниченко К.С. с соавт., 1992; Новохотский А.С., 1994).

Результаты исследований показали, что кровь из пантов и сосудов тела оленей обладает одинаковой биологической активностью (Брызгалов Г.Я., 1991). Примером препаратов из крови может служить «Пан-тогематоген», «Рангем», которые стимулируют обмен веществ, обладают антианемическим действием, повышают пролиферативные способности тканей (Юдин A.M., 1993).

В 1994 году в городе Барнауле был получен препарат «ПЛАЗМАРАЛ» из плазмы крови маралов (периода интенсивного роста пантов). Выяснилось, что он содержит полипептидные факторы роста (ЭФР, ИФР - 1), витамины, микроэлементы. «ПЛАЗМАРАЛ» обла- , дает воздействием на регенераторные способности тканей, а также адатгтогенным, антистрессорным действием, повышает иммунитет.

В клиниках Барнаула показаны способности этого препарата ускорять процесс заживления кожномышечных ран. Препарат показан при артрозах и артритах, при остеопорозе, остеохондрозе. Но механизм и характер воздействия «Плазмарала» на костную ткань остается не выясненным. В связи с этим, на было предпринято иссле-

дование остеоиндуктивных свойств этого препарата, морфофункцио-нальных особенностей репаратнвного остеогенеза при моделировании различных видов костных повреждений и вероятного механизма его воздействия на процесс регенерации. Данной проблеме посвящены главы собственных исследований.

Заключение диссертации по теме «Физиология», Сигарева, Наталия Александровна

2. Результаты исследования морфофункциональных особенностей регенерации костной ткани при введении препарата "Плазмарал" могут быть использованы в учебном процессе на медицинских, ветеринарных и биологических факультетах.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сигарева, Наталия Александровна, 1999 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аврунин А. С, Корнилов Н. В. Обмен фосфатов минерального мат-рикса интактных костей после единичных и множественных переломов /У Бюлл. Эксиер. биол. и мед. -1992. -№3,- С. 322 - 324.

2. Аврупин А. С., Корнилов Н.В, Смирнов A.M. Динамика процессов репаративной регенерации при диафизарных переломах длинных трубчатых костей // Травматол. и ортопед. России. - 1994. - С.111 -120.

3. Автандилов Г.Г, Яблучанский Н. И., Губенко В.Г.Системная стереометрия в изучении патологического процесса. - М, 1981.

4. Алексеев Д. Рантарин // Химия и жизнь. - 1975. - №8. - С. 104.

5. Баланж А., Балажек И. Эндогенные ингибиторы клеточной пролиферации. - М. :Мир, 1982. - 302 с.

6. Белендер 3. Н. Процессы регенерации и васкуляризации, их взаимосвязь и взаимообусловленность // Материалы сессии ЦИТО с институтами травматологии и ортопедии и протезирования Украины. - Харьков, 1967. -С.144-146.

7. Бердттиков В.А. Регенерация костной ткани при различных условиях кровоснабжения // Ортопед.травматол. - 1963. - №7. - С.34-38.

8. Богданов Ф. Р, Крамеров И.А. Регенерация костной ткани в различных условиях остеосинтеза // Труды IV съезда травматологов и ортопедов Украины. - Киев. - 1960. - С.112-123.

9. Брехман И.И, Добряков Ю. И, Кириллов О. И. и др. Формакологиче-ские свойства раитарииа. Сообщ. 2. Экспериментальные исследоваштя

препарата, характеризующие его специфические свойства ff Биологические ресурсы Восточной и Юго - Восточной Азии и их использование . - Владивосток : ДВНЦ АН СССР, 1978. - С. 94-100.

10. Брызгалов Г. Я. Биологические и физико - химические св - ва крови пятнистого оленя // Сб. научн. трудов / Магаданский ЗНИИСХ Северо - Востока . - Новосибирск. -1991. - С. 94 -100.

11. Булатов A.A. Паратгормон и кальцитонин : Биохимия гормонов и гормональная регуляция. - М.: Наука, 1976. - С. 126-144.

12. Венгеровский И.С., Гендлер Э.М. Значение кровеносных сосудов в заживлении переломов костей. В кн.;Вопросы хирургии детского возраста. - Свердловск, 1962. - С.263.

13. Виноградова Т.П., Лаврищева Г .И. Регенерация и пересадка костей. -М.: Мед.,1974.-247 с.

14. Влияние белковых рострегулирующих факторов внеклеточного мат-рикса костной ткани на репаративный остеогенез и кроветворение / Десягниченко К. С., Балдин Ю., Дьячков А. Н. и др. // Цитология. -1989. -Т.31.-№9. -С, 92.

15. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. - М.: Мед., 1971. - 289 с.

16. Воробьев H.A. Общие закономерности репаративной регенерации костной ткани // Материалы сессии ЦИТО с институтами травматологии, ортопедии и протезирования Украины. - Харьков, 1967, -

С. 127-130.

17. Выделение и биотестирование костных рострегулирующих факторов / Десягниченко К. С., Балдин Ю.П., Дьячков А.Н. и др. // Методические рекомендации. - Курган, 1990. - С. 24.

18. Грибанов Г. А, Базанов Г.А. Модификация ультрамикроопределе-ния общего и неорганического фосфоров с помощью малахитового зеленого /7 Лабораторное дело. - 1976. - № 19. - С. 527-530.

19. Гришин И. Г, Лаврищева Г.И, Диваков М. Г. О развитии сосудистой сети при имплантации сосудистого пучка в аваскуляризованные зоны костей /7 Ортопедия, травматология и протезирование . - 1983. -№8.-С. 5-10.

20. Десягниченко К.С, Балдин Ю.П. Физико- химические свойства не-коллагеновых белков органического матрикса костной ткани // Тез.докл. V съезда травматологов-ортопедов респ. Закавказья. - Ереван , 1984.-С. 153-155.

21. Добряков Ю.И. К вопросу о биологической активности разных частей панта /7 Некоторые вопросы биологии и медицины на Дальнем Востоке. - Владивосток, 1968. - С. 8-10.

22. Добряков Ю.И. Лекарственные средства Дальнего Востока : Панты. - Владивосток, 1970. - 40 с.

23. Доценко З.М., Пугач Б.В., Губчешсо E.H., Диденко С.О., Солодова Е.В., Вакуленко Л.В. О биологической активности фракции пантокрина /7 Перспективы развития пантового оленеводства : пути совершенствования технологии производства и использование его продукции : Доклады Всесоюзного рабочего семинара. - Новосибирск, 1992. -С.19-27.

24. Дунаев П.В., Соловьев Г.С. Влияние сыворотки крови животных с травмой органов скелета на процессы остеогенеза в имплантатах эмбрионального хряща .//' Дифференцировка клеток в гисто- и органоге-незах : Мат-лы 111 Всесоюзного симпозиума. - Киев, 1975. С. 112-116.

25. Емец Г.Л., Толстопягов Б.А., Шиндер К.Т. и др. Процесс репара-тивной регенерации костной ткани при компрессионном остеосинтезе // Труды 1-го Всесоюзного Съезда травматологов и ортопедов.- М., 1965. - С. 337-338.

26. Илизаров Г.А. Десятилетний опыт применения аппарата автора при компрессионном остеосинтезе в травматологии и ортопедии. В кн.:

. Вопросы восстановительной хирургии травматологии и ортопедии. Т.8. - Свердловск, 1962. - С.14- 21.

27. Илизаров Г.А., Попова Л.А., Шевцов В.И. Метод чрескостного ос-теосинтеза - новый этап в развитии отечественной травматологии и ортопед гот//Ортопед. Травматол. - 1986. №1. - С.1 -5.

28. Каплан A.B., Чернавский В.А. Основные вопросы теории и пластики лечения переломов трубчатых костей // Ортопед.травматол. - 1967. -№ И. - С. 20-26.

29. Каплан A.B. Повреждения костей и суставов. - М.: Мед., 1979. -540 с.

30. Корж П.И., Белоус A.M., Панков Е.Я. Репаративная регенерация кости. - М.: Медицина. - 1972. - 232 с.

31. Кравченко Г.Ф., Мацун В.М., Парамонова Н.В., Слюсар H.H. К вопросу о механизме действия тироидных гормонов /7 Репаративная регенерация и гормоны: Сб. научн.трудов. - 1987. - С. 54.

32. Кусень С.И., Стойка P.C. Молекулярные механизмы в действии полипептидных факторов. - М.: Наука, 1985. - 240 с.

33. Лаврищева Г. И., Дубров Э.Я. О значении наличия и величины диастаза между отломками при сращении переломов костей первичным заживлением. В кн.: Материалы научной сессии по травматологии и ортопедии. - Рига, 1966. - С. 373-375.

34. Лавршцева Г.И., Карпов С.П, Бачу И.С. Регенерация и кровоснабжение костей. - Кишинев: Штииница, 1981. - С. 150.

35. Лавршцева Г. И, Оноприенко Г.А. Морфологические и клинические аспекты репаративной регенерации опорных органов и тканей. -М.: Медицина, 1996. - 208 с.

36. Лащшик Н.В., Горская Ю.Ф., Трошева А.Г. и др. Содержание стромальных колониеобразующих клеток (КОКФ) в костном мозге мышей и клональная природа образуемых ими колоний фибробластов // Онтогенез. - 1986. - Т. 17, № 1. - С. 27 - 35.

37. Лепехова Н.П. Биохимические показатели в оценке гуморальных влияний на репаративную реакцию кости: Авто-реф.дис...канд.биол.наук - Ташкент, 1979. - 18 с.

38. Любимов И.М. Как добывают пантокрин // Природа. - 1960. - №4. -С. 117.

39. Мажуга П.М. Функциональная морфология кровеносных сосудов конечностей человека и животных. - Киев: Наук.думка, 1966. - 258 с.

40. Маркс В.О. Заживление закрытого перелома кости - Минск, 1962.-С. 7-34.

41. Маркс В.О. Регенерация кости в эксперименте и клинике заживления переломов // Материалы сессии ЦИТО с институтами травматологии, ортопедии и протезирования Украины .- Харьков, 1967. -

С. 130 - 133.

42. Меркулов Г.А. Курс патологогистохимической техники. - М.: Мед, 1969.-300 с.

43. Михайлова Л.Н., Палицин A.A. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1986.- № 6. - С. 755.

44. Мэттсон П. Регенерация-настоящее и будущее.-М.: Мир, 1982. -180 с.

45. Новохатский A.C. Ростовые факторы сыворотки Pf крови . Новые возможности получения и применения // Проблемы цитотехнологии : Тез. докл. IV Пущинского совещания « Культтширование клеток жрг-вотных и человека »/ Црттология . - 1994. - Т.36. - № 6. - С.506.

46. О гуморальных механизмах регуляции репаративного остеогенеза / Филимонов В.И., Лепехова Н.П., Недоспасов В.О. и др. // Бюл.эксперим. биол.имед. - 1977.- № 12.- С.725-727.

47. Панков Е. Я. Гистохимия дезоксирибонуклеиновой кислоты в процессе заживления перелома костей // Травматология.- Киев, - 1966.-С.70-73.

48. Пугач Б. В., Руткевргч Ю.Е., Мартыненко O.A., Диденко С.О., До-ценко З.М., БорщевскаяМ.И, Влияние пантокрина на сердечно - сосудистую систему, электрическую активность нейтронов и уровень тестостерона в крови /У Перспективы развтпчия пантового оленеводства: пути совершенствования технологий производства и использование его продукции : Доклады Всесоюзного рабочего семинара. - Барнаул, 1992. - С.35.

49. Ревели П. А. Патология кости . - М.: Медицина, 1993. - С. 267 - 270.

50. Родионова Н.В. Репродукция клеток остеогенного слоя периоста // Цитология и генетика. - 1980. - 14, № 3. -С. 11-18.

51. Родионова Н.В. Функциональная морфология клеток в остеогене-зе.- Киев: Наукова Думка, 1989. - 187с.

52. Романенко В.Д. Физиология кальциевого обмена. - Киев : Наукова думка, 1975. - С. 172.

53. Романчиков Ю.М. Факторы роста, вторичные мессенджеры и онкогены а Усн.совр. биол. - 1991. - Т. 111. - № 1. - С. 19-33.

54. Русаков А. В. Ввведение в физиологию и патологию костной ткани. В кн.: Многотомное руководство по патологической анатомии. Т. 5. М. : Мед, 1959.-С. 7-532.

55. Салтыков С.А. Стереометрическая металлография . - М.: Металлургия. - 1976. - 271 с.

56. Северин М. В., Юшков Б. Г., Ястребов А.П. Регенерация тканей при экстремальных воздействиях на организм . - Екатеринбург.: Ур-ГМИ, 1993. - С. 185.

57. Силаев А. Б. Катруха Г. С., Шампанова О.М, Тэвил А. С. Аминокислотный и минеральный состав пантокрина // Пантокрин. - Горно -Алтайск, 1969. - С.29 - 32.

58. Смольянников П.В. Переломы костей // Многотомное руководство по патологической анатомии . Т. 6. - М.: Медицина, 1962. С. 13-59.

59. Соловьев Г. С, Колпаков В.В. Дифференцировка костномозговых клеток под влиянием остеопоэтической сыворотки // Материалы VII научно - технической конференции молодых ученых специалистов Тюмени - Тюмень, 1973. - С. 174-176.

60. Соловьев Г.С. Реакция остеогеннмх элементов на действие стимуляторов остеогенеза // Реактивность и пластичность эпителия и соединительной ткани в нормальных, экспериментальных и патологических условиях. //Свердловск, 1974. - С. 27-29.

61. Соловьев Г. С. Факторы стимуляции регенерационных процессов хрящевой и костной тканей // Эпителий и соединительная ткань в нормальных , экспериментальных и патологимческих условиях : тез. конф. морфологов Сибири. - 1974. - С. 27 - 29.

62. Сумароков Д.Д, Гуткин Д.В. Роль белковых факторов короткодис-тантного действия в регуляции остеогенеза в норме и патологии /7 Пат. физиология и эксперим. терапия. - 1987. - № 2. - С.78-80.

63. Суханов П. В. Аврунин A.C., Корнилов Н. В. Перестройка костной ткани после нарушения целостности костей // Морфология . - 1997. -№6. - С, 82 - 87.

64. Торбенко В. П, Касавина Б. С. Функциональная биохимия костной ткани. - М.: Медицина , 1977. - 272 с.

65. Трубников В. Ф, Битчук Д.Д. Захарченко С. Н. , Прокофьев C.B. Экзогенная РНК и скорость регенерации костной ткани // Мат- лы 2 съезда травматологов и ортопедов СССР. - М., 1969. - С.96 - 98.

66. Флоренский Н.Д. Морфогенез костной ткани при заживлении переломов // Хирургия. - 1963. - №5. - С.29-35.

67. Формирование остеопоротических сдвигов в структуре костной ткани / Аврунин A.C., Корнилов Н. В, Суханов A.B., Емельянов В.Г.; Под ред. A.C. Аврунина. - Санкт-Петербург, 1998. - 68 с.

68. Франке Ю, Рунге Г. Остеопороз. - М. : Медицина, 1995. - 245 с.

69. Фриденштейн А.Я, Лурия У. А. Клеточные основы кроветворного микроокружения. - М. : Медицина, 1980. - 216 с.

70. Фриденштейн А.Я, Чайлахян Р.К, Герасимов Ю.В, Пролифера-тивные и дифференциальные потенции скелетогенных костномозговых кологатеобраз\топшх клеток /7 Цитология. -1986. - Т. 28, № 3. - С. 341 - 349.

71. Фукс Б.Б, Фукс Б. PI. Очерки морфологии и гистохимии соединительной ткани. - Ленинград, 1968. - 215 с.

72. Хомулло Г.В. Регенерация тканей в различных условиях нейроэн-докринной регуляции // Материалы 4-ой конференции по вопросам регенерации и клеточного размножения. М., 1964. - С. 146-148.

73. Хэм А., Кормак Д. Гистология Т. 3. - М.: Мир, 1983. - 280 с.

74. Чобану П.И, Лавритцева Г.И, Козлюк А.С. Стимуляция остеогене-за костномозговыми клетками при осложненных переломах. - Кишинев: Штииница, 1989. - 180 с.

75. Щепеткин И. А. Полипептидные факторы остеогенеза И Успехи современной биологии. - 1994. - т. 114. - С. 454-465

76. Юдин A.M. Панты и антлеры : рога как лекарственное сырье. - Н.: Наука, 1993.- 120 с.

77. Aaron S. Histology and microanatomy of bone // Calcium, Phosphate and Magnesium Metabolism. - Edinburg ect., 1976. - P. 298-356.

78. Antosz M.E., Bellows C.C., Aubin S. E, // J.Bone Mineral Res. -1987. - V. 2. P. 385. - цит.по [73]

79. Baxter R.C., Martin J.L., Radioimmunoassay of growth hormon - dependent insulin - like growth factor binding protein in human plasma // J. Clin. Invests. - 1986. - V. 78. - P. 1054-1512.

80. Beck L. S., Amento E.P, Xu Y, Deguzman L, Lee W.P. TGF - beta inluces bone clousure of skull defects if J.Bone and Min. Res. - 1993. - N.8. - P. 753-761.

81. Bell G.J., Gepharol D.S., Fong N.M., Sanchez - Pescador R, Roll L.B. // Proe. Nat. Acad. Sci. U.S.A.- 1985. -V. 82.- P. 6450.- цит.по [73]

82. Berelowitz M., Szabo M., Frohman L.A, Firestone S, Chu L, Hintz R.L. Somatomedin - С mediates growth hovmone negative feedback by effects on both the hypothalamus and the pituitary // Science. - 1981. - V. 212.-P.1279- 1281.

83. Berman J, Loxly R. Two improved and simplified methods for the speetrophotometrie determination of hydroxyproline// Anal. chem. - 1963. -Vol. 35, N12. - P. 1961-1965.

84. Canalis E, Raisz L.G. Effect of EGF on bone formation in vitro // Endocrinology. - 1979. - V. 104. - P.862 - 869.

85. Canalis E. Bone - related growth factors // Tringle. - 1988. - V.27. N 1/2.-P. 11-19.

86. Canalis E. // Bone.- 1993.- V. 14. - P.273.- цит. no [138 ]

87. Cartier P, de Bernard B, Lagrange J. Evolution biochimique de calet reaction du squelette. Bull. Soc. Cliim. Biol. Paris. - 1960. - V. 42,-

p. 427-444.

88. Centrella M, McCarty T.L, Canalis E. Platelat-derived growth factor enhances deocsyribonucleic acid and collagen synthesis in osteoblast-enriched cultures from fatal rat parietal bone // Endocrinology. - 1989. - V. I25.N.1. - P. 13-19.

89. Chunyi L, Zhongan Liu, Shizhen Zhao, Yhao, Yuchuan Du. Изменения уровней содержания тестостерона и эстрадиола в крови в течение роста и развития рогов пятнистого оленя . // ( кит.) ЗЖ 04. Биология. -1989. -GU510.

90. Dart A, Thaller S.R, Tesluk H. The effects of insulin - like growth factor - 1 on critiealsize calvarial defect in Sprague - Dawley rats // Ann. Plast. Surg.- 1993.-V.31.- P. 429 - 433 .

9L Fennessy P, Gtuckman P.D., Corson D. IGF - 1 from growing antlers //

Endocrinology. - 1989. - V. 122,- N. 6. - P. 3005 - 3007. 92. Finkelman R.D., Linkhart T.A, Mohan S, Lan К. - H, Baylink D.J. // Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A. - 1991. - V.88. - P.3657.

93. Finkelman R.D. Growth factors in bones and teeth /7 CDA Journal. -1992. - Vol.20. N.12. - P.23-29.- mix. no [73 ]

94. Fisher L.W., Term in J.D. Noncollagenous proteins influencing the local mechanisms of calcification // Clin. Orthopead. - 1985. - V.200. -

P.362- 385.

95. Goddard A. D, Covello R, Luoh S. M., C-locson T.. Wells J.A. Mutations of the growth hormone receptor in children with idiopathic short stature. // J.Med.- 1995.- V.333.- P. 1093 - 1098.

96. Goldring M.B, Goldring S.R. Skeletal tissue response to cytokines // Clin.Orthopeadics and Rel.Res. - 1990. - N.258. - P. 245-278.

97. Goldring M.B, Goldring S.B. il Crit. Revs in Eukaryotic Gtnt Expression. -1991. -V.l. -P. 301. -m-it. no [73]

98. Guness - Hey M, Hock J. M. // Metabol. Bone Dis. - 1984. - V. 51. - P. 317. no [138]

99. Hall B. K, Dickson I, R. The effects of parathyroid hormone on osteoblast - like cells from embryonic chick calvaria /7 Acta endocrinol. - 1985. -108, N. 2. - P. 217-223.

100. Hauchka P.V, Mavrakos A.T. et al. Growth factors in bone matrix. Isolation of multiple types by affinity chromatography on heparin - sepha-rose / Hauchka P.V, Mavrakos A.E, Iafraty M.D. et al. /7 J.Biol.Chem. -1986. - V.261. - P. 12665-12674.

101. Heath J. K, Alkinson S. G, Meikle M. C, Ktynolds G.G. Mouse osteoblasts synthe size cjllagenase in response to bone resorbing agents /7 Biochim.etbiophys.acta.- 1984.-V. 802.-N. 1. - P.151-154.

102. Hock J.M, Centrella M, Canalis E. Insulin - like growth factor has indepandent effects of bone matrix fromation and cell replication // Endo-ciinology. -1988. - V.l22, - P.254 - 261.

103. Holly J.M.P., Wass J.A.H. Insulin - like growth factors ; autocrine, paraciine or endocrine? New perspectives of somatomedin hypothesis in the light of recent development/7 J.Endocrinol. - 1989. - V. 122. - P.611-618.

104. Johnson G.L, Vaillancourt R.R.' Sequential protein kinase reaction controlling cell growth and differentiation // Curr. Opin. Cell Biol.- 1994.-V.6.- P.230 - 238.

105. Kimmel D. B, See W. S. S. Bone cell kinetics during longitudinal bone growth in the rat // Calcified Tissue Int. - 1980. -V. 32.-N.2. - P. 123-133.

106. Kiss F. A. Osteogenesis in costal cartilage inoluced by administration of local administration of adrenal e[tract // Acta morhhol - 1964. - V.13.- N.l.

- P. 25 - 34.

107. Kolar J., Babicky A. Generalizd skeletal responses on local trauma in joung rats studied by means of GA45- metabolism. Nature . - 1961. -V.192. - P. 1297-1298.

108. Kong Y.C, Fennessy P, Belew M.C. Epidermal Growth Factor from dew subtaxillary gland and velvet antler // General and comporative endocrinology. - 1986.- V.63. - P. 431-440.

109. Koskinen E. V. S. Effect of endocrine factors on callus development in experimental fractures in callus formation.- Budapest, 1967. - P. 315-322.

110. Lind M., Schumacker B., Soballe K., Keller J., Melsen F., Bunger C. Transforming growth factor - beta enhances fracture healing in rabbit tibiae //Acta. Oithop. Scandinavica. - 1993.- N. 64,- P. 553-556.

111. Lind M. Growth factor stimulation of bone healing // A. Orthop. Scand.

- Suppl. 283. - 1998. - V.69. - P. 3-37.

112. Linkhart T.A., Mohan S. // Enlocrinology. - 1989. - V. 125. - P.1484. urn . no [73]

113. Lynch S. E., Trippel S.B., Finkelman R. D., Hernandez R. A, Kiritsy C.P, Antoniades H.N. Hie combination of platelet - derived growth factor -BB and insulin - like growth factor - 1 stimulates bone repair in adult Yucatan miniaturer pigs // Wound Repair Regen. -1994,- V.2.- P. 182 - 190.

114. Mackie E. I, Trechsel U. // Bohe. - 1990.- V. 11.- P.295.- hut. no [138]

115. Marcelli C, Yates A.I, Munoly G.R. // S. Bone Mineral Res. - 1990. -V.5. - P. 1087. -iwt. no [73]

116. Martin J.L, Baxter R.C. Insulin - like growth factor - binding protein from human plasma // S. Biol. Chem. - 1986. - V. 261. - P. 8754-8760.

117. Marie P.J, Hot! M, Perheentupa J. Effects of epidermal growth factor on bone formation and resoiption in vivo. // Am. J. Physiol. - 1990. - N.258. -P. 81-275.

118. Merriman H.L, La T.D, Mohan S. // Calcit. Tissue Internat. - 1990. -V.46. - P.258. - uht, no [73]

119. Mohan S, Baylink D.J. Bone growth factors /7 Clin. Orthop and Rel. Res. - 1991. - N.263.- (Febr.). - P. 30-48.

120. Nielsen H.M., Andreassen T.T., LedentT. Oxlund H. Local injection of TGF - beta increases the strength of tibial fractures in the rat. // Acta. Orthop. Scandinavica. - 1994.- N.65.- P.37-41.

121. Owen M. Precursors of osteogenic cells // Calcified Tissue Res. - 1977. -24, suppl. - P. 19.

122. Pfeilschifter J, Oechsner M, Naumann A, Gronwald R.G, Minne H.W, Ziegler R. Stimulation of bone matrix opposition in vitro by local growth factors : a comparison between insulin - like growth factor - 1, platelet - derived growth factor, and transforming growth factor beta // Endocrinology. 1990,- V. 127.- P. 69 - 75.

123. Raisz L.G. ¡1 S. Clin. Ynvest. - 1985. - V.44. - P.103.- mix. no [138]

124. Reed B.Y, Terwerh S. E, Antieh P. P,Par C. Y. // J. Bone Mineral Res. - 1993.-V.8. - P. 19.

125. Roberts A.B, Sporn M.B. Transforming growth factors //Cancer Surveys. - 1985. - V.4. - N.4. - P.683-705.

126. Robey P.G, Young M.F, Flangers K.C. et al. Osteoblasts synthesize and respond to transforming growth factor - type b(TGF - b) in vitro // S.Cell.Bid. - 1987. - V. 105. - P.457-463

127. Rodan G. A. Autocrine/paracrine regulation of osteoblast growth and differentiation // Laboratory Investigation. - 1991.-V.64.-N.5.-P. 593595.

128. Roodman G.D. .// J.Bone Mineral Res. - 1992.- V.7. - P.475. - ijht. no [73]

129. Sandberg M, Vuorio T, Hirvonen H, Alitalo K, Vuorio E.// De-veloptment - 1988. - V. 102. - P.461. - ixht. no [73]

130. Scheven B. A. A, Hamilton N.J. // Acta endocrinol.- 1991.- V.124.- P. 602.- itHT. no [138]

131. SennN. // Amer.J. Med. Sci. - 1889. - V.98. - P.219. - miT.no [52].

132. Severson A.R. The effects of parathyroid hormont, dibutyryl cyclic AMP, calcitonin and colchicine on glucosamine incorporation into bone cells .// Cell, and Mol. Biol. - 1985. - V. 31.- N.4. - P.251-257.

133. Sporn M.B, Todaro G.J. Autocrine secretion and malignant transformation of cells Ji New England J. Med.-1980. - N.303. - P.878-880.

134. Suttie T. M, Fennessy P. F. Elevated plazma JGF - 1 lavels in stags prevented from growing antlers./ Endocriunolagy. - 1985.- V.122. - N. 6, -P. 3005 - 3007.

135. Tashjian A.H, IIoilman E.L, Antoniades H.N, Lavin L. Platelet-derived growth factor stimulates bone resorbtion via a prostaglandin mediated mechanism /7 Endokrinology.- 1982. - V. 111. P. 118-127.

136. Tavassoli M, Takahashi K. Morphological stadies on long - term culture of morrow cells : Characterization of the adherent stromal cells and their interaction in maintaining proliferation of hemopoiec stem cells // Amer. S.Anat. - 1982. - V.164.- N1. - P.18.

137. Tavassoli M, Takahashi K. Morphological stadies on long - term culture of morrow cells : Characterization of the adherent stromal cells and their interaction in maintaining proliferation of hemopoiec stem cells // Amer. S.Anat. - 1982. - V.164.-N1. - P.18.

138. Thaller S. R, Hoyt J, Tesluk H, Holmes R. Effect of insulin - like growth factor - 1 on zygomatic arch bone regtneration : a preliminary histological andhistometric study//Ann. Plast. Surg. -1993, -V.31. -

P.421-428.

139. Trippel S.B. Role of insulin - like growth factors in the regulation of chondrocytes. // Biological regulation of the chondrocytes. - 1992. -

P. 161-190.

140. Trippel S. B. Biologic regulation of bone growth // Jn Bone Formation and Repain. - 1994,- P. 39-60.

141. Trippel S. B. Growth factor actions on articular cartilage.// J. RTieumat.-1995.- Supplement 43.- P. 129-132.

142. Trippel S.B, C-outts R. D, Einliom T. A, Mundy G.R. Growth factors as therapeutic agents /7 J. Bone and joint surgery. -1997. -V.46.-

P. 1272-1286.

143. Van de Putte K.A, Urist M.R. Bone formation by autoinduction // Science. - 1965. - V. 150. - P.893-899.

144. Vasconez O, Martinez V, Martinez A.L, Hidalgo F. Heart rate increases in patients with growth hormone receptor deficiency treated with insulin like growth factor - 1 // Supplement urn 399,- 1994,- P. 137-139.

145. Urist M.R, Strates B.S. // Y. Dental Res. - 1971. -V. 50. Suppl.-P. 1392. nnx. no [73] ^

146. Watanabe N, Rosenfeld R.g, Hintz R. L, Dollar L. A, Smith R.L. /7 J. Endocrinal .-1985,- V. 17.- P. 275. - m*r. no [138]

147. Weiss L, Sakai H. The hematopoietic stroma// Amer. T. Anat. - 1984. -V.170.- N. 3. - P. 447-463.

148. W'ergedal J.E, Mohan S, Lundy M, Baylink D.J,// J. Bone Miner. Res.

- 1990. - V.5. - P. 179. - iprr. no [73]

149. Wilton P. Treatment with recombinate human insulin - like growth factor - 1 of children with growth hormone receptor deficiency // Supplemen-tum 383.- 1992.-P. 137-142.

150. Zaidi M, Alam A.S, Bax B.E, Shankar V.S, Bax C.M. /7 Bjne. - 1993.

- V. 14. - P. 97, - hht. no [73]

i i i